UNIVERSIDAD TCNICA DE AMBATO

FACULTAD DE CIENCIA E INGENIERA EN ALIMENTOS

CARRERA INGENIERA EN ALIMENTOS
LABORATORIO DE QUMICA ORGNICA

PROFESORA: Dra. Nahir Dugarte FECHA: 23/01/2015

AYUDANTE: Alex Pastua SEMESTRE: Mdulo II Prctica. N 6

TEMA:

CROMATOGRAFA DE CAPA FINA

FUNDAMENTO TERICO:

La cromatografa de capa fina es una tcnica de adsorcin slido-lquido. El fenmeno responsable de la separacin es la
adsorcin, la cual implica la distribucin de un soluto entre dos fases inmiscibles de acuerdo a la mayor o menor adsorcin del
soluto en la superficie de una fase slida. La fase estacionaria es slida y la fase mvil es lquida (disolvente). La adsorcin es un
fenmeno de superficie, que se manifiesta por un aumento de concentracin en la interfase que rodea el medio estacionario. No
se debe confundir la adsorcin con la absorcin, que consiste en la penetracin de una sustancia en el seno de otra. Por ejemplo,
al escribir, el papel adsorbe tinta, mientras que una esponja absorbe agua.
La teora de la cromatografa de capa fina an no ha podido aclararse en todos sus detalles y es complicada por varias razones.
1. La velocidad de flujo del solvente no es constante, sino que vara a medida que el frente del solvente avanza a lo largo de la
capa de adsorbente. La velocidad depende de las caractersticas fsicas del solvente empleado. El solvente se mueve
constantemente hacia reas de adsorbente seco, lo cual tiende a involucrar calores y consecuentemente distorsiona el equilibrio.
1. Las manchas que se separan pueden sufrir una difusin lateral y probablemente no estarn uniformemente depositadas sobre
el adsorbente. Probablemente, la conclusin ms importante, de toda la teora desarrollada para la cromatografa de capa fina, es
que el mayor grado de resolucin en una capa fina ocurre en el rea alrededor de los valores de Rf entre 0,3 y 0,4.

PROCESO DE PARTICIN LQUIDO-LQUIDO.

En su forma bsica, un sistema de particin y las fuerzas que gobiernan su operacin son mucho ms simples que las de un
sistema de adsorcin. Est constituido por dos lquidos que son parcialmente miscibles uno en el otro. Debido al requisito de
inmiscibilidad, uno de los lquidos tender a ser mucho ms polar que el otro. Cualquiera de los dos lquidos puede ser un
solvente puro o una mezcla de complejidad considerable. Los factores que dictan si un soluto permanece en la fase estacionaria o
si se mueve juntamente con la fase mvil, estarn supeditados a las diferencias de solubilidad del soluto en las dos fases. La
extensin a la cual un soluto se distribuye entre dos lquidos puede medirse en un embudo de separacin. Tales mediciones,
producen constantes conocidas como coeficientes de particin o reparto. Si un soluto A se disuelve en dos disolventes B y C, se
distribuye entre ellos de acuerdo con la siguiente ley:

= una constante a temperatura constante = coeficiente de reparto

Por ende, entonces, podemos decir en forma general que los materiales que tienen diferentes coeficientes pueden ser separados.
Aquellos solutos que son ms solubles en la fase mvil se movern ms rpido que aquellos que son menos solubles y los solutos
que son ms solubles en la fase estacionaria tendern a moverse ms lentamente que aquellos que son menos solubles.

Consideraremos como ejemplo tpico la separacin de una mezcla de sustancias sobre una tira de papel de filtro. Se sabe que el
papel de filtro est formado por numerosas fibras de celulosa que portan un cierto porcentaje de humedad. Podemos considerar
que las partes individuales de cada fibra, junto con su humedad asociada, constituyen hipotticas "clulas" elementales. La
separacin se lleva a cabo al repartirse las sustancias entre la humedad de las clulas y el flujo de disolvente entre ellas. El agua
de las clulas permanece estacionaria, mientras que el disolvente circula sobre ellas. Debido a esto, a las clulas se llama fase
estacionara, mientras que al disolvente se le denomina fase mvil.

Podemos ilustrar mejor estos principios haciendo referencia a un ejemplo. Consideremos que una mezcla de dos compuestos, A y
B (cuyo coeficiente de reparto entre las fases estacionaria y mvil son 2:1 y 1:2, respectivamente, es decir, A es relativamente
ms soluble en agua), que se aplican en el origen de una cromatografa de papel. La figura 1 representa un diagrama del corte
longitudinal del papel, que contiene la mezcla disuelta en el agua de una clula en el origen. Por conveniencia se puede
considerar que el reparto tiene lugar entre volmenes iguales de la fase en movimiento y estacionaria. En la figura, las molculas
del comportamiento A estn representadas por crculos negros, y las de B, por cruces

Cuando el disolvente penetra en la clula (esto ocurre cuando comienza la separacin), las dos sustancias se repartirn de
acuerdo con la ley de reparto, especificada anteriormente. El solvente conteniendo una cierta cantidad de mezcla que correr a lo
largo del papel y encontrara otra clula que contiene agua, mientras que el disolvente puro se pone en contacto con la primera
clula (figura 1,c) y tendr lugar en ella un nuevo reparto (fig 1,d). Este proceso se conoce como distribucin en contracorriente
continua, en tanto que el disolvente avance a lo largo del papel: La figura 1e representa la distribucin de A y B en el papel
despus de haber tenido lugar la separacin. Es obvio que los dos componentes ya han comenzado a separarse. En la prctica
este proceso se repite mltiples veces, dando, eventualmente, una separacin eficaz. Haciendo una similitud con el proceso de
extraccin lquido-lquido, podemos afirmar que en la multitud de pequeas celdas formadas por las micelas del papel, la
separacin tiene lugar igualmente como s se dispusiera de extracciones sucesivas. La cromatografa que resultar de la anterior
separacin se representa en la figura 2.
A se encontrar a un tercio de la distancia entre el origen y el frente del disolvente, mientras que B estar a dos tercios de esta
distancia.

Uno de los aspectos ms importantes de la cromatografa es que, en un sistema cromatografa) dado, el movimiento relativo de un
compuesto con respecto al frente del disolvente es una propiedad caracterstica y reproducible. En el caso de las cromatografas
de papel y capa fina se expresa el movimiento de un compuesto como un valor de Rf. Este valor, es una constante caracterstica y
constante de cualquier sustancia para un sistema cromatogrfico dado. En la cromatografa sobre papel y capa fina los valores de
Rf se expresan mediante la ecuacin:

=

Para el caso estudiado tendremos:

() = /, () = /

a.- distancia recorrida por la sustancia A, la cual se mide desde el punto de aplicacin al centro de la mancha.
b.- distancia recorrida por la sustancia B, la cual se mide desde el punto de aplicacin al centro de la mancha.
x.- distancia recorrida por el frente del solvente.

COMPARACIN CON LA CROMATOGRAFA SOBRE PAPEL

La cromatografa sobre papel es una tcnica muy valiosa. Haciendo uso de ella se pueden separar de forma fcil y rpida,
sustancias qumicas relacionadas estrechamente en estructura, bien sean iones orgnicos, as como tambin, compuestos
orgnicos polifuncionales o muy polares, tales como: amino-cidos, azucares o pigmentos de plantas. Entonces por qu
usar otros mtodos, los cuales aparentemente, a primera vista, hacen exactamente la misma cosa ?.
La respuesta a esta interrogante es bastante sencilla. Existen un gran nmero de familias de impuestos, principalmente en el
campo de los lpidos, donde la cromatografa de papel no ha producido los resultados deseados. Por lo tanto, se necesita una
tcnica alternativa que sea capaz de separar, por ejemplo, los cidos grasos de estructura muy parecida, de una manera tan
simple y fcil como la cromatografa de papel separa los amino-cidos estrechamente relacionados en su estructura qumica.

La cromatografa de capa fina (TLC: Thin Layer Cromatography), es la tcnica que cubre estas expectativas. Podemos comparar
la cromatografa sobre papel con la cromatografa de capa fina (TLC), aspecto a las similitudes de los principios tericos y las
tcnicas experimentales empleadas. En cuanto al fundamento terico, la cromatografa sobre papel es una tcnica de particin
lquido-lquido, mientras que la de capa fina es una tcnica de adsorcin slido-lquido. Las ventajas de la TLC son: mayor
velocidad, mejor resolucin, (en general las manchas separadas se presentan ms compactas), mayor sensibilidad, (se pueden
separar y recuperar con mayor facilidad cantidades extremadamente pequeas de compuestos, en el orden de los microgramos) y
ms amplia posibilidad en la seleccin de reactivos de deteccin, (se puede esparcir sobre las placas de slica y almina,
reactivos reveladores altamente corrosivos como el cido sulfrico, sin afectar la capa de adsorbente). La cromatografa de capa
fina tiene otras ventajas comparada con la de papel. Mientras que la cromatografa sobre papel se desarrolla sobre una pelcula
de pequeo espesor de celulosa soportada sobre el papel mismo, la de capa fina puede desarrollarse sobre capas finas de una
gran variedad de materiales inorgnicos pulverizados, tales como; slica gel (xido de silicio: SiO2.H2O), celita, almina (xido de
aluminio: Al2O2), tierra de diatnicas (kieselguhr) y sobre sustancias orgnicas como: alcohol polivinlico, celulosa y celulosas
modificadas qumicamente. Es posible entonces, escoger el material particular ms adecuado, para resolver la separacin del
grupo de compuestos en estudio. El tiempo requerido para lograr una separacin satisfactoria es considerablemente ms corto en
TLC; y por ltimo, la capa de adsorbente puede ser fcilmente retirada con una esptula fina para recuperar por elucin el
contenido de una mancha o banda presente en un espacio determinado de la placa. Adicionalmente, la TLC puede usarse para
separar sustancias hidrofbicas tales como: lpidos e hidrocarburos que son difciles de manejar sobre el papel cromatogrfico.
Las desventajas de la TLC comparadas con la cromatografa sobre papel son; mayor dificultad para preservar resultados en TLC,
los vales de Rf no son fcilmente reproducibles en TLC y, los platos para la TLC son ms costosos que las hojas de papel.

PRINCIPIOS GENERALES DE LA CROMATOGRAFA EN CAPA FINA.

La cromatografa de capa fina se lleva a cabo sobre una capa delgada uniforme de un adsorbente adecuado extendida sobre una
lmina de vidrio o de algn otro material y activada por calentamiento en un horno (100 a 250C). Las muestras de mezclas a
separar se disuelven en un solvente adecuado (aproximadamente al 1%) y se aplican, mediante el uso micropipetas, a lo largo de
un borde de la placa, alrededor de 1 cm del final. Despus de evaporado el solvente, las placas se colocan verticalmente en un
recipiente de vidrio cerrado, denominadas cmaras de desarrollo, que contiene una capa de solvente adecuado en el fondo.
Antes, se ha debido procurar que la atmsfera de la cmara de desarrollo est saturada con vapor del eluyente. El eluyente,
avanza sobrepasando la mancha de origen. Al cabo de unos pocos minutos los componentes de la mezcla son separados por el
solvente que ir ascendiendo a travs de la capa fina del adsorbente, transportando las manchas a localizaciones diferentes sobre
el adsorbente, por una combinacin de adsorcin y distribuciones variables del sistema del solvente.

Un ejemplo de separacin empleando la cromatografa de capa fina se indica en la serie de figuras que se muestra a
continuacin.

Las placas se extraen, procedindose a marcar rpidamente el frente del solvente antes que el disolvente se evapore, se secan y
se revela con diversos agentes que permiten visualizar los componentes de la mezcla. La presencia de las sustancias separadas,
se comprueban entonces por algn mtodo de visualizacin. Las sustancias coloreadas se pueden observar inmediatamente,
algunas fluorescen o absorben luz U.V., y otras se hacen visibles rocindolas con reactivos especficos.

Como medida de la velocidad de desplazamiento de cualquier sustancia en un eluyente determinada, se usa, como en la
cromatografa de papel, el valor del Rf es decir, la relacin de la distancia que una sustancia se ha movido con la distancia que ha
viajado el frente del solvente de desarrollo.

Los valores de Rf, pueden ayudar en la identificacin de sustancias, cuando las mediciones se realizan bajo las mismas
condiciones, esto significa que se deben desarrollar cromatogramas comparativos al mismo tiempo.

La cromatografa de capa fina se usa para determinar el nmero de componentes en una mezcla, para detectar un compuesto
particular en una mezcla de reaccin, y como un ensayo preliminar, para determinar las condiciones ptimas para realizar una
cromatografa de columna. El uso de la cromatografa de capa fina est limitado a la aplicacin de sustancias relativamente poco
voltiles, ya que las pequeas cantidades de las mismas se encuentran expuestas en una superficie abierta.

PROCESOS DE ADSORCIN:

Dos factores estn involucrados en la cromatografa de adsorcin: las fuerzas de atraccin entre los solutos y adsorbentes y las
fuerzas que tienden a apartar los solutos de los adsorbentes, de tal manera que puedan desplazarse con la fase mvil y puedan
ser separados. A estos dos factores se les denomina respectivamente adsorcin y desorcin.

De esta manera, la separacin de componentes de una mezcla por cromatografa de adsorcin depende del equilibrio adsorcin -
desorcin entre los compuestos adsorbidos en la superficie de la fase slida estacionaria y la fase lquida mvil.

La fuerza con la que se adsorbe un componente aislado depende de la polaridad de la molcula, de la actividad del adsorbente, y
de la polaridad de la fase lquida mvil. Por lo tanto, la separacin de los componentes de una mezcla depende de los valores
relativos del equilibrio de adsorcin - desorcin para cada uno de ellos. Por lo general, cuanto ms polar es un compuesto, ms
fuertemente ser adsorbido en la superficie de la fase slida.

El proceso de adsorcin es un fenmeno de superficie. En el sentido cromatogrfico el trmino adsorcin se limita a las
interacciones que implican enlaces por puente de hidrgeno, fuerzas de Van der Walls o fuerzas de atraccin electrostticas
(cuando las interacciones son inicas el proceso se denomina intercambio inico), entre el o los solutos a separar y los centros
activos del adsorbente.

Los centros activos del adsorbente provienen principalmente de los defectos (grietas, filos, etc.) de la red cristalina del adsorbente
donde las fuerzas electrostticas estn proyectadas parcialmente hacia el exterior. La adsorcin es debida justamente a la
interaccin de estas fuerzas con las interiores del soluto, provocando de esta manera que las molculas del soluto se distribuyan
en capas sucesivas diferenciadas.

Las primeras capas de molculas se adsorben 3 a 5 veces ms fuertes que las capas siguientes. El calor de adsorcin para la
primera capa adsorbida sobre un slido est en el rango de 25-35 KcaI/mol, disminuye rpidamente al rango de 5-10 Kcal/mol
para capas sucesivas. Cuanto mayor sea la separacin de cargas del soluto (mayor momento dipolar), mayor ser la adsorcin.
Desde el punto de vista prctico la cromatografa de adsorcin se aplica en la separacin de sustancias de media o baja
polaridad.

En resumen, podemos decir que las fuerzas que causan la adsorcin de los solutos neutros son:

1. Atracciones del tipo dipolo-dipolo entre adsorbentes polares y solutos polares.

2. Enlaces por puentes de hidrgeno entre los grupos hidroxilo dentro de la estructura qumica del adsorbente que se usa,
especialmente de la slica, y los tomos de oxgeno y nitrgeno en la estructura qumica de los solutos.

3. Las fuerzas de polarizabilidad entre adsorbentes polares y solutos tales como materiales aromticos que pueden ser
polarizados.

En todo caso, en cualquier fenmeno de adsorcin influyen tres variables independientes estas son el adsorbente, el disolvente y
las sustancias a cromatografiar.

Las separaciones sobre adsorbentes dependen de la existencia del equilibrio entre las molculas adsorbidas en la fase
estacionaria y las que estn libres en el disolvente (equilibrio adsorcin - desorcin). Si las molculas de un componente particular
tienen una elevada afinidad por el adsorbente pasarn muy lentamente, mientras que otro componente con menos afinidad lo har
ms rpido.

INFLUENCIA DEL DISOLVENTE.

El tipo de disolvente a usar es determinante para lograr una buena separacin. La regla general es elegir la polaridad del
disolvente anloga a la de la muestra a emplear y en la mayora de los casos adsorbentes poderosos (activos) para sustancias no
polares y adsorbentes con menos actividad para sustancias ms polares.

La razn de la primera regla es obvia. Si, por ejemplo, elegimos un disolvente polar para una mezcla de compuestos no polares,
las molculas del disolvente sern adsorbidas preferentemente, por lo que la mezcla pasar rpidamente a travs del sistema sin
conseguir la separacin. Contrariamente, si empleamos un disolvente apolar para una mezcla polar, sta permanecera en el
origen sin lograrse tampoco la separacin.

Existen dos fuerzas las cuales causan que los solutos se muevan con el solvente en un cromatograma.

La primera, es la tendencia para disolverse y moverse con el solvente, un fenmeno denominado frecuentemente elucin. En este
caso, los solventes ideales, debern disolver los solutos y debern ser lo suficientemente buenos como solventes, como para
competir con el poder de adsorcin del adsorbente. Este tipo de situacin probablemente prevalece cuando se usan solventes
aprticos para desarrollar los cromatogramas como por ejemplo: hidrocarburos, teres y compuestos con funcin carbonlica.

La segunda fuerza que tiende a mover los solutos en un sistema cromatogrfico es un fenmeno de desplazamiento.

Las molculas del solvente tienden a competir con el soluto por los sitios de adsorcin en el adsorbente y por tanto tienden a
mover las molculas del soluto a lo largo del sistema. Este fenmeno se denomina desplazamiento. En cierto sentido, la elucin
es una fuerza de traccin y el desplazamiento es una fuerza de empuje. El fenmeno de elucin prevalece con solventes aprticos
y el de desplazamiento con solventes prticos como los alcoholes.
Para facilitar la eleccin del disolvente, se les ha clasificado en una serie llamada elutrpica, es decir en orden de poder eluyente
creciente. l poder eluyente aumenta con la polaridad del disolvente. La serie elutrpica de Trappe modificada es:

DISOLVENTE CONSTANTE DIELCTRICA ()

ter de petrleo 2,0
Ciclohexano 2,1
Tetracloruro de carbono 2,2
Benceno 2,3
Tolueno 2,4
Tricloroetileno 3,4
ter dietlico 4,3
Cloroformo 5,0
Acetato de etilo 6,4
Cloruro de etileno 10,0
Piridina 12,0
Acetona 21,0
n - propanol 22,0
Etanol 26,0
Metanol 34,0
Acetonitrilo 37,0
Agua 81,0

Es importante correlacionar el poder eluyente de un disolvente con su constante dielctrica ya que la cromatografa de adsorcin
est basada en atracciones electrostticas, las cuales estn gobernadas por la ley de Coulomb.
1 2
=
2
Esta ecuacin establece que la fuerza F, entre dos cargas depende de la magnitud de las cargas y es inversamente proporcional
a la constante dielctrica del medio y al cuadrado de la distancia entre las cargas. Si asumimos que los otros factores
permanecen constantes, la fuerza de atraccin vara inversamente con la constante dielctrica del medio. Es fcil demostrar
(cmo ?) que el Rf es inversamente proporcional a las fuerzas de atraccin entre el adsorbente y el material adsorbido, esto es:

1
=

mientras menor es la interaccin soluto - adsorbente, mayor es su Rf; si es grande, F es pequea, y el Rf, es grande.

Cuando no es posible obtener una buena separacin con disolventes puros se usan mezclas de disolventes, hasta conseguir
aquella combinacin que permita obtener la separacin deseada. Para que los resultados de la cromatografa en capa fina sean
reproducibles se usan disolventes de alto grado de pureza, ya que las constantes dielctricas dependen grandemente de la
pureza.

INFLUENCIA DE LA ESTRUCTURA QUMICA DE LAS SUSTANCIAS A SEPARAR.

La polaridad de las molculas es un factor muy importante en las separaciones cromatogrficas por adsorcin. En general, cuanto
ms polar es una sustancia, ms fuertemente es adsorbida. Las sustancias adsorbidas fuertemente necesitan disolventes ms
polares para ser eluidos.

Si las sustancias a separar poseen en la adsorcin con un disolvente no acuoso poca afinidad por los adsorbentes hidrfilos
usuales, entonces se trabajar con un absorbente activo y eluyentes poco polares. Por el contrario, se emplearn adsorbentes
poco activos y eluyentes polares cuando la afinidad de adsorcin de las combinaciones es grande. Por esto es muy importante
conocer qu caractersticas de la estructura qumica de las sustancias influyen en la fuerza de unin por adsorcin.

Los principios en los que esto se rige se indican a continuacin:

1.- Los hidrocarburos saturados son poco o nada adsorbidos, la introduccin de enlaces dobles aumenta la afinidad de adsorcin,
tanto ms, cuanto mayor es su nmero y ms todava si estn conjugados. Con la introduccin de enlaces dobles, especialmente
enlaces dobles conjugados, aumenta la facultad de polarizacin de las molculas y con esto la fuerza de la unin adsortiva a la
superficie de los adsorbentes hidrfilos.

2.- Si se introducen grupos funcionales en un hidrocarburo, aumenta generalmente la afinidad de adsorcin, pudindose observar
la siguiente serie de adsorcin descendente: -COOH, -CONH2, -OH, -NHCOCH3, -NH2, -OCOCH3, -COCH3, -N(CH3)2, -NO2 -
OCH3, -H, -Cl. Las combinaciones carbonlicas se adsorben ms dbilmente que las hidroxlicas y amnicas. Los grupos C - metilo
estn sin una influencia especial.

3.- Si en una molcula estn presentes varios grupos funcionales de distinta naturaleza, sus influencias separadas en la adsorcin
son aproximadamente aditivas. Los efectos estricos son importantes y pueden variar grandemente el grado de adsorcin.

Los factores que hay que tener en cuenta en la seleccin de adsorbentes y eluyentes apropiados, se pueden resumir
sinpticamente en el esquema que se presenta a continuacin.

De aqu resulta que para la separacin de sustancias poco polares (vrtice del tringulo punteado sealando hacia abajo a la
izquierda en la direccin de mezcla a separar no polar), hay que emplear un adsorbente con actividad alta (vrtice del tringulo
punteado sealando hacia arriba a la izquierda en la direccin de la fase estacionaria con actividad I) y un eluyente con poco
poder de elucin (vrtice del tringulo punteado sealando hacia la derecha).

NATURALEZA DEL ADSORBENTE

La adsorcin de sustancias en la superficie del slido que acta como adsorbente es mayor cuanto mayor es la polaridad del
absorbente. La presencia de agua disminuye la actividad del adsorbente. La actividad del adsorbente (poder de adsorcin),
depende del tipo de material y del modo cmo se prepar. Muchos de los slidos empleados como adsorbentes en cromatografa
de capa fina son xidos metlicos, xidos hidratados y sales. Las sustancias adsorbidas, llamadas tambin
adsorbatos, son combinaciones polares o polarizables.

En general, estn ligadas a la superficie del adsorbente por medio de fuerzas electrostticas las cuales tambin son responsables
de la cohesin de la red cristalina. Aqu, las tensiones reticulares actan en parte hacia afuera. Los centros activos de adsorcin
en el adsorbente son, por lo tanto, aristas, secciones de rotura, ngulos y lugares defectuosos de la superficie, en tos que los
iones estn ms o menos al descubierto. Con esto se hace comprensible el paralelismo entre la actividad de adsorcin y
la escala de dureza, que representa una medida de la magnitud de las fuerzas reticulares.

Por las tensiones elctricas superficiales se inducen momentos dipolares en las combinaciones no polares, o se
intensifican los momentos dipolares ya existentes en combinaciones polares. As pues, la unin del adsorbato a la superficie del
medio de adsorcin est producida por fuerzas ion, dipolo o dipolo-dipolo respectivamente. En caso extremo la polarizacin
puede conducir a la ionizacin de las molculas adsorbidas. Los puentes de hidrgeno participan, a menudo de la unin entre el
adsorbente y la sustancia adsorbida. Las molculas, que forman puentes de hidrgeno internos, se adsorben ms dbilmente en
slica gel, xido de aluminio hidratado, que los compuestos ismeros que no poseen estas propiedades. Adems, los puentes de
hidrgeno influyen en la movilidad entre la sustancia y el eluyente. La serie de poder adsortivo de los adsorbentes ms usados
que se presenta en la tabla fue establecida por H. H. Strian.
Para facilitar la eleccin del sistema, se ha preparado una lista de adsorbentes y disolventes ordenados de menor a mayor
polaridad (actividad y poder eluyente respectivamente). Esta se ha elaborado a base de conocimientos prcticos y se representa a
continuacin.

Adsorbentes por orden de menor a mayor Disolventes por orden de menor a

poder adsortivo mayor poder eluyente

Azcar, almidn Hexano, teres de petrleo

Inulina Heptano
Nitrato magntico Ciclohexano
Talco Tetracloruro de carbono
Sosa Benceno
Carbonato potasio Tolueno
Carbonato clcico Cloroformo
Fosfato clcico ter dietlico
Carbonato magntico Acetato de etilo
Magnesia Piridina
cido silicio activado Acetona
Silicato de magnesio activados Propanol
xido de aluminio Etanol
Carbn animal activado y magnesia activada Metanol
Agua
Mezcla de cidos, bases con agua, alcoholes o piridina

Aunque esta relacin es muy til, hay que tener cuidado, especialmente con los disolventes, ya que con frecuencia se encuentra
inversin de los resultados, entro dos disolventes determinados, en las mismas condiciones.

Virtualmente puede emplearse cualquier lquido como disolvente en la cromatografa de adsorcin, pudiendo combinarse mezclas
de dos, tres e incluso cuatro lquidos de polaridad diferente. De esta manera, el nmero de disolventes disponibles es mucho
mayor que el de adsorbentes. Los adsorbentes ms usados en TLC, en orden de importancia son la slica gel, y la almina. En
determinados casos tambin se emplean otros adsorbentes especiales como kieselguhr, celulosa, carbn activado y el polvo de
poliamida (nylon).

En la prctica slo se emplean con frecuencia solamente dos adsorbentes, la slica gel y la almina, desarrollando la separacin
empleando el disolvente apropiado o cambiando la polaridad del adsorbente por adicin de agua. Para conseguir la forma ms
activa del adsorbente, se calienta fuertemente, eliminando toda el agua y cualquier impureza orgnica.

Los grados de menos actividad se consiguen por adicin de cantidades conocidas de agua. A este proceso se le denomina
desactivado.

Algunos adsorbentes contienen un aglomerante el cual aumenta la adhesin del adsorbente a la placa de vidrio. Los
aglomerantes ms comunes son el sulfato de calcio (yeso) y el almidn. Sin embargo, los productos modernos tienen mejores
propiedades adhesivas, siendo, en muchos casos, superfluo e incluso indeseable el empleo de aglomerantes.

SILICAGEL: (CIDO SILCICO).

Es el adsorbente ms extensamente usado en TLC y probablemente el mejor material para realizar las pruebas iniciales de
separacin, ya que posee una capacidad de adsorcin muy elevada.

Si los compuestos a separar son neutros y contienen uno o dos grupos funcionales, pueden ser separados sobre capas de slica
gel, activada usando para el desarrollo de la cromatografa solventes orgnicos puros o mezclas de solventes. Si los
compuestos a ser separados son bases orgnicas, el solvente de desarrollo deber contener una pequea cantidad de hidrxido
de amonio de dietilamina.
Del mismo modo, se deber aadir una pequea cantidad de cido actico a los solventes usados para el desarrollo del
cromatograma cuando se desea separar mezclas de compuestos cidos. La slica gel puede usarse con todos los solventes, aun
cuando exhibe capacidad de enlazamiento por puentes de hidrgeno con algunos solutos y solventes cuando est presente el
agua.

Esta capacidad de enlazamiento conjuntamente con el factor de hinchamiento y por tanto la disminucin de la velocidad de flujo,
en presencia de agua, metanol y etanol, causa algunas limitaciones a su uso general. Los compuestos muy polares, tales como:
alcoholes, aminas o cidos carboxlicos, se adsorben fuertemente a la superficie de la slica, formando puentes de hidrgeno con
los residuos de cido silcico de la forma Si--O--H.

Por lo tanto, se requiere de un solvente muy polar para hacer que este tipo de compuestos se mueva a lo largo de la superficie de
la slica gel. Los compuestos apolares no sern muy atrados por la slica gel y se movern rpidamente an en la presencia de
solventes apolares. La slica gel puede adquirirse en formas muy diversas.

Las ms comunes son la slica gel G y la slica gel H. La forma G, (la G significa Gypsum o yeso de Pars, es decir sulfato de
calcio. Cuando este aglomerante se expone al contacto con el agua o la humedad, se convierte en una masa rgida de
CaSO42H2O, el cual se enlaza al adsorbente y a la placa de vidrio), contiene un 13% de aglomerante: El tamao medio de sus
granos es de 5 a 25 mieras, la slica gel H no contiene aglomerantes.

Igual que la forma G, posee un tamao medio de granulacin de 5 a 25 mieras. Las capas de slica gel H poseen una buena
estabilidad. Los tiempos de recorrido, en comparacin con los de la slica gel G son algo superiores. Tambin pueden obtenerse
slica gel H y slica gel G, con indicadores de fluorescencia (slica gel GF254 y slica gel HF254). La materia fluorescente
inorgnica (un silicato de zinc activado con manganeso), hace innecesario en muchos casos, tener que colorear tas sustancias.
Se observa el cromatograma en la luz de una lmpara UV de onda corta. Las sustancias que absorben la luz UV aparecen como
manchas de absorcin oscuras sobre un fondo fluorescente.

ALUMINA:

Hasta ahora el xido de aluminio (almina), se ha utilizado con menor frecuencia en la cromatografa de capa fina que la slica gel.
Las mltiples posibilidades de aplicacin de la almina incluyen por ejemplo la separacin de terpenos, alcaloides, esteroides,
combinaciones alicclicas, alifticas y aromticas.

La almina tiene reaccin alcalina, por lo tanto se usa frecuentemente para la separacin de compuestos con caractersticas
bsicas en preferencia o la slica gel. Debido a su naturaleza bsica, no se requiere aadir cantidad alguna de base al solvente de
desarrollo.
La cromatografa de capa fina sobre almina tambin se usa como una herramienta complementaria para la cromatografa de
columna, tcnica en la cual la almina se emplea ms extensamente que la slica gel. La almina presenta sitios de adsorcin de
estructura qumica variada del tipo: Al5+, Al - OH, Al O-, Al OH+ y dependiendo de su preparacin iones sodio o hidronio.
La almina puede obtenerse en tres formas: cida, bsica y neutra. La almina cida es una almina lavada con cido, la cual
produce una suspensin en el agua con un pH de aproximadamente 4.

Esta almina es adecuada para la separacin de compuestos con propiedades cidas tales como aminocidos y cidos
carboxlicos. La almina neutra (pH aproximadamente 7) se puede usar para la separacin de cetoesteroides, glicsidos, cetales,
lactonas, algunos esteres y para la deshidratacin de solventes.

La almina bsica (pH aproximadamente 10) es adecuada para la separacin de compuestos con caractersticas bsicas como
las aminas.

Este tipo de almina, posee el ms amplio espectro de aplicacin. Los compuestos altamente polares se, adsorben fuertemente
sobre, este material, mientras que los compuestos no-polares (excepcin hecha con los hidrocarburos insaturados) se enlazan
dbilmente. La acetona, no debe usarse como solvente de elucin con almina bsica de alto grado de actividad, ya que puede
condensar por una reaccin de condensacin aldlica.

Existen varios tipos de almina dependiendo de su grado de actividad, la cual se mide en la escala de Brockman, de acuerdo al
contenido de agua. Los grados de actividad son los siguientes:

Grado de Actividad I II III IV V

 Peso de agua (% en peso) 0 3 6 10 15

Para la almina, el grado de mayor actividad se define como actividad I de Brockman. El contenido de agua posee un significado
decisivo, ya que las molculas de agua fcilmente adsorbibles bloquean los puntos activos de la superficie.

La cromatografa de los cidos y bases se desarrolla en forma diferente. De los adsorbentes que ms se emplean en
cromatografa de capa fina, la slica gel es relativamente cida y la almina es relativamente bsica. S se intentara
cromatografiar solutos con propiedades cidas sobre, almina, estos se unirn fuertemente al adsorbente mediante fuerzas
inicas.

Debido a este hecho, se movern con mucha dificultad a lo largo de la capa de adsorbente, por lo tanto, su separacin ser muy
difcil.

Igual situacin ocurrir con solutos bsicos sobre slica gel. Es as como, las bases debern ser cromatografiadas sobre almina,
donde podrn ser adsorbidas en casi la misma extensin que los alcoholes. Los cidos y fenoles, debern ser separados sobre
slica gel, donde podrn ser adsorbidos en una extensin un poco mayor que los alcoholes.

KIESELGUHR Y CELULOSA:

El kieselgur adsorbe ms dbilmente que la slica gel y la almina. Por eso es especialmente apropiado para separaciones de
combinaciones polares (en particular para cromatografa de reparto). Estos dos adsorbentes se usan como soportes para
pelculas lquidas en la cromatografa de particin.

Este tipo de cromatografa se usa siempre para la separacin de molculas muy polares como los aminocidos, los carbohidratos
y algunos otros compuestos hidroflicos naturales y frecuentemente para la separacin de ismeros estrechamente relacionados.
Se debe tener cuidado de asegurar que las capas contengan un lquido corno fase estacionaria, generalmente agua. Esto es
especialmente el caso, cuando las capas se preparan por el mtodo de inmersin. El sistema de solventes usado con estos
adsorbentes contiene generalmente varios constituyentes, uno de los cuales es la fase estacionaria lquida, por ejemplo, agua.

CONCENTRACIN DE LA MUESTRA A APLICAR.

La cantidad de muestra en la cromatografa de adsorcin es muy importante, puesto que el poder adsorbente de la superficie
disminuye marcadamente con el incremento de la cantidad de muestras, ya que se ocupan primero los centros ms activos. El
resultado es la aparicin de "colas" en direccin al origen.

Los mejores resultados se consignen al aumentar tanto como se pueda la relacin adsorbente/muestra. Lo normal es que sea de
1000 a 1, para obtener resultados satisfactorios. En todo caso, las cantidades que se pueden cromatografiar sin formacin de
cola, son distintas. Dependen del nivel de adsorcin total, es decir de la clase de adsorbente y de su capacidad, que en general va
paralela con la actividad de adsorcin.

Para un espes de capa de 250 , las cantidades de sustancias que se pueden cromatografiar en cada capa de slica
gel ascienden a unos miligramos, sobre las capas de xido de aluminio menos activadas, la dcima parte, mientras que sobre
capas de Kieselgur inactivas, se pueden cromatografiar solamente 25 hasta 50 g de mezclas de sustancias.

ETAPAS PARA REALIZAR UNA CROMATOGRAFA DECAPA FINA PREPARACIN DE LA PAPILLA DE ADSORBENTE

Sobre las placas se esparce en forma homognea una papilla de adsorbente dispersado en un solvente adecuado. Si el
adsorbente no contiene aglomerante, las papillas de adsorbente pueden conservarse en frascos cerrados, casi indefinidamente.

Normalmente, las papillas se hacen con agua que, si es necesario, puede contener cidos, bases, lampones o reactivos
acomplejantes. El mayor problema en esta tcnica es conseguir una consistencia correcta. Si la papilla es demasiado diluida
correr rpidamente, dando lugar a capas, excesivamente finas. Por el contrario, si es muy espesa se extiende muy difcilmente,
siendo fcil obtener lneas o grumos a lo largo de las placas. La papilla con agua debe usarse inmediatamente despus de su
preparacin, de lo contrario comenzar a formar grumos. Esta no debe emplearse si la misma ha estado sin uso despus de
un periodo de tiempo. Las placas preparadas con una papilla acuosa deben secarse en una estufa antes de su uso.

An cuando, se pueden usar un gran nmero de solventes, para preparar la papilla, el cloruro de metileno y el cloroformo son
probablemente los ms convenientes. Poseen dos ventajas, ambos tienen bajos puntos de ebullicin y la habilidad para evitar que
el adsorbente forme grumos. Los bajos puntos de ebullicin significa que no es necesario secar las placas revestidas de
adsorbente en una estufa. Adems, las placas preparadas con estos solventes son estables por varios das. Tienen la
desventaja, que la capa de adsorbente formada sobre el vidrio es frgil y por tanto se debe tratar cuidadosamente.

Por esta razn, algunas personas prefieren aadir una pequea cantidad de metanol para hacer posible que el aglomerante se fije
ms firmemente. El metanol solvata el sulfato de calcio tanto como el agua.

La papilla se prepara convenientemente en un recipiente de tamao mediano con tapa hermtica. Se requieren de 3 ml de
diclorometano por cada gramo de slica gel.

Para obtener una papilla sin grumos, se deber aadir la slica gel al solvente, mientras la mezcla est siendo agitada. Aadir
solvente al adsorbente usualmente causa la formacin de grumos en la mezcla. Cuando la adicin del solvente es completa, se
coloca la tapa del recipiente y se cierra hermticamente, se agita vigorosamente y para asegurar un mezclado completo.

PREPARACIN DE LAS PLACAS

Las placas para la cromatografa de capa fina se pueden adquirir comercialmente revestidas de capas muy uniformes de slica gel
o almina sobre lminas de plstico. Estas placas pueden obtenerse con o sin un colorante fluorescente impregnando la superficie
del adsorbente. Sin embargo, generalmente se usan placas de vidrio, de tamao variable segn las necesidades de la aplicacin
particular. Las dimensiones ms comunes son:

7,5 x 2,5 cm (portaobjeto)

20 x 5 cm
20x10cm
20x20 cm (para cromatografa bidimensional)
100 x 20 cm (para cromatografa preparativa)

Las placas deben lavarse con jabn y agua, lavadas nuevamente con agua y luego con metanol acuoso al 50%. Seguidamente,
se permite que las placas se sequen completamente sobre toallas de papel. La manipulacin de las placas debe hacerse por los
extremos, debido a que las huellas digitales sobre la superficie de las placas hacen dificultoso que el absorbente pueda adherirse
al vidrio.

Para la preparacin de placas de capa fina sobre lminas de vidrio en el laboratorio se usan frecuentemente dos mtodos:
(i) por revestimiento
(ii) por inmersin.

REVESTIMIENTO

En este mtodo, placas de vidrio del mismo espesor se disponen en hilera sobr un soporte especial, extendiendo la papilla de
adsorbente con un extendedor de capa fina. Si las placas de vidrio poseen distinto espesor se usa un aparato con un dispositivo
que permite colocar las placas de tal manera que todas ellas tengan la superficie superior en un mismo plano, para asegurar que
cada placa recibe el mismo espesor de adsorbente, al deslizar el extendedor con el adsorbente tal como se indica en la figura:
El nivelador automtico de placas tiene una manivela frontal, la cual, con un giro, hace que suban las placas y queden niveladas
por la parte superior, ofreciendo una superficie total en un mismo plano, aunque el grosor de las placas sea diferente.

Las placas se aplican por medio del extendedor, el cual cuenta con una serie de calibraciones para conseguir capas de 0,25; 0,50;
0,75; y 1 mm de espesor.

Habiendo preparado las placas, el paso siguiente es el pecado, lo que se consigue alentndolas en una estufa a una temperatura
de.100 - 125 C durante un par de horas. De esta forma se activan, lo que las hace adecuadas para la cromatografa de
adsorcin.

INMERSIN.

Este es el mtodo ms ampliamente usado para preparar placas revestidas de adsorbente, tipo portaobjetos, con fines
didcticos en el laboratorio.

Consiste en sumergir un par de portaobjetos de vidrio de similares dimensiones adheridos uno contra el otro y sujetados por un
extremo con los dedos ndice y pulgar, dentro del recipiente que contiene la papilla a una velocidad constante hasta que
aproximadamente 0,25 cm desde el borde superior de las placas permanezca sin revestimiento de adsorbente. A continuacin, se
extraen las placas, lentamente a una velocidad constante: La operacin puede visualizarse en la figura:

La operacin total del procedimiento oscila entre 3 y 5 segundos. Se requiere de cierta prctica para ajustar el tiempo correcto.
Despus de extradas, se permite escurrir la suspensin sobrante en el otro extremo de la placa, apoyando el borde inferior de las
placas en la parte superior del envase que contiene la papilla. Las placas se separan, limpiando con un dedo el exceso de
absorbente que haya quedado en los bordes y en la superficie no cubierta de las placas, para finalmente colocarlas sobre una
toalla de papel para completar el proceso de secado.

APLICACIN DE LAS MUESTRAS SOBRE LAS PLACAS

Los mtodos son prcticamente los mismos que para la cromatografa de papel, teniendo en cuenta que la mayor delicadeza de
las capas finas exige mayor cuidado al aplicar la muestra. Las muestras se aplican con un capilar sobre la lnea base, dejando
evaporar el disolvente (Ver figura).

Los capilares que se usan son una extensin muy fina del tipo empleado en la determinacin de puntos de fusin. (ver figura). La
evaporacin del disolvente en la capa fina es tan rpida que no es necesario el empleo de un secador de pelo u otro aparato
similar. El dimetro de las manchas en el origen debe ser lo ms pequeo posible.

Las solucin es no muy concentradas se pueden aplicar varias veces dejando evaporar el disolvente entre cada aplicacin. El
volumen de la muestra suele ser de 1 microlitro. No se debe olvidar marcar la placa de forma adecuada, antes de comenzar la
cromatografa. Lo ms sencillo es enumerar los puntos de origen de izquierda a derecha, anotando las sustancias que se aplican
en cuaderno de laboratorio.
ELECCIN DEL DISOLVENTE

Para obtener resultados reproducibles, en la cromatografa se deben usar solamente disolventes muy puros. En general, se
procura emplear disolventes (eluyentes) sencillos, de uno o dos componentes. En caso de disolventes de varios componentes,
hay que evitar que los ms voltiles se evaporen si se emplean recipientes que no cierran hermticamente. Cuando se
trata de mezclas de sustancias desconocidas, lo mejor es emplear en primer lugar como disolvente benceno o cloroformo (con
contenido de alcohol). Si las sustancias se quedan durante la cromatografa cerca del origen, entonces o bien se elige un
medio disolvente de mayor polaridad o se agrega al disolvente empleado otro miscible con l de mayor polaridad.

Si las sustancias se desplazan demasiado aprisa (cerca del frente), se emplea entonces un disolvente, con menor polaridad. En
todo caso, la eleccin del disolvente depender de la naturaleza, de los compuestos que se van a separar y del material
adsorbente sobre el cual se desarrollar la separacin. Una regla general para la eleccin del disolvente es establecer la
comparacin de polaridad del mismo con respecto a las polaridades de las sustancias a separar.

As, para sustancias solubles en agua se elegirn capas de celulosa o slica gel, emplendose un disolvente polar. Para
sustancias menos polares se elegirn capas de almina o slica gel activadas, emplendose un disolvente no acuoso apropiado.
Una tcnica sencilla para la eleccin del disolvente a emplear en una determinada separacin consiste en colocar una serie de
manchas de la muestra a intervalos en una placa. Los disolventes se prueban aplicndolos en los centros de las manchas
mediante un capilar muy fino, lo que permite desarrollar las manchas radialmente (ver figura).

En el caso representado el disolvente 2 resulta ser el ms apropiado, debido a que resulta en la separacin del mayor nmero de
componentes de la mezcla en estudio.

DESARROLLO DE LAS PLACAS.

El desarrollo se lleva a cabo por el mtodo ascendente en cubetas especiales para cromatografa o en recipientes
adecuados tales como frascos pequeos con tapa de rosca, vasos de precipitados cubiertos con vidrio de reloj, etc, del tipo que
se muestran en las figuras anexas.

En el interior de la cmara de desarrollo debe colocarse un papel de filtro, empapado de disolvente, que cubra las paredes
interiores de la misma, para conseguir que la atmsfera est saturada de vapor del disolvente.

El fondo de la cubeta se cubre de disolvente hasta una altura de 0,5 a 1 cm y, despus de un periodo de tiempo apropiado, en el
que se consigue el equilibrio, se introduce la placa. Durante el desarrollo no puede moverse la cubeta. Por lo general, cuando se
desarrolla una placa se deja que ascienda el disolvente unos 10 cm por encima del origen y se saca la placa. El frente del
disolvente se marca cuidadosamente con un lpiz puntiagudo y se deja evaporar el mismo, operacin que dura unos pocos
minutos. Si es necesario se calienta la placa, estando lista para el revelado.

REVELADO DE LAS PLACAS.

Los procedimientos empleados para revelar las placas son anlogos a los que se usan en la cromatografa sobre papel. Sin
embargo, existen algunas diferencias interesantes. En principio, el mtodo de baado no es recomendable, ya que las placas se
estropean fcilmente con este mtodo.

Una de las ventajas de la cromatografa en capa fina sobre la de papel es la posibilidad de revelado con agentes corrosivos tal
como los cidos concentrados y compuestos fuertemente oxidantes, a alta temperatura, debido a la naturaleza inorgnica de la
capa. Otro reactivo muy empleado son los vapores de yodo.

En un recipiente con tapa hermtica que contiene en el fondo unos pocos cristalitos de yodo, se introduce el cromatograma y se
deja unos minutos.

El yodo tiende a concentrarse en los sitios donde estn los compuestos, por lo que aparece una mancha marrn oscuro, sobre un
fondo amarillo plido. En tanto que el yodo no reaccione con los compuestos revelados, el mtodo es extraordinariamente bueno
como revelador no destructivo.

Otros mtodos que no afectan a los productos en el revelado son la fluorescencia y la radiactividad: Muchas placas llevan
impregnadas sustancias fluorescentes como aditivos para el revelado de los compuestos, localizndose los mismos por la
aparicin de manchas no fluorescentes. Adems, muchas veces los compuestos a separar absorben en el ultravioleta, siendo este
el mtodo ms sencillo para localizarlos.

Cuando se emplea una lmpara UV, cualquier material orgnico, que contenga un cromforo, aparecer sobre la placa como una
mancha oscura sobre un fondo luminoso. Teniendo en cuenta que el material orgnico se deposita sobre la superficie del
adsorbente, si se tiene un cromforo, actuar como una sombra o cortina que evitar que la radiacin UV alcance la superficie del
adsorbente. La posicin de la mancha debe delinearse como se mencion antes.
Si se desea emplear el revelado UV, se coloca la placa seca bajo una lmpara UV, preferiblemente en un recinto oscurecido.
Existen diversas lmparas de luz UV, pero las dos ms comunes son una que puede manipularse con la mano y colocarse
directamente sobre la placa y otra con un recinto cerrado por todos los lados, provista de un trapo oscuro en la parte frontal y una
mirilla en la parte superior. Si se emplea una lmpara de mano, se mantiene sobre la placa a una altura de 10 cm

aproximadamente, tal como se muestra en la figura. Mrese solo la placa, evite siempre mirar directamente a la lmpara.
CONSERVACIN DEL CROMATOGRAMA

La conservacin de los cromatogramas en capa fina es difcil y generalmente indeseable, puesto que las placas se utilizan
muchas veces. Interesa, por tanto, encontrar un medio para conservar los cromatogramas obtenidos. El espesor del vidrio y la
naturaleza tan delicada de la capa son obstculo para guardar los cromatogramas. La posicin de las manchas despus del
revelado puede fotografiarse o dibujarse. Un mtodo que puede usarse convenientemente, consiste en adherir con sumo cuidado
sobre la superficie del adsorbente, una cinta plstica transparente de una anchura un poco mayor que el de la placa y, tratar que
el cromatograma se pegue en la cinta de manera que se conserve por largo tiempo.

APLICACIONES DE LA CROMATOGRAFA DE CAPA FINA EN QUMICA ORGNICA.

La tcnica de cromatografa en capa fina tiene muchos usos importantes en qumica orgnica. Puede usarse en las siguientes
aplicaciones.
1.- Establecer si dos compuestos determinados son idnticos.
2.- Determinar el nmero de componentes en una mezcla.
3.- Determinar el solvente apropiado para una separacin en columna cromatogrfica.
4.- Monitorear la separacin de una columna cromatogrfica.
5.- Comprobar la efectividad de separaciones realizadas en columna, o mediante tcnicas de extraccin o cristalizacin.
6.- Registrar el progreso de una reaccin.

En todas estas aplicaciones, la cromatografa de capa fina tiene la ventaja sobre otras tcnicas, que en esta, se usan pequeas
cantidades de material para realizar los anlisis. Con muchos de los mtodos de visualizacin, se pueden detectar cantidades tan
pequeas como 10 -7 gramos. Por otra parte, pueden utilizarse cantidades relativamente grandes como 1 miligramo.

El uso de la cromatografa de capa fina, puede servir para establecer la identidad qumica de dos compuestos que se sospechan
son idnticos. Simplemente se aplican ambos compuestos en una misma placa y se desarrolla en un solvente adecuado. S
ambos compuestos recorren la misma distancia, es decir tienen el mismo valor de Rf estos sern probablemente idnticos. Si en
cambio, la posicin de ambas manchas no es la misma, se puede asegurar en forma definitiva y concluyente que los dos
compuestos no son idnticos.
Es importante, aplicar ambos compuestos en la misma placa. Esta precaucin es especialmente importante cuando se usan
placas preparadas por inmersin, puesto que estos varan de uno a otro. Dos placas preparadas de esta forma no tendrn
exactamente el mismo espesor de adsorbente.

La cromatografa en capa fina, tambin encuentra aplicacin para establecer si un compuesto es una sustancia pura o en su
defecto se trata de una mezcla. Una sustancia pura produce una sola mancha sin importar el solvente que se use para desarrollar
la placa. Por otra parte, el nmero de componentes de una mezcla puede establecerse probando varios solventes para desarrollar
la mezcla.
Sin embargo, los resultados deben tomarse con cuidado, ya que a menudo resulta difcil, conseguir un solvente adecuado que
pueda separar una mezcla de compuestos con propiedades muy similares tales como los ismeros. La falta de separacin no es
prueba absoluta de que una aplicacin particular de una muestra sea una sustancia pura.

Podernos emplear la cromatografa de capa fina para determinar el mejor solvente que podr ser usado en la resolucin de una
mezcla que ha de ser separada utilizando la tcnica de cromatografa en columna. El proceso consiste en preparar varias placas,
impregnadas con el mismo adsorbente que ser usado en la separacin por cromatografa en columna, aplicar la solucin de la
mezcla en cada una de las placas y analizar los resultados que se obtienen al desarrollar la cromatografa de capa fina en
solventes de diferente polaridad. El solvente que proporciona una mejor resolucin en capa fina, muy probablemente funcionar
mejor en columna. Estos experimentos en pequea escala tienen la virtud de ser rpidos, usa pequeas cantidades de material y
ahorrar tiempo.

En forma similar, la tcnica de TLC, puede usarse para monitorear el progreso de una separacin por cromatografa de columna.
Una situacin hipottica se analiza en los diagramas de la figura que se muestra a continuacin.

El anlisis preliminar por cromatografa de capa fina revela que un solvente determinado, separa la mezcla en cuatro
componentes (A-D). Por lo tanto, se usa este solvente para eluir la columna. Este proceso conduce a la obtencin de 11
fracciones de 15 ml cada una.

El estudio detallado de las distintas fracciones por TLC muestra que las fracciones 1, 2, y 3, contienen el componente A, las
fracciones 4, 5, 6, y 7, el componente B, las fracciones 8 y 9, el componente C y las fracciones 10 y 11, el componente D. Se
observa que las fracciones 3, 4, 7 y 9 se obtienen con una pequea contaminacin de otro componente. La fraccin 3 est
contaminada o con algo de B la 4 con A, la 7 con C y la 9 con D.

Otro ejemplo de la aplicacin de la tcnica de TLC, se encuentra en el anlisis de una mezcla producto de una reaccin. El
anlisis del producto de reaccin por TLC, produjo dos manchas, A y B. Despus de la cristalizacin del producto, se procedi a
analizar los cristales obtenidos por TLC, encontrndose que los cristales eran puros e idnticos al componente A, mientras que las
aguas madre contenan una mezcla de A y B. Estos resultados conducen a pensar que el proceso de purificacin resulta
satisfactorio para el componente A.

Finalmente, es posible usar la tcnica de TLC para monitorear el progreso de una reaccin. A intervalos de tiempo especficos,
durante el transcurso de la reaccin, se toman muestras de la mezcla de reaccin y se someten a anlisis por TLC. Un ejemplo
se detalla en las figuras esquematizadas a continuacin:
En este caso, se desea convertir el reactante A en el producto B. Al comienzo de la reaccin (0 hr), se prepar una placa en la
cual se aplicaron los compuestos puros A y B, adems de la mezcla de reaccin. Anlisis similares se condujeron a 0,5; 1; 2; y 3
horas despus del inicio de la reaccin. Las placas muestran que la reaccin se completa en 2 horas: Cuando el tiempo de
reaccin se prolonga por ms de 2 horas, comienza a aparecer un producto colateral nuevo C. Por lo tanto, el tiempo ptimo de
reaccin es de 2 horas.

CROMATOGRAFA DE CAPA FINA

 1. INTRODUCCIN

La palabra cromatografa proviene del griego chromo (color) y graphos (escrito). La cromatografa es un sistema analtico que
permite separar los diferentes componentes de una muestra problema por distribucin entre dos fases, una estacionaria y otra
mvil, con el fin de identificarlos y/o cuantificarlos.

Fase Mvil (eluyente): Efecto de desplazamiento ejercido sobre los componentes de la mezcla por una fase mvil, que
puede ser un lquido o un gas, sobre una fase estacionaria. Cuando se utiliza un lquido como fase mvil mediante una
serie eluotrpica se escoge la mejor combinacin de solventes miscibles para una buena separacin cromatogrfica de
una muestra en sus componentes, para lo cual se pueden emplear ter de petrleo, hexano, benceno, tolueno,
cloroformo, etc.
Fase estacionaria (adsorbente): Efecto de retencin producido sobre los componentes de la mezcla por una fase
estacionaria, que puede ser slida o lquida, anclada a un soporte slido. Si es un lquido, puede estar distribuido en un
slido, el cual puede o no contribuir al proceso de separacin. El lquido puede tambin estar qumicamente unido al
slido (Fase Ligada) o inmovilizado sobre l (Fase Inmovilizada). Los adsorbentes ms utilizados son: slica gel (SiO 2) y
almina (Al2O3).

El fenmeno de migracin de los componentes de una mezcla a lo largo de la fase estacionaria, impulsados por la fase mvil,
recibe el nombre de elucin. El orden de elucin de un compuesto se incrementa al aumentar la polaridad de la fase mvil o
eluyente.

CROMATOGRAFA DE PAPEL

La cromatografa en papel es la tcnica de separacin e identificacin de sustancias qumicas mediante un disolvente que se
mueve sobre hojas o tiras de papel de filtro. Es la ms sencilla de las tcnicas, pero slo dar resultados cualitativos. El mtodo
se basa en un mecanismo de reparto, y consiste en depositar una pequea cantidad de muestra en el extremo de una tira de
papel de filtro, que se deja evaporar. Luego se introduce la tira en una cubeta que contenga el disolvente, de manera que ste
fluya por la tira por capilaridad (fig. 1).

Figura 1. Cromatografa de papel

Fuente: OpenCoursiveWare, Cromatografa, 2011.

CROMATOGRAFA DE CAPA FINA

Es la tcnica utilizada para separar los componentes puros de una mezcla, de acuerdo con su polaridad. Consiste, en que la fase
estacionaria se encuentre sobre un plano formando una capa de partculas slidas extendida sobre un soporte, tal como una placa
de vidrio o aluminio ((Thin Layer Chromatography, TLC), la muestra es aplicada en puntos o en banda, para posteriormente ser
eluda dentro de un tanque cromatogrfico como se ilustra en la figura 2.

Figura 2. Diagrama de una cromatografa de capa fina

Fuente: biomodel.uah.es, Cromatografa, 2008.

La cromatografa en capa fina como mtodo cualitativo y cuantitativo, siempre requiere contar con un estndar de referencia para
comparar su valor de factor de retardo (Rf) y el color de la mancha del estndar al ser revelada con agentes qumicos, con los
datos experimentales obtenidos.

Para el caso de cromatografa de papel y de capa fina se analiza el factor de retardo de la siguiente manera:

Factor de retardo (Rf): Es un valor relativo para cada sustancia y depende de las condiciones cromatogrficas con que
se haya trabajado (fase mvil, fase estacionaria, eluyente y el tiempo de saturacin). El valor de Rf es el coeficiente de la
distancia recorrida por el compuesto (DM) para la distancia recorrida por el disolvente (DF), se lo puede visualizar el la
figura 3.

Figura 3. Representacin del factor de retardo

Fuente: Martnez, et al., Manual de prcticas de laboratorio de farmacognosia y fotoqumica, 2008.

Revelado de la placa: Se denomina revelado de placa a los mtodos empleados para la visualizacin de los
componentes no coloreados de la muestra. El revelado de las placas se puede realizar mediante dos mtodos: mtodo
qumico (por inmersin o rociado de reactivos colorantes como yodo); y mtodo fsico (mediante la radiacin con luz UV).

2. OBJETIVO

Aplicar cromatografa de capa fina (CCF) para muestras de analgsicos y colorantes.

3. MATERIALES Y REACTIVOS

Muestras

Cafena
Analgsicos con contenido de cafena
 Rojo congo (0.1% m/v)
Rojo de fenol (0.1% m/v)
Azul de metileno (0.1% m/v)

Reactivos

Butanol
Agua
cido actico
Hexano

Materiales

Papel filtro
Tubos de ensayo
Vasos de precipitacin
Matraces erlenmeyers
Mortero y pistilo
Vidrios reloj
Pipetas
Probetas
Esptulas
Varillas de agitacin
Embudos
Tijera
Regla

4. PROCEDIMIENTO

PREPARACION DE LAS MUESTRAS

Preparar una solucin de los colorantes a una concentracin de 0.1% (5 ml).

Para los analgsicos se trituran por separado hasta obtener un polvo fino. Intentar disolver 0.2gr en 5 ml de etanol al 95%. Filtre y
conserve el filtrado para aplicar en las placas de capa fina. El patrn de cafena se prepara disolviendo 0.1 gr de cafena en 10
ml de etanol al 95%. En caso de no disolverse, someter a bao mara.

PREPARACIN DE LA PLACA PARA CROMATOGRAFA DE CAPA FINA

Cortar un trozo de la lmina de slica gel para CCF segn lo requerido.

Trazar una lnea con lpiz a 0,5 cm del borde inferior y a 0,5 cm del borde superior del papel.

En el borde inferior, marcar un punto con el lpiz a 0.5 cm del borde izquierdo donde se colocara la primera siembra, la segunda
siembra se la realizara a 0.5 cm de la primera aplicacin (continuar con el mismo proceso para las dems aplicaciones), la ltima
siembra se la realiza a 0.5 cm de distancia del borde derecho de la placa.

Aplicar las diferentes muestras sobre la placa cromatogrfica en los puntos de sealados.

Colocar en un vaso de precipitacin el solvente a emplear (figura 4).

Dejar eluir y evitar que el solvente llegue a la lnea superior marcada con lpiz y con las muestras aplicadas, retirar y dejar secar
los cromatogramas.

Figura 4. Cromatografa de capa fina y preparacin de muestra

PREPARACIN DEL SOLVENTE

Preparar las soluciones que se indican en la tabla 1, un volumen de 5 ml para cubrir la base del recipiente a emplear (que no
sea mayor a 0.5 cm de altura):

Tabla 1. Relacin para mezcla de solventes

Mezcla Solventes Relacin

M1 1-Butanol:cido Actico: Agua: Hexano 4:3:5:1
M2 Butanol : Etanol : Amoniaco 2:1:2
Fuente: Laboratorio de Qumica Orgnica, 2015

REVELADO DE PLACAS DE CAPA FINA

Luz ultra violeta (UV)

Unas vez secos los cromatogramas que contienen el patrn de cafena y el analgsico llevar a la lmpara de luz ultravioleta (UV).
Dibujar las marcas visibles y luego tomar las respectivas mediciones para el clculo del factor de retardo (Rf).

Yodo

Colocar dos o tres cristales de yodo en un vaso de precipitacin, introducir la placan que contiene la cafena y el analgsico
dentro del vaso de precipitacin, luego tapar con papel aluminio, llevar a una fuente de calor (plancha de calentamiento, mechero),
observar.

5. DATOS OBTENIDOS

Reportar los datos de distancias recorridas por los colorantes y los analgsicos sobre las placas de capa fina.

6. RESULTADOS
Calcular el Rf para cada color y para los analgsicos con cada mancha observada.

Tabla 2. Datos obtenidos

Distancia recorrida (cm)

Colores
Solvente Marca Color Rx Rf
separados Rx (solvente)
(colores/analgsicos)

Fuente:

Elaborado por:

Reportar los grficos (fotografas).

6. DISCUSIN

Discuta sobre la diferencia entre solventes empleados en la prctica, lo que sucede con los colorantes y los analgsicos.

7. CONCLUSIONES
Concluya si se alcanzaron o no los objetivos planteados.

8. CUESTIONARIO

1. Indique la clasificacin de la cromatografa de acuerdo al estado fsico del eluyente y del mecanismo de separacin.
2. En qu consisten las fuerzas propulsoras y las fuerzas retardantes en cromatografa?
3. Qu es el RF?
4. El valor del Rf Depende del eluyente?
5. Qu es el TR?
6. Explique las razones por las cuales unos solventes son ms polares que otros. Considerar los solventes utilizados en la
prctica.
7. Por qu se dice que la cromatografa en capa fina es un criterio parcial y no total de identificacin?
8. Cul es la importancia y las aplicaciones de cromatografa de capa fina?
9. Qu significa que una sustancia tenga: Rf menor a 0.5, mayor a 0.5 e igual a 0.5?
10. Segn lo realizado en la prctica cul ser el resultado de los siguientes errores en cromatografa en capa fina?
a. -Aplicacin de solucin muy concentrada
b. -Utilizar eluyente de alta polaridad
c. -Emplear gran cantidad de eluyente en la cmara de cromatografa

9. BIBLIOGRAFIA

1. Introduccin a la Cromatografa, David Abbott y R.S. Andrews, Tercera Edicin., Alhambra S.A. Madrid., 1973.
2. Paper, Thin Layer Chromatography and Electrophoresis, A Teaching Level Manual, Smith Ivor and Feinberg, J. G. Shandon,
London, 1965.
3. Experimental Methods in Organic Chemistry, Moore, J. A.., and Dalrymple, D. L., Second Edition., W. B. Saunders Co.,
Philadelphia,, 1976.
4. Introduction to Organic Laboratory Techniques. A Contemporary Approach, Second Edition., Pavia, Lampman y Kriz