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INSTITUTO FEDERAL DE EDUCAO, CINCIA E TECNOLOGIA GOIANO -

CAMPUS RIO VERDE


DIRETORIA DE PESQUISA E PS-GRADUAO
PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM ZOOTECNIA

Bromatologia

Relatrio de Aula Prtica: Preparo das amostras de laboratrio, Determinao de


cinza bruta e da cinza cida insolvel, Determinao da Fibra Bruta, Extrato
Etreo

Autor: Joo Antnio Gonalves e Silva


Professora Dra. Fabiana Ramos dos Santos

Rio Verde - GO
Abril/2017

Relatrio de Aula Prtica: Preparo das amostras de laboratrio, Determinao de


cinza bruta e da cinza cida insolvel, Determinao da Fibra Bruta, Extrato
Etreo

Autor: Joo Antnio Gonalves e Silva


Professora Dra. Fabiana Ramos dos Santos

Relatrio entregue como parte das exigncias da


disciplina Bromatologia, no Programa de Ps-
Graduao em Zootecnia do Instituto Federal de
Educao, Cincia e Tecnologia Goiano - Campus
Rio Verde - rea de concentrao
Zootecnia/Recursos Pesqueiros.

Rio Verde - GO
Abril/2017
NDICE GERAL

Pgina

1 INTRODUO Aula 1: Preparo das amostras de laboratrio....................... 4


1.1 METODOLOGIA........................................................................................ 6
1.2 RESULTADOS E DISCUSSO.......................................................... 6
1.3 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS......................................................... 8
2.1 INTRODUO Aula 2: Determinao das cinzas brutas e cinza cida 11
solvel................................................................................................................
2.2 METODOLOGIA........................................................................................ 14
2.3 RESULTADOS E DISCUSSO.................................................................
2.4 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS......................................................... 16
3.1 INTRODUO Aula 3: Determinao da Fibra Bruta...............................
3.2 METODOLOGIA........................................................................................ 17
3.3 RESULTADOS E DISCUSSO.................................................................
3.4 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS.........................................................
4.1 INTRODUO Aula 4: Extrato Etreo......................................................
4.1.1. MTODO QUENTE............................................................................
4.1.2 MTODO DE BLIGH E DYER...............................................................
4.2 METODOLOGIA........................................................................................
4.3 RESULTADOS E DISCUSSO.................................................................
4.4 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS.........................................................
Aula 1: Preparo de Amostras de laboratrio

1 Introduo

A importncia do conhecimento acerca das caractersticas dos alimentos, assim como


da utilizao desses nutrientes na obteno do mximo potencial produtivo e reprodutivo do
animal inquestionvel. O valor nutricional dos alimentos se faz importante uma vez que
utilizado principalmente para fazer o balanceamento das raes e dietas que sero fornecidas
aos animais (DAGOSTINI et al., 2004).
A anlise foliar permite ao tcnico mensurar quais as possveis enfermidades ou
deficincia nutricionais que certa planta est passando (MALAVOLTA, 2006).
A matria seca (MS) tem sido utilizada, como importante parmetro para expressar a
produo de forrageiras (CRESPO 2002)
A secagem do material vegetal necessria para evitar alteraes qumicas e a degradao dos
tecidos durante o armazenamento, alm de ser requerida para estimar as quantidades de
nutrientes que os animais consumiro (PETRUZZI et al. 2005).
Para determinao de matria seca existem alguns mtodos que foram desenvolvidos
para esta finalidade, O mtodo de secagem convencional utiliza estufa de circulao forada
de ar e demanda de 12 a 72 horas, temperatura mdia de 65C, at atingir massa constante.
J o mtodo alternativo, com uma maior velocidade na secagem das amostras demorando
apenas 10 a 20 minutos (FIGUEIREDO et al., 2004; LACERDA et al., 2009) e melhor
aparncia das mesmas, mostrando ser uma excelente tcnica de secagem de plantas que
apresentam substncias volteis (Jacquin-Dubreuil et al.,1989).
A anlise de matria seca, por exemplo, que baseia-se na evaporao da gua presente na
amostra pela ao do calor, convencionalmente realizada com estufa de secagem a 105 C,
entretanto alguns laboratrios j se utilizam da radiao microondas segundo o mtodo de
SOUZA et al. (2002) para a realizao dessas anlises.
Um mtodo que fornea rapidamente valores referentes a teor de umidade e matria seca em
solos, silagem e forragens deve ser empregado para facilitar o trabalho dirio em laboratrios.
Acerca disso muitos trabalhos j foram feitos com o objetivo de comparar a secagem por
radiao de microondas com a realizada em estufa com circulao forada de ar, em amostras
variadas, como tomate, queijo, carnes, milho e forragem (AOAC 1995).
1.1 METODOLOGIA

Aps coleta representativa, as amostras devero ser preparadas para o seu ingresso no
laboratrio.
As amostras de forragens verdes, fezes, urina ou outros materiais com elevada
umidade que no forem processados imediatamente, devero ser congeladas a 5 a 10
C.
Preparo da amostra a ser analisada
1 Triturao prvia- triturao grosseira (reduzir o tamanho da amostra at que a mesma
possa passar pela moagem final sem danificar o equipamento).

2 Moagem Final:
- Amostras com teor de matria seca acima de 80% - moagem final
- Amostras com teor de seca abaixo de 80% pr-secagem
- Utilizar moinho de facas com peneiras de 10,20 ou 30 mesh (0,5, 10 ou 20 mm)

- Qual peneira usar?


O uso de peneiras grosseiras (2mm)superestimam o valor de FDN de diferentes materiais,
enquanto a moagem de amostras em peneiras de porosidade de 1mm propicia a extrao
eficiente do contedo celular pela ao do detergente neutro e maior superfcie especfica para
ao da a- amilase termoestvel (Valente et., al).

1.1 ROTULAGEM
- Tipo de Amostra
- Data de entrada no laboratrio
- Responsvel pelas anlises

2. DETERMINAO DA MATRIA SECA


Preservao do material
Comparao de resultados- base na MS
gua contida nos alimentos: livre, coloidal e metablica.
Determinao: mtodo indireto: determina-se a MS, admitindo-se que a amostra perde
peso corresponde a quantidade de gua perdida
Desvantagem do mtodo:
- Outras substncias volteis podem ser perdidas ocasionando erros.
- Altas temperaturas: perdas de subst. Volteis, reaes de degradao de AG e
AA e, reao de Mailard torna indisponvel alguns aminocidos- SECAGEM
POR LIOFILIZAO

2.1. Pr secagem x Secagem definitiva


- Mtodos gravimtricos
2.1.1 PR SECAGEM: Amostras com teor de MS < 80%
- Tambm chamada de ASA
- Deve ser realizada a 60+/- 5C em estufa de ventilao forada
- Balana deve ter preciso de pelo menos 0,1g
- Utilizar recipientes especficos para cada tipo de amostra
- Perodo de secagem- 72 horas
- Aps secagem, retirar a amostra, deixar esfriar por +/- 1 hora: Equilbrio: umidade da
amostra x umidade do ar.
- Pesar novamente
- REALIZAR OS DEMAIS PROCEDIMENTOS DE PREPARO E ROTULAGEM DAS
AMOSTRAS
2.1.2 SECAGEM DEFINITIVA
- Tambm chamada de ASE.
- Usada para amostras submetidas a pr-secagem ou para amostras que contm mais 80% de
MS.
- Balana deve ter preciso de 0,0001 g.
- Secar previamente em estufa, colocar em dessecador por uma hora e pesar (P1)
- Adicionar de 1 a 5 g da amostra ao recipiente, pesar e registrar a massa (P2).
- Transferir o recipiente com a amostra para estufa 105 C at peso constante
(aproximadamente 6 horas).
- Retirar da estufa, deixar resfriar em dessecador por uma hora e pesar (P3)
Clculos:
MTODO DE BLIGH DYER
1. Princpios gerais do mtodo: Este mtodo apresenta vantagens marcantes sobre a maioria
dos mtodos existentes de extrao e purificao de lipdeos, a saber: a) todas as classes de
lipdeos so extradas, polares e apolares, pois o clorofrmio um solvente orgnico para
qualquer classe de lipdeos, e o metanol tem funo dupla de facilitar o embebimento da
amostra e desfazer as ligaes lipdeos protenas (LOVREN, 1965); B) a extrao
realizada sem aquecimento, podendo os lipdeos extrados ser utilizados para qualquer tipo de
determinao, sem alteraes qumicas e fsicas; c) o mtodo independente da umidade da
amostra.
2. Material e Mtodos:
2.1 Material
2.1.1 Reagentes
- Clorofrmio p.a
- Metanol p.a
- Sulfato de Sdio (Na2SO4) p.a
- Sulfato de Sdio, soluo a 1,5% em gua
2.1.2. Equipamentos
- Erlenmeyer de 125 ml
- Tubos pirex de 150 x 15 mm, com tampade rosca com teflon ou PVC (30 ml)
- Mesa agitadora
2.2. Mtodo
Para amostras secas ou quase secas, at 10% de umidade.
Pesar entre 2,0 e 2,5 g (amostras com teor de gordura acima de 20%) ou entre 3,0 e
3,5g (amostras com teor de gordura abaixo de 20% da amostra finalmente moda e
homogeneizada).
Transferir para o erlenmeyer de 125 ml.
Adicionar exatamente 10 ml de clorofrmio e 10 ml de soluo de sulfato de sdio
1,5%.
Agitar vigorosamente por 2 minutos.
Deixar separar as camadas naturalmente por aproximadamente 20 minutos.
Succionar a camada metanlica superior e descartar.
Filtrar a camada inferior (pode ser adicionada 1g de Na2SO4) em papel de filtro
qualitativo (a soluo deve ficar limpida) para o tubo de 30 ml.
Medir exatamente 5,0 ml do filtrado e transferir para um bquer de 50 ml previamente
tarado.
Evaporar o solvente em estufa a 100C, esfriar em dessecadore pesar.
2.3. Clculo
( P3P 1)
ASA= x 100
( P2P1)
(P 3P 1)
ASE= x 100
(P 2P 1)

ASAxASE
Matria SecaTotal (MST )=
100

P1= Peso do recipiente, em gramas


P2= Peso do recipiente + amostra, em gramas
P3= peso do recipiente + amostra seca, em
gramas

OBSERVAO: Para fins de comparao com a literatura, todas as demais anlises devero
ser corrigidas pelo valor da ASE.
1.2 RESULTADOS E DISCUSSO
Tabela 1. Matria Seca de diferentes matrias (Gramneas e Leguminosa).

Em relao aos resultados apresentados na Tabela 1 foi visto que o teor de matria seca da
Brachiaria, do tifton 85 e da gliricdea apresentaram valores maiores que valores encontrados
por ( BR Corte-3, 2017), j valores fornecidos pela plataforma CBQAL que fornece dados
referentes a tamanho e idade dos alimentos, o valor que mais se aproximou da amostra
coletada em relao a matria seca foi a forrageira com idade de 31 a 45 dias, em cima dessa
perspectiva Sinclair et al. (2004), relataram o aumento no desenvolvimento da cultivar Tifton
85, revelando grande potencial desta forrageira em condies tropicais, denotando que
intensidade luminosa pode favorecer o desenvolvimento da cultivar Tifton 85, revelando
grande potencial desta forrageira em condies tropicais.
Os teores da matria seca da Brachiaria decumbens da amostra coletada quando comparadas
aos valores obtidos por Magalhes, (2007) pode ter ocorrido essa diferena em razo do
manejo adotado para aquela realidade em detrimento da amostra coletada para a aula prtica.
Em relao ao rami o valor apresentado da amostra no teve diferena quando comparado
com os valores obtidos na plataforma CBQAL, indicando que estes valores de matria seca
so obtidos a partir dos 30 dias aps a sua germinao.
O capim Napier apresentou um teor aproximado dos valores obtidos pela plataforma CBQAL
quando comparado aos dias de desenvolvimento da planta, a realidade entre a produo da
amostra coletada e dos dados obtidos podem variar conforme poca de coleta, forma de coleta
de amostras.
A glircidea analisada pela plataforma CBQAL e a amostra coletada no tiveram diferena to
significativa, podendo assim explicar quanto a este fato que essa pequena diferena pode se
dever a quantidade de amostra coletada, condies de desenvolvimento das forrageiras,
fertilidade do solo.
Tabela 2. Peso de matria seca de amostra com alto teor de umidade
ASA(%)

A partir do exposto na tabela o que se verificou foi a diminuio no teor de matria seca do
napier que pode ser explicada pela perda da gua que estava contida no material, dentro dessa
lgica importante considerar que, apesar de as plantas mais novas apresentarem maior
contedo de umidade, a perda de gua se processa mais facilmente, sendo tal fato relacionado
maior proporo de folhas. (MOSER, 1995).
As plantas forrageiras quando cortadas possuem teor de umidade entre 80 a
85%, que se reduz rapidamente para 65%. Nessa etapa a secagem rpida e envolve grande
quantidade de perda de gua. Os estmatos permanecem abertos, e o dficit da presso de
vapor entre a forragem e o ar alto. A perda de gua pode chegar a 1 g/g de MS/hora
(SULLIVAN, 1973).
Tabela 3. Matria Seca de amostra com baixa umidade em estufa (ASE%)

Conforme trabalho realizado por OLIVO (2006) o teor em percentagem de extrato etreo de
farinha de penas deve possuir pelo menos 7% e a amostra coletada no demonstrou tal
comportamento, em relao Valadares Filho (2006), a partir da plataforma CBQAL avaliou
que a mdia para o extrato etreo para o sorgo na base de 3,04. Segundo HARRIS JR (1990)
a percentagem de extrato etreo que a soja deve assumir de 17% e conforme mostrado na
tabela essa no foi a realidade,

Tabela 4. Matria seca de amostra com baixa umidade em estufa (ASE%)


1.3 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
AOAC Official Method 985.14 Moisture in Meat and Poultry Products In: CUNNIF, P. (Ed.)
Official Methods of analysis of APAC International. Arlington, VA: Association of Official
Analytical Chemists International, 1995.
CRESPO, R. J. Uso del horno microondas para la obtencin del valor de materia seca en
espcies forrajeras, 2002. 48 f. Tesis (Ingeniero Agrnomo) Universidad Nacional del Mar
del Plata, Facultad de Ciencias Agrarias, Balcarce, Argentina, 2002.
DAGOSTINI, P.; GOMES, P.C.; ALBINO, L.F.T.; ROSTAGNO, H.S.; SA, S.M. Valores de
composio qumica e energtica de alguns alimentos para Aves. Revista Brasileira de
Zootecnia, v.33, p.128- 134, 2004.
FIGUEIREDO, M. P.; SOUSA, S. A.; MOREIRA, G. R.; SOUSA, L. F.; FERREIRA, J. Q.
Determinao do teor de matria seca do capim elefante (Pennisetum purpureum Schum), em
trs estdios de maturidade fisiolgica, pelo forno de microondas. Magistra, v.16,p.113-119,
2004.
HARRIS JR., B, 1990. Feeding Raw or Heat Treated Soybeans to Dairy Cattle. Florida
Extension Bulletin DS 28.
PETRUZZI, H. J.; STRITZLER, N. P.; FERRI, C. M.; PAGELLA, J. H.; RABOTNIKOF, C.
M. Determinacin de materia seca por mtodos indirectos: utilizacin del horno a
microondas. Boletn de Divulgacon Tcnica 88, p. 4, 2005.
SINCLAIR, T. R.; RAY, J. D.; PREMAZZI, L. M.;
MALAVOLTA, E. Manual de nutrio mineral de plantas. Piracicaba: CERES, 2006.
631p.
MOSER, an L.E. Post-harvest physiological change in forage plants. In: Post-harvest
physiology and preservation of forages. Moore, K.J., Kral, D.M., Viney, M.K. (eds).
American Society of Agronomy Inc., Madison, Wisconsin. 1995. p.1-19.
MISLEVY, L. M. Photosynthetic photon flux density influences grass responses to
extended photoperiod. Environmental and Experimental Botany, v. 51, n. 1, p. 69-74, 2004.
OLIVO, R.; RABELO, R.A.; DEMARTINI, A.C. Fbrica de farinha e leo. O Mundo do
Frango - Cadeia Produtiva da carne de frango. Cricima: Imprint, 2006. p. 567-578.
SOUZA, G. B.; NOGUEIRA, A. R. A.; RASSINI, J. B. Determinao de matria seca e
umidade em solos e plantas com forno de microondas domstico. Boletim Embrapa. v. 33,
2002, 9p.
SULLIVAN, J.T. Drying and storing herbage as hay. In Chemistry and
biochemistry of herbage. Buttler, G.W.; Bailey, R.W. (ed). V.1 Academic
Press, London. p.1- 42. 1973.

Aula 2: Determinao das cinzas brutas e cinza cida solvel


2.1 INTRODUO
A importncia do conhecimento do valor nutritivo dos alimentos, assim como da utilizao
dos nutrientes na obteno do mximo potencial produtivo e reprodutivo do animal
inquestionvel. O valor nutritivo do alimento importante no balanceamento das raes e est
diretamente relacionado com sua composio qumica e energtica (DAGOSTINI et al.,
2004).
A cinza insolvel em cido (CIA) um composto mineral indigestvel, principalmente slica,
tratada com cido clordrico, sendo considerada um indicador interno, entretanto, como o
contedo de CIA baixo em gros, e eventualmente pode ser adicionadas fontes externas de
CIA (Celite, areia e slica) s dietas para melhorar a preciso das estimativas, vindo a ser
tambm considerado como um indicador externo (SALES & JANSSENS, 2003).

2.2 METODOLOGIA
1.DETERMINAO DE CINZAS BRUTA E CINZA CIDA INSOLVEL

1.1 CINZAS BRUTAS OU MATRIA MINERAL


Anlise de Cinzas ou Matria mineral- indicativo do total de minerais de uma amostra.
Amostras vegetais: alto teor de cinzas, muitas vezes rica em slica que no apresenta
valor nutritivo para os animais.
Contedo das Cinzas: Ca, K, Na, Mg, Fe, Cu,Co, Al, SO -4 , Cr, silicato, fosfato,
anions, , etc...
Princpio da Anlise: Decomposio das substncias volteis e Matria orgnica por
meio de aquecimento.
Cuidado: 1. Quantidade de amostra que permita a identificao do mineral a ser
analisado a partir das cinzas brutas = Massa de amostra varia com a sensibilidade
analtica. 2. Amostras muito gordurosas, elevar a temperatura vagarosamente.

1.1.1 PROCEDIMENTO

1. Preparar cadinhos de porcelana: deixar secar por 2 h em estufa a 105 C , esfriar em


dessecador e pesar.
2. Em caso de utilizao posterior das cinzas para determinao dos minerais, lavar
cadinhos com soluo de limpeza, (cido ntrico a 10%) e incinerar em mufla por 1
hora a 600C.
3. Pesar 1,5 a 2 g de amostra seca ao ar.
4. Proceder a queima em mufla por 3 horas aps a temperatura ter alcanado 600C.
5. Aps este tempo, desligar a mufla e somente abri-la em temperatura abaixo de 250C.
6. Os cadinhos devem esfriar em dessecador e posteriormente, pesados em balana
analtica.
7. Se aps o tempo de queima, no for produzida cinzas claras, recomenda-se a adio de
2 a 3 gotas de HNO 3 ou H2O2 a 20 volumes e retornara a amostra para a mufla por 1
hora.
Clculos:
P1
Cinzas= ( P 2P 1)
x 100

P1=Peso da amostra( ASA ), em


1.2 CINZA INSOLVEL EM CIDO gramas
A cinza cida insolvel, em cido indicativo total de slica de uma amostra.
P2= Peso do recipiente, em
Alimentos para humanos: importante para detectar adulteraes (areia em tempero,
talco em confeitos e sujeira me geleias de frutas ).
Alimentos animais: detectaadulteraes e tambm indicador de digestibilidade =
Fator de indigestibilidade FI = Indicador na dieta/ Indicador na excreta.
CDAnutriente= (Nutriente na dieta (Nutriente na excreta x FI)) x 100)
Princpio da anlise: Solubilizao dos minerais em cido, deixando como
resduo a slica.
1.2.1 Procedimento:
A cinza cida insolvel, frao indigervel presente nas dietas, excretas e digestas ser
determinada atravs de uma adaptao da metodologia utilizada na University of
Arkansas.
Pesar em tubos cnicos de borossilicato com capacidade para 15 mlaproximadamente
1,5 g de amostras pr-seca.
As amostras sero encaminhadas ao forno mufla com temperatura de 500C por 6
horas. Aps esfriar, ser adicionado a cada amostra, 5 ml de cido clordrico (4 mol -1)
e estas sero levadas ao bloco digestor a 125C, permanecendo nesta temperatura por
30 minutos.
As amostras devem permanecer em descanso at o completo esfriamento e ento,
sero centrifugadas por 10 minutos a 5.000 rpm. O cido deve ser descartado e em
cada amostra ser adicionado aproximadamente 3 ml de gua destilada-desionizada,
agitadas em aparelho vortex e novamente centrifugadas pelo mesmo tempo e rotao.
Proceder a lavagem com a gua por trs vezes consecutivas. Aps, retornar amostras a
estufa de secagem a 105 C por 4 horas. Novamente, as amostras retornaro ao forno
mufla a 500 C por 6 horas.
Aps o esfriamento das amostras proceder a pesagem
% de CAI = (g CAI/g de amostra na ASA)* 100
Observao: Como preparar soluo HCl a 4 molL-1 ?
Dados: HCl: C% = 37% C (concentrao) = 0.37/ MM (massa molar) = 36,46 g/mol; d
(densidade)= 1,19 g/mL
1- Calcula-se a molaridade da soluo inicial
Mi= 1000xCxd/MM
Mi=1000x0,37x1,19/36,46
Mi= 12,08 mol/L
2- Calcule a quantidade de cido a ser diluda
Mi x Vi = Mf x Vf
12,08x Vi = 4 x 1000
Vi= 302 mL, ou seja, a soluo ser preparada com 100 mL do cido 12 mol e diluir com
202mL de gua destilada.
Preparo da soluo: Lembre-se adicionar o cido na gua e nunca o contrrio!
2.3 RESULTADOS E DISCUSSO

Tabela 4. Cinza bruta de alimentos volumosos

Tabela 5. Cinza cida insolvel


2.4. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
DAGOSTINI, P.; GOMES, P.C.; ALBINO, L.F.T.; ROSTAGNO, H.S.; SA, S.M. Valores de
composio qumica e energtica de alguns alimentos para Aves. Revista Brasileira de
Zootecnia, v.33, p.128- 134, 2004.
SALES, J.; JANSSENS, G.P.J. The use of markers to determine energy matabolizability and
nutrient digestibility in avian species. Worlds Poultry Science Journal, v.59, p.214-237,
2003.
Aula 3: Determinao de Fibra Bruta
3.1 INTRODUO
A importncia do conhecimento do valor nutritivo dos alimentos, assim como da
utilizao dos nutrientes na obteno do mximo potencial produtivo e reprodutivo do animal
inquestionvel. O valor nutritivo do alimento importante no balanceamento das raes e
est diretamente relacionado com sua composio qumica e energtica (DAGOSTINI et al.,
2004).
A fibra afeta trs caractersticas dos alimentos, importantes na nutrio animal: est
relacionada com a digestibilidade e com os valores energticos; com a fermentao ruminal e
pode estar envolvida no controle da ingesto de alimento (MERTENS, 1992).
Fibra diettica como agora chamada, antigamente vinha com a nomenclatura de fibra
bruta, ela inclui teoricamente, materiais que no so digerveis pelo organismo humano e
animal. So insolveis em cido e base diludos em condies especficas. A fibra bruta no
tem valor nutritivo, desempenha papel fundamental nos movimentos peristlticos do intestino
(DAMODARAN, 2010).
Existem hoje diversas metodologias para a determinao de fibra bruta, porm
nenhuma totalmente satisfatria (MORETTO, 2008). A maioria dos laboratrios utiliza a
extrao cida e alcalina por ser o mtodo oficial (CECCHI, 2003)
Segundo MORETTO (2008), a fibra alimentar uma frao complexa, composta de
polissacardeos e lignina que se origina, principalmente, da parede celular e do cimento
intercelular de tecidos vegetais
Essa complexidade torna difcil a anlise utilizando a metodologia de fibra bruta, que a
oficial, pois uma tcnica deficiente, estimando valores baixos da proporo de fibra
existente nos alimentos, por destruir toda a sua frao solvel e parte da insolvel (CECCHI,
2003).

3.2 METODOLOGIA
Mtodo Analtico
Reagentes, solues e materiais:
- cido Sulfrico (H2SO4) 1,25% (v/v) ou 0,255 N (7 ML DE H2SO4 /L)
- Hidrxido de Sdio (NaOH) 1,25% (m/v) ou 0.313 N (12,5 g/L ).
- lcool Etilico (96-98%) e lcool isoamilico.
- ter Etilico ou acetona
- Sacos de TNT/ - Cadinhos de porcelana
- Determinador de fibras
Procedimento:
1. Marcar os cadinhos com lpis 6B.
2. Pesar os saquinhos e anotar suas massas (A).
3. Colocar 1 gde amostra dentro do saquinho de maneira a deix-la uniforme e anotar a
massa (B).
Fazer a hidratao nas amostras: Colocar as amostras dentro de um bquer com gua, para
no formar grumos, deixar uns 15 minutos, homogeneizando os saquinhos.
4. Colocar os sauinhos no suporte e introduzir o conjunto no equipamento.
5. Colocar 2L de solupcida 1,25% (para FB).
6. Agitar por alguns segundos.
7. Ligar o aquecimento de modo a proporcionar a fervura da soluo, ateno para a
temperatura de ebulio ( 100 Cao nvel do mar e temperaturas menores para altitudes
maiores); testar inicialmente a 100 C e reduzir 1 Cem 1 C at cessar a produo de
espuma em demasia, esta ser a temperatura de trabalho.
8. Atingindo a temperatura de trabalho marcar 30 minutos.
9. Terminada a extrao, desligar o aquecimento e escoar a soluo.
10. Colocar 2L de soluo bsica a 1,25%.
11. Quando comear a ferver, marcar 30 minutos.
12. Terminada a extrao, desligar o aquecimento e escoar os saquinhos.
13. Desligar o aparelho, escoar toda a gua e retirar o suporte com os saquinhos.
14. Lavar com lcool absoluto (Etanol P.A) : Colocar os saquinhos em um bquer,
cobrir com etanol e manusear 3 minutos, trocar por etanol novo e repetir o
procedimento por mais uma vez.
15. Lavar com Acetona P.A:
Colocar os saquinhos em um bquer, cobrir com Acetona e manusear suavemente por
aproximadamente 3 minutos trocar por acetona nova e repetir o procedimento por mais
uma vez.
16. Colocar os saquinhos sobre papel absorvente e secar bem.
17. Transferir os saquinhos com extrato para um cadinho de porcelana previamente limpo
e seco em estufa.
18. Colocar em estufa a 105 C por quatro horas.
19. Tirar da estufa, colocar em dessecador para esfriar.
20. Pesar o conjunto cadinho-extrato-cinza (C)
21. Levar mufla por 1 hora a 550 C.
22. Tirar da mufla, colocar em dessecador para esfriar.
23. Pesar o conjunto cadinho- cinzas (D).
24. Clculos:
(C A )D
Fibra Bruta= x 100
B

Onde:
A = Massa do saquinho vazio (g)
B = Massa da amostra (g)
C = Massa do conjunto cadinho-saquinho-extrato (g)
D = Massa do conjunto cadinho- cinzas (g)
Observaes:
- Observar o tempo exato de 30 min para cada etapa da digesto, sendo importante que a
fervura se d 1 min aps a amostra entrar em contato com cido ou com base.
- As lavagens/filtraes devem ser efetuadas o mais rpido possvel, sem deixar o material
esfriar.
- Material rico em gordura deve ser previamente desengordurado, para evitar excesso de
saponificao durante a hidrlise bsica e, consequentemente, prevenir a formao de
espuma.
- Se necessrio juntar 3 a 5 gotas de lcool iso-amilico.

Preparo da soluo a 1,25% de H2SO4 ou 0,255 N


Questo: Qual a massa de H2SO4 que dever ser dissolvida em 1000 mL?
1. Calcular o equivalente-grama de H2SO4 MM=98, Concentrao 99%, d= 1,84g/mL
Eqg= Massa Molecular/ n de H+ ionizveis = 98/2= 49
2. Achar a Massa de H2SO4 para 1000 mL de soluo 0,255 N:
N= n eq.g/V(L) 0,255= X / 1 X= 0,255 n eq.g
N= MS/Eq.g x V(l) o,255= y/49 y= 12,495 x 99% de concentrao = 12,37
3. Achar qual o volume usar? D=m/v
1,84=12,37/v
V= 6,7228 mL/L
3.3 RESULTADOS E DISCUSSO

Tabela 6. Fibra Bruta de diferentes Matrias primas


A fibra bruta das amostras demonstraram que o napier, o rami, a gliricidia demonstrou que as
amostras coletadas apresentaram teores encontrados na tabela de Vasconcelos Filho (2006).O
valor obtido pela anlise conferiu com a poca de anlise referente a percentagem de fibra
bruta do tifton, observado por AGUIAR, et. al, (2005). O valor encontrado por Valadares filho
para o Capim Paiguas houve grande diferena em relao a amostra coletada e a literatura,
para a brachiaria decumbens, comparando a valor da fibra bruta do sorgo da amostra com o
encontrado por Valadares filho houve grande diferena entre os valores, os demais materiais
existe pouca informao ou quase no existem materiais que mostrem valores acerca de
alguns parmetros.

3.4 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS


AGUIAR, A., P., A. , NETO, A., R., M., PAIXO, J., B. , APONTE, J., E., E. , RESENDE
JULIANO RICARDO , BORGES, L., F., C. , MELO JUNIOR, L., A. , SILVA, V., F.
COMPOSIO QUMICA DA FORRAGEM DO CAPIM TIFTON 85 (Cynodon
dactylon x Cynodon nlemfuensis cv. Tifton 68) EM PASTAGENS INTENSIVAS.
Anais:..., 2005.
CECCHI, H. M. Fundamentos tericos e prticos em anlise de alimentos.
2.ed.Campinas: UNICAMP, 2003.
DAGOSTINI, P.; GOMES, P.C.; ALBINO, L.F.T.; ROSTAGNO, H.S.; SA, S.M. Valores de
composio qumica e energtica de alguns alimentos para Aves. Revista Brasileira de
Zootecnia, v.33, p.128- 134, 2004.
DAMORADAN, S. Qumica dos alimentos. Porto Alegre: Artmed, 2010.
MORETTO. E. et al. Introduo Cincia de Alimentos. Florianpolis: Editora da UFSC,
2008
MERTENS, D.R. Anlise da fibra e sua utilizao na avaliao de alimentos e formulao de
raes. In: Simpsio Internacional de Ruminantes. Anais... SBZ-ESAL, 188, MG.,1992.

Aula 4: Extrato tereo


4.1 INTRODUO
A importncia do conhecimento do valor nutritivo dos alimentos, assim como da
utilizao dos nutrientes na obteno do mximo potencial produtivo e reprodutivo do animal
inquestionvel. O valor nutritivo do alimento importante no balanceamento das raes e
est diretamente relacionado com sua composio qumica e energtica (DAGOSTINI et al.,
2004).
A extrao de lipdios uma determinao importante em estudos bioqumicos,
fisiolgicos e nutricionais dos mais diversos tipos de alimentos e, portanto, deve ser realizada
com acurcia (BRUM, 2009)
A extrao de leo com solvente um processo de transferncia de constituintes
solveis de um material inerte para um solvente com o qual a matriz se acha em contato. Os
processos que ocorrem so meramente fsicos, pois o leo transferido para o solvente
recuperado sem nenhuma reao qumica (REGITANO-DARCE,1987).
As amostras desse tipo de anlise requerem cuidados especiais para a obteno da
frao lipdica, pois fatores como a co-extrao dos componentes no lipdicos e a oxidao
indesejada podem influenciar a qualidade final da frao lipdica. Os procedimentos clssicos
idealizados por Soxhlet em 1879, com refluxo de solvente por muitas horas, devem ser
evitados, j que favorecem as reaes de peroxidao e de hidrlise,(KATES,1972), podendo
comprometer resultados analticos posteriores, como a quantificao de certos componentes
lipdicos. Um dos procedimentos de extrao mais versteis e efetivos, que supera as
dificuldades mencionadas acima, a metodologia de Bligh & Dyer, (1959) uma verso
simplificada do procedimento clssico usando clorofrmio-metanol proposto por Folch et al.
(1959).
As tcnicas mais utilizadas para determinao do extrato etreo so: mtodo quente
(Goldfish) e mtodo frio (Sohxlet), sendo o ltimo o mais usualmente adotado em
laboratrio de anlise de alimentos para animais. O equipamento consiste em um conjunto
para aquecimento, evaporao e condensao do solvente que ir lavar a amostra que
contm o material a ser extrado. Porm esta tcnica apesar de ser uma das mais simples de se
utilizar, no a mais indicada para alimentos como sementes de oleaginosas, raes lquidas
ou contendo produtos lcteos (Silva & Queiroz, 2005).

4.2 METODOLOGIA
MTODO A QUENTE - GOLDFISH
APLICAO: Produtos ou subprodutos de origem animal e vegetal, raes e concentrados.
PRINCPIO: Baseia-se na extrao da frao gordurosa e demais substncias solveis atravs
de arraste por solvente.
MATERIAL E EQUIPAMENTO:
Balana analtica (preciso +/- 0,0001g)
Estufa de Secagem
Dessecador com cloreto de clcio ou slica gel anidros
Reboiler com boca esmerilhada
Aparelho extrator tipo Soxhlet
Papel de filtro qualitativo ou cartucho extrator de cermica ou celulose
REAGENTES:
ter de petrleo P.A
PROCEDIMENTO:
- Deixar o reboiler em estufa durante 1 hora a 105C e aps, no dessecador por 30 minutos.
- Tarar os reboilers (anotar o valor do reboiler).
- Pr aquecer o bloco 20C acima da temperatura de ebulio do solvente utilizado (esta ser a
temperatura de extrao).
- Usar cartuchos ( de celulose ou de papel filtro para acondicionar a atmosfera a ser
desengordurada.)
- Pesar 2g de amostra seca e triturada e introduzir no cartucho de papel filtro. Colocar o
cartucho com a amostra no cesto.
- Colocar 100 mL de solvente em cada reboiler.
- Segurando com uma das mos o tubo recuperador, encaixar o reboiler juntando as juntas
esmerilhadas.
- Soltar a trava da vareta abaixando o cesto de amostra, at que fique mergulhado no solvente.
Aps, fixar a vareta nesta posio.
- O tempo da extrao por mergulho varia de 1h 1h30min, em funo do tipo de atmosfera.
- Aps o trmino da extrao por mergulho, elevar a temperatura para 60C acima da ebulio
do solvente, soltar a trava da vareta e levantar os cestos at uma altura intermediria onde
possam receber o gotejamento de solvente condensado, fixando a vareta nesta posio por 30
minutos.
- Soltar a trava da vareta e pux-la para cima at que a tampa de teflon feche a sada de
solvente recuperado.
- A recuperao ser executada, ficando a gordura no tubo de reboiler e o solvente no tubo
recuperador.
- Aps a retirada dos reboilers do bloco coloc-los em estufa a 70/80 C para evaporao total
do solvente. Aps, transferi-los para o dessecador durante 30 minutos e pesar.
- O operador deve coletar o solvente recuperado aps a retirada dos reboilers do bloco, que
dever ser desligado. Para isso, colocar um bquer embaixo do tubo recuperador e soltar a
vareta permitindo que o solvente escoe.
CLCULO:
(Peso do balocom extrato peso do balo vazio)
%EE= x 100
Peso da amostra

MTODO DE BLIGH DYER


1. Princpios gerais do mtodo: Este mtodo apresenta vantagens marcantes sobre a maioria
dos mtodos existentes de extrao e purificao de lipdeos, a saber: a) todas as classes de
lipdeos so extradas, polares e apolares, pois o clorofrmio um solvente orgnico para
qualquer classe de lipdeos, e o metanol tem funo dupla de facilitar o embebimento da
amostra e desfazer as ligaes lipdeos protenas (LOVREN, 1965); B) a extrao
realizada sem aquecimento, podendo os lipdeos extrados ser utilizados para qualquer tipo de
determinao, sem alteraes qumicas e fsicas; c) o mtodo independente da umidade da
amostra.
2. Material e Mtodos:
2.1 Material
2.1.1 Reagentes
- Clorofrmio p.a
- Metanol p.a
- Sulfato de Sdio (Na2SO4) p.a
- Sulfato de Sdio, soluo a 1,5% em gua
2.1.2. Equipamentos
- Erlenmeyer de 125 ml
- Tubos pirex de 150 x 15 mm, com tampade rosca com teflon ou PVC (30 ml)
- Mesa agitadora
2.2. Mtodo
Para amostras secas ou quase secas, at 10% de umidade.
Pesar entre 2,0 e 2,5 g (amostras com teor de gordura acima de 20%) ou entre 3,0 e
3,5g (amostras com teor de gordura abaixo de 20% da amostra finalmente moda e
homogeneizada).
Transferir para o erlenmeyer de 125 ml.
Adicionar exatamente 10 ml de clorofrmio e 10 ml de soluo de sulfato de sdio
1,5%.
Agitar vigorosamente por 2 minutos.
Deixar separar as camadas naturalmente por aproximadamente 20 minutos.
Succionar a camada metanlica superior e descartar.
Filtrar a camada inferior (pode ser adicionada 1g de Na2SO4) em papel de filtro
qualitativo (a soluo deve ficar limpida) para o tubo de 30 ml.
Medir exatamente 5,0 ml do filtrado e transferir para um bquer de 50 ml previamente
tarado.
Evaporar o solvente em estufa a 100C, esfriar em dessecadore pesar.
2.3. Clculo
Peso dos lipdeos ( g ) x 4 x 100
Lipdeos totais=
Peso da amostra

4.3 RESULTADOS E DISCUSSO


Tabela 7. Extrato Etreo de Forragem (Goldfish)

Tabela 8. Extrato Etreo (BLIGH E DHYER)


No mtodo BLIGH E DHYER PODE TER OCORRIDO UMA SUPERESTIMATIVA DO
RESULTADO DAS FORRAGENS, POIS ALM DE EXTRAIR A GORDURA DO
MATERIAL, HOUVE A RETIRADA DE PIGMENTO.

4.4 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS


BRUM,A., A., S., ARRUDA L.,F., REGITANO-DARCE, M., A., B. Mtodos de extrao e
qualidade da frao lipdica de matrias-primas de origem vegetal e animal. Revista Quim.
Nova, Vol. 32, No. 4, 849-854, 2009
Bligh, E.G.; Dyer, W.J.; Can. J. Biochem. Physiol. 1959, 37, 911.
DAGOSTINI, P.; GOMES, P.C.; ALBINO, L.F.T.; ROSTAGNO, H.S.; SA, S.M. Valores de
composio qumica e energtica de alguns alimentos para Aves. Revista Brasileira de
Zootecnia, v.33, p.128- 134, 2004.
Folch, J.; Lees, M.; Stanley, G. H. S.; J. Biol. Chem. 1957, 226, 497.
REGITANO-DARCE, M. A. B.; LIMA, U. A.; Cincia e Tcnologia de Alimentos 1987, 7,
KATES, M.; Techniques of lipidology: isolation, analysis and identification of lipids, Elsevier
Applied Science: London, 1972, cap. 2.
SILVA, D.J.; QUEIROZ, A.C. Anlises de alimentos: Mtodos qumicos e
biolgicos. 3 ed. Viosa, MG: Editora UFV, 2005. 235p.