INSTITUTO TECNOLGICO DE CELAYA

DEPARTAMENTO DE INGENIERA BIOQUMICA

MATERIA

LISTAS DE COTEJO
INSTRUMENTO DE EVALUACIN PARA PRCTICAS

DATOS GENERALES DEL PROCESO DE EVALUACIN

Nombre(s) del alumno(s) y/o Equipo: Firma del alumno(s):
ORTIZ LEAL DANIEL, ANDREA CANDELARIA GARCA, JAVIER HERNNDEZ
BUSTAMANTE, CARLOS VILLAGMEZ
Producto: PRACTICA NO.6 Nombre del Trabajo de Investigacin: Fecha: 27/03/2017
TINCION GRAM

Asignatura: MICROBIOLOGIA Grupo: A Periodo Semestral: ENERO-JUNIO

Nombre del Docente: ANA FLORINA VILLAGMEZ Firma del Docente:

Indique si es: Prctica en el Aula Prctica en Laboratorio X Prctica en Empresa

CRITERIOS DE EVALUACIN

Valor del Valor

Caracterstica a cumplir (Reactivo) OBSERVACIONES
reactivo Obtenido
Revisar Marco terico/
metodologa/Marco legal,
Investigacin previa y preparacin de insumos requeridos Hacer diagrama de trabajo y lista
10%
para la prctica (INDISPENSABLE) de insumos.
Contestar cuestionario
Incluir en Reporte escrito.
Organizacin del trabajo: definicin de roles y participacin
10% Lab.
de todos los miembros del equipo
Desarrollo correcto y adecuado de la secuencia de la
25% prctica Lab. + Reporte escrito

Modelo fsico o Producto obtenido en la prctica, en tiempo

10% Lab. + Reporte escrito
y forma
25% Resultados Discusin y Observaciones Lab. + Reporte escrito
Conclusiones, as como su entrega, en tiempo y forma
20% Lab. + Reporte escrito
(INDISPENSABLE)
Examen individual de asimilacin del conocimiento de la
Examen escrito (10%)
prctica
100% CALIFICACIN:

OBSERVACIONES GENERALES:
INTENCIN DE APRENDIZAJE
Utilizar las tcnicas de tincin simple y tincin de Gram para diferenciacin de bacterias.

INTRODUCCIN
Una tincin o coloracin es una tcnica auxiliar utilizada en microscopa para mejorar el
contraste en la imagen vista al microscopio. Los colorantes y tinturas son sustancias que
usualmente se utilizan medicina para resaltar estructuras en tejidos biolgicos que van a

ser observados con la ayuda de diferentes tipos de microscopios.

La tincin de Gram es una tcnica de laboratorio diferencial que permite identificar
distintos tipos de bacterias segn se coloree su superficie, fue desarrollada en 1884 por
Hans Christian Gram.
Permite separar a las bacterias en: Gram-positivas y Gram-negativas. Esta tcnica se
fundamenta en la reaccin de peptidoglucano de la pared celular de las bacterias Gram
(+) al agente colorante, condensndose y constituyendo un obstculo para la salida del
complejo cristal violeta lugol. Por el contrario las bacterias Gram (-) tambin poseen
peptidoglucano pero en menor cantidad, dejando as lugar para la safranina.
Los reactivos utilizados en la tincin Gram son:
1. Cristal violeta= colorante bsico.
2. Lugol=mordiente.
3. Alcohol cetona= decolorante.
4. Safranina= colorante de contraste.

DIAGRAMA DE FLUJO
METODOLOGA

1. Se lav el rea de trabajo y se sacaron del refrigerador los medios anteriormente

sembrados.
2. Posteriormente se realiz un frotis de cada una de las colonias presentes en los
medios, (en el caso del agar sangre solamente se seleccionaron dos colonias para la
realizacin del frotis), en un portaobjetos etiquetado se coloc una gota de agua
destilada y con la ayuda de un asa se tom una pequea muestra de la colonia a analizar,
se extendi en un ara de 1 cm2 aprox. La muestra con la gota de agua.
3. Se dej secar al aire y se fij con calor, pasando el portaobjetos por la flama del
mechero.
4. Agregamos cristal de violeta y se dej reposar durante 1 min. Pasado el tiempo se
enjuago con agua destilada con una piseta, procurando que el chorro del agua fuera
suave.
5. Despus se cubri el portaobjetos con lugol y nuevamente se dej reposar por 1
min. Y lavamos con agua destilada.
6. Cubrimos nuevamente con safranina durante 30 seg. Y se lav con agua destilada.
7. Por ltimo se dej secar al aire.
8. Este procedimiento solamente se realiz una vez para la colonia existente en el
agar nutritivo, pues el tiempo de clase concluyo antes de realizar las tinciones de los otros
medios.
9. Se observ bajo el microscopio con el objetivo de inmersin.
RESULTADOS Y DISCUSIN

1) 2)

3) 4)

5) 6)
7) 8)

9) 10)

1.- CN-AVB / Bacilos en racimos curvos gram positivos

2.- CN AS / Cocos y bacilo-cocos gram negativos
3.- CN AN / cocos gram negativos y algunos bacilos gram positivos
4.-CN ASN / bacilos gram negativos
5.- CN-AMEB / coco-bacilos gram positivos
6.- CT AS / bacilos gram positivos y cocos gram negavitos
7.- CT-AEMB / cocos gram negativos
8.- CT- AS / cocos ramificados gram positivos
9.- CT-AN / bacilos gram positivos y espirilos gram negativos
10.- CT-AS110 / cocos ramificados gram positivos y algunos gram negativos
CONCLUSIONES

La morfologa de los microrganismos no es tan sencilla de describir solamente con una

tcnica de estudio. Para esto nos aporta la tincin Gram que, al ver en el microscopio
compuesto en un objetivo de inmersin, como el 100x, nos permite visualizar y diferencias
bacterias de acuerdo a su pared celular como positivas o negativas, y adems en forma
inherente se visualiza su morfologa respecto a las caractersticas ya estudiadas
bibliogrficamente. Por ejemplo, saber si son cocos, bacilos, bacilo-cocos, espirilos, etc.

CUESTIONARIO

1. Por qu es importante fijar la flama?

La fijacin de una extensin bacteriana hace que las bacterias queden inactivadas y
adheridas al vidrio alterando lo menos posible la morfologa y bacteriana y las posibles
agrupaciones de clulas que pudiera haber

2. Qu otros mtodos de fijacin se pueden emplear?

Preparaciones permanentes, Para la fijacin pueden utilizarse agentes qumicos (formol,
metanol) o el calor.

3. Investiga cules son las estructuras celulares o molculas responsables de la

tincin simple realizada. Da ejemplos de otros colorantes que podran
utilizarse.
La mayora de los colorantes son compuestos orgnicos que tienen alguna afinidad
especfica por los materiales celulares. Muchos colorantes utilizados con frecuencia son
molculas cargadas positivamente (cationes) y se combinan con intensidad con los
constituyentes celulares cargados negativamente, tales como los cidos nucleicos y los
polisacridos cidos. Ejemplos de colorantes catinicos son el azul de metileno, el cristal
violeta y la safranina. Otros colorantes son molculas cargadas negativamente (aniones)
y se combinan con los constituyentes celulares cargados positivamente, tales como
muchas protenas. Esos colorantes incluyen la eosina, la fucsina cida y el rojo Congo.

4. Qu es el aceite de inmersin? Por qu se utiliza?

Porque los objetivos de mayor aumento, tienen una distancia focal muy pequea y
adems la primera lente del objetivo es de menor dimetro. Los rayos que desde la
muestra se dirigen al objetivo atraviesan el vidrio del cubreobjetos y al pasar al aire se
separan de la normal. Algunos rayos incluso sufren reflexin total en la interface vidrio-
aire. Solo llega al microscopio una pequea parte de la luz que parte de la muestra, con
el problema que conlleva para la visin. A intercalar, entre el objetivo y el cubreobjetos
una gota de aceite de cedro, de ndice de refraccin casi igual al vidrio, los rayos
emergentes ya no se apartan de la interfaz normal sino que continan su camino sin
desviacin consiguiendo as que una mayor cantidad de luz llegue al objetivo, mejorando
notablemente la visin.

5. Cules son las desventajas o limitaciones de la tincin simple?

Una desventaja es que solo mostrara una sola cosa, y solo se usa un solo colorante.
La ventaja ser que si solo se requiere observar cierta estructura, dependiendo del
colorante utilizado esta tincin seria la ideal.

6. En que se basa la tincin de Gram?

La tcnica se basa en aplicar una serie de colorantes a una muestra de cualquier origen
(esputo, orina, pus, etctera) que supuestamente contenga bacterias no identificadas. Los
colorantes tien la pared de las bacterias de color morado y, tras unos minutos, se realiza
un lavado del colorante. Despus de eso puede que el colorante permanezca en la pared
bacteriana o que se haya ido. En el primer caso permanecera el color morado, y se
tratara de bacterias Gram positivas y, en el segundo, la pared tendra un color rosado, y
seran Gram negativas.

7. De qu color se tien los Gram positivos y los Gram negativos?

El color morado se tratara de bacterias Gram positivas y, en el segundo, la pared tendra
un color rosado, y seran Gram negativas.

REFERENCIAS

http://es.slideshare.net/Mardj/prctica-2-tincin-de-gram

http://microbiologiaulat2013.blogspot.mx/2013/12/tincion-de-la-capsula-
bacteriana.html

http://www.biblioteca.org.ar/Libros/hipertextos%20de%20biologia/micro8.htm