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Scientia Chromatographica 2012; 4(4):287-297

Instituto Internacional de Cromatografia


http://dx.doi.org/10.4322/sc.2012.017
TCNICAS ELETROFORTICAS
ISSN 1984-4433

Conceitos bsicos em Eletroforese Capilar


Daniel Alfonso Spudeit, Maressa Danielli Dolzan, Gustavo Amadeu Micke*
Departamento de Qumica, Universidade Federal de Santa Catarina - UFSC,
Campus Universitrio Trindade, CP 476, Cep 88040-900, Florianpolis, SC, Brasil
e-mail: gustavomicke@qmc.ufsc.br

Resumo
Historicamente, o qumico sueco Arne Tiselius foi o pioneiro na utilizao da Eletroforese como
ferramenta de separao, aplicando-a em protenas presentes no sangue. A Eletroforese Capilar surgiu
aps dcadas de aperfeioamento dessa tcnica, proporcionando aumento de eficincia e diminuio dos
tempos de anlise. Sua aplicao vasta e compreende desde molculas pequenas e simples, orgnicas e
inorgnicas, at molculas volumosas e complexas, como protenas e cidos nuclicos. Essa versatilidade
peculiar da Eletroforese Capilar a torna ferramenta promissora para diversas reas do conhecimento.
As metodologias desenvolvidas por essa tcnica podem ser auxiliadas e aperfeioadas offline atravs
de softwares de otimizao e simulao, destacando-se o software Peakmaster. O presente artigo ir
introduzir ainda aspectos da instrumentao da Eletroforese Capilar, modos de injeo e deteco, bem
como fenmenos peculiares da tcnica, como o fluxo eletrosmtico.
Palavras-chave
Eletroforese Capilar; fluxo eletrosmtico; instrumentao; modos de injeo.

Basic concepts in Capillary Electrophoresis

Abstract
Historically, the Swedish chemist Arne Tiselius was the first to use Electrophoresis as a separation
tool, applying in blood proteins. The Capillary Electrophoresis emerged after decades as an improved
technique providing an increase in efficiency and reduced analysis time. Its applications are wide and
the range is from small and simple molecules organic and inorganic, to large and complex, as protein
molecules and nucleic acids. This peculiar versatility of Capillary Electrophoresis makes it a promising
tool for several knowledge areas. The methodologies developed by this technique can be improved offline
by optimization and simulation softwares, highlighting the Peakmaster software. This present paper will
further introduce Capillary Electrophoresis instrumental aspects, injection modes and detection, as well
as peculiar phenomena of technique, as electroosmotic flow.
Keywords
Capillary Electrophoresis; electroosmotic flow; instrumentation; injection modes.
Spudeit DA, Dolzan MD, Micke GA Eletroforese Capilar

1 Introduo O uso do capilar oferece muitas vantagens


sobre os outros meios utilizados para eletrofo-
A palavra eletroforese originada do grego rese (placas de gel, papel, etc). Devido a fatores
electro, eletricidade; phresis, transporte. Assim, geomtricos (a relao entre a rea superficial
a tcnica de eletroforese definida como uma interna e o volume apreciavelmente grande),
tcnica de separao baseada na diferena de um capilar possibilita a dissipao eficiente do
migrao de compostos inicos ou ionizveis na calor gerada pela passagem da corrente eltrica
presena de um campo eltrico. Historicamente, (efeito Joule). Alm disso, a alta resistncia el-
a eletroforese foi apresentada pela primeira vez trica do capilar permite o estabelecimento de
pelo qumico sueco Arne Tiselius[1] em sua tese campos eltricos elevados (100-1000 V cm1),
intitulada The Moving Boundary Method to resultando em separaes de alta eficincia
Study the Electrophoresis of Proteins, publicada (geralmente excede 105 pratos) e tempos de an-
em 1930. A ideia surgiu pela necessidade de lise apreciavelmente curtos. Outras vantagens da
separar as diversas protenas que estavam sendo Eletroforese Capilar so a pequena demanda de
descobertas desde o incio do sculo XX, tor- amostra, volumes tipicamente da ordem de 1 a
nando possveis estudos aprofundados acerca 10 nL e a possibilidade de injeo e deteco em
de cada protena. O trabalho pioneiro envolveu fluxo[1,4].
a separao das protenas presentes no plasma
Comparando com os demais mtodos de
sanguneo[2].
separao como Cromatografia Lquida de Alta
Ao longo dos anos, a Eletroforese foi sendo Eficincia (HPLC, do ingls High Performance
aperfeioada de forma a se obter uma maior efi- Liquid Cromatography) e Cromatografia Gasosa
cincia e diminuio dos efeitos trmicos pro- (GC, do ingls Gas Chomatography), a CE con-
venientes da aplicao de um campo eltrico[2]. siderada uma tcnica analtica recente e vem
Com esta finalidade, o avano instrumental das ganhando cada vez mais ateno na comunidade
tcnicas de eletroforese permitiu a introduo cientfica, bem como no controle de qualidade de
de colunas capilares no sistema eletrofortico, e produtos e monitoramento de processos indus-
esta foi denominada Eletroforese Capilar (CE, do triais. Uma das razes para a sua crescente uti-
ingls Capillary Electrophoresis). lizao sua gama de aplicaes. A princpio, a
A primeira tentativa de realizar separa- tcnica ficou conhecida apenas pela separao
o em tubos com pequenos dimetros inter- de macromolculas biolgicas. No entanto, o
nos surgiu em 1967, quando Hjertn realizou a avano dos equipamentos permitiu aos pesqui-
separao em tubos com dimetro interno (d.i.) sadores do mundo todo demonstrar o potencial
de 300 m. Porm, foi apenas aps a publica- da Eletroforese Capilar na separao de mol-
o de Jorgenson e Lukacs em 1981[3] que a tc- culas pequenas e diversas como aminocidos[5],
nica comeou a ser reconhecida. Este trabalho, frmacos quirais[6], vitaminas[7], pesticidas[8],
publicado no Journal of Analytical Chemistry, ons inorgnicos[9], etc. Alm da sua utilizao
demonstrou a capacidade da realizao de sepa- na separao e determinao quantitativa de
raes em capilares com dimetro interno redu- inmeros analitos, a CE permite estudar cinti-
zido, combinado com a aplicao de altas volta- cas de reaes e interaes intermoleculares, no
gens, resultando em um aumento de eficincia e modo online e offline, auxiliando na elucidao
de resoluo e diminuio dos tempos de anlise. destes mecanismos e obteno de constantes de

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associao[10,11]. A tcnica apresenta-se til e pro- O fluxo eletrosmtico consequncia de


missora para diversos campos da cincia, mas uma interao entre a soluo e a superfcie
destacam-se as vertentes da Qumica, Cincias interna do capilar. Quimicamente, a slica fun-
Forenses, e a Biologia Molecular. dida caracterizada pela presena de vrios tipos
de grupos silanis (SiOH), os quais apresen-
Alm da vasta aplicao da CE, outras
tam um carter cido. Em contato com o meio
caractersticas da tcnica a tornam bastante vi-
aquoso, alguns desses grupos so ionizados, e
vel, como, por exemplo, o baixo custo analtico com isso, a superfcie do capilar torna-se negati-
(destacando-se o baixo custo das colunas capila- vamente carregada. Quando um campo eltrico
res, algo em torno de U$ 5,00 a U$ 20,00), a sim- imposto tangencialmente superfcie, foras el-
plicidade na operao e no manuseio, o tempo de tricas causam um movimento unilateral de ons
execuo das metodologias desenvolvidas, alm em direo ao eletrodo de carga oposta. Durante
da reduo significativa nas quantidades de rea- a migrao, os ons transportam molculas de
gentes e solventes orgnicos utilizados, quando gua, induzindo o fluxo da soluo como um
comparada tcnica de HPLC. O solvente mais todo em direo ao ctodo (plo negativo). Este
utilizado em CE gua, e sempre em volumes modo conhecido como fluxo eletrosmtico
muito pequenos (poucos mililitros), gerando normal[1]. A velocidade do EOF pode ser defi-
nida pela Equao1.
quantidade mnima de resduo e toxicidade. Por
estas razes, dentre as tcnicas de separao, a ( )
VEOF = / E
(1)
Eletroforese Capilar a que mais bem se enqua-
onde a constante dieltrica; a viscosidade
dra nos parmetros da Qumica Verde.
do eletrlito; E o campo eltrico aplicado e
o potencial zeta medido entre plano de cisalha-
2 Fundamentos tericos mento e a interface lquido-slido.
O potencial zeta essencialmente determi-
2.1 Fluxo eletrosmtico nado pela carga na superfcie do capilar. Como
a ionizao dos grupos silanis so dependen-
A utilizao de capilares de slica fundida na tes do pH, temos que a magnitude do EOF varia
execuo da tcnica introduziu uma importante com o pH. Para valores de pH mais elevados
peculiaridade: a gerao do chamado fluxo ele- onde os grupos silanis esto mais desprotona-
trosmtico (EOF, do ingls Electroosmotic Flow), dos, a magnitude do EOF maior que em valores
como mostra a Figura1. de pH menores, onde os grupos silanis esto
menos ionizados (Figura2)[12].
Uma caracterstica do EOF seu perfil
radial, o que permite que o componente veloci-
dade seja adicionado a todos os analitos de forma
homognea, independente da posio radial do
analito. Essa caracterstica permite separaes
com maiores eficincias, distinguindo a CE dos
mtodos cromatogrficos em fase lquida em
coluna, que apresentam um perfil de velocidade
parablico, caracterstico do fluxo gerado por
Figura 1 Ocorrncia do fluxo eletrosmtico. presso (Figura3)[13].

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Spudeit DA, Dolzan MD, Micke GA Eletroforese Capilar

o da superfcie interna do capilar, que pode ser


dinmica ou permanente, atravs da adsoro ou
alterao qumica da slica, respectivamente[15].
A separao das espcies por eletroforese
se d pela diferena da velocidade do soluto na
presena de um campo eltrico. A velocidade
eletrofortica de um determinado on pode ser
definido pela Equao2.
Figura 2Variao da mobilidade do fluxo
Vep = ep E
eletrosmtico em funo da variao do pH em (2)
um capilar de slica fundida. Legenda: EOF, fluxo
eletrosmtico. onde Vep a velocidade do eletrofortica, ep a
mobilidade eletrofortica e E o campo eltrico
aplicado[13].
Todo on em soluo possui uma mobi-
lidade que caracterstica para cada on. Essa
mobilidade, tambm conhecida como mobili-
dade eletrofortica (ep), determinada pela fora
eltrica que as espcies ionizadas, molculas ou
Figura 3Perfil de velocidade do fluxo radial partculas, sofrem, balanceada com as foras de
(eletrosmticoEOF) e laminar (presso).
frico geradas pela passagem das espcies pelo
meio. Para um determinado on, sua mobilidade
Em condies normais, o fluxo prove- eletrofortica pode ser determinada atravs da
Equao3[13-14].
niente do nodo (eletrodo de carga positiva) para
o ctodo (eletrodo de carga negativa). Os nions q
e = (3)
so levados em direo ao ctodo nos casos em 6 r

que a magnitude do EOF maior que a magni-
onde q a carga do on, a viscosidade da solu-
tude da sua mobilidade efetiva. Assim, ctions,
o e r o raio inico.
nions e molculas neutras podem ser analisados
Com base na Equao3, evidente que esp-
em uma nica corrida. Porm, no haver distin-
cies menores e mais carregadas possuem mobi-
o das molculas neutras quando houver mais
lidades elevadas. Por outro lado, espcies com
de uma destas[14].
maiores raios inicos e menos carregadas pos-
O EOF pode ser reduzido ou at mesmo suem valores baixos de mobilidade. As mobili-
invertido. A reduo do EOF ocorre com a alte- dades eletroforticas so determinadas no ponto
rao dos valores de pH para faixas mais cidas, em que o soluto est completamente ionizado
onde os grupos silanis esto menos ionizados. (= 1) e extrapoladas para diluio infinita[1].
Outra alternativa utilizar aditivos catinicos no Espcies que se comportam como cidos
eletrlito de corrida que interajam com a super- ou bases fracas apresentam, no equilbrio, duas
fcie do capilar, de forma a reduzir a carga nega- espcies: uma neutra, com mobilidade nula, e
tiva dessa superfcie. J a inverso do fluxo pode outra inica, que possui mobilidade que passa
ocorrer tambm pela adio de componentes no agora a ser chamada de mobilidade efetiva (()ef)
eletrlito, como surfactantes, ou pela modifica- e pode ser obtida atravs da Equao4.

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ef = i .e (4) 3 Instrumentao

Uma caracterstica fundamental da CE sua
onde i o grau de ionizao de uma determi-
simplicidade instrumental. Uma representao
nada molcula.
esquemtica de um equipamento de Eletroforese
Como o grau de ionizao pode ser defi-
Capilar demonstrada na Figura5.
nido pelo pKa do soluto, a mobilidade efetiva
Basicamente, um equipamento de CE con-
altamente dependente do pH e da composio
siste em um sistema de injeo, uma coluna capi-
do eletrlito de corrida. O efeito da variao do
lar onde ocorre a separao, uma fonte de alta
pH na mobilidade efetiva pode ser observado na
Figura4, onde temos um grfico de mobilidade tenso, representada por F na Figura5 (que opera
efetiva versus pH para o cido p-hidroxibenzico com voltagens at 30 kV), um par de eletrodos
(pKa1 4,53 e pKa2 9,31), cido actico (pKa 4,75) e (e1 e e2), um detector (D) e um computador (C)
cido clordrico. para obteno e tratamento dos dados[13,14].

Observando-se o grfico de curva de mobi- A fonte de alta tenso conectada, por meio
lidade podemos perceber que para os cidos dos eletrodos, aos reservatrios que contm o
p-hidroxibenzico e actico, a mobilidade efe- eletrlito adequado (R1 e R2). Os capilares preen-
tiva varia consideravelmente com a variao do chidos com eletrlito ajudam a manter o contato
pH. Isso ocorre pelo fato destes serem eletrlitos eltrico, funcionando como um canal de migra-
fracos. Por sua vez, o cido clordrico em soluo o.
um eletrlito forte, ou seja, sua ionizao ser Para minimizar os efeitos gerados pelo
completa. Sendo assim, o on cloreto no sofre aquecimento, os capilares devem ser mantidos
variao de mobilidade efetiva com o pH. temperatura constante, mantida principalmente
A combinao vetorial do fluxo eletrosm- atravs da circulao de lquidos ou de ar.
tico e a mobilidade do analito resulta na mobili-
dade aparente do composto.

Figura 5 Esquema ilustrativo de um equipamento


de Eletroforese capilar. Onde R1 e R2, e1 e e2 so
os reservatrios e eletrodos, respectivamente. F
representa a fonte de alta tenso, D o detector, C
Figura 4Curva de mobilidade para o cido o computador para obteno dos dados e EOF
p-hidroxibenzico (1), cido actico (2) e cido representa o fluxo eletrosmtico, que gerado aps
clordrico (3). ser aplicado o potencial[16].

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3.1 Capilares por 3 segundos, aplicando-se uma presso de 50


mbar em um capilar de 70cm de comprimento
Em geral, os capilares utilizados em CE so
total e dimetro interno de 50 m, o volume cor-
abertos, constitudos de slica fundida e revesti-
responde a aproximadamente 3,7 nL e o compri-
dos externamente com polmeros que fornecem
flexibilidade e resistncia, geralmente polii- mento seria igual a 1,9mm[14].
mida ou poliacrilato. Dependendo do modo de A injeo hidrodinmica em CE permite
deteco, necessria uma janela de deteco ser realizada individualmente ou em sequncia,
no capilar, que seria um pequeno seguimento sendo denominada de injeo simples e inje-
ausente destes polmeros, j que estes absorvem es mltiplas, respectivamente. Esta ltima
luz em comprimentos de onda que podem pre- vem sendo demonstrada em trabalhos publica-
judicar ou tornar impossvel a deteco dos ana- dos principalmente na ltima dcada, tanto em
litos. A janela de deteco feita num compri- metodologias para determinao quantitativa de
mento especfico do capilar atravs da remoo analitos, quanto para metodologias empregadas
do polmero, geralmente realizada por calor. Os em estudos de interao intermoleculares[17,18].
capilares utilizados em eletroforese apresentam A principal vantagem em se utilizar o modo de
tamanhos que variam de 10 a 100cm, mais comu- injees mltiplas o aumento da frequncia
mente se utilizam comprimentos de 25-75cm e analtica do mtodo, ou seja, a possibilidade de
dimetros internos entre 25 e 75 m, embora
um maior nmero de anlises num dado inter-
possam ser encontrados capilares comerciais de
valo de tempo[18,19].
10 a 200 m de d.i.[14].
O segundo modo de injeo mais comum
3.2 Modos de injeo da amostra em CE a eletrocintica ou por eletromigrao.
Neste caso, a amostra introduzida atravs da
Em CE, as amostras podem ser introduzidas
aplicao de uma tenso eltrica. A quantidade
por injeo hidrodinmica ou eletrocintica. A
injetada pode ser calcula atravs da Equao6.
injeo hidrodinmica feita aplicando-se uma
diferena de presso que se estabelece entre o
Q=
( ep )
+ eo V r 2Ctinj
(6)
reservatrio do eletrlito e o capilar. O volume L
da amostra injetada depende do tamanho do
capilar, da viscosidade da amostra e da diferena onde e a mobilidade eletrofortica do analito,
de presso usada, e apresenta-se na ordem de EOF a mobilidade do fluxo eletroosmtico, V
nanolitros (1-50 nL). O volume (Vi) de injeo a voltagem, r o raio interno do capilar, C a
pode ser calculado atravs da Equao5. concentrao do analito, tinj o tempo de injeo
e L o comprimento total do capilar.
Pd 4 tinj
Vinj = (5) Assim sendo, a quantidade de amostra inje-
128 L

tada no capilar ser dependente da mobilidade
onde P a presso aplicada no capilar, d o di- eletrofortica de cada analito, o que pode acarre-
metro interno do capilar, t o tempo em que a tar discriminao entre espcies inicas de maior
presso aplicada, a viscosidade da amostra e e menor mobilidade. Este fato pode ser limitante
L o comprimento total do capilar. Por exemplo, deste tipo de injeo, bem como uma forma de
em uma injeo de uma soluo aquosa a 25 C injeo seletiva. A injeo eletrocintica sim-

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ples, no requer nenhum equipamento adicional dade do analito respeita a Lei de Lambert Beer,
e vantajosa quando utilizada em amostras com Abs=b.C., onde Abs a resposta em absorbn-
maior viscosidade[1,2]. cia, b o caminho ptico, C a concentrao
molar e a absortividade molar do analito. Por
3.3 Detectores este motivo, o feixe ptico deve ser bem focali-
A Tabela1 apresenta de forma resumida os zado no capilar, de forma a minimizar a disper-
detectores mais comuns em CE e seus limites de so da luz[13,14].
deteco caractersticos.
Muitos dos detectores utilizados em CE 3.3.1 Modos de deteco no UV-Vis:
so tambm empregados em HPLC. Em ambas direto e indireto
as tcnicas, o detector de absorbncia no ultra- O modo de deteco direto comumente
violeta/visvel (UV-Vis) o mais utilizado[13]. utilizado e adequado quando as espcies a
No entanto o espectrmetro de massas (MS, do serem determinadas apresentam absoro na
ingls Mass Spectrometer) apresenta-se universal regio do ultravioleta e/ou visvel. Nesse caso,
e altamente seletivo.
normalmente so utilizados como eletrlito de
De um modo geral, para a escolha de um corrida compostos que no apresentam absoro
detector adequado o analista deve atentar-se nessa regio. Assim sendo, o tamanho do pico
primeiramente ao fato dos compostos separa-
referente dependente da Lei de Lambert Beer,
dos apresentarem caractersticas que permitam
como descrito anteriormente[4,14,20].
que sejam detectados pelo mtodo selecionado.
Assim como em HPLC, outros fatores devem ser J a deteco indireta aplicada com sucesso
levados em considerao na escolha do modo de em Eletroforese Capilar para analitos que no
deteco, tais como sensibilidade, seletividade, apresentam absoro no UV-Vis, ou apresentam
faixa linear e a capacidade de fornecer dados absoro pouco intensa. Neste modo, faz-se uso
quantitativos[14]. de um cromforo no eletrlito de corrida, ou seja,
No caso de CE equipada com detector um dos componentes do eletrlito deve apresen-
UV-Vis, a tcnica tem sua sensibilidade prejudi- tar absoro na regio UV-Vis. Os compostos
cada com relao ao mesmo modo de deteco que so normalmente analisados utilizando-se
em HPLC. Isso se deve ao reduzido caminho esse tipo de deteco so ctions e nions inorg-
ptico, cujo dimetro do capilar da ordem nicos, cidos carboxlicos, aminocidos e aminas
de m. Para detectores deste tipo, a absortivi- de cadeia curta[4].

Tabela 1 Detectores mais comuns usados em Eletroforese Capilar.

Modo de deteco Limite de deteco1


UV-Vis 105-107
Fluorescncia (LIF) 1013-1016
Espectrometria de Massas (MS) 108-1010
Amperomtrico 107-1010
Condutomtrico 107-109
1
Concentrao em mol L . 1

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Spudeit DA, Dolzan MD, Micke GA Eletroforese Capilar

4 Modos de operao em 4.3 Cromatografia Eletrocintica


Eletroforese Capilar Capilar (CEC)

A CEC uma tcnica recente de separa-


Durante as dcadas passadas, a Eletroforese
o que combina as vantagens da cromatogra-
Capilar e suas muitas variantes, tal como a fia lquida de alta eficincia com a Eletroforese
Cromatografia Eletrocintica Micelar (MEKC, do Capilar. Nesta tcnica, o transporte de solvente
ingls Micellar Electrokinectic Chromatography), (fase mvel) feito atravs do fluxo eletrosm-
Eletroforese Capilar em Gel (CGE, do ingls tico ao longo da coluna. Os capilares utilizados
Capillary Gel Electrophoresis), Cromatografia para esse tipo de separao so recheados com
Eletrocintica (EKC, do ingls Eletrokinetic uma fase estacionria, como C18 (octadecils-
Chromatography), Isotacoforese Capilar lica).
(CITP, do ingls Capillary Isotachophoresis) e
Eletroforese Capilar em Soluo Livre (FSCE, 4.4 Isotacoforese Capilar (CITP)
do ingls Free Solution Capillary Electrophoresis), A Isotacoforese Capilar uma tcnica em
tm se demonstrado como tcnicas de grande que so empregados dois tipos de eletrlito e
poder de separao[14,21,22]. os solutos ficam confinados entre duas regies
compostas por estes eletrlitos. O primeiro ele-
4.1 Cromatografia Eletrocintica trlito, que apresenta mobilidade eletrofortica
Micelar (MEKC) maior que todos os componentes da amostra,
chamado de eletrlito lder. O segundo, que
A cromatografia eletrocintica micelar se
apresenta mobilidade eletrofortica menor que
aplica principalmente anlise de compostos todos os componentes da amostra, conhecido
neutros. Neste mecanismo de separao base- como eletrlito terminador. Quando o poten-
ada na partio diferenciada dos solutos entre a cial aplicado, cria-se um estado estacionrio
fase mvel e uma pseudo-fase composta por no qual as zonas dos analitos migram em ordem
micelas, cuja mobilidade efetiva uma resultante decrescente de mobilidade, mas com velocidade
da mobilidade do fluxo eletrosmtico e da mobi- constante e nica. Outro aspecto importante
lidade da prpria micela. que todas as zonas adotam a concentrao do
eletrlito lder. Desse modo, esse fenmeno pode
4.2 Eletroforese Capilar em Gel (CGE) ser utilizado para concentrao de amostras no
interior do capilar.
Essa tcnica usada para a separao de
compostos, principalmente protenas e cidos 4.5 Eletroforese Capilar em soluo
nucleicos, por diferenas de tamanho relativo. A livre (FSCE)
separao obtida preenchendo-se um capilar Tambm denominado Eletroforese
com uma matriz polimrica. A maior vantagem Capilar de Zona (do ingls Capillary Zone
sobre a clssica eletroforese em placas a obten- Electrophoresis), o modo de operao em CE
o de resultados quantitativos mais exatos, mais utilizado pelos analistas. Neste modo, a
tempo de anlise mais curtos e a possibilidade de amostra injetada dentro da coluna capilar pre-
automao do processo. viamente preenchida com o eletrlito de corrida,

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e o potencial aplicado gerando um campo el- 5 Concluses


trico, fazendo com que os solutos migrem den-
tro do capilar em zonas distintas. Dessa forma, Dentre as tcnicas analticas de separao, a
Eletroforese Capilar considerada a mais recente
os solutos so separados de acordo com as dife-
e, de fato, ainda no est inserida nas comunida-
rentes mobilidades efetivas resultantes da com-
des acadmicas, bem como em indstrias, tanto
posio entre as mobilidades eletroforticas e a
quanto as tcnicas cromatogrficas. No entanto,
mobilidade eletrosmtica.
vem crescendo exponencialmente o interesse
pela tcnica. Isto se deve principalmente a carac-
4.5.1 Simulao de Eletroforese Capilar
em soluo livre tersticas como baixo custo operacional, abran-
gncia das anlises (versatilidade), simplicidade
A ferramenta que se destaca para otimizao instrumental, tempo e quantidades e toxicidade
e simulao de FSCE o software Peakmaster[27]. de reagentes e resduos extremamente reduzi-
Vale reconhecer que a Eletroforese Capilar no dos se comparados s tcnicas de HPLC e CG.
modo FSCE o nico, dentre todos os mtodos Por outro lado, a CE necessita de investigaes e
de separao, que pode apresentar simulao aperfeioamento para melhoria de sensibilidade
completa da separao. e reprodutibilidade das anlises. De fato, a tc-
Para utilizao do software necessrio nica extremamente verstil, porm apresenta-
que sejam conhecidos os valores de mobilidade -se como complemento s tcnicas de separao,
inica e pKa dos componentes da anlise. Estes assim como as demais. Quando se deseja fazer
dois parmetros fsico-qumicos so, na verdade, uma anlise especfica, necessrio uma escolha
as informaes preliminares mais teis quando se criteriosa da tcnica adequada, e para isto deve-
deseja desenvolver um mtodo por CE. Quando -se considerar seletividade, sensibilidade, robus-
se pretende utilizar softwares de otimizao e/ou tez, tempo, quantidade de reagentes e amostras
disponveis, concentrao de analito, custo,
simulao, so fundamentais.
quantidade de resduo, e outros. A relevncia de
Conhecidos esses parmetros, possvel
cada um destes fatores ir depender do objetivo
construir curvas de mobilidade efetiva versus
da anlise que se deseja e das condies as quais
pH. A partir dela so obtidas informaes como
se encontram. A CE apresenta diversos modos
pH timo e componentes do eletrlito de corrida de operao e cada um adequado para sistemas
adequados para a anlise. determinados. No modo CZE possvel otimi-
O software Peakmaster foi desenvolvido por zar metodologias com auxlio de softwares de
Bob Bohuslav Ga[27-29] e fornece caractersticas otimizao e simulao, destacando o simulador
relevantes, como pH, fora inica, condutividade Peakmaster, desenvolvido por Ga et al.[23]. No
e capacidade tamponante do eletrlito de cor- mais, todos utilizam a mesma instrumentao,
rida j estabelecido, bem como eletrodisperso exceto a eletrocromatografia capilar, em que a
dos analitos (EMD, do ingls Electromigration coluna capilar se difere pelo empacotamento.
Dispersion) que acarreta alargamento dos picos e Anlises de molculas pequenas, como fr-
mobilidades efetivas dos componentes da anlise macos, vitaminas, aminocidos, ons inorgni-
nas condies determinadas. Deteco indireta e cos, etc, so possveis de ser realizadas por CE,
deteco por condutividade tambm podem ser bem como molculas maiores, como polmeros,
simulados pelo software[23,25]. protenas e cidos nucleicos. Alm disso, estudos

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Spudeit DA, Dolzan MD, Micke GA Eletroforese Capilar

cinticos e de interao para clculos de cons- Electrophoresis 2012. 33(14):2192. PMid:22821497.


tantes de ligao tambm vm sendo realizados http://dx.doi.org/10.1002/elps.201200043
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Recebido: 10/09/2012
Aceito: 31/10/2012

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