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Tcnicas de identificacin
1. INTRODUCCIN
ciente para hacer posible la discriminacin entre los gneros y especies. Adems,
hoy en da, las tcnicas de biologa molecular (basadas en la caracterizacin de
genes especficos o segmentos de ellos) son cada vez ms comunes y utilizadas
en Microbiologa Clnica.
3. IDENTIFICACIN BACTERIANA
La taxonoma bacteriana tiene como objetivo la construccin de sistemas
que permitan clasificar a las bacterias. Dentro de la clasificacin taxonmica,
las categoras y definiciones ms utilizadas son familia (un grupo de gneros
relacionados entre s), gnero (un grupo de especies relacionadas entre s),
especie (un grupo de cepas relacionadas entre s), tipo (grupos de cepas in-
terrelacionados dentro de las especies; por ejemplo, biotipo, serotipo) y cepa
(aislamiento concreto de una especie en particular).
Uno de los factores clave para identificar a las bacterias como agentes
patgenos depende de su aislamiento en cultivo puro. Una colonia en cultivo
puro est compuesta por un solo tipo de microorganismo y procede de una
sola clula original. Las pruebas de identificacin se deben hacer siempre con
colonias nicas procedentes de cultivos puros.
t 5BYPONJDPQFSNJUFMBDMBTJmDBDJOJOJDJBMEFMBTCBDUFSJBTVTBOEPDSJUF-
rios morfolgicos (tamao, forma, agrupacin, carcter tintorial).
t $MOJDP QFSNJUF VO EJBHOTUJDP QSFTVOUJWP EF CBDUFSJVSJB TJHOJmDBUJWB
tambin un diagnstico etiolgico orientativo del lquido cefalorraqudeo
(LCR) de un paciente con sospecha de meningitis, etctera.
t $POUSPMEFDBMJEBEZWBMJEF[EFMBNVFTUSBSFNJUJEBQBSBDVMUJWP
DPNP
sucede con los esputos y otras muestras del tracto respiratorio.
t (VB QBSB FM QSPDFTBNJFOUP EF MB NVFTUSB PSJFOUB TPCSF MB FMFDDJO
de los medios de cultivo, temperaturas y atmsferas de incubacin,
requerimientos nutricionales adicionales, etc. ms apropiados segn los
microorganismos observados en la tincin.
Tabla 3. Tinciones y mtodos microscpicos para la deteccin rpida de microorganismos en muestras y materiales
infectados
Tincin o mtodo Aplicacin Resultados esperados Comentarios
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-#"
QSFQBSBDJPOFTEF5[BODL
NVFTUSBT Morfologa general de las estructuras Permite visualizar bacterias, levaduras,
Wright-Giemsa
con fondo celular complejo celulares parsitos e inclusiones virales
(SOVMPT NFUBDSPNUJDPT EF DPSJOFCBD Morfologa general y seleccionada Corynebacterium diphteriae
Azul de metileno
terias
Permite hacer diagnstico presuntivo, Deteccin de leucocitos, reconocimiento Requiere experiencia para valoracin
sobre todo, en neumona y meningitis de la morfologa de bacterias comunes adecuada; no incluye otros agentes in-
Gram
bacteriana fecciosos, pero puede diferenciar leva-
duras
5JODJPOFT EF NVFTUSBT FTQVUPT
-#"
Los microorganismos AAR muestran un Las micobacterias son bacilos rectos,
LCR, orina, etc.) para identificar bacterias color rojo granate, contrastado sobre cortos o largos y las nocardias, bacilos
Ziehl-Neelsen, Kinyoun cido-alcohol resistentes (AAR) y para un fondo azulado; permite detectar arboriformes y ramificados
diferenciacin de micobacterias y algunos tambin parsitos como Cryptosporidium
actinomicetales aerobios (AAR parcial) y Cyclospora
Microscopa de campo Examen directo de lesiones con sospecha Se ven espiroquetas mviles Requiere experiencia
oscuro de sfilis primaria
Examen directo de la extensin de LCR, Los criptococos poseen una cpsula de 5JODJO JOWFSTB
MB DQTVMB OP TF UJF
Tinta china sangre y orina para Cryptococcus polisacridos que aparece como un halo requiere experiencia para diferenciar
sobre un fondo oscuro leucocitos de levaduras
Examen directo de las extensiones de piel, Visualiza elementos fngicos Digiere las protenas de las muestras y
KOH 10%
pelos y uas para ver dermatofitos facilita la visualizacin
Microbiologa aplicada al paciente crtico
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Tcnica
e crtico
Tabla 3. Tinciones y mtodos microscpicos para la deteccin rpida de microorganismos en muestras y materiales
infectados (continuacin)
Tincin o mtodo Aplicacin Resultados esperados Comentarios
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Tcnicas de identificacin
Es eficaz para diferenciar verdaderos mi- 5JODJO EF GMVPSPDSPNP GJKBEB B MPT Requiere el uso de microscopio de fluo-
croorganismos de artefactos, especialmen- ncleos de las bacterias, que muestran rescencia
Naranja de acridina te en hemocultivos fluorescencia naranja sobre un fondo
oscuro; fluorescen tanto bacterias viables
como no viables
Examen directo de LCR, LBA y otros Las levaduras y mohos muestran una 5JODJOGMVPSFTDFOUFRVFTFGJKBBMBQBSFE
lquidos corporales para detectar estruc- fluorescencia blanquecina suave celular de hongos y levaduras, pero no
turas fngicas y algunos quistes parasi- a bacterias o clulas inflamatorias; se
Blanco calcoflor tarios prefiere a la tinta china y a preparaciones
de KOH
Requiere el uso de microscopio de fluo-
rescencia
Es til para bsqueda de AAR en una Extensiones concentradas de sedimentos 5JODJO QSFGFSJEB QBSB NJDSPPSHBOJTNPT
variedad de muestras clnicas, especial- de micobacterias AAR, por su rendimiento en el cribado
Auramina-rodamina mente, las ms contaminadas con flora de gran nmero de muestras
normal Requiere el uso de microscopio de fluo-
rescencia
33
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34 Microbiologa aplicada al paciente crtico Tcnica
t 1VFEF JOEJDBS MB DPOWFOJFODJB EF BQMJDBS PUSBT UDOJDBT EF EJBHOTUJDP
rpido (deteccin de antgenos o de anticuerpos, tcnicas de biologa
molecular).
t (VB MB DBMJEBE EFM QSPDFTP RVF FYJHF DPODPSEBODJB FOUSF MPT NJDSPPS-
ganismos que se observan en la visin directa y los que se obtienen,
recuperan o aislan por cultivo.
t 1VFEF QSPQPSDJPOBS BZVEB QBSB PSJFOUBS MB BTJTUFODJB
UBOUP FO QBVUBT
teraputicas empricas de antimicrobianos, como en la adopcin precoz
de medidas preventivas y de control epidemiolgico.
deteccin diferencial (agar MacConkey, agar CLED, agar XLD, agar VCAT o
VCN). Se utilizan para sembrar diferentes tipos de muestras contaminadas
(intraabdominales, heces, orina o exudados genitourinarios).
Es posible hacer una identificacin preliminar de muchas bacterias impor-
tantes en la clnica, basndose en unas pocas y sencillas caractersticas ma-
croscpicas de las clulas apreciables en su disposicin en forma de colonias
sobre los medios de cultivos en que crecen y se aislan. La interpretacin de los
cultivos primarios, despus de 24-48 h de incubacin, requiere una evaluacin
de las colonias con una sistemtica bien estructurada.
Caractersticas macroscpicas de las colonias:
Despus de un examen visual del desarrollo en la superficie de las placas
de agar, se deben apreciar las principales caractersticas de las colonias: tamao
(en general, las bacterias gram-positivas producen colonias algo ms pequeas
que las gram-negativas), forma, grado de elevacin, borde, color, superficie,
densidad, consistencia y olor.
Reacciones en el medio de agar usadas para la identificacin de bacterias:
1. Tipo de hemlisis en el medio de agar sangre. La hemlisis es una reaccin
observada en el medio circundante o subyacente a la colonia; sirve de ayuda
para la identificacin presuntiva, particularmente, de los estreptococos, y
debe valorarse frontalmente y por transiluminacin.
t a-hemlisis: eliminacin parcial de la sangre en torno a la colonia, ori-
ginando una decoloracin verduzca en el medio (ej.: S. pneumoniae,
estreptococos del grupo viridans).
t b-hemlisis: eliminacin completa de la sangre circundante o subyacente
a las colonias por lisis completa de los hemates (ej.: Streptococcus pyo-
genes, Streptococcus agalactiae, Listeria monocytogenes).
2. Produccin de pigmentos en medio de agar: es una de las caractersticas
inherentes de cada microorganismo especfico y pueden estar confinados
a la propia colonia o colorear el medio: verde, a veces, con brillo metlico
(P. aeruginosa), rojo-rosado (Serratia marcescens), azul (Kluyvera spp.), pr-
pura (Chromobacterium violaceum) o marrn negruzco (Prevotella melanino-
genica).
Cambios en medios diferenciales: en los medios de cultivo diferenciales
se incluyen diversos colorantes, indicadores de pH y otros componentes meta-
Gram y morfologa
Catalasa
Negativa
Positiva
Coagulasa
Negativa
ECN
Positiva
Staphylococcus aureus
Figura 1. Ejemplo de identificacin por algoritmo en cascada. ECN: estafilococos negativos para
la coagulasa.
Resumen
t &MBJTMBNJFOUP
JEFOUJmDBDJOZBOMJTJTEFMBTCBDUFSJBTRVFDBVTBOFO-
fermedades en los seres humanos es una de las principales funciones
EFMNJDSPCJPMHPDMOJDP&MDPOPDJNJFOUPEFMBFTUSVDUVSB
mTJPMPHBZ
metabolismo bacteriano es muy importante, al menos, para tres de las
reas fundamentales de la microbiologa mdica:
4. BIBLIOGRAFA
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