Jesus Eduardo

BIOTECNOLOGIA
DivisinGala
de Ciencias
Moralesde
12-148314
la salud
Francisco Figueroa May
16/Abril/2017

Complemento de Calificacin
 Bibliotecas y bancos gnicos
Uno de los aspectos fundamentales para obtener mapas moleculares y poder realizar
anlisis fsicos de grandes regiones cromosmicas, as como el aislamiento de genes de
inters, se basa en la disponibilidad de bibliotecas genmicas. Una biblioteca genmica
es una coleccin de fragmentos de DNA en la que se espera estn incluidas el mayor
nmero de secuencias posibles de un genoma o las secuencias contenidas en un
cromosoma.
En una biblioteca genmica es posible seleccionar fragmentos de DNA entre millones de
secuencias clonadas en cantidad suficiente para ser analizada. Los fragmentos clonados
deben ser de tamao suficiente para contener, en lo posible, genes con sus secuencias
reguladoras, pero no tan grandes que dificulten su discriminacin cuando se realice el
mapa con las enzimas de restriccin. Hoy da existen diferentes sistemas de clonacin
para la construccin de bibliotecas genmicas, desde vectores basados en el bacterifago
Lambda con un tamao de inserto alrededor de 20 kb, los cromosomas artificiales de
levaduras (YACs) cuya capacidad mxima es de 1 Mb y los csmidos y bacterifago P1
que cubren el rango medio de 40-100 kb, respectivamente. Una vez construida la
biblioteca genmica se debe proseguir con la bsqueda e identificacin de aquella
secuencia de inters.
La primera consideracin en la construccin de una Genoteca es el nmero de clones
necesarios. Esto depende de una variedad de factores, la ms evidente es el tamao del
genoma. Por lo tanto, un genoma pequeo como la de E. coli se requieren menos clones
de un proceso ms complejo tales como el genoma humano. El tipo de vector que se
utilizar Tambin hay que considerar, que determinar el tamao de los fragmentos que
se pueden clonar. En la prctica, el tamao de la biblioteca se puede calcular
simplemente sobre la base de la probabilidad de que una secuencia particular de ser
representados en la biblioteca
Un gen en particular, slo representa una muy pequea parte del genoma de eucariotes.
Si un gen es de aproximadamente 5000 pb en un genoma de alrededor de 109 pb, ste
representara un 0,0005% del DNA total. Para identificar estas pequeas secuencias, el
mtodo a utilizar debe seleccionar slo el clon o los clones que contienen el gen de
inters y determinar si el clon contiene todo o parte del gen. Para lograr este objetivo,
existen varios mtodos: Southern blot, Western blot, ELISA o PCR. La eleccin del
mtodo depende de las circunstancias y la disponibilidad de la informacin de la
secuencia de inters.
De acuerdo con Glover y Hames (1996) el aislamiento del DNA es un paso crtico en la
construccin de bibliotecas genmicas, ya que se constituye en el material de partida que
garantiza el xito de las reacciones en las cuales est involucrado (digestin y ligacin.
Despus de que la Bilioteca es creada, el genoma de un organismo puede ser
secuenciado to aclarar como los genes afectan un organismo, se compara con otro
organismo a nivel genmico en busca de similitudes o como interaccionan en otro
organismo. Lo antes mencionado referente a los estudios de asociacin del genoma,
pueden identificar genes candidatos derivados de muchos rasgos funcionales
El asunto de aislar genes especficos tiene un amplio uso hoy en dia en la rama de
Biotecnologa: un ejemplo seria el estudio de todo el genoma humano, el cual recalco, ya
se ha logrado clonar el genoma humano en un conjunto de vectores (genes); esto nos
permite analizar, conocer, estudiar las alteraciones y funciones de genes de algn inters
especfico: mutaciones-evolucin.
Otras aplicaciones ms especficas seria:
-Deteccin de Alelos Mutantes
-Bsqueda de Alelos mutantes (an desconocidos)
-Identificacin de microorganismos patgenos (Identificacin de cepa infecciosa de
Influenza)
-Secuenciacin de ADN
-Generacin de mutantes puntuales
-Estudiar la expresin gnica. En opinin propia la ms importante.

Referencias
UNIVERSITAS SCIENTIARUM- Revista de la Facultad de Ciencias
PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA.
Principios de Ingeniera gentica y aplicaciones en Biologa Molecular.
Articulo de Revision
https://es.wikipedia.org/wiki/Biblioteca_gen%C3%B3mica
Fuesler J, Nagahama Y, Szulewski J, Mundorff J, Bireley S, Coren JS (April 2012). "An arrayed
human genomic library constructed in the PAC shuttle vector pJCPAC-Mam2 for genome-wide
association studies and gene therapy".

Mutagnesis dirigida
Como introduccin quiero aportar: el hombre desde el inicio de los tiempos ha
estado en constante cambio el cual esa es la palabra clave en esta sntesis. Si
nos referimos a la seleccin natural es aquella que evoluciona a su ritmo de
manera espontnea en la cual intervienen tanto factores genticos, fenotpicos
y tambin ambientales; por otro lado est la seleccin artificial que puede ser
descrita como la manipulacin del desarrollo de una especie (animal, vegetal,
microorganismo). Ahora bien el cambio en el desarrollo de una especie
enfocado en el material gentico que este posee se le denominara
mutacin: alteracin o cambio en la informacin gentica (genotipo) el cual
provoca cambios caractersticos a la especie que si es para bien o es para mal;
una mutacin puede ser heredada.
Ya mencione que si bien ocurre de manera natural puede ser llamado evolucin
pero en el caso de una mutacin inducida existen factores externos que la
provocan:
Fsicos (Radiacin)
Qumicos (Sustancias xenobiticas)
Biolgicos (Virus-enfermedades)
En la ingeniera gentica la mutagnesis inducida se utiliza desde mediados del
siglo XX con el fin de lograr cambios semejantes a los que ocurren de
manera natural e igual no solo se ocupa para alterar la secuencia de un gen,
tambin pueden insertar o sustituir la prdida de un gen determinado.
La mutagnesis sitio-dirigida in vitro es una tcnica invaluable para estudiar
relaciones de la estructura-funcin de protenas, la expresin del gen y la
modificacin del vector. En una protena pequeos cambios especficos en la
secuencia de aminocidos dentro de un sitio crtico son en muchos casos
responsables de las diferencias en el desempeo de una protena y del fenotipo
del organismo.
Varios mtodos de los mtodos reportados requieren de DNA de una sola
cadena como templado. La razn de esto es la necesidad de separar los
filamentos complementarios para evitar el realineamiento. El uso de PCR en
mutagnesis sitio-dirigida logra la separacin de las hebras usando un paso de
desnaturalizacin que separa las hebras complementarias y permitiendo la
polimerizacin eficiente de las primers de PCR.
Los mtodos de PCR sitio-dirigidos permiten as que las mutaciones
sitio-especficas sean incorporadas en cualquier plsmido de doble
cadena. El gen de inters es amplificado con una ADN polimerasa en
condiciones donde la fidelidad de transcripciones es baja y se introducen
errores en las copias generadas. Dado que la mayora de las mutaciones no son
beneficiosas, dos mutaciones favorables se acumularn en el mismo gen,
solamente con baja probabilidad y muchas mutaciones beneficiosas sern
enmascaradas por las deletreas.
Para combinar varias mutaciones deseables, se utiliza un segundo mtodo,
donde el conjunto de fragmentos de ADN generado por la PCR es digerido por
DNasa I, una enzima que corta en forma inespecfica, y se re ensamblan los
trozos por PCR. En principio, cada mutacin puede ser recombinada y
propagada individual e independientemente de otras mutaciones.
Para introducir mutaciones solamente en una regin particular de un gen,
puede utilizarse la mutagnesis en cassette por PCR. El fragmento de ADN
conteniendo el punto mutado es recortado en dos sitios de restriccin
flanqueantes. Luego, un producto de PCR, que puede ligarse exactamente en
estos sitios de restriccin, se genera con un primer degenerado. Este iniciador
se sintetiza qumicamente para llevar una mezcla al azar de nucletidos en uno
o ms codones y la protena codificada lleva, por lo tanto, un conjunto de
aminocidos al azar, en esta posicin particular.
Desafortunadamente, un codn completamente formado al azar exhibir una
fuerte desviacin hacia algunos aminocidos que son codificados por ms de
un codn, por ejemplo, el aminocido serina es codificado por seis codones
diferentes, mientras que triptofano est codificado por un solo codn), siendo
tambin difcil evitar la incorporacin de un codn de terminacin. La solucin
a este problema es usar trinucletidos presintetizados (codones) para todos los
20 aminocidos como bloques de construccin para la sntesis de ADN de los
oligonucletidos, en lugar de utilizar los mononucletidos convencionales.
Estos bloques pueden ser mezclados en cualquier proporcin y solamente se
necesita agregar aquellos trinucletidos que el investigador desea en esta
posicin en la secuencia proteica.
Algunas de las funciones de esta tcnica son:
Cambiar la secuencia de aminocidos de una protena
Suprimir la expresin de un gen
Modificar la expresin de un gen/As como aumentar la expresin genes
benficos
Inhibir la expresin de genes no deseados
Producir cambios en las protenas para hacerla ms eficientes y efectivas.
Entre algunas de sus aplicaciones comerciales se mencionan el diseo de
protenas (suplementos alimenticios), la alteracin de microorganismos como
bacterias o levadoruas (produccin de vacunas), en animales (ganadera y
terapia gnica) los cuales crecen descontroladamente, en la agricultura en el
caso de los pesticidas regados en campos de maz, trigo, arroz, frijol, etc.
Incluso en las mismas plantas: plantas resistentes a la accin del herbicida.

Referencias
Instituto de Biotecnologa, UNAM 2004 Mtodos Fisicoqumicos en
biotecnologa-
Mutagenes Dirigida por Oligonucleotidos (ODM), Facultad de Ciencias
Biologicas, UANL. Dvorak Montiel Condado, Ph. D

Terapia Gnica
Los genes pueden interpretarse como el mapa gnetico de la herencia.
Pasan de padres a hijos y contienen las instrucciones para producir protenas.
Si los genes no producen las protenas correctas o no lo hacen correctamente,
el nuevo ser (organismo) puede tener un trastorno gentico. La terapia
gentica es una tcnica experimental que utiliza los genes para tratar o
prevenir enfermedades. La forma ms comn de terapia gentica incluye la
insercin de un gen normal para sustituir a uno anormal. Otros tipos incluyen:
-Intercambio de un gen anormal por uno normal.
-Reparacin de un gen anormal.
-Alteracin del grado en el que se active o se desactive un gen.
-Incluso con el avance de la tecnologa, an es experimental.
Aunque la terapia gnica se define como el tratamiento que cambia la funcin
gnica, a menudo se considera como la insercin de genes normales en las
clulas de una persona que carece de tales genes a causa de un trastorno
gentico especfico (insercin). Los genes normales pueden producirse
mediante la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) a partir del ADN
donado por otra persona. Por ahora, la terapia gnica por insercin es la que
tiene mayor probabilidad de xito en la prevencin o curacin de
enfermedades causadas por un solo gen, tales como la fibrosis qustica. El DNA
y el RNA pueden ser amplificados y producir muchas copias de un gen o
segmentos de ste mediante PCR.
Las sondas gnicas pueden utilizarse para localizar segmentos especficos de
DNA normal o mutado. Diferentes tipos de sondas pueden investigar una
amplia gama de tamaos de secuencia de DNA. Un segmento de DNA conocido
puede ser clonado y luego marcado por fluorescencia. El DNA marcado se une
a su segmento complementario de DNA y puede detectarse mediante la
medicin de la cantidad y tipo de fluorescencia. Las sondas pueden detectar
varios trastornos antes y despus del nacimiento. La variedad de sondas de
oligonucletidos son otro tipo de sondas utilizadas ahora en forma rutinaria
para identificar regiones eliminadas o duplicadas de secuencia de DNA en
cromosomas especficos sobre una base genmica. El DNA de un paciente se
compara con un genoma de referencia usando muchas sondas de
oligonucletidos.
Los microchips son poderosas herramientas nuevas que pueden utilizarse para
identificar las mutaciones de DNA, trozos de RNA o protenas. Un nico chip
puede probar millones de cambios diferentes de DNA utilizando slo una
muestra. Los microchips proporcionan una resolucin ms fina sobre las
consultas del genoma que las sondas de oligonucletidos.
Las tecnologas de secuencia de prxima generacin proporcionan el ms alto
grado de resolucin, pero tienen muchas cuestiones analticas e informticas
an sin resolver (Ej. la forma de interpretar los resultados, sobre todo para
trastornos multigenticos complejos). La secuenciacin de prxima generacin
implica romper todo el genoma en pequeos segmentos y luego hacer un
anlisis de la secuencia base por base de todos o algunos de los segmentos
dependiendo de dnde se pone el intrs: en un subconjunto de genes o en el
genoma. Los resultados del segmento se analizar para proporcionar un
resultado compuesto por la suma de todos los segmentos pequeos mapeadas.
Las vaariantes de nucletido singulares pueden ser identificadas, as
como tambin segmentos muy cortos que han sido insertados o eliminados.
Algunas de estas variantes pueden indicar trastornos genticos.
La transferencia de ADN normal al interior de clulas anormales puede
conseguirse por mtodos distintos. Uno de ellos consiste en utilizar un virus, ya
que algunos virus tienen la habilidad de insertar su material gentico en el
ADN humano. El ADN normal se inserta en el virus, que luego infecta las clulas
del paciente y de este modo transmite el ADN a su ncleo celular. Una de las
preocupaciones sobre la insercin mediante virus es la posibilidad de reaccin
contra el virus, similar a la que se produce ante una infeccin.
Otra cuestin preocupante es que el nuevo ADN normal puede perderse o
puede no incorporarse a las nuevas clulas despus de un cierto
periodo de tiempo, derivando en la reaparicin de la enfermedad
gentica. Tambin pueden desarrollarse anticuerpos contra el virus que
podran causar una reaccin similar al rechazo de un rgano trasplantado.
Otro mtodo para insertar genes consiste en utilizar liposomas, que son unas
esfrulas microscpicas de ADN las cuales son absorbidas por las clulas del
paciente y liberan su ADN en el ncleo celular. A veces este mtodo fracasa
porque los liposomas no se absorben al interior de las clulas del paciente,
porque el nuevo gen no acta de la manera prevista o porque el nuevo gen
desaparece. Otro mtodo de terapia gnica es el que usa la tecnologa
antisentido. En la tecnologa antisentido, no se insertan genes normales. En
lugar de ello, los genes anormales se inactivan. Con dicha tecnologa, los
frmacos se combinan con secuencias especficas del ADN evitando as la
actuacin de los genes afectados. Actualmente se est ensayando con la
tecnologa antisentido en el tratamiento del cncer pero todava est en una
fase muy experimental. No obstante, parece tener mayor eficacia y seguridad
que la terapia gnica por insercin. Otro enfoque de la terapia gnica se basa
en aumentar o disminuir la actividad de ciertos genes mediante la modificacin
de las reacciones qumicas celulares que controlan la expresin del gen. Por
ejemplo, mediante el control de una reaccin qumica llamada metilacin
puede alterarse la funcin de un gen de modo que se aumenta o se disminuye
la produccin de ciertas protenas o se producen distintos tipos de protenas.
Estos mtodos se estn ensayando experimentalmente para el tratamiento de
ciertos tipos de cncer.
En el tratamiento de los cnceres que se realiza hoy da, una de las
principales vas de investigacin es la de marcar genticamente a las clulas
tumorales de un cncer para que el organismo las reconozca como extraas y
pueda luchar contra ellas, estimulando la respuesta inmune. Otras estrategias
que se siguen en la actualidad contra el cncer son:
- Inactivar oncogenes.
- Introducir genes supresores de tumores.
- Introducir genes suicidas.
- Introducir genes que aumenten sensibilidad a frmacos.
La terapia gnica tambin se est estudiando experimentalmente en la ciruga
de trasplantes de organos. Esto, mediante la modificacin de los genes de
los rganos trasplantados para hacerlos ms compatibles con los genes del
receptor, la probabilidad de que el organismo receptor rechace el rgano
trasplantado es menor. Con esta tcnica, el receptor no necesitar ser tratado
con frmacos que inhiben el sistema inmunitario, que pueden tener efectos
secundarios graves. No obstante, este tipo de tratamiento generalmente no
tiene xito.
Referncias:
http://recursos.cnice.mec.es/biosfera/alumno/2bachillerato/genetica/contenido1
4.htm
https://medlineplus.gov/spanish/genesandgenetherapy.html