INSTITUTO DE SALUD PUBLICA DE CHILE PROCEDIMIENIOS TECNICOS DE LABORATORIC CLINIC@ MANUAL DL PARASHLOLOGI* SANTIPROCEDIMIENTOS TECNICOS DE LABORATORIO CLINICO MANUAL DE PARASITOLOGIA ESTAS NORMAS TECNICAS DE PARASITOLOGIA 4AN SIDO ELABORADAS FOR EL DEPARTAMENTO DE LABORATORIOS DEL INSTITUTO DE SALUD PUBLICA DE CHILE JTORES RUAN CARLOS WEITZ VATTUONE 1M. BERBEL! ASTORGA LEIVA WSDICE DE MATERIAS, FECOLECCION Y REQUISITOS DE LA MUESTRA TEGNICAS DEDIAGNOSTICO COPROPARASTOLOGICO + Método de Burrows 0 PAF Método de Telemann macitcads ~ Métodes de dagnéstica de Cryptosporidium parvum Zichi Neelsen moctticads Satranina + Aursamina + Téerica de seclmentacion rapa TECNICA DE DIAGNOSTICO DE Enterobus vermiculr TECNICAS DIFECTAS DE DIAGNOSTIC DE LA ENFERMEDAD DE CHAGAS Exameride sangre al treceo + Fronts earguineos + Gota grucea + Strout Merostout TECNICA DE DIAGNOSTICO DE Sercoptes scebiel Acarotest LISTA DE PROTOZOOS, HELMINTOS ¥ SUS FORMAS EVOLUTIVAS REFERENCIAS BIBLIOGRAFiCASTECHICAS DE DIAGNOSTICO COPRO- PARASITOLOGICO Las tetas Ge dagnéace copraparetolgice que se jiataien sor al eoda ee Burrows, Telemam mediicedo, JponiNoclsen Saranina, Auzearinay Seaimertacon ape La recoleceiin y requisites de las muestas, asi como os materiales y equipos, se detallarén en corjarto para ectas {Tocricas, salva la sedimentacién risida que se especticars apart. 3ECOLECCION Y REQUISITOS DE LA MUESTRA Requisitos de la muestra, Mueeira de deposicisntresca, recién emiida en unrecipien- telimpie y 2800, ne mezclade con erna. En oe lactantes fa muestra ge toma dol pafal, recién omigay siesta hospita- Tzado, puede obtenerae por sonda recta = Cada muestra debe golocats® en un trasco con fader, reeolecladas dia por medio, n un total de tres, Elvolumen maximo de deposiclones debe sor lamitad del fiador del rascay sta debe rezcarse ulzardo a peleta, ‘pasta obtener une emulién homogénee. + Elpaciente no debe haber recbido, er fs tims dos alas, artibisticoe, quimicterspleos, purgantes cleosos, antiparesterioe © compusstoe que cortongan carn y bar + Sien la deposieon se cbsorvan vermes, deben ser coloce- ‘dos en oto asco con agua potable ~ Lasmusstrastjedespuecen serconservaasurante varias Sernanas on un igarresc, de poterancia on rligerasor 1c Pingonanvnee ate beans eeceoocce ‘etigeracisn martoiéncous hernticamerecovresee ‘sin exposicién al sol : Recoleccién La orden de éolictud de examen debe inclu + Nombre compat del paciente Edad + Nimera de fcha + Procedencia Diagnéstco cinco « Alpaciente se le debe entregar 3trascoe etquetadcs, con 10, 15 mie fjador, 9 paletas de macera y una hoja mpresa com las instiucciones para la recoleccion de lag musstras, Las eiquetas deben tener siguientes datos: = Nlombre cet paciete Fecha do toma de muestra “Procadencia. a hoja de inctrusciones dabe becaree en los aspectos generale dotalladoe en le requisite de le muestra, adap tados a un languaje eencilo y comprensbe, Deb exaiicarse verbaimente el proceso de tema de mues- Sleldagnéstico es uigente, se pueden recib'y procesarias rmuestas indlveduaimeree,‘sterates y equipos ‘+ Frastos plésticos desechabies, con capaciiad ce 20 a 50m, boca ancha, tapa hermetiee,debisamente atique- 1260s. 2. Paletas de madera do 1-1.6 em de anche por 52 10 em 8 largo. : 3. Vaso de vierio de 180 mi como minima de capacidad, 4> Mallas de bronce fostérco NY35 9 40, cortades on ‘cuactos de 103 10 er, 5+ Portaabjetos y cubrecbjstos (20x20 0 22x22 ram} 6. Pipotas de 1.5y 10 ml 7 Pipetes Pasteur + Tubos de centituga de fondo cénico 39 15 mi ‘5 Graclls pars uses e cenrituca 10- Bandejas de plgstco do 20xS0x4 em, con tans, pare utilzar come camara himeds Mie Papel fitro para camara himeda 12+ Aceta de inmersion ge baja viecosigad, 13+ Centrtugactinieacontacomeio, de cabeza tioc floan- 14 Microscapia binoeuiar con lentes objetivos de 10, 40 y 100x, ocviares de 10¢ © iluminacion oe intersided variable Reactives y proparacién de soluciones Método de Burrows + Reactivos: Yodo en cristaies, yodurode potasio, cloruro de soda, solucin de fermaldehice al 37%, trnerosel 1/1000 0 tintura de merthiolato,étereultrico o eliza, terol en erste los (lances) liquido,etanel al 98% tionina en pave v agua desta Proparacién de solucfones 1 Fleder PAF: Clistales de fenol 2. Sol, salina sekonica (0.05%) 225m tana! al 95% 125 mL Formaldehido en eolicién (87 040%) 50. mi Disclverios cristales de fenol(209) en solygynsaline isotdrice (625.m) agregar etanol 85% (125 mi) ypormaleh ie (60 mi, ‘Mezciar bien y guardar en lugar treeco, Fenl igus (23 rt) Puede teempiazar a los 20 g de lencl en crislales. 2+ Tincén de MIF: Lagol 010. mt Formatdehida sol. (37 0 40%) 045 m Timerosal 15000 O75 mi, Debe prepararse diariamente, 3 Lugot Yoo 1g Youre de fotesio 26 ‘Aqua destiaga 30 Ta Guadar en raace obscure por no mas ée 1 mee." + 4 Tloninas Tianna en polo 10 mg ‘Agua destiads 100 Flrar con pape! tr vata veces hasta que'no c@ produzce Precipitaciin de los crictales al tafir las prepareciones,Iétodo de Tefemenn moditicado Reactivos:Yodo en eisale, yosuro de potas, clouro de ‘tod, soloion oo formaldenic al 37% ,imerosal, er sult Flea etlen y agua destleds + Preparacién de solucionss {> Fila formolsal: Formaldenido en solucén (37 940%) 50. CCorure oe sodio 5 Agua destlada 950m 2+ Tinciin de MIF : igual procedimiento que en el M: de Burrows, Zieh! Neelsen modificade ‘Reactivos: Azul de mations, deido acétic glacial, acide clomicteo,aleaholsifloe 95%, fuesinabasica anal rite lizado y agua destiada Proparacién de tinciones: Fucsina + Fuesina basica 109 *Aleohet etles 250 100 mi * Fenolerictalzade (*) 50m “Agua destlode 2p, 900m + Fundira baho Mara eltenolcrstalzedoagregando 10%de ‘agua daetlada y de este medir 50 ml (aprox 50g) Preperacién: dieoWer la fuceina en 9 leahel y [ego agregar ei fenoléieveka en el agua destlada tibia, 2+ Azul de metileno *Azulde metteno zo ‘cldo actico hacia! 50 ‘Agua destlads 0-5 p 300: mi 2+ Aleehot Seige ‘Acido clohidiico 30a “Aloha etico 95% 970m Tincibn de satranina -Reactivos: Satranina, azude rtilono, aco acco gla claly aqua desttade. = Preparacién de tinciones 4 Solueién de Sefrarina Salanina ts + Agua desitada csp, 100 a 2+ Azul de mottene, “azulde metleno 26 “Acido ecetizo glacial 50 “Agua desilada ¢.3.. 1.000 = Tinelén de aurearina -Reactivos: Aureaming, enol en e“tales, prmanganato 6.potasio, cid clrhidrico, alcoho etiico (05%), butter PH95, gleerina y agua destlads - Preparacién de soluciones 4. + Aurearina * Aureamin 20 ng. Fenet 39 = Agua destiada C85 100m2° Pormanganato de potasio Permanganate de petasle 100 ‘agua destlada cep, 108 + Mantener amibas soluciones en botella amb 3+ Alccholaeics ‘Acido clarhidtica 30 ‘leche elico 95% 970 4+ Gilcerina para tlorescencia + Glicetina pa Fa Butler PHOS 10 METODO DE BURROWS 0 PAF Goneralidades Es un métods ae concentracién de las depceisiones, recomendade por el Laboratorio de eterenciade Parastologia, por su buen rendimienta en el diagnéstico de huevos de Fekrintes, qulsteaytrofozatas de protozoos. Os gran uilidad para el diagnéetico de E, hsiohyica El fjador es lavererte ‘mis cato que €formoleal, ol proceso de las muestrat ex elgo ‘deroroso y la lectura'ecupa mayor lempo que el Telemann. “Procesamiento de Ins muestras 4 Durante al praceeariento de este examen, al igual que peralae otto oxmenes de dos corporles, se daben ‘quarda’ ae precauciones contenidas enlos manuals de Dloseguridad, 2, Numerar los 3 frascos de un paciente con un mismo 32 Numerat 2 poractistos, 2 vases y 1 tubo de centrituge con | mismo nimero de les Trascos. Marcar un poracbjetos con la letra Ty otro con i lee O. 4. brirlosracosy resuspenderis emulsiénfecaleenuna palota de madera, +5, Vaciar la mitad de contenise de cads Irasco en unvaco y agregar fiador sila emulsién es muy espesa 6. Tamizarla emulsion a través de la. mala de bronee foeterieo haela un vaso limple. 72 Observar el material etenido en la mala buscando pardetos macreeaspicce {8+ Colocar aproxinedamente 10 mls emulciéntamiza- da en el tubo de centiluga numerece. 9 Geninfugat por 8 minutos ante 7.500 y1.800r.p.m. no ‘hicar balancear los tubes. 40 Elminar ol ntvanadante fviniondo tuba,tte Resuepender el secimianto en sotuién salina iotenien hata competar aproxmadamente 10 mL a Genttfugar nuavamenteiguel que en el punto 9 Te erie sdbronadante invitiendo el tubo: sel se frente es muy eceaza, agregar aprovimadamente 2. Gea emulsion fecal obterida en la etapa 6. tae Repel tt, 12 y 19 baste obtener un sobrenadante Fibtvamente fimpo fe requleren 2 2 3 centhilugeds=) e:, Golover una gela de tncien de fionina y.una de MIF, Seetedae Sem. entre si en el portachletos arcade 7 16+ Gatocar doe gotas del eedimento, une junto 2.6843 9°12 a tein. 17 Gon un angulo de evbrecbjetos mezciarel sediment 7 Ie neler, extrr. Repel con loro par de gatas 12° Guardar eneamara hued: ésla es a fase trofozellen de la tecrice, jo. Resuspender el sedimenio of el tubo con soem alia; si elsedimento es muy eacasa agregar 2mi ela femulign fecal obtenida en 6 Joreger une ecurana de tom de allure de ater atiléo > sulle. « Gekiral tube.con parafiim o =a cement, Destaparlentarrente 22: Cantehugar por 4 minutos entre 1.800 1.800 p.m. 3a. Veclar of eobrenadante en forma Brusca, iviriando el tuto, ‘bd Concer une gots de eoluelon de tionina y MIF come en 25+ Clear dos gotes del secimerto, una junto a cade gol dotircion ‘25. Proceder igual qe en 17. Esta esa fase qustice de! reerica by. Goloser ef edimara hirkeda haste la lecture. Este Sroparaciones se puédan conservarhasta 24hores eile amare, quardada a 3°C. _yagtaronergh Leciura 1 Leet anbas preparaiones de a fase quistica con Lael Sr toy low oswpar 100¢ en caB0 ée lagnesicoce Bos a+ Frocese’ de igual forma alee: as preparaciones ce ia fase lorie. oe ae 23 Lalesuta be se ordenaca y stomaten,abarcando tois's presanciny conceals hmfes ot Tone ov ipenengan pero de Sass + Informe de resultados ‘1s Elinlorme debe incluire nombre complete deipaciente Inte ficha, procecenciay fecha de erision 2.- Se debe indear el rumere de muestras examinadas, 31 Slelresuitado es negativ ee informa: Porasitologico seriado de deposiciones etowa de Burrows (PAF) (Brmuestras) No se cbservan elemenios parastaios, 4 Sies posto dobe informarse! Parasitolagico seriado ce deposiciones Ieétodo de Burrows (PAF) (Gmvesiras) Huoves ce Hymenoleps nana Sujstes ee Giavts lamba ‘Siempre se debe indicer la forma evoluiva (huevo, vist, aoquiste et.)y elnombre clertlicocorractamen- {eset (Ver tabla Pag. NY 4}sencentradasen : Serecemionda roclatieelas ep raatoeycomeraales. 1 EYER sheme onmarie presencia de toes de Charet Leyden cuando o oberon, Registro En ellora de registro destinado al examen paresiteligico Ge deposiciones ee dobe anctar = Fecha del examen Eead Procedencia = Numero de Fa + Tecnica emplend= Resutado METODO DE TELEMANN MODIFICADO Generalidades Es un método de concentrecisn de is elementos paraéi tarios y comensales, de utlidad principalmente para el ciag- Teslice de huevos de helminias, quistes de protoz0oe Croessionalmente trofezoitos. Si bien fue una técnica de Sola clusion nacional por cu rapidez y economia, été Tends reemplazada por el métedo de Burrows, cuya ventaie ceei mayor rendimienta en el dagnéstico de Enlamoebs histoyies, Prozesamiente de la muestra te urate el proceso de este exarson.aligual qe para los (tree examenes de fuidos Corpoveles,¢e deben guardar las precauciones contenidas en los manueles de bloseguide| 2 Numarar los res ftaecos de un pacientes con un mismo a: Numerer 2 portacbates, 2 vases, 1 tubo de centrituga ‘con el misma nlmere de los frescos 44. Abr ine frescos y Leer Is preparaciin ctecta con aumento 10 y 40x 81 tuera nevesaro. 2> Leer ambas preparaciones concentradas, despues de Untiempe prudeate para dear actuarlatincién (10 mi), Utiizar aumentos de 10, 42 100x en caso de diagnos: tica de. hstolytics, > Ua lectura debe ser ordenade y sstematic, abereando toda la preparactén y cuidando que los limites de los recortidos se superpongan pata no dejar areas sin Informe de resultados Lascaracteristcas delinforme son simtaresald|métodode Burrons. Solo debe reemplzzarse metodo de Telemann mod ficado por el método PAF. + Registro ‘Se regatran iguales parametres que en Mc Butrou= DIAGNOSTICO DE CRYPTOSPORIDIUM PARVUM Goneratidades Eldlagndstica dé Cryptosporidium parvum sé puede rea lear por diferentes métodoey en esta guia se detalaran nee mayor importancia, por su facil ejecucisn, rape, costo y sonebiad Les técnicas que se describiran son 3: Zieh! Neslsen ‘mediicado, Safranina y Aureamina. Las dos primeras son lnciones permanertas, de bao costay sensiblivad sila iy “hima es mas répida enlalectura, pro mae costosay requicre de microscopio de Nuorascencia, ZIEHL NEELSEN MODIFICADO Procosamiento de las muestras. 1) Durante elprocesamiento de este examen, aliguil que para los ts exémenes de luidos corparales, ce eben, (quarderlesprecaucionescontenidas elas manuaies de Dbiosegurided, Numerar is tes frescos de un paciente, portacbjetos ‘vases y tubs de centuga. 38% Abii frescos, rosuependier a emuleién fal con una palota de macera. Vaciar la ited del eantenio de cada frasco en un vaso y agregar liador (PAF 9 Formolea), ‘Tamizar la emulsién a través de mala de bronce fost rico hacia un vaso limp. Of Colca aprox. 101ml. dola emutslintamizads en untube ce centrifuga 28. Centtugar por minutos ana 1800 1860 rp. 2S Eliminar ol sobrenecarte invitiendo él ubo, 7 Temar una gota del secimierto con pipeta Pasteur ‘8+ Confeccionar un estendio sobra un partachjet; el grosor del rots debe perm la lature a su taut 9: Delat sacar a temperatura ambiente. 5° Cubsiela lamina con fucsina 4+ Calentar a lamina hasta a emisién de Vapores blancos, _zinpermiicque ierva, Silalamina 9 s8ca, agregar mae ‘oborenie. (2 Dear a timina cublera can fueeina por 15:20 min12+ Lavar sl ois con agus dastiads © potable. 14 Oecolerar eon eleoholécklo por t min. le extencldos ‘mas gruesos requieren mis timpo, Ee imperanne no decclorar 18+ Lavar con agua, 46+ Curr la lamina 6on azul de metilno, por 1 minvte mminime. 1+ Lavar con agua, 48> Dejar eecar el ambiente + Lecture 1+ Leer el frie completamente y con aumento de 100x. 2. Los coquites de Cryptosporidium parvum son de 4-8 rierones de dmetra redandos, de cole oj; se puede ‘conocer una pared contenido en elintror. El onde de la preparacién es de color azul = Informe de resultados ‘o linforme debe inclu el nombre completo del paciente, Nt de fica, procedencia y fecha de emision. 2. Slel vesuitado ee negetlve debe infermarse: Bésqueda de Cryptosporidium parvum Ziehl Neolsen Moditicado No se observan ooqulstes de Cryptosporidium patvtr + Sis postive debe informarse Buequeda de Cryptosporicium parvum “Zehl Neelsen Modificado Se chserva ooquistes de Cryptospctictum parvum Registro Se pracede igual que el método de Burrows, SRFRANINA Procesamiento de las muestras Etapas 1 99 igual que en Z, Nelsen modi. 10. Cubsirla lamina con eatanina, 1 Calontar le lsrine hasta que bier. 12 Deja la Ibmina cubierta con eatranina 1 minut, 13> Lavar ates con agua potable, 14> $60 en caso que el tots quede de color naranja intenso, decclorar con aleohol elo por 1 eegundo pera relia el exceso de safranina, Tener cudedo ce ro decolorar demasiado, 15+ Lava con agua, 18+ Cubrirla lamina eon azul de metilno por t minuto, 47> Lavar eon agua, 18> Dejar seca’ al ambiente, Lectura 1. Leer eltrats completamente y con aumento de 100 2+ Loe eaquisies de. Cyptcaperisium ge absenvan de 4-5 microns de clémetro, redondos, de color arena Intenso; se puede reconocer la pared y con facia el Contenido intrier. Fl color de fondo dela areparacion os gre-srul Informe de resultados Elinforme debe inclu el nombre complete det paciente Nt de ficha, precederciay feona de amisonINtde cha, procedenciay fecha de emisisn, 2: Sielresutado es negativo debe Informarse Busqueda de Cryptosporicium parvum Tincién de Safranina| No se observan coquistes ae Lryplosporiturh parvum + Sis postive debe intormaree: Biisqueda de Cryptosporidium parvum TinelBn de Satranina Se observa coguistes de Ciyptesperidium parvum Registro de resultados Igual que en tericas anteriores AUREAMINA + Procesamiento de las muestres Elgpas de 1 a9 igual que tincién de Z. Nelsen 10.- Curr ia lémina con aureemina 11 Dejar la mins eublerta oon aurésmina por 10 min. 12> Laver el ots con agua potebe 18> Becolar con aleohobacido por trinuto minima 14. Laver con agua. 15> Curr la mina con permanganato de petasis por” ‘segures, 16. Lavar con agua 17. Delar secar en ambient. 38> Monier con glcerina para inmunolluorescencia 19 Mantaner effets en la oscuridad hasta su leciua, Lectura er elfois completamente eon aumento 40xy encazo ecesario 100x 2. Los coquistes de Crypiasporcium ee cbservan redon- dead y su contenido de color verce-amarilo; se puede reconecer la pared y el contenido inlrior, Eltondo de ia preparacion es de color nag. Informe y registro de resultados Se procede iguel que el Z, Neelten y Safranina, consig- nando que se trata de Tincién de Aureamina, TECNICA DE SEDIMENTACION RAPIDA Generalidaces Es une éerice sencila, de bajocostopare'serimplantada ot les laboratories de parastologia de fodos las niveles de complead. De uilldad para el dlagnostica de huevos ‘opereulados, especialmente loe de Fasciola hepatica Materiales y equipos 1 Frascos plisticos desechabies de 90 a $0 mi, boca ancha. taps hermtica y debidemerte etiquetads. tas ce madera de 1-1,5m. de anche por 10m. de lag. 28 de vitro de 150 ml. minim, 4> Malles de Bronce fostérico NF 36 2 40 en cuadrados de 10x 10m 5. Porta y cubresbjetes. 2io Gepas cbnicas do vitro de 150 4 Agua caliente (60:60°C) Bu scopie binocular de iquales caractersticas aus on rétocos anteriores. Recoleccién 4 Us orden de solickud da examen debe inclu Hombre completo de! pacerte ceded Nurmero ae sha “Procedencis “pjagnéstico einico 2 Aipaclertesele debe enifogar0trascosetiquetedos.con fda 15 mild flacor (PAF 0 Formolal, de acuerdo al we fode en usa por el laborstoro] con las paletas ce eee ry ona hela impresacon las intruciones para la Feeolecclén de las muestras. a. Cap etiustes deben tener cufiente espacio para lenar ioe siguientes datos Nombre del paciente “Fecha de toma de muestre Procedencis ‘4c Lana de instrucelonas debe basarse enes aspectos Gonerales que sean deialidos en elpurtorequlstos gererjestra, adaptados a un fenguaje sencilla ¥ comprensibe 5. bebe explasrae verbalmente et proceso de toms de ussite. « Requisitos de le muestra Lb requ de taia de musta de dapescin son os seer desetioe para el mélode de Burrows 0 ef de Telemann modiesd numero de muesiras en sete examen €8 det, tome dee on das segues. No ohidar que las muestras lads pueden ser conser We a durante varias samanas en luge reaco, ce pate vena en retrigerader a 4°C. Pueden envierat a otras (eaSidades sin nevesidad de rfrigeracién, manteriér Kose hermaticamente cerrades y sin exposicon a sol Procesamiento de las muestras, 1 9. 10. Durante el piocesariento de este eximen, al igus! ue paratosotres ramenes 6 fhidos corporeles sedeben Petrdarasprecaucionesconterida enlos maruales de Biosegurided, None tascos,conascéricas,vasosy portacjstes, ~ uti on fresco, hacer una emulsion dé 4-8 g, de heces Gn 30 mide agua caliente (50-60%) Hiymegenizer,ahaciendo progresivamente agua de Teve, que puede 2 a. dave Se Fria malla metas dreciarnente on une cops Tangent Dreger agua através cela mall ests comple fara copacidad dela cor. ‘Sir sedimertar 5 minis, elminr el sobrenadanis y eotcger nuevamente aguafiishasta completa cape cidade ln copa, sescarin lave antoro dos mas veces hast logs FePSferencia del agua y daspube cea tima secimen angeeremmover igeremente el escimierto, aspirando on una glpsta Pasteur core Ei cbtonido se reperte proporcenaimenté £n ca aebjats yo» procede al examen microscopic. ee rocedimiento se repte con cada muestra, Entste una Varlante que consiste on el examen det ssarmont enero on lace, Pat yb us tetereoseépica, removiedo a muestra con pipsta Pesiour. beta aceLectura 4+ Leora musetra con aumento de 10% 2+ Lalectura debs cor erdenada y sotematieg, abareando toda la preparactén, > Los huevos de F.hepiica son deforma ovalada, de 150 mierones de dlametro mayor, colérpardo amarilento y con un opércule én uno de sus extremos, Informe de Resultados 1+ Ellnforme debe itu elnombre completed Fente, de cha, procedonciay fecha de emis. > Slel estado es negativo debe ilarmarst ‘Buisqueda de Huevos de Fasciola hepatica Téeniea Sedimentacin Répida No 62 ebeervan huevos de Fascois hr 3+ Sis postive debe informarse Biiequeda de Huevos de Fasciola hepe Técnica Sedimentacisn Répida ‘Se observan hivevos de Fasciola hepa) + Ragistro de resultados Igual que en teenicas anteriores. IECNICAS BL DIAGNOSIICO 11 FNITROBIASIS U OXYURIASIS MELODG Di GRAHAM. Generalidades Método de vsorutinaro ens lboratriosdeparastologia de todo nivel, Se emplea para el cagnéstico de infecctén por Enfarabive vermicularis Eade ato rendimierto para el diagréetico de ests infec ‘ion ( mas del 90%) al compararla con el coproparastolbgico ce deposiciones (5%). La Gesvertaja es la dteutad en la toma de la muestra Materiales y equipoe 1+ Portaabjetos. 2 Cinta achesiva, ransparerie, de t #2 cm. 3: Mictoscopio binocular con edas ls objets efuina- 26nd intensidac variable. Proparaci6n de Materiales 41+ Numerer S-portaabjetoe de | €15con lip gras0 0 rmareadorincelbie. 2+ Gorter trozae ce cintas acheeivas de aprox. @ om. 3 Adnetir un trozo de cinta adhesiva en cada uno de los portavbjetos en el sentido. au ele mayer, cubriéndoios ‘en extreme aro dejando aproximadamente 1.5emn ep chia sobresalierse4- Doblareltrozeds cinta eobresaliente sobre si mismo pot la cara echesva, formado un asa, de la cual se puede ttaccionar pata despegarla del portaobjeto. ‘5. EnvoWver los 5 portaobjtos preparados en un papel on ‘lque s0 debe anatar al nombre completo del pactent. Requisitos de las muestras te Tomar una mussia diata, en dias seguldos, haste competar 8 2 Cade dia ee debe utfzer una place nueva. $3 Tomar la muest en la mefana al leventarae, ant realizar euaiquer ectveae. 4« Ideaimante otra persona cebe tomar la muestra 5. Nose cebe aplearpomacae, talconictras subtancias en la regicn perianal durante lee dias en que se tomen las muestra, 6» Despegar la cinta dela place y sufetar rte elpulgary cldedo indice, cone! lado adhesive descubierto 7+ Conlos dedos Indice y pulgar de Ia ora mana, separar las nalges del paciente y aplicarvarise veces la ears ‘adhesive dela cinta akededor cel orficie anal, on forma racace 8. Adheri la civa nuevamente @ la place, alséndole con ‘suavidad y euldando que quede peraiela al borge del ponaobjotes. 2 Lavarse las manos culdadosamente con agus jabén y uilzar escobila pera ufas. 10 Las muesivas obtenides pueden guerdarse por varios meses enlugartiesco, Se puederrenvar eotrs lugares, ton el cudado que en el vaslado no se rompan. 1+ Rlechazar las muesiras que contengan deposiciones. Recoleccién Lacrden oe solctud de exémen debe inclin ‘Nembre completo del pacionte Edad Numero de tcha Procedencia Diagnsetio Citleo 2+ Se entregan al paciente los 5 pertacbstos envuelos y tuna hojaimprese con las intrucciones de tora de mues- tra > La heja 6 etrucciones debe basarse en los asoest igonerales detalacos en el purto anterior, adeptados & Sr lenguaje comprensisie para ol paciente « Debe explicarse verbalmente las insrucciones a los pacientes, rosesamianto y lactura 1 Las lashings 8 lean directement, cn requetr prepara ion previa, 2 Emplear aumento de 1Oxy cuando hay que dferenciar Un huevo de una burbuja, ulzar el 40%. eer sictemates y orcenadamente ia superiie ce le Ghntaadhesiva, cuando que tslimitesdalos recorrcos ‘Se superpangan entre ei, parano dejar areas sin exer 42 Sie encuentra otro elemento paresitatio,continuar la lectura en busca del huevo E vermiculer's ‘5x Detenerialocturaal encontrar huevesde & vermicularis.- Informe de resultados 4 Dabe incur el nombre completo del pacente, nimero de fiona, procedentia y fecha do omision. 2+ Se dabe incécar el nimero de places leidae, 3: Slee negativo debe informarse: Método 0 Test de Granam } Nido mucsiras: 5 Flo se observan huevos de Enteroblus vermicularis 4+ Sies postive debe informarce Método 0 Test de Graham NFde muestras: 5 Huevos dé Enterobivs vermiula Registro 1+ En libro del laboratotio debe haber una seccién dest: dasa le test de Graham, 2+ Sé debe inclu ls siguentes coluznnas para le datos: = Fecha de examen “Nombre complet del paciente “ded + Procedencia = Nomar dé fleha “Numero de placas lecas Rosutados: IICHICAS: DIRECIAS PL_DIAGNOSTICO DE TNIFRMEDAD DE CHAGAS Gonetalidades Los extmenes diectos de sangre se ullizan en Chile fundamentamenta para el clagnéstico de la ertermedad ce ‘Chagas en su etapa aguda (daniro do lac prmeras semanas de Infecc} Elfundamente de elias es pesquisarlas formas clculan tes del pardoto en lac etapae tempranas de nfeccisn. Estas \enices deben ser aplcadae anto a coepecha de un Chagas agudo y s8 debe realizar en todos los leboratoros de Parasitologia del pale de evaiquer nivel de complelded. Estos métodoe sande ayuda adamés en el dlagndsticode ‘hala, latiasis y eypanosomiasi afiean, Se ceserben 4 Imélades, as que en el estudio cinico debom eer eomplamertados con ecnicas de mayor comple ed, come wenodiagnosica y seguimiento serolgico. =XAMEN DE SANGRE AL FRESCO Materiales y equipos. +-Laneetas Aigodn 203 ‘Alzahol de 70% y 90% ~ Portacbjalos desengresedes (en alcohol 70% y $0%) Cubrecjetos = Mioroscopia éntico bineusarToma procesamiento de la muestra 1+ Durante fa toma de muestra, lecture y descarte ot material, se deben observar rigurcearente todas las ‘necidas de bleeegurided que correeperden al trabajo on fluids corporles, en especial ange, 2+ El ao de puncion Iceal es la yerna ce Tazonadebe estaba, aque selogralcolocer el edo cheque tba ifuese neceeario, Otros ioe de puncis ‘sonal bau de arelay en rectn nacido eltalén cel pie (museira dealdebeterare con ancetajencasoderealc pureidn venoes, tomarla muestra dkectamente de age 3+ El silo de puncién ee debe limpiar y desinoctar co fase o elgodén ean elechel sl 70%. Luego, secar le Zona con gasa estérl, es preterble el algocén, el que puede dejar libra que difcutten ia ectura 4+ Pinghar la zone elagia con fanceta esto 5- La primere gota de eangre ee debe lrnpar con gasa. La segunda gola se coleca entre porta y cubredbjetos. 7. La preparactin debe er delgada, para obtener une buena observacion miroscepica + Come minimo se requiare examinar § preparados por pactente. redo anuler 6 + Lecture fh La lectuza s@ realize inmesiaiamente de tomadt la ‘mueeiraresarriando el preparado con aumento £0x mayor 2+ Lafotma citculante de Trypanosoma cruz eltsgomas- tigote, es de 20 micrones de largo fulterme, eon un flageb y lomasimportane es su movida el encontrar: ‘29 rodeade de hematies ayuda a localizaro, (Recustce fe que tote es la forma infactante Ge la enfermedad de hages) Informe de resultados ‘Le Elinlorre debe incu al nomére complato del paciote numero de fiche, procedenciay fecha de emision. 2. Slel resultado es negatve debe Informarse: ‘Bdsqueda de Formas Circulantes (0 Tripomastigotos) DE T. cruzi Exémen de Sangre al fresco Namero de muestias examinadas.. Nowe observan formas circlantes de T. cruz) ‘Sie! examen es postive debe informar BUsquetia de Formas Circulantes ‘0 Tripomastigotos) DE T. cruzi ‘Exémen de Songre al frosco Narhero de muestias exeminadas:.. ‘Se cbeervan formas ereulartes de T. cruzl Registro Enelibrode regstrode examenes drectos de sangre se 2 arctan: Fecha de examet “Nombre completo del paclonte “Edad Procedencla Numero de Ficha “Técnicas empleada “ hmere da mupstras examinadasFROTIS SANGUINEO nateriaies yequlpos 1 Lanceta 2. Aigedén gasa 3+ Alpahol de 70% y 90% Portaobjetos desengratados(en alconot 1v y 80%) 5 Pipeta Pasteur 6. Tinelon do Wright 7. Aqua dectiads 8» Mitroscapio éptico binceur. Toma de muestra Igual que para el examen de sangre al resto. - Procesamiento de la muestra 11+ Colocar una gota de eangre en uno de las extremes de portaobletoe aebidamente desengraseco. 2+ Bacender la songre sobre la superte del portecbietos Eonotioporaetistes, eonfecclonand tina delgada capa Un tots esta compuesto por una capa gruesa en un fecramo y unadelgada ene oio. Ese ima dabo med Some largo, ocuparla pare ceriral de lalgmira y dejar rmargenes 2 cada lado. 3+, Dejar sacar al ambiente Centar et nometo de gotee da tncion de Wight que se requiere para cube el (als Deja ropocar de 12 3 minutos. Relagarel lame numero ce gotaisce agua desfiads (0 butter fostaio pH 6.6 2 63). Mezclar suaverente le tinea y el agua Deja ranosar por 4@@ minutos fe Reriover Ia tincion eon agua destlada o buller save- mente, No_se recomionda eliminar la tincion antes de Invar con agun. puee se puede preciptar en el ais. ‘9+ Onjar eecar al ambient. 10. Esta tincion puede eer reemplazeda pot e! Giemsa. {i Este examen tiene major rencimiento si se efectin en forma serada Lectura t= La lectura 26 reatza fecorriendo el preperadé con au mento do 40 y 100x euidando de no dejar zonas sin beervar. 2: La forma creulame de Tiypanosome cru eltipomas: tigete, ee de 20 mierones de laigo, [esilorme, con wn Nisgelo Informe de resultados al resco, expectcanc e! Igual aldel examen de sang metodo! trate sanguineo. Aegistro gual que para el examen anterior GOTA GAUESA eriales y equipes Lanceta Algedsn 2 gasa ‘Aleohal de 70% y 90% + Ponacbjetes devengrasados|en alcohdl 70 y 90%) Pipata Pasteur + Agula hipedérmicao afer2. = o incon 2e wiemee ‘Agua destlada erossopiaopica bitocular Tome de muestra Igual que para el examen de sangre el resco - Provesamilento dela muestra Colccardes tres gotze dela eangro onl portacbjeter, (1 gota de Giemsa por 2 ml do agua cestada} Eltretis debe axquirr un colt rojo por la hemogisbina ive, « Repetir 2 0 3 veces este proceso; cambiar el Giemsa ada vez. Eltrats debe adquitr un color azulino rans Parente a os 150 mas minutos, éebido alla débiltncion ‘eglobulesbiancos, plaquetasyparasios ylacesaps tieién de los gules rojos. CCubri a imine eon Glemea consenirado (1 gota'de Gicinsa por 1 mide agua destilada), (Deiat ia tinea por #8 a 50 minutos. * Lavat la lamina colecandnla dantro de una cubeta con ‘agua dectiada por 3 5 minutos. No lavar al charo de agua, porque se puede desprender Ia preparacion + Secar al amblenlé en posicén vertical Este examen, a gual que los enterores,tlene mejor rendimionte #166 efectia en Icrma seriada, Lectura 1+ Lalectura se realize recorlendo el praparado complet. rmante con aumentes 40 y 100x,culsando ge no dejar zonae sin beervar : 2- Latorma crculante de Trypenovoma ert liners ete, es de 20 micrones de large, tusforve, con un fags, + Informe y registro de resultados Se procede en forma sinilar 2 los evdmenes anteriores, especiicande la técnica empleada, METODO DE CONCENTARCION DE STROUT Este método permite, con una extraccién de sangre, obtener susro para serologiay el secimanto para la observa cin de ttpemastigote de T. cruzi at 2 y equipos 1 Jeringa (10 m) desechable con agile 2. Algodéno gasa 3- Alcohol de 70% 52 Penacbjotoe 5--Cubreabjetos 5. Fipotas Pasteur 7 Tubos de centrtuga 2+ Centiluge 8 Micoscopio price binocular Toma y protesamionto de la musstra 1+ Durante fa toma'de muasira, li lectura y descarte de materiales se deben observar rigurosamente todas las,rmadidas de biosegurdad quo coreeponden al trabajo ‘on fluidos corporat, en especial sangre. 2. El silo de puncibn, idealmente el plegue cel cove, se debe limplar y dasinfectar con gasa 0 algaden con alechol al 70%, + Extraor 5 mi do cangre en aniicoagulante, mediante puneién vances, Vacier la muestra en tubo estérly gel comgutar. ~ Dejar decantar el suero obtenido. © ‘Cenintugar a 180 g durante 3 minvtos para soparar los glbaulos ojos. Extfaer el sobrenadante(ouero) y quardaria para etec- tuar el estudio serolégico 8+ Colocar 102 gotasdel secimento entra portay cubrec- Jetos. Confeccionar varias preparacionee, s 9 Lectura 4 Laleetura se realize reorrende el preparado comp mente con aumentos 20 y 40x, cuidando eno dejar 2onas sin obsorvar, 2+ Aligualquolatécricade sangiealresco, de debebuccar la forma circulant de Trypanosoma cruzi el bipomas tigole, que es movi - Iniorme y registro resultade Seprocede iusl que en métodos erteviores, espectian: ola técnica uliizada, MICROSTROUT 0 CONCENTRACION POR MICAOHE: MATOCRITO Este métoto tiene similares caracterstcas que el Strout vy tienda raemplazerto, lates y equipos 1 Lanceta 2. Algodén o gesa 3+ Alcohol ee 70% 4> Portactjetos 5- Cubreobjotos 8. Capilares de microhematocrto heparinizados 7: asia 8+ Centrifuge para microhematoctto 8 Microscopia optico binacular Toma de muestra ‘Se procede igual que pera el examen de sang Procesamiento de la muestra ‘1+ Colocar en el sto dé punclon al caper de ricrohem: techs heparinizade, Tepar el extreme Inferior del expla con mee ‘3+ Centritgar por 3 minutee 01.000 rp.m. En caso de no oseer mierocentifuga, se recomiende colacat fs cap larea dentio de un tubode centrifuga como en el Sita. 4+ Fracturar el caplaren el imte de i eapa de entrocitoe yy leveoetos; en esta oporacién ee deben extrema las ‘medias do bioseguriad. 5° Depositarsobre un portacbjetesla cepaleucoctaria mir plasms, E + Emulstona a preparation y cubrir con un eubreobjetor Te Parte del plasma puede eer guarcado pare estudio serolsgicos 8» Se recomignda examina 6 coplares por pacientes. E1 Fendimiento es mayer s se efectia an forma seriada,Lectura to La lesa se realiza recoriendo el preparado con’ ‘rerio de 40 100 cidendo de no der zonas sn cbs ovr 2+ Se buacan las formnas creulantes y movies de T. cruz! - Informe y regist de resultados Igual que en técnica ante! IECNICAS DE DIAGNOSIICO_ DF SARCOPTIS SCABIEI ACAROTEST Generalidades Ee un métoito sencilo de clagnéstico de! fare de | ‘arn, Sarcoptes scabel debe estar implementaco en todo ibs laboretarioe de paracitlogia cel pals = Materiales y equipos 1 Partacbjetee. 2. Cinta adhesive transparerte de 1 2 2m. de ancho. ‘3 Microscopio binocular con jluminacién 48 intenside varable Preparacién de materiates ‘i= Numerar 10 portaobjetos con lapiz graso 9 marcatc Indoieble 2+ Cotta 10 troz0s de cintad adhesivas de aproximade mente Bem, de largo ‘2, Adhrie un trozo de cinta a cada pottacbjeto en su 8 mayer. Dejar eproximadamerte 1.5 em de cinta 2 aadherit ala lamina 4. Doblarlos extremosdela cinta sobre si misma, fermanc ‘asas de Ine cuales se puede traccioner Toma y procesamiento de la muestra {= Tomar 10 mucatras por paciente 2° Uplea ioe estonce, de preterencia las escemongs, cc prupelones recientes, en especial en la zone 20 ph Side come munseas, codes: artebrazo,inferdighsle Silas, espelda, cores dal omblign piomas, planta ¢Faspar suavemente la lesi6n con e! norde del portaobjetos. 4 Una ve2 stectuado ecte procedimiano, desprendir Ia Detener a lectura al encontrar sjerplares de Sarcoptas gcabiao de sus nueves, 4 Elacaromide 150micronesel machoy 200-380 misrones le-hambra, Su forma es oval, con ¢ pares de patas, 2 anteriores y 2 posterires, Et cuerpe posee numerosas ‘cordae y copings quitinosae digas hacia atras, Los huevos son ovales y miden 150- 180 micrones. pio con aumento.de 10x Informe de resultados 1. Debeinclue! nombre completo delpaciente,ndmerode fiena, procedencia y fecha de emisién. 2. Deb cansignar el nimero de placas leidas, 3. Slee nogatve debe inormaree: ‘Acarotest (Bisqueda de Sarcoptes scabie). ‘Numero oe muestra! No 20 cbservan ejemplares nj husvos de Sarcoptes seabiel 4 Ses posawo cene intormarse: ‘Acarotest (Bisqueda de Sarcoptos scabie). Numero de muestas! ‘Se opservan ejemplates a huevos de Sercaptes sca segun coresponda Registro 1.» En ebro ce laboratorieisbe Haber una seccién ct nada a anotar los acaroeste 2 Debe inclu calurnas para ancta: Fecha de examen “Nombre completo del patente “Edad “Precadencia “nlumare de ficna Namero de placasleidas “Reesukads.