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Aquino, S. F. et al.

Artigo Tcnico

Metodologias para determinao da Atividade


Metanognica Especfica (AME) em Lodos Anaerbios
Methodologies for determining the Specific Methanogenic Activity
(SMA) in Anaerobic Sludges
Srgio F. Aquino
Professor do Departamento de Qumica, Universidade Federal de Ouro Preto - UFOP

Carlos A. L.Chernicharo
Professor do Departamento de Engenharia Sanitria e Ambiental, Universidade Federal de Minas Gerais - UFMG

Eugnio Foresti
Professor do Departamento de Hidrulica e Saneamento, Universidade de So Paulo USP/So Carlos

Maria de Lourdes Florncio dos Santos


Professora do Departamento de Engenharia Civil, Universidade Federal de Pernambuco - UFPE

Luiz O. Monteggia
Professor do Instituto de Pesquisas Hidrulicas, Universidade Federal do Rio Grande do Sul - UFRGS

Recebido: 21/07/06 Aceito: 26/03/07

Resumo Abstract
Esse artigo apresenta uma reviso sobre os diferentes protoco- This paper presents a review on the different methodologies to
los para a determinao da atividade metanognica especfica determine the specific methanogenic activity (SMA) of anaerobic
(AME) de lodos anaerbios. Os protocolos propostos se sludges. The protocols available in the literature differ not only
diferem tanto em relao aos procedimentos adotados para a regarding the procedures adopted to incubate the sludge, but
incubao do lodo, quanto ao mtodo utilizado para quanti- also in relation to the method utilized to quantify the methane
ficao do metano produzido durante o teste. So discutidos produced during the test. This paper discusses the principles of
os princpios dos mtodos manomtricos e volumtricos, e manometric and volumetric methods, and briefly describes the
descritos brevemente os protocolos de incubao do lodo, protocols mostly used by the Brazilian research community for
de medio do metano e o procedimento para clculo da sludge incubation, methane measurement and calculation of
AME obtida pelos mtodos mais utilizados pela comunidade SMA.
cientfica nacional.

Palavras-chave: Lodo anaerbio, dgesto anaerbia, Keywords: Anaerobic sludge, anaerobic digestion, Specific
Atividade Metanognica Especfica, Testes AME. Methanogenic Activity; SMA tests.

INTRODUO da demanda qumica de oxignio determinado reator permite estabelecer,


(DQO), da gua residuria a ser trata- em ltima anlise, a capacidade mxima
A atividade metanognica espe- da s ocorrer de fato com a formao de remoo de DQO da fase lquida, e
cfica (AME) pode ser definida como do metano, que por ser praticamente por isso permite estimar a carga orgnica
a capacidade mxima de produo de insolvel em gua, escapa facilmente mxima que pode ser aplicada com mi-
metano por um consrcio de micror- da fase lquida. nimizao do risco de desbalanceamento
ganismos anaerbios, realizada em Desta forma, a AME pode ser do processo anaerbio. Fazendo uma
condies controladas de laboratrio, utilizada como um parmetro de moni- anlise inversa, a AME permite determi-
para viabilizar a atividade bioqumica toramento da eficincia da populao nar a massa mnima de lodo anaerbio
mxima de converso de substratos metanognica presente em um reator a ser mantida no reator para a remoo
orgnicos a biogs. A determinao biolgico e, como tal, constitui-se de determinada carga orgnica aplicada.
da capacidade do lodo anaerbio em ainda em uma importante ferramenta Consequentemente o conhecimento da
produzir metano importante porque para o controle operacional de reatores AME possibilitaria a adoo de procedi-
a remoo de eltrons equivalentes, ou anaerbios (Foresti et al, 1999). O mentos mais racionais para o descarte de
seja compostos reduzidos causadores conhecimento da AME do lodo de lodo de sistemas anaerbios.

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Metodologias para determinao da atividade metanognica

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Os trabalhos de Valcke & medio do metano produzido, no se Os cerca de 30% restantes de metano
Verstraete (1983), De Zeeuw (1984) pode sugerir nesse artigo, um procedi- so produzidos por microrganismos
e Dolfing & Bloemen (1985) foram mento nico para a determinao da hidrogenotrficos a partir da reduo
pioneiros no desenvolvimento e uso AME. Sendo assim, o principal objetivo do dixido de carbono. Desta forma,
dos testes de AME, como ferramenta dessa reviso apresentar os principais muitos pesquisadores utilizam comu-
de caracterizao e avaliao de reatores mtodos utilizados pela comunidade mente sais de acetato ou cido actico
anaerbios. No Brasil, pesquisas sobre cientfica nacional e internacional para como substrato. O clculo da AME
o teste de AME comearam a ser feitas a determinao da AME, dedicando-se atravs do uso de apenas acetato como
cerca de dez anos depois, e a tese de especial ateno ao princpio de cada fonte de carbono e energia subestima
doutorado de Penna (1994) talvez te- mtodo, aos principais equipamentos em no mnimo 30% a capacidade m-
nha sido o primeiro trabalho brasileiro necessrios para sua implantao, bem xima de produo de metano, uma vez
devotado ao estudo das condies de como ao procedimento para clculo que microrganismos hidrogenotrficos
incubao e implantao do teste de da AME. tm maiores taxas de crescimento que
AME. Os artigos de Penna et al (1995) Torna-se importante esclarecer os acetoclsticos (Harper & Poland,
e Monteggia (1997) foram de fato as que a falta de uma padronizao in- 1986; Pavlostathis & Giraldo-Gomez,
primeiras comunicaes cientficas ternacionalmente aceita para o teste 1991) e certamente estaro presentes
nacionais que discutiram a necessidade, de AME dificulta, de certa forma, a em reatores reais devido degradao
e propuseram uma metodologia, para a comparao dos resultados absolutos de substrato mais complexo (protenas,
harmonizao do teste de AME. No obtidos a partir de cada metodologia carboidratos e lipdeos) que resulta em
obstante as contribuies desses autores, atualmente disponvel. Nesse sentido, produo de hidrognio (H2) e gs
o fato que h, na literatura nacional entende-se que os resultados obtidos carbnico (CO2).
e internacional, diferentes protocolos a partir de cada um dos mtodos ora No sentido de se avaliar a ativida-
para a determinao da atividade me- descritos devam ser utilizados muito de metanognica de ambos os grupos
tanognica de lodos anaerbios. Os mais como base relativa de comparao de microrganismos, acetoclsticos e
protocolos diferem entre si tanto nos em cada local em que vier a ser aplicado hidrogenotrficos, alguns pesquisa-
procedimentos adotados para a incuba- e levando-se em conta ainda o objetivo dores (Field et al, 1987; Florencio
o do lodo (concentrao de biomassa, principal de aplicao do resultado. et al, 1993; Alves et al, 2005) utilizam
tipo e concentrao de substrato, rela- Em outras palavras, uma vez escolhido uma mistura de cidos graxos volteis
o alimento/microrganismo, tipo e um determinado mtodo para o teste (AGVs), comumente constituda de
concentrao de nutrientes, tempo de de AME, os resultados obtidos atravs acetato (C2), propionato (C3) e butirato
incubao, etc), quanto para a quanti- do mesmo sero muito mais teis em (C4), na proporo de 100:100:100 g/L,
ficao do metano produzido. termos comparativos, por exemplo, respectivamente. A DQO resultante
Em relao aos procedimentos de entre determinadas condies e fases da mistura de AGVs tem a proporo
incubao, observa-se que a comunida- operacionais de reatores anaerbios. de 24,3:34,4:41,3 % para C2, C3 e C4,
de cientfica utiliza diferentes concen- Portanto, a maior contribuio respectivamente. Nesse caso, o teste
traes iniciais de substrato e biomassa, deste artigo ser no sentido de fornecer avaliar no s a atividade dos micror-
sendo que alguns pesquisadores prefe- subsdios para a comunidade cientfica ganismos metanognicos, mas tambm
rem utilizar glicose como substrato, ao e para os operadores de reatores ana- a capacidade sintrfica do sistema, ou
passo que outros utilizam cido actico erbios escolherem um determinado seja, a atividade dos microrganismos
ou uma mistura dos principais cidos mtodo para medio da AME do lodo, que convertem propionato e butirato
orgnicos intermedirios da digesto alm da proposio de algumas padro- em acetato. importante salientar que
anaerbia (cidos actico, propinico e nizaes mnimas a serem empregadas a avaliao da atividade dos microrga-
butrico). Em relao quantificao de por qualquer mtodo que venha a ser nismos sintrficos fundamental para a
metano, h mtodos mais sofisticados, escolhido. boa operao dos digestores anaerbios.
como os que se empregam cromat- Como os microrganismos metanog-
grafos a gs e/ou respirmetros inter- CONSIDERAES SOBRE nicos no produzem metano a partir
faciados com micro-computadores, AS CONDIES DO de propionato ou butirato, a queda de
bem como mtodos simplificados que TESTE DE AME eficincia de um reator anaerbio pode
se baseiam na purificao do metano estar mais relacionada baixa atividade
do biogs seguida de sua determinao Tipo e concentrao de dos microrganismos sintrficos pro-
volumtrica. substrato dutores de acetato do que atividade
Em virtude da no existncia de de microrganismos metanognicos
um procedimento padro para a deter- Para se avaliar, strictu sensu, a consumidores de acetato.
minao atividade metanognica, um atividade metanognica de determi- Nessa linha de raciocnio alguns
esforo da International Water Associa- nado lodo deve-se aliment-lo com pesquisadores defendem que um teste
tion (IWA) resultou na criao de um substrato que suporte apenas a ativi- de atividade do lodo anaerbio deva
grupo de especialistas para harmonizar dade metablica dos microrganismos avaliar todo consrcio microbiano,
diversos protocolos de anlise, dentre metanognicos. Como se sabe, a maior e para isso o uso de substratos mais
os quais se encontra a AME. Como parte do metano produzido, cerca de complexos, como glicose, seria o re-
no h, at o momento, consenso em 70%, advm da clivagem do acetato comendado, simulando o que ocorre
relao melhor condio de incubao durante metabolismo dos microrga- em um reator em escala real. De fato
do lodo anaerbio, bem como para a nismos metanognicos acetoclsticos. o uso de glicose suportaria a atividade

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metablica de microrganismos fer- do teste. Ou seja, partindo-se de uma se faa anlise dos slidos suspensos
mentativos (acidognicos), sintrficos concentrao maior de biomassa, volteis (SSV) no lodo utilizado como
(acetognicos) e produtores de metano haver uma menor relao alimen- inculo. Outro aspecto importante que
(metanognicos), permitindo avaliar to/microrganimos (A/M), resultando se deve ter em mente o crescimento
a atividade do consrcio anaerbio em degradao mais rpida do substra- da biomassa durante o ensaio, que
como um todo. Se o teste com glicose to disponvel, sendo a anlise inversa interfere diretamente na determinao
evidenciar uma baixa produo de me- verdadeira. Como o resultado final da do valor de AME, uma vez que a con-
tano, ento novos testes com mistura AME expresso de forma normalizada, centrao de SSV geralmente medida
de AGVs ou com acetato poderiam ser ou seja, levando-se em conta a massa no incio e no no final do teste. Para
feitos para identificar que grupo(s) de de inculo, a concentrao inicial de minimizar este problema, devem ser
microrganismo(s) est(o) limitando a lodo no deveria afetar o valor da AME utilizadas concentraes relativamente
degradao anaerbia. obtido. Tais fatos foram observados por altas de lodo e baixas concentraes de
Em relao concentrao do Monteggia (1997) que, investigando o substrato (baixa relao A/M). Uma
substrato utilizado, importante res- efeito da concentrao de microrganis- alternativa seria fazer a anlise de SSV
saltar que o teste de AME deve ser feito mos no teste de AME feito sob agitao, tanto no incio quanto no final do teste,
com excesso de substrato e nutrientes, concluiu que a faixa tima de valores e usar o valor mdio para calcular a
de forma que a cintica de degradao se de AME ocorreu entre 2 e 5 g SSV/L AME. Esse procedimento informaria,
aproxime de uma reao de pseudo or- e que, para valores crescentes de SSV, ainda, se houve predominantemente
dem zero, passando a depender apenas houve reduo significativa na durao crescimento ou endogenia da biomassa
da concentrao dos microrganismos do teste, ao passo que, para valores de durante o teste.
(inculo) presentes. Desta forma, o SSV abaixo de 2 g/L ou superiores a
importante que a concentrao de 5 g/L, houve reduo apenas discreta Soluo de nutrientes
substrato seja maior que o valor de nos valores de AME. Rocha et al (2001)
Ks, que no caso dos microrganismos salientam que se o ensaio conduzido A soluo de nutrientes ideal,
metanognicos acetoclsticos situa-se sem agitao, a concentrao de lodo ou gua de diluio, deve conter
na faixa de 11 a 421 mg/L de acetato deve ser em torno de 2,0 gSSV/L para macro (N-NH4+, P-PO43-, Mg, Ca) e
(Harper & Ohlland, 1986; Pavlostathis se reduzir problemas com a difuso do micro-nutrientes (Fe, Ni, Zn, Co...),
& Giraldo-Gomez, 1991). Sendo assim substrato. bem como alcalinidade (NaHCO3 ou
uma concentrao de 2 g/L de acetato Os resultados de Penna (1995) KH2PO4 + K2HPO4) e agente redutor
seria suficiente para garantir excesso de so concordantes com os de Monteggia (Na2S.7H2O). No h consenso na
substrato e, de fato, essa concentrao (1997), ao mostrarem que a quantidade literatura em relao soluo nutri-
o valor de referncia recomendado de biomassa, na faixa de 2,5 a 20 g/L, cional a ser usada no teste de AME,
por Monteggia (1997), que concluiu no influenciou no resultado da AME. havendo inclusive a sugesto de alguns
que o uso de concentraes de cido Entretanto, Penna (1995) mostrou que, pesquisadores para a no utilizao das
actico na faixa de 2 a 4 g/L resultaram para testes de AME com lodo de esgoto solues minerais e nutricionais, para
em valores mximos de AME. sanitrio, nas concentraes iniciais de alguns tipos de lodo, como o caso
Segundo Penna (1994), para 5,2 e 10 gSSV/L, os melhores valores do lodo de esgoto sanitrio (Dolfing
cada quantidade de biomassa, existe de A/M ficaram na faixa de 0,3 a & Bloemen, 1985; Penna, 1995). Tal
uma faixa adequada de quantidade de 0,5 gDQO/gSSV. Para testes com lodo sugesto motivada pela decorrente
substrato, que varia com a natureza e a 20 gSSV/L, a melhor relao ficou na simplificao do teste, e tem como
atividade do lodo. Ou seja, a relao faixa de 0,1 a 0,25 gDQO/gSSV, ao premissas a pequena durao do teste e
alimento/microrganismo que resulte passo que para lodo com 2,5 gSSV/L, a presena de nutrientes no lodo de es-
em maior valor de AME deve ser pes- a faixa de 0,8 a 1,8 gDQO/gSSV foi goto sanitrio. Entretanto, a tendncia
quisada caso a caso. Alm disso, Penna a que forneceu os maiores valores de na literatura nacional e internacional
(1994) chega a sugerir a utilizao, AME. Steil et al (2004) corroboram a de se adicionar soluo nutricional
como substrato durante o teste, da a proposio de Penna (1995), de ao frasco de reao, conforme mostra a
prpria gua residuria que alimenta o que necessrio pesquisar para cada Tabela 1, originalmente proposta por
reator que forneceu o lodo para o teste. lodo a relao A/M que fornece o Monteggia (1997) e complementada
Essa proposio decorre do fato de o maior valor de AME, e mostraram que aqui com outras referncias.
autor ter verificado que a AME obtida 0,25 gDQO/gSSV foi o valor de A/M A soluo de nutrientes utilizada
com a gua residuria foi similar quela mais adequado quando a mistura de por Souza et al (2005) uma adapta-
obtida quando se usou uma mistura de AGVs foi escolhida como substrato. o do meio nutricional apresentado
AGVs como substrato. Como o resultado do teste ser em Chernicharo (1997), por incluir
expresso em termos da quantidade de os macro-nutrientes clcio e magnsio
Concentrao inicial de biomassa presente, a quantidade do (CaCl2.2H2O e MgCl2), os micronu-
inculo inculo usada, em tese, no precisaria trientes nquel e boro (NiCl2.6H2O e
ser exatamente a mesma para diferentes H3BO3), e por reduzir a quantidade de
Assumindo-se que o substrato e os ensaios. O importante que se saiba fsforo (K2HPO4 e KH2PO4) devido
nutrientes estaro presentes em excesso exatamente a concentrao do lodo pre- substituio desse sistema tampo pelo
durante o teste de AME, de se esperar sente em cada frasco para que se possa sistema bicarbonato (NaHCO3).
que a concentrao inicial de inculo calcular com preciso a massa inicial de No sentido de harmonizar, em
defina, em ltima instncia, a durao inculo. Por isso indispensvel que termos de Brasil, a soluo nutricional a

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ser usada no teste de AME, recomenda- trato, ou seja, quando a quantidade de carga orgnica que poderia ser aplicada
se que a soluo de nutrientes proposta metano acumulada for igual terica no reator anaerbio contendo determi-
pela referncia X (ver Tabelas 1 e 2) (Penna, 1995), o que poderia levar de nada massa de lodo. Contudo, deve-se
seja utilizada e complementada com horas a semanas. A maioria dos pesqui- avaliar criticamente o resultado do
50 mg/L de extrato de levedura (fonte sadores prefere adotar uma soluo mais teste de AME, uma vez que os reatores
de vitaminas). Embora tal procedimen- prtica, encerrando o teste quando a anaerbios em operao nas estaes de
to no contribua para a simplificao produo acumulada de metano sai da tratamento ficam submetidos variao
do teste, tal padronizao facilitaria a fase exponencial e entra na fase estacio- sazonal de temperatura, e raramente
comparao de resultados de diferen- nria. Nesse caso preciso verificar se a trabalham na faixa de temperatura ideal
tes grupos de pesquisa, uma vez que produo acumulada de metano ao final para a atividade metanognica. Sendo
eliminaria incertezas relacionadas da fase exponencial atingiu o mnimo assim, o resultado de AME determina-
deficincia nutricional que poderiam de 50% da produo terica. do em laboratrio pode superestimar a
eventualmente surgir, a depender da capacidade de converso dos micror-
origem do lodo testado. Agitao e controle de ganismos metanognicos no reator
temperatura exposto a condies ambientais dife-
Tempo de incubao antes rentes. Pesquisa em andamento (Souto,
da adio de substrato Deve-se garantir, durante o teste 2006) se prope a avaliar a influncia
de AME, que haja suficiente contato da temperatura no resultado da AME,
Durante a execuo dos testes da biomassa com o substrato e que no possibilitando a determinao de coefi-
de AME comum incubar frascos de haja limitao de transferncia de massa ciente emprico que permita converter
branco, ou seja, contendo gua des- do substrato e nutrientes. Sendo assim os valores de AME obtidos a 30oC ou
tilada ao invs da soluo de substrato, comum incubar os frascos de reao 35 oC para outras temperaturas.
para se avaliar a produo residual de sob agitao constante, muito embora
metano devido ao decaimento endge- no haja na literatura resultados con- MTODOS DE MEDIO
no, sendo a produo endgena descon- clusivos sobre a influncia da agitao DO BIOGS
tada da produo observada nos frascos intermitente, e do tipo de agitador uti-
contendo o substrato. Tal procedimento lizado (agitao orbital versus agitao H diferentes mtodos para a me-
pode levar a erros grosseiros no clculo magntica) nos testes de AME. Penna dio de biogs produzido no teste de
da AME, uma vez que a endogenia (1994) sugeriu que para lodo de esgoto AME, os quais podem ser classificados
observada no frasco contendo substrato sanitrio seria possvel uma simplifi- em manomtricos ou volumtricos.
deve ser bem menor que aquela obser- cao da metodologia substituindo a
vada no frasco branco. Para eliminar a agitao mecanizada contnua pela agi- Mtodos manomtricos
incerteza do metano de origem endge- tao manual intermitente. Resultados
na FDZ-Polanco et al (2005) sugeriram preliminares de pesquisa em andamento Os mtodos manomtricos se
a incubao do lodo por 7 dias a 35 oC, (Souto, 2006) demonstraram que se a baseiam na medio da presso exercida
antes que o substrato fosse adicionado, agitao magntica for muito intensa, sobre um sensor (membrana trasdutora
para que o metano produzido pela os valores de AME podem ser menores de presso) acoplado ao frasco de rea-
endogenia pudesse ser desconsiderado que os valores obtidos com a agitao o. Dependendo da configurao do
no teste. Outros autores (James et al, orbital e com a agitao intermitente sistema a presso medida pode ser de-
1990; Penna, 1994; Monteggia 1997; (agitao dos frascos uma vez por dia). vido mistura de gases do biogs, que
Silva et al, 2005) tambm sugeriram a Esses resultados parecem demonstrar constitudo principalmente por metano
incubao do lodo, na temperatura de que a agitao muito intensa com barras e dixido de carbono, ou devido somen-
realizao do ensaio e na presena de magnticas pode levar ruptura dos flo- te ao metano. Como possvel, atravs
nutrientes e soluo tampo, previa- cos microbianos, afetando consequen- de calibrao do sistema, estabelecer
mente adio do substrato, todavia temente a transferncia de produtos e uma correlao entre a presso medida e
por perodos menores, da ordem de 6 substratos entre os microrganismos do a quantidade de metano presente dentro
a 15 horas. consrcio anaerbio. do frasco de reao, o registro dirio
Ressalta-se que, dependendo das Com relao temperatura, h da presso permite determinar a taxa
condies operacionais do reator (Ex. consenso na literatura de que o teste diria de produo de metano e, por
carga aplicada) no qual o lodo anae- de AME deva ser feito na faixa de 30 conseguinte, o valor da AME.
rbio foi amostrado, a produo de a 35 oC, para que os microrganismos A grande vantagem do mtodo
metano endgena pode durar horas ou metanognicos mesoflicos tenham manomtrico a possibilidade de se
dias. Uma prtica segura para garantir as melhores condies de crescimen- acoplarem os medidores de presso
que a endogenia no afete os resultados to. Alguns pesquisadores utilizam a a microcomputadores, permitindo
da AME consiste em incubar o lodo, temperatura de 30 oC (Chernicharo, assim o monitoramento instantneo
na presena de nutrientes e na tempe- 1997; Souza et al, 2005) enquanto e a automao do processo, enquan-
ratura de realizao do teste, at que a outros preferem a temperatura de 35 oC to que a principal desvantagem est
produo de metano se estabilize. S (Alves et al, 2005; Monteggia, 1997; relacionada ao custo de aquisio e
ento o substrato seria adicionado para FDZ-Polanco, 2005). Como o teste de manuteno dos equipamentos. Um
incio do teste. AME indica a capacidade de formao exemplo de respirmetro apresentado
O teste de AME pode ser fina- de metano, o valor de AME obtido na Figura 1, e vrios autores j desen-
lizado aps o consumo total do subs- pode ser usado para se determinar a volveram equipamentos semelhantes

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Tabela 1 - Resumo dos nutrientes recomendados para testes de AME


Nutriente Referncia
(mg/l) (I) (II) (III) (IV) (V)a (VI)a (VII)a (VIII) (IX) (X) (XI) (XII)
NH4Cl 1.000 73,6 500 500 40 174 500 73,6 500 500 2.235 280
(NH4)2SO4 - 13,6 - - - - - 13,6 - -
NaHCO3 - - 10.000 10.000 1.000 - - - - 1.000 - 1e
KH2PO4 2.500 13,6 300 300 9 - 1.500 13,6 1.500 650 486
K2HPO4 1.000 - 400 400 - - 1.500 - 1.500 150 - 252
Na2HPO4.2H2O - - - - - 37 - - - - -
MgCl2 100 - - - 5,5 - - 500 - 100 150 100f
CaCl2.2H2O - - - - - - - - - 100 107 10
KCl - - - - 25 - - - - - -
Na2SO4 - - - - 9 7 - - - - -
Na2S.7H2O 100 - - - - - 50 - 50 50 0,25
Extrato levedura 200 - - - 50 - 200 - - - -
Elementos trao No Sim b
No No Sim b
Sim b
No Sim c
Sim c
Sim c
Simc Simc
Resarzurinad - - - - - - - 1 ml/L - 1 ml/L - 0,2
a) gua de torneira contendo aproximadamente 35 mg/l de ons clcio; b) adio de 1 ml de soluo de elementos trao descrito por Zehnder et al (1980);
c) soluo de micronutrientes (Tabela 2); d) indicador de potencial redox (pE) (incolor: baixo pE; rosa, roxo: alto pE); e) 1 g/gDQO; f ) adio na forma
de MgSO4.7H2O.
Referncias: I) Valcke & Verstraete, (1983) apud Monteggia (1997); II) De Zeeuw, (1984); III) Dolfing & Bloemen, (1985) apud Monteggia (1997); IV)
Dolfing, (1985) apud Monteggia (1997); V) Koster et al, (1986); VI) Koster & Cramer, (1987); VII) Monteggia (1997); VIII); Penna (1994); IX) Cherni-
charo (1997); X) Souza et al.. (2005); XI) Alvez et al (2005); XII) Florencio et al, (1993).

Tabela 2 Soluo de micronutrientes


Micronutriente Referncia
Concentrao na soluo final (em mg/L) VIII IX X XI XII
FeCl3.6H2O 2a 2 2 4 2
ZnCl2 0,05 0,05 0,05 0,212b 0,05
CuCl2.2H2O 0,03 0,03 0,03 0,076 c
0,038
MnCl2.4H2O 0,5 0,5 0,5 1 0,5
(NH4)6Mo7O24.4H2O 0,05 0,05 0,05 0,2 0,05
AlCl3.6H2O 0,05 0,05 0,05 - 0,09
CoCl2.6H2O 2 2 2 2,2 2
NiCl2.6H2O - - 0,05 0,1 0,142
H3BO3 - - 0,01 0,1 0,05
Na2SeO3 - - - 0,2 0,164
EDTA - - - 2 1
H3PO4 1 ml/L - - - -
HCl conc.d 1 ml/L 1 ml/L 1 ml/L 1 ml/L 1 ml/L
a) Sal usado foi FeCl2.4H2O; b) Sal usado foi ZnSO4.7H2O; c) Sal usado foi CuSO4.5H2O; d) Proporo a ser adicionada na soluo estoque.

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para a determinao da AME usando Um outro sistema respiromtrico pastilhas de NaOH colocadas em uma
o procedimento manomtrico (James que pode ser utilizado e, que tambm cestinha suspensa, atravs da qual os
et al, 1990; Chernicharo & Campos, utiliza a concepo de absoro do gases so obrigados a passar antes de
1991; Cohen, 1991; Chernicharo gs carbnico previamente medio atingirem o trasdutor de presso.
et al, 1997; Monteggia, 1991; de presso, uma adaptao do kit Com base no exposto possvel
FDZ-Polanco et al, 2005; Louzada comercial Oxitop disponvel no adaptar o equipamento Oxitop para
et al, 2005). mercado e usualmente empregado nas sua utilizao nas determinaes de
O sistema mostrado na Figura 1 determinaes da demanda bioqumica AME, s que nesse caso o equipamento
consistia de 8 frascos de reao de 1 L de oxignio (DBO). registraria acrscimos de presso, devi-
submersos em um banho termostati- A determinao da DBO com o do produo de metano, ao invs da
zado, sendo a mistura do seu contedo sistema Oxitop (Figura 3) se baseia no reduo de presso devido ao consumo
feita com agitadores magnticos. O fato de que durante a respirao aerbia de oxignio.
sistema de medio de gs era cons- haver consumo de oxignio dissolvido No processo manomtrico preci-
titudo de uma vlvula solenide de na fase lquida, com conseqente repo- so calibrar o equipamento e determinar
3 vias controlada por um medidor de sio pelo oxignio molecular presente a constante do frasco (K, em unidade de
presso (manmetro ou transdutor de na fase gasosa. Desta forma a presso volume/unidade de presso), de forma
presso), de tal forma que duas vias (vias parcial do oxignio no headspace tende que o volume do biogs produzido
1 e 2 indicadas na Figura 1) ficavam a diminuir devido reposio do oxi- (V, em unidade de volume) possa ser
normalmente abertas permitindo a gnio consumido pela atividade micro- relacionado presso medida (P, em
comunicao do frasco de reao com biana. Como h, durante a degradao unidade de presso) atravs da Equao
o reservatrio de gs. No decorrer do aerbia, produo de gs carbnico, 1 (Chernicharo, 1997):
ensaio de AME a presso no frasco de preciso que se tenha um dispositivo V = K.P (1)
reao e no reservatrio de gs aumen- para sua absoro antes que a presso A determinao experimental da
tava e era registrada progressivamente seja medida, de forma que a queda de constante K pode ser feita atravs da
pelo manmetro at atingir um valor presso devido ao consumo de oxignio calibrao de frascos de reao contendo
limite. Quando a presso detectada no seja percebida e quantificada correta- um volume de gua correspondente ao
manmetro atingia o limite estipulado, mente. Nos equipamentos Oxitop, volume lquido utilizado no teste com
o controlador emitia um sinal eltrico a absoro de gs carbnico feita por o lodo. Para minimizar, durante o teste
para a vlvula solenide para fechar a via
de entrada para o reator (via 1) e abrir
a via de purga (via 3). Isso fazia com
que a presso do sistema fosse aliviada
devido liberao do gs acumulado
no reservatrio. Aps a despressurizao
o controlador enviava um novo sinal
para a vlvula para fechar a via 3 e
abrir novamente as vias 1 e 2, iniciando 1- Frascos de reao (V =1 L)
assim um novo ciclo (Ince et al, 1995). 2- Septa para amostragem
3- Agitadores magnticos
Outros respirmetros utilizam sistemas 4- Vlvula solenide de 3 vias
de medio semelhantes, substituindo o 5- Reservatrio de gs (V = 80 ml)
6- Manmetro
manmetro por transdutores de presso 7- Cabos eltricos
(Cohen, 1991; Chernicharo et al, 1997; 8- Termostato de imerso
FDZ-Polanco et al, 2005). 9- Banho de gua
10- Motor do agitador magntico
importante ressaltar que os pro- 11- Painel de controle da vlvula solenide
cedimentos manomtricos s dispen- 12- Computador par a aquisio de dados

sam o uso de cromatgrafo caso haja Figura 1 Respirmetro, originalmente proposto por Monteggia
a absoro do dixido de carbono em (1991), para realizao de testes de AME
etapa prvia medio de presso. Nos
respirmetros utilizados por James
et al (1990), Chernicharo & Campos
(1991), Monteggia (1991), Ince et al
1- Frasco de reao (200 ml)
(1995) e Chernicharo et al (1997), a 2- Soluo alcalina (15 gNaOH/L)
presso registrada correspondia s presses 3- Headspace da cmara de lavagem do biogs
4- Tubo coletor
parciais do gs carbnico e metano e, por 5- Porta de amostragem
isso a determinao cromatogrfica dos 6-
7-
Agulha de seringa
Transdutor de presso
gases era necessria para quantificao do 8- Computador para aquisio de dados
metano produzido. Recentemente, FDZ-
Polanco et al (2005) desenvolveram um
respirmetro acoplado a um sistema de
absoro de gs carbnico (Figura 2), de
forma que a presso medida pelo trasdu- Figura 2 Respirmetro desenvolvido por FDZ-Polanco et al (2005) para
tor devida apenas ao gs metano. remoo do CO2 previamente medio da presso

Eng. sanit. ambient. 197 Vol.12 - N 2 - abr/jun 2007, 192-201


Aquino, S. F. et al.

Artigo Tcnico
de calibrao, a solubilizao de gases na
gua, principalmente do CO2, deve-se
utilizar gua previamente saturada com
NaCl. A simulao da produo de gs
seria feita injetando-se, a cada 30 mi-
nutos ou outra frequncia mais conve-
niente, quantidades conhecidas de uma
mistura padro contendo gs carbnico
e metano em concentraes conhecidas.
O acrscimo de presso registrado pode
ser ento relacionado com a quantidade
de metano adicionada, possibilitando a
determinao de K (Figura 4).
Figura 3 Sistema Oxitop para medio da AME (Borges, 2004)
Mtodos volumtricos
Os mtodos volumtricos se ba-
seiam na determinao do volume de
biogs ou metano produzido em um Presso mxima registrada pelo transdutor
frasco reacional que contm o lodo a (o headspace do frasco deve ser escolhido de
Presso medida (atm)

ser testado. A literatura reporta trs forma que o valor de presso mxima no
metodologias comumente utilizadas seja atingido durante o teste)
que empregam procedimentos volu-
mtricos: i) medio do volume e com-
posio do biogs, ii) medio apenas
da composio do biogs, iii) medio dV/dP = K (ml/atm)
direta do volume de metano.

Medio do volume e composio do


biogs Metano adicionado (ml)
Figura 4 Exemplo da determinao grfica da
Nesse procedimento, frascos de constante do frasco (K)
vidro (tipo antibitico por exemplo)
so inoculados com lodo a ser testado,
substrato e soluo de nutrientes, e tando-se diferentes volumes de um quer gs, na CNTP (O oC e 1 atm),
incubados 30 oC por um perodo que mesmo gs padro. A taxa mxima de ocupa um volume de 22,7 L, pode-se
varia de 7 a 20 dias. O teste deve ser produo de metano pode ser obtida dizer que 1 g de DQO destruda equi-
finalizado quando a produo acumu- ao se construir um grfico temporal vale, na CNTP, a 0,354 L de metano
lada de metano se estabilizar, ou seja, da produo acumulada de metano. A formado. Como as condies do teste
fundamental que a taxa mxima de AME pode ser ento determinada no de AME no se encontram na CNTP,
produo de metano (ponto de mxima grfico volume acumulado de metano preciso usar a Equao 3 para ajustar
inclinao na curva obtido em grfico versus tempo de incubao (Figu- a relao terica:
ra 5), pelo coeficiente angular no trecho
d n = d 2 2n
tipo volume acumulado de metano PV
1 1 PV
versus tempo de incubao) seja ob- de maior inclinao. Deve-se assegurar T1 CNTP T2 LAB (3)
tida antes que o teste seja encerrado. O que a taxa mxima seja determinada
no trecho linear que corresponda ao Supondo que o teste de AME seja
monitoramento da produo de metano
consumo mnimo de 50% do substrato feito em um laboratrio localizado em
pode ser feito diariamente com o auxlio
adicionado. uma regio onde a presso atmosfrica
de uma seringa esmerilhada (que no
Como o resultado de AME geral- de 1 atm, e sendo a temperatura de
oferea resistncia ao deslocamento),
mente expresso como gDQOCH4/gSSV.d, incubao de 30 oC (303 K), tem-se:
e a determinao da composio do
=c
1atm # V2 m
biogs amostrado pode ser feita por preciso conhecer tambm a massa de c 1atm # 22, 7L m &
cromatografia gasosa. lodo inoculada (em gramas de SSV), 273K CNTP 303K LAB
Nesse procedimento a produo bem como converter a produo volu- & V2 = 25, 19L (4)
volumtrica de metano calculada dia- mtrica de metano (Ex. ml CH4/d) em Ou seja, nas condies em que a
riamente, multiplicando-se o volume DQO (gDQO/d). Isso pode ser feito produo de metano foi determinada,
de biogs pela porcentagem de metano sabendo-se o coeficiente estequiomtrico 1 mol de metano ocupar um volume
no biogs. A porcentagem de metano de oxidao do metano (Equao 2). de 25,19 L. Desta forma possvel
no biogs pode ser encontrada a partir CH4 + 2O2 & CO2 + 2H2O (2) dizer que a 30 oC e 1 atm, 394 ml de
de uma curva de calibrao construda metano produzido equivalem a 1 g de
injetando-se volumes fixos de diferentes A Equao 2 mostra que 1 mol DQO destruda. Atravs dessa correla-
gases padro que contenham metano de metano equivale a 2 moles de O2 ou o possvel expressar a taxa mxima
em diferentes porcentagens, ou inje- 64 g de DQO. Como 1 mol de qual- de produo de metano determinada

Eng. sanit. ambient. 198 Vol.12 - N 2 - abr/jun 2007, 192-201


Metodologias para determinao da atividade metanognica

Artigo Tcnico
graficamente em equivalentes de DQO K = Constante da Lei de Henry (Para CH4 matografia gasosa (Figura 6). Conforme
(gDQOCH4/d). a 25oC, K = 1,34.10-3 mol.L-1.atm-1) discutido anteriormente, isso pode ser
Pg = presso parcial do metano (atm), feito injetando-se diferentes quantida-
Medio apenas da composio do funo da presso total e da % de meta- des de um gs contendo porcentagem
biogs no no headspace (PCH4 = Ptotal %CH4) fixa de metano, ou volumes fixos de ga-
Conhecendo-se os volumes da fase l- ses contendo diferentes porcentagens de
De forma similar ao procedimen- quida e gasosa, pode-se encontrar ento metano. Por sua vez, o nmero de moles
to descrito anteriormente, frascos de a quantidade de metano produzida a de metano que injetada no cromat-
vidro (tipo antibitico por exemplo) partir da Equao 6. grafo durante a construo da curva de
so inoculados em triplicata com lodo n = Xg.Vg + Xl.Vl (6) calibrao obtido conhecendo-se o
anaerbio, substrato e soluo de nu- Onde: volume de metano injetado bem como
trientes, e incubados at que a produo n = quantidade de metano dentro do a temperatura e presso local.
acumulada de metano se estabilize. frasco (em moles) A curva de calibrao permite
A diferena principal para o mtodo Xg = concentrao de metano determi- ento que o nmero de moles de me-
descrito anteriormente est relacionada nada na fase gasosa (em mol.L-1) tano produzido diariamente no frasco
forma de medio do metano produ- Vg = volume (em L) da fase gasosa de reao seja determinado a partir da
zido. Nesse caso o monitoramento da (headspace) injeo de um volume fixo de amostra
produo de metano feito diariamente Xl = concentrao de metano calculada (Ex. 1 ml). Uma vez conhecido o n-
amostrando-se um volume fixo de bio- na fase lquida (em mol.L-1) mero de moles de metano produzido
gs (Ex. 0,5 ml) de dentro do frasco de Vl = volume da fase lquida diariamente, pode-se obter a produo
reao e deteminando-se a quantidade O inconveniente do procedimen- diria em termos de ml CH4/d, bem
de metano (massa ou nmero de moles) to descrito acima a necessidade de se como a produo acumulada em ter-
produzida, por cromatografia gasosa saber a presso dentro do frasco para se mos de gDQOCH4 conforme racioc-
(Steil et al, 2004). determinar de forma exata a quantidade nio desenvolvido anteriormente. De
A grande vantagem dessa metodo- de metano dissolvida. forma similar, o valor da AME, em
logia que ela dispensa a medio do Para se determinar a produo gDQOCH4/gSSV.d, pode ser calcula-
volume de biogs e o uso de seringas diria de metano preciso construir do conhecendo-se a quantidade de
de vidro. Por outro lado sua grande uma curva de calibrao que relacio- lodo usada como inculo (g SSV) e a
desvantagem reside no fato de que o ne nmero de moles de metano no taxa mxima de produo de metano
frasco de reao trabalha sob presses headspace com a rea sob o pico de (gDQO CH4/d) obtida no trecho de
muito maiores, aumentando o risco de metano separado e detectado por cro- maior inclinao.
perda de biogs, principalmente durante
o procedimento de amostragem do volu-
me fixo. Alm do mais, para evitar erros
na construo da curva de calibrao,
preciso que o volume de biogs amos-
Volume acumulado

trado seja exato (Ex. 1 ml), uma vez que


de CH4(ml)

esse volume determinar a quantidade de


metano injetada no cromatgrafo. Taxa mxima produo CH4 = dV/dt
Por ser um gs pouco solvel, a
quantidade de metano presente na fase
lquida desprezada na metodologia
de AME descrita na seo anterior,
uma vez que a presso no interior do Tempo incubao (d)
frasco zerada (igualada atmosf-
rica) periodicamente. Entretanto, no Figura 5 Determinao grfica da taxa mxima
procedimento em que se mede apenas de produo de metano
a composio do biogs, um pequeno
volume de gs amostrado periodica-
Nmero de moles CH4

mente, causando a elevao contnua da


presso no interior do frasco de reao.
Nesse caso a solubilizao do metano
no pode ser desprezada, e necessita
ser calculada.
A solubilidade de metano em
gua pode ser facilmente calculada pela
Lei de Henry, conforme a Equao 5
(Manahan, 1994).
Xl = K.Pg (5) rea
Onde: Figura 6 Curva de calibrao para
Xl = concentrao metano dissolvida quantificao do metano
(mol.L-1)

Eng. sanit. ambient. 199 Vol.12 - N 2 - abr/jun 2007, 192-201


Aquino, S. F. et al.

Artigo Tcnico
Medio direta do volume de metano Aparato I Aparato II (Frasco de Mariotte)

A nica diferena entre o mtodo Gs livre de CO2 Gs livre


(medio volume com de CO 2
de medio do volume e composio seringa esmerilhada)
descrito anteriormente e o mtodo da
medio direta de metano que, para Frasco
NaOH 15%
se medir o volume de apenas metano,
deve-se lavar o biogs com uma soluo
de soda (Ex. NaOH 15%) para que haja Frasco Frasco
a absoro do CO2 de acordo com as incubao NaOH 15%
seguintes reaes: Medio do volume
Vreao deslocado com proveta
H2O + CO2 * H2CO3 (7)
H2CO3 + 2NaOH * Na2CO3 + 2H2O Figura 7 Esquema de dois aparatos experimentais para lavagem do
(8) biogs e medio do volume de metano produzido
CO2 + 2NaOH & Na2CO3 + H2O (9)
Esse procedimento assume que o tambm seria usado para conectar o esforo de alguns pesquisdores, no h,
CO2 e o CH4 so os principais constitu- frasco de incubao ao frasco de NaOH, na literatura nacional e internacional,
ntes do biogs formado durante o teste entretanto a despressurizao do frasco consenso sobre as melhores condies de
de AME. Essa considerao vlida de incubao ser seguida da expulso incubao do lodo (concentrao de bio-
uma vez que em pH neutro a maior de soluo de soda, que corresponde massa, tipo e concentrao de substrato,
parte da amnia (NH3) e metade do ao volume deslocado pelo metano. O relao alimento/microrganismo, tipo e
sulfeto de hidrognio (H2S), se presen- volume de metano produzido pode ser concentrao de nutrientes, tempo de
tes, estaro ionizados e dissolvidos na conhecido atravs da medio do volu- incubao), bem como procedimentos
fase lquida como NH4+ e HS-. me ou peso da soda expulsa do frasco. de medio de metano (manomtricos,
Diferentes grupos de pesquisa Caso se opte pela pesagem do liquido volumtricos) para a execuo do teste.
brasileiros usam esta metodologia tambm deve ser conhecida a densidade A no existncia de um procedi-
(Rocha et al, 2001; Alves et al, 2005), da soluo alcalina. A grande vantagem mento padro para a determinao da
e o monitoramento da produo de do Aparato I a sua simplicidade e a AME, dificulta a comparao dos resul-
metano tambm feito diariamente, dispensa da necessidade de recompo- tados obtidos por diferentes estudos, e
com o auxlio de uma seringa conectada sio peridica do volume da soluo limita a aplicabilidade e disseminao
a um recipiente para absoro do CO2. de NaOH, enquanto que a vantagem do teste de AME como ferramenta
A grande vantagem dessa metodologia do Aparato II a dispensa do uso das de controle dos processos anaerbios.
que ele dispensa o cromatgrafo seringas esmerilhadas. Salienta-se que Dessa forma importante que novas
para determinao da composio do para o correto funcionamento dos apa- pesquisas investiguem a possiblidade
biogs. Por isso essa tcnica tem baixo ratos I e II, as mangueiras utilizadas nas de harmonizao do teste de AME,
custo e pode ser implementada em, conexes agulha-mangueira-agulha tanto pela adoo de procedimentos
literalmente, qualquer laboratrio de devem ser impermeveis a gases (Ex.: comuns de incubao do lodo, como
monitoramento, e mesmo em ETEs mangueiras tipo cristal ou de ltex, pela avaliao da confiabilidade dos
pequenas sem grande capacidade de impermeveis a gases). diferentes mtodos de medio do
infra-estrutura. A medio de metano Uma vez conhecido o volume metano durante o teste.
do biogs pode ser realizada como de metano produzido diariamente,
ilustrado na Figura 7. pode-se obter a produo acumulada REFERNCIAS
A Figura 7 mostra que o volume em termos de gDQOCH4/d conforme
de metano produzido pode ser aferido ALVES, R. G. C. M.; et al. Digestores anaerbios
raciocnio desenvolvido anteriormente. para tratamento de dejetos sunos avaliao de
medindo-se o volume do biogs lavado De forma similar, o valor da AME, em partida para diferentes configuraes de reatores.
(Aparato I), ou o volume de soluo de gDQOCH4/gSSV.d, pode ser calcula- In: 23O CONG. BRAS. ENG. SANITRIA E
hidrxido deslocado pelo gs lavado do conhecendo-se a quantidade de AMBIENTAL, Anais..., Campo Grande, 2005.
(Aparato II). No Aparato I pode-se, lodo usada como inculo (g SSV) e a BORGES, E. S. M. Tratamento trmico de lodo
no momento da leitura, conectar o fras- taxa mxima de produo de metano anaerbio a partir da queima do biogs produzido
co de incubao ao frasco de NaOH por (gDQO CH4/d) obtida no trecho de em reator UASB objetivando a higienizao e a
melhoria da biodisponibilidade e biodegradabili-
meio de um sistema agulha-mangueira maior inclinao e que corresponda a dade da frao orgnica. Tese de doutorado em
latex-agulha, de forma que a introdu- uma utilizao de, pelo menos, 50% Saneamento, Meio Ambiente e Recursos Hdri-
o da agulha da seringa esmerilhada no do substrato adicionado. cos, UFMG, 2004.
septo do frasco de NaOH cause a au- CHERNICHARO, C. A. L. Reatores Anaer-
tomtica despressurizao do frasco de CONCLUSES bios - Princpios do tratamento biolgico de guas
incubao. Como o gs entra no frasco residurias, v. 5, DESA-UFMG, 1997.
de NaOH abaixo do nvel da soluo, Esse artigo apresentou uma reviso CHERNICHARO C. A. L., CAMPOS, C. M. M. A
garante-se que o gs medido na seringa sobre os diferentes testes normalmente new methodology to evaluate the behaviour of anaerobic
esmerilhada seja predominantemente utilizados para a determinao da sludge exposed to potentially inhibitory compounds. In:
PROC.
IAWPRC INTERN. SEMINAR ON
metano. No caso do Aparato II, o sis- atividade metanognica especfica INDUSTRIAL RESIDUALS MANAGEMENT,
tema agulha-mangueira latex-agulha (AME) de lodos anaerbios. Apesar do Salvador, p. 79-88, 1990.

Eng. sanit. ambient. 200 Vol.12 - N 2 - abr/jun 2007, 192-201


Metodologias para determinao da atividade metanognica

Artigo tcnico
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E AMBIENTAL, J. Pessoa, 2001.

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