Reclutamiento de estudiantes para
combatir el cncer: sntesis total de ligada a la induccin de Apoptosis en clulas
Goniotalamina
La naturaleza nos proporciona una fuente
ilimitada de productos naturales que exhiben
interesantes actividades biolgicas. El
desarrollo de nuevos compuestos que llevan
varios arreglos estructurales y propiedades
notables proviene principalmente de estos
productos naturales. Por ejemplo, se ha
demostrado que las estiril-lactonas,
encontradas en gran medida en el gnero
Goniothalamus, presentan una actividad
antiproliferativa notable contra las clulas
cancerosas (Figura 1).
La familia Goniothalamus consiste en unas 115
especies de arbustos y rboles que crecen
principalmente en Asia. Muchas de estas
plantas se utilizan como fuente de fibra, como
un repelente contra los mosquitos, y
especialmente en la medicina tradicional. Por
ejemplo, los extractos de semillas de
Goniothalamus amuyon se utilizan para tratar
edema y reumatismo cerca de la costa sur de
Taiwn. Los efectos insignificantes que estas
estiril lactonas tienen sobre las clulas
normales estn bien documentados, lo que
sugiere que la citotoxicidad de este ltimo
parece dirigirse especficamente a las clulas
cancerosas. Una cantidad sustancial de
evidencia sugiere que la actividad
antiproliferativa de las estiril lactonas est
diana. El goniothalamin estirilo es una lactona
que se aisl por primera vez de la corteza de
Cryptocarya caloneura en 1967 y se le asign
una (S)-estereoqumica. Sin embargo, la
estereoqumica se revis posteriormente a la
(R)-configuracin. Posteriormente, se
descubrieron varios derivados de la
goniotalamina de una variedad de plantas
tropicales / subtropicales, incluyendo
Cryptocarya moschata, Bryonopsis laciniosa y
varias especies de Goniothalamus.
En 1972, Geran et al. Demostr durante un
cribado in vivo que los extractos etanlicos de
la corteza de Goniothalamus giganteus eran
altamente txicos para las lneas celulares de
cncer P-388 en ratones. (R) -Goniothalamina
exhibe una actividad citotxica in vitro contra
diversas cepas de clulas cancerosas, tales
como MDA-MB-231 (cncer de mama), clulas
HeLa (carcinoma cervical), HGC-27
(carcinoma gstrico), HL-60 (leucemia ), Y
Caov-3 (carcinoma ovrico). Las actividades
inhibidoras medidas (IC50) son del orden de
micromolar, y se ha demostrado que la
actividad citotxica proviene de diferentes
fenmenos, tales como dao al ADN o
induccin de apoptosis o reduccin de la
capacidad de migracin de las clulas.
Recientemente, se ha demostrado que el
enantimero (S) no natural de la goniotalamina
mostr una fuerte actividad citotxica (IC50 = 4
nM) frente a la lnea celular 786-0 (cncer de
rin). El qumico sinttico tiene hoy un papel
primordial que desempear en el desarrollo de
un nuevo tratamiento mediante la
implementacin de sntesis eficaces de estos
compuestos y la preparacin de anlogos
antinaturales para optimizar la actividad
biolgica. Esto destaca las partes de la
molcula necesarias para la actividad biolgica
con el fin de optimizarlas. Muchas sntesis
eficientes de goniotalamina y sus anlogos han
sido reportados en la literatura. Algunas
sntesis totales de productos naturales han
aparecido en esta Revista. Sin embargo, a
nuestro conocimiento, ningn procedimiento
experimental anlogo ha aparecido en esta
Revista. El objetivo de este experimento es
sintetizar goniotalamina enantiomricamente
enriquecida de una manera rpida y eficiente.
Para ello, se ha desarrollado un procedimiento
modificado que permite a los estudiantes
acceder a estos ltimos en menos etapas y
una mayor eficiencia, utilizando varias
reacciones orgnicas clave que pueden
encontrarse en cualquier laboratorio de
investigacin.
Este experimento est diseado para un curso
orgnico avanzado y ofrece a los estudiantes
la oportunidad de usar reactivos
organometlicos y realizar una resolucin
cintica enzimtica y una reaccin de
mettesis, todos en la misma sntesis. Estas
Las reacciones se discuten en la mayora de
los cursos de conferencias pero rara vez se
implementan en experimentos de laboratorio.
Adems, los estudiantes aprenden tcnicas de
secado de llama para la manipulacin de
materiales sensibles al aire y la manipulacin y
anlisis de cromatografa lquida de alto
rendimiento (HPLC) para observar los
enantimeros separados. Este experimento se
ha utilizado en un curso avanzado orgnico
realizado por estudiantes de primer ao de
maestra. Los estudiantes reciben 5 das en el
curso del semestre para completar la sntesis
individualmente; Sin embargo, solo se
requieren tres periodos completos de
laboratorio (8 h / perodo). Al final del
semestre, se pide a cada estudiante que
presente un informe completo detallando toda
la sntesis (procedimientos, mecanismos,
anlisis de RMN y HPLC, etc.), lo que
constituye una parte importante de su
calificacin final. Para obtener ms detalles
sobre la logstica de la programacin de este
experimento, consulte la Informacin de
soporte.
DESCRIPCIN DEL PROCEDIMIENTO
Equipos y productos qumicos
Una lista detallada de todos los equipos y
productos qumicos necesarios para este
experimento puede encontrarse en la
Informacin de Soporte. Una bomba de vaco
capaz de suministrar presiones de menos de 1
Torr y un cilindro de argn comprimido son
necesarios para este experimento. Todos los
dems productos qumicos pueden adquirirse
en Aldrich, Fisher Chemicals, VWR o Acros; Se
proporciona una lista detallada de productos
qumicos y sus proveedores en la Informacin
de Apoyo.
Etapa 1: Adicin del reactivo de Grignard
El bromuro de alilmagnesio comercialmente
disponible se aade al trans-cinamaldehdo
para formar el alcohol racmico 1 deseado
(Esquema 1). Esta reaccin es rpida y, si se
hace correctamente, muy selectiva. La adicin
lenta del reactivo de Grignard es necesaria
para evitar productos secundarios y evitar as
una cromatografa en columna de la mezcla
bruta. Esta reaccin sirve como un buen
indicador de las habilidades de manipulacin
de un estudiante. En general, no es necesaria
la cromatografa en columna y el producto
bruto se utiliza directamente en la siguiente
etapa.
Paso 2a: Resolucin cintica enzimtica
La Lipasa CALB (lipasa B de Candida
antarctica (C. antarctica) o Novozyme 435) es
una hidrolasa aislada de C. antarctica e
inmovilizada en forma de agregados
reticulados (copolmeros reticulados). Esta
lipasa realiza la transesterificacin enzimtica
de alcoholes racmicos seleccionando uno de
los dos enantimeros. El acetato de vinilo es
un donador de acilo irreversible (la formacin
de acetaldehdo en la reaccin de
transesterificacin evita la reaccin inversa).
La ventaja de este mtodo es que puede aislar
tanto compuestos enriquecidos
enantiomricamente (alcohol no consumido (S)
-1 como acetato (R) -2) recin formado por
cromatografa sobre gel de slice (Esquema 2).
Los excesos enantiomricos dependen de la
estructura del sustrato, de la naturaleza del
agente acilante, de los parmetros de reaccin
y del tiempo de reaccin (y, por tanto, de la
conversin del sustrato) .13 La mezcla en
bruto se analiza por HPLC quiral a Determinar
el exceso enantiomrico del alcohol y el
anlisis de RMN 1H para medir la tasa de
conversin. El alcohol (S) -1 y el acetato (R) -2
se separan por cromatografa sobre gel de
slice y se usan en etapas posteriores.
Etapa 2b (reaccin lateral): Hidrlisis del
acetato
El acetato (R) -2 se hidroliza en condiciones
estndar para generar el otro enantimero del
alcohol (R) -1 (Esquema 3). Este enantimero
no se utilizar en etapas subsiguientes pero
demuestra a los estudiantes que los
enantimeros, una vez mezclados, estn ahora
completamente separados. Este enantimero,
si fuera necesario, podra convertirse en el
deseado (S) -1 a travs de una reaccin de
Mitsunobu.14
Etapa 3: Esterificacin del Alcohol (S) -1
La esterificacin del alcohol (S) -1 separado de
la etapa 2a en condiciones tpicas proporciona
el precursor para la reaccin de mettesis de
cierre del anillo (RCM), generalmente con altos
rendimientos (Esquema 4).
Paso 4: Mettesis de cierre del anillo
La importancia de la reaccin RCM se
demuestra por su alta eficiencia para cerrar
una amplia gama de anillos y su amplio uso en
la literatura como un paso clave en la sntesis
de numerosos productos naturales.15 En este
experimento se utiliza el catalizador Grubbs de
primera generacin Ciclizar (S) - 3 y completar
la sntesis de (S) - goniotalamina (Esquema 5).
Aunque el catalizador Grubbs de primera
generacin no es tan activo como los
catalizadores Grubbs ms recientes
(catalizadores de segunda generacin y
Hoveyda-Grubbs), se encontr que el primero
era ms barato y catalizaba la reaccin
deseada fcilmente en rendimientos
aceptables.
PELIGROS
Todas las reacciones deben realizarse en una
campana extractora. La trietilamina y el
bromuro de alil-magnesio son corrosivos. El
acetato de etilo, el tetrahidrofurano, el ter
dietlico, la trietilamina, el cloruro de acriloilo, el
bromuro de alilmagnesio, la acetona y el ter
de petrleo son inflamables. El diclorometano,
el trans-cinamaldehdo, el tetrahidrofurano, el
acetato de etilo, la acetona y el gel de slice
son irritantes. El hexano, el diclorometano, el
cloruro de acrilolo, el ter de petrleo y el ter
dietlico son txicos. El n-hexano es una
neurotoxina. Se deben emplear precauciones
estndar cuando se trabaja con gases
comprimidos; Los cilindros deben estar respectivamente. La reaccin se repiti cuatro
encadenados a una pared y deben ser abiertos veces en 4 aos (33 estudiantes en total) y
solamente con el regulador firmemente sujeto. result ser muy exitosa tanto con los
Todos los productos de reaccin deben estudiantes como con los instructores.
considerarse irritantes.
RESULTADOS
Los estudiantes han llevado a cabo con xito
todos los pasos del experimento. Como
resultado, se expusieron a la qumica de
vanguardia y una amplia gama de tcnicas
experimentales cruciales que los estudiantes
ms tarde necesitarn cuando tomen un
trabajo o comiencen un doctorado. En qumica
orgnica. Los rendimientos y el exceso
enantiomrico (ee; para (S) -1 y (R) -1) valores
obtenidos por los estudiantes para la sntesis
de todos los compuestos (1-4) en este
experimento estn en la Tabla 1 y la Tabla 2,