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Departamento de Medicina Biomolecular y Bioprocesos, Instituto de
Biotecnologa, Departamento de Inmunologia , Instituto de Investigaciones
+
Biomedicas y Departamento de Medicina Experimental, Facultad de Medicina,
Universidad Nacional Autnoma de Mxico
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TABLA DE CONTENIDO
1. Consideraciones generales
2. La respuesta inmune adquirida se rige por complejas interacciones celulares
2.1 Respuesta inmune humoral
2.2 Respuesta inmune celular
2.2.1 Linfocitos CD4+
2.2.2 Linfocitos CD8+
3. Seales intracelulares generadas a traves del receptor para el antgeno
3.1 Los primeros eventos
3.2 La va de PLCg
3.3 La va de Ras y de las MAP cinasas
3.4 Activacin de la va de PI3K
3.5 Distintas vas de sealizacin regulan la expresin de distintos
genes mediante la activacin de factores de trascripcin
3.6 Papel de las molculas adaptadoras en las cascadas de
sealizacin
4. Seales de las molculas co-receptoras
5. Inmunodeficiencias provocadas por defectos en las molculas de
sealizacin
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1. Consideraciones generales.
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intervencin teraputica estn diseados para controlar eventos muy precisos
de la activacin de distintas clulas linfoides. Hoy da se busca incidir sobre los
puntos de control de ciertas vas de sealizacin particularmente importantes
para el desarrollo de ciertas respuestas. Un logro particularmente importante
para el campo de la inmunologa es el desarrollo de drogas como el FK506 que
bloquean especficamente a la calcineurina, una fosfatasa intracelular
involucrada en el reclutamiento de factores de trascripcin responsables de la
activacin de genes que contribuyen al rechazo de trasplantes.
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Los antgenos reconocidos por los anticuerpos pueden ser tan diversos como
polisacridos, lpidos, pptidos, cidos nucleicos y pequeas sustancias
qumicas. Los anticuerpos pueden reconocer eptopes lineares o bien
determinantes conformacionales, resultantes del plegamiento de las cadenas
polipeptdicas. El reconocimiento antignico induce la endocitosis del antgeno,
y su procesamiento para ser presentado por el linfocito B mediante molculas
MHC II.
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Las seales intracelulares generadas cuando los receptores para el antgeno
reconocen a su antgeno no son suficientes para la activacin adecuada del
linfocito B y se requiere la participacin de molculas co-receptoras tanto de
clulas B como T. Las molculas co-receptoras expresadas por el linfocito B
incluyen B7-1 (CD80) y B7-2 (CD86) cuyo ligando en clulas T es CD28. El
linfocito T CD4+ a su vez expresa la molcula co-estimuladora CD40L cuyo
ligando en la clula B es CD40 (Fig.4) . Esta co-estimulacin, o segunda seal,
es indispensable para la activacin mutua, ya que sin ella los linfocitos entran
en un estado de anergia. Adicionalmente, la IL-2 secretada por el linfocito T
CD4+ induce la activacin y proliferacin del linfocito B, transformndolo en
clula plasmtica productora de anticuerpos (Fig.2E).
Las clulas plasmticas pueden salir de los ganglios linfticos donde sufrieron
su estimulacin, proliferacin y expansin clonal y migar a distintos sitios del
sistema inmune (ganglios o mdula sea) y secretar anticuerpos mientras
persista el reto antignico o bien, transformarse en clulas de memoria, con
capacidad de producir anticuerpos de alta afinidad muy rpidamente, en caso
de la reaparicin del reto antignico. Mientras que la respuesta primaria tarda
de 7 a 10 das para llegar a su mxima expresin, la respuesta inmune
secundaria generada por linfocitos B de memoria, tarda entre 3 y 4 das. Los
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anticuerpos circulan por la sangre y dependiendo de su isotipo, se asocian
preferentemente a distintos tejidos o clulas efectoras, siendo que IgA se
encuentra asociada a mucosas, mientras que IgE se une a receptores FceRI de
alta afinidad en clulas cebadas y basfilos. El entrecruzamiento de los
receptores IgE en estas clulas lleva a la liberacin instantnea de las
substancias vasoactivas de sus grnulos.
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deCD28), respectivamente. Otras molculas accesorias presentadas por
linfocitos T son CD4, CD8 (cuyos ligandos son MHC II y MHC I), CD45R, L-
selectina y CD44 (une a linfocitos T al endotelio de tejidos inflamados). Una
vez activados, los linfocitos T expresan CTLA-4, que tiene mayor afinidad por
B7-1 y B7-2 que CD28, y funciona como mecanismo regulador que inhibe la
proliferacin excesiva del linfocito. Las molculas accesorias adicionalmente
regulan la migracin de los linfocitos ((Fig.4)
La afinidad del TCR por los complejos pptido-MHC es mucho menor (Kd: 10-5-
10-7) que la de la mayora de los anticuerpos. Esta baja afinidad posiblemente
es la causa por la cual se requieren las molculas accesorias para estabilizar la
unin de linfocitos T a CPAs. Cuando la interaccin entre el linfocito T y la CPA
es exitosa, las cadenas del TCR se desplazan de manera coordinada con sus
ligandos en las CPAs formando una estructura supramolcular denominada
sinapsis inmunolgica.
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combinacin de eventos induce la proliferacin, diferenciacin y secrecin de
citocinas del linfocito. La primer citocina producida por linfocitos T al ser
activados es la IL-2, que acta como factor de crecimiento autcrino (para la
misma clula), as como un factor parcrino (para clulas vecinas).
Una vez activados, los linfocitos T CD4+ se convierten en clulas efectoras que
ayudan a otras clulas como macrfagos, a eliminar microbios fagocitados, o a
linfocitos B para producir anticuerpos. La ayuda que prestan los linfocitos T
CD4+ se realiza a travs de las citocinas que producen y por medio de sus
molculas co-receptoras. Las poblaciones de linfocitos T CD4+ mejor definidas
son las Th-1 y Th-2, cuya diferencia radica esencialmente en las citocinas que
secretan. Mientras que las citocinas producidas por CD4+ Th-1 incluyen IFN-g
y TNF-a que activan a los macrfagos en la fase efectora de la respuesta
inmune celular, las citocinas producidas CD4+ Th-2 incluyen IL-4, IL-5, TGF-b,
e IL-13 que participan en la fase efectora de la respuesta inmune humoral
activando a linfocitos B, para transformarlas en clulas plasmticas productoras
de anticuerpos (Fig.5). Recientemente se ha reconocido la existencia de una
subpoblacin de linfocitos T CD4+ con funcin reguladora. Aunque no se
dispone aun de un marcador exclusivo de estas clulas, se sabe que son
CD25+ (cadena a del receptor para IL-2). Estas clulas tienen la capacidad de
inhibir la respuesta de linfocitos CD4+ y CD8+ ya sea por contacto clula-clula
o mediante la produccin de citocinas inhibitorias (IL-10 y TGF-b)
En resmen, las clulas CD8+ citotxicas pueden inducir apoptosis por tres
distintos mecanismos: granzimas y perforinas, Fas-L y mediante las citocinas
TNF-a y TNF-b unidas al receptor TNFRI en clulas blanco (Fig.6). Los
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linfocitos T CD4+ Th-1 tambin pueden inducir apoptosis mediante estas dos
ltimas vas.
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formacin de la sinapsis inmunolgica, se registra la activacin de enzimas que
catalizan la fosforilacin de residuos de tirosina de diversas cinasas de tirosina.
Las cadenas invariantes CD3 g,d y e as como los dmeros de la cadena z del
complejo TCR-CD3 y las subunidades Ig-a/b asociadas con el BCR constituyen
el modulo de sealizacin (Fig.6). Cada una de las molculas del modulo de
sealizacin se caracteriza por tener por lo menos una secuencia especfica de
16 aminocidos llamada ITAM (Immunoreceptor Tyrosine Activation Motif) que
consta de dos residuos de tirosina (Y ) separados entre si por 9-11
aminocidos. (YXXXL/I X6-8 YXXXL/I). Las porciones citoplsmicas de la
cadena CD3 y de la cadena z contienen un total de diez ITAMS. Cuando el
TCR de un linfocito T interacciona con el complejo MHC-peptido presentado en
la superficie de una clula presentadora de antgeno, las molculas co-
receptoras CD4 o CD8 se unen simultneamente a las regiones no polimrficas
de las mismas molculas MHC clase II o clase I. Como resultado de ello, Lck,
una tirosin cinasa de la familia Src, que normalmente se encuentra asociado a
la cola citoplsmica de CD4 y CD8, se aproxima a los ITAMs del complejo CD3
y de la cadena z, y fosforila sus residuos de tirosina. Estos residuos de
tirosina fosforilados sirven a su vez de sitio de unin para la cinasa ZAP-70 (z-
associated protein of 70 kDa). La fosforilacin de ZAP-70 por Lck induce su
actividad enzimtica, la cual se traduce por la fosforilacin de la molcula
adaptadora LAT entre otros.
LAT es una molcula adaptadora que consta de varios residuos de tirosina los
cuales una vez fosforilados son el punto de anclaje de diversas molculas: la
molcula adaptadora Grb2, fosfolipasa C-g1 (PLC-g1) y la subunidad p85 de la
fosfatidil inositol 3 cinasa (PI3K). La molcula Grb2 atrae a este creciente
complejo macromolcular a Sos, y a SLP-76. Sos es un intercambiador de
nucletidos de guanina (intercambia molculas de GDP por GTP, necesarias
para activar a las llamadas pequeas GTPasas tales como Ras), y SLP-76 es
una molcula adaptadora que se asocia con Vav (otro factor intercambiador de
nucletidos de guanina, que participa en rearreglos del citoesqueleto) y a Cbl,
una molcula que se ha relacionado con la regulacin negativa de las seales
intracelulares. La formacin de este complejo multimolecular activa por lo
menos cuatro grandes vas de sealizacin: la va de PLC-g1 (fosfolipasa-g1),
las de Ras-MAPK (mitogen-activated protein kinases) y de Ras-PI3K as como
la va de itk (Figs.7 y 8).
3.2: La va de PLC-g
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flujos de calcio en la regulacin de algunas de las respuestas de los linfocitos T
se demuestra en el efecto de la ciclosporina y FK506, dos drogas ampliamente
usadas en la clnica por su poder inmunosupresor. En el citoplasma, estas
drogas se unen a la ciclofilina y a FKBP respectivamente, las cuales forman
parte de una amplia familia de molculas llamadas inmunofilinas. Cuando la
ciclosporina y FK506 forman complejos con sus respectivos ligandos, son
capaces de unirse con y de inhibir las funciones de la calcineurina, una
fosfatasa dependiente de calcio y de calmodulina. En condiciones normales, al
desfosforilar al factor de trascripcin NF-AT, la calcineurina descubre un sitio
de localizacin nuclear en NF-AT, provocando su translocacin al ncleo. La
presencia de ciclosporina y FK506 inhibe la actividad de fosfatasa de la
calcineurina, y por la tanto la activacin de los linfocitos. Por otra parte, la
activacin de algunos miembros de la familia de PKC que resulta de la
generacin de DAG, puede participar en la activacin de varias vas de
sealizacin, como por ejemplo la va de las MAPKs, a travs del Raf-1 e
inducir la activacin de otros factores de trascripcin tales como NFkB (Fig.8).
Otro evento de gran importancia que resulta del reconocimiento del antgeno
por parte del receptor para el antgeno es la activacin de Ras. Ras es una
protena que se encuentra normalmente localizada en la cara interna de la
membrana celular y que une molculas de guanosina 5-trifosfato (GTP)cuando
es activada o GDP cuando se encuentra en estado inactivo. Como sucede en
el caso de otras molculas que unen GTP, el estado de activacin de Ras
refleja en realidad el balance entre el conjunto de molculas de Ras que se
encuentran asociadas a GDP y el de las asociadas a GTP. Este delicado
equilibrio est controlado por los factores intercambiadores de nucletidos de
guanina (Guanine Exchange Factors, GEF) que al inducir el intercambio de
GDP por GTP inclinan la balanza hacia la activacin de las protenas G. Ras-
GTP es un activador alostrico de las MAPKs. La familia de las MAPKs esta
constituida por nmerosos miembros, que se activan en cascada. Cada
cascada consta de por lo menos tres enzimas que son sustrato las unas de las
otras. Entre las molculas que son reclutadas en respuesta a la activacin de
Ras, se encuentra Raf-1. Al unirse Raf-1 con Ras-GTP (lo cual favorece su
localizacin membranal), esta cinasa se activa y fosforila residuos de
serina/treonina de sus sustratos. La activacin de Raf-1, mediada a travs de
PKC, conduce a la activacin de la cascada de las MAPKs, entre las cuales
mencionaremos a ERK1/2. A su vez, en el ncleo, ERK fosforila a una
protena llamada Elk, la cual estimula la transcripcin de Fos, uno de los
componentes del factor de transcripcin AP-1 (Fig.7).
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citocinas proinflamatorias como TNF e IL-1. Cuando JNK se encuentra en su
forma activa, es capaz de fosforilar a Jun, el otro componente del factor de
transcripcin AP-1. Por otra parte, Rac-GTP participa activamente en
promover los rearreglos del citoesqueleto que llevan a la formacin de la
sinapsis inmunologica)
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En linfocitos en reposo, NF-AT se localiza en el citoplasma de la clula, y esta
fosforilado en residuos de serina. Cuando la calmodulina, que es una fosfatasa
dependiente de Ca+-calmodulina, desfosforila a NF-AT, se descubre un sitio de
localizacin nuclear, lo cual permite que NF-AT se dirija al ncleo, en donde se
une con secuencias especficas de la regin promotora de los genes de IL-2 e
IL-4 por ejemplo. Generalmente en la regin reguladora de los genes hay
secuencias concenso especficas para mas de un factor de trascripcin, lo que
sugiere que la induccin de la expresin de un gen es un proceso muy
regulado. Como mencionamos anteriormente, los mecanismos de activacin
de NF-AT se descubrieron mediante el uso de las drogas inmunosupresoras
Cyclosporina y FK506.
Hasta ahora hemos descrito a grandes rasgos las vas de sealizacin que
llevan a la activacin de los linfocitos. Hemos hecho hincapi en una serie de
cascadas de sealizacin en donde los actores principales son molculas con
actividad cataltica. Sin embargo, no podramos abordar plenamente este tema
sin hablar de una categora adicional de molculas: las molculas adaptadoras.
Las molculas adaptadoras, no tienen capacidad enzimtica intrnseca. Como
la mayor parte de las molculas que participan en la transduccin de seales,
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las protenas adaptadoras estn constituidas por dominios modulares que unen
y/o reclutan a otras protenas de sealizacin, de ah que tambin se les
denomine protenas de andamiaje. Entre los modulos de sealizacin
mencionaremos los dominios SH2 (Src Homology domain 2) y PTB (Phospho-
Tyrosine binding domain) que reconocen secuencias cortas de aminocidos
que contienen fosfotirosinas, los dominios SH3 y WW que interactuan
respectivamente con secuencias ricas en prolina y con dominios PH (dominios
de homologia a plekstrina) que se asocian con fosfoinositidos.
Algunas molculas como LAT (Linker for Activation of T cells) y WASP (Wiskot-
Aldrich Syndrome Protein) al reclutar numerosas molculas, muchas de ellas
con actividad enzimtica, promueven la formacin de grandes complejos
moleculares en una regin de la clula en donde se percibieron, a traves de los
receptores para el antgeno, seales de activacin, participan en la regulacin
positiva de las seales. LAT es indispensable para el reclutamiento de la va
de PLCg-1, la generacin de flujos de Ca2+ y la activacin de la MAP cinasa
ERK. WASP participa de manera importante en la regulacin del citoesqueleto
de actina en respuesta a las seales del TCR. En cambio, otras molculas
tales como Cbl-b y c-Cbl participan en la regulacin negativa de las seales.
Las molculas de la familia Cbl son molculas adaptadoras constituidas por
una gran variedad de dominios funcionales a traves de los cuales tambin
reclutan a numerosas molculas sealizadoras, para dirigirlas hacia la va de
degradacin del proteosoma, debido a su funcin de ligasa de ubiquitina. Es
interesante notar que ambos tipos de molculas son reclutados por las mismas
seales.
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Adems de modular la fuerza de la adhesin entre los linfocitos y sus APCs,
estas molculas generan seales intracelulares que regulan de una manera
positiva o negativa las del receptor para el antgeno, y en funcin del balance
final de las seales intracelulares, determinan la respuesta final del linfocito T o
B (Fig.4). A pesar de que el nmero de molculas caracterizadas como
molculas co-receptoras o accesorias es muy grande y crece cada da, solo se
conocen las funciones precisas de algunas de ellas.
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moleculares de la va de sealizacin de estas molculas, sin embargo
mencionaremos el hecho que en sus colas citoplsmicas presentan variaciones
de estructuras muy parecidas a los ITAMS, llamadas ITIMS (Immuno Tyrosine
Inhibitory Motifs), y que en vez de tener un papel positivo en la sealizacin,
tienen un papel inhibitorio. El resultado final de estos eventos, y de otros que
no mencionamos, es que el umbral de activacin de los linfocitos T y B
aumenta (Fig.9).
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BIBLIOGRAFIA
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TEXTO DE LEYENDAS.
7. Las seales del TCR y del BCR, junto con las de sus respectivas molculas
accesorias generan seales tempranas a partir de las cuales las tirosin cinasas
de la familia de Src (Lck en el caso de los linfocitos T y Lyn en el caso de los
linfocitos B) fosforilan los residuos de tirosina de los ITAMs, generando sitios de
unin para las tirosin cinasas de la familia ZAP-70/SYK. Estos primeros
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eventos permiten luego reclutar tres grandes vas de sealizacin, que
ultimadamente regulan el destino de los linfocitos: 1) la va de PLCg, que a
traves de sus productos regula los flujos de Ca2+ intracelular y la activacin de
los distintos miembros de la familia de PKC; 2) la va de los fosfoinostidos
cuyos productos regulan la va de PLCg as como otras enzimas intracelulares
que regulan la activacin de factores de trascripcin tales como NF-AT; 3) la
va de las MAP cinasas que a traves de sus mltiples enzimas participa en
eventos tales como reclutamiento de factores de trascripcin, rearreglos del
citoesqueleto etc
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Tabla 1
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B/ Defectos a nivel de la activacin de linfocitos
Enfermedad Deficiencia funcional Causa del defecto
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