INSTITUTO DE CIENCIAS BIOLGICAS

Materia: Microbiologa.

Reporte de Prctica #2

Comunidades microbianas.

Semestre: 2B
Catedrtico:
Dr. Javier Gutirrez Jimnez

Alumnos:
Edi Daniel Sols Mndez.
Maya Genesis Quintana Ruiz.
Luz Elena Espinosa Hernndez.

Tuxtla Gutirrez, Chiapas 09 de Marzo del 2017

INTRODUCCIN

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Las comunidades microbianas se conforman por la asociacin de microorganismos,
por lo general mixtas y que comprenden a las bacterias, hongos, algas y protozoos.
Las comunidades pueden establecerse en una amplia gama de hbitats naturales
tales como el agua, el suelo, la superficie de plantas, el hombre y otros animales.
Las relaciones que establecen los miembros de una comunidad microbiana pueden
ir desde aquellas en las que los microorganismos se benefician, o bien, tener que
rivalizar entre ellos.
A diferencia de los estudios realizados por Luis Pasteur y Roberto Koch sobre
cultivos puros, dos famosos microbilogos: Sergei N. Winogradsky (1856-1953) y
Martinus Willem Beijerinck (1851- 1931), fueron los primeros en estudiar las
relaciones entre diferentes tipos de microorganismos en un mismo hbitat.
Tradicionalmente, la columna de Winogradsky se ha utilizado en el cultivo de
enriquecimiento para el aislamiento de bacterias fototrficas rojas y verdes, de
bacterias de sulfato reductoras y de muchos otros anaerobios. Winogradsky utiliz
la columna por primera vez a finales del siglo XlX para estudiar microoganismos del
suelo. La columna de Winogradsky es un ecosistema anxico en miniatura que
puede usarse como suministro a largo plazo de bacterias para cultivos de
enriquecimiento (Rogan et al 2005)
El estudio de las comunidades microbianas en condiciones de laboratorio puede
realizarse fcilmente en una columna de Winogradsky, la cual simula un
microecosistema o microambiente que ilustra cmo los microorganismos ocupan
microespacios altamente especficos de acuerdo con sus necesidades vitales, tales
como: requerimientos de carbono, energa y oxgeno, as como la
interdependencia, de forma tal que la actividad metablica de un microorganismo
posibilita el crecimiento de otros y viceversa. Las columnas de Winogradsky se
preparan con muestras de suelo colectadas en ambientes hmedos, las cuales son
enriquecidas con compuestos orgnicos e inorgnicos y finalmente son expuestas
a una fuente de luz natural. En ellas se observa que despus de 3 4 semanas de
incubacin aumenta la cantidad de los distintos tipos de microorganismos, mismos
que de acuerdo con sus caractersticas fisiolgicas se establecen en las diferentes
zonas a lo largo de la columna, lo que se conoce como sucesin. De esta forma, el

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resultado es una columna estratificada (zonas de diferente color) tanto en el suelo
como en el agua, donde cada estrato se relaciona con un proceso qumico-
biolgico. (Moreno,2012)
En la zona inferior de lodos se desarrollan organismos fermentadores que producen
alcohol y cidos grasos como subproductos de su metabolismo. Estos productos de
"desecho" constituyen el sustrato para el desarrollo de bacterias reductoras de
sulfato, las cuales como resultado de su metabolismo liberan sulfuros que difunden
a la zona superior oxigenada creando un gradiente en el que se desarrollan
bacterias fotosintticas que utilizan el azufre. Por encima de esta zona pueden
desarrollarse las bacterias prpura que no utilizan el azufre y que obtienen su
energa de reacciones luminosas, pero que emplean cidos orgnicos como fuente
de carbono para su sntesis celular. Finalmente, en la zona aerobia crecen las
Cianobacterias y algas las cuales como producto de su metabolismo liberan
oxgeno. Tambin pueden crecer bacterias que oxidan compuestos del azufre y 2
del nitrgeno hasta sulfatos y nitratos respectivamente. Todos estos grupos
sintetizan su materia orgnica a partir del CO2. (Prescott,2002)
La columna aqu descrita se enfoca sobre todo al ciclo del azufre, pero se podra
desarrollar igualmente la reproduccin de otros ciclos biogeoqumicos equivalentes
para nitrgeno, carbono y otros elementos.
OBJETIVO
Establecer una sucesin de comunidades microbianas mediante un sistema
construido en el laboratorio, denominado columna de Winogradsky.
METODO
Para construir las columna de Winogradsky se utilizaron botellas transparentes de
plstico de 600 Ml, cortando la parte de arriba de ambos recipientes.
Se procedi a mezclar 100g tierra en un vaso de precipitado con los siguientes
reactivos: 10 gr de almidn, 10g Mgso 4
Posteriormente llen 1/3 parte de ambos recipientes pet con la mezcla de tierra,
celulosa y Mgso4.
Se aadi H2O corriente hasta llegar a 2/3 parte de los pet y marcamos cada envase
una como columna control la otra como experimental. A la columna experimental se
le aadi Bovitrz (Amitraz al 12.5%).
Finalmente se procedi a sellar con una pelcula de papel parafilm ambos recipientes
y dejamos reposar las columnas por 4 semanas en una zona fresca e iluminada.

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Examinamos las columnas durante 4 semanas, anotando cambios de color y grosor
de las capas diferentes y se tomaron muestras cada semana observando la cantidad
de protozoos las columnas.
9. Registramos observaciones y se trat de identificar los microorganismos
encontrados.

Fig 1 MgSO4. FIg 1.2 bovitraz. Fig .13. Pesado de Reactivos.

Fig 1.4 Columna control y experimental

RESULTADOS
Se pudieron diferenciar tres zonas caractersticas en base a su concentracin
relativa de oxgeno: 1) zona aerbica,la cual es la ms superficial, dispone de una
alta concentracin de oxgeno; 2) zona microaerfila, inmediatamente debajo de la
anterior, con una menor concentracin de oxgeno; 3) zona anaerbica, que
constituye el lecho de lodo (tierra).

1 Observacin y medicin de PH 16/02/17

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A los 8 das despus de construir nuestras columnas de Winogradsky registramos
el ph de ambas columnas, la columna control tuvo un ph de 6.63 mientras que la
experimental fe de 7.13 ,posteriormente se realizaron las observaciones en el
microscopio a 20 y 40x solo observamos en la columna control la presencia de
bacterias de forma esfrica o cocos y un protozoo llamado una Vorticella ,el cual
logramos observar cmo se contraa de forma violenta hasta que al paso de los
minutos muri quedando estirada completamente. Mientras que en la experimental
solo observamos cocos y otras bacterias ms no protozoos. No se procedi a
realizar la fijacin ya que no tuvimos nada que fijar.

Fig.2 Vorticella 40x.

2 Observacin y medicin de PH 22/02/17
16 das despus de construir las columnas las mediciones del pH fueron las
siguientes: pH control: 6.45 PH experimental: 6.89
Al observar la muestra tomada en la columna control esta vez logramos observar
bacterias como cocos ,estafilococos y paramecios. Mientras que en la columna
experimental la cual contiene bovitraz ( amitraz) , logramos observar a 20x y 40x
euglenas y paramecios.

Fotos columna experimental

5
 Fig.3. Euglena 40x . Fig 3.1 Paramesium 40x.

Fig 3.4 Paramesium columna Control.

CONTROL C1: 0 C2: 1 C3: 0 C:4

EXPERIMENTAL C2: 5 C2: 1 C3: 2 C4: 1

3 Observacin y medicin de PH 2/03/17

24 das despus al observar ambas columnas no se encontr actividad alguna de
protozoos y muy pocas bacterias seguan con vida en la columna control. En la

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columna experimental toda vida bacteriana haba desaparecido esto se cree que es
por el amitrz agregado inicialmente a la columna.
Mediciones del pH: pH control: 6.91 PH experimental: 7.1

Fig. 4 Medicin pH Columna ctrl y exp.

TABLA 1 PH

Control Experimental
Exp Exp2 Exp Exp2
6.63 43.95 7.13 50.83
6.45 41.6 6.89 47.47
6.41 41.8 7.01 49.14
<19.4 <126.6
9 3 <21.03 <147.44

TABLA ANALISIS DE VARIANZA

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DISCUSIN

Se busc identificar de manera general, las caractersticas de los compuestos y la

presencia de microorganismos en un micro-ecosistema construido con una muestra
de lodo, almidn y Mgso4 . La zona anaerobia es la zona de menor tamao entre las
tres capas identificadas, en ella hay menor cantidad de bacterias. En la ltima capa,
la zona aerobia y microaeroflica hay mayor presencia de oxgeno y por ende, mayor
presencia y actividad microbiana, esto va conforme lo descrito por Madigan en el
2003.

En la columna control la coloracin de las capas, especialmente en la capa

microaeroflica y anaerbica no es clara, posiblemente debido a que durante la
prctica se mezcl la Columna (tierra y reactivos) y la coloracin se torn
homognea (oscura,negra).
Creemos que la poca observacin de protozoos en la columna experimental fue
por el ph alto que se tuvieron en ambas columnas , siendo mas notorio esto en la
columna experimental ocasionado por el insecticida bovino amitraz. Ya que la
mayora de las bateras y protozoos viven en ph neutros .
El pH puede tener importancia en la retencin de las bacterias en el suelo,
segn lo observado experimentalmente por Bitton et al. (1974). La mayor parte
de bacterias y protozoos se desarrollan mejor a pH neutro y ligeramente

8
alcalino; en cambio, los hongos se desarrollan a un pH ms amplio (Fassbender,
1982).
CONCLUSIN
En la primera zona que es la capa anaerobia encontramos presencia de bacterias
reductoras que dan el aspecto negro observado en la Columna Control, stas
componen la mayor parte de la poblacin de los microorganismos en la capa, a
juzgar por su coloracin. En la zona de lodo, el ambiente anaerobio observado y la
descomposicin de parte de la celulosa, evidencian la presencia de bacterias
Clotridium segn la literatura.
En las capas microaeroflicas y aerobias se observan una mayor cantidad de
actividad y poblacin de bacterias; en ella no se visualizan bacterias prpura no del
azufre, tampoco bacterias prpuras del azufre. A pesar de que las coloraciones no
son lo suficientemente claros, se puede especular que hay presencia de algas,
Cianobacterias, Tiobacilos, bacterias sulfo-oxidadoras y bacterias sulfo-reductoras
o fermentadoras
CUESTIONARIO
1. Dnde se localizan los metangenos y por qu?
Los metangenos ocurren solamente en ausencia de oxgeno, lugares cerrados
esto ocurre en el biogs que es un producto de la digestin anaerbica. Para
reproducir estas condiciones se emplean plantas de biogs o biodigestores como
unidades bien cerradas, como una laguna cubierta o un silo de hormign con
techo de lona o de membrana. El biogs generado, es una mezcla de metano y
dixido de carbono. El metano es el vector energtico y su composicin oscila
entre el
50 hasta 75 %. El metano brinda el poder calorfico que oscila entre los5500 y
6000 Kcal y es posible utilizarlo en todas las aplicaciones de este gas. (Hibert
2012)

2. Desarrolle una secuencia de etapas que puedan sucederse en el

microcosmos de la columna, partiendo de la fermentacin de los azcares
derivados de la degradacin de celulosa.

9
En el siguiente ejemplo podemos observar las etapas que se llevan a cabo
durante el proceso de fermentacin de los azucares en una columna de
Wynogradsky en etapa inicial y final.

-Laboratorio columna de Wynogradsky (2017,Marzo08)Recuperado de

matematicas.udea.edu.co/~actubiol/actualidadesbiologicas/3VelE1squez.pdf

3. Qu tipo de bacterias es la que degrada la celulosa y en qu nivel de

la columna se encuentran?
Las bacterias fermentadoras utilizan la celulosa del papel aportado como fuente
primaria para su metabolismo, aparecen las bacterias del gnero Clostridium. Son
anaerobias estrictas, y no empiezan a crecer hasta que el oxgeno desaparece del
sedimento. Estas bacterias degradan la celulosa hasta residuos de glucosa y
fermentan la glucosa para obtener la energa que necesitan, produciendo una serie
de compuestos orgnicos simples (etanol, cido actico, cido lctico, cido
succnico, etc.) como productos finales de esa fermentacin. Estos compuestos
orgnicos sern, a su vez, respirados por las bacterias reductoras del sulfato.
Cuando la celulosa se agote, usarn la materia orgnica producida por el resto de
bacterias.

4. Cul es la importancia de las bacterias del gnero Beggiatoa?

Se consideran bioindicadores que indican la presencia de contaminacin marina.
Adems, pueden generar problemas de sedimentacin en plantas de tratamiento de
aguas residuales, lagunas de desechos de fbricas conserveras, de pasta de papel,

10
 de cerveza.Sin embargo, como aspecto positivo es que Beggiatoa es capaz de
eliminar el sulfuro de hidrgeno del suelo.
La Beggiatoa es una bacteria filamentosa que vive sobre los sedimentos
acuticos a poca profundidad, una bacteria muy especial, por su apariencia y por
sus hbitos de vida. Beggiatoa obtiene esa energa oxidando Sulfuro de
Hidrgeno (cido sulfhdrico) H2S, un gas ms pesado que el aire, inflamable,
incoloro, txico y de fuerte olor a materia orgnica en descomposicin, como de
huevos podridos. Al oxidar el Sulfuro de Hidrgeno se forma Azufre que queda
almacenado en pequeos grnulos en el interior del cuerpo de Beggiatoa y agua
que se libera hacia el exterior. Cuando la Beggiatoa crece de forma masiva forma
densas alfombras filamentosas de aspecto lechoso y de fuerte olor a azufre y
como consecuencia otros procesos de oxidacin de materia orgnica que utiliza
de forma alternativa para completar su metabolismo, no es raro que los fondos en
los que habita se tian de color negruzco.
Beggiatoa y otras bacterias filamentosas relacionados como Thiothrix o Thioploca
podran ser utilizadas en el tratamiento de aguas residuales, lagunas de residuos
industriales en la industria conservera, fabricacin de pasta de papel, elaboracin
de la cerveza y otras actividades contaminantes y son capaces de desintoxicar el
sulfuro de hidrgeno que puede estar presente en el suelo.
(Recuperado de http://www.biodiversidadvirtual.org/micro/Beggiatoa-img993.html)

5. Mencione un ejemplo de relaciones microbianas que se establecen en

la columna de Wynogradsky.
En el siguiente esquema est representado el orden o relaciones microbianas,
dentro de una colunma.

11
-La columna de Winogradsky(2017,Marzo08).Recuperado de
www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioBiodiversidad.htm

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