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Anlises

Qumicas
e Bioqumicas
em Plantas

Egdio Bezerra Neto


Levy Paes Barreto

UFRPE
2011
Ministrio da Educao
UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DE PERNAMBUCO

Reitor:
Prof. Valmar Corra de Andrade

Diretor da Editora Universitria da UFRPE:


Anto Marcelo Freitas Athayde Cavalcanti

Av. Dom Manoel de Medeiros, s/n


Dois Irmos Recife / PE
CEP: 52171-900

Autores:
Prof. Egdio Bezerra Neto e Prof. Levy Paes Barreto

Projeto Grfico e Capa:


Bruno de Souza Leo

Departamento de Qumica
Tel.: (81)3320-6367
egidio@dq.ufrpe.br
levy@dq.ufrpe.br

Catalogao na Fonte
Setor de Processos Tcnicos da Biblioteca Central UFRPE

B574m Bezerra Neto, Egdio


Anlises qumicas e bioqumicas em plantas /
Egdio Bezerra Neto, Levy Paes Barreto. --
Recife: UFRPE, Editora Universitria da UFRPE, 2011.
261p. : il.
1. ANLISE QUMICA 2. QUMICA VEGETAL
3. NUTRIO MINERAL I. Barreto, Levy Paes
II. Ttulo
CDD 581.19

ISBN: XXXXXXXXXXXXXX
Apresentao 7

S umrio
1 | Coleta e Preparo de Amostra
Vegetal para Anlise Qumica 9
2 | Determinao de Umidade 13
3 | Determinao de Resduo
Mineral (R.M.) 16
4 | Determinao de Acares
Redutores em Caldo de Cana 20
5 | Determinao de Sacarose
em Caldo de Cana 27
6 | Determinao de Amido 35
7 | Determinao de Carboidratos
Solveis Totais 41
8 | Determinao de Sacarose 48
9 | Determinao de Acares Redutores 53
10 | Determinao de Carboidratos
Totais No Estruturais 59
11 | Determinao de leo em
Sementes de Oleaginosas 64
12 | Determinao de Fibra Bruta 69
13 | Determinao de Nitrognio Total
e Estimativa do Teor de Protena Bruta73
14 | Determinao de Protena Solvel 79

15 | Determinao de Aminocidos
Livres Totais 84

16 | Determinao de Prolina Livre


em Tecido Foliar Fresco 90
17 | Determinao de Glicinabetaina 93
18 | Determinao de Nitrato
em Tecido Vegetal 99
19 | Determinao da Atividade de Nitrato
Redutase (E.C.1.6.6.1) em Tecido Vegetal 103
20 | Determinao da Atividade
da Peroxidase (EC 1.11.1.7) 110
21 | Atividade da Fenilalanina
Amnia Liase (EC. 4.3.1.5) 115
22 | Determinao da Atividade
da Beta Glucanase (EC 3.2.1.39) 119
23 | Separao de Pigmentos Fotossintticos por
Cromatografia em Papel 123
24 | Determinao de Clorofila
em Tecido Foliar 127
25 | Derminao da Acidez
em Suco de Frutas 130
26 | Determinao do pH em Suco de Frutas 136
27 | Determinao de SST em Suco de Frutas 138
28 | Determinao de Vitamina C
em Suco de Frutas 141
29 | Determinao de Fenis Totais 146
30 | Determinao de Fenis
Totais e Taninos 150
31 | Determinao de Carbono Orgnico
Total em Tecido Vegetal 156
32 | Digesto Nitro-Perclrica para Anlise
de Elementos Minerais 161
33 | Determinao de Fsforo 165
34 | Determinao de Enxofre 170
35 | Determinao de Cloreto 173
36 | Determinao de Boro 177
37 | Determinao de Silcio 182
38 | Determinao de Sdio e Potssio em
Tecidos Vegetais por Fotometria de Chama 188
39 | Determinao de Nutrientes Minerais por
Espectrofotometria de Absoro Atmica 192
Anexo 1 | Conselhos teis para
Trabalhos em Laboratrio 203
Anexo 2 | Instrues para Elaborao
de Relatrios de Anlises Qumicas 205
Anexo 3 | Transformaes de Resultados
de Anlises Qumicas 207
Anexo 4 | Exerccios Propostos 209
Anexo 5 | Padronizao de Solues 240
Anexo 6 | Composio Bromatolgica
Aproximada de Algumas Hortalias,
Frutas e Culturas de Larga Escala 246
Anexo 7 | Princpios Bsicos de Anlises
Espectrofotomtrica 248
Anexo 8 | Tabela de Eynon-Lane
para Anlise de Acares,
Titulando 10 mL da Soluo de Soxhlet 254
Anexo 9 | Concentrao de Alguns cidos
Comuns em Laboratrios 256
Anexo 10 | Teores Adequados de Nutrientes
Minerais nas Folhas para Diversas Culturas 257
Anexo 11 | Tabela Perdica
dos elementos qumicos 260
A presentao

O livro Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plan-


tas direcionado rea agrria, mais especificamente nas
Universidades e Centros de Ensino. Foi concebido com base
no interesse dos professores-autores Dr. Egdio Bezerra Neto
e Levy Paes Barreto (que lecionam no Departamento de Qu-
mica da Universidade Federal Rural de Pernambuco) de favo-
recer o processo de aprendizado ao trazer para os estudantes
valiosas recomendaes sobre trabalhar num laboratrio, a
sequncia usada na elaborao de relatrios de aulas prticas
(que tanto os confunde) e representaes de tabelas. Os que
desejarem aprender vo encontrar nesse livro uma ferramen-
ta til para responder aos seus questionamentos no que con-
cerne a essas anlises.
A estrutura de cada prtica traz esclarecimentos importan-
tes que se traduzem logo na introduo, seguida pelos mtodos
e tcnicas utilizados. Para sedimentar o aprendizado, o livro
conta com exerccios propostos nos anexos. Tais aes desen-
volvem sobremaneira o lado cognitivo e fazem aflorar o interes-
se por um tema que pertence realidade do mundo acadmico
e que no futuro, far parte do dia a dia dos profissionais que a
Universidade assume a misso de formar.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 7


Considero meus queridos colegas Egdio e Levy pesquisa-
dores competentes, que com muita dedicao nos presenteiam
esta obra: ao mesmo tempo um material rico, que norteia as
anlises de natureza Qumica e Bioqumica.
Agradeo o convite para apresentar esse trabalho, o que me
honrou. Expresso tambm a minha alegria pela homenagem
(veja contra-capa) ao meu tambm querido colega Prof. Emano-
el Lopes de Albuquerque.
Sneca nos disse que Ensinando, aprende-se. Este livro
uma prova do trabalho responsvel dos professores que divi-
dem agora com os seus alunos um pouco do que aprenderam
ensinando e os convidam a aprender mais, para que um dia
possam ensinar outros. Esse o pensamento coletivo da nossa
Universidade, comprometida na busca do conhecimento cien-
tfico. E na difuso desse conhecimento que encontramos no
meio acadmico a contribuio maior que podemos deixar para
a sociedade.

Rosangela Ma S. Lucena
Profa. do Departamento de Qumica da UFRPE

Recife, maio de 2011


C oleta P reparo
1
e

de A mostr a Vegetal par a

A nlise Q umica
I. I ntroduo

O sucesso de qualquer mtodo analtico que visa a caracte-


rizao do estado fisiolgico da planta, dos processos bioqumi-
cos, e dos produtos dela obtidos, baseia-se fundamentalmente
em dois fatores:

a. Correto estabelecimento dos mtodos para coleta, conserva-


o e preparo das amostras de rgos ou de tecidos a anali-
sar.
b. Interpretao correta dos resultados em funo de um siste-
ma referencial.

Na amostragem de uma populao a ser analisada deve-se


estabelecer a representatividade da amostra, isto , tomar um
nmero de amostras individuais ou compostas que realmente
espelhem a populao dentro da variabilidade natural.
Os tecidos frescos so altamente perecveis, assim como,
aps a coleta continuam a funcionar os processos fisiolgicos e

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 9


comea a se estabelecer a senescncia com o aumento da respira-
o, hidrlise de protenas, etc. Para a realizao de testes bioqu-
micos, os quais simulam as condies in vivo, necessria a uti-
lizao de tecido recm-colhido. Neste caso, devem-se promover
as anlises imediatamente aps a coleta ou promover um sistema
adequado para a conservao da amostra, como o congelamento,
por exemplo.
Para anlise de certos componentes orgnicos como prote-
nas, carboidratos, etc. bem como dos nutrientes minerais, o me-
lhor meio de conservao da amostra atravs da desidratao
em estufa com circulao forada de ar regulada entre 60 e 70C,
moagem e em seguida acondicionamento em recipiente herme-
ticamente fechado. A amostra assim tratada chama-se amostra
preparada ou amostra pr-seca.
Em algumas situaes, antecedendo o processo de conser-
vao da amostra, necessrio realizar a descontaminao do
material vegetal. No caso de amostras impregnadas por solo ou
poeira, as mesmas devem ser lavadas inicialmente com gua cor-
rente (potvel), posteriormente com detergente neutro a 0,1% e
por ltimo com gua destilada. No entanto, se o material vegetal
foi adubado via foliar ou pulverizado com defensivos agrcolas,
o mesmo deve ser submetido a lavagem com HCl a 3% em subs-
tituio ao detergente neutro citado anteriormente. importante
que o tempo total de lavagem no ultrapasse 3 minutos com vis-
tas a evitar perdas de nutrientes como K e Ca.

10 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


II. M archa A naltica par a P reparo
de A mostr a V egetal par a A nlise V isando
o A specto A limentar ou N utricional

1. Colher (ou obter no mercado) a amostra, seguindo os critrios


da representatividade;
2. Quando necessrio, lavar o material com gua corrente, de-
tergente neutro a 0,1% ou HCl a 3%, conforme o caso, seguida
de lavagem com gua destilada, e deixar secar sombra;
3. Acondicionar em saco plstico limpo e transportar para o la-
boratrio, o mais breve possvel;
4. Cortar o material em pequenos fragmentos (0,51,0cm) e co-
locar em recipiente aberto tipo bandeja;
5. Levar o material a uma estufa regulada a 6070C e deixar
desidratando por cerca de 4872 horas (ao final desse tempo,
o material deve apresentar aspecto quebradio);
6. Moer o material em moinho de facas de ao inoxidvel (tipo
Willey), com peneira de 2mm;
7. Acondicionar o material em recipiente hermeticamente fe-
chado e devidamente identificado.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 11


III. B ibliogr afia

BEZERRA NETO, E.; BARRETO, L.P. Mtodos de anlises qumicas

em plantas. Recife: Imprensa Universitria da UFRPE, 2004. 149p.

CARVALHEIRA, J.H.P. da. Qumica vegetal. Recife: UFRPE,

mimeografado, 1975. 130p.

MIYAZAWA, M.; PAVAN, M.A.; BLOCH, M. de F.M. Anlise qumica

de tecido vegetal. Londrina: Instituto Agronmico do Paran, 1992.

17p. (IAPAR. Circular, 74).

SILVA, F.C. da. Manual de anlises qumicas de solos, plantas e

fertilizantes. Braslia: EMBRAPA, 1999. 370p.

12 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


D eterminao U midade
2
de

I. I ntroduo

O contedo de gua das plantas, tambm denominado de


teor de umidade, varia de uma espcie vegetal para outra e,
dentro da mesma espcie, varia de um rgo para outro, bem
como, com o estdio de desenvolvimento da planta. As plan-
tas lenhosas contm, em seus caules, cerca de 50% de gua. Os
caules das plantas herbceas contm normalmente 70 a 80% de
gua enquanto que certos frutos podem atingir at mais de 90%
de gua, como por exemplo, a melancia. As sementes maduras
geralmente contm de 7 a 15% de gua (veja ANEXO 5). Como
regra geral o teor de gua nos tecidos est relacionado com as
atividades metablicas dos mesmos.
importante conhecer o teor de umidade dos tecidos e das
amostras porque a preservao das mesmas est relacionada
com o teor de umidade, alm de que para se comparar o valor
nutritivo de dois ou mais alimentos, tem-se que levar em consi-
derao os respectivos teores de matria seca. A matria seca
a amostra isenta de umidade.
Nos trabalhos de rotina dos laboratrios, geralmente se de-
termina o teor de umidade de tecidos vegetais pelo mtodo in-
direto. Por este processo, pesa-se uma quantidade de amostra
e em seguida a mesma posta para desidratar completamente.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 13


Aps completa desidratao, pesa-se a matria seca e por dife-
rena calcula-se o quanto a amostra tinha de umidade, expres-
sando-se o resultado em termos de percentagem. Na realidade,
outras substncias volteis (leos essenciais, por exemplo) alm
da gua, so desprendidas, ocasionando algum erro, o qual
pode geralmente ser considerado desprezvel.
Tradicionalmente, na determinao de umidade, recomen-
da-se pesar a amostra e colocar a mesma em uma estufa regu-
lada a 100-105C at obter peso constante. Entretanto na prtica,
muitos laboratrios adotam o mtodo rpido de determinao
de umidade. Pelo mtodo rpido, a amostra aps ser pesada
colocada em uma estufa regulada a 135 C por uma hora; em
seguida deixa-se a mesma esfriar em um dessecador e pesa-se
a matria seca.

II. M archa A naltica par a D eterminao de


U midade pelo M todo R pido

1. Tarar um pesa-filtro previamente seco em estufa;


2. Pesar no prprio pesa-filtro 5,0 g da amostra;
3. Colocar o pesa-filtro (aberto) em uma estufa regulada a 135
C ( 2 C) e deixar desidratando por uma hora;
4. Fechar o pesa-filtro e transferir para um dessecador;
5. Aguardar cerca de 10 a 15 minutos e em seguida pesar o pesa-
filtro com a amostra seca;

14 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


6. Calcular o teor de umidade e expressar o resultado em ter-
mos de percentagem.

III. B ibliogr afia

BEZERRA NETO, E.; BARRETO, L.P. Mtodos de anlises qumicas

em plantas. Recife: Imprensa Universitria da UFRPE, 2004. 149p.

CARVALHEIRA, J.H.P. da. Qumica vegetal. Recife: UFRPE,

mimeografado, 1975. 130p.

INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Mtodos fsico-qumicos para anlise

de alimentos. So Paulo: Instituto Adolfo Lutz, 2008. 1020p.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 15


D eterminao R esduo
3
de

M iner al (R.M.)
I. I ntroduo

Os elementos minerais que as plantas absorvem, seja pelas


razes, seja pela parte area so classificados em elementos es-
senciais, elementos teis (ou benficos) e elementos txicos. No
existe uma metodologia universal para analisar todos estes ele-
mentos conjuntamente. Contudo, a maior parte dos elementos
contidos nos tecidos vegetais pode ser analisada partindo de
um extrato nico. A preparao de extratos vegetais para a an-
lise dos elementos minerais pode ser realizada tanto atravs de
uma digesto seca como de uma digesto mida. A digesto
seca obtida atravs da incinerao (calcinao) da amostra e
em seguida dissoluo do resduo mineral (cinza) em um cido.
Portanto, a cinza corresponde ao resduo inorgnico resultante
da oxidao (atravs da queima) completa da matria orgnica,
e representa o total de elementos minerais. A digesto por via
mida obtida atravs da ao de cidos minerais concentra-
dos (cido ntrico, cido perclrico, etc.) temperatura elevada
(veja captulo 32).
Durante a digesto por via seca, alm de gua, gases como
CO2, NH3, e outros so eliminados, permanecendo no cadinho

16 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


apenas o resduo mineral, o qual formado de ctions como: K+,
Na+, Mg2+, Fe3+, Al3+, etc. e nions como silicato, fosfato e sulfato
e dos respectivos xidos. O contedo de resduo mineral varia
de espcie para espcie vegetal. Dentro da mesma espcie ve-
2
getal varia com o rgo e idade da planta. O teor de cinzas est
diretamente relacionado com a atividade metablica. Desta for-
ma, as folhas contm muito mais cinzas de que as sementes. O
lenho (madeira) contm pouca cinza.

II. M archa A naltica

1. Aquecer um cadinho em uma mufla temperatura de 350C


por uma hora;
2. Deixar o cadinho esfriar em dessecador e em seguida pesar
no mesmo 2,0000g da amostra;
3. Colocar o cadinho com a amostra em um fogareiro eltri-
co ou bico de Bunsen com chama branda e deixar o material
carbonizar completamente. Reconhece-se que o material est
completamente carbonizado quando o mesmo deixar de eli-
minar fumaa;
4. Transferir o cadinho para uma mufla previamente aquecida a
300C e em seguida regular a mesma para 575C ( 25C);
5. Aps quatro horas, baixar a temperatura da mufla para 300C.
Quando esta temperatura for atingida, transferir o cadinho
para um dessecador, deixar o mesmo esfriar e pesar;

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 17


6. Calcular o contedo de cinzas e expressar em termos de per-
centagem.

Observaes:

1. Nunca abrir a mufla quando a mesma estiver aquecida a mais


de 350C.
2. Se aps quatro horas de calcinao a amostra ainda no se
apresentar com cor clara, continuar o processo de calcinao
por mais duas ou quatro horas.
3. No desprezar as cinzas. As mesmas podem ser utilizadas
para a determinao do contedo de certos elementos como
fsforo, clcio, potssio, sdio, etc. Para isto, necessrio pre-
parar o extrato das cinzas conforme segue:
a. Com o auxlio de um basto de vidro dissolver as cinzas
(R.M.), usando 10 mL de HCl 2 N;
b. Filtrar para um balo volumtrico de 100 mL;
c. Lavar o cadinho e resduo do filtrado com gua destilada
e completar o volume do balo volumtrico;

18 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


III. B ibliogr afia

BEZERRA NETO, E.; BARRETO, L.P. Mtodos de anlises qumicas

em plantas. Recife: Imprensa Universitria da UFRPE, 2004. 149p.

CARVALHEIRA, J.H.P. da. Qumica vegetal. Recife: UFRPE,

mimeografado, 1975. 130p.

INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Mtodos fsico-qumicos para anlise

de alimentos. So Paulo: Instituto Adolfo Lutz, 2008. 1020p.

SILVA, D.J.; QUEIRZ, A.C. de. Anlise de alimentos: mtodos

qumicos e biolgicos, Vicosa: UFV, 2002. 235p.

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D eterminao A cares
4
de

R edutores em C aldo de C ana


M todo de E ynon -L ane

i . introduo

Os monossacardeos em geral, em reaes de xido-reduo,


comportam-se como agentes redutores, fornecendo eltrons ao
sistema, sendo eles, simultaneamente oxidados, transforman-
do-se nos cidos carboxlicos correspondentes. Um exemplo
dessa reao ilustrado na Figura 1.
O mtodo de Eynon-Lane para anlise de acares redu-
tores, est fundamentado na propriedade acima exposta, de
forma que o cobre, presente na soluo de Soxhlet, reduzido
pelo acar redutor. Nessa reao, a reduo do cobre cprico
(Cu2+) para cobre cuproso (Cu+) ocorre com a formao de um
precipitado vermelho tijolo, caracterstico da formao de xido
cuproso (Equao II). Durante a titulao, usa-se o indicador
azul de metileno para auxiliar na visualizao do ponto final
da reao.
Os sucos de frutas em geral so ricos em monossacarde-
os como glucose, frutose, etc., os quais podem ser analisados
conjuntamente pelo mtodo de Eynon-Lane. O caldo de cana-

20 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


de-acar apresenta, entre outros acares redutores, uma
elevada proporo de glucose e frutose. A mistura equimole-
cular desses dois acares denominada de acar invertido,
e sua anlise constitui uma rotina de elevada importncia na
agroindstria aucareira.

H O
C
NaO O
H C OH C
HO C H H C O
+ 2 Cu
H C OH H C O
H C OH C
H C OH KO O
H cupritartarado
glucose de sdio e potssio

HO O
C
NaO O
H C OH C
HO C H H C OH
+ 2 + Cu2O
H C OH H C OH
H C OH C
H C OH KO O
H
cido tartarato duplo xido
glucnico de sdio e potssio cuproso

Figura 1. Esquema representativo da oxidao da glucose, pelo cobre presente


na soluo de Soxhlet, durante a titulao pelo mtodo de Eynon-Lane.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 21


II. M archa A naltica par a D eterminao
de A car I nvertido em C aldo de C ana - de -
A car

1. Pesar 20g de caldo de cana em uma cpsula de porcelana (ou


recipiente equivalente);
2. Transferir quantitativamente para um balo volumtrico
de 200mL, e adicionar 4mL do clarificante acetato neutro de
chumbo (54,3Brix);
3. Agitar suavemente o balo e em seguida adicionar 6mL da
soluo fosfato-oxalato para remover o clcio e o excesso de
chumbo;
4. Completar o volume do balo com gua destilada. Se neces-
srio adicionar 2 a 3 gotas de ter para remover a espuma;
5. Agitar e filtrar com papel de filtro qualitativo;
6. Com o filtrado, encher uma bureta de 50mL e zerar a mes-
ma;
7. Preparar a soluo de Soxhlet, pipetando para um erlenmeyer
de 250mL, 25mL da soluo A e 25mL da soluo B do licor de
Fehling. Usar pipetas volumtricas nesta operao;
8. Pipetar para dois erlenmeyers separadamente, 10mL da solu-
o de Soxhlet recentemente preparada (item 7). Nesta opera-
o tambm recomendado usar pipeta volumtrica;

22 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


Ensaio Preliminar*
9. Em um erlenmeyer contendo 10mL da soluo de Soxhlet
(item 8), adicionar a frio, 15mL do filtrado contido na bureta
(item 6) e colocar para aquecer em um fogareiro eltrico;
10. Marcar 15 segundos aps o incio da fervura, e ento adi-
cionar 3 gotas do indicador azul de metileno e continuar a
titulao gota a gota, sem remover o erlenmeyer da fonte de
aquecimento. O final da titulao reconhecido pela mudan-
a da cor azul para vermelho tijolo;
11. Se aps adicionar o indicador (item anterior), verificar que
j ocorreu a mudana de cor, torna-se necessrio fazer uma
diluio do filtrado. Como sugesto, pipetar 50mL do filtrado
para um balo volumtrico de 100mL, completar o volume
com gua destilada e repetir o ensaio preliminar conforme
descrito nos itens 9 e 10;
12. Anotar o volume do filtrado gasto no ensaio preliminar, o
qual servir como referncia para a realizao do ensaio de-
finitivo;

Ensaio Definitivo*
13. Novamente, encher a bureta com o filtrado (diludo se for o
caso), zerar a mesma e em seguida pegar outro erlenmeyer
contendo 10mL da soluo de Soxhlet e adicionar a frio, o vo-
lume do filtrado correspondente ao que foi gasto na titulao
do ensaio preliminar, menos 2mL;

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 23


14. Colocar o erlenmeyer para aquecer e 2 minutos aps o incio
da fervura, adicionar 3 gotas de azul de metileno e completar
a titulao sem remover o erlenmeyer da fonte de aquecimen-
to. A titulao do ensaio definitivo no deve gastar mais que
1 minuto aps a adio do indicador;
19. Anotar o volume gasto na titulao do ensaio definitivo e
calcular a percentagem de acar invertido do caldo de cana,
mediante correlao com os valores da tabela de Eynon-Lane
(ANEXO 8).

OBS.: Esta anlise tambm pode ser realizada em ensaio nico,


com adio de 15mL do filtrado a frio na soluo de Soxhlet,
adicionando-se o indicador azul de metileno dois minutos aps
a fervura e continuando a titulao at a viragem da cor de azul
para vermelho tijolo (Pessoa et al., 2007).

III. P reparo D os R eagentes

a. Acetato neutro de chumbo. Dissolver cerca de 250g de aceta-


to neutro de chumbo em 500mL de gua (soluo saturada) e
em seguida filtrar em tecido de nilon de malha fina.
b. Soluo A de Soxhlet. Dissolver 34,639g de sulfato de cobre
pentahidratado (CuSO4.5H2O) em cerca de 300mL de gua
destilada e em seguida completar o volume para 500mL. Fil-
trar e transferir para recipiente apropriado.

24 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


c. Soluo B de Soxhlet. Dissolver 173g de tartarato duplo de
sdio e potssio em cerca de 300mL de gua destilada, adicio-
nar 100mL de hidrxido de sdio a 50% e em seguida comple-
tar o volume para 500mL. Filtrar e transferir para recipiente
apropriado.
d. Soluo fosfato-oxalato. Pesar 3,0g de oxalato de potssio e
7,0g de fosfato dissdico, dissolver separadamente em gua
destilada, em seguida misturar as duas solues e completar
o volume para 100mL.
e. Soluo de azul de metileno a 1%. Pesar 1,0g de azul de
metileno, dissolver em gua destilada e completar o volume
para 100mL.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 25


IV. B ibliogr afia

BEZERRA NETO, E.; BARRETO, L.P. Mtodos de anlises qumicas

em plantas. Recife: Imprensa Universitria da UFRPE, 2004. 149p.

CARVALHEIRA, J.H.P. da. Qumica vegetal. Recife: UFRPE,

mimeografado, 1975. 130p.

INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Mtodos fsico-qumicos para

anlise de alimentos. So Paulo: Instituto Adolfo Lutz, 2008.

1020p.

PESSOA, C. de O.; SANTOS, D. S. dos; BARRETO, L.P. Efeito do

tempo de aquecimento precedente adio do indicador na anlise

de amido pelo mtodo de Eynon-Lane. In: VII JORNADA DE

ENSINO, PESQUISA E EXTENSO DA UFRPE, 2007.

26 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


D eterminao S acarose
5
de

em C aldo de C ana
M todo de E ynon -L ane

I. I ntroduo

A sacarose o acar comum comercial, amplamente dis-


tribudo nas plantas superiores, constituindo em certas esp-
cies, tais como a cana-de-acar e a beterraba, uma reserva de
grande importncia. Nestas, por exemplo, sua extrao pro-
duz matria prima para grandes indstrias mundiais. Quimi-
camente a sacarose um dissacardeo formado pela unio de
uma molcula de glucose com uma molcula de frutose. Ao
contrrio da glucose e da frutose que so acares redutores,
a sacarose no um acar redutor, portanto no pode ser de-
terminada diretamente pelo mtodo de Eynon-Lane. No en-
tanto, a sua hidrlise produz partes iguais de glucose e frutose
(acar invertido) os quais so acares redutores, podendo-
se desta forma, determinar o teor de sacarose, indiretamente,
por este mtodo. Para tanto, provoca-se hidrlise da sacarose,
determina-se o teor de acar invertido e em seguida, atravs
de um clculo estequiomtrico obtm-se o teor de sacarose
que continha a amostra. Veja a estequiometria a seguir:

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 27


H+
C12H22O11 + H2O C6H12O6 + C6H12O6
sacarose gua glucose frutose

342 (sacarose) 360 (acar invertido)


X 1

X = 342 x 1 = 0,95
360

sacarose = a.i. x 0,95

importante salientar que todo caldo de cana-de-acar


contm normalmente uma determinada quantidade de acar
invertido, a qual denominada aqui como acar invertido
previamente existente no caldo (a.i.c). A esta quantidade de
acar invertido soma-se o proveniente da hidrlise da sa-
carose (a.i.s), dando o que denominamos de acar invertido
total (a.i.t). Como mostram as equaes abaixo, por subtrao
pode-se saber o teor de acar invertido proveniente da hidr-
lise da sacarose.

a.i.c + a.i.s = a.i.t

a.i.s = a.i.t - a.i.c

28 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


O mtodo qumico de determinao de acares redutores
baseia-se na propriedade que tm estes acares de reduzir o
cobre da soluo Soxhlet. O cobre presente na soluo de Soxh-
let encontra-se na forma de cupritartarato de sdio e potssio
(Cu2+), oriundo da reao de sulfato de cobre com o tartarato
duplo de sdio e potssio. Esta soluo apresenta-se de cor azul
piscina. Sob a ao de agentes redutores, como os acares re-
dutores em geral, e em condies favorveis, o cobre precipi-
ta na forma de xido cuproso (Cu2O), reconhecvel pela colo-
rao vermelho tijolo. Sob a forma de xido cuproso, o cobre
encontra-se com o nmero de oxidao 1+, isto , Cu+, e portanto
encontra-se reduzido.

II. M archa A naltica

1. Pesar 20,0g de caldo de cana em uma cpsula de porcelana


(ou recipiente equivalente);
2. Transferir, quantitativamente, para um balo volumtrico
de 200mL, e adicionar 4mL do clarificante acetato neutro de
chumbo (54,3Brix);
3. Agitar suavemente o balo e em seguida adicionar 6mL da
soluo fosfato-oxalato para remover o clcio e o excesso de
chumbo;
4. Completar o volume do balo com gua destilada. Se neces-
srio, adicionar 2 a 3 gotas de ter para remover a espuma;

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 29


5. Agitar e filtrar com papel de filtro rpido;
6. Para provocar a hidrlise da sacarose, transferir 50mL do fil-
trado para um balo volumtrico de 100mL e adicionar 20mL
de gua destilada;
7. Introduzir um termmetro no balo volumtrico e colocar
para aquecer em Banho-Maria at o lquido atingir 65C;
8. Atingida a temperatura desejada, retirar o balo volumtrico
da fonte de aquecimento e imediatamente adicionar 5mL de
cido clordrico concentrado (12,5 N);
9. Agitar suavemente o contedo do balo e em seguida deixar
em repouso por 30 minutos para que ocorra a hidrlise da sa-
carose. Enquanto espera a hidrlise da sacarose, determinar
o teor do acar invertido previamente existente no caldo de
cana (a.i.c).

Acar Invertido Previamente Existente no Caldo

10. Tomar outra poro do filtrado (item 5), encher e zerar uma
bureta de 50mL, para determinao do acar invertido pre-
viamente existente no caldo de cana;
11. Preparar a soluo de Soxhlet, pipetando para um erlen-
meyer de 250mL, 25mL da soluo A e 25mL da soluo B do
licor de Fehling. Usar pipetas volumtricas nesta operao;
12. Agitar a soluo de Soxhlet, referida no item anterior e em
seguida, com o uso de uma pipeta volumtrica, transferir

30 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


quatro pores de 10mL, para erlenmeyers individuais, com
capacidade para 250mL;
13. Em um erlenmeyer contendo 10mL da soluo de Soxhlet
(item 12), adicionar a frio, 15mL do filtrado contido na bureta
(item 10) e colocar para aquecer em um fogareiro eltrico;
14. Marcar 15 segundos aps o incio da fervura, e ento adi-
cionar 3 gotas do indicador azul de metileno e continuar a
titulao gota a gota, sem remover o erlenmeyer da fonte de
aquecimento. O final da titulao reconhecido pela mudan-
a da cor azul para vermelho tijolo;
15. Se aps adicionar o indicador (item anterior), verificar que
j ocorreu a mudana de cor, torna-se necessrio fazer uma
diluio do filtrado. Como sugesto, pipetar 50mL do filtrado
para um balo volumtrico de 100mL, completar o volume
com gua destilada e repetir o ensaio preliminar conforme
descrito nos itens 13 e 14;
16. Anotar o volume do filtrado gasto no ensaio preliminar, o
qual servir como referncia para a realizao do ensaio de-
finitivo;

Ensaio Definitivo*

17. Novamente encher e zerar a bureta com o filtrado (diludo


se for o caso) e, em seguida, usar outro erlenmeyer contendo
10mL da soluo de Soxhlet e adicionar, a frio, o volume do

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 31


filtrado correspondente ao que foi gasto na titulao do en-
saio preliminar, menos 2mL;
18. Colocar o erlenmeyer para aquecer e 2 minutos aps o incio
da fervura, adicionar 3 gotas de azul de metileno e completar
a titulao sem remover o erlenmeyer da fonte de aquecimen-
to. A titulao do ensaio definitivo no deve gastar mais que
1 minuto aps a adio do indicador;
19. Anotar o volume gasto na titulao do ensaio definitivo e
calcular a percentagem de acar invertido do caldo de cana,
mediante correlao com os valores da tabela de Eynon-Lane
(ANEXO 7).

Acar Invertido Total

20. Transferir o contedo do balo volumtrico referido no item


9, para um balo volumtrico de 500mL e em seguida com
o auxlio de NaOH 2,5 M e de um peagmetro (ou papel in-
dicador), elevar o pH do meio para quase neutro (levemente
cido);
21. Completar o volume do balo volumtrico e em seguida
determinar o teor de acar invertido total, titulando a solu-
o de Soxhlet em dois ensaios, conforme foi realizado para
a determinao do acar invertido previamente existente no
caldo de cana;
22. Calcular a percentagem de acar invertido total, em segui-

32 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


da a percentagem de acar invertido proveniente da hidr-
lise da sacarose e, finalmente, a percentagem de sacarose.

OBS.: Esta anlise tambm pode ser realizada em ensaio nico,


com adio de 15mL do filtrado a frio na soluo de Soxhlet,
adicionando-se o indicador azul de metileno dois minutos aps
a fervura e continuando a titulao at a viragem da cor de azul
para vermelho tijolo (Pessoa et al., 2007).

III. P reparo dos R eagentes


(Veja captulo 4)

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 33


IV. B ibliogr afia

BEZERRA NETO, E.; BARRETO, L.P. Mtodos de anlises qumicas

em plantas. Recife: Imprensa Universitria da UFRPE, 2004. 149p.

CARVALHEIRA, J.H.P. da. Qumica vegetal. Recife: UFRPE,

mimeografado, 1975. 130p.

INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Mtodos fsico-qumicos para anlise

de alimentos. So Paulo: Instituto Adolfo Lutz. 2008. 1020p.

PESSOA, C. de O.; SANTOS, D. S. dos; BARRETO, L.P. Efeito do tempo

de aquecimento precedente adio do indicador na anlise de

amido pelo mtodo de Eynon-Lane. In: VII JORNADA DE ENSINO,

PESQUISA E EXTENSO DA UFRPE, 2007.

34 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


D eterminao A mido
6
de

M todo volumtrico de E ynon -L ane

I. I ntroduo

O amido um polissacardeo de reserva das plantas supe-


riores, formado pela unio de vrias molculas de glicose. Pode
ser encontrado em folhas, no entanto seu armazenamento
mais comum em razes, tubrculos e gros. O amido extrado
industrialmente do trigo, milho, arroz, mandioca, batata, etc.
Por ser um alimento bastante rico em calorias e de fcil assi-
milao pelo organismo humano, muito utilizado na alimen-
tao de crianas e de adultos. Pela mesma razo, dos animais
domsticos em geral.
Da mesma forma que a sacarose, o amido no pode ser
determinado diretamente pelo mtodo de Eynon-Lane, pois
o mesmo no um acar redutor. No entanto, sua hidrlise
completa produz a glicose, a qual pode ser determinada direta-
mente pelo mtodo de Eynon-Lane, por se tratar de um acar
redutor. Desta forma, para se analisar o amido pelo mtodo de
Eynon-Lane, provoca-se a sua hidrlise atravs de um cido
mineral forte, determina-se o teor de glicose e em seguida cal-
cula-se estequiometricamente quanto havia de amido na amos-
tra. A seguir, fornecida a equao da hidrlise do amido, com

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 35


a demonstrao da estequiometria necessria converso de
glicose em amido.

(C6H10O5)n + nH2O nC6H12O6


amido gua glicose
162 + 18 180

162 (amido) 180 (glicose)


X 1

amido = glicose x 0.9

Antes de se provocar a hidrlise do amido, necessrio re-


mover os acares solveis que porventura existam na amos-
tra, como sacarose, glicose, frutose, etc. A remoo dos acares
solveis feita atravs de uma solubilizao em gua destilada
e em seguida filtrao.

II. M archa A naltica

1. Pesar 1 a 3g da amostra, transferir para um bquer de 125mL


e adicionar cerca de 50mL de gua destilada;
2. Agitar por 1 hora em mesa agitadora orbital e em seguida
filtrar lavando o resduo com 250mL de gua destilada;
3. Transferir o resduo para um erlenmeyer de 500mL, adicionar
200mL de gua destilada e, em seguida, 20mL de HCl 8 M;

36 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


4. Adaptar ao erlenmeyer, um condensador de refluxo e colocar
para aquecer por trs horas, sob ebulio suave;
5. Aps as trs horas de aquecimento, deixar esfriar e com o
auxlio de NaOH 2,5 M e de um peagmetro (ou papel indi-
cador), elevar o pH do meio para quase neutro (levemente
cido);
6. Adicionar 4mL de acetato neutro de chumbo (54,3Brix), ho-
mogeneizar e em seguida adicionar 6mL da mistura fosfato-
oxalato;
7. Transferir o contedo do erlenmeyer para um balo volum-
trico de 500mL e completar o volume;
8. Filtrar e com o filtrado encher uma bureta de 50mL. Em se-
guida, zerar a bureta para posterior titulao da soluo de
Soxhlet;
9. Para preparar a soluo de Soxhlet, pipetar para um erlen-
meyer 20mL da soluo A e 20mL da soluo B. Usar pipetas
volumtricas nesta operao.
10. Agitar suavemente a soluo de Soxhlet referida no item an-
terior e, em seguida, com o uso de uma pipeta volumtrica,
transferir 2 pores de 10mL, para erlenmeyers individuais,
com capacidade para 250mL;

Ensaio Preliminar*

11. Em um dos erlenmeyers contendo 10mL da soluo de So-

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 37


xhlet, adicionar a frio, 15mL do filtrado referido no item 8 e
colocar para aquecer em fogareiro eltrico;
12. Marcar 15 segundos aps o incio da fervura, e ento adi-
cionar 3 gotas do indicador azul de metileno e continuar a
titulao gota a gota, sem remover o erlenmeyer da fonte de
aquecimento. O final da titulao reconhecido pela mudan-
a de cor azul para vermelho tijolo;
13. Se aps adicionar o indicador (item anterior), verificar que
j ocorreu a mudana de cor, torna-se necessrio fazer uma
diluio do filtrado. Como sugesto, pipetar 50mL do filtrado
para um balo volumtrico de 100mL, completar o volume
com gua destilada e repetir o ensaio preliminar conforme
instrues anteriores;
14. Anotar o volume do filtrado gasto no ensaio preliminar, o
qual servir como referncia para o ensaio definitivo;

Ensaio Definitivo*

15. Novamente encher e zerar a bureta com o filtrado (diludo


se for o caso) e em seguida pegar um erlenmeyer contendo
10mL da soluo de Soxhlet e adicionar a frio, o volume do fil-
trado correspondente ao que foi gasto na titulao do ensaio
preliminar, menos 2mL;
16. Colocar o erlenmeyer para aquecer e, 2 minutos aps o incio
da fervura, adicionar 3 gotas de azul de metileno e completar

38 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


a titulao sem remover o erlenmeyer da fonte de aquecimen-
to. A titulao do ensaio definitivo no deve gastar mais que
1 minuto aps a adio do indicador;
17. Anotar o volume gasto na titulao do ensaio definitivo e
calcular a percentagem de amido na amostra analisada.

OBS.: Esta anlise tambm pode ser realizada em ensaio nico,


com adio de 15mL do filtrado a frio na soluo de Soxhlet,
adicionando-se o indicador azul de metileno dois minutos aps
a fervura e continuando a titulao at a viragem da cor de azul
para vermelho tijolo (Pessoa et al., 2007).

III. P reparo dos R eagentes


(Veja captulo 4)

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 39


IV. B ibliogr afia

BEZERRA NETO, E.; BARRETO, L.P. Mtodos de anlises qumicas

em plantas. Recife: Imprensa Universitria da UFRPE, 2004. 149p.

CARVALHEIRA, J.H.P. da. Qumica vegetal. Recife: UFRPE,

mimeografado, 1975. 130p.

INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Mtodos fsico-qumicos para anlise

de alimentos. So Paulo: Instituto Adolfo Lutz. 2008. 1020p.

PESSOA, C. de O.; SANTOS, D. S. dos; BARRETO, L.P. Efeito do tempo

de aquecimento precedente adio do indicador na anlise de

amido pelo mtodo de Eynon-Lane. In: VII JORNADA DE ENSINO,

PESQUISA E EXTENSO DA UFRPE, 2007.

40 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


D eterminao
7
de

C arboidr atos S olveis Totais


M todo E spectrofotomtrico de A ntrona

I. I ntroduo

Quimicamente os carboidratos so polihidroxialdedos


ou polihidroxicetonas ou compostos que por hidrlise pro-
duzem esses compostos. Fisiologicamente so compostos de
elevado teor calorfico, servindo como fonte de energia para os
organismos em geral. Alm da funo de reserva energtica,
merece destaque a funo estrutural desempenhada pela ce-
lulose, como componente da parede celular dos vegetais. No
universo dos carboidratos existem aqueles que so insolveis
em gua tal como a celulose e os que so solveis em gua
como a sacarose, frutose e glicose, estes ltimos so chamados
de acares solveis.
Os carboidratos solveis podem ser determinados colori-
metricamente mediante o aquecimento dos mesmos em pre-
sena de antrona. Nestas condies, a reao ocorre com a
formao de compostos de colorao esverdeada. A reao da
antrona fundamenta-se na ao hidroltica e desidratante do
cido sulfrico concentrado sobre os carboidratos, e na conse-

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 41


quente condensao com a antrona, formando um composto
colorido. Quando a reao realizada com dissacardeos, tris-
sacardeos ou polissacardeos, estes so hidrolisados a monos-
sacardeos os quais so desidratados para furfural ou hidroxi-
metil furfural. Essas substncias se condensam com a antrona
originando um composto de colorao azul (Figura 2).
A primeira etapa da determinao de carboidratos sol-
veis em tecido vegetal consta da extrao de tais acares,
empregando-se um solvente ou sistema de solventes cuja
escolha vai depender da natureza do tecido a ser analisado,
se no estado fresco ou seco. Quando se pretende determinar
carboidratos em amostra seca, a gua destilada o solvente
mais indicado para a extrao dos acares solveis. No en-
tanto, se o material a ser analisado tratar-se de folhas verdes,
recomenda-se o uso de etanol a 70% ou 80% como sistema
de solvente extrator de acares. Sabe-se que os carboidra-
tos, mesmo os de baixo peso molecular, no se solubilizam
em etanol, e sim, solubilizam-se muito bem em gua. Por ou-
tro lado, o etanol um timo solvente para as clorofilas, as
quais interferem negativamente na anlise dos carboidratos
solveis pelo mtodo da antrona, haja vista tratar-se de um
mtodo colorimtrico. Para solucionar este problema, aps a
extrao dos carboidratos solveis em folhas frescas, usando
etanol a 70% ou 80%, removem-se os pigmentos fotossintti-
cos atravs de uma cromatografia de partio, empregando-

42 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


se clorofrmio ou benzeno, resultando com isto a fase aquo-
sa livre dos pigmentos e contendo os carboidratos.
H O
C
H C OH
H2SO4 H O
HO C H
HO C C
H C OH -3H2O H
H O
H C OH
H C OH
H hidroximetil
hexose furfural

H O +
HO C C
H
H O
hidroximetil H H
furfural antrona

C H
derivado
de colorao
O azul

H C OH
H
Figura 2. Esquema da reao qumica caracterstica da identificao de
carboidratos em presena de antrona.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 43


II. M archa A naltica

Preparo do extrato

1. Pesar 0,250g de amostra pr-seca e transferir para um erlen-


meyer de 125mL;
2. Adicionar 20mL de etanol* a 80%;
3. Agitar por 30 minutos e em seguida filtrar em tecido de ni-
lon de malha fina;
4. Completar o volume do filtrado para 50mL com gua desti-
lada;
5. Homogeneizar e transferir uma alquota de 10mL para um
tubo de ensaio rosqueval, identificar e manter o extrato dilu-
do em refrigerador at o momento da anlise qumica.

OBS.: Este extrato tambm pode ser usado para a determi-


nao de sacarose. Embora a gua destilada seja um bom
solvente para a extrao dos carboidratos solveis, reco-
mendado usar etanol a 70 ou 80% por duas razes: o etanol
auxilia a quebrar a tenso superficial facilitando uma melhor
interao do solvente com a amostra, alm de propiciar uma
melhor conservao do extrato, evitando o desenvolvimento
de microorganismos.

44 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


Procedimentos para o desenvolvimento da cor

6. Preparar uma bandeja de isopor (ou de polipropileno) com


gelo triturado e colocar estantes com tubos de ensaio devi-
damente identificados para extratos das amostras e solues
padres;
7. Pipetar para tubos de ensaio, separadamente, 0,2mL dos ex-
tratos das amostras e das solues padres e manter em ba-
nho de gelo;
8. Adicionar a cada tubo de ensaio, 2,0mL do reagente antro-
na, fechar hermeticamente os tubos de ensaio e agitar su-
avemente at que a mistura se apresente bem homognea,
mantendo os tubos de ensaio em banho de gelo;
9. Cautelosamente transferir os tubos de ensaio para um apa-
relho de banho-maria, regulado a 100C e manter sob aque-
cimento por 10 minutos, para o desenvolvimento da cor (azul
esverdeada);
10. Aps o desenvolvimento da cor, transferir novamente os
tubos de ensaio para banho de gelo e aguardar cerca de 5
minutos para que sejam resfriados;
11. Transferir o contedo do tubo de ensaio para uma cube-
ta espectrofotomtrica de 1,0mL e fazer a leitura em um co-
lormetro com filtro vermelho ou em espectrofotmetro a
620nm;

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 45


12. Proceder aos clculos e expressar os resultados em termos
de percentagem de carboidratos solveis em relao amos-
tra analisada.

OBS.: recomendado realizar esta determinao com trs


repeties analticas, e usar cubetas espectrofotomtricas
de vidro.

III. R eagentes

Reagente especfico (antrona a 0,2%). Pesar 0,200g de antro-


na, dissolver em cido sulfrico 12,854 M e completar o volume
para 100mL. Recomenda-se que esta soluo seja preparada no
mesmo dia a ser utilizada. O cido sulfrico 12,85 molar pre-
parado adicionando-se 500mL do cido puro (96%) a 200mL de
gua destilada.

Solues padres
Soluo estoque de glucose (soluo estoque 2,5 g.L-1). Pesar
0,500g de glucose (P.A.), dissolver em 100mL de gua destilada
e completar o volume para 200mL com etanol a 80%. Transferir
para recipiente adequado e manter em refrigerador. A partir
desta soluo, so preparados os padres de trabalho, nas con-
centraes de 0 a 200 mg.L-1.

46 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


Solues padres diludas. Pipetar para bales volumtri-
cos de 100mL: 1, 2, 4, e 8mL da soluo estoque de glucose (2,5
g.L-1) e completar o volume com gua destilada. Com este pro-
cedimento, estaro preparadas as solues padres de glicose
nas concentraes respectivas de 25, 50, 100, e 200 mg.L-1. O pa-
dro zero corresponde gua deionizada.

OBS.: Mais precisamente, as solues padres diludas tam-


bm podem ser preparadas com base na massa em vez do
volume.

IV. B ibliogr afia

BEZERRA NETO, E.; BARRETO, L.P. Mtodos de anlises qumicas

em plantas. Recife: Imprensa Universitria da UFRPE, 2004. 149p.

YEMM, E. W. ; WILLIS, A. J. The estimation of carbohydrates in plant

extracts by anthrone. Biochemical Journal, v.57, p.508-514, 1954.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 47


D eterminao S acarose
8
de

M todo E spectrofotomtrico
de van H andel

I. I ntroduo

A sacarose obtida industrialmente da cana de acar ou


da beterraba. um dissacardeo constitudo por uma molcula
de -D-glucose interligada com uma molcula de -D-frutose
por ligao 1-2. A sacarose no um acar redutor, pois a
mesma no possui hidroxila glucosdica livre. Este dissacar-
deo encontradoamplamente no reino vegetal, e na maioria
das espcies predomina sobre os demais carboidratos solveis.
O mtodo da antrona (Yemm & Willis, 1954) um mtodo co-
lorimtrico que quantifica todos os acares solveis presentes
na amostra (mono e oligossacardeo). Tal metodologia pode ser
empregada para a determinao dos oligossacardeos solveis
de uma amostra, desde que se aplique um artifcio para remo-
ver ou mascarar a presena dos monossacardeos presentes na
amostra. Van Handel (1968) descreve uma metodologia para a
determinao da sacarose mediante uma prvia destruio dos
monossacardeos presentes na amostra, pela ao do hidrxido
de potssio, e posterior desenvolvimento da cor em presena
da antrona.

48 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


II. P rocedimento A naltico

Preparo de extrato.
Partindo de material vegetal pr-seco.
1. Pesar 0,250g de amostra pr-seca e transferir para um erlen-
meyer de 125mL;
2. Acrescentar 20mL de etanol* (80%) e tampar o erlenmeyer;
3. Colocar para agitar em mesa agitadora orbital por 30 mi-
nutos;
4. Filtrar o extrato em tecido de nilon de malha fina, lavando
o mesmo e completar o volume para 50mL com gua des-
tilada;
5. Homogeneizar e transferir uma alquota de 10mL para um
tubo de ensaio rosqueval, identificar e manter o extrato dilu-
do em refrigerador at o momento da anlise qumica.

OBS.: Para a determinao de sacarose pode ser usado o mes-


mo extrato preparado para a determinao de carboidratos
solveis totais. Embora a gua destilada seja um bom solven-
te para a extrao dos carboidratos solveis, recomendado
usar etanol a 70 ou 80 % por duas razes: o etanol auxilia a
quebrar a tenso superficial facilitando uma melhor interao
do solvente com a amostra, alm de propiciar uma melhor
conservao do extrato, evitando o desenvolvimento de mi-
croorganismos.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 49


Desenvolvimento da cor
6. Pipetar para tubos de ensaio rosqueveis, em separado,
200L das solues padres de sacarose e dos extratos das
amostras;
7. Acrescentar 200L de KOH a 30 % em metanol;
8. Fechar hermeticamente os tubos de ensaio e colocar para
aquecer em banho-maria por 10 minutos a 100C;
9. Deixar resfriar em banho de gelo;
10. Com os tubos de ensaio ainda mergulhados no banho de
gelo, acrescentar 2mL do reagente antrona, e em seguida agi-
tar suavemente at que a mistura se apresente bem homo-
gnea;
11. Transferir novamente para banho-maria a 100C por 10 mi-
nutos para que ocorra o desenvolvimento da cor;
12. Aps o desenvolvimento da cor, transferir novamente os
tubos de ensaio para banho de gelo e aguardar cerca de 3 a 5
minutos para esfriar;
13. Efetuar as leituras espectrofotomtricas no comprimento
de onda de 620nm.

OBS.: recomendado realizar esta determinao com trs re-


peties analticas.

50 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


III. P reparo dos R eagentes

Reagente especfico: antrona a 0,2 % em cido sulfrico.


Pesar 0,200g de antrona, dissolver em cido sulfrico 12,85 M
e completar o volume para 100mL. Recomenda-se que esta so-
luo seja preparada no mesmo dia a ser utilizada. O cido sul-
frico 12,85 molar preparado adicionando-se 500mL do cido
puro (96%) a 200mL de gua destilada.
Soluo padro de sacarose (soluo estoque 2,5g.L-1). Pesar
0,500g de sacarose P.A., dissolver em gua destilada e completar
o volume para 200 mL. Transferir para recipiente adequado e
manter em refrigerador. A partir desta soluo, so preparados
os padres de trabalho, nas concentraes de 0 a 200mg.L-1.
Solues padres diludas. Pipetar para bales volumtri-
cos de 100 mL: 1, 2, 4, e 8mL da soluo estoque de sacarose
(2,5g.L-1) e completar o volume com gua destilada. Com este
procedimento, estaro preparadas as solues padres de saca-
rose nas concentraes respectivas de 25, 50, 100, e 200mg.L-1. O
padro zero corresponde gua deionizada.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 51


I v. B ibliogr afia

Van HANDEL, E. Direct microdetermination of sucrose. Anal.

Biochem., v.22, p.280-283, 1968.

YEMM, E.W.; WILLS, A.J. The estimation of carbohydrates by

anthrone. Biochemical Journal, v.57, p.508-514, 1954.

52 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


D eterminao A cares
9
de

R edutores
M todo E spectrofotomtrico
de S omogyi e N elson

I. I ntroduo

Os monossacardeos em geral, em reaes de xido-reduo,


comportam-se como agentes redutores, fornecendo eltrons ao
sistema, sendo eles, simultaneamente oxidados, transformando-
se nos cidos carboxlicos correspondentes. Um exemplo dessa
reao ilustrado na Figura 9.2 (Bezerra Neto e Barreto, 2004).
O mtodo de Somogyi e Nelson fundamenta-se na proprie-
dade acima exposta, de forma que o cobre, presente na solu-
o de Somogyi, reduzido pelo acar redutor, formando um
cromforo azulado, relativamente estvel, ao ser dissolvido em
presena do arsenomolibdato do reagente de Nelson, permi-
tindo dessa forma a sua leitura em espectrofotmetro a 760nm
(Nelson, 1944; Somogyi, 1952).
Os sucos de frutas em geral so ricos em monossacardeos
como glucose, frutose, etc., os quais podem ser analisados con-
juntamente pelo mtodo de Somogyi e Nelson. O caldo de ca-
na-de-acar apresenta, entre outros acares redutores, uma

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 53


elevada proporo de glucose e frutose. A mistura equimole-
cular desses dois acares denominada de acar invertido,
e sua anlise constitui uma rotina de elevada importncia nas
usinas de acar.

II. P rocedimento A naltico

H O
C
NaO O
H C OH C
HO C H H C O
+ 2 Cu
H C OH H C O
H C OH C
H C OH KO O
H cupritartarado
glucose de sdio e potssio

HO O
C
NaO O
H C OH C
HO C H H C OH
+ 2 + Cu2O
H C OH H C OH
H C OH C
H C OH KO O
H
cido tartarato duplo xido
glucnico de sdio e potssio cuproso

Figura 3. Esquema representativo da oxidao da glucose, pelo cobre presente


na soluo de Somogyi, e a consequente reduo do cobre a xido cuproso.

54 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


Preparo de extrato.
Partindo de material vegetal pr-seco.

1. Pesar 0,250g de amostra pr-seca e transferir para um


erlenmeyer de 125mL;
2. Acrescentar 20mL de etanol* (80%) e tampar o erlenmeyer;
3. Colocar para agitar em mesa agitadora orbital por 30 mi-
nutos;
4. Filtrar o extrato em tecido de nilon de malha fina, la-
vando o mesmo e completar o volume para 50mL com
gua destilada;
5. Homogeneizar e transferir uma alquota de 10mL para
um tubo de ensaio rosquevel, identificar e manter o ex-
trato diludo em refrigerador at o momento da anlise
qumica.

OBS.: Para a determinao de acares redutores pode ser


usado o mesmo extrato preparado para a determinao de
carboidratos solveis totais. Embora a gua destilada seja um
bom solvente para a extrao dos carboidratos solveis, re-
comendado usar etanol a 70 ou 80 % por duas razes: o etanol
auxilia a quebrar a tenso superficial facilitando uma melhor
interao do solvente com a amostra, alm de propiciar uma
melhor conservao do extrato, evitando o desenvolvimento
de microorganismos.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 55


Desenvolvimento da cor
6. Pipetar para diferentes tubos de ensaio, 0,2mL das solues
padres de glicose e dos extratos das amostras;
7. Acrescentar em cada tubo de ensaio 1,0mL do reagente de
Somogyi, agitar suavemente e tampar o tubo de ensaio;
8. Aquecer os tubos de ensaio em banho-maria, temperatura de
100C por 15 minutos;
9. Esfriar os tubos em banho de gelo e depois acrescentar 1,0mL
do reagente de Nelson;
10. Agitar suavemente e deixar em repouso por 20 minutos;
11. Acrescentar 5,0mL de gua destilada e agitar suavemente;
12. Efetuar as leituras em espectrofotmetro no comprimento
de onda de 760nm;

III. P reparo D os R eagentes

Reagente de Somogyi
28,0g de fosfato dibsico de sdio anidro (Na2HPO4) ou 71g de fos-
fato dibsico de sdio duodeca-hidratado (Na2HPO4.12H2O);
40,0g de tartarato duplo de sdio e potssio;
4,0g de hidrxido de sdio (dissolvido em 100mL de gua
destilada);
8,0g de sulfato de cobre (dissolvido em 80mL de gua des-
tilada);
180,0g de sulfato de sdio anidro;

56 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


Misturar os reagentes, dissolver bem e deixar em repouso
por dois dias. Filtrar a soluo em papel de filtro, armazenar em
frasco escuro a temperatura ambiente.

Reagente de Nelson
50,0 g de molibdato de amnio (dissolvido em 900mL de gua
destilada);
23,0mL de cido sulfrico concentrado (18 M);
6,0g de arsenato de sdio (Na2H2SO4.7H2O), dissolvido em
50mL de gua destilada;
Misturar os reagentes, dissolver bem e deixar em repouso
por dois dias. Filtrar a soluo em papel de filtro, armazenar em
frasco escuro a temperatura ambiente.

Soluo padro de glucose (soluo estoque 2,5g.L-1). Pesar


0,500g de glucose P.A., dissolver em gua destilada e completar
o volume para 200mL. Transferir para recipiente adequado e
manter em refrigerador. A partir desta soluo, so preparados
os padres de trabalho, nas concentraes de 0 a 200mg.L-1.
Solues padres diludas. Pipetar para bales volumtri-
cos de 100 mL: 1, 2, 4, e 8mL da soluo estoque de glucose (2,5
g.L-1) e completar o volume com gua destilada. Com este pro-
cedimento, estaro preparadas as solues padres de glucose
nas concentraes respectivas de 25, 50, 100, e 200mg.L-1. O pa-
dro zero corresponde gua deionizada.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 57


IV. B ibliogr afia

BEZERRA NETO, E.; BARRETO, L.P. Mtodos de anlises qumicas

em plantas. Recife: Imprensa Universitria da UFRPE, 2004. 149p.

NELSON, Norton. A photometric adaptation of the Somogyi method

for the determination of glucose. J. Biol. Chem., v.153, p.375-380,

1944.

SOMOGYI, Michael. Notes on sugar determination. J. Biol. Chem.,

v.195, p.19-23, 1952.

58 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


D eterminao
de C arboidr atos Totais 10
N o E strutur ais
M todo E spectrofotomtrico da A ntrona

I. I ntroduo

Carboidratos so compostos ricos em energia e que tm como


principais funes nos vegetais: participar ativamente do metabo-
lismo geral, atuar como compostos de reserva energtica ou de-
sempenhar funo estrutural. Os carboidratos solveis envolvem
os monossacardeos, oligossacardeos e alguns poucos polissaca-
rdeos. Esses, conjuntamente com os polissacardeos hidrolisveis
formam os chamados carboidratos totais no estruturais (CTNE),
que diferem dos carboidratos estruturais por conter a energia assi-
milvel pelos animais monogstricos. A determinao de carboi-
dratos pelo mtodo da antrona prpria para a quantificao dos
carboidratos solveis contidos em amostras vegetais. Contudo, tal
metodologia tambm pode ser empregada para a determinao
de CTNE em amostra vegetal, desde que se convertam os oligo e
polissacardeos (amido) em suas unidades monomtricas, com o
mnimo de extrao e hidrlise de carboidratos estruturais.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 59


II. P rocedimento A naltico

Preparo do extrato
1. Pesar 0,250g de amostra pr-seca e transferir para um erlen-
meyer de 125mL;
2. Adicionar 20mL de cido clordrico 0,2 M;
3. Colocar para aquecer por uma hora em banho-maria, em
seguida deixar esfriar e filtrar em tecido de nilon de ma-
lha fina;
4. Completar o volume do filtrado para 100mL com gua des-
tilada;
5. Homogeneizar e transferir uma alquota de 10mL para um
tubo de ensaio rosqueval, identificar e manter o extrato dilu-
do em refrigerador at o momento da anlise qumica.

Procedimentos para o desenvolvimento da cor

6. Preparar uma bandeja de isopor (poliestireno) com gelo tri-


turado e colocar estantes com tubos de ensaio devidamente
identificados para extratos das amostras e solues padres;
7. Pipetar para tubos de ensaio, separadamente, 0,2mL dos ex-
tratos das amostras e das solues padres e manter em ba-
nho de gelo;
8. Adicionar a cada tubo de ensaio, 2,0mL do reagente antrona,
fechar hermeticamente os tubos de ensaio e agitar suavemen-

60 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


te at que a mistura se apresente bem homognea, mantendo
os tubos de ensaio em banho de gelo;
9. Cautelosamente transferir os tubos de ensaio para um apare-
lho de banho-maria, regulado a 100C e manter sob aqueci-
mento por 10 minutos, para o desenvolvimento da cor (azul
esverdeada);
10. Aps o desenvolvimento da cor, transferir novamente os
tubos de ensaio para banho de gelo e aguardar cerca de 5
minutos para que sejam resfriados;
11. Transferir o contedo do tubo de ensaio para uma cubeta es-
pectrofotomtrica de 1,0mL e fazer a leitura em um colorme-
tro com filtro vermelho ou em espectrofotmetro a 620nm;
12. Proceder aos clculos e expressar os resultados em termos
de percentagem de carboidratos solveis em relao amos-
tra analisada.

Observaes
1. recomendado realizar esta determinao com trs repe-
ties analticas.
2. O mtodo da antrona tambm pode ser empregado para
a determinao dos polissacardeos de reserva (PR), ex-
pressos como amido. Para isto necessrio fazer a deter-
minao dos CTNE e na mesma amostra determinar CST
(carboidratos solveis totais). Em seguida calcula-se o teor
de PR pela equao seguinte: % PR = (% CTNE - % CST)

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 61


x 0,9; onde 0,9 representa o fator de converso de glucose
em amido.

III. R eagentes

Reagente especfico (antrona a 0,2 %). Pesar 0,200g de antro-


na, dissolver em cido sulfrico 12,854 M e completar o volume
para 100mL. Recomenda-se que esta soluo seja preparada no
mesmo dia a ser utilizada. O cido sulfrico 12,854 molar pre-
parado adicionando-se 500mL do cido puro (96%) a 200mL de
gua destilada.
cido clordrico 0,2 M. Em um balo volumtrico com ca-
pacidade para 250mL, adicionar cerca de 200mL de gua desti-
lada, acrescentar 4,2mL de cido clordrico concentrado (12 M)
em seguida completar o volume com gua destilada.

Solues padres
Soluo estoque de glucose (soluo estoque 2,5 g.L-1). Pesar
0,500g de glucose P.A., dissolver em gua destilada e completar
o volume para 200mL. Transferir para recipiente adequado e
manter em refrigerador. A partir desta soluo, so preparados
os padres de trabalho, nas concentraes de 0 a 200 mg.L-1.
Solues padres diludas. Pipetar para bales volum-
tricos de 100mL: 1, 2, 4, e 8 mL da soluo estoque de glucose
(2,5g.L-1) e completar o volume com gua destilada. Com este

62 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


procedimento, estaro preparadas as solues padres de gli-
cose nas concentraes respectivas de 25, 50, 100, e 200mg.L-1. O
padro zero corresponde gua deionizada.

OBS.: Mais precisamente, as solues padres diludas tambm


podem ser preparadas com base na massa em vez do volume.

IV. B ibliogr afia

SOUZA, A.E.R. de; SILVA, A.B. da; BEZERRA NETO, E.;

ALBUQUERQUE, E.L. de. Calibrao de metodologia para anlise

de carboidratos totais no estruturais em tecido vegetal. In: XXIX

REUNIO NORDESTINA DE BOTNICA, Mossor-RN. Anais

SNB. 2006. Cd-Rom.

YEMM, E. W. ; WILLIS, A. J. The estimation of carbohydrates in plant

extracts by anthrone. Biochemical Journal, v.57, p.508-514, 1954.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 63


D eterminao leo
11
de em

S ementes de O leaginosas
M todo de S oxhlet

I. I ntroduo

As matrias graxas dos vegetais (leos e gorduras) so mis-


turas de glicerdeos e cerildios constitudos de cidos graxos
os mais diversos, impurificados por vrios lipides. So encon-
tradas fazendo parte das membranas celulares (onde exercem
a funo estrutural), na superfcie de folhas e frutos (desem-
penhando a funo protetora) e em grandes quantidades nas
sementes de oleaginosas, com a funo de reserva. As matrias
graxas de origem vegetal, em particular os leos, so ampla-
mente extradas das sementes de plantas oleaginosas, como:
soja, girassol, algodo, oliva, mamona, pinho manso, etc., as-
sim como do endosperma slido do coco, e do mesocarpo do
dend (tambm chamado de leo de palma).
crescente a demanda por leos ricos em cidos graxos po-
liinsaturados nos produtos alimentcios de modo geral. O de
maior consumo o leo de soja, o qual possui 61% de cidos
graxos poliinsaturados. O leo de milho, o leo de caroo de
algodo e o leo de amendoim contm respectivamente 42, 50 e

64 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


21% de cidos graxos poliinsaturados (Shreve e Brink Jr., 1980)
Do ponto de vista qumico, os leos so steres de cidos
graxos com glicerol. So insolveis em gua, mas solveis em
solventes orgnicos tais como, ter de petrleo, hexano, benze-
no, clorofrmio e tetracloreto de carbono. So pouco solveis
em lcool frio, com exceo dos leos de crton, rcino e oliva.
A extrao das matrias graxas pode ser feita por trs pro-
cessos:
a.Simples fuso com aquecimento a seco ou em presena de
gua. Por este processo, o calor dilacera as clulas vegetais e
o leo ou a gordura aps a fuso se separa das impurezas por
diferena de densidade.
b. Presso mecnica a frio, quando se tratar de um leo, ou a
quente, no caso de uma gordura. Neste processo, a matria
gordurosa expulsa por presso.
c. Extrao por solvente orgnico, que consiste em submeter a
amostra ao de um solvente orgnico e em seguida filtrar
para separar os detritos vegetais da fase lquida, a qual cons-
ta da mistura da matria graxa com o solvente. Finalmente
o leo (ou gordura) separado do solvente por destilao,
sendo recuperado o solvente. Esta separao ocorre graas a
diferena entre o ponto de ebulio dos solventes orgnicos
empregados (cerca de 60 a 70C) e o ponto de ebulio das
matrias graxas (em torno de 300C). A extrao das matrias
graxas por este processo tem sido historicamente denomina-

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 65


da de extrato etreo devido s primeiras extraes terem sido
realizadas com o uso do ter.
importante salientar que o extrato etreo obtido de mate-
riais pobres em leo e gordura, como as folhas em geral, apre-
senta em sua constituio uma boa parcela de outros compos-
tos de natureza lipdica, como os pigmentos.
O processo industrial de extrao de leo depende da
matria-prima, no caso do caroo de algodo, utiliza-se a ao
combinada da prensagem seguida da extrao por solvente, com
o objetivo de aumentar o rendimento. Porm, quando a matria-
prima o gro de soja, a extrao por solvente realizada de
modo contnuo, em contracorrente, atravs de diversos estgios
de extrao. Em termos de eficincia, a extrao por solvente
pode recuperar at 98% do leo (rendimento de 14,2kg/hl),
enquanto a prensagem hidrulica (11,2kg/hl) ou em prensa-
parafuso (11,9kg/hl) pode recuperar 80-90% do leo (Shreve e
Brink Jr., 1980).

II. M archa A naltica

1. Tarar um balo coletor previamente seco em estufa;


2. Com o auxlio de um almofariz e de um pistilo, macerar as
sementes e pesar, em papel de filtro, 5,0g das mesmas, en-
volver no prprio papel de filtro e colocar em um cartucho
extrator;

66 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


3. Transferir este conjunto para um extrator de Soxhlet;
4. Adaptar o extrator de Soxhlet ao balo e, em seguida, adicio-
nar solvente (hexano) em quantidade suficiente para sifonar
uma vez e mais a metade da capacidade do extrator;
5. Conectar o conjunto extrator ao condensador e em seguida
levar a uma fonte de aquecimento;
6. Ligar a fonte de aquecimento e a circulao de gua (para
resfriamento) e deixar a extrao se processar por 8 horas;
7. Aps a extrao, recuperar o restante do solvente, retirar o
cartucho com a amostra e levar o balo coletor para uma es-
tufa regulada a 100C;
8. Deixar o balo coletor na estufa por trs horas e em seguida
transferir o mesmo para um dessecador;
9. Deixar o balo coletor (contendo leo) no dessecador por cer-
ca de 10 minutos e em seguida pesar o mesmo e calcular a
percentagem de leo na amostra analisada.
OBS.: No desprezar a amostra desengordurada (livre de extra-
tivos), pois a mesma serve para a anlise de fibra bruta.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 67


III. B ibliogr afia

BEZERRA NETO, E.; BARRETO, L.P. Mtodos de anlises qumicas

em plantas. Recife: Imprensa Universitria da UFRPE, 2004. 149p.

CARVALHEIRA, J.H.P. da. Qumica vegetal. Recife: UFRPE,

mimeografado, 1975. 130p.

INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Mtodos fsico-qumicos para anlise

de alimentos. So Paulo: Instituto Adolfo Lutz. 2008. 1020p.

SHREVE, R.N.; BRINK JR., J.A. Indstrias de processos qumicos. 4

Edio. Rio de Janeiro: LTC, 1980. 732 p.

SILVA, D.J.; QUEIRZ, A.C. de. Anlise de alimentos: mtodos

qumicos e biolgicos. Visosa: UFV, 2002. 235p.

STRYER, L. Bioqumica. 4. ed. Rio de Janeiro: Guanabara-Koogan,

1996. 1000p il.

68 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


D eterminao F ibr a B ruta
12
de

M todo G r avimtrico

I. I ntroduo

As fibras dos vegetais so constitudas principalmente por ce-


lulose, hemiceluloses e lignina, componentes estes encontrados
em altas concentraes na parede celular das plantas.
Em termos analticos, denomina-se fibra bruta, a fibra de celu-
lose associada a pores variveis dos demais componentes cita-
dos acima, no extrados por cidos e bases diludos e a quente.
A celulose o principal componente da parede celular e o
composto de carbono mais abundante na natureza. encon-
trada em forma mais pura nas fibras de algodo submetido a
cuidadoso tratamento de purificao. O material obtido por
esse processo serve como celulose-padro e apresenta cerca de
99,8% de pureza.
As hemiceluloses so os principais polissacardeos no ce-
lulsicos da parede celular e diferem da celulose, em termos
analticos, principalmente por serem solveis em solues al-
calinas diludas e serem hidrolisadas pela ao de cidos dilu-
dos a quente. Esse grupo de carboidratos estruturais forma-
do por xilana, xiloglicana, glicomanana, arabinoxilana e calose
(Lacerda, 2002; Taiz e Zeiger, 2009)

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 69


A lignina um polmero de natureza fenlica, constitu-
do por trs diferentes lcoois de fenilpropanides: coniferil,
cumaril e sinapil. Tais lcoois so biossintetizados a partir
do aminocido fenilalanina. Como um polmero, a lignina
um composto de elevado peso molecular, e considerada
como produto final do metabolismo do vegetal, pois quando
o processo de lignificao completado, a clula morre, for-
mando o tecido de resistncia. Tal composto pode ser hidroli-
sado pela ao dos cidos ou bases sob condies apropriadas
e altas temperaturas.
A determinao da fibra bruta de uma amostra vegetal ba-
seada na remoo (extrao) dos demais constituintes da amos-
tra, que no sejam a prpria fibra bruta. Essa extrao realiza-
da atravs da hidrlise, solubilizao e filtrao dos compostos
mais facilmente hidrolisveis e solveis, os quais no fazem
parte do conjunto denominado de Fibra Bruta.

II. M archa A naltica

1. Transferir o resduo da determinao de leo para um erlen-


meyer de 500mL, adicionar 200mL de cido sulfrico a 1,25%,
fervente e, em seguida, colocar para aquecer em ebulio su-
ave e sob refluxo por 30 minutos;
2. Filtrar, sob suco (a vcuo), em funil de Bchner, usando
como filtro um tecido de nilon de malha fina;

70 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


3. Lavar o resduo com cerca de 100mL de gua destilada (fer-
vente) e, em seguida, transferir o resduo para o mesmo erlen-
meyer usado anteriormente, usando 200mL de NaOH a 1,25%
(fervente);
4. Colocar para aquecer em ebulio suave e sob refluxo por 30
minutos;
5. Filtrar sob suco (a vcuo), em funil de Bchner, usando um
papel de filtro previamente seco e tarado conjuntamente com
um pesa-filtro;
6. Proceder uma lavagem do resduo, usando gua destilada
quente, sob filtrao a vcuo, at neutralizar o meio (usar pa-
pel indicador);
7. Proceder mais uma lavagem por filtrao usando 20mL de
lcool etlico, e em seguida, 20mL de ter de petrleo;
8. Transferir o papel com o resduo para um pesa-filtro previa-
mente seco e tarado, e em seguida colocar em uma estufa re-
gulada a 100C;
9. Aps permanecer duas horas na estufa, transferir o pesa-fil-
tro com o resduo para um dessecador e deixar por cerca de
10 minutos;
10. Aps esfriar, pesar o pesa filtro contendo o resduo (fibra
bruta + cinzas).
11. Transferir o papel de filtro com o resduo para um cadinho
previamente queimado e tarado, e calcinar a 575C ( 25C)
at obter as cinzas (cerca de 4 horas);

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 71


12. Levar o cadinho com as cinzas para um dessecador e
deixar esfriar por cerca de 10 a 15 minutos;
13. Pesar o cadinho contendo as cinzas e calcular a percenta-
gem de fibra bruta na amostra.

III. B ibliogr afia

BEZERRA NETO, E.; BARRETO, L.P. Mtodos de anlises qumicas

em plantas. Recife: Imprensa Universitria da UFRPE, 2004. 149p.

CARVALHEIRA, J.H.P. da. Qumica vegetal. Recife: UFRPE,

mimeografado, 1975. 130p.

INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Mtodos fsico-qumicos para anlise

de alimentos. So Paulo: Instituto Adolfo Lutz, 2008. 1020p.

LACERDA, C.F. Fisiologia Vegetal. Fortaleza: UFC, 2002. 356 p. il.

SILVA, D.J.; QUEIRZ, A.C. de. Anlise de alimentos: mtodos

qumicos e biolgicos. Vicosa: UFV. 2002. 235p.

TAIZ, L.; ZEIGER, E. Fisiologia Vegetal. 4. ed. Porto Alegre: Artmed,

2009. 820 p. il.

72 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


D eterminao N itrognio
13
de

Total e E stimativa do Teor


de P rotena B ruta
M todo de A rr aste de Vapor (K jeldahl )

I. I ntroduo

As protenas so compostos nitrogenados consideradas ma-


cromolculas formadas a partir da unio de vrios aminocidos
entre si e que so largamente encontradas nos reinos animal
e vegetal. Quanto funo biolgica, as protenas podem ser
classificadas em enzimas, protenas de armazenamento, prote-
nas transportadoras, protenas protetoras, toxinas e hormnios.
Dependendo do produto vegetal o teor de protena bruta pode
variar de 0,2% (ma, mamo, etc.) at 17% (castanha do Par)
(Franco, 2000).
Considerando que as protenas em geral contm cerca de
16% de N, o teor de protena bruta (PB) de uma amostra vege-
tal pode ser determinado partindo-se da anlise do nitrognio
total e em seguida multiplicando-se seu teor (%) pelo fator 6,25.
Este fator usado principalmente para rgos de reserva, como
por exemplo, gros de milho e tambm para ovo e carne. No en-

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 73


tanto, conforme cita Silva (1990), dependendo da natureza do
material analisado, outros fatores de transformao podem
ser usados, em funo das protenas existentes nestes mate-
riais, possurem um percentual de N diferente de 16. Alguns
exemplos de fatores de transformao de N-total em protena
bruta so dados a seguir: endosperma de trigo (5,70), farelo
de trigo (6,31), gro de trigo (5,83), gro de aveia (5,83), farelo
de algodo (5,30), farelo de linho (5,30), amendoim (5,46), leite
(6,38) e gelatina (5,55).
A determinao de nitrognio pelo mtodo de Kjeldahl re-
alizada em trs etapas, a saber: digesto, destilao e titulao.
Durante a digesto da amostra, o nitrognio orgnico mine-
ralizado pelo cido sulfrico em presena de catalisadores, a
temperatura elevada (300C). A mineralizao do nitrognio
orgnico pode ser representada pela equao abaixo:

(catalizadores)
N-orgnico + H2SO4 (NH4)2SO4 + CO2 + H20 (I)

Aps a digesto, processa-se a destilao, na qual o nitro-


gnio j mineralizado na forma do ction amnio (NH4+)
volatilizado na forma de amnia pela ao de uma base forte
(NaOH por exemplo) e, em seguida, recebido pelo cido brico
(H3BO3), tornando-se disponvel para uma posterior titulao.

74 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


As reaes envolvidas durante a destilao so representadas
a seguir:

(NH4)2SO4 + 2 NaOH 2 NH4OH + Na2SO4 (II)

Na4OH NH3 + H2O (III)

Na3 + H3BO3 NH4H2BO3 (IV)

Aps a destilao, a amnia (NH3) titulada por um cido


(H2SO4 por exemplo) e o nitrognio quantificado estequio-
metricamente. A titulao pode ser representada conforme
esquema abaixo:

2 NH4H2BO3 + H2SO4 (NH4)2SO4 + 2 H3BO3 (V)

II. E stequiometria dos C lculos

De acordo com a equao V, 2 NH4+ reagem exatamente


com um mol de H2SO4. Seguindo-se esta proporo e sabendo-
se a concentrao e volume do cido empregado na titulao,
calcula-se a quantidade de N total da amostra, conforme rela-
es abaixo :
2 NH4+ + H2SO4 (NH4)2SO4 + 2H+
28g (N) 98g (H2SO4)
14g (N) 49g (1000mL de H2SO4 1N)
14g (N) 1000mL de H2SO4 1N
0,7g (N) 1000mL de H2SO4 0,05N
0,7mg (N) 1mL de H2SO4 0,05N

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 75


III. M archa A naltica

1. Pesar 100mg de uma amostra vegetal. Transferir para um


tubo digestor e adicionar 7mL da mistura digestora;
2. Adaptar o tubo digestor a um bloco digestor localizado em
uma capela e colocar para aquecer obedecendo a seguinte se-
quncia de tempo e temperatura:
Uma hora a 100C
Uma hora a 200C
Uma hora a 300C
3. Deixar esfriar, dissolver o digerido com cerca de 10mL de
gua destilada e acoplar o tubo digestor ao destilador de Kjel-
dahl.
4. Proceder destilao com o auxlio de 25mL de NaOH (50%)
e recolher o destilado em um erlenmeyer contendo 10mL de
cido brico com indicador misto. Aps obter 20mL de desti-
lado, toda a amnia deve ter sido destilada.
5. Titular a amnia destilada usando uma soluo padro de
H2SO4 0,05 N. Para a mistura de indicador utilizada, o ponto
final da titulao corresponde mudana de cor: de verde
para vermelho claro.
6. Proceder aos clculos expressando o teor de N-total em ter-
mos percentuais. Em seguida, estimar o teor de protena
bruta multiplicando o teor de N-total pelo fator de converso
adequado ao material analisado.

76 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


OBS.: Para calcular o teor de N-total na amostra, considerar que
1,0mL do cido sulfrico 0,05 N gasto na titulao corresponde a
0,7mg de nitrognio na amostra (Bezerra Neto e Barreto, 2004).

IV. P reparo dos R eagentes

a. Mistura digestora
175ml de gua destilada;
3,6g de selenito de sdio (Na2SeO3) anidro ou 5,47g de selenito
de sdio penta hidratado (Na2SeO3.5H2O);
4,0g de sulfato de cobre penta hidratado (CuSO4.5H2O);
21,3g de sulfato de sdio (Na2SO4) anidro ou 48,5g de sulfato de
sdio deca hidratado (Na2SO4.10H2O).
200mL de cido sulfrico (H2SO4) concentrado (36 N).

b. Soluo de cido brico mais indicador misto.


Dissolver 20g de cido brico em 1 litro de gua destilada e
acrescentar 15ml de uma soluo alcolica a 0,1% de verde
de bromocresol e 6ml de soluo alcolica de vermelho de
metila a 0,1%.
c. Soluo de cido sulfrico (0,05 N). Colocar cerca de 500mL
de gua destilada em um balo volumtrico de 1000mL e em
seguida acrescentar 1,4mL de cido sulfrico concentrado
(36 N) e padronizar (Anexo 5)

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 77


V. B ibliogr afia

BEZERRA NETO, E.; BARRETO, L.P. Mtodos de anlises qumicas

em plantas. Recife: Imprensa Universitria da UFRPE, 2004. 149p.

FRANCO, G. Tabela de composio qumica dos alimentos. 9 ed.

So Paulo: Atheneu, 2000. 307p.

INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Mtodos fsico-qumicos para anlise

de alimentos. So Paulo: Instituto Adolfo Lutz, 2008. 1020p.

SILVA, D.J.; QUEIRZ, A.C. de. Anlise de alimentos: mtodos

qumicos e biolgicos. Vicosa: UFV, 2002. 235p.

78 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


D eterminao
de P rotena S olvel 14
M todo E spectrofotomtrico de B r adford

I. I ntroduo

As protenas so compostos nitrogenados, consideradas


macromolculas formadas a partir da unio de vrios amino-
cidos entre si. Vrias so as classificaes que se podem empre-
gar para as protenas. Uma destas classificaes, por exemplo,
subdivide as protenas em duas categorias, protenas solveis
e protenas estruturais. As protenas estruturais geralmente
encontram-se ligadas a outros compostos e so constituintes
das membranas celulares, enquanto que as protenas solveis
participam diretamente do metabolismo vegetal, notadamente
como enzimas.
O reagente Coomassie Brilliant Blue G-250 reage com as pro-
tenas produzindo um complexo de colorao azul escuro. A
ligao do corante s protenas causa um aumento no pico m-
ximo de absoro do corante de 465 para 595nm, cuja absor-
bncia apresenta uma correlao bastante linear com valores de
concentrao de solues padres de protena. O processo de
ligao do reagente com as protenas bastante rpido, comple-

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 79


tando-se em aproximadamente dois minutos, e mantendo a cor
estvel por uma hora. Os resultados de anlises, empregando-
se este mtodo, apresentam boa reprodutibilidade, apresentan-
do pouca ou nenhuma interferncia de ctions como Na+ ou K+,
ou carboidratos tal como a sacarose. Uma pequena intensidade
de cor desenvolvida na presena de agentes tamponantes for-
temente alcalinos. No entanto, a anlise pode ser efetuada acu-
radamente empregando-se controles tamponados apropriados.
Os poucos componentes que apresentam excessiva interfern-
cia na cor, so grandes quantidades de detergentes tais como
sulfato de dodecyl sdio, Triton X-100, e detergentes comerciais.
A interferncia por pequenas quantidades de detergentes tam-
bm pode ser eliminada pelo uso de controles apropriados.

II. M archa A naltica

Preparo do extrato vegetal (tecido vegetal fresco)


1. Com o auxlio de uma placa de Petri e uma lmina de ao, re-
mover a nervura principal das folhas a analisar, e em seguida
recortar as folhas em pequenos pedaos (cerca de 5mm);
2. Pesar 0,200g das folhas frescas desprovidas da nervura prin-
cipal;
3. Triturar o material em presena de 10mL de etanol a 80%;
4. Enxaguar o rotor do triturador de tecidos empregando-se
mais 10mL do mesmo solvente;

80 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


5. Centrifugar uma alquota do extrato bruto por 5 minutos a
2.000g;
6. Transferir para um tubo de ensaio uma alquota de 3mL do
sobrenadante, e acrescentar a este, 6mL de clorofrmio;
7. Agitar suavemente por cerca de dois minutos e deixar em
repouso por cerca de 5 a 10 minutos, para que ocorra a sepa-
rao das duas fases (orgnica e aquosa);
8. Recolher a frao aquosa (incolor) para um tubo de Eppen-
dorf e manter em congelador at o momento do desenvolvi-
mento da cor.

Desenvolvimento da cor
9. Pipetar para tubos de ensaio, separadamente, 200 L das so-
lues padres de BSA e dos extratos das amostras. Fazer o
branco usando gua destilada em vez BSA;
10. Acrescentar 4mL do reagente coomassie brilliant blue, agi-
tar suavemente e deixar em repouso por 5 minutos;
11. Fazer as leituras em espectrofotmetro, no comprimento de
onda de 595 nm;
12. Calcular o contedo de protena solvel, expressando os re-
sultados em termos de mg de protena solvel por grama de
tecido foliar fresco.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 81


III. P reparo dos R eagentes

Coomassie brilliant blue. Pesar 0,0100g de coomassie


brilliant blue (G-250), dissolver em 5mL de etanol a 95%, adicio-
nar 10mL de cido fosfrico concentrado e 85mL de gua desti-
lada. Misturar bem, filtrar e manter em frasco escuro.

Soluo padro de protena solvel.


Soluo estoque de BSA a 1000 mg.L-1. Pesar exatamente
0,1000g de albumina de soro bovino BSA (PA), dissolver em
gua destilada e completar o volume para 100 mL;
Padres de trabalho. Pipetar para tubos de ensaio, separa-
damente, exatamente 1, 2, 4 e 10mL da soluo estoque de BSA
(1000 mg.L-1) e completar o volume precisamente para 20mL
com gua destilada, o que proporcionar solues nas concen-
traes de 50, 100, 200 e 500 mg.L-1.

Observaes:
1. Esta anlise tambm pode ser realizada em amostra pr-seca
de tecido vegetal. Neste caso, pode-se preparar um extrato
aquoso, dispensando, portanto a Cromatografia de Partio
com vistas separao dos pigmentos fotossintticos. Da
mesma forma, tambm pode ser preparado o extrato etanli-
co, conforme preparado para a determinao de carboidratos
solveis totais e sacarose;

82 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


2. No preparo do extrato vegetal empregando-se tecido vegetal
fresco, a diluio da amostra pode ser feita com base no peso
final do extrato em vez do volume. Neste caso minimiza-se o
erro decorrente da volatilizao do etanol durante o processo
de extrao. Para a converso do peso do etanol a 80% em vo-
lume, recomenda-se utilizar a densidade de 0,8687 g.mL-1.

IV. B ibliogr afia

BEZERRA NETO, E.; BARRETO, L.P. Mtodos de anlises qumicas

em plantas. Recife: Imprensa Universitria da UFRPE, 2004. 149p.

BRADFORD, M.M. A rapid and sensitive method for the determination

of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-

dye binding. Analitical Biochemistry, v.72, p.248-254, 1976.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 83


D eterminao A minocidos
15
de

L ivres Totais
M todo E spectrofotomtrico da N inidrina

I. I ntroduo

Os -aminocidos so compostos orgnicos de baixo peso


molecular, comumente encontrados nas protenas. Todos os
aminocidos, com exceo da prolina, tm como denominador
comum um grupamento carboxlico livre e um aminogrupo
livre no-substitudo, no tomo de carbono alfa. Eles diferem
uns dos outros na estrutura de suas cadeias laterais distintas,
denominadas grupamentos R.
Alm dos aminocidos-padro comuns (que so vinte) e
de vrios aminocidos raros das protenas, mais de 150 outros
aminocidos so conhecidos como ocorrendo biologicamente
em forma livre ou combinada, porm nunca em protenas. Al-
guns destes so precursores importantes ou intermedirios no
metabolismo. As plantas superiores possuem uma variedade
extraordinria de aminocidos no-proticos, sendo a maioria
deles de funo metablica desconhecida.
Nesta determinao, ocorre uma reao amplamente utili-
zada do -aminogrupo, a reao da ninidrina, a qual permite

84 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


determinar quantitativamente os aminocidos em quantidades
muito reduzidas. Pelo aquecimento, um -aminocido reage
com duas molculas de ninidrina para produzir um composto
intensamente colorido. Uma cor prpura obtida na reao da
ninidrina por todos os aminocidos e peptdeos que apresen-
tam um -aminogrupo livre, enquanto que a prolina e a hidro-
xiprolina, em que o -aminogrupo est substitudo, produzem
derivados com uma cor amarela caracterstica.
Durante a reao, a ninidrina, que um agente fortemente
oxidante, ocasiona a oxidao descarboxilativa dos aminoci-
dos. O amnio e a hidrindantina assim formados, reagem com
uma segunda molcula de ninidrina para produzir um com-
posto corado de violceo, no qual somente o tomo de nitrog-
nio proveniente do aminocido (Lehninger, 2002).

II. M archa A naltica

Preparo do extrato
1. Pesar 0,5g de tecido vegetal fresco e triturar em almofariz ou
homogeneizador de tecidos, usando cerca de 10mL de etanol
a 80% como extrator;
2. Filtrar o macerado em tecido de nilon de malha fina, reco-
lhendo o filtrado em um funil de separao. Nesta operao,
usar cerca de mais 10mL de etanol a 80% para lavar o resduo
do filtrado;

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 85


3. Adicionar 20mL de clorofrmio ou benzeno ao funil de sepa-
rao, agitar suavemente a mistura, e deixar em repouso por
um a dois minutos;
4. Desprezar a frao mais densa, recolhendo a frao menos
densa em um tudo de ensaio rosquevel e guardar em ge-
ladeira a 4C. Em se usando o benzeno, deve-se desprezar a
frao menos densa. No momento da anlise proceder di-
luio que for conveniente, dependendo da concentrao de
aminocidos presente na amostra. Usualmente, utiliza-se um
fator de diluio de 25 vezes.

Desenvolvimento da cor.
1. Pipetar para um tubo de ensaio 0,5mL do tampo citrato
200mM, 1,2mL do reagente revelador (ninidrina + KCN) e
1,0mL do padro de leucina ou amostra problema (deve-se
respeitar a ordem de adio de cada reagente);
2. Tampar os tubos de ensaio, agitar suavemente e colocar para
aquecer em banho-maria a 100C por 15 minutos;
3. Esfriar os tubos em banho de gelo por 5 minutos e, em segui-
da, adicionar 3,0mL de etanol a 60% para fixar a cor desenvol-
vida (violeta), ficando estvel por at 3 horas;
4. Agitar e ler a absorbncia a 570nm em espectrofotmetro de
emisso. A partir da curva padro, obtm-se uma equao de
regresso para o clculo das concentraes de aminocidos
nas amostras.

86 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


Observaes
1. Esta anlise tambm pode ser realizada em amostra pr-seca
de tecido vegetal. Neste caso, pode-se preparar um extrato
aquoso, dispensando, portanto a cromatografia de partio
com vistas separao dos pigmentos fotossintticos. Da
mesma forma, tambm pode ser preparado o extrato etanli-
co, conforme preparado para a determinao de carboidratos
solveis totais e sacarose;
2. No preparo do extrato vegetal empregando-se tecido vegetal
fresco, a diluio da amostra pode ser feita com base no peso
final do extrato em vez do volume. Neste caso minimiza-se o
erro decorrente da volatilizao do etanol durante o processo
de extrao. Para a converso do peso do etanol a 80% em vo-
lume, recomenda-se utilizar a densidade de 0,8687g.mL-1.

III. P reparo D os R eagentes

a. Tampo citrato 200mM (pH 5,0). Pesar 21,014g de cido ctri-


co monohidratado (P.M. = 210,14), adicionar 200mL de NaOH
1,0 M e uma gota de soluo saturada de Timol (P.M. = 150,22).
Ajustar o pH para 5,0 utilizando o NaOH 1,0 M e completar o
volume para 500mL com gua destilada.
b. Soluo estoque de KCN (10 mM). Vlida por 3 meses. Pesar
0,1628g de KCN (P.M. = 65,12), dissolver em gua destilada e
completar o volume para 250 mL.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 87


c. Soluo de KCN 0,2 mM em Metilcelosolve. Vlida por
1 ms. Pipetar 5,0mL da soluo estoque de KCN 10mM
para um balo volumtrico de 250mL e completar o volu-
me com metilcelosolve. Este reagente tambm conhecido
como etilenoglicol monometil ter, metoxietanol e metil-
glicol (C3H8O2, P.M. = 76,10).
d. Ninidrina a 5%. Vlida por 6 meses. Pesar 12,5g de ninidri-
na (P.M. = 178,15), dissolver em metilcelosolve e completar o
volume para 250mL, com este mesmo solvente.
e. Reagente revelador. Preparado no momento da anlise. Mis-
turar a soluo de KCN 0,2mM com a ninidrina a 5% na pro-
poro de 1:5 (v/v).
f. Preparo da curva padro. Soluo estoque de leucina
(50mg.L-1). Pesar 50mg de leucina, dissolver em cerca de
100mL de gua deionizada e em seguida completar o volume
para 1,0 L com gua deionizada.
g. Padres de trabalho. Pipetar para bales volumtricos de
50mL alquotas de 5, 10, 15, 20 e 25mL da soluo estoque
de leucina (50mg.L-1) e completar o volume com gua deio-
nizada. Ao final desta etapa, resultaro os padres 5, 10,
15, 20 e 25mg de leucina por mL de soluo. Utilizar gua
deionizada como padro zero. Esta curva padro apresenta
boa linearidade.

88 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


IV. B ibliogr afia

BEZERRA NETO, E.; BARRETO, L.P. Mtodos de anlises qumicas

em plantas. Recife: Imprensa Universitria da UFRPE, 2004. 149p.

NELSON, D.L.; COX, M.M. Princpios de bioqumica (Lehninger). 4.

ed. So Paulo: Sarvier, 2002. 1232p. il.

YEMM, E.W.; COCKING, E.C. The determination of amino-acids

with ninhydrin. Aalyst, v.80, p.209-213, 1955.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 89


D eterminao P rolina L ivre
16
de

em Tecido F oliar F resco


M todo E spectrofotomtrico da N inidrina

I. I ntroduo

A prolina estudada conjuntamente com os aminocidos


proticos devido a sua participao como componente das pro-
tenas. No entanto, como pode se constatar em sua frmula es-
trutural, trata-se na verdade de um iminocido heterocclico de
peso molecular igual a 115.

H H
H C C H

H C C COOH
H N
H
Frmula estrutural da prolina

As pesquisas tm constatado que a prolina livre acumula-


da em plantas cultivadas em condies de estresse hdrico, sen-
do considerada como um soluto compatvel que desempenha
papel osmorregulador em determinadas espcies vegetais. A
quantificao da prolina livre em tecido vegetal fresco pode ser

90 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


realizada por mtodo colorimtrico, de boa preciso e pratica-
mente livre de interferentes dentre os componentes vegetais.

II. M archa A naltica

1. Pesar 250mg de tecido foliar fresco;


2. Triturar utilizando 5mL de soluo de cido sulfossaliclico a
3% como solvente;
3. Centrifugar por 10 minutos a 2000g;
4. Transferir para um tubo de ensaio rosquevel:
1mL do padro ou do extrato centrifugado;
1mL de ninhidrina cida;
1mL de cido actico glacial;
5. Fechar o tubo de ensaio e aquecer por uma hora a 100C;
6. Aps uma hora de aquecimento, resfriar o tubo de ensaio em
banho de gelo;
7. Adicionar 2mL de tolueno a cada tubo de ensaio e agitar vigo-
rosamente por aproximadamente 20 segundos;
8. Deixar em repouso por cerca de 5 a 10 minutos para que ocor-
ra a separao das fases;
9. Recolher a fase orgnica e ler a absorbncia no comprimento
de onda de 520nm, usando-se o tolueno como branco;
10. Calcular o teor de prolina livre do tecido foliar fresco, com-
parando com os valores da curva padro e expressar os resul-
tados em mol.g-1 de tecido foliar fresco.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 91


II. P reparo dos R eagentes

1. cido sulfossaliclico: soluo aquosa a 3% (p/v).


2. Soluo Estoque de Prolina (50mg.L-1): pesar 50mg de proli-
na, dissolver em gua destilada e completar o volume para 1
litro.
3.Padres de Trabalho de Prolina. Partindo da soluo estoque
e gua destilada, preparar solues padres contendo 0, 5, 10,
15, 20 e 25mg.L-1 de prolina.
4. Ninhidrina cida: Pesar 1,25g de ninhidrina e transferir para
um bquer. Adicionar 30mL de cido actico glacial e 20mL
de cido fosfrico 6 M. Colocar para aquecer brandamente
(aprox. 70C) sob agitao at dissolver. Esfriar rapidamente
em banho de gelo. O reagente permanece estvel por 24 ho-
ras, se guardado a 4C.

III. B ibliogr afia

BATES, L.S.; WALDREN, R.P.; TEARE, I.D. Rapid determination of

free proline for water-stress studies. Plant and Soil, v.39, p205-207,

1973.

BEZERRA NETO, E.; BARRETO, L.P. Mtodos de anlises qumicas

em plantas. Recife: Imprensa Universitria da UFRPE, 2004. 149p.

92 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


D eterminao
de G licinabetaina 17
M todo E spectrofotomtrico

I. I ntroduo

A glicinabetana um derivado do aminocido glicina com


o N completamente metilado. Assim como a colina, um com-
posto de amnio quaternrio (QAC), encontrado em vrias
plantas submetidas s condies de estresse, particularmente
as plantas da famlia das chenopodiceas. A glicinabetana ou
simplesmente betana, como tambm conhecida, um inter-
medirio na biossntese da metionina (aminocido sulfurado).
As plantas quando submetidas condies de estresse salino
ou hdrico necessitam diminuir o potencial osmtico intrace-
lular, para tolerar tal condio. Para baixar o potencial osmti-
co, as plantas podem absorver ons inorgnicos e ou sintetizar
compostos orgnicos, os putativos solutos compatveis, que
funcionam como osmorreguladores ou osmoprotetores. Vrios
compostos tm sido citados como osmorreguladores ou solutos
compatveis, entre eles, so citados: prolina, glicinabetaina, ma-
nitol, carboidratos, aminocidos, etc. A literatura tem mostra-
do que plantas de centeio contm 3,2 e 15,8 mg.kg-1 de betana,

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 93


respectivamente em baixa e elevada salinidade, enquanto que
plantas de atriplex apresentam 17,7 e 24,6 mg.kg-1 de betana,
respectivamente em baixa e elevada salinidade.

CH3 H O
CH3 N+ C C
CH H O-
3

A determinao da glicinabetana pode ser feita em um ex-


trato aquoso, espectrofotometricamente, com periodeto de po-
tssio em presena de dicloroetano.

II. M archa A naltica

Preparo do extrato. Pesar 0,5g da amostra (m.s.), transferir


para frascos de vidro, acrescentar 20mL de gua deionizada,
fechar os frascos e colocar para agitar por 24 horas.

Desenvolvimento da cor.
1. Diluir o extrato, pipetando 1mL do mesmo e acrescentando
1mL de H2SO4 (2N), mantendo em banho de gelo;
2. Homogeneizar e pipetar uma alquota de 500L para tubos
de centrfuga com parede grossa e manter em banho de gelo
por 1 hora;

94 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


3. Adicionar 200L de KI-I2 previamente resfriado e agitar sua-
vemente em agitador de tubos de ensaio, tipo vortex;
4. Manter os tubos de centrfuga em refrigerador (0 a 4C) por
16 horas, para formao do complexo cristalino de QAC-pe-
riodeto, em seguida centrifugar por 15 minutos (10.000 rpm
a 0C);
5. Manter em banho de gelo e cuidadosamente aspirar o sobre-
nadante e desprezar;
6. Dissolver os cristais do complexo QAC-periodeto em 9mL de
1,2-dicloroetano;
7. Agitar vigorosamente em agitador tipo vortex at completa
dissoluo;
8. Aguardar de 2 a 2,5 horas e ler a absorbncia a 365nm;
9. Comparar com padres de glicinagetana.

III. R eagentes

Soluo de periodeto de potssio (KI-I2). Pesar 20g de iodeto


de potssio, transferir para um bquer contendo cerca de 50mL
de gua destilada, acrescentar 17,5g iodo, dissolver e completar
o volume para 100mL com gua destilada;
cido sulfrico 2N. Pipetar 13,9mL de cido sulfrico con-
centrado (36N) para um balo volumtrico de 250mL, contendo
cerca de 200mL de gua destilada. Homogeneizar e completar
o volume.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 95


cido sulfrico 1N. Pipetar 6,94mL de cido sulfrico con-
centrado (36N) para um balo volumtrico de 250mL, contendo
cerca de 200mL de gua destilada. Homogeneizar e completar o
volume, ou diluir parte do cido sulfrico 2 N em partes iguais,
isto , 1+1 (em volume).
Soluo estoque de glicinabetana (padro 2.500mg.L-1).
Pesar exatamente 0,250g de glicinabetana (anidra), dissolver e
completar o volume para 100mL com cido sulfrico 1N. Tam-
bm encontrado nos catlogos como betana (P.M. 117,15).
Padres de trabalho de glicinabetana. Pipetar para bales
volumtricos de 100mL, 2, 4, 6 e 8mL da soluo estoque de
glicinabetana (2.500mg.L-1), completar o volume com cido sul-
frico 1N. Tal diluio proporcionar padres de trabalho nas
concentraes de 50, 100, 150 e 200mg.L-1. O padro zero (branco)
o cido sulfrico 1N.

96 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


IV. B ibliogr afia

FLOWERS, T.J.; TROKE, P.F.; YEO, A.R. The mechanism of salt

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Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 97


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98 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


D eterminao N itr ato
18
de

em Tecido Vegetal
M todo E spectrofotomtrico
do cido S aliclico

I. I ntroduo

Nitrato a principal forma de absoro de nitrognio pela


maioria das plantas. Aps sua absoro, o mesmo reduzido
a amnio para em seguida ser incorporado aos compostos or-
gnicos, formando aminocidos, protenas, cidos nuclicos e
demais compostos nitrogenados. O acmulo de nitrato em alta
concentrao no tecido vegetal pode causar distrbio nutricio-
nal, quando ingerido em concentraes acima de 2.500mg.kg-1,
o nitrato pode ser reduzido a nitrito, o qual na corrente sang-
nea pode causar a metahemoglobinemia ou resultar na forma-
o de nitrosaminas, as quais so cancergenas e mutagnicas.
Para a determinao de nitrato geralmente so utilizados
mtodos potenciomtricos ou espectrofotomtricos. O mtodo
de cido fenoldissulfnico verstil, porm tedioso. J o mto-
do enzimtico requer uma enzima de difcil preparo e conso-
me muito tempo. A baixa sensibilidade e a interferncia de ons
como Cl-, NH4+ e NO2- na anlise so tambm responsveis pelo

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 99


desuso desses mtodos. No entanto, o mtodo do cido salic-
lico rpido, livre de interferncia de outros ons presentes em
tecidos vegetais e apropriado para anlise de uma ampla faixa
de concentraes de nitrato.
Neste mtodo, o cido saliclico (cido 2-hidroxibenzico) ao
reagir com o N-NO3- tem o carbono 5 (que para em relao ao
grupamento hidroxlico) nitrificado. Os nitrocompostos forma-
dos so essencialmente o cido 5-nitrosaliclico e uma pequena
quantidade do ismero 3-nitrossaliclico.
A reao ocorre em pH alcalino (acima de 12) formando-se o
nitro-composto de cor amarela. Na reao, a relao molar en-
tre o cido saliclico e o nitrato de 1:1, sugerindo que a nitrata-
o ocorre primariamente em uma nica posio, por molcula
de cido saliclico (Cataldo et al., 1975).

II. M archa A naltica

a. Preparo do extrato utilizando matria fresca. Utilizar o mes-


mo extrato preparado na anlise de aminocidos livres totais.
Apenas a diluio a ser feita dever ser diferente. Usualmente
o fator de diluio utilizado de no mximo 5 vezes.
b. Preparo de extrato utilizando matria seca. Pesar 0,25g de
material vegetal seco e colocar em um tubo de ensaio ros-
quevel em presena de 10mL de gua deionizada, levando,
em seguida, a suspenso para aquecer em banho-maria a 45C

100 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


por uma hora; Aps o aquecimento, agitar e filtrar a mistura
em tecido de nilon de malha fina, recolhendo o filtrado em
outro tubo de ensaio rosquevel, ou centrifugar a mistura a
2000g por 15 minutos. Guardar o filtrado (ou sobrenadante)
em geladeira at o momento da anlise.
c. Anlise do nitrato.
1. Pipetar para um tubo de ensaio 0,2mL da soluo pa-
dro ou extrato da amostra e 0,5mL do reagente revela-
dor (AS-H2SO4), agitando vigorosamente em seguida;
2. Deixar a mistura em repouso por 20 minutos tempera-
tura ambiente;
3. Adicionar lentamente 10mL de NaOH 4 M, e logo depois
agitar para deixar a mistura com uma colorao homo-
gnea (unifsica). Neste momento ocorre a formao de
um composto de cor amarelada estvel por menos de 48
horas;
4. Deixar o tubo esfriar e proceder leitura de absorbncia
a 410nm em espectrofotmetro de emisso. A partir da
curva padro, obter a equao de regresso para o clcu-
lo da concentrao de nitrato nas amostras.

III. P reparo D os R eagentes

a. Soluo de cido saliclico a 5% em H2SO4 (AS-H2SO4). Pesar


1,25g de cido saliclico (P. M.= 138,12) e dissolver em H2SO4

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 101


concentrado (P.A). Completar o volume para 25mL com o
mesmo solvente. Guardar em frasco mbar (validade de uma
semana).
b. Soluo estoque de nitrato (1.000mg.L-1). Pesar 1,3710g de
NaNO3 (P.M.=85,00), dissolver em gua deionizada e comple-
tar o volume para 1.000mL. Conservar em geladeira.
c. Padro de trabalho. Pipetar para cinco bales volumtricos
de 50mL, 1,25; 2,5; 5,0; 10,0 e 15mL de soluo estoque de ni-
trato (1.000 mg.L-1) e completar o volume com gua deioniza-
da. Ao final, resultaro solues padres nas concentraes
de 25, 50, 100, 200 e 300mg.L-1 de NO3-. O branco (padro zero)
corresponde gua deionizada.
d. Soluo de NaOH 4 M. Pesar 40g de NaOH, dissolver em
200mL de gua destilada, deixar esfriar e completar o volume
para 250mL.

IV. B ibliogr afia

CATALDO, D.A.; HAROON, M; SCHRADER, L.E.; YOUNHG, V.L.

Rapid colorimetric determination of nitrate in plant tissue by nitration

of salicylic acid. Commun. Soil Science and Plant Analysis, v.6, n.1,

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102 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


D eterminao Atividade
19
da de

N itr ato R edutase (E.C.1.6.6.1)


em Tecido Vegetal
I. I ntroduo

A nitrato redutase uma enzima complexa, contendo


vrios grupos prostticos, incluindo FAD, citocromo e mo-
libdnio. Em plantas superiores, seu peso molecular da
ordem de 200.000 Daltons, enquanto que em organismos in-
feriores, cerca de 500.000 Daltons. A mesma desempenha
um papel importante na assimilao (utilizao) do nitro-
gnio pelas plantas.
Depois que o nitrognio absorvido pelas razes na
forma de nitrato (NO3 -), o mesmo translocado atravs do
xilema para as folhas, onde reduzido a nitrito (NO2-) e
posteriormente a amnio. Este processo de reduo tam-
bm pode ocorrer, geralmente em menor escala, nas razes,
dependendo da espcie vegetal, at mesmo de forma apa-
rentemente exclusiva.
A reduo do nitrato a nitrito catalisada pela nitrato re-
dutase e no requer a participao direta de luz, porque o
agente redutor primrio o NADH, que provm das reaes

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 103


oxidativas do citoplasma, onde est localizada a enzima. Em
tecidos no clorofilados, como as razes, o doador de eltrons
poder ser o NADH ou o NADPH. As nitrato redutases encon-
tradas em vegetais superiores so constitudas por duas su-
bunidades idnticas contendo trs grupos prostticos cada:
FAD, heme e um complexo formado entre o molibdnio e a
pterina. Por outro lado, a reduo do nitrito a amnio (NH4+)
ocorre nos cloroplastos, exigindo a transferncia direta de
eltrons via ferredoxina, estando portanto, associada s
reaes fotossintticas (Taiz & Zeiger, 2009). As equaes
abaixo representam o processo de reduo do nitrato a nitri-
to, e do nitrito a amnio:

NADH NAD+

NO3 - NO2-
nitrato redutase

Fd-red Fd-ox

NO2- NH4+
nitrito redutase

Fd-red = Ferredoxina reduzida; Fd-ox = Ferredoxina oxidada

As mais altas atividades da nitrato redutase so obtidas


em folhas jovens, provenientes de plantas cultivadas com

104 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


adequada proviso de nitrato e adequada iluminao. Ge-
ralmente a taxa mxima da atividade da nitrato redutase
atingida 3 a 4 horas aps o incio do dia, em plantas cultiva-
das em campo.
As determinaes da atividade da nitrato redutase po-
dem ser sumarizadas em dois mtodos: mtodo in vitro e
mtodo in vivo. Para a anlise pelo mtodo in vitro, a enzima
extrada do tecido vegetal, atravs da macerao do tecido
em soluo tampo adequada, em seguida o extrato pu-
rificado por centrifugao em gradiente ou cromatografia.
Aps a purificao, alquotas do extrato enzimtico so adi-
cionadas mistura de reao e em seguida a atividade da
mesma medida por espectrofotometria.
O mtodo in vivo assim denominado porque a atividade
da enzima medida sem provocar o rompimento das c-
lulas vegetais. Por este mtodo, pequenos discos de folhas
recm colhidas so incubadas no escuro, em soluo tam-
po contendo nitrato e outros componentes que facilitam a
difuso do substrato atravs da membrana celular. Aps de-
terminados intervalos de tempo, recolhem-se alquotas do
extrato incubado e determina-se por colorimetria ou espec-
trofotometria, a quantidade de nitrito formada. A atividade
da enzima ento calculada em funo da quantidade do
produto da reao formado, durante um determinado inter-
valo de tempo, por grama de tecido analisado.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 105


II. Marcha A naltica para Determinao In
Vivo da Atividade da Nitrato R edutase em
Tecido Foliar.

1. Preparar quatro cubetas de leitura espectrofotomtrica de


1mL e pipetar para cada uma, 400L de gua deionizada e
500L da mistura de reagentes reveladores;
2. Pipetar 5mL do meio de incubao para um tubo de ensaio;
3. Pesar cerca de 250mg de sees de folhas (desprezando as
nervuras), com cerca de 5mm de dimetro e transferir para o
tubo de ensaio contendo o meio de incubao (item 2);
4. Colocar o tubo de ensaio contendo a amostra e meio de incu-
bao (item 3), em local escuro, temperatura de 30C;
5. Adaptar uma mangueira de borracha, conectada uma
bomba de vcuo, boca do tubo de ensaio que contm o
meio de incubao (item 4), e provocar uma leve suco por
60 segundos;
6. A cada 15 minutos, aps o incio da incubao, retirar uma
alquota de 100L do extrato de incubao, e transferir para
uma das cubetas de leitura espectrofotomtrica, que contm
as solues de leitura (item 1);
7. Aps a coleta da alquota correspondente a 60 minutos da
reao enzimtica, aguardar 15 minutos para permitir o de-
senvolvimento da cor (violeta) e fazer a leitura em espectro-
fotmetro a 540nm;

106 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


8. Enquanto aguarda a reao enzimtica se processar (item 7),
preparar a curva padro. Para isto, pipetar para 6 cubetas,
separadamente, 400L de gua deionizada, 500L da mistura
de reagentes reveladores e 100L das solues padres con-
tendo 0, 10, 20, 30, 40 e 50M de nitrito;
9. Aguardar 15 minutos e fazer a leitura da mesma forma como
mencionado no item 7;
10. De posse dos valores das leituras espectrofotomtricas da
amostra e das solues padres, proceder aos clculos da ati-
vidade enzimtica e representar graficamente a atividade da
enzima em funo do tempo de reao. Adote como unidade
da atividade enzimtica, mol de nitrito produzido por gra-
ma de tecido.

III. P reparo dos R eagentes

Meio de incubao. Pipetar 20L de espalhante adesivo para


um bquer, adicionar 2mL de n-propanol e agitar suavemente
at dissolver o espalhante adesivo. Adicionar cerca de 100mL
de gua deionizada, 2,022g de nitrato de potssio e 2,7218g de
fosfato monobsico de potssio. Agitar at dissolver os sais,
transferir para um balo volumtrico de 200mL e completar o
volume com gua deionizada.
Soluo dos reagentes reveladores. A soluo dos reagentes
reveladores preparada juntando-se partes iguais em volume,

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 107


de soluo 0,02% de N-(1-naftil) etilenodiaminocloridrato com
a soluo 1,0% de sulfanilamida (em HCl 1,5 M).
Soluo Padro de Nitrito do sdio 1,0 mM. Pesar 0,0069g
de nitrito de sdio, dissolver em gua deionizada e completar o
volume para 100mL. A partir desta soluo estoque, preparar
uma curva padro na faixa de 0 a 50M de nitrito. Pipetar para
bales volumtricos de 50mL, separadamente, 500, 1000, 1500,
2000 e 2500L da soluo estoque de nitrito, completando o
volume com gua deionizada. Como padro zero de nitrito,
utiliza-se apenas gua deionizada. Aps o preparo das solu-
es, transferir as mesmas para frascos apropriados e conser-
var em geladeira.

108 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


IV. B ibliogr afia

BEZERRA NETO, E.; BARRETO, L.P. Mtodos de anlises qumicas

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Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 109


D eterminao Atividade
20
da

da P eroxidase (EC 1.11.1.7)


I. I ntroduo

As peroxidases (POD) so enzimas comuns em plantas e


o aumento de sua atividade, como resposta ao ataque de pa-
tgenos, indica seu envolvimento em mecanismo de defesa,
desempenhando importante papel no processo fisiolgico,
incluindo catabolismo das auxinas, modificaes das pro-
priedades da parede celular e lignificao (Wyatt et al., 1991).
No mecanismo de defesa das plantas, as peroxidases atuam
no processo de lignificao da parede celular, participando
na converso do lcool cinmico em formas de radicais livres
com o consumo do perxido de hidrognio, caracterizando o
ltimo passo da formao da lignina, embora, alguns autores
consideram que o mecanismo ainda no est totalmente es-
clarecido (Heldt, 1997).
Certas enzimas associadas ao estresse causado por excesso
de oxidantes tambm so importantes nos mecanismos de de-
fesa. As superxidos dismutases, por exemplo, ajudam a anular
radicais livres. Como o perxido de hidrognio (H2O2) alta-
mente txico para as clulas, os organismos aerbicos criaram
meios de proteo contra seus efeitos, usando enzimas (cata-

110 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


lases e peroxidases) para remov-lo. As catalases convertem o
composto em O2 e H2O e as peroxidases em H2O.
A atividade da POD estimada com base na diferena de ab-
sorbncia produzida com a oxidao do guaiacol e concomitan-
te reduo do perxido de hidrognio (Dann e Deverall, 2000).
Representao da reao entre o guaiacol e o perxido de
hidrognio, catalisada pela peroxidase

4 guaiacol + 4 H2O2 peroxidase tetraguaiacol + H2O

II. P rocedimento A naltico

Preparo do extrato
a. Pesar 1,0g da amostra, colocar em almofariz e acrescentar
50mg de PVP e cerca de 10mL de nitrognio lquido;
b. Macerar a amostra com o auxlio de um pistilo e imediata-
mente acrescentar 3mL da soluo tampo acetato de sdio
(50mM, pH 5,0), contendo 1mM de EDTA;
c. Homogeneizar a mistura e em seguida centrifugar por 10 mi-
nutos a 10.000g* e 4C;
d. Transferir o sobrenadante para tubos de Eppendorf e arma-
zenar a -80C at o momento da avaliao da atividade enzi-
mtica.
* Nas separaes de compostos por centrifugao im-
portante levar em considerao que o raio do rotor da

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 111


centrfuga influencia diretamente na capacidade de pre-
cipitao das partculas em suspenso. Assim, de acordo
com a equao a seguir, a fora centrfuga relativa (FCR)
ou fora gravitacional (g) proporcional ao quadrado da
velocidade do rotor, expressa em rpm, multiplicado pelo
raio do rotor da centrfuga, expresso em centmetro (Ro-
byt & White, 1990).

g = 1,119 x 10 -5 x (rpm)2 x r

Atividade enzimtica
a. Pipetar para uma cubeta espectrofotomtrica: 50L de guaia-
col (0,2 M), 0,5mL de perxido de hidrognio (0,38M) e 2,0mL
de tampo de sdio (0,2M, pH 5,0);
b. Agitar suavemente a mistura e iniciar a reao enzimtica
com a adio de 50L do extrato enzimtico;
c. Efetuar as leituras espectrofotomtricas a 470nm, intercala-
das de 10 segundos, pelo prazo de um minuto;
d. Estimar a atividade enzimtica com base na diferena de ab-
sorbncia por minuto e por peso da amostra fresca.
OBS.: A prova em branco preparada usando-se gua desti-
lada em vez do extrato enzimtico.

III. P reparo dos R eagentes

a. Guaiacol (0,2 M). Pipetar para um frasco de cor mbar, 230L

112 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


de guaiacol (C7H8O2) e em seguida acrescentar 10mL de gua
destilada.
b. Tampo acetato de sdio (50mM, pH 5,0). Misturar 14,8mL
de soluo 0,2 M de cido actico com 35,2mL de soluo
0,2M de acetato de sdio, ajustar o pH para 5,0, usando cido
actico ou acetato de sdio, em seguida completar o volume
para 200mL.
c. cido actico (0,2 M). Pipetar 2,31mL do cido actico gla-
cial e completar o volume com gua destilada para 200mL.
d. Acetato de sdio (0,2 M). Dissolver 3,28g de acetato de sdio
anidro (ou 5,44g de acetato de sdio tri-hidratado) e comple-
tar o volume para 200mL com gua destilada.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 113


IV. B ibliogr afia

DANN, E.K.; DEVERALL, B.J. Activation of systemic disease

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114 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


Atividade F enil al anina
21
da

A mnia L iase (EC. 4.3.1.5)


I. I ntroduo

A fenilalanina amnia liase a enzima que catalisa a con-


verso da fenilalanina em cido trans-cinmico, participando,
portanto da rota biossinttica dos fenilpropanides. Est envol-
vida na sntese de compostos antimicrobianos, de baixo peso
molecular, como fitoalexinas, alm de flavonides e da lignina.
A lignificao dos tecidos atua como uma barreira mecnica
contra o avano de patgenos. A induo de lignificao est re-
lacionada como resposta de defesa em vrias interaes patge-
no/hospedeiro. A biossntese da lignina envolve uma rota longa
com vrias etapas, iniciando com a converso da fenilalanina
em cido trans-cinmico (Figura 9.4).
A enzima fenilalanina amnia liase (PAL) catalisa a primeira
de uma srie de reaes metablicas que gera inmeros produ-
tos naturais baseados em fenilpropanos, incluindo a lignina, cer-
tos pigmentos e protetores contra luz ultravioleta. A produo
de tal enzima regulada durante o crescimento vegetal, mas
tambm induzida em clulas vizinhas ao local de infeco por
vrios estmulos ambientais, como infeco, ferimentos, conta-
minao por metais pesados, luz e reguladores de crescimento.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 115


A atividade da PAL estimada com base na diferena de
absorbncia resultante da converso da fenilalanina em cido
trans-cinmico (Hyodo et al., 1978).

O OH O OH
C C
H C NH2 C H
H C H H C

+ NH3
PAL

cido
fenialanina trans-cinmico

Figura 9.4 Representao da reao catalisada pela fenilalanina amnia liase.

II. P rocedimento A naltico

Preparo do extrato
a. Pesar 1,0g da amostra, colocar em almofariz e acrescentar
50mg de polivinilpirrolidone e cerca de 10mL de nitrognio
lquido;
b. Macerar a amostra com o auxlio de um pistilo e imediata-
mente acrescentar 3mL da soluo tampo TRIS (0,5 M, pH
8,5), contendo 1mM de EDTA;
c. Homogeneizar a mistura e em seguida centrifugar por 10
minutos a 10.000g e 4C;

116 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


d. Transferir o sobrenadante para tubos de Eppendorf e ar-
mazenar a -80C at o momento da avaliao da atividade
enzimtica.

Atividade enzimtica
a. Pipetar 0,5mL do extrato enzimtico para tubo de ensaio;
b. Acrescentar 2,0mL de tampo TRIS (0,5 M, pH 8,5) e 0,5mL
de soluo de fenilalanina (300M);
c. Incubar por 30 minutos a 40C por uma hora;
d. Aps a incubao, transferir imediatamente os tubos de
ensaios para banho de gelo, com o objetivo de encerrar a
reao;
e. Realizar as leituras espectrofotomtricas a 290nm e expres-
sar os resultados em termos de mmol de cido cinmico
produzido por hora e por grama da amostra fresca;
OBS.: A prova em branco preparada usando-se gua des-
tilada em vez da fenilalanina.

III. P reparo dos R eagentes

a. TRIS (0,5 M, pH 8,0), contendo 1mM de EDTA. Pesar 4,44g


de TRIS (bsico), colocar em um bquer de 200mL, acrescen-
tar 0,075g de EDTA, dissolver com 150mL de gua destilada,
ajustar o pH para 8,0 e em seguida completar o volume para
200mL.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 117


b. Fenilalanina (30M). Pesar 0,2478mg de fenilalanina
(PM=165,19), dissolver em gua destilada e completar o vo-
lume para 50mL.

IV. B ibliogr afia

HYODO, H.; KUROOA, H.; YANG, S.F. Induction of phenilalanine

ammonia lyase and increase in phenolics in lettyce leaves in relation

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118 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


Determinao Atividade
22
da

da Beta Glucanase (EC 3.2.1.39)


I. I ntroduo

As quitinases e -1,3-glucanase so enzimas que ocorrem


nas plantas e hidrolisam a quitina (um polmero de N-acetil-
glucosamina) e a -1,3-glucana respectivamente. Apresentam
funo de defesa, pela ao direta sobre o patgeno e como
elicitores ativando outros mecanismos locais ou sistmicos da
defesa das plantas (Bol et al. 1990). O aumento da atividade da
-1,3-glucanase foi constatado em vrias plantas, principal-
mente em Phaseolus vulgaris e Vigna unguiculata, aps a induo
com produtos qumicos ou organismos no patognicos, redu-
zindo a severidade de doenas causadas por vrios patgenos
(Dann et al., 1996).
A -1,3-glucanase, tambm conhecida como glucan endo
1,3-glucosidase, pertence famlia das PR-2 protenas e apresen-
ta peso molecular de cerca de 33kDa (Lubner-Metzer e Meins,
1999). Sua atividade pode ser avaliada mediante a dosagem da
glucose produzida com a hidrlise da laminarina (Tuzun et al.,
1989). A laminarina um polissacardeo formado por unidades
de -1,3-glucose, encontrado em vrias algas pardas, como por
exemplo a Laminaria digitata.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 119


II. P rocedimento A naltico

Preparo do extrato
a. Pesar 1,0g do fruto, colocar em almofariz e acrescentar
50mg de polivinilpirrolidone (PVP) e cerca de 10mL de ni-
trognio lquido;
b. Macerar a amostra com o auxlio de um pistilo e imedia-
tamente acrescentar 5mL da soluo tampo acetato (0,1 M,
pH 5,0) e 1mL de EDTA (1mM);
c. Homogeneizar a mistura e em seguida centrifugar por 10
minutos a 10.000g e 4C;
d. Transferir o sobrenadante para tubos de Eppendorf e ar-
mazenar a -80C at o momento da avaliao da atividade
enzimtica.

Atividade enzimtica
a. Pipetar 25L do extrato enzimtico para tubo de ensaio;
b. Acrescentar 200L de soluo tampo acetato (0,1 M, pH
5,0) e 200L de laminarina (15mg.mL-1);
c. Incubar por 30 minutos a 37C;
d. Aps a incubao determinar o teor de glicose produzido
com a hidrlise da laminarina.

Determinao de glicose
a. Pipetar para tubos de ensaio rosqueveis, em separado,

120 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


200L dos padres de glucose e do extrato enzimtico aps
ter sido incubado;
b. Acrescentar 1,0mL do reagente de Somogyi, tampar os tubos
e agitar suavemente;
c. Colocar para aquecer a 100C por 15 minutos e em seguida
resfriar em banho de gelo;
d. Acrescentar 1,0mL do reagente de Nelson e 5,0mL de gua
destilada;
e. Agitar suavemente e deixar em repouso por 20 minutos;
f. Realizar a leitura espectrofotomtirca a 760nm.
g. Comparar os resultados com padres de glicose

III. P reparo dos R eagentes

a. Tampo acetato (0,1 M, pH 5,0). Transferir para um bquer


14,8mL de cido actico 0,2 M, acrescentar 35,2mL de acetato
de sdio 0,2 M, conferir o pH e se necessrio ajustar para 5,0
usando uma das duas solues componente da mistura tam-
po. Completar o volume para 100mL com gua destilada.
b. cido actico (0,2M). Pipetar 2,31mL de cido actico glacial
para um balo volumtrico de 200mL e completar o volume
com gua destilada.
c. Acetato de sdio (0,2 M). Dissolver 1,64g de acetato de sdio
(anidro) ou 2,72g de acetato de sdio tri-hidratado em gua
destilada e completar o volume para 100mL.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 121


d. EDTA (1mM). Pesar 0,2922g de EDTA (PM = 292,2), dissolver
em gua destilada e completar o volume para 1000L.
e. Laminarina (15mg.mL-1). Pesar 0,15g de laminarina e dissol-
ver em 10mL de gua destilada.

IV. B ibliogr fia

BOL, J.F.; LINTHORST, H.J.M.; CORNELISSEN, B.J.C. Plant

pathogenesis-related proteins induced by virus infection. Annual

Review of Phytopathology. Palo Alto, v.28, p.113-138, 1990.

DANN, E.K. MEUWLY, P.; MTRAUX, J.P.; DEVERAL, B.J. The effect

of pathogen inoculation of salicylic in leaves of green bean, Phaseolus

vulgaris L. Physiological and Molecular Plant Pathology, London,

v.49, p.307-319, 1996.

LEUBNER-METZGER, G.; MEINS JUNIOR. Function and regulation

of plant -1,3-glucanase (PR-2). In: DATA, S.K.; MUTHUKRISHNAN,

S. (eds..) Florida: CRC Press LLc., p.49-76. 1999.

TUZUN, S.; RAO, N.M.; VOGEL, J.U.; SCHARDL, C.L.; KC, J. Induced

systemic resistance to blue mold: early induction and accumulation

of -1,3-glucanase, chitinase and other pathogenesis-ralated proteins


(b-proteins) in immunized tabacco. Physiology and Biochemistry,

v.79, 979-983, 1989.

122 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


S epar ao P igmentos
23
de

F otossintticos
por C romatogr afia em Papel
I. I ntroduo

As tcnicas cromatogrficas constituem um conjunto de m-


todos utilizados na identificao, purificao e quantificao de
compostos e ons orgnicos e inorgnicos. A separao dos com-
postos (ou ons) analisados cromatograficamente ocorre devido
s diferenas de solubilidade destes, nos solventes utilizados,
bem como, devido ao grau de afinidade entre os compostos ana-
lisados e a fase adsorvente.
Basicamente, um sistema cromatogrfico constitudo de
duas fases: uma estacionria, que pode ser um slido ou um
lquido, e uma fase mvel, a qual pode ser um lquido ou um
gs. Na cromatografia, a fase mvel desloca-se atravs dos in-
terstcios ou sobre a superfcie da fase estacionria, arrastando
os compostos a serem separados, em diferentes velocidades.
A cromatografia em papel um tipo de cromatografia de ad-
soro. Adsoro a capacidade de uma substncia reter outra
na sua superfcie. Essa reteno se d atravs de foras de Van
der Waals (fsica) ou de forma mais intensa (adsoro qumica).

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 123


II. M archa A naltica

1. Colocar em um almofariz cerca de dois a cinco gramas de


folhas verdes de uma planta qualquer.
2. Adicionar 4mL de lcool etlico e em seguida macerar as fo-
lhas completamente.
3. Transferir o material macerado para um tecido de nilon de
malha fina e espremer o mesmo filtrando para uma cpsula
de porcelana.
4. Preparar uma tira de papel de filtro nas dimenses de
20cmx1,5cm e em seguida fazer uma marca com um lpis de
grafite a 1,5cm de uma das extremidades (veja Figura 3-A).
5. Com o auxlio de uma pipeta de 0,1mL, transferir uma gota
de extrato alcolico de pigmentos para a tira de papel de fil-
tro, depositando-a na marca feita anteriormente (Fig.3-B).
6. Pipetar 1mL de ter de petrleo e em seguida mais 1mL de
hexano para uma proveta de 50mL, depositando os solventes
diretamente no fundo da proveta. Evite que os solventes to-
quem nas paredes laterais da proveta.
7. Cuidadosamente, coloque o papel de filtro dentro da proveta,
com a marca onde foi colocado o extrato, voltada para baixo.
Evite que a marca onde foi colocado o extrato mergulhe no
solvente (Fig. 3-C)
8. Cubra a proveta com um vidro de relgio e observe a ascen-
o dos solventes arrastando os pigmentos.

124 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


9. Antes da frente do solvente atingir o topo do papel de filtro
(a cerca de 2cm), retire o papel de filtro da proveta e observe
o ocorrido.
10. Anote as observaes e apresente as suas concluses.
OBS.: Repetir o mesmo processo utilizando um dos solventes
abaixo, ou a mistura de dois deles.

Solvente Constante Dieltrica


Hexano 1,89
ter de petrleo 4,34
Clorofrmio 4,87
Etanol 24,3

A B C

Figura 3. Representao das etapas envolvidas na realizao de uma


cromatografia unidimensional em papel.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 125


III. B ibliogr afia

BEZERRA NETO, E. ALBUQUERQUE, E.L.; BARRETO, L.P.

Introduo s tcnicas cromatogrficas. Recife: UFRPE, 2000. 43p.

BEZERRA NETO, E.; BARRETO, L.P. Mtodos de anlises qumicas

em plantas. Recife: Imprensa Universitria da UFRPE, 2004. 149p.

COLLINS, C.H.; BRAGA, G.L.; BONATO, P.S. Introduo a mtodos

cromatogrficos. Campinas-SP: Ed. da UNICAMP, 1995. 279p.

126 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


D eterminao C lorofil a
24
de

em Tecido F oliar
M todo E spectrofotomtrico

I. I ntroduo

A fotossntese um processo metablico realizado pelos vege-


tais, e essencial para a manuteno da vida no planeta Terra. Este
processo se desenvolve em organelas celulares denominadas de
cloroplastos que ocorrem predominantemente no mesfilo foliar.
A clorofila um composto orgnico formado por carbono,
hidrognio, nitrognio e contendo no centro de sua molcula
um tomo de magnsio. Em todos os vegetais superiores exis-
tem dois tipos de clorofila: a clorofila a e a clorofila b. A cloro-
filaa possui cor verde-azulada, com pico de absoro de luz em
420nm e 663nm, enquanto que a clorofila b tem cor verde-ama-
relada e apresenta absoro de luz mxima em 453nm e 645nm.
As clorofilas podem ser extradas de estruturas fotossintticas
com solventes orgnicos como acetona, etanol, etc. Vale salientar
que o ter no um bom solvente para extrao de clorofila. De
um modo geral, as folhas apresentam teores de clorofila total,
isto , o somatrio da clorofila a e clorofila b, entre 0,9 e 1,9mg.g-1
de tecido fresco.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 127


II. M archa A naltica

1. Colocar em uma placa de Petri, cerca de 5 A 10 folhas frescas,


com o auxlio de um bisturi remover e desprezar a nervura
central e cortar o restante em pequenos pedaos com cerca de
3 a 5mm.
2. Pesar 200mg das amostras de folhas e transferir para um tubo
de ensaio de tamanho grande e paredes grossas.
3. Adicionar 5mL de acetona a 80% e triturar em um homogenei-
zador de tecido vegetal.
4. Filtrar para um balo volumtrico de 25mL, usando uma tela
de nilon de malha fina.
5. Lavar o rotor do homogeneizador e tubo de ensaio, usando
mais 5mL do mesmo solvente e transferir, sob filtrao, o ma-
terial para o balo volumtrico.
6. Repetir a operao anterior mais trs vezes, e em seguida com-
pletar o volume do balo volumtrico com o mesmo solvente.
7. Agitar e recolher uma alquota de cerca de 10mL do filtrado e
centrifugar por 5 minutos a 2000g.
8. Zerar o espectrofotmetro com acetona a 80% e fazer as lei-
turas das amostras nos comprimentos de ondas de 645nm e
663nm.
9. Com o auxlio das equaes a seguir, calcular a concentrao
de clorofila a, clorofila b e o total das duas e expressar os re-
sultados em mg.g-1 de tecido fresco.

128 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


clorofila a (mgL-1) = 12,72 A663 - 2,59 A645

clorofila b (mgL-1) = 22,88 A645 - 4,67 A663

Sendo A645 e A663 respectivamente as absorbncias a 645nm


e 663nm.

III. B ibliogr afia

ARNON, D.I. Copper enzymes in isolated chloroplasts. Polyphen-

oloxidases in Beta bulgaris. Plant Physiology, v.24, n.1, p.1-15, 1949.

MACKINNEY, G. Absorption of light by chlorophyll solutions. J.

Biol. Chem. 140: 315-322, 1941.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 129


D erminao A cidez
25
da

em S uco de F rutas
I. I ntroduo

Frutas e hortalias, assim como outros produtos vegetais,


tm a sua composio alterada ao longo do tempo, quando
armazenadas ou transportadas por longo perodo, bem como
por ao de agentes patolgicos. Uma das alteraes bastante
comuns e que pode ser considerada indesejvel diz respeito
ao grau de acidez de certos frutos, o qual contribui de forma
positiva como componente das caractersticas organolpticas.
O sabor de certas frutas, como o da goiaba, por exemplo, no
momento da colheita, quando a fruta colhida prximo ma-
turao (de vez) bem diferenciado do seu sabor no estgio de
maturao plena. Por conseguinte, importante mencionar
que a determinao da acidez auxilia na avaliao do estado
de conservao do alimento. Um processo de decomposio,
seja por hidrlise, respirao ou fermentao (oxidaes) quase
sempre altera a concentrao dos ons hidrognio no fruto.
A avaliao do sabor exige a participao de tcnico trei-
nado ou de equipe de provadores, o que torna este processo
at certo ponto lento e oneroso. Outra forma de se avaliar a
acidez, mais precisa e rpida, atravs da medio do pH e

130 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


determinao da acidez titulvel dos frutos. O pH de um suco
de fruta, por exemplo, representa a concentrao dos ons H+
livres no suco, enquanto que a acidez total titulvel (ATT) es-
tima a participao dos cidos, orgnicos ou no, presentes no
meio. Em ambos os casos, as determinaes potenciomtricas
apresentam a vantagem sobre as determinaes colorimtri-
cas, devido a no interferncia da cor do produto que est sen-
do analisado.

II. M archa A naltica par a D eterminao


de ATT em S uco de L imo ou L ar anja

1. Espremer a fruta e recolher o suco, filtrando-o para um b-


quer ou erlenmeyer de 100 ou 200mL;
2. Pipetar 10mL do fitrado para um erlenmeyer de 125mL;
3. Acrescentar 20mL de gua destilada e em seguida 2 gotas do
indicador fenolftalena;
4. Com o auxlio de uma bureta contendo hidrxido sdio 0,1 N,
titular o contedo do erlenmeyer at a mudana da cor para
rosa claro;
5. Anotar o volume do hidrxido de sdio gasto na titulao e
proceder aos clculos.

Observaes
a. No caso de sucos muito cidos, como o de limo por exem-

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 131


plo, recomenda-se usar na titulao um volume menor do
suco, como 2mL, por exemplo.
b. No caso de um suco pouco cido, uma alternativa usar um
volume maior do filtrado na titulao, como 20 ou 50mL e
no diluir.
c. Outra alternativa, no caso de um suco pouco cido, empre-
gar na titulao uma soluo de hidrxido de sdio 0,01 N,
em vez de 0,1 N.
d. Empiricamente algumas pessoas preferem converter e ex-
pressar os resultados da acidez titulvel para a massa de um
dado cido orgnico componente da fruta, como o cido c-
trico ou mlico por exemplo. importante ressaltar que as
frutas possuem diversos cidos orgnicos como componentes
que contribuem para a acidez das mesmas, que a participa-
o de cada um desses cidos varia com uma srie de fatores,
at mesmo com o cultivar e com a massa molecular de cada
cido orgnico, alm de que alguns cidos so monohidroxi-
lados enquanto outros so dihidroxilados ou trihidroxilados.
Tudo isto acarreta uma srie de distores que mascaram a
interpretao dos resultados, notadamente quando se deseja
compar-los.
f. Alternativamente a dosagem da ATT pode ser feita potencio-
metricamente, empregando-se o peagmetro. Neste caso, em
vez de acrescentar o indicador ao suco contido no erlenmeyer,
introduz-se o eletrodo de um peagmetro previamente cali-

132 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


brado, e procede-se a titulao com o hidrxido de sdio 0,1 N
at que o pH atinja o valor 8,1 (Instituto Adolfo Lutz, 2008).

III. C lculos

Admitindo o exemplo de pipetar 10,0mL do suco da fruta,


gastar 5,0mL de NaOH 0,1 N na titulao, e que a referida base
tem um fator de correo da sua normalidade igual a 1,05.

Vb x Fpb x 100
ATT =
Vs x C

ATT = acidez titulvel total, expressa em mL de NaOH 1,0 N


Vb = volume em mililitros da base gastos na titulao
Fpb = fator da padronizao da base
100 = constante da expresso dos resultados para 100mL do
suco
Vs = volume em mililitros do suco empregado na titulao
C = correo da base para padronizar os resultados em NaOH
1,0 N.
Se usar uma base 0,1 N o valor de c ser igual a 10.
Se usar uma base 0,01 N, o valor de c ser igual a 100.

5,0mL x 1,050 x 100


ATT = = 5,25mL / 100mL
10,0ml x 10

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 133


IV. P reparo dos R eagentes

Indicador fenolftalena a 0,1%. Pesar 0,100g de fenolftalena,


dissolver em etanol e completar o volume com o mesmo solven-
te para 100mL.
Soluo de hidrxido de sdio 0,1 N. Pesar 4,10g de NaOH,
dissolver em gua destilada e completar o volume para 1000mL.
Padronizar a soluo com cido oxlico (veja anexo) e determi-
nar o fator da padronizao (fpb).

Observaes
a. No caso de se desejar analisar uma fruta oleaginosa, como
coco ou abacate por exemplo, a acidez titulvel decorrente
principalmente dos cidos graxos livres, os quais so lipos-
solveis, portanto a sua extrao deve ser feita com etanol.
b. Embora a metodologia descrita anteriormente, refira-se a
limo ou laranja, a mesma pode ser empregada para qual-
quer fruta. No entanto, quando se tratar de uma fruta menos
suculenta do que o limo ou laranja, a exemplo do mamo,
no preparo do suco so necessrias algumas modificaes,
conforme descritas a seguir.
1. Descascar a fruta e macerar a polpa em um almofariz;
2. Centrifugar uma alquota de cerca de 100g da polpa, por
meia hora a 3000rpm;

134 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


3. Recolher o sobrenadante e filtrar em papel de filtro, com
sistema a vcuo.
4. Recolher uma alquota de 10mL do filtrado e titular con-
forme descrito anteriormente.
5. Padronizao da soluo de hidrxido de sdio. A de-
terminao da acidez titulvel em suco de frutas rea-
lizada usualmente com soluo de hidrxido de sdio
0,1N. Neste caso, para se realizar a anlise com preci-
so, necessrio que a soluo de hidrxido de sdio
seja padronizada previamente, haja vista que tal base
no um padro primrio. A padronizao de soluo
de hidrxido de sdio feita com soluo padro de ci-
do oxlico 0,1 N.

V. B ibliogr afia

BEZERRA NETO, E.; BARRETO, L.P. Anlises bioqumicas e fisico-

qumicas em ps-colheita. In: OLIVEIRA, S.M.A. de et al (editores).

Patologia ps-colheita: frutas, olercolas e ornamentais tropicais.

Braslia-DF: EMBRAPA, 2006, p. 443-472.

INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Mtodos fsico-qumicos para anlise

de alimentos. So Paulo: Instituto Adolfo Lutz, 2008. 1020p.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 135


D eterminao do p H
26 em S uco de F rutas
I. P rocedimento A naltico

1. Espremer a fruta e recolher o suco em um bquer, filtrando o


mesmo em tecido de nilon de malha fina;
2. Pipetar 10mL do suco para um recipiente estreito, como um
tubo de ensaio ou frasco com cerca de 2 a 2,5cm de dimetro;
3. Introduzir no frasco, o eletrodo do peagmetro previamente
calibrado com solues tampo 4,0 e 7,0;
4. Agitar suavemente, observar no mostrador do aparelho o va-
lor do pH e anotar o valor.

Observao
Alguns aparelhos j possuem dispositivo para a compensa-
o automtica da temperatura, a qual convencionalmente ex-
pressa a 25C. Caso o peagmetro utilizado no disponha desse
recurso, utilize uma tabela para proceder tal correo.

136 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


II. B ibliogr afia

BEZERRA NETO, E.; BARRETO, L.P. Anlises bioqumicas e fisico-

qumicas em ps-colheita. In: OLIVEIRA, S.M.A. de et al (editores).

Patologia ps-colheita: frutas, olercolas e ornamentais tropicais.

Braslia-DF: EMBRAPA, 2006, p. 443-472.

INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Mtodos fsico-qumicos para anlise

de alimentos. So Paulo: Instituto Adolfo Lutz, 2008. 1020p.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 137


D eterminao SST
27
de

em S uco de F rutas
I. I ntroduo

A determinao do teor de slidos solveis totais (SST) tem


sido tradicionalmente realizada com o emprego de densmetros
ou aermetros, nas anlises de caldo de cana-de-acar, lcool,
vinagre, etc. Os resultados obtidos desta anlise so expressos
em graus Brix ou percentagem do soluto empregado na calibra-
o. Para trabalhos de campo, em anlise de caldo de cana-de-
acar, os refratmetros manuais tm sido bastante emprega-
dos, os quais tambm expressam os resultados em graus Brix
e corresponde a percentagem da sacarose, soluto predominan-
te no caldo de cana, e portanto empregado na calibrao dos
mesmos. A tecnologia de fabricao dos refratmetros evoluiu
bastante, de forma que j se encontram facilmente no comrcio,
refratmetros portteis digitais.
Os refratmetros tm sido amplamente empregados para
determinar SST no suco de diversas frutas, como uma vari-
vel auxiliar na identificao do ponto de colheita das mesmas.
A determinao refratomtrica dos SST bastante prtica, haja
vista que consta apenas em se colocar uma ou duas gotas do
suco da fruta, ou caldo de cana, em um compartimento apro-

138 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


priado do instrumento, fechar o mesmo e fazer a leitura dire-
tamente no mostrador. No se dispondo de tal equipamento,
pode se determinar o teor de SST gravimetricamente.

II. M archa A naltica par a D eterminao


de SST em S uco de L imo ou L ar anja por
G r avimetria

1. Espremer a fruta e filtrar o suco em papel de filtro;


2. Com o auxlio de uma pipeta volumtrica, pipetar 20mL do
suco para um pesa-filtro previamente seco e tarado;
3. Colocar o pesa-filtro (aberto) em uma estufa com circulao
de ar, regulada para 80C, e manter por duas horas;
4. Aps este perodo, regular a estufa para 105C e manter o
aquecimento por mais uma hora;
5. Ainda na estufa, tampar o pesa-filtro, transferir o mesmo
para um dessecador, deixar esfriar por 20 minutos e pes-lo;
6. Calcular a percentagem de SST conforme a equao
seguinte:
(PPF + PSS) - TPF
SST = x100
Va

SST = slidos solveis totais (em percentagem)


PPF + PSS = peso do pesa-filtro mais peso dos slidos solveis
(em gramas)
TPF = tara do pesa-filtro (em gramas)

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 139


Va = volume do suco (em mL)
100 = constante da percentagem

III. B ibliogr afia

BEZERRA NETO, E.; BARRETO, L.P. Anlises bioqumicas e fisico-

qumicas em ps-colheita. In: OLIVEIRA, S.M.A. de et al (editores).

Patologia ps-colheita: frutas, olercolas e ornamentais tropicais.

Braslia-DF: EMBRAPA, 2006, p. 443-472.

INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Mtodos fsico-qumicos para anlise

de alimentos. So Paulo: Instituto Adolfo Lutz, 2008. 1020p.

OHLWEILER,O.A. Qumica analtica quantitativa. vol.2. Rio de

Janeiro: Livros Tcnicos e Cientficos, 1988. 226p.

140 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


D eterminao
de Vitamina C 28
em S uco de F rutas

M todo de Tillmans

I. I ntroduo

A vitamina C, alm de sua conhecida propriedade de au-


mentar a resistncia do organismo s infeces, ajuda ao cres-
cimento e um fator de regenerao e formao do sangue.
Tambm importante para a sade dos dentes e das gengivas.
Encontra-se em verduras e legumes, mas principalmente nos
frutos cidos como o caju, uva, limo e laranja. Atualmente,
sabe-se que a acerola um fruto bastante rico nessa vitamina,
contendo dezenas de vezes mais vitamina C do que qualquer
das frutas citadas acima.
Quimicamente, a vitamina C o cido ascrbico, o qual se
comporta como um composto bastante instvel. Por oxidao,
facilmente se converte em cido desidroascrbico (Figura 4),
propriedade esta que dificulta sua anlise qumica.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 141


O C O C
HO C O C
O O
HO C O C
H C H2 H C
HO C H HO C H
H C OH H C OH
H H

cido cido
L-ascrbico L-deidroascrbico

Figura 4. Frmulas estruturais dos cidos L-ascrbico e L-desidroascrbico.

A vitamina C pode ser analisada em suco de frutas pelo m-


todo de Tillmans (Bezerra Neto e Barreto, 2004), o qual consta
da titulao do cido ascrbico presente no suco da fruta, utili-
zando uma soluo de 2,6-diclorofenol-indofenol, previamente
padronizada com uma soluo de cido ascrbico. O mtodo
de Tillmans est descrito a seguir, modificado no sentido de se
usar soluo de cido oxlico como solvente e estabilizador da
vitamina C, em substituio ao cido metafosfrico, tradicio-
nalmente utilizado neste mtodo (Instituto Adolfo Lutz, 2008).

II. M archa A naltica

a. Preparo do suco da fruta. Extrair o suco da fruta a ser ana-


lisada e filtrar em tecido de nilon de malha fina. Pipetar trs
alquotas de 5mL da soluo de cido oxlico para erlenmeyers

142 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


de 50mL, e em seguida, adicionar a cada erlenmeyer, 2mL do
suco da fruta.

b. Padronizao do diclorofenol indofenol. Encher uma bureta


de cor mbar com a soluo de diclorofenol indofenol e, em
seguida, zer-la. Pipetar 5mL da soluo de cido oxlico para
um erlenmeyer de 50mL, adicionar 2mL da soluo de cido
ascrbico e titular com a soluo de diclorofenol indofenol.
Oponto final desta titulao reconhecido com a mudana de
cor para o rosa claro, e a persistncia desta cor por um a dois
segundos. Aps padronizar o diclorofenol indofenol, proceder
prova em branco. Para isto, transferir 5mL da soluo de ci-
do oxlico para erlenmeyer de 50mL, adicionar 2mL de gua
destilada e titular com a soluo de diclorofenol indofenol. Esta
operao deve ser efetuada com trs repeties, e em seguida
calcular a mdia aritmtica dos valores gastos nas titulaes.

c. Titulao da amostra. Titular as amostras referidas no itema,


com a soluo de diclorofenol indofenol. O ponto final da titu-
lao da amostra reconhecido com o surgimento da cor rosa
claro e a persistncia desta cor, no mais retornando para in-
color. Na anlise de frutas como laranja e limo por exemplo,
pode ser feita a titulao do suco da fruta sem necessitar de di-
luio. J no caso da acerola, a qual contm bastante vitamina
C, recomenda-se que seja feita uma diluio de 100 vezes.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 143


III. P reparo D os R eagentes

a. cido Oxlico 1,6% em cido actico. Pesar 8,0g de cido ox-


lico, dissolver em um bquer contendo 200mL de gua desti-
lada e 40mL de cido actico glacial. Completar o volume para
500mL e guardar em frasco apropriado.

b. Soluo padro de indofenol. Dissolver 0,042g de bicarbo-


nato de sdio em 50mL de gua destilada e adicionar 50mg
de 2,6-diclorofenol indofenol (sal dissdico). Agitar vigorosa-
mente e, em seguida, completar o volume para 200mL com
gua destilada. Filtrar a soluo, guard-la em frasco escuro,
hermeticamente fechado e sob refrigerao. Recomenda-se
que antes do preparo desta soluo, o diclorofenol indofenol
na forma cristalizada seja mantido por pelo menos duas horas
em um dessecador contendo um agente higroscpico bastante
ativo.

c. Soluo padro de cido ascrbico (1000mg.L-1). Pesar exata-


mente 100mg de cido ascrbico (P.A.), transferir para um ba-
lo volumtrico de 100mL e completar o volume com a soluo
do cido estabilizante (cido oxlico) utilizado no preparo do
suco da fruta a ser analisada. Imediatamente aps o preparo
desta soluo, manter a mesma ao abrigo da luz e padronizar
a soluo de indofenol, conforme descrito acima.

144 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


IV. C lculos

Adotando-se as condies de trabalho acima descritas, isto


, utilizando o mesmo volume (2,0mL por exemplo) de ci-
do ascrbico na padronizao do indofenol, e da amostra (suco
da fruta por exemplo), o teor de vitamina C pode ser calculado
pela seguinte frmula:

Via - Vib
C= x 100
Vip

Onde:
C = mg de cido ascrbico/100mL do suco da fruta.
Via = volume de indofenol gasto na titulao da amostra.
Vib = volume de indofenol gasto na prova em branco.
Vip = volume de indofenol gasto na padronizao do mesmo.

V. B ibliogr afia

BEZERRA NETO, E.; BARRETO, L.P. Mtodos de anlises qumicas

em plantas. Recife: Imprensa Universitria da UFRPE, 2004. 149p.

INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Mtodos fsico-qumicos para anlise

de alimentos. So Paulo: Instituto Adolfo Lutz, 2008. 1020p.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 145


D eterminao F enis Totais
29
de

M todo do A zul da P rssia

I. I ntroduo

Taninos so compostos do metabolismo secundrio dos


vegetais, de natureza fenlica, e que precipitam ao interagir
com protenas. Como resultante desta propriedade, os tani-
nos proporcionam o sabor adstringente, e quando em eleva-
da concentrao diminui a digestibilidade dos alimentos. H
muito tempo os taninos tm sido empregados no curtume de
couro, atividade esta explorada industrialmente e que gera
divisas para o Brasil. Os taninos tambm so empregados
com fins medicinais, alm do emprego como fixadores de co-
rantes e anticorrosivo na indstria naval. Existem dois tipos
de taninos, os taninos condensados (proantocianidinas) e os
taninos hidrolisveis (galotaninos e elagitaninos).
Do ponto de vista agronmico, as principais vantagens
do tanino so: barreira para herbvoros (ex: ataques de ps-
saros em sorgo), resistncia a fungos causadores da podrido
no gro antes da colheita (ex.: sorgo) e resistncia a insetos.
A principal desvantagem do tanino na alimentao animal
o seu efeito antinutricional, causado pelo complexo tani-
no-protena, que quando em elevada concentrao diminui

146 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


a digestibilidade das forragens. Existem diversos mtodos
para se quantificar taninos, no entanto, nenhum deles pode
ser considerado completamente satisfatrio. Segundo Ma-
galhes et al. (1997), o mtodo de Folin-Denis superestima a
quantidade de taninos, enquanto que o mtodo do azul da
Prssia o que apresenta melhor correlao com o desem-
penho de aves que se alimentam com rao rica em taninos.
Ambos quantificam fenis totais e se usam o cido tnico
como padro por tratar-se do tanino mais representativo
do grupo. O mtodo do azul da Prssia se baseia na reao
de xido-reduo entre os compostos fenlicos e ons ferro.
Grupos hidroxifenlicos reduzem ons Fe3+ a Fe2+, os quais
so complexados com ferricianeto, produzindo pigmentos
de colorao azul.

II. M archa A naltica

Preparo do extrato.
1. Pesar 0,5g da amostra e transferir para um erlenmeyer de
125mL;
2. Adicionar 10mL de HCl a 1% em metanol e tampar;
3. Agitar suavemente em mesa agitadora por 20 minutos;
4. Centrifugar a 1.000rpm, durante dez minutos, ou filtrar em
papel de filtro qualitativo;
5. Guardar em refrigerador at o momento da anlise.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 147


Desenvolvimento da cor.
1. Pipetar 2mL de gua destilada para tubos de ensaio devida-
mente identificados para receber os padres e amostras;
2. Acrescentar 1mL de cloreto frrico (FeCl3) 50mM e agitar su-
avemente o tubo de ensaio por 10 segundos;
3. Imediatamente acrescentar 1mL de ferricianeto de potssio,
agitar suavemente o tubo de ensaio e deixar em repouso por
exatamente 20 minutos a partir da adio do cloreto frrico.
4. Efetuar a leitura espectrofotomtrica a 720nm.
5. Calcular o teor de tanino nas amostras por comparao com
as leituras de solues padres de cido tnico.

OBS.: Exatamente 30 segundos aps a adio do cloreto frrico


ao primeiro tubo de ensaio, proceder da mesma forma com o se-
gundo tubo de ensaio, assim sucessivamente, de forma que an-
tes de atingir o tempo necessrio para efetuar as leituras espec-
trofotomtricas (20 minutos), possvel promover a reao em
40 tubos de ensaio, incluindo padres de trabalho e amostras.

III. P reparo D os R eagentes

cido clordrico a 1% em metanol. Pipetar para um balo


volumtrico de 1.000mL, 27mL de HCl conc. (d = 1,19 g.mL-1) e
completar o volume com metanol (P.A.).
Soluo estoque de cido tnico (1000mg.L-1). Pesar 100mg

148 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


de cido tnico, dissolver em HCl a 1% em metanol, e completar
o volume para 100mL.
Padres de trabalho de cido tnico. Pipetar separadamen-
te 0,25; 0,50; 1,00 e 2,00mL da soluo estoque de cido tnico
(1000mg.L-1) e completar o volume para 10mL com soluo de
HCl a 1% em metanol, obtendo-se respectivamente 25, 50, 100
e 200mg.L-1 de cido tnico. O branco (padro zero) corresponde
soluo de HCl a 1% em metanol.
Cloreto frrico (FeCl3) 50 mM. Calcinar FeCl3.6H2O a 200C,
por 3 horas. Em seguida levar a um dessecador e aps 15 minu-
tos, pesar 0,6488g, dissolver com gua destilada e completar o
volume para 500mL.
Ferricianeto de potssio [K3Fe(CN)6] 8mM. Pesar 1,3170g
de ferricianeto de potssio [K3Fe(CN)6], dissolver com gua
destilada e completar o volume para 500mL.

IV. B ibliogr afia

BEZERRA NETO, E.; BARRETO, L.P. Mtodos de anlises qumicas

em plantas. Recife: Imprensa Universitria da UFRPE, 2004. 149p.

MAGALHES, P.C.; RODRIGUES, W. A.; DURES, F.O.M. Tanino

no gro de sorgo: bases fisiolgicas e mtodos de determinao. Sete

Lagoas: EMBRAPA-CNPMS, 1997. 26p. (EMBRAPA-CNPMS. Circular

tcnica, 27).

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 149


D eterminao F enis
30
de

Totais e Taninos
M todo de F olin -D enis

I. I ntroduo

Os compostos fenlicos so enquadrados como compostos


do metabolismo secundrio, e podem ser subdivididos em trs
grupos: flavonides, cido saliclico e taninos. importante res-
saltar que a lignina um composto de natureza fenlica, porm
no faz parte dos compostos do metabolismo secundrio, haja
vista sua participao como componente da parede celular, o
que lhe confere a funo estrutural. Os taninos so compostos
do metabolismo secundrio dos vegetais, de natureza fenlica,
e que precipitam ao interagir com protenas. Como resultante
desta propriedade, os taninos proporcionam o sabor adstrin-
gente, caracterstico de certos frutos verdosos, como caju, ta-
marindo, uva, banana, etc. Compostos fenlicos simples como
cido hidroxi-cinmico, catequinas e antocianinas no causam
o sabor adstringente, enquanto que dmeros de flavanas apre-
sentam esta caracterstica (Van Buren, 1971).
Admite-se que os taninos so produzidos pelas plantas como
um mecanismo de defesa, contra ataque de pragas e doenas. A

150 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


sntese de fitoalexinas bem como a sntese de taninos tambm
so consideradas como modalidades de RAS (Resistncia Sist-
mica Adquirida). O acmulo de compostos fenlicos tem sido
constatado, atuando diretamente na inibio de crescimento de
fungo, criando ambiente fitotxico, em razes de tomateiro tra-
tado com quitosana (Benhamou et al., 1994).
Quimicamente existem dois tipos de taninos: os taninos con-
densados (flavolanas) e os taninos hidrolisveis (galotaninos e
elagitaninos). Alguns autores consideram os taninos como poli-
fenis, outros preferem consider-los como compostos oligom-
ricos com mltiplas unidades que apresentam grupos fenlicos
livres e peso molecular variando entre 500 e 20.000 Daltons. So
solveis em gua, com exceo de algumas estruturas de eleva-
do peso molecular. Os mesmos so componentes dos extrativos
da madeira, que em algumas rvores podem ser extrados e co-
mercializados como uma boa fonte de renda, destacando-se seu
emprego na indstria de curtume de couro. Os taninos tambm
tm aplicao medicinal, na produo de fitoterpicos. A seguir
so citadas algumas espcies arbreas que apresentam um con-
tedo relativamente elevado de taninos: barbatimo (Stryphno-
dendro adestringens (Mart.) Coville), accia negra (Acacia mearnsii
De Wild.), angico verdadeiro (Piptadenia rigida Benth.), angico
vermelho (Anadenanthera macrocarpa (Benth.) Brenan.), mangue
branco (Laguncularia racemosa L.), canafstula (Senna ferruginea
Schrad.), goiabeira (Psidium guajava L.), jurema preta (Mimosa

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 151


hostilis Benth.), etc. A principal desvantagem do tanino na ali-
mentao animal o seu efeito antinutricional, causado pelo
complexo tanino-protena, que quando em elevada concentra-
o diminui a digestibilidade das forragens.
Existem vrios mtodos para a determinao de taninos e
fenis totais em tecidos vegetais, porm, todos eles tm suas
limitaes (Magalhes et al., 1997). O mtodo de Folin-Denis
um mtodo colorimtrico que determina fenis totais (Horwitz,
1980). Tal mtodo baseia-se na reduo em meio alcalino do fos-
fomolibdato-fosfotungstato pelos fenis, a molibdnio, o que
proporciona o desenvolvimento da colorao azul. O mtodo de
Folin-Denis tambm pode ser empregado para se determinar o
teor de taninos em amostras vegetais. Para isto, determina-se
primeiro o teor de fenis totais no extrato vegetal, e em seguida
procede-se precipitao dos taninos com o uso de protena ou
PVP. Aps a precipitao dos taninos presentes no extrato vege-
tal, determina-se no sobrenadante o teor de fenis no tnicos,
e por diferena calcula-se o teor de taninos.

II. M archa A naltica

Preparo de extrato
a. Cortar em placa de Petri uma amostra de casca de rvore
(goiabeira, por exemplo) em fragmentos de cerca de 2mm;
b. Pesar 0,2g da amostra, transferir para um erlenmeyer de

152 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


50mL e acrescentar 20mL de etanol a 80%;
c. Fechar o erlenmeyer e colocar para agitar por 30 minutos;
d. Filtrar para um balo volumtrico de 50mL e lavar o resduo
com gua destilada;
e. Completar o volume do balo volumtrico, homogeneizar o
extrato e transferir para um frasco rosquevel;
f. Colocar uma identificao no frasco e manter sob refrigerao
at o momento do desenvolvimento da cor.

Precipitao dos taninos


a. Pipetar para um tubo de ensiao 1,0mL do extrato vegetal;
b. Acrescentar cerca de 50mg de casena (ou PVP), fechar o tubo
de ensaio e agitar vigorosamente por cerca de um minuto;
c. Deixar em repouso por 24 horas em refrigerador;
d. No dia seguinte, centrifugar por 10 minutos a 2000g e em
seguida proceder o desenvolvimento da cor.

Desenvolvimento da cor
a. Pipetar para tubos de ensaio 0,2mL do extrato ou soluo pa-
dro de cido tnico;
b. Acrescentar 5mL de gua destilada;
c. Acrescentar 1,0mL da soluo saturada de carbonato de
sdio;
d. Acrescentar 0,5mL do reagente de Folin-Denis;
e. Agitar suavemente e deixar em repouso por 30 minutos;

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 153


f. Realizar a leitura espectrofotomtrica a 760nm.
g. Realizar os clculos, com base na curva padro de cido tni-
co e expressar os resultados em termos de mg de taninos por
grama de material analisado.

III. P reparo dos R eagentes

Reagente de Folin-Denis. Transferir 380mL de gua des-


tilada para um bquer, acrescentar 50g de tungstato de sdio
(Na2WO4.2H2O), 10g de cido fosfomolbdico e 25mL de cido
fosfrico. Colocar para refluxar por duas horas e completar o
volume para 500mL com gua destilada. Esta soluo tem vali-
dade de um ms.
Soluo saturada de carbonato de sdio. Pesar 35g de car-
bonato de sdio (Na2CO3), dissolver em 100mL de gua destila-
da a quente. Deixar esfriar, provocar precipitao com cristais
de carbonato de sdio e em seguida filtrar.
Soluo padro de cido tnico (soluo estoque 2,5g.L-1).
Pesar 0,500g de cido tnico, dissolver em gua destilada e
completar o volume para 200mL. Preparar solues padres
novas a cada determinao.
Solues padres diludas. Pipetar para bales volumtri-
cos de 100mL: 1, 2, 4, e 8mL da soluo estoque de cido tnico
(2,5g.L-1) e completar o volume com gua destilada. Com este
procedimento, estaro preparadas as solues padres de cido

154 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


tnico nas concentraes respectivas de 25, 50, 100, e 200mg.L-1.
O padro zero corresponde gua deionizada.

IV. B ibliogr afia

HORWITZ, W. Official methods of analysis of the association

of official analytical chemists. Association of Official Analytical

Chemists. 13 ed. Washinton, 1980. 1018p.

MAGALHES, P.C.; RODRIGUES, W. A.; DURES, F.O.M. Tanino

no gro de sorgo: bases fisiolgicas e mtodos de determinao. Sete

Lagoas: EMBRAPA-CNPMS, 1997. 26p. (EMBRAPA-CNPMS. Circular

tcnica, 27).

VAN BUREN, J. Fruit Phenolics. In: HULME, A.C. The biochemistry

of fruits and their products. v. 1, p. 269-304. London: Academic

Press. 1971.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 155


D eterminao C arbono
31
de

O rgnico Total
em Tecido Vegetal
I. I ntroduo

Em estudos de ciclagem do carbono na natureza neces-


srio se conhecer uma metodologia para determinao do
carbono em tecidos vegetais. Em algumas situaes, por li-
mitao dos laboratrios, o teor de carbono estimado por
meio do uso de fatores de converso, que so multiplicados
pelo teor de matria orgnica. No entanto, importante sa-
lientar que o teor de carbono na matria orgnica varia com
a natureza da mesma, isto , de sua composio qumica. A
depender da predominncia de um determinado composto
ou outro na matria orgnica, um dado fator de converso
pode se tornar invivel. Por exemplo, o fator de converso
com base na frmula molecular da glucose, celulose e cido
oxlico respectivamente 2,25; 2,50 e 3,75.
O mtodo descrito a seguir baseia-se na oxidao da ma-
tria orgnica em presena de cido sulfrico e dicromato de
potssio, e posterior dosagem, por titulao, do excesso de
dicromato, com soluo padro de sulfato ferroso amoniacal.

156 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


O carbono da matria orgnica oxidado a CO2 enquanto que
o cromo reduzido de Cr+6 para Cr+3.

II. M archa A naltica

1. Pesar 0,1g da amostra vegetal pr-seca e transferir para um


erlenmeyer de 500mL;
2. Adicionar 20mL* de dicromato de potssio 1 N e em seguida
40mL de cido sulfrico concentrado;
3. Tampar o erlenmeyer com vidro de relgio, aquecer por cinco
minutos em fervura branda, em seguida agitar suavemente
por um minuto e deixar em repouso por 30 minutos;
4. Adicionar 200mL de gua destilada, em seguida 10mL de ci-
do fosfrico concentrado e 1mL de difenilamina;
5. Titular o excesso do oxidante com soluo de sulfato ferroso
amoniacal 0,5 N, at viragem da cor prpura para verde.
* OBS.: Usar pipeta de alta preciso, tipo volumtrica.

III. C lculos

Cada mililitro de dicromato de potssio 1 N reduzido equi-


vale a 3mg de carbono oxidado. Com base nesta estequiometria
e na quantidade de amostra pesada, calcula-se a percentagem
de carbono na amostra pr-seca que deve posteriormente ser
corrigida para a matria seca absoluta.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 157


EXEMPLO: Admitindo que se pesou 200mg de uma amostra
pr-seca, com 10% de umidade, e que esta foi oxidada em um
erlenmeyer com 20mL de dicromato de potssio 1 N. Aps a
oxidao da matria orgnica, titulou-se o excesso de dicro-
mato gastando-se 5,2mL de sulfato ferroso amoniacal 0,5 N.
Calcular a percentagem de carbono total na matria seca da
amostra referida.
Como o excesso de dicromato foi titulado com sulfato fer-
roso amoniacal a 0,5 N e no a 1,0 N, deve-se primeiramente
dividir por 2 o volume desse reagente gasto na titulao, assim
5,6mL/2 igual a 2,6mL.

Dicromato de potssio consumido na oxidao:


20,0 mL - 2,6 mL = 17,4 mL

Quantidade total de carbono na amostra:


3mg x 17,4mL = 52,2mg

Percentagem de C na amostra pr-seca:


200mg (amostra) ------- 52,2mg de C
100 (de % ) -------------- X

100x52,2
X= =26,1% de C na matria seca.
200

158 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


Percentagem de matria seca da amostra:
100% - % de umidade
100% - 10% = 90 %
Percentagem de C na matria seca:
90% de MS ------------ 26,1% de C
100% de MS ----------- Y

Y = 100x26,1 = 29,00% de C na matria seca.


90

IV. R eagentes

Dicromato de potssio 1 N. Pesar 49,04g de dicromato de


potssio (K2Cr2O7), previamente seco em estufa regulada a
120C por 2 horas, dissolver em gua destilada e completar o
volume para um litro. Este reagente deve ser P.A.
cido fosfrico a 85%. Corresponde ao cido ortofosfri-
co concentrado (H3PO4);
Difenilamina. Pesar 0,5g de difenilamina e dissolver em
20mL de gua destilada, em seguida acrescentar 100mL de
cido sulfrico concentrado;
Sulfato ferroso amoniacal 0,5 N. Dissolver 196,05g de sul-
fato ferroso amoniacal [Fe(NH4)2(SO4)2.6H2O] em 500mL de
gua destilada, acrescentar 7,5mL de cido sulfrico concen-
trado e completar o volume para um litro. Este reagente deve
ser recm preparado. Recomenda-se padronizar previamente

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 159


esta soluo com a soluo de dicromato de potssio de mes-
ma normalidade.

V. B ibliogr afia

BEZERRA NETO, E.; BARRETO, L.P. Mtodos de anlises qumicas

em plantas. Recife: Imprensa Universitria da UFRPE, 2004. 149p.

MENDONA, E.S.; MATOS, E. da S. Matria orgnica do solo:

mtodos de anlises. Ponte Nova-MG: D&M Grfica e Editora Ltda,

2005. 107p.

SILVA, F.C. da. Manual de anlises qumicas de solos, plantas e

fertilizantes. Braslia: EMBRAPA, 1999. 370p.

TEDESCO, M.J. Anlises de solo, plantas e outros materiais. Porto

Alegre: UFRS, 1995. 174p.

160 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


D igesto N itro -P erclrica
par a A nlise 32
de E lementos M iner ais
I. I ntroduo

A digesto nitro-perclrica utilizada quando se deseja re-


alizar determinaes analticas da maioria dos nutrientes mi-
nerais presentes nas plantas (P, K, Ca, Mg, Cu, Fe, Mn, Zn, etc.),
excetuando os elementos N e Cl. Durante a digesto a matria
orgnica da amostra vegetal oxidada com cidos minerais
concentrados sob aquecimento. As misturas de cidos mine-
rais mais utilizadas so as seguintes: HNO3 + HClO4 (3:1 ou 5:1),
HNO3 + HClO4 + H2SO4 (3:1:1) e HCl + HNO3 (3:1). A desvan-
tagem do uso do cido sulfrico refere-se inviabilidade de
se analisar Ca e S, pois o primeiro precipita como CaSO4 e o
segundo constituinte do H2SO4.

II. M archa A naltica

1. Pesar 0,5g da amostra pr-seca e transferir para um tubo


digestor;
2. Adicionar ao tubo digestor 5mL de cido ntrico concentrado

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 161


e 1mL de cido perclrico concentrado e deixar em repouso
de um dia para o outro;
3. Colocar para aquecer em bloco digestor localizado em uma
capela, obedecendo a seguinte seqncia de tempo e tempera-
tura: 1h a 80C, 1h a 120C, 1h a 150C e 1h a 180C;
4. Aguardar esfriar e transferir quantitativamente o digerido
para um balo volumtrico de 50mL: com o auxlio de gua
deionizada e um basto policial, lavar o tubo digestor pelo me-
nos trs vezes, transferindo o lquido de lavagem para o balo
volumtrico e em seguida completar o volume;
5. Transferir o extrato para frascos, proceder s anlises recomen-
dadas ou guardar sob refrigerao para posterior anlise.

OBSERVAES
1. Se ao final das trs horas de aquecimento e posterior esfria-
mento do material, se constatar que a amostra no foi perfei-
tamente digerida, isto , no estiver de cor clara, esbranquia-
da ou translcida, adicionar cerca de 3mL de cido ntrico e
colocar para aquecer novamente por 1 hora a 180C.
2. Alternativamente, pode se obter o volume final do extrato,
com base na massa, isto , por pesagem. Neste caso, transfere-
se quantitativamente o digerido para um frasco de polietileno
previamente tarado. Com o auxlio de gua deionizada e um
basto policial, lavar o tubo digestor pelo menos trs vezes,
transferindo o lquido de lavagem para o frasco at conseguir

162 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


cerca de 50mL de extrato. Em seguida pesar o frasco de plsti-
co contendo o extrato vegetal, proceder s anlises recomen-
dadas ou guardar sob refrigerao para posterior anlise. O
fator de diluio da amostra ser igual ao quociente entre o
peso do extrato (frasco + extrato - tara do frasco) e o peso da
amostra.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 163


III. B ibliogr afia

BEZERRA NETO, E.; BARRETO, L.P. Mtodos de anlises qumicas

em plantas. Recife: Imprensa Universitria da UFRPE, 2004. 149p.

MALAVOLTA, E.; VITTI, G.C. e DE OLIVEIRA, S.A. Avaliao do

estado nutricional das plantas: princpios e aplicaes. Piracicaba:

POTAFOS, 1989. 201p.

MIYAZAWA, M.; PAVAN, M.A.; BLOCH, M. de F.M. Avaliao de

mtodos com e sem digesto para extrao de elementos em tecidos

de plantas. Cincia e Cultura, v.36, n.11, p.1953-1958, 1984.

MIYAZAWA, M.; PAVAN, M.A.; BLOCH, M. de F.M. Anlise qumica

de tecido vegetal. Londrina: Instituto Agronmico do Paran, 1992.

17p. (IAPAR. Circular, 74).

SARRUGE, J.R.S. e HAAG. H.P. Anlises qumicas em plantas.

Piracicaba: USP-ESALQ, 1974. 65p.

SILVA, F.C. da. Manual de anlises qumicas de solos, plantas e

fertilizantes. Braslia: EMBRAPA, 1999. 370p.

164 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


D eterminao
de F sforo 33
M todo C olorimtrico
do M olibdo - vanadato

I. I ntroduo

O fsforo um macronutriente vegetal cuja concentrao


total em tecidos vegetais pode variar de 1 a 15g kg-1 da matria
seca. Sua determinao pode ser feita colorimetricamente pelo
mtodo do molibdo-vanadato, o qual apresenta uma sensibili-
dade relativamente boa na faixa de 0,1 a 20ppm. Este mtodo
sofre interferncia do Fe2+ e Cl- quando em concentraes supe-
riores a 100ppm e 75ppm respectivamente.
A colorimetria baseia-se na comparao da intensidade de
cor de solues de concentraes desconhecidas (amostras),
com a intensidade de cor de solues padres de um dado ele-
mento ou composto, responsvel pela cor destas solues. A in-
tensidade de cor das solues medida em aparelhos denomi-
nados colormetros, cujos resultados das leituras (absorbncia)
so correlacionados com as concentraes do elemento ou com-
posto em estudo, possibilitando o clculo de sua concentrao
nas solues problemas.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 165


A primeira etapa da anlise de fsforo em tecido vegetal
a digesto da amostra, a qual pode ser feita por via mida ou
por via seca. Por via mida, usa-se uma mistura de cido n-
trico com cido perclrico e pe-se a amostra para aquecer por
quatro horas. Por via seca, procede-se a calcinao da amostra,
conforme descrito na determinao de cinzas (R.M.).
O extrato vegetal devidamente preparado apresenta-se
como uma soluo incolor. Para a sua anlise por um mtodo
colorimtrico, faz-se necessrio adicionar um reagente espec-
fico (molibdato de amnio mais vanadato de amnio), o qual
reage com o fsforo formando um complexo de cor amarelada.
A intensidade de cor formada proporcional concentrao
de fsforo e pode ser medida em um colormetro e em seguida
correlacionada com solues padres de fsforo.

II. M archa A naltica

1. Pipetar para tubos de ensaio, separadamente, mL dos pa-


dres de fsforo (0; 25; 50; 75; 100 e 200mg.L-1) ou do extrato
vegetal (nitro-perclrico ou das cinzas);
2. Acrescentar a cada tubo de ensaio, 5mL de gua deionizada
e 1mL do reagente especfico, formado pela mistura de volu-
mes iguais de molibdato de amnio a 5% e vanadato de am-
nio a 0,25%;
3. Deixar em repouso por 5 minutos, fazer a leitura em color-

166 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


metro com filtro azul ou em espectrofotmetro a 470nm;
4. Elaborar um grfico, colocando no eixo x os valores dos pa-
dres de fsforo e no eixo y as leituras obtidas com os mes-
mos, e em seguida calcular a equao de regresso linear;
5. Calcular a concentrao de fsforo na amostra vegetal e ex-
pressar os resultados em g kg-1.

Observao: O colormetro tipo Klett-Summerson fornece as


leituras em unidades Kletts (u.k.), as quais equivalem a absor-
bncia multiplicada pelo fator 500.

III. R eagentes

Molibdato de amnio ((NH4)6Mo7O24). Soluo aquosa a


5%. Pesar 26,55g do sal tetra hidratado, dissolver em gua des-
tilada e completar o volume para 500mL.
Vanadato de amnio (NH4VO3). Soluo a 0,25%. Pesar
1,25g do sal e dissolver em cerca de 250mL de gua destilada
quente. Deixar esfriar e em seguida adicionar 175mL de cido
ntrico concentrado. Completar o volume para 500mL e guar-
dar em frasco escuro.
Soluo padro de fsforo. Preparar uma soluo estoque
contendo 1.000mg.L-1 de fsforo. Pesar 2,195g de fosfato mo-
nobsico de potssio (KH2PO4) seco em estufa, dissolver em
150mL de gua destilada e em seguida adicionar 5mL de cido

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 167


sulfrico 10 N. Completar o volume para 500mL com gua des-
tilada e guardar em frasco escuro.
Padres de trabalho (curva padro). Pipetar para bales vo-
lumtricos, de 100mL, separadamente, 2,5; 5,0; 7,5; 10,0 e 20,0mL
da soluo estoque de fsforo (1.000mg.L-1). Adicionar cerca de
50mL de gua destilada e em seguida 4,0mL de cido sulfrico
10 N. Completar o volume e transferir para frascos apropria-
dos. As solues preparadas conforme descritas acima contm
respectivamente 25, 50, 75, 100 e 200mg.L-1 de fsforo. O padro
zero preparado de forma semelhante aos demais, porm sem
a adio da soluo estoque de fsforo.

168 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


IV. B ibliogr afia

BEZERRA NETO, E.; BARRETO, L.P. Mtodos de anlises qumicas

em plantas. Recife: Imprensa Universitria da UFRPE, 2004. 149p.

MALAVOLTA, E.; VITTI, G.C. e DE OLIVEIRA, S.A. Avaliao do

estado nutricional das plantas: princpios e aplicaes. Piracicaba:

POTAFOS, 1989. 201p.

MIYAZAWA, M.; PAVAN, M.A.; BLOCH, M. de F.M. Anlise qumica

de tecido vegetal. Londrina: Instituto Agronmico do Paran, 1992.

17p. (IAPAR. Circular, 74).

SARRUGE, J.R.S. e HAAG. H.P. Anlises qumicas em plantas.

Piracicaba: USP-ESALQ, 1974. 65p.

SILVA, F.C. da. Manual de anlises qumicas de solos, plantas e

fertilizantes. Braslia: EMBRAPA, 1999. 370p.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 169


D eterminao
34 de E nxofre
M todo Turbidimtrico
do S ulfato de B rio

I. I ntroduo

O enxofre um macronutriente vegetal constituinte dos


aminocidos cistena, cistina e metionina e portanto das pro-
tenas. Desse modo, em condies de deficincia de enxofre a
sntese de protena inibida, levando queda na produtivi-
dade das culturas.
O teor de enxofre nas plantas varia de 1 a 15g kg-1 da ma-
tria seca. Para cafeeiro, cana-de-acar e pessegueiro, teores
da ordem de 2g kg-1 na matria seca so considerados adequa-
dos. Por outro lado, o milho, a soja e tomateiro exigem 3g kg-1
de S na matria seca.
A determinao turbidimtrica do enxofre fundamenta-se
na turbidez produzida pela reao do enxofre com o cloreto
de brio, formando sulfato de brio. Esta turbidez pode ser
medida em colormetro ou espectrofotmetro na forma de
transmitncia ou absorbncia.

170 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


II. M archa A naltica

a. Obteno da curva-padro
1. Em tubo de ensaio de 10mL adicionar 2mL das solues-pa-
dro de enxofre (0, 10, 15, 20, 25, 30, 40 e 50mg.L-1 de S).
2. Adicionar 0,2mL da soluo de HCl 6N contendo 20mg.L-1
de S.
3. Juntar cerca de 100mg de cristais de BaCl2.2H2O finamente
modo e deixar em repouso por 1 minuto.
4. Agitar durante 30 segundos, dissolvendo os cristais, e fazer a
leitura em at 8 minutos aps a adio do cloreto de brio, em
espectrofotmetro a 420nm.

b. No extrato vegetal
1. Transferir 2mL do extrato ntrico-perclrico para tubo de en-
saio de 10mL e em seguida proceder conforme descrito para
a obteno da curva-padro.
2. Calcular a concentrao de enxofre na amostra preparada,
expressando o resultado em grama por quilograma.

III. P reparo dos R eagentes

Soluo-estoque de enxofre (contendo 1.000mg.L-1 de S).


Pesar 5,434g de K2SO4 P.A , seco em estufa, dissolver em gua
deionizada e completar o volume para 1.000mL.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 171


Solues-padro de enxofre. Pipetar para bales volum-
tricos de 100mL, separadamente, 1,0 ; 1,5 ; 2,0 ; 2,5 ; 3,0 ; 4,0 e
5,0mL da soluo-estoque de enxofre (1.000mg.L-1), e em segui-
da completar o volume com gua deionizada. O branco (padro
zero) corresponde gua deionizada.
Soluo de HCl 6N contendo 20mg.L-1 de S. Adicionar em
um bquer de 1.000mL, 200mL de gua destilada, 500mL de
HCl P.A (d= 1,19g.L-1) e 0,1087g de K2SO4 P.A., previamente seco
em estufa. Agitar at dissolver o sulfato de potssio, transferir
para um balo volumtrico de 1000mL e completar o volume
com gua destilada.

IV. B ibliogr afia

BEZERRA NETO, E.; BARRETO, L.P. Mtodos de anlises qumicas

em plantas. Recife: Imprensa Universitria da UFRPE, 2004. 149p.

MALAVOLTA, E.; VITTI, G.C. e DE OLIVEIRA, S.A. Avaliao do

estado nutricional das plantas: princpios e aplicaes. Piracicaba:

POTAFOS, 1989. 201p.

SILVA, F.C. da. Manual de anlises qumicas de solos, plantas e

fertilizantes. Braslia: EMBRAPA, 1999. 370p.

172 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


D eterminao
de C loreto 35
M todo de M ohr

I. I ntroduo

O cloro um micronutriente dos vegetais superiores en-


contrado em abundncia nas guas dos oceanos e mares, as-
sim como em solos salinos. componente fundamental dos
fertilizantes cloreto de potssio e cloreto de amnio. Nas
plantas, esse micronutriente participa da fotossntese atu-
ando sobre a fotlise da gua, e tambm do processo de os-
morregulao. Seu contedo nos vegetais varia em funo de
diversos fatores, principalmente do meio onde as plantas so
cultivadas. De um modo geral, pode se considerar como
teores adequados para a maioria das culturas, de 340 a
1200mg.kg-1 de matria seca. Vrios so os mtodos empre-
gados para se analisar o on cloreto. O mtodo descrito neste
captulo consta de uma extrao com gua quente, partindo
de uma amostra pr-seca, e posterior quantificao pelo mto-
do volumtrico de Mohr.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 173


II. M archa A naltica

1. Pesar 1,0g da amostra pr-seca;


2. Transferir para um erlenmeyer de 50mL;
3. Adicionar 25mL de gua deionizada e tampar o mesmo;
4. Colocar para aquecer a 90C por 20 minutos;
5. Deixar esfriar e filtrar em tecido de nilon de malha fina;
6. Pipetar uma alquota de 10mL do extrato obtido acima, para
um erlenmeyer de 50mL;
7. Adicionar 1mL de cromato de potssio a 5%;
8. Titular com soluo padronizada de nitrato de prata 0,025 N.

Observaes
1. Estequiometricamente, 1,0mL de nitrato de prata 0,025 N
equivale a 0,8863mg de cloreto.
2. Veja exerccio proposto no ANEXO IV.

III. R eagentes

Soluo de nitrato de prata 0,025 N. Pesar 4,2468g de nitrato


de prata (P.A.), dissolver em gua destilada, completar o volu-
me para um litro e em seguida padronizar a mesma, titulando
com uma soluo padro de cloreto de sdio 0,05 N. Guardar
em frasco escuro.
Soluo de cromato de potssio a 5%. Pesar 50,0g de cro-

174 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


mato de potssio (K2CrO4) dissolver em gua destilada e com-
pletar o volume para um litro.

Observaes
Alguns detalhes envolvendo a anlise de cloreto pelo mtodo
de Mohr

Prova em branco:
Encher a bureta com AgNO3 0,025 N e em seguida zer-la;
Pipetar 10mL de gua deionizada para um erlenmeyer de
50mL;
Adicionar 1,0mL de cromato de potssio a 5%;
Titular e anotar o volume gasto.
Padronizao do nitrato de prata:
Realizar esta operao com trs repeties.
Pipetar 5,0mL de soluo padro de NaCl 0,05 N, para um
erlenmeyer de 50mL;
Adicionar 5,0mL de gua deionizada;
Acrescentar 1,0mL de cromato de potssio;
Titular e anotar o volume.
Titulao dos extratos das amostras:
Pipetar 10mL do extrato para um erlenmeyer de 50mL;
Acrescentar 1,0mL de cromato de potssio;
Titular com AgNO3 0,025 N padronizado, e em seguida ano-
tar o volume gasto para os devidos clculos.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 175


IV. B ibliogr afia

MALAVOLTA, E. Elementos de nutrio mineral de plantas. So

Paulo: Editora Agronmica Ceres, 1980. 251p.: il.

MARSCHNER, H. Mineral nutrition of higher plants. (2nd edition).

London: Elsevier Ltd., 1995. 674p.

OHLWEILER, O.A. Qumica analtica quantitativa. 2. ed. Rio de

Janeiro: Livros Tcnicos e Cientficos, 1988. v.2, 226p.: il.

SILVA, F.C. da. Manual de anlises qumicas de solos, plantas e

fertilizantes. Braslia: EMBRAPA, 1999. 370p.

176 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


D eterminao
de B oro 36
Mtodo Espectrofotomtrico
da Azometina-H

I. I ntroduo

O boro um micronutriente essencial s plantas. absor-


vido na forma de cido brico (H3BO3). Na planta se comporta
como pouco mvel ou imvel. Sua deficincia ocorre em tecidos
de crescimento, enquanto que os sintomas de toxidez aparecem
em tecidos mais velhos. O boro possui papel na formao da pa-
rede celular, diviso celular, crescimento celular e transporte de
carboidratos. O teor considerado como txico varia com a esp-
cie vegetal, assim para o cafeeiro 200mg.kg-1 nas folhas, esto as-
sociados com os sintomas de clorose malhada (Malavolta, 2006).
Fageria (1999) estudando arroz, feijo, milho, soja e trigo con-
cluiu que os nveis adequados na planta variaram de 10 a 75mg.
kg-1 e os txicos de 20 a 153mg.kg-1, dependendo da cultura.
A anlise de boro em tecidos vegetais importante para o
diagnstico de deficincia ou toxicidade. A determinao de
boro pode ser feita por vrios mtodos colorimtricos, baseados
em reaes com corantes orgnicos como azometina-H, curcu-

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 177


mina, carmina e quinalizarina (Sah & Brown, 1997). Dentre os
mtodos colorimtricos o mais utilizado o da azometina-H,
por ser menos susceptvel a interferncias, mais rpido e mais
sensvel, o nico inconveniente o preo do reagente que um
pouco elevado (Bataglia et al., 1983).
A metodologia com azometina-H baseia-se na formao de
um complexo de colorao amarelada, resultante da reao do
cido brico, com o reagente azometina-H. Os possveis interfe-
rentes para o mtodo so partculas em suspenso, que possam
aumentar a turbidez, ou interferir na colorao, a presena de
Fe e a contaminao de borossilicatos devido utilizao de vi-
drarias. Deve ser efetuada a digesto seca por calcinao, uma
vez que a digesto por via mida provoca perda de cido brico
por volatilizao (Malavolta et al., 1997).

II. P rocedimento A naltico

1. Pesar em cadinho de porcelana 0,250g da amostra vegetal


(m.s.);
2. Colocar para calcinar a 650C por 2 horas;
3. Deixar esfriar e em seguida dissolver as cinzas com 10mL*
de HCl 0,1 N.
4. Transferir 1,0mL* do extrato ou soluo padro de boro, para
tubo de ensaio (material plstico);
5. Adicionar 2,0mL* da soluo tampo e homogeneizar;

178 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


6. Adicionar 2,0mL* da soluo de azometina-H, agitar e aguar-
dar 30 minutos para o desenvolvimento da cor (amarela);
6. Efetuar a leitura em espectrofotmetro a 420nm, ajustando o
zero com soluo de HCl 0,1 N.
7. Proceder aos clculos com base na equao de regresso ge-
rada a partir da correlao entre a absorbncia e concentrao
de boro na curva padro. Expressar os resultados em mg.kg-1
de matria seca da amostra vegetal.
*OBS:. Usar pipetas de alta preciso.

III. R eagentes

Soluo de cido L-ascrbico a 1%. Dissolver 1g de cido


ascrbico em 100mL de gua deionizada;
Soluo tampo acetato. Dissolver 125g de acetato de am-
nio e 7,5g de EDTA (sal dissdico) em 200mL de gua destilada,
adicionar 62,5mL de cido actico glacial e completar o volume
para 250mL com gua deionizada;
Soluo de azometina-H 0,45%. Dissolver 0,45g de azo-
metina-H em 100mL de uma soluo de cido ascrbico a 1%.
Guardar em frasco escuro, no refrigerador, conservando por no
mximo uma semana;
Soluo de cido clordrico 0,1 N. Pipetar 8,3mL de HCl con-
centrado (12 N) para um balo volumtrico de 1000mL contendo
cerca de 500mL de gua destilada, homogeneizar, completar o

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 179


volume com gua destilada e acondicionar em frasco plstico;
Soluo padro de boro (soluo estoque 50mg.L-1). Dissol-
ver 0,286g de cido brico P.A. (H3BO3) em HCl 0,1 N, completar
o volume para 1L e acondicionar em frasco plstico.
Solues padres de trabalho. Pipetar para bales volum-
tricos de 100mL 2,0; 4,0; 8,0; 12,0 e 16,0mL da soluo estoque
e completar o volume com HCl 0,1 N, guardando em frascos
plsticos. Essas solues contm respectivamente 1,0; 2,0; 4,0;
6,0 e 8,0mg.L-1 de B. O branco (padro zero) corresponde solu-
o de HCl 0,1 N.

IV. B ibliogr afia

BATAGLIA, O.C; et al. Mtodos de anlises qumicas de plantas.

Campinas: Instituto Agronmico, 1983. 48p. (Boletim Tcnico, 78).

BROWN, J.C.; HU, H. Phloem boron mobility is species dependent:

evidence for phloem mobility in sorbitol-rich species. Ann. Bot., v.77,

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FAGERIA, N.K. Nveis adequados e txicos de boro na produo

de arroz, feijo, milho, soja e trigo. R. Bras. Eng. Agrc. Ambiental,

Campina Grande, v.3, n.1, p.30-33, 1999.

LIU, L.; SHELP, B.J.; SPIERS., G.A. Boron distribuition and

retranslocation in field-grown broccoli (Brassica oleracea var. Italica).

Can. J. Plant Sci., v.73, p.587-600, 1993.

180 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


MALAVOLTA, E. Manual de nutrio mineral de plantas. So Paulo:

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MALAVOLTA, E.; VITTI. G.C.; OLIVEIRA, S.A.; Avaliao do estado

nutricional das plantas: princpios e aplicaes. 2a Edio. Associao

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MIYAZAWA, M.; PAVAN, M.A.; BLOCH, M. de F.M. Anlise qumica

de tecido vegetal. Londrina: Instituto Agronmico do Paran, 1992.

17p. (IAPAR. Circular, 74).

RAIJ, B.van; BATAGLIA, O.C. Anlise qumica de solo. In: FERREIRA,

M.E.; CRUZ, M.C.P. eds. Micronutrientes na agricultura. Piracicaba:

POTAFOS/CNPq, 1991. p.333-356.

SAH, R.H.; BROWN, P.H. Techiniques for boron determination and

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SRIVASTAVA, P.C.; GUPTA, U.C. Trace elements in crop production.

Lebanon: Science Publishers, 1996. 356p.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 181


D eterminao
37 de S ilcio
M todo E spectrofotomtrico
do A zul de M olibdnio

I. I ntroduo

O silcio (Si) o segundo elemento em abundncia na crosta


terrestre, depois do oxignio. Embora o silcio seja encontrado
em todas as plantas em quantidades variveis, sua essenciali-
dade no foi ainda demonstrada, mesmo com a utilizao de
refinadas tcnicas de cultivo por hidroponia. Entretanto, as
pesquisas efetuadas por diversos autores mostram que princi-
palmente para gramneas, o Si exerce alguns efeitos benficos
como: melhora na arquitetura da planta, impedimento toxi-
dez devido ao excesso de Mn, diminui a taxa de transpirao,
confere maior atividade fotossinttica e aumenta a resistncia
das plantas s pragas e molstias.
O Si absorvido pelas plantas na forma de cido monossil-
cico no dissociado. A maior proporo do Si na planta est na
forma de slica amorfa hidratada, SiO2nH2O. O cido monossil-
cico mvel nas plantas, mas quando o Si se solidifica na forma
de slica, se torna imvel.

182 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


Em geral, so consideradas plantas acumuladoras de silcio,
aquelas que possuem teor foliar acima de 1%, e no acumu-
ladoras plantas com teor de silcio menor que 0,5%. Na plan-
ta, o silcio concentra-se nos tecidos de suporte, do caule e nas
folhas, podendo ser encontrado em pequenas quantidades nos
gros. Em geral, o contedo mdio de silcio das razes menor
se comparado com o caule e folhas, em alguns casos, como por
exemplo, a soja, o teor de Si na raiz maior do que nas folhas. O
silcio aparece naturalmente em altas concentraes nas folhas
de certas culturas. Na cana-de-acar, por exemplo, as concen-
traes podem variar desde valores muito baixos em folhas jo-
vens (0,14% de Si) at valores muito altos em folhas velhas (6,7%
de Si).
O mtodo espectrofotomtrico, baseado na formao do
complexo molibdo-silcico reduzido, tem sido o mais utilizado
para a determinao de silcio em plantas. O composto azul de
molibdnio resulta da reduo do cido molbdico-silcico obti-
do pela condensao, em meio cido, dos nions silicato e moli-
bdato. O sucesso desse mtodo est condicionado dissoluo
da slica presente nos materiais vegetais, utilizando-se comu-
mente NaOH. Devido contaminao atravs da slica contida
nos vidros, toda vidraria deve ser evitada. Dos elementos con-
tidos em cinzas de material vegetal, somente o fsforo tem sido
considerado interferente na determinao de silcio pelo mto-
do colorimtrico do azul de molibdnio. Dentre os complexan-

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 183


tes recomendados para a eliminao da possvel interferncia,
o cido tartrico e o oxlico so os mais empregados.

II. P rocedimento A naltico

Preparo do extrato
1. Tarar um cadinho previamente seco e pesar no mesmo 1,0g
da amostra pr-seca;
2. Carbonizar em fogareiro eltrico e em seguida calcinar por
4 horas a 600C;
3. Deixar esfriar, acrescentar 5mL de NaOH a 1%, e como aux-
lio de um basto de vidro, dissolver a cinza;
4. Transferir quantitativamente filtrando para um balo volu-
mtrico de 25mL;
5. Acrescentar ao cadinho, mais 5mL de NaOH a 1% para lavar
o mesmo, e transferir o lquido (quantitativamente e filtran-
do) para o mesmo balo volumtrico mencionado no item an-
terior;
6. Repetir por mais trs vezes a operao anterior, e em seguida
remover o funil e completar o volume para 25mL;
7. Homogeneizar o extrato e em seguida transferir para um
frasco de plstico devidamente limpo, seco e identificado.

Desenvolvimento da cor
1. Pipetar para tubos de ensaio de plstico, separadamente, 5mL

184 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


da soluo padro de silcio e dos extratos das amostras;
2. Acrescentar 1,0mL de cido sulfrico (0,5 M) a cada tubo de
ensaio;
3. Acrescentar 1,0mL de molibdato de amnio a 2%;
4. Agitar suavemente e esperar 5 minutos;
5. Acrescentar 1,0mL de acido oxlico a 2%;
6. Acrescentar 1,0mL de cido sulfrico (1,5 M);
7. Acrescentar 1,0mL de cido ascrbico a 2%;
8. Agitar suavemente, aguardar 20 minutos e fazer a leitura es-
pectrofotomtrica a 660nm.
9. Proceder aos clculos com base na equao de regresso ge-
rada a partir da correlao entre a absorbncia e concentra-
o de silcio na curva padro. Expressar os resultados em
mg.kg-1 de matria seca da amostra vegetal.

III. R eagentes

Soluo de cido sulfrico 1,5 M. Pipetar 21mL de H2SO4


concentrado (18 M) para um balo volumtrico de 250mL con-
tendo cerca de 200mL de gua destilada, homogeneizar e com-
pletar o volume;
Soluo de cido sulfrico 0,5 M. Pipetar 7mL de H2SO4
concentrado (18 M) para um balo volumtrico de 250mL con-
tendo cerca de 200mL de gua destilada, homogeneizar e com-
pletar o volume;

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 185


Soluo de cido L-ascrbico a 2%. Pesar 2,0g de cido as-
crbico, dissolver em gua destilada e completar o volume para
100mL;
Soluo de molibdato de amnio a 2%. Pesar 2,0g de
(NH4)6.Mo7O24.4H2O, dissolver soluo de H2SO4 0,5 M e
completar o volume para 100mL com o H2SO4 0,5 M;
Soluo de hidrxido de sdio 1%. Pesar 2,5g de NaOH, dis-
solver em gua destilada e completar o volume para 250mL;
Soluo padro de Si (1000mg.L-1). Pesar 0,4345g de silica-
to de sdio P.A. (Na2SiO3), dissolver em 10mL de hidrxido de
sdio a 1% e em seguida completar o volume para 100mL com
gua destilada;
Solues padres de trabalho. Pipetar para bales volu-
mtricos de 100mL, 0,2; 0,4; 0,6; 0,8 e 1,0mL da soluo padro
de silcio (1000 mg.L-1) e completar o volume com gua desti-
lada. Essas solues contm respectivamente 2,0; 4,0; 6,0; 8,0 e
10mg.L-1 de Si.
OBS.: Todas as solues devem ser guardadas em recipientes
de polietileno.

186 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


IV. B ibliogr afia

EPSTEIN E.; BLOOM, A.J. Nutrio mineral de plantas; princpios e

perspectivas. 2.ed. Londrina: Editora Planta, 2006. 403p.

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Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 187


D eterminao S dio
38
de

e Potssio em Tecidos Vegetais


por F otometria de C hama
I. INTRODUO

O potssio um macronutriente absorvido pelas plantas


sob a forma de K+, o qual se encontra nos tecidos vegetais na
concentrao de 2 a 110g kg-1 da matria seca. Embora o sdio
no seja considerado um elemento essencial para as plantas de
metabolsimo fotossinttico do tipo C3, ele elemento essencial
(micronutriente) para as plantas C4 e tambm para as plantas
CAM, tendo em vista a sua participao na regenerao do fos-
foenolpiruvato. No caso das halfitas, plantas nativas de habi-
tats salinos, esse elemento exigido em grandes quantidades
sendo, portanto um macronutriente para as mesmas (Epstein e
Bloom, 2006; Larcher, 2006).
A fotometria de chama uma tcnica espectroscpica de
emisso em que a amostra em soluo introduzida na chama
em forma de aerosol (nebulizada). A funo da chama neste
caso excitar eletronicamente os constituintes da amostra. Os
metais alcalinos e alcalinos terrosos so os elementos mais fa-
cilmente excitados temperatura das chamas. A excitao de

188 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


um tomo resulta da modificao temporria na posio dos
eltrons. Quando um eltron absorve energia, ele salta do seu
nvel para outro de maior energia (mais distante do ncleo). Ao
voltar para seu estado original, quando o tomo (ction) alcan-
a uma regio menos quente na chama, ele devolve a energia
absorvida em forma de ondas luminosas monocromticas. A
radiao emitida ento quantificada atravs de uma clula
fotoeltrica, a qual conectada a um galvanmetro, provoca o
desvio de um ponteiro, permitindo a avaliao da concentrao
do elemento que fora excitado, por comparao com solues
padres.
Para que a radiao originria de um determinado elemento
seja tanto quanto possvel a nica a sensibilizar a clula fotoe-
ltrica, ela dever atravessar um filtro que, idealmente, absorva
todas as radiaes, com exceo, da que interessa. Este tipo de
filtro denominado de filtro de interferncia. Os fotmetros, no
geral, so providos de um filtro para sdio, outro para potssio,
outro para clcio, outro para magnsio, etc.

II. M archa A naltica

1. Ligar o fotmetro de chama dez minutos antes de realizar as


leituras;
2. Zerar e ajustar o fotmetro para a faixa de leitura e em segui-
da proceder leitura das solues padres com o aparelho

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 189


ajustado para Na+ e K+. Anotar os valores das leituras referen-
tes s solues padres;
3. Proceder leitura com o extrato da amostra usado para a
determinao de fsforo, ou extrato nitro-perclrico. Se ne-
cessrio, isto , se a leitura for superior ao ponto mximo da
curva padro, proceder diluio do extrato, tomando 2mL
do mesmo e completando o volume para 25mL com gua
deionizada;
4. Anotar o valor da leitura referente a Na+ e K+ no extrato da
amostra.
5. Proceder aos clculos para encontrar a concentrao de po-
tssio e sdio na amostra preparada (pr-seca).

III. P reparo dos R eagentes

Soluo padro (estoque) de sdio e potssio 1000mg.L-1.


Pesar 0,1907g de cloreto de potssio e 0,2541g de cloreto de s-
dio (ambos P.A.), dissolver em gua deionizada e completar o
volume para 100mL.
Curva padro. Preparar uma curva padro de sdio e po-
tssio contendo 0, 5, 10, 15, 20 e 25mg.kg-1 de cada um destes ele-
mentos, partindo de uma soluo estoque de 1.000mg.L-1. Para
isto, pipetar para bales volumtricos de 200mL (separadamen-
te) as quantidades de 0, 1, 2, 3, 4 e 5 mL da soluo estoque e em
seguida completar o volume com gua deionizada.

190 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


IV. B ibliogr afia

BEZERRA NETO, E.; BARRETO, L.P. Mtodos de anlises qumicas

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fertilizantes. Braslia: EMBRAPA, 1999. 370p.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 191


Determinao
39 de N utrientes Minerais
por E spectrofotometria
de A bsoro Atmica
I. I ntroduo

A determinao analtica de grande parte dos nutrientes


minerais essencias s plantas tais como clcio, magnsio, cobre,
ferro, mangans e zinco, realizada atravs da espectrofotome-
tria de absoro atmica. Esta tcnica analtica foi desenvolvida
pelo australiano Alan Walsh, em meados da dcada de 1950,
para superar o problema de que grande quantidade dos ele-
mentos qumicos no era excitada pela temperatura das cha-
mas (exceo feita para os metais alcalinos) e se encontravam
no estado fundamental e portanto, e no poderiam ser determi-
nados pela tcnica de espectroscopia de emisso de chama.
A espectroscopia de absoro atmica fundamenta-se na
absoro de energia radiante (e consequente excitao) por ele-
mentos qumicos em estado fundamental. Na absoro atmi-
ca, o elemento a determinar levado condio de uma disper-
so atmica gasosa, atravs da qual se faz passar um feixe de

192 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


radiao com comprimento de onda que possa ser absorvido.
Sabe-se que uma certa espcie atmica neutra e no estado fun-
damental capaz de absorver radiaes em comprimentos de
onda iguais aos que ela, quando excitada, capaz de emitir.

Descrio Do Espectrofotmetro De Absoro Atmica


Os componentes do equipamento incluem uma fonte pri-
mria, a qual emite o espectro do elemento a determinar, um
dispositivo para a vaporizao da amostra, um monocromador
para isolar a raia analtica, um detector de radiao e um siste-
ma adequado para medir o sinal.

Fontes de Radiao
As fontes de radiao mais empregadas so as lmpadas de
vapor e as de ctodo oco. As lmpadas de vapor so tubos de
descarga de baixa presso, que contm vapor ao menos par-
cialmente composto do elemento de interesse. Por outro lado,
as lmpadas de ctodo oco so tubos de descarga de nenio ou
argnio a baixa presso, em que o vapor do elemento a excitar
produzido por volatilizao catdica durante a descarga. Este
tipo de dispositivo consiste em um tubo de vidro com paredes
grossas, contendo o gs nobre sob presso (1-2atm), provido de
um ctodo, em uma das extremidades, confeccionado ou reco-
berto com o elemento de interesse, comumente sob a forma de
um cilindro fechado, e um nodo na forma de um fio de tungs-

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 193


tnio. Existem lmpadas de ctodo oco para um nico elemen-
to, e tambm lmpadas multielementos, as quais contm vrios
elementos em uma nica estrutura de ctodo oco (ex.: Ca e Mg;
Cu e Mn, Cu e Zn; e Cr, Co, Cu, Fe, Mn e Ni).

Dispositivo de Vaporizao da Amostra


(Atomizador de Chama)
Serve para dispersar a amostra em forma de partculas
atmicas neutras no feixe de emisso do ctodo oco, para
que isso ocorra necessria a remoo do solvente e as mo-
lculas convertidas em tomos simples, isto pode ser feito
por uma chama, em forno de grafite (aquecimento sem cha-
ma) ou por forno de plasma.
O atomizador de chama formado por:
Nebulizador: do tipo pneumtico em que o fluxo dos
gases atravs de um orifcio cria um vcuo que arrasta a
amostra atravs de um tubo capilar. A mistura ar-amostra
emerge do nebulizador para o interior de uma cmara (c-
mara de nebulizao) em forma de aerossol, que se mistura
com o combustvel, em geral acetileno. A mistura torna-se
turbulenta devido ao de deflectores e finalmente, chega
ao combustor. As gotculas maiores so coletadas na cma-
ra de mistura e removidas por um dreno, e assim apenas
as partculas menores e homogneas chegam chama em
fluxo constante.

194 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


Queimador: em geral do tipo pr-mistura, com uma c-
mara especial onde a amostra misturada com os gases antes
da queima. Possuem fenda longa e so fabricados com titnio
para conferir maior resistncia s solues cidas, estabilidade
e inrcia. Os combustveis utilizados para produzir a chama
so acetileno e hidrognio, enquanto os oxidantes so ar, oxig-
nio e xido nitroso (Quadro 39.1).

Quadro39.1. Temperatura (oC) de combusto no queimador em funo do


combustvel e oxidantes empregados em espectroscopia de absoro atmica.

O X I D A N T E S (C)
COMBUSTVEIS xido
Ar Oxignio
Nitroso
Acetileno 2200 3050 2955
Hidrognio 2100 2780 -

Monocromador
A funo primordial do monocromador isolar a raia ana-
ltica do elemento de interesse das raias emitidas pela lmpada
de ctodo oco que no so absorvidas (raias vizinhas), assim
como a radiao de fundo da chama.

Detectores e Indicadores
Em geral so empregados tubos fotomultiplicadores para
detectar a energia radiante e converter em sinal eltrico, e so
idnticos aos utilizados em espectrofotmetros UV-visvel.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 195


Tipos de Instrumentos
Existem dois tipos de espectrofotmetros, os de feixe sim-
ples e os de duplo feixe. No sistema de feixe simples, a modu-
lao da fonte produz uma corrente alternada no detector. O
sistema fica submetido aos efeitos da variabilidade na emisso
da fonte e na sensibilidade do detector. necessrio um cer-
to tempo de espera para a estabilidade da emisso. Por outro
lado, no sistema de feixe duplo com corrente alternada, o mo-
dulador divide a luz da fonte em dois feixes, o feixe da amos-
tra que passa atravs da chama e o de referncia que circunda
a chama, e ao final os feixes so recombinados.
Particularmente para as anlises de clcio e magnsio h a
necessidade da adio de soluo de cloreto de estrncio ou de
cloreto de lantnio (que contenha de 2,0 a 5,0g de Sr ou La por
litro de soluo) para evitar interferncias provocadas pela
presena de fosfatos e aluminatos. Tanto o estrncio como o
lantnio tm a capacidade de impedir a formao de compos-
tos termicamente estveis (xidos refratrios) entre magnsio
ou clcio com fosfatos e aluminatos, os quais no so decom-
postos pela chama ar/acetileno. Desse modo, o estrncio e o
lantnio exercem o papel de agente liberador do clcio e do
magnsio, pois formam compostos quimicamente mais est-
veis com os interferentes.

196 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


II. M archa A naltica

1. Conectar a lmpada de catodo oco, correspondente ao ele-


mento a ser analisado, ao espectrofotmetro de absoro at-
mica (EAA). Marca CGB, modelo AA7000;
2. Ligar o EAA e deixar aquecendo por cerca de 15 minutos;
3. Ajustar o comprimento de onda (ajuste grosso) de acordo com
o elemento a ser analisado. Para isto, consulte o quadro 39.2;
4. Selecionar a lmpada a ser utilizada (bocal n 1 ou n 2) e
entrar com o valor da corrente em mA;
5. Ajustar o tempo de integrao para trs segundos, e tambm
a abertura da fenda conforme o quadro 39.2;
6. Fazer os ajustes horizontal e vertical do feixe luminoso e pos-
teriormente efetuar o ajuste fino do comprimento de onda;
7. Regular a presso de sada do ar comprimido para 3,4 bar;
8. Ligar o sistema de exausto dos gases e em seguida acender
a chama;
9. Fazer a calibrao do aparelho, utilizando os padres de tra-
balho relativos ao elemento em anlise. Esta calibrao rea-
lizada em absorbncia;
10. Aspirar o branco e depois zerar o aparelho;
11. Passar o EAA para o modo de concentrao e proceder
leitura dos padres de trabalho e logo em seguida a leitura
das amostras;
12. Aps ler todas as amostras, apagar a chama, desligar o

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 197


aparelho, fechar as sadas dos gases e desligar o sistema de
exausto.
OBS.: A amostra para o caso de tecidos vegetais o extrato
nitro-perclrico

Quadro 39.2. Corrente a ser empregada na lmpada, abertura da fenda e com-


primento de onda para calibrao do EAA correspondente a cada elemento
qumico a analisar.
Elemento Corrente da Abertura Comprimento
Qumico Lmpada* da Fenda de Onda
Ca 4,0 0,5 422,7
Mg 4,0 0,5 285,2
Cu 4,0 0,5 324,7
Fe 6,0 0,2 248,3
Mn 5,0 0,2 279,5
Zn 5,0 0,5 213,9
OBS.: Estes valores podem ser alterados em funo do modelo de aparelho e
do tempo de uso (idade) da lmpada.

III. R eagentes

a. Solues padres de clcio


Soluo estoque 1.000 mg.L -1 de Ca. Pesar 2,4970g de
CaCO3 seco, dissolver em 25mL de cido clordrico (d=1,18
12N) e completar para um litro com gua deionizada.
Padres de trabalho (0; 2; 4; 6; 8 e 10mg.L -1 Ca). Transfe-
rir para bales volumtricos de 100mL alquotas de 0,2; 0,4;
0,6; 0,8 e 1,0mL da soluo estoque (1.000mg.L-1 Ca) e com-

198 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


pletar o volume com soluo de cloreto de estrncio 1,52%.
O branco (padro zero) corresponde soluo de cloreto de
estrncio 1,52%.

b. Solues padres de magnsio


Soluo estoque 1.000 mg.L -1 de Mg. Pesar 1,0000g de
magnsio metlico, dissolver em 50mL de cido clordrico 5
N e completar para um litro com gua deionizada.
Padres de trabalho (2; 4; 6; 8 e 10 mg.L-1 Mg). Transferir
para bales volumtricos de 100mL alquotas de 0,2; 0,4; 0,6; 0,8
e 1,0mL da soluo estoque (1.000 mg.L-1 Mg) e completar o vo-
lume com soluo de cloreto de estrncio 1,52%. O branco (pa-
dro zero) corresponde soluo de cloreto de estrncio 1,52%.

OBS.: Recomenda-se que os extratos vegetais obtidos por di-


gesto nitro-perclrica sejam diludos (0,5+10) com soluo de
cloreto de estrncio 1,52%.

c. Solues padres de cobre


Soluo estoque 1.000 mg.L -1 de Cu. Pesar 1,0000g de co-
bre metlico, dissolver em 50mL de cido ntrico 6 N e com-
pletar para um litro com gua deionizada.
Padres de trabalho (1; 2; 3; 4 e 5mg.L-1 Cu). Transferir
para bales volumtricos de 100mL alquotas de 0,1; 0,2; 0,3;
0,4 e 0,5mL da soluo estoque (1.000mg.L-1 Cu) e completar o

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 199


volume com gua deionizada. O branco (padro zero) corres-
ponde gua deionizada.

d. Solues padres de ferro


Soluo estoque 1.000mg.L -1 de Fe. Pesar 1,0000g de ferro
metlico, dissolver em 20mL de cido clordrico 5N e 5mL de
cido ntrico 6 N, e completar para um litro com gua deio-
nizada.
Padres de trabalho (0; 2; 4; 6; 8 e 10mg.L -1 Fe). Transferir
para bales volumtricos de 100mL alquotas de 0; 0,2; 0,4; 0,6;
0,8 e 1,0mL da soluo estoque (1.000 mg.L-1 Fe) e completar o
volume com gua deionizada

e. Solues padres de mangans


Soluo estoque 1.000 mg.L -1 de Mn. Pesar 1,0000g de
mangans metlico, dissolver em 50mL de cido ntrico 6 N e
completar para um litro com gua deionizada.
Padres de trabalho (0; 1; 2; 3; 4 e 5mg.L-1 Mn). Transferir
para bales volumtricos de 100mL alquotas de 0; 0,1; 0,2; 0,3;
0,4 e 0,5mL da soluo estoque (1.000 mg.L-1 Mn) e completar
o volume com gua deionizada.

f. Solues padres de zinco


Soluo estoque 1.000 mg.L-1 de Zn. Pesar 1,0000g de zinco
metlico, dissolver em 40mL de cido clordrico 5 N e comple-

200 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


tar para um litro com gua deionizada.
Padres de trabalho (0; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 e 2,5mg.L-1 Zn).
Transferir para bales volumtricos de 200 mL alquotas de 0;
0,1; 0,2; 0,3; 0,4 e 0,5mL da soluo estoque (1.000mg.L-1 Zn) e
completar o volume com gua deionizada.

g. Soluo de Cloreto de Estrncio 1,52%. Pesar 15,2g de clo-


reto de estrncio hexahidratado P.A. (SrCl2.6H2O), dissolver em
gua deionizada e completar a um litro.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 201


IV. B ibliogr afia

BEZERRA NETO, E.; BARRETO, L.P. Mtodos de anlises qumicas

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EWING, G. W. Mtodos Instrumentais de Anlise Qumica. 5

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OHLWEILER, O.A. Fundamentos de Anlise Instrumental. Rio de

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SARRUGE, J.R.S. e HAAG. H.P. Anlises qumicas em plantas.

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fertilizantes. Braslia: EMBRAPA, 1999. 370 p.

202 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


C onselhos teis

A nexo 1
par a Tr abalhos
em L abor atrio
1. Tenha em mente que o laboratrio um lugar de trabalho e
que sempre envolve riscos. Preserve o silncio, o respeito aos
colegas e evite brincadeiras. Se necessrio, lembre este item
ao companheiro;
2. Prepare-se para qualquer experincia, lendo as orientaes e
a metodologia do manual antes de vir para o laboratrio;
3. Siga rigorosamente as instrues do professor e realize so-
mente experincias prescritas pelo mesmo;
4. Evite fumar no laboratrio, bem como sentar nas bancadas;
5. Procure usar bata ou avental apropriado;
6. Evite contato de qualquer substncia com a pele, e se isto
ocorrer, procure imediatamente lavar a pele com bastante
gua e em seguida comunique ao professor, informando tam-
bm sobre qualquer acidente que ocorra;
7. Caso seja necessrio testar o odor de algum produto qumico,
no coloque o frasco sob o nariz. Abane lentamente com a
mo os vapores desprendidos pelo frasco, at suas narinas;
8. Observe cuidadosamente o rtulo dos frascos que contm o
dado reagente, e antes de retirar qualquer poro do conte-

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 203


do, leia o rtulo duas vezes, certificando-se de que tem o
frasco certo;
9. Zele pela organizao do laboratrio e evite trocar as tampas
dos frascos, bem como trocar pipetas em uso;
10. Mantenha sempre a aparelhagem e bancadas limpas. Evite
derramamentos, mas se cair alguma coisa, limpe-a imediata-
mente com gua e detergente ou pano mido.

Observao: Se estes conselhos forem seguidos rigorosamente


por todos os alunos, entre outros benefcios que podem ser pro-
porcionados, podemos enumerar os seguintes: segurana, efici-
ncia, economia, maior aprendizagem e gratido do professor.

204 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


I nstrues par a E l abor ao

A nexo 2
de R el atrios
de A nlises Q umicas

Introduo. Faa uma breve introduo descrevendo sobre o


material analisado, sua importncia agrcola, industrial, etc.
Ainda neste item, descreva, brevemente, acerca da anlise em
foco, enfatizando sua importncia e/ou objetivo, bem como o
fundamento ou princpio em que a mesma baseada.
Material E Mtodos. Descreva neste item a marcha analtica,
isto , o roteiro utilizado na execuo da anlise. Faa cons-
tar neste item todo o material de laboratrio utilizado para
a realizao da anlise (vidrarias, equipamentos, reagentes
qumicos, etc.).
Resultados e Discusso. Nas anlises quantitativas, realize
os clculos necessrios, apresentando os resultados em per-
centagem, g.kg-1, ppm, mg.kg-1, ou na unidade convencional-
mente mais adequada para cada caso. Compare os resultados
obtidos pelo seu grupo com o que h na literatura especiali-
zada (livros, revistas cientficas, etc.).
Concluso. Neste item, procure dar uma interpretao aos
seus resultados.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 205


Observaes
a. Se consultar alguma literatura, acrescente ao relatrio mais
um item denominado Referncias Bibliogrficas, onde
dever constar a literatura consultada. Procure seguir as nor-
mas da ABNT ao referenciar a bibliografia.
b. Ao escrever cada relatrio, use os verbos na 3 pessoa do
singular ou plural, de forma impessoal, utilizando a voz
passiva.

206 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


Tr ansformaes de R esultados

A nexo 3
de A nlises Q umicas
A composio qumica dos vegetais varia com o teor de
umidade dos mesmos. A quantidade absoluta de um deter-
minado constituinte como protena, carboidrato, etc., presen-
te em uma amostra, no depende diretamente do seu teor
de umidade. Porm, o contedo relativo (concentrao) de
qualquer componente de uma amostra, varia com o teor de
umidade da mesma. Por isto, de fundamental importncia,
quando se expressar a composio de qualquer constituinte
vegetal, indicar qual o teor de umidade do mesmo.
No geral, a composio qumica dos vegetais expressa em
relao matria seca, isto , condio de umidade zero. A
matria seca , portanto, um referencial bastante til para se
comparar a concentrao de qualquer constituinte vegetal.
Conhecendo-se a composio qumica de uma amostra em
relao matria seca, possvel converter os valores para
outras condies, como as condies de campo (matria fres-
ca), por exemplo. Para tal, basta saber o teor de umidade que a
referida amostra apresenta nas condies de campo. Esse tipo
de converso, ou transformao de resultados, baseia-se no
fato de que, retirada a umidade de qualquer amostra vegetal,
o que resta a matria seca. Desta forma, todos os demais

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 207


constituintes de qualquer amostra vegetal so os que formam
a matria seca e, portanto, esto contidos nela.

208 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


E xerccios P ropostos

A nexo 4
D eterminao de umidade
1. Calcule a percentagem de umidade de uma amostra saben-
do que:
a. Tara do pesa-filtro ..................................... 26,4300g
b. Peso do pesa-filtro + amostra mida......... 31,4300g
c. Peso do pesa-filtro + amostra seca............ 27,6300g

2. Calcule a percentagem de umidade de uma amostra vegetal


que apresentou os seguintes dados de anlise:
a. Tara do pesa-filtro .................................... 41,1340g
b. Peso do pesa-filtro + amostra mida ........ 45,1340g
c. Peso do pesa-filtro + amostra seca ...........42,1340g

3. Em uma determinao de umidade de uma amostra vegetal,


obteve-se os seguintes dados:
a. Tara do pesa-filtro ................................. 44,2560g
b. Peso do pesa-filtro + amostra mida ..... 48,2560g
c. Peso do pesa-filtro + amostra seca ....... 44,7560g
Calcular a percentagem de umidade da amostra acima.

4. Em uma anlise vegetal, colocou-se 6,0000g de uma amostra


em um pesa-filtro de tara igual a 42,3890g e em seguida foi
levada estufa at completa desidratao. Sabendo-se que ao

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 209


sair da estufa o conjunto pesa-filtro mais amostra seca pesava
47,5490g, calcule a percentagem de umidade que continha a
amostra.

Tr ansformaes de resultados de anlises


qumicas

1. Uma amostra preparada de mandioca apresenta 12,00% de


umidade e 40,00% de amido. Calcule a percentagem de ami-
do que a referida amostra tem nas condies de campo, sa-
bendo-se que a umidade de campo da mesma 70,00%.

2. Consideremos duas amostras preparadas de uma plan-


ta forrageira. A amostra A contendo 17,60% de protena
e 20,00% de umidade (Uap), enquanto que a amostra B
contendo 18,70% de protena e 15,00% de umidade (Uap).
Calcule:
a. Qual das duas amostras contm mais protena em re-
lao matria seca?
b. Qual das duas amostras contm mais protena nas
condies de campo, sabendo-se que nas condies
de campo a amostra A contm 70,00% de umidade e a
amostra B contm 80,00% de umidade?
c. Quantos quilos de cada uma das forragens acima, nas
condies de campo, um animal precisaria comer para

210 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


ingerir um quilo de protena? Admitir que o animal se
alimentaria somente com um tipo de forragem (A ou B).

3. Sabendo-se que uma amostra preparada contm 27,00% de


protena e 10,00% de umidade, pede-se para calcular:
a. A percentagem de protena desta amostra nas condies
de campo, sabendo-se que a umidade de campo da referida
amostra 90,00 %;
b. A percentagem de protena da referida amostra em relao
matria seca.

4. Uma amostra vegetal contm 45,00% de fibra em relao


matria seca. Calcule a percentagem de fibra que contm esta
amostra nas condies de campo e na amostra preparada,
sabendo-se que a mesma apresenta 82,00% de umidade de
campo e 12,00% de umidade na amostra preparada.

5. Uma amostra vegetal nas condies de campo, com 83,00%


de umidade, contm 2,55% de carboidratos. Calcule qual a
percentagem de carboidratos que contm esta amostra em re-
lao matria seca e em relao amostra preparada com
11,00% de umidade.

6. A anlise de uma amostra preparada de uma forragem apre-


sentou os seguintes resultados:

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 211


Uap = 16,00% RM = 9,00%
ENN = 44,00% PB = 15,00%
EE = 5,00% FB = 11,00%
Pede-se para calcular a composio da amostra acima, em
relao matria seca e nas condies de campo, sabendo-se
que a umidade de campo 79,00%.

7. Os valores abaixo representam a composio qumica de uma


amostra vegetal em relao matria seca:
ENN = 25,00% PB = 26,00%
EE = 10,00% FB = 34,00%
RM = 5,00%
Pede-se para expressar a composio desta amostra nas con-
dies de campo com 74,00% de umidade e na amostra prepa-
rada, com 13,00'% de umidade.

8. Abaixo temos a composio qumica de uma amostra vege-


tal, nas condies de campo. Pede-se para transformar estes
resultados de anlise para a matria seca e para amostra pre-
parada com 20,00% de umidade.
Uc = 75,00% RM = 1,00%
ENN = 5,00% FB = 9,00%
EE = 4,00% PB = 6,00%

9. Uma amostra vegetal com a composio qumica abaixo,

212 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


colocada em uma estufa at completa desidratao. Pede-se
para expressar a sua composio quando a mesma sair da
estufa.
Uc = 60,00% RM = 2,00%
ENN = 8,00% FB = 14,00%
EE = 6,00% PB = 10,00%

D eterminao de resduo miner al

1. Na anlise do resduo mineral de uma amostra vegetal, fo-


ram obtidos os seguintes resultados:
Tara do cadinho 21,3690g
Peso do cadinho mais amostra 23,8690g
Peso do cadinho mais RM 21,5690g
Calcule a percentagem de cinzas da amostra acima.

2. Em uma determinao de cinzas de uma amostra vegetal,


pesou-se 1,8000g da amostra em um cadinho de tara igual a
26,4830g e em seguida foi colocada na mufla at completar a
calcinao. Calcule a percentagem de cinzas da amostra ana-
lisada, sabendo-se que o conjunto, cadinho mais cinzas, ao
sair da mufla pesava 26,5730g.

3. Uma amostra preparada de uma forragem foi analisada e ob-


tidos os seguintes resultados:

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 213


Tara do cadinho 23,9140 g
Peso do cadinho mais amostra 26,1140 g
Peso do cadinho mais cinzas 24,0020 g
Calcule a percentagem de cinzas na amostra analisada, de-
termine ainda quantos quilos de cinzas so produzidos por
hectare com a queima completa da referida forragem, saben-
do-se que a umidade da amostra preparada de 20,00%, a
umidade de campo 87,00% e a produtividade da forragem
de 13 toneladas por hectare.

D eterminao de acares redutores


pelo mtodo de E ynon -L ane

1. Em uma dosagem de acar invertido, pesou-se 20,0g de cal-


do de cana e transferiu-se para um balo de 200mL. Depois
de clarificado, completado o volume e filtrado, foi feita a titu-
lao, sendo gasto no ensaio definitivo 45mL do filtrado para
reduzir 10mL da soluo de Soxhlet, volume este que corres-
ponde a 50,9mg de acar invertido. Calcule a percentagem
de acar invertido no caldo analisado.

2. Para uma anlise de caldo de cana foi pesado 25,0g do caldo,


sendo o mesmo transferido para uma balo volumtrico de
250mL, clarificado, completado o volume e em seguida filtra-
do. Com o filtrado, foi titulado 10mL da soluo de Soxhlet,

214 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


gastando-se 30mL do mesmo. Calcule a percentagem de a-
car invertido existente no caldo analisado, sabendo-se que de
acordo com a tabela de Eynon-Lane, 30mL de soluo anali-
sada corresponde a 50,5mg de acar invertido.

3. Em uma anlise de caldo de cana, pesou-se 20,0g do mesmo,


transferiu-se para um balo volumtrico de 200mL, clarifi-
cou-se, completou o volume e em seguida filtrou-se. Com o
filtrado foi feita uma titulao da soluo de Soxhlet, sendo
gasto menos que 15mL do filtrado para reduzir 10mL da so-
luo de Soxhlet. Ento foi feita uma diluio da soluo fil-
trada, tomando-se 50mL da mesma e completando o volume
para 100mL com gua destilada. Desta soluo diluda foi
feita uma nova titulao, sendo gastos 25mL da mesma para
reduzir 10mL da soluo de Soxhlet. Calcule a percentagem
de acar invertido do caldo analisado, sabendo-se que se-
gundo a tabela de Eynon-Lane, 25mL de soluo analisada
coresponde a 50,4mg de acar invertido.

D eterminao de sacarose pelo mtodo


de E ynon -L ane

1. Para determinar o teor de sacarose de uma amostra de caldo-


de-cana, foi pesado 20,0g do mesmo, transferido para um ba-
lo volumtrico de 200mL, clarificado, filtrado e completado o

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 215


volume. Do filtrado foi feita a titulao de 10mL da soluo de
Soxhlet, para determinar o acar invertido previamente exis-
tente no caldo, gastando-se 35mL, o que na tabela de Eynon-
Lane corresponde a 50,7mg de acar invertido. Do filtrado
tomou-se 50mL para determinao de acar invertido total,
transferindo-se para um balo de 500mL, sendo usada esta
soluo diluda para titulao da soluo de Soxhlet, e gastan-
do-se 25mL, o que corresponde a 51,2mg de acar invertido.
Calcule a percentagem de sacarose no caldo analisado.

2. Em uma determinao de sacarose pelo mtodo de Eynon-


Lane, foi pesado 30,0g de caldo de cana, transferido para
um balo volumtrico de 250mL, clarificado, completado o
volume e filtrado. Na determinao do acar invertido pre-
viamente existente no caldo, gastou-se 40mL do filtrado para
reduzir 10 mL da soluo de Soxhlet, o que corresponde a
50,8mg de acar invertido. Para provocar a hidrlise da sa-
carose foi usado 100mL do filtrado e diludo para um balo
de um litro, sendo gasto na titulao do acar invertido total
21mL, volume este que corresponde a 51mg de acar inver-
tido. Calcule:
a. A percentagem de sacarose no caldo analisado;
b. Quantas toneladas de caldo de cana so necessrias para se
obter 450kg de sacarose, admitindo o rendimento industrial
de 100%.

216 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


3. Em uma dosagem de sacarose pelo mtodo de Eynon-Lane,
pesou-se 20,0g de caldo de cana, transferiu-se para um balo
de 200mL, clarificou-se, completou-se o volume e filtrou-se.
Com o filtrado encheu-se uma bureta para a dosagem do a-
car invertido previamente existente no caldo. Enquanto isto,
tomou-se 25mL do filtrado e provocou-se a hidrlise da saca-
rose, completou-se o volume para 250mL e dosou-se o acar
invertido total. Na dosagem do acar invertido previamente
existente no caldo, gastou-se 40mL da soluo, o que corres-
ponde a 50,8mg do acar invertido; na dosagem do acar
invertido total gastou-se 28mL do hidrolisado, o que corres-
ponde a 51,4mg de acar invertido. Calcule:
a. A percentagem de sacarose no caldo analisado;
b. Quantas toneladas do caldo acima so necessrias para se
obter 500kg de sacarose;
c. Quantos quilos de sacarose poderia se obter com 2 toneladas
do caldo de cana acima.

4. Em uma determinao de sacarose pelo mtodo de Eynon-


Lane, obteve-se os seguintes resultados de anlise:
Peso da amostra 25,0g;
Volume para o qual foi diludo a amostra: 250mL;
Volume do filtrado usado para a hidrlise da sacarose: 25mL;
Volume para o qual foi completado o hidrolisado: 200mL;
Volume gasto do filtrado para dosagem do acar inverti-

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 217


do previamente existente no caldo: 42mL (correspondente a
50,8mg de acar invertido);
Volume gasto do hidrolisado para dosagem do acar inverti-
do total: 24mL (correspondente a 51,2mg de acar invertido).
De posse destes dados, calcule:
a. A percentagem de sacarose do caldo;
b. Quantas toneladas de caldo de cana so necessrias para pro-
duzir 450kg de sacarose;
c. Quantos quilos de sacarose so obtidos a partir de 4,5 tonela-
das de caldo de cana.

D eterminao de amido pelo mtodo


de E ynon -L ane

1. Em uma determinao de amido, pesou-se 4,0g de uma


amostra, provocou-se a hidrlise da mesma, transferiu-se
para um balo volumtrico de 500mL e completou-se o volu-
me com gua. Em seguida, filtrou-se e com o filtrado foi titu-
lado 10mL da soluo de Soxhlet, gastando-se 25mL, quan-
tidade esta que equivale a 49,8mg de glicose. Pede-se para
determinar a percentagem de amido na amostra analisada.

2. Em uma determinao de amido, foi pesado 5,0g da


amostra, procedida a hidrlise e transferida para um ba-
lo de 500mL. Em seguida foi clarificado, completado o

218 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


volume e filtrado. com o filtrado foi titulada a soluo
de Soxhlet, gastando-se menos de 15mL. Ento foi feita
uma diluio tomando-se 100mL do filtrado e comple-
tando para um volume de 200mL com gua destilada, e
em seguida feita uma nova titulao, gastando-se 40mL
da soluo diluda, o que na tabela de Eynon-Lane cor-
responde a 50,6mg de glicose. Calcule a percentagem de
amido no material analisado.

3. Em uma determinao de amido, pesou-se 5,0g de


uma amostra preparada de mandioca, procedeu-se
a hidrlise, em seguida transferiu-se para um ba-
lo de 500mL e completou-se o volume com gua des-
tilada. Em seguida filtrou-se e com o filtrado foi ti-
tulada a soluo de Soxhlet, gastando-se 30mL do
filtrado, volume este que equivale a 50,1mg de glicose.
Calcule:
a. A percentagem de amido na amostra analisada;
b. Quantas toneladas so necessrias da amostra acima para
se obter 300kg de amido;
c. Quantas toneladas de amido poder se obter a partir de
um hectare de mandioca, sabendo-se que sua produtivi-
dade de 20 toneladas por hectare, a umidade da amostra
preparada 10,00% e a umidade de campo da amostra
60,00%.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 219


D eterminao de ex tr ato etreo

1. Em um trabalho de pesquisa foram pesados 4,0g de semente


de soja e colocados para extrair o leo, obtendo-se os seguin-
tes resultados:
Tara do balo coletor = 39,1250g
Peso do balo coletor + E.E. = 39,8450g
De posse desses resultados pede-se para calcular:
a. A percentagem de leo na semente de soja;
b. Quantos quilogramas de leo se obtm a partir de uma tone-
lada de semente;
c. Quantas toneladas de semente so necessrias para se obter
270kg de leo.

2. Em uma anlise de semente de amendoim foram pesados


15,0g do fruto (vagem), descascados e separadas as amn-
doas (sementes) das cascas, obtendo-se 6,75g de cascas. Das
amndoas foram pesados 2,5g e colocadas para extrair o leo,
obtendo-se os seguintes resultados:
Tara do balo coletor = 54,0420g
Peso do balo coletor + E.E. = 55,2170g
Com base nos resultados acima, pede-se para calcular:
a. Percentagem de cascas e de amndoas nos frutos;
b. Percentagem de leo nas amndoas e nos frutos, admitindo-
se que as cascas no contm leo.

220 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


3. Em uma anlise de semente de milho, pesou-se 3,0 g da mes-
ma e colocou-se para extrair o leo, sendo o mesmo recebido
em um balo coletor de tara igual a 45,2860g. Aps a extrao
completa de leo, o balo foi pesado com o leo, obtendo-se
45,4360g. Calcule:
a. A percentagem de leo na semente analisada;
b. Quantas toneladas de semente so necessrias para se obter
800kg do leo.

4. Em uma anlise de semente de arroz foram pesados 12,0g


da semente, descascada e separadas as cascas dos gros, ob-
tendo-se 4,80g do gro descascado. Sabendo-se que a percen-
tagem de leo no gro (descascado) de 3,00%, pede-se para
calcular:
a. A percentagem de casca na semente;
b. A percentagem de gro na semente;
c. A percentagem de leo na semente (com casca), admitindo
que as cascas no contm leo.

D eterminao de fibr a bruta

1. Na anlise de uma forragem, pesou-se 5,0g da amostra pre-


parada e colocou-se para extrair o leo, encontrando-se 8,00%
de leo neste material. Em seguida o resduo da determina-
o de leo (torta), foi tratado para a determinao da fibra

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 221


bruta (F.B.), obtendo-se os seguintes resultados:
Tara do pesa-filtro + papel de filtro = 27,4523g
Peso do pesa-filtro + papel de filtro + F.B. = 31,2243g
Pede-se para calcular:
a. A percentagem de fibra bruta na amostra preparada.
b. A percentagem de fibra bruta na amostra desengordurada
c. Quantos quilogramas desta forragem precisam-se colher no
campo para se obter 300kg de fibra bruta, sabendo-se que a
umidade da amostra preparada de 12,00% e a umidade de
campo de 84,00%.

D eterminao de protena bruta

1. Calcule a porcentagem de protena bruta determinada pelo


mtodo de Kjeldahl, sabendo-se que foi pesado 0,1g de uma
amostra vegetal, e que aps a digesto, o destilado foi titu-
lado com 1,8ml de cido sulfrico 0,05 N.

2. Numa anlise de protena bruta (PB) pelo mtodo de Kjel-


dahl, utilizou-se 100mg de uma amostra vegetal e gastou-se
0,5ml de cido sulfrico 0,2 N na titulao da amnia. Cal-
cule a percentagem de protena bruta na amostra.

3. Na determinao de protena bruta de uma leguminosa,


foi pesado 0,1g da amostra preparada, digerida e, em se-

222 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


guida, destilada. Aps a destilao, foi efetuada a titula-
o, gastando-se 1,5ml de cido sulfrico 0,1 N para titular
a amnia. Calcule a percentagem de protena na amostra
analisada.

4. Admita que a amostra referente ao problema anterior trata-


se de uma amostra preparada com 10,00% de umidade, e
que a mesma foi obtida de uma planta leguminosa a ser
utilizada como adubo verde, e que nas condies de campo
ela contm 70,00% de umidade. Com base nestas conside-
raes e nos dados do problema anterior, calcule quantos
quilogramas de nitrognio se adiciona ao solo em 5,0 hecta-
res de rea plantada, com a incorporao total da biomassa,
sabendo-se que a referida cultura apresenta uma produtivi-
dade de 6 toneladas por hectare.

5. Deduza a equao para se calcular diretamente a percenta-


gem de protena bruta (PB), em funo do volume do cido
gasto na titulao, conhecendo-se as condies padres de
trabalho, as quais so fornecidas abaixo:
Usar 100mg da amostra e titular a amnia destilada
com H2SO4 0,05 N.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 223


D eterminao de protena solvel pelo
mtodo de B r adford

1. Pesou-se 200mg de uma amostra vegetal e procedeu-se a


extrao utilizando-se um total de 20mL do solvente (etanol
a 80%). Aps a centrifugao do extrato bruto, procedeu-se
a cromatografia de partio para remover os pigmentos fo-
tossintticos e em seguida recolheu-se 200L da fase aquosa
para um tubo de ensaio. Acrescentaram-se 4mL do reagente
coomassie brilliant blue e procedeu-se a leitura espectrofotom-
trica, da mesma forma que foi realizado com as solues pa-
dres. Calcule o teor de protena solvel da amostra (mg.g-1 de
matria fresca), sabendo-se que a leitura espectrofotomtrica
referente a amostra foi 0,125, e que as leituras com solues
de BSA nas concentraes de 0 e 200g.mL-1 foram respecti-
vamente 0 e 0,250.

2. Para determinar a concentrao de protena solvel em bra-


quiria (Brachiaria humidicula), pesou-se 250mg de folhas
frescas, desprezando-se a nervura principal e triturou-se em
presena de 20mL de etanol a 80%. Posteriormente, centrifu-
gou-se e recolheu-se 2mL do sobrenadante. Procedeu-se a
cromatografia de partio para remoo dos pigmentos fo-
tossintticos, desprezando-se a fase orgnica e transferindo
a fase aquosa para tubo de Eppendorf. Aps o desenvolvi-

224 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


mento da cor devido a reao do coomassie brilliant blue com
as protenas, obteve-se uma leitura espectrofotomtrica de
0,139. Tendo em vista que as leituras dos padres de BSA (0
a 500g.mL-1) proporcionaram uma equao cujo coeficiente
angular foi 0,1 e o coeficiente linear 0,2, calcule o teor de pro-
tena solvel na braquiria em questo, expressando o resul-
tado em mg.g-1 de matria fresca.

D eterminao de aminocidos livres totais

1. Na determinao de aminocidos livres totais, pesou-se


500mg de tecido vegetal fresco e triturou-se utilizando 10mL
de etanol 80%. Procedeu-se a filtrao e depois adicionou-se
mais 10mL de etanol a 80% para lavar o resduo da filtrao.
Posteriormente, fez-se a cromatografia de partio para re-
moo dos pigmentos, e com o extrato aquoso procedeu-se
o desenvolvimento da cor com auxlio do revelador. A leitu-
ra espectrofotomtrica correspondente amostra foi 0,230.
As solues padres de leucina, nas concentraes de 0 e
25mg.L-1, aps o desenvolvimento da cor, proporcionaram
respectivamente as leituras de 0 e 0,500. Calcule o teor de
aminocidos livres na amostra, expressando o resultado em
mg.g-1 de material fresco.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 225


D eterminao de nitr ato

1. Com o objetivo de determinar o teor de nitrato em folhas de


alface (Lactuca sativa L.), pesou-se 500mg de folhas frescas e
triturou-se em homogeneizador de tecidos na presena de
10mL de etanol a 80%. Em seguida, o macerado foi filtrado
utilizando-se mais 10mL de etanol a 80%. Adicionou-se 20mL
de clorofrmio e agitou-se, desprezando a frao mais densa
e recolhendo a menos densa em tubo rosquevel. Pipetou-se
para um tubo de ensaio: 0,2mL do extrato aquoso e 0,8mL de
cido saliclico a 5% em H2SO4. Agitou-se e mediu-se a absor-
bncia encontrando-se uma leitura igual a 0,200. Sabendo-se
que as leituras efetuadas com as solues padres de nitrato
produziram a equao y = 0,01x 0,1, calcule a concentrao
de nitrato nas folhas de alface analisadas.

D eterminao da atividade
da nitr ato redutase

1. Utilizando os dados fornecidos abaixo, referentes a um en-


saio com a nitrato redutase, represente graficamente, a ativi-
dade da enzima em funo do tempo de reao. Expresse a
atividade em termos de mol do produto da reao por gra-
ma de tecido.

226 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


Dados referentes s solues Dados referentes
padres amostra
Curva Padro L. E. T.R. L.E.
(M de nitrito) (abs. x 103) (minuto) (abs. x 103)
0 0 10 200
10 200 20 350
20 400 30 450
30 600 40 530
40 800 50 580
50 1000 60 600
L.E.: leitura espectrofotomtrica; T.R.: tempo de reao

Para o exemplo acima, foram pesados 250mg da amostra (fo-


lha) e incubada em 5,0mL do meio de incubao.

2. Utilizando os mtodos de Michaelis-Menten, Lineweaver-


Burk e Eadie-Hofstee, represente graficamente e determine
os valores de KM e Vmax da enzima cujos resultados de sua
atividade so representados na tabela abaixo. Identifique que
tipo de inibidores so os que atuam sobre a enzima do exem-
plo abaixo.

Concentrao do Produto da Reao Enzimtica


Expressa em mM, Aos 5 E 10 Segundos aps o Incio da
Reao, na Ausncia e na Presena de Inibidores.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 227


C.S. Sem Inibidor Com Inibidor A Com Inibidor B
(mM) 5 seg. 10 seg. 5 seg. 10 seg. 5 seg. 10 seg.
1 0,223 0,445 0,167 0,333 0,185 0,370
2 0,363 0,727 0,286 0,572 0,303 0,607
4 0,533 1,067 0,444 0,888 0,444 0,888
6 0,632 1,263 0,546 1,092 0,527 1,053
10 0,741 1,482 0,667 1,333 0,618 1,235
15 0,811 1,622 0,750 1,500 0,676 1,352

C.S.: concentrao do substrato; 5 e 10 seg. significam


respectivamente 5 segundos e 10 segundos aps o in-
cio da reao.

D eterminao de clorofil a
pelo mtodo espectrofotomtrico

1. Com o objetivo de quantificar o teor de clorofila em folhas de


tomateiro (Lycopersicon esculentum Mill), pesou-se 200mg de
folhas frescas, transferiu-se para um tubo de ensaio apropria-
do e adicionou-se 10mL de acetona a 80%. Posteriormente este
material foi triturado e filtrado para um balo volumtrico de
25mL, completando-se o volume com o mesmo solvente uti-
lizado na etapa de triturao. Calcule a concentrao de clo-
rofila A e clorofila B nas folhas de tomateiro, expressando os
resultados em mg de clorofila por grama de folhas frescas.

228 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


D eterminao de vitamina C

1. Calcule o teor de vitamina C no suco de um limo, sabendo-


se que 2,0mL do mesmo foi titulado gastando-se 4,1mL de in-
dofenol. Para a padronizao do indofenol, usou-se 2,0mL de
soluo de cido ascrbico (1000 mg.L-1), gastando-se 16,0mL
do indofenol. Na realizao da prova em branco, gastou-se
0,1mL do indofenol.

2. Para a determinao de vitamina C em suco de acerola, trs


frutas foram espremidas e em seguida filtradas em tecido de
nilon de malha fina. O suco foi diludo, tomando-se 1,0mL
do mesmo e completando-se o volume para 100mL com gua
destilada. Em seguida, 2,0mL do suco diludo foi titulado,
gastando-se 3,2mL de indofenol. Calcule o teor de vitamina C
no suco da acerola acima, sabendo-se que na prova em bran-
co gastou-se 0,1mL de indofenol e que na padronizao do
indofenol foi gasto 15,5mL do mesmo. Para a padronizao
do indofenol, foram usados 2,0mL de cido ascrbico na con-
centrao de 1,0mg.mL-1.

D eterminao de fsforo

1. Para a anlise do teor de fsforo de uma amostra vegetal,


pesou-se 200mg da amostra preparada, procedeu-se a calci-

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 229


nao da mesma e em seguida o resduo mineral foi diludo
para 50mL. Calcule a percentagem de fsforo desta amostra,
sabendo-se que a leitura colorimtrica do extrato da amostra
foi igual a 100 (Absorbncia x 103). As solues padres de 20
e 60mg.L-1 de P apresentaram respectivamente as leituras 50
e 150 (A x 103).

2. Em uma determinao de cinzas pesou-se 2,5000g de uma


amostra vegetal, a qual aps a calcinao resultou em 375mg
de R.M. Desta cinza foi feita uma diluio para um volume
de 100mL e em seguida os procedimentos necessrios para a
anlise do teor de fsforo. A leitura colorimtrica do extrato
foi igual a 96 (Absorbncia x 103). Calcule a percentagem de
fsforo na amostra acima, bem como nas cinzas, sabendo-se
que a equao referente s leituras com as solues padres
foi y = a.x, o coeficiente angular foi igual a 3,5. Considere que
as leituras colorimtricas com as solues padres foram ob-
tidas com unidades de concentrao em partes por milho.

3. Em uma determinao de fsforo pesou-se 1,6000g de uma


amostra preparada, procedeu-se a digesto da mesma e em
seguida o extrato foi diludo, completando-se o volume para
200mL. A leitura colorimtrica com o extrato da amostra foi
igual a 50 (Absorbncia x 103) e as leituras colorimtricas com
solues padres em concentraes expressas em ppm, pro-

230 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


duziram a equao y = 2,5x. Calcule:
a. Quantos ppm de fsforo tem a amostra preparada.
b. Qual a percentagem de fsforo na amostra preparada.
c. Quantos gramas de fsforo contm 1,4 quilogramas de
amostra preparada.
d. Quantos miligramas de fsforo contm em 8 gramas de
matria seca, sabendo-se que a umidade da amostra pre-
parada de 20,00%.

4. Em uma determinao de fsforo pesou-se 2,0000g de uma


amostra vegetal, a qual aps a calcinao resultou em 0,2000g
de R.M. As cinzas foram solubilizadas e diludas para um
volume de 50mL. Com este extrato, procedeu-se as opera-
es necessrias anlise de fsforo, obtendo-se uma leitura
colorimtrica de 144 (Absorbncia x 103). Sabendo-se que as
solues padres de 10 e 50mg.L-1 produziram uma leitura
colorimtrica de 30 e 150 (A x 103), respectivamente, pede-se
para calcular:
a. A percentagem de P e de P2O5 na amostra acima;
b. A percentagem de P e de P2O5 nas cinzas.

05. Admitindo-se que a amostra referente ao problema anterior


(n 4) trata-se de uma amostra preparada que contm 16,00%
de umidade, e que a umidade de campo da mesma de
79,00%, calcule quantas toneladas de P2O5 so incorporadas

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 231


ao solo em uma rea de 5,0 hectares com a queima da cultura
em apreo, nas condies naturais. Considere que no perodo
da queima, a produtividade da biomassa (matria fresca) de
60 toneladas por hectare.

6. Para a anlise do teor de fsforo de uma amostra vegetal,


pesou-se 300mg da amostra preparada, procedeu-se a calci-
nao da mesma e em seguida o resduo mineral foi diludo
para 50mL. Calcule a percentagem de fsforo desta amostra,
sabendo-se que a leitura colorimtrica do extrato da amostra
foi igual a 120 (Ax103). As solues padres de 30 e 50mg.L-1 de
P apresentaram respectivamente as leituras 60 e 140 (Ax103).

7. Em uma determinao de resduo mineral pesou-se 3,7000g


de uma amostra vegetal, a qual aps a calcinao resultou em
436mg de R.M. Desta cinza foi feita uma diluio para um vo-
lume de 100mL e em seguida os procedimentos necessrios
para a anlise do teor de fsforo. A leitura colorimtrica do
extrato foi igual a 72 (Absorbncia x 103). Calcule a percenta-
gem de fsforo na amostra acima, bem como nas cinzas, sa-
bendo-se que a equao referente s leituras com as solues
padres foi y = ax. O coeficiente angular foi igual a 2,5. Con-
sidere que as leituras colorimtricas com as solues padres
foram obtidas com unidades de concentrao em mg.L-1.

232 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


8. Na determinao de fsforo pesou-se 1,5000g de uma amostra
preparada de folhas de goiabeira (Psidium guajava), prodeceu-
se a digesto da mesma e em seguida o extrato foi diludo,
completando-se o volume para 200mL. A leitura colorimtri-
ca com o extrato da amostra foi igual a 80 (Ax103) e as leituras
colorimtricas com solues padres em concentraes ex-
pressas em mg.L-1, produziram a equao y = 2,5x. Calcule:
a) Quantos mg.kg-1 de fsforo tem a amostra preparada.
b) Qual a percentagem de fsforo na amostra preparada.
c) Quantos gramas de fsforo contm 3,7 quilogramas de
amostra preparada.
d) Quantos miligramas de fsforo contm em 6 quilo-
gramas de matria seca, sabendo-se que a umidade da
amostra preparada de 18,00%.

9. Em uma determinao de fsforo pesou-se 2,2000g de uma


amostra vegetal, a qual aps a calcinao resultou em 0,2000g
de R.M. As cinzas foram solubilizadas e diludas para um vo-
lume de 50mL. Com este extrato, procedeu-se as operaes
necessrias anlise de fsforo, obtendo-se uma leitura colo-
rimtrica de 144 (Ax103). Sabendo-se que as solues padres
de 10 a 50mg.L-1 produziram uma leitura colorimtrica de 30
e 150 (Ax103), respectivamente, pede-se para calcular:
a) A percentagem de P e de P2O5 na amostra acima;
b) A percentagem de P e de P2O5 nas cinzas.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 233


10. Considerando que a amostra referente ao problema anterior
(n 9) trata-se de uma amostra preparada contendo 13,00% de
umidade e que a umidade de campo da mesma de 82,00%,
calcule quantos megagramas de P2O5 so incorporados ao
solo em uma rea de 8,0 hectares com a queima total da cul-
tura em questo, nas condies naturais. Considere que no
perodo da queima, a produtividade da biomassa (matria
fresca) de 70 toneladas por hectare.

D eterminao de enxofre

1. Para a determinao de enxofre em uma amostra vegetal,


pesou-se 0,5g de uma amostra pr-seca, procedeu-se a diges-
to e em seguida a diluio do extrato nitro-perclrico para
um volume final de 50mL. No extrato nitro-perclrico pro-
cedeu-se as etapas necessrias leitura espectrofotomtrica,
cuja absorbncia foi 0,250. Calcule o teor (gkg-1) de enxofre na
amostra analisada, sabendo-se que as leituras obtidas com as
solues padres de enxofre foram 0,100; 0,200; 0,300; 0,400 e
0,500 respectivamente para as concentraes de 10, 20, 30, 40
e 50mg.L-1.

2. Na determinao do teor de enxofre de uma amostra prepa-


rada de folhas de sorgo forrageiro (Sorghum bicolor (L.) Moen-
ch) encontrou-se os seguintes resultados:

234 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


Peso da amostra preparada que foi digerida quimica-
mente: 2,0g;
Peso final do extrato, aps a adio de gua destilada:
100g;
Equao de regresso linear obtida a partir das leituras
dos padres de S: y = 0,01x;
Leitura do extrato da amostra (em absorbncia): 0,200.
Calcule a concentrao de enxofre na amostra preparada, ex-
pressando os resultados em g kg-1.
Qual o teor de S nas condies de campo, sabendo que a umida-
de da amostra preparada foi de 10% e nas condies de cam-
po a umidade foi de 55%.

D eterminao de cloreto

Calcule o teor de cloreto na amostra (m.s.), admitindo que para


a sua determinao, pesou-se 500mg da mesma (m.s.), proce-
deu-se a extrao e o volume final do extrato foi completado
para 25mL com gua deionizada. Na titulao de 10mL do
extrato, gastou-se 4mL de nitrato de prata 0,025 N. Expressar
o resultado em mg.g-1 (m.s.).
OBS.: Estequiometricamente, 1,0mL de nitrato de prata 0,025
N equivale a 0,8863mg de cloreto.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 235


D eterminao de sdio e potssio

1. Calcule o teor de sdio e de potssio em uma amostra vegetal


que apresentou os seguintes resultados de anlise:
a. Quantidade da amostra analisada: 2,00g;
b. Diluio das cinzas (volume total do extrato): 100mL;
c. Leitura referente a sdio no extrato concentrado (antes
da diluio): 2;
d. Leitura referente a potssio no extrato diludo (aps a
diluio de 1:50): 15;
e. Valores das leituras da curva padro de sdio e potssio:
0mg.L-1 = 0 4mg.L-1 = 8 8mg.L-1 = 16
2mg.L-1 = 4 6mg.L-1 = 12 10mg.L-1 = 20

2. Para a anlise dos elementos minerais, foi pesado 2,5000g de


uma amostra, feita a calcinao e em seguida o resduo mine-
ral foi diludo e completado o volume para 200mL. Com este
extrato foi realizada a leitura fotomtrica para sdio, obtendo
7,5. Para obter a leitura fotomtrica referente ao potssio, foi
necessrio proceder uma diluio no extrato, na proporo de
1:100. Aps esta diluio, a leitura fotomtrica para potssio
foi igual a 4,5. Calcule o teor destes dois elementos minerais
na amostra analisada, sabendo-se que a leitura fotomtrica
com as solues padres de Na+ e K+ na faixa de 0 a 10mg.L-1
produziram a equao y = 1,5 x.

236 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


3. Considere que a amostra do problema anterior trata-se de
uma amostra preparada de batata inglesa (Solanum tubero-
sum) contendo 12,00% de umidade, e que a mesma amostra
nas condies de campo apresentou 47,20% de umidade. Com
base nestes dados e resultados do problema anterior, calcule
quantos quilogramas de potssio so exportados do solo pela
colheita da batata inglesa, em uma rea de 2 hectares, admi-
tindo que a produtividade desta cultura de 25 toneladas por
hectare.

Determinao de nutrientes minerais por EAA

1. Em uma determinao de clcio em folhas de mangueira


(Mangifera indica L.), pesou-se 0,5g da amostra foliar pr-seca
e promoveu-se a digesto nitro-perclrica. Aps a digesto, o
material digerido foi transferido quantitativamente para um
frasco de plstico de tara igual a 10,0000g. Em seguida o con-
junto frasco de plstico mais extrato foi pesado resultando
em 60,0000g. As leituras (em concentrao) dos padres de
clcio no espectrofotmetro de absoro atmica produziram
uma equao de regresso linear igual a y = 0,9637x 0,02214
(r=0,9988). O extrato nitro-perclrico foi diludo (1:25) em clo-
reto de estrncio. A leitura do extrato nitro-perclrico diludo
foi igual a 0,2336. Calcule o teor de clcio nas folhas da man-
gueira, expresse o resultado em g kg-1.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 237


2. Na anlise da concentrao de magnsio em folhas de goia-
beira (Psidium guajava L.), pesou-se 0,5g da amostra foliar
pr-seca e promoveu-se a digesto nitro-perclrica. Poste-
riormente, o material digerido foi transferido quantitativa-
mente para um frasco de plstico de tara igual a 9,6090g. Em
seguida o conjunto frasco de plstico mais extrato foi pesado
resultando em 58,8245g. As leituras (em concentrao) dos
padres de magnsio no espectrofotmetro de absoro at-
mica produziram uma equao de regresso linear igual a
y = 0,9985x 0,03362 (r = 0,9998). A leitura do extrato nitro-
perclrico diludo 21 vezes em cloreto de estrncio 1,52% foi
igual a 0,2336. Calcule o teor de magnsio nas folhas da goia-
beira, expresse o resultado em g kg-1.

3. Para analisar o teor de micronutrientes metlicos em amos-


tra de palma forrageira (Opuntia ficus-indica, Mill) pesou-se
400mg da amostra pr-seca e procedeu-se a digesto nitro-
perclrica. Com o digerido preparou-se 52g de extrato. As
leituras efetuadas no espectrofotmetro de absoro atmica
(em modo concentrao) revelaram os seguintes resultados:

238 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


Micro- Equao de Regresso Leitura do Extrato
Nutriente Nitro-Perclrico
Cobre Y = 1,0189 X 0,003792 0,1248
Ferro Y = 0,70048 X 0,03567 0,3847
Mangans Y = 1,1970 X + 0,03696 0,2458
Zinco Y = 0,9897 X + 0,01259 0,6348

Com base nestes resultados calcule o teor de cada nu-


triente analisado, expressando os resultados em mg.kg-1
de matria seca.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 239


Padronizao
A nexo 5

de S olues
I. I ntroduo

Soluo padro considerada aquela cuja concentrao


rigorosamente precisa, de forma que a mesma possa ser em-
pregada como referencial para a anlise quantitativa de deter-
minados compostos ou ons. Nem todos os reagentes qumi-
cos devem ser usados para se preparar, a priori, uma soluo
padro. Para se preparar uma soluo padro, deve-se partir
de um composto (reagente qumico) considerado como padro
primrio. Para que uma substncia possa servir como padro
primrio, so necessrios alguns requisitos, como: o reagente
deve ser bastante estvel, isto , que no seja higroscpico, no
se oxide e nem se decomponha com facilidade, deve ser bastan-
te solvel, alm de outras qualidades desejveis.

II. S oluo Padr o de C arbonato


de S dio N a 2 CO 3 0,05N

1. Pegar uma cpsula de porcelana* e acrescentar cerca de 5 gra-


mas de carbonato de sdio anidro (Na2CO3, Eq.: 52,995) e P.A.;
2. Colocar em estufa reguladora a 105C por duas horas;

240 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


3. Transferir para um dessecador contendo slica-gel bem ativa-
da e deixar esfriar por cerca de 30 minutos;
4. Pesar exatamente 2,6500 gramas do carbonato de sdio ani-
dro, transferir para um bquer de 250mL e dissolver com
gua deionizada;
5. Transferir quantitativamente para um balo volumtrico de
1000mL e completar o volume com gua deionizada;
6. Homogeneizar e transferir para um frasco de vidro mbar
devidamente etiquetado;

* Toda vidraria utilizada nas operaes de preparo de soluo


padro deve ser rigorosamente lavada e seca. Tambm reco-
mendado o mximo de rigor e preciso possvel em todas as
operaes envolvendo o preparo de uma soluo padro.

III. P reparo da S oluo Padr o


de H 2 SO 4 0,05N

Clculo:
Volume total a preparar: 2 litros;
Fonte: cido sulfrico (P.A.) concentrado (36N)
Clculo do volume de cido concentrado:
N . V = N . V
36N . V = 0,05N . 2000mL
V = 2,777mL

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 241


Procedimento
1. Pegar um balo volumtrico 2000mL, adicionar cerca de
1000mL de gua deionizada e em seguida acrescentar 2,8mL
de H2SO4 (36N). Neste caso pode ser empregada uma pipeta
graduada, mas no deve ser pipetado com a boca;
2. Completar o volume do balo volumtrico com gua deioni-
zada, homogeneizar bastante e em seguida padronizar.

IV. Padroniz ao do cido S ulfrico


com C arbonato de S dio

1. Enxaguar uma bureta devidamente limpa, com uma soluo


padro de carbonato de sdio (0,05 N);
2. Encher e zerar a bureta com o carbonato de sdio menciona-
do no item anterior;
3. Pipetar para um erlenmeyer de 50mL, 10,0mL da soluo do
cido sulfrico a ser padronizada (0,05N). Neste caso reco-
mendado usar uma pipeta volumtrica;
4. Acrescentar duas ou trs gotas do indicador vermelho de me-
tila ou alaranjado de metila;
5. Titular a soluo de cido sulfrico com o carbonato de sdio
(padro) at a mudana de cor;
6. Anotar o volume gasto e repetir a titulao mais duas vezes;
7. Tirar a mdia do volume de carbonato de sdio gasto e proce-
der com o clculo da normalidade empregando a equao de

242 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


volumetria: N.V = N.V. Se necessrio corrigir a concentrao
do cido. Do contrrio, anotar a normalidade exata e guardar
o cido padronizado em frasco escuro ou utilizar conforme a
necessidade.

V. P reparo de S oluo Padr o


de cido O x lico 0,05 N.

1. Preparar 1000mL. Pesar 3,1525g de cido oxlico dihidratado;


2. Transferir para um bquer de 500mL, acrescentar cerca de
200mL de gua deionizada e dissolver com o auxlio de bas-
to de vidro;
3. Transferir quantitativamente para um balo volumtrico de
1000mL, completar o volume do balo volumtrico com gua
deionizada;
4. Homogeneizar e transferir para um frasco de vidro limpo e
devidamente etiquetado.
OBS.: cido oxlico dihidratado (C2H2O4.2H2O), PM=126,1 e
Eq=63,05

VI. P reparo e Padroniz ao


de H idrxido de S dio 0,05 n

Preparo de 1000 mL de hidrxido de sdio 0,05N


1. Pesar 0,21g de hidrxido de sdio (P.A.);

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 243


2. Transferir para um bquer de 500mL;
3. Dissolver em cerca de 200mL de gua deionizada;
4. Transferir quantitativamente para um balo volumtrico de
1000mL e completar o volume com gua deionizada.

Padronizao do hidrxido de sdio.


1. Encher uma bureta com cido oxlico 0,05 N (padro) e em
seguida zerar a mesma;
2. Pipetar para um erlenmeyer de 50mL, exatamente 10mL da
base a ser padronizada. Neste caso recomendado usar uma
pipeta volumtrica;
3. Acrescentar duas ou trs gotas do indicador fenoftalena;
4. Titular a at a mudana de cor (vermelho para incolor);
5. Anotar o volume gasto e repetir a titulao mais duas vezes;
7. Tirar a mdia do volume gasto e proceder com o clculo da
normalidade empregando a frmula N.V = N.V. Se neces-
srio corrigir a concentrao da base. Do contrrio, anotar a
normalidade exata e guardar a base padronizada em frasco
escuro ou utilizar conforme a necessidade. Esta soluo no
tem muita durabilidade, portanto deve ser usada em menos
de uma semana.
OBS.: Alternativamente pode-se titular potenciometricamente
at pH 8,0.
Soluo de fenolftalena. Dissolver 1,0g de fenolftalena em
60mL de etanol e em seguida completar o volume para 100mL.

244 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


Este indicador incolor em pH abaixo de 8,3 e vermelho em pH
acima de 9,8.

VII. B ibliogr afia

ASSUMPO, R.M.V.; MORITA, T. Manual de solues, reagentes e

solventes. So Paulo: Edgard Blcher, 1969. 627p.

OHLWEILER, Otto Alcides. Qumica analtica quantitativa. 2. ed.

Rio de Janeiro: Livros Tcnicos e Cientficos, 1988. v. 2, 226p.: il.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 245


C omposio B romatolgica
A nexo 6

A proximada de A lgumas
H ortalias , F rutas e C ultur as
de L arga E scal a

Cultura U RM PB CHO EE FB
(%) (%) (%) (%) (%) (%)
Abbora 96,10 n.a. 1,20 9,80 0,30 1,30
Alface 95,00 n.a. 1,20 2,30 0,20 1,10
Batata ingl. 83,00 n.a. 1,80 17,60 0,10 0,40
Beterraba 87,00 n.a. 3,00 9,00 0,10 1,10
Cenoura 88,00 n.a. 1,20 10,70 0,30 1,80
Chuchu 97,00 n.a. 0,90 7,70 0,20 1,70
Pepino 96,00 n.a. 0,07 2,70 0,07 0,70
Melancia 95,00 n.a. n.a. n.a. n.a. 0,50
Rabanete 94,00 n.a. traos 2,80 n.a. n.a.
Repolho 92,00 n.a. 1,40 4,30 n.a. n.a.
Tomate 94,00 n.a. 1,00 3,40 0,30 1,00
Abacate n.a. n.a. 2,15 5,63 n.a. n.a.
Abacaxi n.a. n.a. 0,40 13,70 0,20 n.a.
Banana n.a. n.a. 1,40 26,00 0,25 n.a.
Coco 12,00 n.a. 5,70 27,90 50,60 n.a.

246 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


Cultura U RM PB CHO EE FB
(Cont.) (%) (%) (%) (%) (%) (%)
Goiaba n.a. n.a. 0,75 7,98 n.a. n.a.
Mamo n.a. n.a. 0,20 14,50 n.a. n.a.
Manga n.a. n.a. 1,00 27,6 n.a. n.a.
Arroz 12,00 1,20 7,50 76,00 1,90 0,60
Batata doce 70,00 1,30 1,92 32,00 0,50 1,30
Feijo 13,00 3,50 22,89 61,93 1,49 3,00
Mandioca 60,00 0,50 2,00 33,00 0,20 n.a.
Milho 10,00 1,60 11,80 70,00 4,50 2,00

OBS.: Valores expressos em relao matria fresca.


Compilado de diversos autores. n.a. = no apresentado

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 247


P rincpios B sicos de A nlises
A nexo 7

E spectrofotomtrica
A espectrofotometria uma tcnica de anlise qumica em
que se determina a concentrao de espcies qumicas (ons,
tomos, molculas) pela absoro de energia radiante (energia
luminosa ou luz).
A energia luminosa tem propriedades ondulatrias e
corpusculares e se propaga no espao a grandes velocida-
des, em geral em linha reta. As caractersticas ondulatrias
so definidas entre outros parmetros pelos diversos com-
primentos de onda (representados pela letra grega lambda
(), e geralmente expresso em termos de nanmetro (nm =
10 -9 m). Por outro lado, as propriedades corpusculares refe-
rem-se ao fato da radiao ser constituda por partculas de
energia, denominada de ftons, cuja energia denominada
de energia quntica e calculada pela expresso: E = h, em
que E representa a energia (expressa em Joules), a letra gre-
ga ni () a freqncia de onda (em Hertz, Hz) e h a constante
de Planck, cujo valor 6,6256x10 -34Js. Sabe-se tambm que
= c/, onde o valor de c corresponde a velocidade de uma
onda eletromagntica no vcuo, conhecido tambm como a
velocidade da luz, que possui o valor de 3 x 1010 cm.s -1. Da,
percebe-se que um fton de alta freqncia (baixo compri-

248 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


mento de onda) mais energtico do que um fton de baixa
freqncia (alto comprimento de onda).
A faixa de comprimento de onda das vrias regies do es-
pectro eletromagntico encontra-se no quadro a seguir.

Comprimento de Onda (nm) Regio do Espectro Luminoso


0,1 - 100 Raios X
100 - 400 Ultravioleta
400 - 800 Visvel
800 - 5000 Infravermelho
5000 - 30000 Microonda

A luz tem a propriedade de interagir com a matria e quando


isso ocorre uma parte de sua energia absorvida por eltrons
dos tomos que compem as molculas e a outra parte no
absorvida e simplesmente atravessa a matria e transmitida.
O estudo quantitativo da absoro da energia radiante por
solues coloridas fundamenta-se no princpio geral conhecido
como Lei de Lambert-Beer, segundo a qual a absorvncia (tam-
bm chamada de absorbncia) proporcional concentrao
da espcie qumica absorvente, mantendo-se constantes o com-
primento de onda, a espessura atravessada pelo feixe luminoso
e demais fatores. A lei de Lambert-Beer expressa por:

A = D.O. = a.b.c = log I0/I

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 249


Onde A = absorvncia
D.O. = densidade tica
I0 = intensidade de radiao incidente na soluo
I = intensidade de radiao emergente (ou transmitida)
a = coeficiente de absoro (ou ndice de absortividade), carac-
terstico do soluto
b = espessura da camada de soluo atravessada pelo feixe lu-
minoso
c = concentrao do soluto na soluo.
A escala de transmitncia (T%) dada por:
T = 100 I / I0

Nota-se, portanto que quando a absorbncia igual a zero,


no h absoro da luz devido substncia ser totalmente inco-
lor (na sensibilidade do aparelho), apresentando cem por cento
de transmitncia. O oposto ocorre quando o valor da absorbn-
cia tende ao infinito, com absoro completa, no caso de soluo
preta, tendo-se ento valor zero de transmitncia. Uma soluo
de uma dada cor absorver preferencialmente, a radiao lu-
minosa da cor complementar, conforme o quadro de escala de
cores a seguir.

250 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


Tabela 1. Comprimentos de ondas referentes s cores da radia-
o visvel
Comprimento
Cor Complemento
de Onda (nm)
400 - 465 Violeta Verde-amarelo
465 - 482 Azul Amarelo
482 - 487 Azul-esverdeado Alaranjado
487 - 493 Turquesa Vermelho alaranjado
493 - 498 Verde-azulado Vermelho
498 - 530 Verde Vermelho prpura
530 - 559 Verde-amarelado Prpura-avermelhado
559 - 571 Amarelo-verde Prpura
571 - 576 Amarelo-esverdeado Violeta
576 - 580 Amarelo Azul
580 - 587 Laranja-amarelado Azul
587 - 597 Alaranjado Azul-esverdeado
597 - 617 Laranja-avermelhado Turquesa
617 - 780 Vermelho Turquesa
FONTE: EWING. Gelen Wood. Mtodos instrumentais de anlise qumica.
v.1. Ed. Edgard Blcher, Sao Paulo. 296 p. 1972.

Assim, da expresso anterior pode-se deduzir:


I / I0 = T / 100
I0 /I = 100 / T
Desse modo, log (I0 / I) = log (100 /T)
Ento A = log 100 log T
E finalmente, A = 2 log T.
O equipamento utiliado para medir a intensidade de ra-
diao transmitida por uma soluo chamado de espec-

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 251


trofotmetro, ou simplesmente fotmetro (Figura 1), o qual
constitudo pelos seguintes componentes:
Uma fonte luminosa, que pode ser uma lmpada de tungs-
tnio ou de hidrognio (deutrio);
Um seletor de comprimento de onda, que pode ser um fil-
tro tico ou monocromador base de prisma ou de rede
de difrao. Quando o aparelho provido de filtro tico
ele chamado de fotocolormetro ou fotmetro, por outro
lado, quando provido de monocromador de prisma ou
de rede de difrao denominado de espectrofotmetro.
Um compartimento para a amostra, onde se coloca a cube-
ta, de quartzo para leituras na regio do ultravioleta abai-
xo de 350nm, ou de vidro para leituras em comprimentos
de onda de 350nm a 2m;
Uma clula fotoeltrica (detectores de radiao visvel e
ultravioleta, so transdutores que convertem a energia ra-
diante em sinal eltrico);
Um sistema de amplificao, constitudo de tubos foto-
multiplicadores de medida do sinal eltrico (potencime-
tro, medidor de potencial eltrico);
Um mostrador com a finalidade de expor as leituras es-
pectrofotomtricas (absorbncia ou tramitncia). Geral-
mente estes aparelhos podem ser acoplados um regis-
trador, impressora ou computador.

252 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


Figura 1. Esquema dos componentes de um espectrofotmetro ou colo-
Figura 1. Esquema dos componentes de um
rmetro.
FM = fotomultiplicador ou fototubo.
espectrofotmetro ou colormetro.
FM = fotomultiplicador ou fototubo.
B ibliogr afia

HARRIS, Daniel C. Anlise Qumica Quantitativa. 7 Ed. So Paulo:


BIBLIOGRAFIA
LTC, 2008. 886p.

HARRIS, DanielJ.;C.
KOBAL JNIOR, AnliseL.Qumica
SARTORIO, Quantitativa.
Manual de Anlise 7 Ed.
Instrumental.
So1 Paulo: LTC, 2008. 886p.
Ed. So Paulo: Moderna, 1978. 68p.
KOBAL JNIOR, J.; SARTORIO, L. Manual de Anlise
MENDHAM, J., DENNEY, R.C.; BARNES, J.D. Vogel Anlise
Instrumental. 1 Ed. So Paulo: Moderna, 1978. 68p.
Qumica Quantitativa. 6 Ed.. So Paulo: LTC, 2002. 464p.
MENDHAM, J., DENNEY, R.C.; BARNES, J.D. Vogel
Anlise Qumica
OHLWEILER, Quantitativa.
Otto Alcides. Fundamentos 6deEd.. So
Anlise Paulo: LTC,
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2002. 464p.
Rio de Janeiro: Livros Tcnicos e Cientficos, 1988. 486p.

OHLWEILER, Otto Alcides.


ROBYT, J.F.; WHITE, Fundamentos
B.J. Biochemical de Anlise
techniques: theory and
Instrumental. Rio de Janeiro: Livros Tcnicos e
practice. London: Academic Press. 1990. 407p.
Cientficos, 1988. 486p.

255

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 253
Tabela de Eynon -L ane para
A nexo 8

A nlise de Acares, Titulando


10 m L da S oluo de S oxhlet
V.S.A. Sacarose contida em 100 mL da soluo Glicose
(mL) 0g 1g 5g 10 g 25 g (mg)
mg de acar invertido
15 50,5 49,9 47,6 46,1 43,4 49,1
16 50,6 50,0 47,6 46,1 43,4 49,2
17 50,7 50,1 47,6 46,1 43,4 49,3
18 50,8 50,1 47,6 46,1 43,3 49,3
19 50,8 50,2 47,6 46,1 43,2 49,4
20 50,9 50,2 47,6 46,1 43,2 49,5
21 51,0 50,3 47,6 46,1 43,2 49,5
22 51,0 50,3 47,6 46,1 43,1 49,6
23 51,1 50,3 47,6 46,1 43,0 49,6
24 51,2 50,3 47,6 46,1 42,9 49,8
25 51,2 50,4 47,6 46,0 42,8 49,8
26 51,3 50,4 47,6 46,0 42,8 49,9
27 51,4 50,4 47,6 46,0 42,7 49,9
28 51,4 50,5 47,7 46,0 42,7 50,0
29 51,5 50,5 47,7 46,0 42,6 50,0
30 51,5 50,5 47,7 46,0 42,5 50,1
31 51,6 50,6 47,7 45,9 42,5 50,2
32 51,6 50,6 47,7 45,9 42,4 50,2
33 51,7 50,6 47,7 45,9 42,3 50,3

254 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


Cont.

V.S.A. Sacarose contida em 100 mL da soluo Glicose


(mL) 0g 1g 5g 10 g 25 g (mg)
mg de acar invertido
34 51,7 50,6 47,7 45,8 42,2 50,3
35 51,8 50,7 47,7 45,8 42,2 50,4
36 51,8 50,7 47,7 45,8 42,1 50,4
37 51,9 50,7 47,7 45,7 42,0 50,5
38 51,9 50,7 47,7 45,7 42,0 50,5
39 52,0 50,8 47,7 45,7 41,9 50,6
40 52,0 50,8 47,7 45,6 41,8 50,6
41 52,1 50,8 47,7 45,6 41,8 50,7
42 52,1 50,8 47,7 45,6 41,7 50,7
43 52,2 50,8 47,7 45,5 41,6 50,8
44 52,2 50,9 47,7 45,5 41,5 50,8
45 52,3 50,9 47,7 45,4 41,4 50,9
46 52,3 50,9 47,7 45,4 41,4 50,9
47 52,4 50,9 47,7 45,3 41,3 51,0
48 52,4 50,9 47,7 45,3 41,2 51,0
49 52,5 51,0 47,7 45,2 41,1 51,1
50 52,5 51,0 47,7 45,2 41,0 51,1
V.S.A.: volume da soluo analisada.
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Mtodos fsico-qumicos para anlise de ali-
mentos. So Paulo: Instituto Adolfo Lutz, 2008. 1020p.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 255


Concentrao de Alguns cidos
A nexo 9

Comuns em L aboratrios
% D
cidos em peso (g/mL)
Be N

cido actico glacial DAB. 6 96 1,06 8 17


cido actico glacial 99-100% 99-100 1,06 8 18
cido actico diludoDAB. 6 30 1,04 5,4 5
cido clordrico DAB. 6 25 1,12 16 8
cido clordrico conc. 32 1,16 20 10
cido clordrico conc. 36 1,18 22 12
cido clordrico fumegante 38 1,19 23 12,5
cido frmico 98-100 1,22 26 26
cido fosfrico DAB. 6 25 1,15 19 9
cido fosfrico conc. 85 1,69 59 45
cido fosfrico conc. 89 1,75 62 48
Acido ntrico DAB. 6 25 1,15 18,6 5
Acido ntrico concentrado 65 1,40 41 14
cido ntrico fumegante 99* 1,51 49 21
cido sulfrico concentrado 95-96 1,84 66 36
cido sulfrico diludo DAB. 6 16 1,11 14 4
cido sulfrico fumegante ** - 1,99 72 -
Anidrido actico 90 1,07 10 -
* valores aproximados. ** 65 % SO3-

Fonte: E. MERCK AG. Tabelas Auxiliares. Darmstad: E. Merck, s.d. 22 p.

256 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


Teores Adequados de Nutrientes

A nexo 10
Minerais nas Folhas
para Diversas Culturas
N P K Ca Mg S
Cultura
g Kg-1
Abacate 17,5-18,5 0,8-2,5 7,5-20,0 10,0-30,0 2,5-8,0 2,0-6,0

Abacaxi 20,0-22,0 2,1-2,3 25,0-27,0 3,0-4,0 4,0-5,0 2,0-3,0

Abbora (a) 30,0-35,0 6,0-7,0 24,0-26,0 48,0-49,0 9,0-10,5 -

Alface 34,0-40,0 4,0-6,0 50,0-80,0 14,0-20,0 3,0-7,0 -

Algodo 32,0 1,7 15,0 20,0 5,0 4,0

Alho 30,0-0,0 3,0 20,0-0,0 1,0-6,0 1,5-3,0 3,0-15,0

Amendoim 40,0 2,0 15,0 20,0 3,0 2,5

Arroz 30,0-40,0 1,4-2,7 14,0-28,0 1,6-3,9 1,2-2,1 1,7-2,0

Aspargo 29,5-49,0 1,8-3,5 11,6-26,4 8,6-17,6 2,7-7,0 -

Banana 26,0 2,2 28,0 6,0 3,0 2,0

Batata 55,0-65,0 3,5-5,5 45,0-65,0 10,0-20,0 3,0-5,0 -

Cacau 28,0 2,0 33,0 3,0 4,0 3,0

Caf 28,0 1,2 18,0 10,0 3,5 2,0

Cana de acar 16,0 1,2 12,0 4,0 2,0 2,0

Cebola 25,0-35,0 2,5-4,0 25,0-50,0 15,0-35,0 3,0-5,0 -

Cenoura 26,0 3,1 29,0-33,0 14,0-30,0 3,0-5,5 -

Citros 22,0 1,2 10,0 30,0 3,0 2,0

Coco 17,0 1,0 5,0 5,0 3,0 -

Couve-flor 25,0 5,0 25,0 35,0 - -

Feijo arranca 30,0-50,0 2,0-3,0 20,0-25,0 15,0-20,0 4,0-7,0 5,0-10,0

Feijo corda 18,0-22,0 1,2-1,5 30,0-35,0 50,0-55,0 5,0-8,0 1,5-2,0

Goiaba 22,0-26,0 1,4-1,9 14,0-20,0 7,0-15,0 2,5-4,0 2,5-3,5

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 257


Cultura N P K Ca Mg S
(cont.) g Kg-1
Mamo/limbo 45,0-50,0 5,0-7,0 25,0-30,0 20,0-22,0 10,0 4,0-6,0

Mandioca 51,0-58,0 3,0-5,0 13,0-20,0 7,5-8,5 2,9-3,1 2,6-3,0

Manga 12,0-13,0 1,2-1,4 4,0-6,0 30,0-33,0 5,0-6,0 1,6-1,8

Maracuj 40,0-50,0 4,0-5,0 35,0-45,0 15,0-20,0 3,0-4,0 3,0-4,0

Milho 27,5-32,5 2,5-3,5 17,5-22,5 2,5-4,0 2,5-4,0 1,5-2,0

Pepino (a) 30,0-35,0 6,-7,0 24,0-26,0 48,0-49,0 9,0-10,5 -

Pimento 30,0-45,0 3,0-7,0 40,0-54,0 4,0-6,0 10,0-17,0 -

Soja 45,0-55,0 2,6-5,0 17,0-25,0 4,0-20,0 3,0-10,0 2,5

Sorgo 13,0-15,0 4,0-8,0 25,0-30,0 4,0-6,0 4,0-6,0 8,0-10,0

Tomate 30,0 3,5 40,0 14,018,0 4,0 3,0

Videira/limbo 15,0-25,0 2,0-4,0 12,0-20,0 20,0-35,0 3,0-6,0 -


(a) folha com pecolo

B Cu Fe M Zn
Cultura
mg Kg -1

Abacate 15-100 5-15 50-200 30-500 30-150

Abacaxi 30-40 9-12 100-200 50-200 10-15

Alface 25-55 10-80 50-500 30-200 25-150

Algodo 50 8 - - 30

Alho 50 25 200 100 75

Amendoim 140-180 - - 110-440 -

Arroz - - 89-193 237-744 22-161

Aspargo 25-211 6-11 - 72-173 16-30

Banana 15 8 70 - 20

Batata 30-60 6-20 70-150 50-300 20-60

Cacau 32 15 - - 30

Caf 40 6 70 50 10

Cana-de-acar 10 6 100 50 10

Cebola 30-45 6-20 - - 20-55

Cenoura 29-35 5-7 120-350 190-350 20-50

258 | Anlises Qumicas e Bioqumicas em Plantas


Cultura B Cu Fe M Zn
(cont.) mg Kg-1
Citros 50 6 60 25 25

Couve-flor 40 5 - 60 -

Feijo de arranca 30-60 10-20 100-450 30-300 20-100

Feijo corda 150-200 5-7 700-900 400-425 40-50

Goiaba 20-25 10-40 50-150 80-180 25-35

Mamo/limbo 15 11 291 70 43

Mandioca 30-60 6-10 120-140 50-120 30-60

Manga 30 30 70 120 90

Maracuj 40-50 10-20 120-200 400-600 25-40

Milho 15-20 6-20 50-250 50-150 15-50

Pimento 40-100 10-20 - 26-300 35-260

Soja 21-55 10-30 51-350 21-100 21-50

Sorgo 20 10 200 100 20

Tomate 50-70 10-15 500-700 250-400 60-70

Videira/limbo 25-40 12-20 60-180 80-120 25-60

Fonte: CAVALCANTI, F.J. de A. et al. Recomendaes de adubao para o


estado de Pernambuco. Recife: Instituto Agronmico de Pernambuco IPA.
2008. p 64.

Egdio Bezerra Neto Levy Paes Barretos | 259


Tabel a P eridica
dos
ANEXO 11. TABELA PERIDICA DOS ELEMENTOS QUMICOS E lementos Q umicos
1 2
H He
1,008 4,003
3 4 5 6 7 8 9 10
Li Be B C N O F Ne
6,939 9,012 10,811 12,011 14,007 15,999 18,998 20,183
11 12 13 14 15 16 17 18
Na Mg Al Si P S Cl Ar
22,999 24,312 26,982 28,086 30,974 32,064 35,453 39,948
19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36
K Ca Sc Ti V Cr Mn Fe Co Ni Cu Zn Ga Ge As Se Br Kr
39,102 40,08 44,956 47,90 50,942 51,996 54,938 55,847 58,933 58,71 63,54 65,37 69,72 72,59 74,922 78,96 79,909 83,80
37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54
Rb Sr Y Zr Nb Mo Tc Ru Rh Pd Ag Cd In Sn Sb Te I Xe
85,47 87,62 88,905 91,22 92,906 95,94 99 101,07 102,905 106,4 107,87 112,40 114,82 118,69 121,75 127,60 126,904 131,30
55 56 57 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86
Cs Ba La Hf Ta W Re Os Ir Pt Au Hg Tl Pb Bi Po At Rn
132,905 137,34 138,91 178,49 180,948 183,85 186,2 190,2 192,2 195,09 196,967 200,59 204,37 207,19 208,98 210 210 222
87 88 89
Fr Ra Ac 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71
223 226 227
Ce Pr Nd Pm Sm Eu Gd Tb Dy Ho Er Tm Yb Lu
140,12 140,907 144,24 147 150,35 151,96 157,25 158,924 162,5 164,93 167,26 168,934 173,04 174,97
90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103
Th Pa U Np Pu Am Cm Bk Cf Es Fm Md No Lw
232,038231 238,04 237 242 243 247 247 251 254 253 256 254 257
A nexo 9
Semeador
Ceclia Amoroso

No imenso campo do mundo,


Tu s um semeador.
Semeia, mestre, semeia
Cada vez com mais amor.

No digas que o solo mau.


Que chove frequentemente.
Ou o sol castiga a terra
Ou que no serve a semente.

Enfrenta as dificuldades,
No podes desanimar.
Aqui, no campo do mundo,
Teu dever semear.

Tua palavra semente,


Teu exemplo, teu perdo.
semente todo zelo
Com que ds tua lio.

semente teu sorriso,


O teu aperto de mo.
semente tudo, tudo
Que vem do teu corao.

No esperas recompensa
Mas recompensa ters.
E nem, pensas em riqueza
Mas rico sei que sers.

Porque trabalhas num reino


Onde perder ganhar,
Onde dar receber.
Vamos, mestre, semear.

Semeia, semeia sempre.


Cada vez com mais amor.
No imenso campo do mundo,
Tu s um SEMEADOR.
Outras obras dos autores:

Mtodos de Anlises Qumicas em Plantas (2004)

O potssio no Metabolismo Vegetal (2000)

Introduo s Tcnicas Cromatogrficas (2000)

Tcnicas de Hidroponia (2000)

Anlise Qumica de Tecidos e Produtos Vegetais (1994)

EDU
EDITORA
UNIVERSITRIA
DA UFRPE

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