Manual Toxi

UNIVERSIDAD AUTNOMA DEL ESTADO DE MXICO
FACULTAD DE QUMICA
Manual de Prcticas
de
Toxicologa
Licenciatura
Qumico Farmacutico Bilogo
8 Semestre
Elabor: Dr. en C. Juan Carlos Snchez Meza

Dra. Araceli Amaya Chvez
Dra. Mara Dolores Hernndez Navarro
Toluca, Mxico, Febrero Julio 2011.

CONTENIDO
Pgina
I. Introduccin
II. Objetivo general del curso prctico
III. Reglamento del laboratorio de prcticas de Toxicologa
IV. Evaluacin del curso
V. Prcticas a desarrollar
V.1 Manejo de animales de experimentacin en estudios
toxicolgicos
V.2 Factores que modifican la respuesta txica de los xenobiticos
V.3 Hepatotoxicidad producida por exposicin a tetracloruro de
carbono
V.4 Determinacin de nitritos en jamn
V.5 Determinacin cualitativa de cianuro en material biolgico
V.6 Determinacin de etanol en sangre
V.7 Evaluacin de la toxicidad aguda del metil paratin en ratn
V.8 Interaccin entre barbitricos y xenobiticos organofosforados
V.9 Terapia antidotal
V.10 Determinacin de nitritos como contaminantes en alimentos y
sus efectos en el organismo
V.11 Produccin de metahemoglobinemia por nitritos y su
tratamiento con azul de metileno.
V.12 Determinacin de la DL50 de paratin en ratones y
determinacin de colinesterasa en la sangre de los mismos
V.13 Cintica de eliminacin del cido acetil saliclico y su relacin
con el dao heptico
V.14 Efecto del pH en la liberacin de plomo en utensilios de
cermica.
Proyecto
VI. Normatividad aplicable al manejo de animales de laboratorio
para el desarrollo de estudios toxicolgicos
VII. Vas de administracin y obtencin de muestras biolgicas
VIII Mtodos de sacrificio
IX. Manejo de residuos peligrosos y biolgico-infecciosos
X. Bibliografa general
I. INTRODUCCIN
La Toxicologa abarca un amplio campo de investigacin relacionado con la

identificacin, cuantificacin y evaluacin de los efectos adversos de una gran
diversidad de sustancias qumicas que se emplean como materia prima en la
industria, o productos que tienen diferentes fines para beneficio del hombre. Se
estima que alrededor de 100 000 sustancias pudieran entrar en contacto con el ser
humano al incorporarse a la vida diaria, medicamentos, plaguicidas, aditivos de
alimentos, cosmticos, son entre otras, algunas de estas sustancias.
El uso seguro de una sustancia depende del conocimiento de sus propiedades

fsicas, qumicas y de su actividad biolgica sobre los organismos vivos.
Para ello es necesario contar con mtodos adecuados para identificar la presencia
de una sustancia en el ambiente y en los organismos y con ello evaluar la posible
exposicin de estos.
El conocimiento de las vas de ingreso y de los mecanismos de absorcin,

distribucin, biotransformacin y eliminacin de una sustancia, sin duda alguna
permiten identificar la posibilidad de que la sustancia llegue a entrar en contacto
con los diferentes rganos y tejidos del organismo e interactuar en el nivel
bioqumico con las diferentes macromolculas y organelos de la clula
modificando su funcin.
Uno de los propsitos al evaluar el potencial txico de una sustancia es determinar

la relacin que existe entre la dosis y el efecto producido.
El incremento en el uso de frmacos lleva inevitablemente al aumento en el

nmero de reacciones txicas. Todos los frmacos son txicos en dosis grandes,
en ocasiones, an cuando se encuentren dentro de lmites normales de
dosificacin teraputica, muchos frmacos llegan a tener efectos txicos
colaterales inevitables. La amplia distribucin de los frmacos es causa tambin
de intoxicaciones y suicidios.
Es difcil el control de envenenamientos, debido a la rpida salida de

nuevos productos al mercado, los cambios constantes en los patrones de abuso y
los deficientes datos cientficos disponibles acerca de los fenmenos toxicolgicos.
Los diferentes temas que sern tratados en este manual intentan abarcar
cada uno de los campos de la Toxicologa a saber: clnica, forense, ocupacional,
de alimentos, etc., prestando una especial atencin a aquellas que permitan
evaluar los efectos adversos de un compuesto en el hombre a partir de datos
obtenidos en animales.
Este manual esta orientado para apoyar los cursos de Toxicologa de reas
relacionadas con la salud, en particular el rea de farmacia y clnicos de la
licenciatura de Qumico Farmacutico Bilogo.
III. OBJETIVO DEL CURSO DE LABORATORIO:
El laboratorio de Toxicologa tiene como objetivo principal que el alumno evale

experimentalmente algunos de los conceptos bsicos vistos en el curso terico y
conozca algunos de los procedimientos y criterios que se emplean para evaluar el
potencial txico de sustancias.
III. REGLAMENTO DEL LABORATORIO DE PRCTICAS DE TOXICOLOGA
Asistencia.
1. Tendr el carcter de alumno de esta asignatura, aquel que se encuentre
inscrito en las listas oficiales de la Universidad.
2. El alumno deber cumplir con un mnimo del 80% para tener derecho a
examen prctico.
Comportamiento dentro del laboratorio.
1. Los alumnos y profesores deben usar dentro de los laboratorios bata de tela
de algodn y el equipo de seguridad como lentes de proteccin o googles y
guantes.
2. No se permitir la estancia de personas ajenas al grupo (amigo (a), novio
(a), etc).
3. No se permitir ingerir alimentos o bebidas, as como realizar cualquier otra
actividad que no est relacionada a la ctedra.
4. No se permitir la entrada con gorras, sombreros, etc. y zapatos
descubiertos.
5. Cada alumno es responsable de su propia seguridad por lo que es
indispensable que conozca antes de cada prctica las propiedades fsicas y
qumicas, riesgos y medidas de prevencin de todos los reactivos con los
que trabajen, as como el equipo de proteccin y primeros auxilios en caso
de accidente.
6. Dentro del laboratorio se formarn equipos sern definitivos durante todo el
curso prctico.
7. Al trmino de cada prctica, los alumnos debern limpiar perfectamente sus
mesas y rea de trabajo.
8. Los alumnos debern retirarse del rea de laboratorios al trmino de cada
prctica. No debern permanecer en ellos bajo ninguna circunstancia.
9. Los alumnos que utilicen cualquier rea de apoyo para el desarrollo de su
prctica, debern hacerlo en estricto orden y respeto a los otros usuarios.
10. Los alumnos no debern:
realizar actividades que vayan en contra del desarrollo de las prcticas,
utilizar indebidamente el equipo y material,
encender sus aparatos mviles de telefona en las reas de los laboratorios.
11. Los alumnos al dejar su credencial y el vale se hacen responsables del

material y/o equipo registrados en el mismo. Es necesaria la verificacin
frente al encargado de las condiciones en que se presta y el registro en el
vale de cualquier tipo de inconveniente que se detecte antes de llevrselo
del almacn o de utilizarlo.
12. Cualquier dao que presente el material y/o equipo y que no est registrado
en el vale del almacn obliga a los alumnos a la reposicin del mismo.
13. Los alumnos estn obligados a regresar el material y/o equipo limpios, el
mismo da del prstamo, dentro del turno en que se solicito y en las
condiciones registradas en el vale. El vale ser cancelado al devolver el
material y/o equipo al almacn.
14. Los alumnos contarn con una fecha lmite para la devolucin de todo aquel
material que se adeude
15. Todo material olvidado en las reas de laboratorios y de apoyo, se recoger
y se integrar al inventario del almacn.
16. Todo producto en refrigeracin deber colocarse en cajas adecuadas para
tal fin, perfectamente bien cerradas y etiquetadas con los datos personales
del usuario, el perodo de almacenamiento del producto, grupo y materia. Si
no rene los requisitos mencionados ser desechado
IV. EVALUACIN DEL CURSO.
Para la acreditacin de la asignatura de Toxicologa:
1. El porcentaje de acreditacin terica es del 70% y de la parte prctica es

del 30%. El alumno debe acreditar la parte prctica del curso para tener
derecho a examen ya sea ordinario o extraordinario. De no ser as se le
pondr la calificacin mnima de 2.9 y tendr que reciclar la materia.
2. El laboratorio ser evaluado por:
Presentaciones por equipo 10 %
Reportes de prcticas realizadas 30 %
Seminario de discusin y examen 30 %
Trabajo en el laboratorio 10%
Proyecto 20%
3. Los equipo a quienes les corresponda presentar la explicacin de

introduccin de cada prctica, se ajustarn a 20 minutos. Esta
participacin aportar el 10% de su calificacin prctica.
4. El estudiante debe obtener en el laboratorio una calificacin promedio
final de 6.0 puntos para tener derecho a promediar con la parte terica.
5. En caso de que un alumno acredite el laboratorio pero no apruebe el
examen ordinario, podr presentarse al examen extraordinario.
Estrategia de trabajo (la cual puede ser modificada de acuerdo a las

caractersticas de cada grupo y criterio del profesor).
1. Se integrarn equipos de trabajo de 4 personas (mnimo 3, mximo 4

alumnos)
2. Se llevar a cabo al inicio de cada prctica una exposicin relacionada con
los objetivos, fundamentos y procedimiento a seguir. Se asignar entre los
equipos formados la explicacin de la prctica de cada semana mediante
una presentacin, cubriendo los siguientes requisitos: Breve introduccin,
objetivo (s) de la prctica, hiptesis, fuente de origen y/o exposicin,
mecanismo de accin, Efectos txicos y terapia antidotal, fundamento de la
prctica y metodologa en forma de diagrama de flujo.
3. Despus de cada tres prcticas realizadas, se llevar a cabo un seminario
de anlisis y discusin de cada prctica, en el cual se expondrn los
resultados de forma integral, mismos que sern discutidos por todo el
grupo. Posteriormente, se aplicar el examen correspondiente.
4. Los reportes de prcticas se entregarn como un informe integral del
bloque correspondiente de (archivo electrnico) a la sesin siguiente del
seminario sin prrroga de tiempo.
5. El informe comprender los siguientes puntos: Breve introduccin (2
cuartillas mximo), Objetivo integral(s), Hiptesis, Fundamento de la
prctica, Resultados (en forma de grficos o tablas, indicando sus
respectivo ttulo y pie de figura o tabla, segn sea el caso), discusin,
conclusiones, y cuestionario resuelto y Bibliografa (misma que debe ser
referenciada en el texto por Sistema Harvard).
V. PRCTICAS A DESARROLLAR
PRCTICA N 1
MANEJO DE ANIMALES DE LABORATORIO
Tiempo de duracin: 4 h
INTRODUCCIN
La respuesta biolgica en animales de laboratorio pueden ser semejante a

la que ocurre en los seres humanos en condiciones adecuadas, en consecuencia,
los estudios realizados en animales de laboratorio se han vuelto una fuente
principal de datos toxicolgicos.
Los efectos txicos de una sustancia qumica pueden variar de una especie
a otra y estn sujetos a la influencia de muchos factores modificadores como las
dosis empleadas y vas de administracin, que de acuerdo a su variacin inducen
signos patentes de toxicidad. En general, los roedores son los animales
seleccionados para evaluar signos de toxicidad de diversas sustancias; sin
embargo, no permiten obtener datos 100% extrapolables al ser humano, debido a
que existen diferencias cuantitativas entre especies, no obstante, se manifiestan
algunos posibles signos y respuestas que podran presentarse en el hombre.
En los estudios con animales de laboratorio, es importante mantener

condiciones experimentales controladas para obtener repetibilidad y
reproducibilidad de la respuesta biolgica inducida; para tal efecto, es necesario el
buen manejo y cuidado de los especmenes de trabajo, adecuada administracin y
medicin de la respuesta a travs de funciones fisiolgicas, bioqumicas y
morfolgicas.
OBJETIVO GENERAL
Manipular de forma adecuada las especies roedoras proporcionadas por su
profesor.
OBJETIVOS ESPECFICOS
Ensayar diferentes vas de administracin en las especies roedoras con una
adecuada manipulacin.
Ensayar diferentes tcnicas de manipulacin para la obtencin de fluidos
biolgicos.
MATERIALES Y REACTIVOS
Ratones albino cepa ICR de 20-25 g de peso.
5 Jeringas para insulina con aguja desmontable (por equipo)
1 Cnula para ratn o rata (por equipo)
Guantes
Reactivo: Solucin salina isotnica estril
Equipo: Balanza para animales
DESARROLLO EXPERIMENTAL
1. Pesar, marcar y distribuir aleatoriamente 6 animales por cada equipo.

2. Practicar la manipulacin adecuada de los animales para su posterior
administracin.
3. Practicar la administracin por va oral, intraperitoneal e intravenosa en los
animales proporcionados.
RESULTADOS
1. Informar los problemas presentados y experiencias adquiridas.
BIBLIOGRAFA
1. Crdoba, D., Toxicologa. 4a ed., Manual Moderno, Bogot, 2001.

2. Klaassen, C.D. 1996. Casarett & Doulls Toxicology. The basic science of
poisons. 5th ed., McGraw Hill, New York.
3. Klaassen, C.D., Watkins, III, J.B. Manual de Toxicologa. 5 ed., McGraw Hill
Interamericana, Mxico, D.F., 2001.
4. Lu, F.C. Toxicologa Bsica. Riesgos por exposicin a sustancias txicas.
Harla, Mxico, D.F., 1992.
FORO DE DISCUSIN SOBRE: MANEJO DE ANIMALES DE
EXPERIMENTACIN EN ESTUDIOS TOXICOLGICOS
El reglamento de la ley General de Salud en materia de investigacin en

salud seala en su TITULO SEPTIMO referente a
De la Investigacin que incluya a la utilizacin de animales de

experimentacin.
CAPITULO UNICO
ARTICULO 121.- En las investigaciones experimentales con animales, referidas a

la salud humana, se debern llenar los requisitos que establezcan las normas de
las propias instituciones de salud, autorizadas por la Secretara y satisfacer lo
sealado en este Captulo.
ARTICULO 122.- Las investigaciones se disearn a modo de evitar al mximo el

sufrimiento de los animales.
ARTICULO 123.- Cuando sea necesario sacrificar a un animal de

experimentacin, se emplear un procedimiento que asegure en lo posible su
muerte sin sufrimiento.
ARTICULO 124.- Los bioterios debern estar de acuerdo con la especie,

conformacin corporal, hbitos, preferencias posturales y caractersticas
locomotoras de los animales, para proporcionarles comodidad, excepto cuando las
variables experimentales justifiquen otras situaciones.
ARTICULO 125.- Los bioterios de produccin o mantenimiento crnico sern

supervisados por profesionales calificado y competente en la materia y debern
permitir el crecimiento, maduracin, reproduccin y comportamiento normal de los
animales, de conformidad con las normas que la propia institucin emita.
ARTICULO 126.- El titular de la institucin de salud en donde se realice

investigacin a la que se refiere este Captulo, deber establecer y vigilar el
cumplimiento de las medidas de seguridad para el cuidado y manejo de los
animales, as como las medidas de profilaxis y vacunacin necesarias para la
proteccin del personal ocupacionalmente expuesto.
Clasificacin de actividades experimentales de acuerdo al grado de invasin,
molestia o dao producido sobre los animales de laboratorio (NOM 062,
1999)
CATEGORIA A. Experimentos utilizando invertebrados de baja escala: Uso de

huevos, protozoarios u otros organismos unicelulares. Uso de metazoarios. Uso
de cultivo de tejidos u rganos obtenidos despus del sacrificio del animal en el
rastro o necropsia.
CATEGORIA B. Experimentos que causan molestia o estrs mnimo: Restriccin
momentnea del animal con propsitos de observacin clnica; toma de muestras
de sangre e inyeccin de sustancias por las vas intravenosa, subcutnea,
intramuscular, intraperitoneal u oral. Estudios agudos sin supervivencia del animal
encontrndose ste completamente anestesiado. Uso de mtodos de eutanasia
con inconsciencia rpida del sujeto; por ejemplo, sobredosis de anestsicos.
Periodos cortos de abstinencia de agua o alimento equivalentes a lo que pudiera
darse en forma natural.
CATEGORIA C. Experimentos que causan estrs menor o dolor de corta
duracin: Canulacin o cateterizacin de cavidades corporales o vasos
sanguneos mayores bajo anestesia. Procedimientos quirrgicos menores como
toma de biopsias bajo anestesia. Restriccin fsica con objetivos ms all de la
simple observacin clnica pero sin llegar a producir estrs importante. Periodos
cortos de abstinencia de agua o alimento pero que excedan lo observable en la
naturaleza. Estos procedimientos no deben traducirse en cambios significativos de
la apariencia fsica del animal, ni tampoco en la alteracin de parmetros
fisiolgicos como la frecuencia cardiaca, frecuencia respiratoria, intensidad de la
diuresis y defecacin, o bien en su respuesta social o conductual; no debe haber
anorexia, automutilacin, hiperactividad, somnolencia excesiva, vocalizacin
aumentada, comportamiento agresivo-defensivo o signos de autoaislamiento y
retraccin social.
CATEGORIA D. Experimentos que causan estrs o dolor moderado a severo:
Procedimientos quirrgicos mayores bajo anestesia general y con sobrevida del
animal. Restriccin fsica prolongada (hora/das). Induccin de estrs conductual
tales como de privacin materna, agresin, interacciones predador-depredador.
Procedimientos que causen alteraciones sensoriales y motoras severas,
persistentes o irreversibles. El uso del Adyuvante Completo de Freund; o bien,
cualquier procedimiento que, anatmica o fisiolgicamente, resulte doloroso.
Exposicin a estmulos nocivos de los cuales no pueda escapar el animal.
Produccin de enfermedad por radiacin. Administracin de medicamentos o
qumicos que alteren la fisiologa del animal.
CATEGORIA E. Procedimientos que causen dolor severo al nivel o por arriba del
umbral de tolerancia del animal consciente no anestesiado: No solamente se
consideran aqu procedimientos quirrgicos sino exposicin a medicamentos o
agentes qumicos o estmulos nocivos cuyos efectos son desconocidos. Esta
exposicin supone una marcada alteracin de los sistemas fisiolgicos pudiendo
causar la muerte, dolor severo o estrs extremo. Se deben considerar en esta
categora cualquier experimento biomdico con alto grado de invasin, estudios
conductuales de los que se conozca poco su respuesta y efectos al estrs, el uso
de paralizantes musculares sin anestesia, la provocacin de trauma o quemaduras
en el animal no anestesiado, mtodos no aprobados de eutanasia, pruebas de
toxicidad e infeccin experimentalmente inducida que tengan como punto final la
muerte del animal.
CUESTIONARIO
1. Realizar un diagrama de flujo sobre los pasos a seguir para la manipulacin de

la rata
2. Mencione las diferentes vas de administracin que son ms utilizadas, y
cules de ellas son ms accesibles y de fcil manipulacin?.
3. Qu criterios se emplean para seleccionar un animal para estudios
experimentales en toxicologa?
BIBLIOGRAFA:
1. Wexler P. Information Resources in Toxicology, 4th ed. Elsevier. 2009.

2. Crdoba, D., Toxicologa. 4a ed., Manual Moderno, Bogot, 2001.
3. Klaassen, C.D. Casarett & Doulls Toxicology. The basic science of poisons. 5th
ed., McGraw Hill, New York. 1996.
4. Lu, F.C. Toxicologa Bsica. Riesgos por exposicin a sustancias txicas. Harla,
Mxico, D.F., 1992
PRCTICA N 2
FACTORES BIOLGICOS QUE MODIFICAN LA TOXICIDAD DE UN

XENOBITICO
INTRODUCCIN
En los estudios toxicolgicos de rutina se somete a los animales de laboratorio a

dosis y tiempos de tratamiento variables, que ponen de manifiesto los efectos
producidos por el agente de prueba. Esto constituye la base fundamental de la
evaluacin toxicolgica e indica el rgano o sistema sensible, as como la
naturaleza de la toxicidad, evidenciando los cambios a seguir para profundizar en
estudios posteriores.
Los efectos de los txicos son dependientes del tiempo y frecuencia de la

exposicin, el tipo de toxn y la concentracin del mismo. Sin embargo, existen
diversos factores que pueden modificar la respuesta txica producida por un
xenobitico, entre los que podemos mencionar: especie, sexo, edad y estado
patolgico del individuo, entre otros.
OBJETIVO GENERAL
Observar la influencia del sexo, dosis y tratamientos variables en una especie
roedora.
Material
- 20 ratones macho de 25 g de peso
- 20 ratones hembra de 25 g de peso
- 1 matraz volumtrico de 10 mL
- 1 matraz volumtrico de 25 mL
- 2 agitadores de vidrio
- 3 vasos de precipitados de 50 mL
- 3 cnulas para ratn
- 3 jeringas de 1mL
- Aceite vegetal
Reactivos
- Solucin de Etanol al 3 y 6%
- Solucin de Metil-paratin 20 y 40 mg/kg en aceite vegetal*
- Soluciones de Cianuro de Potasio 0.25 y 1 mg/kg*
* Estos reactivos sern proporcionados por su profesor
1. El grupo de ratones macho se distribuirn aleatoriamente en 7 lotes;
asimismo el grupo de ratones hembras se distribuir al azar en 7 lotes de
animales y sern marcados y pesados cada uno.
Tabla de pesos de ratones macho
Marca Testigo Etanol Etanol m- m- KCN KCN

3% 6% paratin paratin 0.25 1 mg/kg
20 mg/kg 40 mg/kg mg/kg
Cabeza
Lomo
Cola
Tabla de pesos de ratones hembra
Marca Testigo Etanol Etanol m-paratin m-paratin KCN KCN

3% 6% 20 mg/kg 40 mg/kg 0.25 1 mg/kg
mg/kg
Cabeza
Lomo
Cola
2. Los animales de experimentacin sern administrados por va oral con las

soluciones proporcionadas por su profesor y se observarn los signos
txicos que se presentan, registrar el tiempo en que se presentan, el
nmero de animales muertos en cada uno de los lotes durante el transcurso
de la prctica.
3. Construya una tabla como se muestra a continuacin para cada tipo de
tratamiento.
SIGNOS MACHOS HEMBRAS

Irritabilidad
Pasividad
Anestesia
Salivacin
Sangrado
Diarrea
Piloereccin
Convulsiones
otros
+ leve; ++ moderado; +++ severo; ++++ muy severo; - no se observ
CUESTIONARIO
1. Describa el mecanismo de accin de cada uno de los txicos empleados en

la prctica.
2. Cmo influyen las caractersticas fisicoqumicas de cada uno de los
xenobiticos utilizados en la prctica en la respuesta txica presentada por
los animales?
3. Cul es la influencia del sexo en la respuesta txica de un xenobitico?
BIBLIOGRAFA
1. Crdoba, D., Cadavid, S., Ramos, J.I. Inhibidores de colinesterasas. En:
Toxicologa. Crdoba, D. (Ed.). 4a ed., Manual Moderno, Bogot, 2001.
2. Eaton, D.L., Klaassen, C.D. Principles of Toxicology. en: Casarett & Doulls
Toxicology. The basic science of poisons. Klaassen, C.D. (Ed.). 5th ed., McGraw
Hill, New York, 1996.
Mxico, D.F., 1992.
5. Repetto, M. Toxicologa Fundamental. 4 ed., Daz de Santos, Madrid, 2009.
PRACTICA V.3
EXTRACCION DE NICOTINA EN CIGARROS.

INTRODUCCION:
La nicotina es un alcaloide comnmente encontrado en el tabaco, cuya frmula es:
N
La exposicin a la nicotina en el ser humano, ocurre generalmente durante la
extraccin o el procesamiento del tabaco, al aplicar insecticidas que contienen
este alcaloide, o lo ms comn en nuestro medio que es a travs del hbito de
fumar. La nicotina se puede obtener en concentrados como base libre, la cual es
voltil, o como sulfato, ambos son lquidos, an en su forma pura.
La dosis mortal de la nicotina pura es alrededor de 10 mg (0.6mg/Kg), una

cantidad que puede estar contenida en 2 g de tabaco (aproximadamente 2
cigarrillos). Cuando se fuma, la mayor parte de la nicotina se quema, y cuando el
tabaco se mastica o se ingiere, la absorcin de nicotina es escasa. La nicotina
primero estimula, luego deprime y paraliza las clulas de los ganglios autonmicos
perifricos, el encfalo y la mdula espinal. No se encuentran cambios histolgicos
especficos despus del envenenamiento por nicotina, pero despus de su
ingestin, la boca la faringe, esfago y el estmago pueden mostrar efecto
custico por la nicotina.
Existen pruebas cuantitativas para detectar drogas, su determinacin consta de:
a) Aislamiento: extraccin
b) Purificacin: cromatografa
c) Anlisis: cualitativo y cuantitativo.
Las tcnicas de separacin o aislamiento que ms se emplean por su
accesibilidad son: la extraccin por solventes y la cromatografa (placa, columna,
gases, HPLC), esto es de acuerdo al tipo de producto que se va aislar.
La extraccin se basa fundamentalmente en las propiedades fisicoqumicas que

tenga la droga y el disolvente que se va utilizar para extraer (solubilidad,
probabilidad de que reaccione, etc.) En esta fase se obtiene el compuesto, pero
no en forma pura, ya que arrastra contaminantes del solvente o del mismo
compuesto, por lo que para su purificacin se utiliza la cromatografa que puede
ser:
Cromatografa en capa fina o en placa (C.C.F.)

Cromatografa en papel
Cromatografa en columna
HPLC(cromatografa de lquidos a alta resolucin)
Cromatografa en gases.
Es importante decir que la mayor parte de los alcaloides, grupo al que pertenece la
nicotina, son insolubles o poco solubles en agua, pero reaccionan con los cidos
para formar sales muy solubles en agua. Los alcaloides libres suelen ser solubles
en ter y cloroformo.
En esta prctica la extraccin se fundamenta bsicamente en la polaridad de las

sustancias, la miscibilidad de la sustancia con el solvente y las reacciones cido-
base que se llevan a cabo al modificar el pH de la solucin.
OBJETIVO:
Extraer y purificar mediante el principio de polaridad la nicotina presente en tabaco

(cigarros), as como identificar este compuesto mediante reacciones cualitativas y
semicuantitativas.
Material orgnico:
Cigarros de diferentes marcas (aproximadamente 5)
Material de laboratorio
Portaobjetos
Vasos de precipitados
pipetas de 1ml
pipetas de 10 ml
Probeta de 100 ml
Embudo de separacin de 250ml.
Tubos capilares
Equipo:
Bao mara
Placas de silica para cromatografa
Cmara para el corrimiento cromatogrfico
Balanza analtica
Portaobjetos (aprox. 2)
Reactivos:
HCl al 5%
Eter
Hidrxido de amonio
Cloroformo
Acido tartrico (cristales)
Hidrxido de amonio en metanol 15:100
Silica gel G.
Solucin de yodo en CCl4 (solucin reveladora), al 10%
Reactivo de Mayer (yoduro mercrico potsico)
Reactivo de Wagner (yodo con yoduro de potasio)
Acido actico 2N
PROCEDIMIENTO:
1.- Extraccin De la muestra
a) Pesar aproximadamente 1g. de tabaco
b) Agregar 10ml. de HCl al 5% y calentar
c) Transferir a un embudo de separacin y agregar 2 porciones de 20ml. cada
una de ter y agitar suavemente.
d) Extraer la fase acuosa y alcalinizar con hidrxido de amonio (pH 8.0) y extraer
con 2 porciones de 10ml cada una de cloroformo
e) Separar la capa clorofrmica y la acuosa
f) A la fase clorofrmica agregar unos cristales de cido tartrico, y evaporar a
sequedad en el bao mara
g) Reconstituir con cido actico 2N (aprox. 0.5ml)
2.-Purificacin del extracto:

a) Preparar la cmara para el corrimiento cromatogrfico: adicionar a la cmara la
solucin de hidrxido de amonio en metanol 15:100, y saturar la cmara
previamente durante 10 min. (fase mvil)
b) Preparar las placas de silica gel; si es necesario activarlas
c) Aplicar la muestra de nicotina extrada del tabaco mediante un tubo capilar en
la placa cromatogrfica, as como un estndar de nicotina.
d) Correr el cromatograma (Aproximadamente dejar correr el frente del disolvente
2/3 del largo de la placa
e) Sacar la placa de la cmara de corrimiento y dejar que el solvente se evapore.
f) Evidenciar las manchas de nicotina rociando la placa con la solucin
reveladora de yodo en tetracloruro de carbono.
g) Realizar las mediciones de la distancia a que llega el frente del disolvente y la
distancia a la que llega la mancha de nicotina para con ello determinar el valor
del Rf de la nicotina
3.-Identificacin cualitativa:
a) Efectuar las siguientes pruebas colocando una gota del extracto y una gota del
reactivo sobre un portaobjeto y mezclar:
Extracto + Reactivo Mayer (HgCl2 + KI + Agua)
Extracto + Reactivo Wagner (Yodo +Kl +Agua)
b) Observar los cambios producidos de acuerdo a:

Mayer: Cambia de verde claro a verde intenso
Wagner: Cambia de violeta a caf rojizo.
Estos son cambios positivos para la identificacin cualitativa de la nicotina
4.- Identificacin semicuantitativa:

Coloque en una celda de cuarzo una porcin del extracto en solucin de cido
actico 2N y realice lecturas de absorbancia cada 5 nm en un intervalo de longitud
de onda entre 200 nm a 600 nm. Compare los grficos de valores mximos y
mnimos encontrados con respecto a un estndar de nicotina. Realice el mismo
procedimiento empleando un extracto de la mancha obtenida en el cromatograma.
RESULTADOS:
1.- Calcular el Rf de la muestra y compararlo con el Rf encontrado en la

bibliografa
2.- Anotar los cambios ocurridos en las pruebas cualitativas de Mayer y Wagner
3.- Grafique los resultados de absorbancia vs longitud de onda obtenidos tanto
para el extracto del tabaco como para el estndar de nicotina
3.- Discutir y concluir ampliamente los resultados
CUESTIONARIO:
1.- Escribir las reacciones efectuadas a lo largo de la parte experimental
2.- Describir el fundamento de extraccin.
3.- Qu tipos de cromatografa existen y en que consisten?
4.- Mencionar otros tipos de purificacin
5.- Qu papel juega el hidrxido de amonio de la extraccin?
6.- Investigue y describa otras reacciones cualitativas que pueden ser tiles para
la identificacin de alcaloides
7.- Tomando como base el procedimiento y resultados obtenidos describa como
sera posible desarrollar un mtodo cuantitativo para medir la concentracin de
nicotina en el tabaco.
BIBLIOGRAFA:
1.- Ariens. Lehman. Introduccin a la Toxicologa General. 2 Edicin. Ed. Diana

Mexico, 1973
2.- Christian. Qumica Analitica. ]Ed. Limusa. Pp. 630. Mxico, 1971.
3.- Goldstein. Arrow. Farmacologa. Ed. Limusa. Mxico, 1976
PRCTICA V.4
DETERMINACION DE LA EXPOSICION AL HUMO DEL TABACO A TRAVES

DE LA APLICACIN DE ENCUESTAS
Tiempo de duracin: 4h
INTRODUCCIN
La Organizacin Mundial de la Salud (OMS)1 ha sealado que, 5 millones de
personas al ao mueren a causa del tabaco, lo cual representa uno de cada diez
adultos, se estima que para el ao 2030, las muertes a causa del tabaco
aumentarn a 8 millones de personas al ao.
De acuerdo a estadsticas sealadas por el Instituto Nacional de Geografa,

Estadstica e Informtica (INEGI) en relacin con el tabaquismo:
Mxico ocupa el sexto lugar mundial en nmero de fumadores y el segundo
en fumadoras.
La edad crtica de inicio para el consumo diario de tabaco es entre los 15 y
17 aos.
Actualmente, son fumadoras 15.9% de las personas mayores de 15 aos.
En 2008, de las enfermedades relacionadas al tabaquismo entre la
poblacin mayor de 20 aos de edad, las isqumicas del corazn fueron la
principal causa de egreso hospitalario (38.8%), seguidas por las
cerebrovasculares (31.9%) y las enfermedades crnicas de las vas
respiratorias inferiores (22.3%).
Las enfermedades cerebrovasculares son la nica enfermedad relacionada
con el tabaquismo en la que las muertes de mujeres superan a las de los
hombres (29.2 contra 21.7%).
De acuerdo con el Instituto Nacional de Salud Pblica (INSP), en nuestro pas se

gastan ms de 75 mil millones de pesos al ao en la atencin de enfermedades
relacionadas al tabaquismo2. Considerando que Mxico es el sexto lugar mundial
en nmero de fumadores y el segundo en fumadoras3, resulta imperativo continuar
con las acciones orientadas a prevenir el inicio del consumo, a proteger a los no
fumadores y apoyar a los fumadores para que abandonen el consumo. Algunos
estudios muestran que, independientemente del tipo de droga, cuando su
consumo inicia a edad temprana, la relacin de abuso y dependencia es mayor4.
De acuerdo con la Encuesta Global de Tabaquismo en Adultos 2009, la edad
crtica de inicio para el consumo diario del tabaco en nuestro pas es entre los 15 y
17 aos.
Como se mencion en la prctica anterior, entre las sustancias que contiene el
tabaco se encuentran la nicotina, que es altamente adictiva, y cuando se fuma,
derivado de la combustin se forma alquitrn, componente que resulta txico y
que se sabe es precursor de cncer. Adems, el consumo del tabaco es un factor
de riesgo para enfermedades cardiovasculares y respiratorias como el enfisema
pulmonar. Por lo anterior resulta de inters desde el punto de vista toxicolgico
estimar la cantidad a la que se encuentra potencialmente expuesta la poblacin
fumadora, en particular los estudiantes de la Facultad de Qumica. La
caracterizacin de la exposicin implica evaluar la intensidad que tiene relacin
con la dosis que recibe el individuo, la frecuencia, la cual tiene relacin con
determinar si el individuo recibi una dosis nica o repetida en un tiempo
determinado y la duracin, este ltimo implica conocer desde cuando el individuo
se encuentra recibiendo alguna dosis de la sustancia de inters, en este caso por
ejemplo: nicotina. Un primer acercamiento para evaluar la exposicin a un agente
txico lo constituye una encuesta, el cual es un instrumento que nos puede aportar
informacin sobre las caractersticas de exposicin e incluso nos puede ser de
utilidad para estimar las dosis a las cuales un organismo potencialmente se
encuentra expuesto.
Exposicin: Se refiere a la posibilidad de contacto entre un agente txico y un

organismo para caracterizarla se requiere conocer la intensidad, frecuencia y
duracin.
ACTIVIDADES PREVIAS:
Integre informacin sobre los siguientes aspectos:

Informacin sobre el consumo del tabaco en nuestro pas
Exposicin al Humo del Tabaco (Exposicin voluntaria e involuntaria,
fumadores pasivos y activos)
Sustancias presentes en el humo del tabaco y sus posibles efectos sobre la
salud
Caractersticas de la encuesta como instrumento para identificar la exposicin
a agentes txicos
OBJETIVO:
Disear y aplicar un instrumento de encuesta que permita evaluar la intensidad,
frecuencia y duracin de la exposicin al humo del tabaco en personas fumadoras
y no fumadoras.
MATERIAL Y MTODOS:
El alumno contar con una propuesta de encuesta para hacer un anlisis de ella y
enriquecerla con el fin de elaborar un instrumento til para evaluar las
caractersticas de exposicin al humo del tabaco (intensidad, frecuencia y
duracin) de una poblacin estudiantil.
Para lo cual disear y complementar las preguntas que considere pertinentes

para el logro del objetivo propuesto basndose en informacin bibliogrfica que
apoye las preguntas elaboradas.
La encuesta deber contener como mnimo:
Titulo
Objetivo de la encuesta
Identificacin
Cuerpo de la encuesta (Preguntas especficas que permitan caracterizar la
intensidad, frecuencia y duracin de la exposicin al humo del tabaco)
Las preguntas no podrn ser abiertas, ni al azar, se requiere pensar como se

representar la informacin recabada por la encuesta, se sugiere que algunas de
ellas su respuesta pueda ser SI NO en otras se sugiere que se brinden
opciones de respuesta las cuales puedan quedar a eleccin del encuestado.
Una vez que la encuesta se encuentre elaborada proceder a aplicarla a un grupo
de alumnos de la Facultad de Qumica.
RESULTADOS:
Con la informacin recabada elaborar un reporte donde se integren las

representaciones grficas de la poblacin encuestada as como un anlisis de la
informacin obtenida, el reporte deber incluir cuando se requiera un anlisis
estadstico de las frecuencias de las respuestas y se debern incorporar al
reporte las encuestas levantadas.
CUESTIONARIO:
1. Investigue las caractersticas que debe tener una encuesta y de acuerdo a

la informacin obtenida elabore una crtica sobre el instrumento aplicado.
2. Investigue y documente el consumo de tabaco en nuestro pas.
3. Investigue y documente los principales problemas que se derivan del

consumo de tabaco en nuestro pas.
4. Investigue y documente el marco normativo jurdico que regula la

exposicin al humo de tabaco.
BIBLIOGRAFIA CONSULTADA:
Organizacin Mundial de la Salud [OMS] (2010). Tabaquismo. Revisado el 28 de

enero de 2011, de http://www.who.int/topics/tobacco/es/
Instituto Nacional de Salud Pblica [INSP] (2010). Por tabaquismo, Mxico pierde
50 mil MDP al ao. Revisado el 3 de febrero de 2011, de
http://www.insp.mx/noticias/salud-poblacional/1345-75-mil-millones-de-pesos-al-
ano-gasta-mexico-por-tabaquismo.html.
Hernndez, T., Roldn, J., Jimnez, A., Mora, C., Snchez-Garnica, D. y Prez, M.
(2009). La Edad de Inicio en el Consumo de Drogas, un Indicador de Consumo
Problemtico. Intervencin Psicosocial, 18(3). Revisado el 9 de febrero de 2011,
de: http://scielo.isciii.es/scielo.php?pid=S1132-
05592009000300002&script=sci_arttext
Conyer R.T., Morales P.K., Gutirrez M.J.H. Panorama Epidemiolgico del

Tabaquismo en Mxico, Salud Publica Mex 2001;43:478-484
Kuri-Morales PA, Gonzlez-Roldn JF, Hoy MJ, Corts-Ramrez M.

Epidemiologa del tabaquismo
en Mxico. Salud Publica Mex 2006;48 supl 1:S91-S98.
Organizacin Panamericana de la Salud; Instituto Nacional de Salud Pblica (MX).

Encuesta Global de Tabaquismo en Adultos. Mxico 2009. Cuernavaca (Mxico):
Instituto Nacional de Salud Pblica, 2010. Coeditado con la Organizacin
Panamericana de la Salud, 2010.
PRACTICA N 4
DETERMINACIN CUALITATIVA DE CIANURO EN MATERIAL
BIOLGICO
Tiempo de duracin:4h
INTRODUCCIN
La toxicologa forense estudia los efectos dainos que produce un agente qumico
en el organismo humano y animal, desde el punto de vista mdico y legal. Estos
aspectos incluyen procedimientos qumico-analticos que permiten la deteccin y
cuantificacin del agente qumico en los diferentes lquidos y tejidos biolgicos
(Clarke, 1998).
El cianuro de hidrgeno (cido prsico o cido hidrocinico), debe su toxicidad no
a su acidez sino a su in cianuro (CN-). As, los cianuros solubles de sodio, de
potasio, etc., son igualmente txicos en las mismas concentraciones molares.
La intoxicacin puede ocurrir principalmente por va inhalatoria en diferentes

procesos industriales a consecuencia de su formacin como producto intermedio
en procesos de altos hornos, en la industria del galvanizado y en el tratamiento de
metales preciosos. La intoxicacin combinada por CO y cianuro, se produce en
vctimas de la inhalacin de humos resultantes de la combustin de materiales
plsticos y espumas de poliuretano. La intoxicacin por cianuro tambin puede
tener carcter voluntario por ingesta de cianuro potsico.
En altas concentraciones, el cianuro de hidrgeno es absorbido a travs de la piel;

as que una mscara antigs no proporciona una proteccin total. Despus de una
hora de exposicin, entre 100 y 250 ppm de HCN son peligrosas. La dosis letal 50
en ratas es de 544 ppm (5 min), en ratones de 169 ppm (30 min), en perros de
300 ppm (3 min) y en seres humanos la exposicin a 150 ppm entre 30 minutos y
una hora puede poner en peligro la vida. La muerte puede sobrevenir por una
exposicin de pocos minutos a 300 ppm. La dosis fatal es de 50 a 60 mg
El cianuro de hidrgeno acta inhibiendo la oxidacin en tejidos, es decir,

impidiendo el empleo til del oxgeno transportado por la sangre.
Los compuestos de cianuro tienen efectos muy rpidos, matando al instante si hay
cantidades suficientes. Es esta velocidad de accin, ms que la pequea cantidad
que hace falta para una dosis letal, la que da al cianuro su reputacin como el
txico comn ms poderoso.
El cianuro se enlaza a los citocromos casi de la misma manera que lo hace el

oxgeno, conjugndose con el fierro. A diferencia del oxgeno, no puede recibir
electrones del citocromo a3, por lo que se bloquea su transporte. Sin ste, la
fosforilacin oxidativa hace desaparecer el gradiente de H+, se detiene la sntesis
de ATP, y la clula muere. El cianuro se une ms fuertemente a los citocromos
que el oxgeno, y como resultado, es letal en concentraciones muy bajas. Este
efecto se da tambin en la hemoglobina, a la que tambin se enlaza el in,
impidiendo que llegue el oxgeno a las clulas
El organismo dispone de diversas vas metablicas (fig.1) que biotransforman el

cianuro. La va ms importante es la de la rodanasa que lo transforma a tiocianato
(compuesto atxico) que es eliminado por la orina.
Figura 1. Diversas vas metablicas de biotransformacin del cianuro. (Tomado de
www.viasalus.com)
OBJETIVO GENERAL
Determinar cualitativamente el contenido de cianuro en muestras biolgicas.
MATERIAL Y REACTIVOS
REACTIVOS
Solucin de NaOH al 10%
Solucin de H2SO4 al 10%
Solucin de FeSO4 al 10%
HCl concentrado
Solucin de KCN de 3 g/mL
Heparina 1:10
ter etlico
Agua destilada
MATERIAL DIVERSO
1 Propipeta
1 Micropipeta de 200 a 1000 L
Puntas para micropipeta
1 Jeringa hipodrmica de 20 mL
Equipo de diseccin
Guantes quirrgicos
Por equipo de trabajo

2 Cmaras de Conway
1 Pipeta volumtrica de 1 mL
3 Pipetas graduadas de 1 mL
EQUIPO
Balanza analtica
MATERIAL BIOLGICO
1 Rata Wistar de 300 350 g de peso para la obtencin de la muestra sangunea
1. Colocar en el centro de una cmara microdifusin de Conway, 1 mL de NaOH

al 10% y en el canal interno 1 mL de la muestra sangunea problema,
paralelamente, correr una muestra de referencia (muestra de sangre con una
concentracin conocida de cianuro).
2. Adicionar suavemente 1 mL de cido sulfrico al 10% sobre la muestra de

sangre y tapar inmediatamente la cmara. Mezclar cuidadosamente y dejar
reaccionar durante 1 hora en una estufa a 55 C.
3. Al terminar el tiempo de reaccin, quitar la tapa con cuidado en el interior de la

campana de extraccin y agregar 5 gotas de FeSO4 al 10% en el centro de la
cmara.
4. Adicionar con un gotero HCl concentrado suficiente para disolver el precipitado

caf formado en el centro de la cmara.
5. Cuando el color caf se disuelve totalmente, se detecta la presencia de cianuro

al formarse un precipitado fino de color azul (azul de prusia).
ANLISIS DE RESULTADOS
La coloracin azul en la cmara interna indicar la presencia de cianuro en la

muestra.
Presentar sus resultados en una tabla comparativa.
CUESTIONARIO
1. Escriba la reaccin de hidrlisis que se lleva a cabo cuando se consume un

vegetal rico en glucsidos cianognicos.
2. Cul es la respuesta txica del cido cianhdrico en un organismo e indica
cual es la DL50 para el hombre?.
3. Cmo eliminaras los glucsidos cianognicos presentes en un alimento?
4. Indica la terapia antidotal que se aplica ante una intoxicacin por cianuro.
5. Describe otros mtodos cuali y cuantitativos alternativos para la
determinacin de cianuro en muestras biolgicas
BIBLIOGRAFA
1. Eaton, D.L., Klaassen, C.D. Principles of Toxicology. In: Casarett & Doulls
2. Parkinson, A. Biotransformation of xenobiotics. In: Casarett & Doulls
4. Montoya, M. A.. Toxicologa Clnica. Mndez Editores. Mxico. 2003.
PRACTICA V.5
EFECTO DEL pH EN LA LIBERACIN DE PLOMO EN UTENSILIOS DE
CERMICA
INTRODUCCIN:
La intoxicacin por plomo se conoce con certeza por lo menos desde el siglo XV
en el que se prohbe la preservacin del vino en vasijas que contienen
compuestos de plomo. La exposicin al plomo puede provenir de fuentes diversas,
entre las cuales se mencionan: emanaciones industriales, combustin de
gasolinas, manejo de acumuladores, fabricacin de pinturas y una fuente comn e
importante en nuestro medio, que es la fabricacin de cermica vidriada.
La materia prima suele ser la arcilla en todas sus variantes; la cermica puede ser
barnizada o glaseada a base de un barniz de slice y plomo trasparente
superpuesto a veces a un polivinilo blanco (engobe), susceptible a ser coloreados
mediante xidos (cobalto, manganeso, cobre, hierro, estao)
Los componentes principales de la arcilla son el silicio, aluminio y el agua, as

como un gran nmero de minerales (calcita, mica, apatita).
En nuestro medio la cermica se usa comnmente como material para cocinar, y

se ha sugerido que parte del plomo contenido en el vidriado puede pasar a los
alimentos y ser una fuente importante a travs de la cual el hombre ingiere plomo.
Aproximadamente del 95% de plomo que ingresa al organismo, slo el 80% se

deposita en los en los huesos, cantidad que se mantiene cuando lo que entra es
igual a lo que sale; el resto se deposita en hgado, riones, cerebro, sistema
respiratorio, tejidos, cabellos y dientes.
Las manifestaciones ms comunes de una intoxicacin por plomo son: dolor de

cabeza, fatiga, irritabilidad, temblores, sntomas que se observan despus una
intoxicacin muy severa. La prolongada vida media biolgica del plomo trae por
consecuencia un incremento paulatino de los niveles txicos, bajo condiciones de
exposicin continua y puede dar lugar a la aparicin de sntomas de
envenenamiento por plomo.
OBJETIVO:
Determinar cualitativa y cuantitativamente la presencia del plomo en vasijas de

cermica, y observar los diferentes efectos del pH sobre la liberacin del plomo
de la cermica.
MATERIALES Y EQUIPO:
Materiales
3 vasijas de cermica vidriada con capacidad min. De 200 mL.

1 mechero
1 tripi
1 rejilla de asbesto.
1 gradilla
1 cronmetro
10 tubos de ensayo de 13X100 mm
1 bao mara
4 tiras de papel pH
1 termmetro
1 centrfuga
Reactivos:
Agua destilada
cido clorhdrico 1N
Hidrxido de sodio 1N
Solucin de NaSO4 1mg./100 mL.
Solucin de KI 20 mg/100 mL
cido Ntrico 1:1 en agua.
PROCEDIMIENTO:
El trabajo a desarrollar estar dividido en dos partes.
A.- Estudio De Campo (Previo a llevarse a cabo la prctica)
1. Cada equipo investigar las principales zonas de produccin de cermica

en el Estado de Mxico, realizando un mapa de localizacin de las
principales zonas alfareras.
2. Cada equipo seleccionar una zona alfarera diferente de la cual se tomarn
muestras de vasijas vidriadas (jarros fabricados a baja temperatura, cuyo
interior este vidriado) de aproximadamente 250 m. de capacidad. Sern 6
vasijas iguales por equipo.
B. Estudio experimental a realizar en el laboratorio
1. Liberacin del plomo
a) Sealar las vasijas con A, B y C y como A, B, y C (Vasijas previamente

curadas)
b) Colocar 100ml. de agua destilada en cada vasija y agregar a la vasija A y A
1 mL de agua destilada; a las vasijas B y B, agregar 1 mL de HCl 1N y a las
vasijas C y C agregar 1 mL de solucin de NaOH 1N
c) Medir el pH de cada vasija con papel indicador
d) Calentar las vasijas a ebullicin durante 2 minutos
e) Dejar enfriar y medir el pH, as como el volumen de agua sobrante.
2. Identificacin cualitativa
a) Colocar 0.5 mL. de las soluciones de cada vasija en un tubo de ensayo y
agregue 3 gotas de una solucin 1:1 de cido ntrico y aada 2 mL de la
solucin de sulfato de sodio en cada tubo (realice esto por duplicado)
b) Coloque el tubo en un bao a ebullicin de agua por 15 minutos
c) Centrifugue a 2000 rpm durante 10 minutos
d) Remueva los tubos de la centrfuga y calentarlos e un bao mara a una

temperatura entre 60-65 C durante 5 minutos.
e) Retire los tubos del bao y aada a cada uno, unos cristales de Kl,
procurando que la solucin caiga directamente en el centro del tubo. No
agite y observe. Un precipitado amarillo indica la presencia de plomo,
comprelo con los otros tubos y evale la cantidad de plomo (precipitado) en
los tubos asignndoles cruces.
f) Emple agua destilada como blanco y realice los pasos anteriores.
3. Identificacin cuantitativa (Mtodo de Ditizona)
Para su realizacin se necesitan los siguientes reactivos:

Hidrocloruro de hidroxilamina (20 mg/100 mL)
Acido ctrico (50 mg/100 mL)
Rojo de fenol (0.2 g/100 mL)
Cianuro de Potasio (10 g/100 mL)
Ditizona, Solucin Stock (40 mg/100 mL de cloroformo)
Solucin de trabajo de ditizona (0.8 mg/100 mL cloformo)
Solucin de lavado (75 mL de hidrxido de amonio concentrado en 100 mL de
la solucin de cianuro de potasio, llevar a 500 ml. Con agua destilada
Solucin stock de plomo (1 mg/mL); disolver 1.588 g de nitrato de plomo en
HNO3 diluido (1ml/100 H2O); diluir 1 mL de la solucin stock de plomo en un
litro de cido ntrico diluido, usar alcuotas de 10 mL para anlisis de referencia
PROCEDIMIENTO:
a) Agregar en un matraz erlenmeyer de 125 mL, 10 mL de la solucin

problema, 2mL de hidrocloruro de hidroxilamina, 2 mL de cido ctrico y de
2 a 4 gotas de rojo de fenol, agregar NH4 OH concentrado, hasta que
cambie de color de amarillo a rojo. Haga lo mismo para las soluciones de la
curva estndar y el blanco (10 mL. de agua destilada).
b) Enfriar a temperatura ambiente y transferir su contenido cuantitativamente a

embudos de separacin de 125 mL, lavar el matraz usando de 10 a 15 mL
de agua destilada (2 veces)
c) Enfriar el contenido del embudo a temperatura ambiente y agregar 5 mL de

la solucin de KCN.
d) Extraer el plomo de la fase acuosa adicionando 10 mL de la solucin de

trabajo de ditizona y agitar vigorosamente durante 10 min.
e) Examine la capa clorofrmica, si no se encuentra verde, agregar 10 mL ms

de la solucin de trabajo de ditizona. Observar nuevamente, remover la
capa roja superior acuosa por aspersin y deschela. Tenga cuidado ya que
el liquido contiene un alto contenido de cianuro.
f) Agregar 10 a 15 mL de la solucin de lavado a la capa de cloroformo

remanente y agitar vigorosamente. Esta operacin extrae cualquier exceso
de ditizona dentro de la fase acusa y deja el color rojo de ditizonato de
plomo en la fase clorofrmica. Remueva la fase acuosa por aspersin y
deschela.
g) Repetir el lavado una vez ms para extraer la ditizona remanente en el

extracto de cloroformo.
h) Transferir el ditizonato a un tubo de ensayo y centrifugar.
i) Determinar la absorbancia de la solucin centrifugada de cloroformo a 505

nm. Usando un blanco de CHCl3 obtenido a partir de agua y sometido al
mismo procedimiento de la muestra problema.
j) Usar esta misma solucin tambin como blanco para medir la absorbancia
de la soluciones de la curva estndar de plomo.
k) Preparar la curva estndar a partir de la solucin stock con las siguientes

concentraciones: 5, 10, 20, 40, 80 ug/10 mL
RESULTADOS:
1.- Construir una tabla con la siguiente informacin
pH antes de pH despus de Precipitado (Pb)

calentar calentar
Vasija A
Vasija B
Vasija C
Control
2.- Construya una grfica de absorbancia vs. concentracin de Pb, y de

concentracin de Pb vs las diferentes vasijas.
3.- Realizar un diagrama en el que se indique el procedimiento para la fabricacin

de vasijas de cermica.
4.- Cul es la interpretacin de los resultados obtenidos?
5.- Construya una tabla donde se indiquen otras fuentes de exposicin al plomo y
la cantidad estimada que pueda contener el mismo.
6.- Mencione al menos 5 alimentos cuyo pH sea alcalino y 5 cuyo pH sea cido
7.- Concluya y discuta ampliamente la prctica realizada

BIBLIOGRAFA:
1. Evaluacin epidemiolgica de riesgos causados por agentes qumicos

ambientales, Toxicologa III. Tomo 6. Mxico, 1980.
2. Methodology for Analytical Toxicology, Irving Sunshine. Ed. C.R.C. Press. 2da.
Edicin Mxico, 1981
3. Diagnstico clnico para Laboratorio. Davidson. J. Henry, T. Sanford. Ed. Salvat.
Mxico, 1971.
PRCTICA N 6
DETERMINACIN DE PLOMO EN MUESTRAS DIVERSAS
INTRODUCCIN
El plomo ha sido objeto de amplios estudios tanto en animales de experimentacin

como en humanos, los cuales han permitido el conocimiento de su toxicologa. El
plomo inorgnico absorbido es transportado en sangre unido al estroma del
eritrocito; su concentracin est en equilibrio con los tejidos blandos, no as con el
hueso, donde se acumula preferentemente (cerca del 90 %). Sin embargo, pude
ser movilizado y regresar a la circulacin sistmica. Tiene una vida media de ms
de 20 aos (Repetto, 1997).
El balance positivo de plomo en el organismo comienza con una ingesta superior

a 200 g/da; una de 2.5 mg/da requiere aproximadamente 4 aos para la
acumulacin de una carga txica, pero una de 3.5 mg/da la alcanza en unos
meses. Un cigarrillo contiene hasta 12 g de plomo y la absorcin puede ser hasta
del 12 %.
Es un txico multisistema y presenta cuatro sndromes importantes: neurotxico,

nefrotxico, hematopoytico y gastrointestinal. Los niveles sanguneos de plomo
son importantes en las intoxicaciones agudas, pero la plumbemia demuestra que
su permanencia en sangre es fugaz, ya que alcanza rpidamente los depsitos.
Este xenobitico presenta gran capacidad para formar complejos estables por
unin a grupos tilicos, carboxlicos y fosfatos, e interacciona con metales
esenciales como calcio, fierro, zinc y cobre (Crdoba y Henao, 2001).
OBJETIVO GENERAL
Determinar la concentracin de plomo en diversas muestras mediante absorcin
atmica.
REACTIVOS
cido ntrico concentrado
Agua desionizada para absorcin atmica
Soluciones estndar de plomo para absorcin atmica (0.5, 1, 1.5, 5, 10, 15 ppm).
MATERIAL DIVERSO
6 Matraces volumtricos de 25 mL
Puntas para micropipeta
6 Frascos de plstico de 25 mL
1 Vaso de precipitados de 50 mL
1 Mechero fisher
1 Tripode para autoclave
1 Gradilla metlica
Papel Whatman No.42
1 Propipeta
Por equipo
1 Tubo de ensayo con tapn de baquelita
1 Embudo de filtracin
1 Matraz volumtrico de 25 mL
1 Frasco de plstico de 25 mL
1 Agitador de vidrio
EQUIPO
Autoclave
Espectrofotmetro de absorcin atmica Varian modelo AA1475
MATERIAL BIOLGICO
Muestras de agua de charco, agua de pozo, agua tratada en material de barro,
sangre humana, lechuga, organismos acuticos, chiles en vinagre, cosmticos y
suelos.
Tcnica establecida en APHA, AWWA & WPCF (1995).
1. Tomar 1 mL de la muestra, colocarlos en un tubo de ensayo con tapn de

baquelita y agregar 2 mL de cido ntrico concentrado, tapar los tubos.
2. Colocar los tubos en una gradilla metlica y digerir en autoclave a 121C y 15
lbs de presin durante 1 hora.
3. Filtrar las muestras a travs de papel Whatman No. 42 y recibirlas en un
matraz volumtrico de 25 mL; aforar con agua desionizada para absorcin
atmica.
4. Transferir las muestras a frascos de plstico y leer en espectrofotmetro de
absorcin atmica.
5. Interpolar los resultados en curva tipo de plomo (0.5, 1, 1.5, 5, 10, 15 ppm).
1. Anotar los datos obtenidos para la determinacin de plomo de las diferentes

muestras, as como los de la curva tipo, en la tabla correspondiente.
2. Interpolar los datos en la curva tipo (regresin lineal).
3. Evaluar si estas muestras se encuentran dentro de los lmites permisibles para

cada una de las matrices.
Tabla 1. Curva tipo.
Muestra Conc. de plomo Absorbancia

(ppm)
1
2
3
4
5
6
Tabla 2. Concentracin de plomo en muestras biolgicas y agua.
Muestra Absorbancia Conc. de plomo

(ppm)
Cuestionario
1. Construya una tabla donde se indiquen otras fuentes de exposicin al plomo y

la cantidad estimada que pueda contener el mismo.
2. Cmo influye el pH de los alimentos en la contaminacin por plomo?
3. Mencione al menos 5 alimentos cuyo pH sea alcalino y 5 cuyo pH sea cido
4. Indique cuales son los signos y sntomas de intoxicacin por plomo
5. Describa cual es el tratamiento preventivo y la terapia a seguir ante una
intoxicacin por Plomo.
Bibliografa
1. APHA, AWWA & WPCF. Standard methods for the examination of water and
wastewater. Eaton, D.A., Clesceri, L.S., Greenberg, A.E. (Eds.). APHA, AWWA
& WPCF, Washington, D. C., 1995.
2. Crdoba, D., Henao, H.S. Plomo. En: Toxicologa. Crdoba, D. (Ed.). 4a ed., El
Manual Moderno, Bogot, 2001.
PRACTICA N 4
EFECTOS DE LA ADMINSTRACIN DE PLOMO EN LA SANGRE

INTRODUCCION:
La produccin de anemia por intoxicacin con plomo, es uno de los efectos mejor
documentados en cuanto a la accin de plomo en sangre. Se sabe que este metal
es capaz de inhibir la sntesis del grupo hem y el conocimiento de mecanismo de
accin ha llegado a establecer indicadores de la exposicin al plomo, como son
los niveles de protoporfirinas, el cido deltaaminolevulnico, as como los niveles
de plomo en sangre. Sin embargo, existen en la actualidad datos escasos acerca
de los cambios morfolgicos a nivel de las clulas sanguneas que se presentan
durante la intoxicacin aguda con plomo.
La manifestacin hematolgica ms conocida, es la formacin de agregados del

cido ribonucleico de los eritrocitos (punteado basfilo). Se sabe tambin que los
glbulos rojos tienden a ser levemente hipocrmicos y microcticos. La medicin
de plomo en sangre es una prueba comnmente empleada en la evaluacin de la
exposicin y absorcin de plomo en el hombre, sin embargo, no permite
establecer la acumulacin de ste en el organismo.
Para conocer sus efectos se emplean otras pruebas, las cuales determinan el
dao sufrido en el proceso de formacin de hemoglobina como la determinacin
de:
a) En orina: Concentracin de plomo, c. delta-aminolevulinico, coproporfirina.
b) En sangre: Ala-dehidratasa, protoporfirina eritroctica y Zn. En este mismo

fluido biolgico se analiza tambin: si hay anemia (midiendo la concentracin
de hemoglobina), reticulocitos (clulas rojas inmaduras), punteado basfilo
(glbulos rojos con grnulos). En la tabla siguiente se muestran algunos
valores de plomo en sangre y su significado.
Concentracin de Pb en Sangre Significado

0-40ug/100g Concentracin que se llega a tener por
exposicin ambiental.
4-60ug/100g Exposicin laboral
60-70ug/100g Niveles de absorcin peligrosa
70-mas ug/100g Niveles de intoxicacin
La mayora de los enfermos por intoxicacin con plomo manifiestan un cierto

grado de anemia, an cuando sta constituya rara vez la manifestacin clnica
predominante. No obstante, el examen de la sangre perifrica proporciona a
menudo la clave del diagnstico y por tanto los datos hematolgicos son de gran
inters.
OBJETIVO:
Determinar la relacin que existe entre las alteraciones en la morfologa de las

clulas sanguneas, provocadas por la administracin de diferentes
concentraciones de plomo, as como sus efectos inmediatos en los valores de
hemoglobina y hemotocrito.
MATERIAL Y EQUIPO
Material biolgico:
4 ratas por equipo (ratas macho de 150 - 200g de peso corporal)
Material:
3 jeringas de insulina por equipo
tijeras y pinzas de diseccin.
4 jeringas de 10 ml.
20 tubos de ensayo de 10X100
15 tubos capilares para microhematocrito.
1 pipeta de Shali
2 pipetas de 5ml.
Tabla de diseccin
Portaobjetos
Equipo:
Centrfuga clnica
Espectrofotmetro visible con celdas,
Microscopio con objetivo de inmersin.
Reactivos:
Acetato de plomo
Acetato de sodio
Solucin salina al 0.9%
Solucin de Drabkin
Kit o reactivo para la cuantificacin de hemoglobina (mtodo de
cianometahemoglobina).
Estndar de cianometahemoglobina (para la elaboracin de la curva
estndar)
Colorante de Wright
Eter
Solucin de heparina (anticoagulante)
PROCEDIMIENTO.
1.- Administracin
a) Pesar los animales y dividirlos en 4 grupos

b) Administrar por va I.P. las siguientes soluciones: Grupo 1: 0.5 mL de acetato
de plomo con una dosis equivalente a 50 mg/kg de peso corporal; Grupo 2:
0.5 mL de acetato de plomo con una dosis equivalente a 100 mg/kg de peso
corporal; Grupo 3: 0.5 mL de acetato de sodio con una dosis equivalente a
100 mg/kg de peso corporal y Grupo 4: 0.5 mL de solucin salina al 0.9%. Las
dosis se administrarn diariamente durante 4 das previos a la prctica.
2.- Obtencin y tratamiento de las muestras sanguneas.
a) 1hr. Despus de la administracin, anestesiar a las ratas con ter y extraer por
puncin cardiaca la mayor cantidad de sangre que sea posible (10 ml.
aproximadamente)
b) Colocar la mitad de la sangre en un tubo con anticoagulante y la otra mitad en
otro tubo para su posterior digestin.
c) Cuantificar el hematocrito y la concentracin de hemoglobina de la muestra
que contiene el anticoagulante
d) Una parte de la misma muestra centrifugar a 2500 r.p.m, por 10 min. Y
cuantificar la concentracin de hemoglobina libre en el plasma
e) Preparar una laminilla con la sangre y teirla con el colorante de Wright,
observar al microscopio e identificar y anotar las alteraciones morfolgicas de
los eritrocitos.
RESULTADOS:
1.- Se construye una tabla con la siguiente informacin
Grupo Hto Hb Hb- L Conc. Pb

Grupo Hematocrito Hemoglobina Hemoglobina Plomo
(%) (g/100ml) libre (g/100 (ug/ml)
ml)
2.- Se construye una grfica de la concentracin de plomo vs grupo y otra grfica

de la concentracin de hemoglobina vs concentracin de plomo (de cada grupo)
3.- Determinar si los resultados son estadsticamente significativos, promediando
los valores de cada grupo y realizando una prueba de t de Student con un nivel de
significancia de p < 0.05 para los valores de Hb, Hto y Hb L; indicar los
resultados de los anlisis realizados.
4.- Cul es la interpretacin de los resultados estadsticos?
5.- Observe al microscopio las laminillas preparadas y compare las diferentes
morfologas de los eritrocitos entre los animales tratados con plomo y el tratado
con solucin salina (testigo)
7.- Elabore una discusin contrastando lo observado con lo que refiere la literatura
y concluya sobre los resultados obtenidos
CUESTIONARIO.
1.- Qu relacin existe entre la Hb-L y las alteraciones morfolgicas

encontradas?
2.- Con qu informacin se cuenta en la actualidad para explicar lo observado en
esta sesin? (Efectos del plomo a nivel de la membrana plasmtica)
3.- Qu papel juega el acetato de sodio del grupo 3 en la interpretacin de los
resultados obtenidos?
4.- Investigue y describa los fundamentos de los mtodos que actualmente se
emplean para cuantificar plomo en sangre y orina. As como de los biomarcadores
de efecto que son empleados en el diagnstico de la intoxicacin con plomo.
BIBLIOGRAFIA:
1.- N. Fernicola y P. Jauge. P. Nociones bsicas de Toxicologa: Centro
Panamericano de Ecologa Humana y salud. Mxico, 1980
2.- Criterios de Salud ambiental: Plomo. O.P.S., O.M.S. Mxico, 1979
3.- Williams, J. Hematologa. Tomo I. 2 edicin. Mxico, 1978.
PRCTICA N 4
DETERMINACIN DE NITRITOS EN JAMN
INTRODUCCIN
La contaminacin microbiolgica de los alimentos representa uno de los

mayores riesgos para la poblacin; sta puede ser prevenida mediante el uso de
aditivos. La toxina botulnica (neurotoxinas tipos A, B y E) del Clostridium
botulinum se produce en alimentos indebidamente elaborados, en condiciones
anaerbicas y especialmente en los no cidos. Es una de las sustancias ms
txicas conocidas, estimndose que 200 g de toxina pura seran suficientes para
intoxicar a la poblacin mundial, llegndose a considerar como una posible arma
biolgica.
La curacin de carnes con nitritos confiere un importante grado de

proteccin contra el botulismo. Sin embargo, la transformacin de los nitritos y
ciertas aminas en el medio cido estomacal pueden propiciar la formacin de
nitrosaminas, siendo algunas poderosos agentes carcinognicos. De igual
manera, los nitratos que bajo ciertas condiciones son convertidos a nitritos,
pueden propiciar la formacin de metahemoglobina
El lmite mximo permitido de residuos de nitritos para embutidos en

Estados Unidos es de 100 a 120 ppm.
La determinacin de nitratos y nitritos se realiza por diferentes mtodos. El

mtodo espectrofotomtrico propuesto en esta prctica se basa en la extraccin
acuosa de estas sales por calentamiento, para posteriormente formar el
compuesto diazo y llevar al cabo su copulacin con clorhidrato de N-naftil
etilendiamino.
OBJETIVO GENERAL
Determinar la concentracin de nitritos presente en una muestra de jamn y

verificar si las muestras analizadas se encuentran dentro de los lmites permisibles
de la Norma Oficial Mexicana.
REACTIVOS
Sulfanilamida (disolver 0.5 g en 150 mL de cido actico al 15%)
Reactivo de NED (disolver 0.2 g de N-(1-naftil etilendiamino) diclorhidrato
en 150 mL de cido actico al 15 %)
cido actico
Nitrito de sodio
Agua destilada
MATERIAL DIVERSO
1 Matraz erlenmeyer de 500 mL
2 Matraces erlenmeyer de 200 mL
1 Probeta de 50 mL
2 Frascos de 200 mL
Papel filtro No. 1
Papel filtro Whatman No. 42
2 Celdas de vidrio para espectrofotmetro
Por equipo
1 Mortero
1 Parrilla
1 Bao Mara
1 Termmetro
1 Soporte universal
1 Anillo para soporte
2 Vasos de precipitados de 100 mL
1 Matraz erlenmeyer de 200 mL
1 Probeta de 100 mL
1 Embudo de filtracin
1 Agitador de vidrio
Para la curva tipo

2 Pipetas volumtricas de 10 mL
1 Vaso de precipitados de 100 mL
EQUIPO
Balanza granataria
Balanza analtica
Espectrofotmetro
MUESTRA BIOLGICA
100 g de jamn por equipo (diferente marca comercial por cada equipo de trabajo)
Mtodo para determinacin de nitritos AOAC (1990).
Muestras
1. Macerar una muestra de jamn y pesar 5 g, pasar a un vaso de precipitados de

100 ml.
2. Adicionar 80 ml de agua destilada y calentar sobre una parrilla a 80 C,
mezclando con una varilla de vidrio.
3. Transferir la muestra cuantitativamente a un matraz erlenmeyer de 500 mL,
lavando el vaso de precipitados con varias porciones de agua destilada
caliente, hasta un volumen aproximado de 150 mL
4. Calentar a bao mara a 80 C durante 1.5 horas, agitando frecuentemente.
Transcurrido este tiempo, enfriar el matraz en bao de hielo; posteriormente
poner a reposar hasta que adquiera la temperatura ambiente, trasvasar y llevar
a aforo de 500 ml con agua destilada (no olvide homogenizar).
5. Filtrar la muestra empleando papel filtro No.1 y silica gel 60 en polvo;
posteriormente pasar el filtrado sobre papel Whatman No.42 doble con silica
gel 60, hasta que desaparezca la opalescencia del filtrado.
6. Tomar una alcuota de 25 mL del filtrado, transferirla a un matraz volumtrico
de 50 ml y colocarlo sobre un bao de hielo para llevar al cabo la reaccin.
7. Adicionar 2.5 mL de reactivo de sulfanilamida, agitar y dejar reposar la reaccin
durante 5 minutos.
8. Agregar 2.5 mL del reactivo de NED, mezclar y dejar que la reaccin se
estabilice durante 15 minutos a temperatura ambiente. Dependiendo del color
observado en comparacin a la curva tipo, aforar al volumen con agua
destilada, o leerlo sin diluir, empleando un espectrofotmetro a una longitud de
onda de 540 nm.
9. Preparar un blanco de reactivos empleando agua en lugar de muestra y con el
mismo tratamiento que el problema.
Curva tipo
1. Pesar exactamente 1 g de nitrito de sodio y transferirlo a un matraz volumtrico

de 1 L. De esta solucin tomar 10 mL y llevarlos a un volumen de 100 mL;
tomar 2 ml de esta solucin y llevarlos a 100 mL.
2. De la ltima solucin, tomar alcuotas de 5, 10, 15, 20 y 25 mL; transferirlas a
matraces volumtricos de 50 mL
3. Adicionar a cada matraz 2.5 mL de reactivo de sulfanilamida, agitar y dejar en
reposo durante 5 min.
4. Agregar a cada matraz 2.5 mL de reactivo de NED, agitar y permitir que la
reaccin se estabilice durante 15 min. Transcurrido este tiempo, aforar a
volumen cada matraz con agua destilada.
5. Determinar la absorbancia en un espectrofotmetro a una longitud de onda de

540 nm, usando como referencia un blanco de reactivos y agua destilada,
tratado de la misma forma que el problema.
1. Trazar una grfica con los datos de las concentraciones y absorbancias

obtenidas del estndar, aplicando regresin lineal.
2. Interpolar en la grfica la absorbancia del problema (regresin lineal).
3. Determinar la concentracin de nitritos de las muestras en partes por milln
(ppm).
CUESTIONARIO
1.- Qu finalidad tiene la digestin de la muestra?
2.- Actan directamente los nitritos en el organismo son transformados?

3.- Qu tipos de nitritos son ms comnmente utilizados en los alimentos
y en qu concentracin?
4.- Escriba una lista de los alimentos ms consumidos por el hombre que
contengan cierta cantidad de nitritos.
5.- Cre usted que las concentraciones encontradas de nitritos en los
diferentes alimentos tratados tengan relacin con algn dao en el
organismo.
BIBLIOGRAFA
1. Garca, R.M., Garca, M., Caas, P. Nitratos, Nitritos y Compuestos de N-

nitroso, Serie Vigilancia 13. Centro Panamericana de Ecologa Humana y
Salud, Metepec, Mex., 1994.
2. Lu, F.C. Toxicologa. 2a ed., Masson, Pars, 1992.
3. Mtodo de Anlisis AOAC (Official Methods of Analysis), 1990.
4. Vallejo, M.C. Toxicologa de alimentos. En: Toxicologa. Crdoba, D. (Ed.). 4a
ed., El Manual Moderno, Bogot, 2001.
PRCTICA N 6
DETERMINACIN DE NITRITOS COMO CONTAMINANTES EN

ALIMENTOS Y SUS EFECTOS EN EL ORGANISMO
INTRODUCCIN:
En la industria alimenticia principalmente, los nitritos alguna de sus formas

(compuestos que contengan el grupo nitrgeno) tienen gran uso debido a las
caractersticas que le proporcionan a los alimentos, como pueden ser de
conservador, colorante y estabilizadores principalmente.
El abuso en el uso de estos compuestos de nitrgeno causan al organismo, desde

pequeos daos hasta la muerte por la formacin de tumores cancergenos.
Estos nitritos en cualquiera de sus formas, cuando ingresan al organismo se

convierten en nitrosaminas (dialquilnitrosamina y monoalquilnitrosamina), grupo
importante de carcngenos muy potentes.
Tambin se ha tomado en cuenta los productos del campo que a pesar de no

estar procesados pueden llegar a tener cantidades considerables de nitritos, esto
es por consecuencia de la fertilizacin de las tierras.
No solo a nivel digestivo actan los nitritos, sino que son capaces de atacar otros
rganos como el hgado, vescula, rin, pulmn, esto va en relacin en ocasiones
al tipo de alimento que se ingiera y al tipo de compuesto nitrogenado (en su
mayora nitritos) que contenga.
Otra caracterstica de los nitritos, es la oxidacin que provoca de Fe+2 a Fe+3,

produciendo as metahemoglobina, llegando a provocar la muerte en el hombre.
Por lo anterior se puede decir que los nitritos son potentes agentes cancergenos,
que se encuentran presentes comnmente en verduras y embutidos llegando a
causar un gran dao an cuando se encuentren presentes en pequeas
cantidades en los alimentos (0.1%).
OBJETIVO:
Determinar la concentracin de nitritos presentes en una muestra alimenticia y

relacionarla con un dao posible en el organismo.
MATERIAL BIOLGICO:
- Embutidos, verduras (aprox. 5g.)
MATERIAL:
- Mortero
- Pipetas graduadas de 2 y 10ml.
- Perilla
- Matraces volumtricos de 10ml.
- Embudo
- Tubos de ensayo de 13X100
EQUIPO:
- Equipo para reflujo

- Balanza analtica
- Espectrofotmetro con celdas
REACTIVOS:
- Etanol al 95%
- Carbonato de sodio
- cido sulfanlico
- N-naftiletilendiamino
- Agua destilada
PROCEDIMIENTO:
1.- Tratamiento de la muestra
a) Pesar 1g. de muestra y macerarla con etanol al 95%
b) Transferirlo a un matraz de bola de 500ml. y agregar 250mg. De

carbonato de sodio y completar el volumen a 100ml. con etanol al 95%
c) Poner a digestin durante 2 hrs.
d) Al trmino filtrar y evaporar el etanol, agregar enseguida 15ml. de agua

destilada.
e) Volver a filtrar y lavar bien el embudo, recibiendo el contenido en un

matraz aforado de 100ml. y llevarlo a volumen con agua destilada.
f) Tomar 2ml. de la solucin anterior y agregar 2ml. de cido sulfanlico y
dejar reposar 10min.
g) Al trmino agregar 2ml. de N-naftiletilendiamina y aforar a 10ml. con

agua destilada.
h) Dejar reposar durante 15min. Y leer su absorbancia en el

espectrofotmetro a 540nm.
2.- Preparacin de la curva estndar
a) Pesar el equivalente a 25mg. De nitritos y realizar disoluciones

hasta obtener una concentracin de: 2,5,5,7,5,10 y 12.5mcg./ml.
b) Realizar la reaccin de color como lo indica la muestra
c) Leer sus absorbancias a 540nm.
RESULTADOS:
1.- Reportar las siguientes tablas:
Conc.(mcg/ml.) D.O.
2.5
5
7.5
10
12.5
Realizar la regresin lineal.
2.- Reportar concentraciones de nitritos por 100g. de muestra
3.- Realizar la curva estndar
4.- Realizar una grfica de barras de conc. vs. Muestras tratadas;
comparando as que muestra contiene ms nitritos.
5.- Discuta los resultados obtenidos as como las conclusiones que de ellos
se obtienen.
CUESTIONARIO:
1.- Que finalidad tiene la digestin de la muestra?
2.- Actan directamente los nitritos en el organismo son transformados?

3.- Que tipos de nitritos son ms comnmente utilizados en los alimentos y
en qu concentracin?
4.- Escriba una lista de los alimentos ms consumidos por el hombre que
contengan cierta cantidad de nitritos.
5.- Considera usted que las concentraciones encontradas de nitritos en los
diferentes alimentos tratados tengan relacin con algn dao en el
organismo.
BIBLIOGRAFA:
1. Tood Sandford. Diagnstico Clnico para Laboratorio. Ed. Salvat,

Mxico, 1979
2. Goldstein. Arrow. Farmacologa. Ed. Limusa. 2. Edicin, Mxico, 1979

PRCTICA N 7
PRODUCCION DE METAHEMOGLOBINA POR NITRITOS Y SU TRATAMIENTO

CON AZUL DE METILENO.
INTRODUCCIN:
La hemoglobina es una protena respiratoria responsable del transporte de

oxgeno en los tejidos. La hemoglobina est constituida de una parte proteica
denominada globina y un grupo tetrapirrolico conocido como grupo hem, que en su
centro contiene un tomo de fierro reducido (Fe+2). En el transporte de oxgeno el
tomo de fierro no cambia su estado de oxidacin, sin embargo, en condiciones
normales de 1 al 3% de la hemoglobina circulante sufre autooxidacin originando
que el hierro del la Hb se oxide hasta Fe+3, formndose as una protena incapaz
para el transporte de oxgeno denominada protoporfirina II, ferriglobina o
comnmente llamada metahemoglobina.
El acmulo de metahemoblobina en sangre ms all de los niveles normales

recibe el nombre de metahemoglobinemia, la cual puede ser producida por:
a) Deficiencia gentica hereditaria.

b) Agente oxidantes de la hemoglobina (nitritos, fenacetinas).
Los nitritos actan directamente sobre la molcula de hemoglobina llevndola

hasta metahemoglobina. Los nitritos se encuentran en grandes cantidades a nivel
industrial o ambiental contaminando agua y alimentos.
Algunos de los factores que influyen sobre la produccin de metahemoglobina

son:
a) va de entrada del compuesto oxidantes
b) Cantidad que entra al organismo
c) Influencia de otras sustancias qumicas sobre la formacin y eliminacin de la
metahemoglobina.
La sintomatologa que presenta la enfermedad es: cianosis, disnea, estupor y

letargia, y como ltimo sntoma paro cardiaco llegando a la muerte.
El uso del azul de metileno para combatir la metahemoglobinemia ilustra la

reparacin por un antdoto de un receptor daado, el colorante produce la
reduccin de la metahemoglobina a Hb, y es un antdoto efectivo contra la
metahemoglobinemia, sin que importe la causa, este colorante (azul de metileno)
acta como un receptor de electrones intermediario entre el NADPH y la
metahemoglobina, sufre la reduccin en uno de sus anillos a su forma incolora, la
leucobase.
Se debe tener cuidado con el uso del azul de metileno a dosis altas porque es
capaz de producir metahemoglobinemia (por oxidacin directa) as como hemlisis
y depresin del SNC.
OBJETIVO:
Observar la produccin de metahemoglobina inducida por la intoxicacin por

nitritos en ratones y el efecto del azul de metileno como antdoto.
MATERIAL BIOLOGICO:
4 ratones con un peso aproximado entre 25 30g
MATERIAL:
2 jeringas heparinizadas.
10 tubos de ensayo de 13X100
Pipetas de 1 y2 ml. Graduadas
Pipetas de 10 ml.
Tabla de diseccin
Pinzas y tijeras de diseccin
EQUIPO:
Balanza para animales
desecador
centrfuga
espectrofotmetro.
REACTIVOS:
- Amortiguador de fosfatos pH 6.6: se disuelven 3.8 g. de fosfato disdico
anhidro y 5.44 g. de fosfato monopotsico anhidro en un litro de agua.
- Solucin de cianuro neutralizada: se prepara inmediatamente antes de su

uso, con una parte de solucin de cianuro al 10% y otra de cido actico al
12% (Hacer uso de ella durante la primera hora de preparacin
- Cianuro de sodio al 10%: se disuelve 1g. de cianuro de sodio en 10 ml.

de agua.
- Solucin de cido actico 2 M: Diluir 12 mL de cido actico glacial con

agua y aforar a 100 mL
- Solucin concentrada de amoniaco
- Solucin de Azul de Metileno
- Ferricianuro de potasio al 20%: Se disuelven 2g de ferricianuro de potasio

en 10ml. de agua
- ter
PROCEDIMIENTO
I.-Obtencin de la muestra
a).- Pesar los ratones y dividirlos en 4 grupos
b).- Administrar por va I.P. las siguientes dosis:
- Ratn 1: 25 mg de Nitrito de sodio/Kg de peso corporal

- Ratn 2: 50 mg de Nitrito de sodio/Kg de peso corporal
- Ratn 3: 50 mg de Nitrito de sodio/Kg de peso corporal, despus de 30
administrar azul de Metileno a una concentracin de 2 mg/Kg pc, por va IP
- Ratn 4: Administrar primero una dosis de 2mg/Kg de azul de metileno y al
cabo de 10 min. Se administrar 50mg/Kg de nitrito de sodio.
c).- Despus de media hora de la administracin se anestesiar el raton con ther

y bajo condiciones de anestesia profunda (Etapa III) se extraer la mayor cantidad
de sangre posible por puncin cardiaca, con jeringa heparinizada, pasa a un tubo
limpio
II.- Tratamiento de la muestra. (Cuantificacin de Metahemoglobina)
1.- Coloque 4.9 ml de buffer de fosfatos en un tubo de ensaye 13X100

2.- Agregue 0.1 ml de sangre heparinizada
3.- Mezcle y deje reposar durante 5 min.
4.- Centrifugue durante 10min, y recupere el hemolizado completo
5.- Lea a 630nm (Lectura A1) empleando agua como solucin de referencia y
regrese la solucin al tubo de prueba.
6.- Agregue una gota de la solucin de cianuro neutralizada al hemolizado.
7.- Mezcle y deje reposar 2min, lea a 630 nm (Lectura A2)
8.- En un tubo de prueba (determine) mezcle 2 ml de solucin del paso 7 con
8mL. de Buffer de fosfatos y 0.2mL de K3Fe (CN). Al mismo tiempo prepare un
blanco empleando 2 mL de H2O tratada en forma similar
9.- Despus 2 min agregue 1 gota de solucin neutralizada de cianuro a la
muestra y al blanco.
10.- Mezcle, espere 10 min. y determine la absorbancia a 540 nm (Lectura A3).
III. Obtenga los corrimientos espectrales de las muestras que fueron empleadas
para obtener las lecturas A1, A2 y A3, obteniendo lecturas de absorbancias en el
intervalo de longitud de onda de 450 nm a 700 nm.
RESULTADOS:
1.- Reportar la Hb total.
Hb total g./100ml.=A3X37.4
2.- Reportar la metahemoglobina total
Metahemoglobina total g./100 = (A1A2) 23.4
3.- Reportar la relacin de Hb y metahemoglobina expresada en %.
%MHb= (A1-A2) x 23.4

-------------------
A3 x 37.4
Los valores normales de metahemoglobina para hombres y mujeres representan

alrededor del 3% de la Hb total: o sea 0.5g./100ml.
4.- Graficar el porcentaje (%) de metahemoglobina vs. Dosis
5.- Grafique las lecturas de absorbancia vs longitudes de onda y compare los

espectros obtenidos.
6.- Concluir y discutir los resultados obtenidos ampliamente.
CUESTIONARIO
1.- Describa el mecanismo de accin del Azul de Metileno en su uso como

antdoto en casos de intoxicacin con sustancias que producen metahemoglobina.
2.- Describa las reacciones que se llevan a cabo entre el azul de metileno y la
molcula de metahemoglobina.
3.- Que se est leyendo al obtener las absorbancias A1, A2, y A3?.
4.- Describa las reacciones que se llevaron a cabo en cada paso seguido en la
determinacin de hemoglobina y metahemoglobina.
BIBLIOGRAFIA
1.-Wintrobe,M. M. Hematologa clnica 4. Edicin de Interamericana. Buenos

Aires. Cap. III, XXIII
2.-Doull, J., Klaassen, C. D. Ambur, H.O. Cassarett Doulls. Toxicology. Ed. Mac
Millan. Pub. Chap. IO. 1980
3.-Drill, E. Famacologa clnica. 2 edicn de la Prensa Mdica Mexicana. Mxico

Cap.II.
4.-Linch. M. J. Mtodos de laboratorio 2. Edicin Ed. Interamericana. Mxico
1982
5.- Sunshine, Y. Methodology for Analytical Toxicology p. 245 C.R. C. Press USA
1975.
PRACTICA V.14
CINTICA DE ELIMINACION DEL ACIDO ACETIL SALICILICO Y SU

RELACION CON EL DAO
INTRODUCCION:
El cido acetilsalicilico (ster actico del cido saliclico) comnmente llamado

aspirina, es un compuesto ampliamente usado en el mundo por sus conocidas
propiedades analgsicas, antipirticas y antiinflamatorias.
Frmula condensada: C9H8O4

P.M. = 180.15 g/mol
pKa = 3.4
El abuso del medicamento y su fcil adquisicin hacen que se presenten con gran
frecuencia reacciones txicas originadas por salicitatos. La aspirina despus de su
administracin oral es hidrolizada mediante una esterasa o hidrolasa dando lugar
a la formacin de cido saliclico, que es el responsable de los efectos
antIinflamatorios y txicos en el organismo. Los principales efectos adversos
producidos por salicilatos se describen a continuacin: En el tracto gastrointestinal
produce nuseas, vmito, lcera gstrica y hemorragia y ms frecuentemente
eritema gstrico, a una dosis generalmente de 20-30 g/da. En pacientes que han
tomado entre 4 a 5 g/da durante 26 das, el promedio de sangre fecal que se
pierde por da es de 3 a 8 mL, comparado con 0.6 mL/da en sujetos control. En el
sistema nervioso central a dosis teraputicas llega a causar sordera, dolor de
cabeza, desvanecimiento. En el rin produce isquemia, vasoconstriccin,
disminuye el flujo sanguneo y la excrecin de sodio. En el hgado se observa a
concentraciones elevadas de salicilatos en sangre (250 ug/mL), un incremento de
la actividad de la TGO, TGP, LDH, fosfatasa alcalina, hepatomegalia, infiltracin
mononuclear peritoneal y la disminucin de la sntesis de cido flico.
Afortunadamente el problema es reversible en la segunda semana, tambin se ha
observado un aumento en el volumen de bilis que se excreta. El dao heptico
aparece por la expresin, en la mayora de los casos, de la susceptibilidad
individual, a la toxicidad de este compuesto.
OBJETIVO:
Evaluar el dao heptico en conejos producido por el cido acetilsaliclico

mediante la cuantificacin de la actividad enzimtica y su relacin con la cintica
en sangre de este compuesto.
MATERIAL Y EQUIPO
Material Biolgico:
3 conejos de un peso aproximado de 1.5 - 2.0 Kg.
Material:
5 jeringas de 5 mL
algodn
20 tubos de ensayo de 13 x 100
pipetas volumtricas y graduadas.
pliego de papel filtro
hoja para rasurar.
1 cnula
Equipo:
1 bao mara
1 Espectrofotmetro
1 centrifuga
Reactivos:
cido acetilsaliclico
Alcohol
Xilol
Reactivos para las pruebas de transaminasa glutmico oxalactica (TGO),
transaminasa glutmico pirvica (TGP), y fosfatasa alcalina (FA).
Reactivo de Trinder: 40 g de cloruro mercrico en 850 mL de agua
destilada, prepare por separado 120 mL de HCl 1N y 40 g. de nitrato frrico
(FeNO3), ya disuelto todo el nitrato frrico se adiciona a la primera solucin
y se afora a un litro.
Estndar de salicilatos.
PROCEDIMIENTO:
1.-Obtencin de muestras sanguneas:

a) Pesar los 3 conejos en una balanza granataria
b) Restaurar la oreja, dejando ver claramente la vena marginal.
c) Obtener por incisin de la vena marginal, 3 mL de sangre, limpindola
previamente con alcohol. Se puede aplicar xilol a la oreja del conejo para
producir hiperemia y facilitar la extraccin de sangre. Es recomendable lavar la
oreja con agua corriente y eliminar el xilol despus de cada extraccin.
d) Administrar por va oral dosis de cido acetil salicilico: 60, 200 y 500 mg/Kg de
peso a los conejos enumerados como 1, 2, y 3.
e) Obtener en intervalos de 30 minutos muestras de sangre, hasta completar un
periodo de 3 h, aproximadamente 3 mL de sangre en cada extraccin.
f) Centrifugar a 2500 r.p.m. por 10 minutos y separar el suero.
g) Determinar la actividad enzimtica de TGP, TGO y FA, siguiendo las tcnicas
descritas en los insertos correspondientes, as como salicilatos por el mtodo
de Trinder.
2.- Determinacin de salicilatos en la muestra:

a) Se toman 0.25 mL del suero en un tubo y se agregan 0.25 mL de agua
destilada y 2.5 mL. del reactivo de color (reactivo de Trinder), sin dejar de
agitar el tubo observar hasta que el precipitado quede finalmente disperso.
b) Centrifugar a 2000 r.p.m. durante 2 min., bien se filtra sobre el papel filtro.
c) Se transfiere el sobrenadante claro el filtrado a una celda y se lee su
absorbancia a 540 nm, frente a un testigo formado por 0.5 mL de agua y 2.5
mL del reactivo de color.
3.- Preparacin de la curva estndar de salicilatos.

a) Preparar por separado en matraces aforados de 10 mL soluciones de
salicilatos que contengan concentraciones de 50.100.150.200. y 250 ug/mL.
b) Realizar el procedimiento para desarrollo del color con el reactivo de Trinder,
como se indica en el punto 2 del procedimiento.
c) Leer la absorbancia de cada concentracin en el espectrofotmetro a 540nm, y
elabore una grfica de absorbancia vs concentracin de salicilatos.
RESULTADOS:
A partir de los resultados obtenidos realizar los siguiente:

1.- Grfica de la curva estndar de salicilatos
2.- Grficas de la actividad enzimtica de TGO, TGP, F.A., vs tiempo para cada
uno de los conejos tratados.
3.- Grficas de la concentracin de salicilatos en suero contra tiempo de cada
uno de los conejos administrados.
5.- Elabore una discusin comparando los resultados obtenidos con lo referido en
la literatura y concluya.
BIBLIOGRAFA:
1.- Goodman and Gilman. Bases Famacolgicas de la Teraputica. Ed. Mac Millan
2da. Edicin. Mxico, 1979
2.- Golstein. Arrow. Farmacologa. Ed. Limusa 2da. Edicin. Mxico, 1976
PRCTICA N 8
TERAPIA ANTIDOTAL
INTRODUCCIN
En la mayor parte de las intoxicaciones es posible identificar el agente

etiolgico. De acuerdo a diversos informes esto puede no ocurrir en menos del
10% de los casos. La historia clnica y una exploracin fsica cuidadosa permiten
obtener datos orientadores hacia un posible agente causal, a pesar de que ste no
se identifique.
Actualmente, se cuentan con diversos frmacos para el tratamiento

especfico de algunas intoxicaciones. Un antdoto tiene la capacidad de
combinarse qumicamente con el txico para formar un nuevo compuesto inerte
polar y fcilmente eliminable.
La eleccin del antdoto depende principalmente del conocimiento del

mecanismo de accin del agente txico, aunque pueden intervenir tambin
factores de especificidad, dosis, tiempo y va de administracin.
OBJETIVO GENERAL
Comparar la capacidad que tiene el carbn activado y la atropina como antdotos
inespecfico y especfico respectivamente, cuando son administrados como terapia
antidotal para tratar la intoxicacin de metil-paratin por va oral.
15 Ratones albino
Jeringas de 1, 3 y 5 mL
Cnula para ratn
Guantes
REACTIVOS
Solucin de metil-paratin
Solucin de atropina
Suspensin de carbn activado
EQUIPO
Balanza para animales
1. Pesar, marcar y distribuir aleatoriamente los animales en lotes
Lote 1: Testigo
Lote 2: Atropina
Lote 3: Carbn activado
2. Administrar el metil-paratin va oral a los tres lotes
3. Transcurridos 10 minutos, administrar:
Lote 2: Atropina 1 mg/kg va intraperitoneal cada 10 minutos
Lote 3: Carbn activado 1 g/kg por va oral cada 10 minutos
NOTA: Antes de administrar el carbn activado debe agitarse fuertemente
la suspensin para homogeneizar y ser administrada lo ms rpidamente
posible evitando tapar la cnula.
4. Anotar los signos de neurotoxicidad observados.
5. Continuar la observacin hasta 2 horas despus de la administracin de
metil-paratin.
RESULTADOS
1. Informar de acuerdo a cada tratamiento los signos presentados y el % de
incidencia.
2. Construir un grfico en el que se comparen los tratamientos y signos
observados vs. % de frecuencia sintomtica
3. Discutir de acuerdo a los resultados y literatura cual fue el mejor
tratamiento, ventajas y desventajas del uso de los antdotos empleados en
la prctica.
4. Investigue los diferentes antdotos empleados en la actualidad para
intoxicaciones con plaguicidas organofosforados.
BIBLIOGRAFA
1. Guven, M. D. et al., In vitro adsorption of dichlorvos and parathion by

actived charcoal. J. Toxicology Clin. Toxicol. 1994. 32(2):157-63.
2. Lee, D. C., Roberts, J. R. Use of oral activated charcoal in medical
toxicology. In: Contemporary Management in Critical Care. Churchill
Livingstone Inc. 1991. Vol. 1, N 3:43-60.
3. Montoya, M. A. Toxicologa Clnica. Mndez Editores, Mxico. 2009.
4. Jeyaratnam, J. Maroni, M. 1994. Organophosphorous compounds.
Toxicology. 91:15-27.
PRACTICA N 5 Bis
TOXICIDAD PRODUCIDA POR LA EXPOSICIN A TETRACLORURO DE

CARBONO (CCl4)
INTRODUCCIN
El CCl4 produce necrosis en los hepatocitos y como consecuencia el hgado
disminuye su capacidad funcional. Clnicamente se aprecia acidosis metablica,
as como elevacin de transaminasas, fosfatasa alcalina, lactato deshidrogenasa y
gama glutamil transpeptidasa, entre otras enzimas, as como tambin aumento de
la bilirrubina y disminucin de los factores de coagulacin (Treinen, 1996).
La toxicidad del CCl4 se incrementa al ser biotransformado por el sistema

enzimtico microsomal. El radical libre formado (tricloruro de metilo o de carbonilo)
no solo lesiona al hgado sino tambin a otros rganos como pulmn y rin
(Repetto, 1997).
Los procesos txicos debidos a radicales libres requieren un tiempo para su

desarrollo y aparicin de efectos; en algunos casos, como el del CCl4, el lapso es
corto. En las reacciones hepatotxicas causadas por este disolvente se distinguen
dos fases: la temprana o precoz, en donde antes de la primera hora despus de la
exposicin tiene lugar la aparicin de los metabolitos reactivos (tricloruro de metilo
[Cl3C] y tricloroperoximetilo [Cl3COO]), seguido de la peroxidacin de lpidos y
las uniones covalentes a los receptores nucleoflicos. En la segunda fase se
aprecian los fenmenos consecuentes a la acumulacin intracelular de calcio
(Snyder y Andrews, 1996).
OBJETIVO
Determinar la hepatotoxicidad y nefrotoxicidad producida por el tetracloruro de
carbono, mediante la cuantificacin de biomarcadores en suero y orina.
Observar el dao orgnico provocado por la exposicin a tetracloruro de carbono
Reactivos
Kit GOT (AST)

Kit GPT (ALT)
Kit ALP
Kit GGT
Aceite de maz
Perxido de hidrgeno
Tetracloruro de carbono
ter etlico
Kit Urea
Kit Creatinina
Kit Protenas totales
Material diverso
2 Pipetas graduadas de 10 mL 2 Gradillas para tubos de
2 Vasos de precipitados de 50 mL microcentrfuga
1 Propipeta 6 Jaulas para rata
1 Frasco de 50 mL 6 Bebederos
Pipetas pasteur Aserrn
Bulbos para pipeta pasteur Alimento para roedores
25 Tubos de microcentrfuga Marcadores indelebles
6 Pinzas de diseccin
6 Tijeras
6 Bistures
Guantes para cirujano

Cubrebocas
1 Desecador
Algodn
Por equipo
9 Tubos de ensayo
1 gradilla
EQUIPO
Microcentrfuga
Espectrofotmetro
Balanza para ratas
Balanza analtica
Animales de experimentacin
20 ratas hembra de 200 g de peso
1. Pesar, marcar y distribuir aleatoriamente los animales en seis lotes: 2 testigos y

4 tratados.
2. Administrar por va oral a los lotes tratados con CCl4 1:1 en aceite de maz, 0.4
mL por cada 100 g de rata. A los testigos administrar el mismo volumen de
aceite de maz.
3. Transcurridas 24 h de la administracin, obtener muestras de sangre de 3 a 5
mL, en tubos de ensayo.
4. Obtener el suero y centrifugar en tubos de microcentrfuga durante 15 minutos
a 9,000 rpm; separar el sobrenadante y colocarlo en los tubos de ensayo para
su anlisis.
5. Reconstituir y determinar las concentraciones de alanino amino transferasa
(ALT), aspartato amino transferasa (AST), gama-glutamil transpeptidasa (GGT)
y fosfatasa alcalina (ALP), Urea, Creatinina y Protenas totales, de acuerdo a
cada uno de las instrucciones de cada enzima.
6. Extraer, pesar y obtener el peso relativo del hgado y rion de cada animal.
7. Comparar las caractersticas macroscpicas de los rganos de los animales
tratados y testigos.
1. Llenar la tabla 1 con los datos obtenidos.
2. Obtener la media y desviacin estndar de testigos y tratados; anotarlas en la

tabla 2.
3. Sealar si existe diferencia significativa entre ambos grupos de animales,

aplicando la prueba de t-Student, con p >0.05.
4. Anotar en la tabla 3 las observaciones realizadas en los hgados.
Tabla 1. Resultados obtenidos de la evaluacin de enzimas.

Lote Rata Urea Crt PrT ALT AST GGT ALP Peso rel.
No. rgano
1
2
3
4
Testigos 5
6
7
8
9
10
1
2
3
4
Tratados 5
con CCl4 6
7
8
9
10
Tabla 2. Anlisis estadstico de resultados.
Lote Ur Cr Pr ALT AS GG AL Peso

T T T P Rel
X D. X D. X D. D.E. D. X D. X D.E X D. X D.
E. E. E E. E. E. E.
Test
Trat
Tabla 3. Caractersticas macroscpicas.

Lote Color Presencia de grasa
Testigo
Tratado
CUESTIONARIO
1.- Cmo acta el CCl4 en cuanto a su toxicidad en el organismo (a nivel

celular).?
2.- Qu usos principales se le dan a el CCl4?
3.- Describir el mecanismo qumico de accin del CCl4 dentro del organismo.
4.-Qu otros daos a nivel celular produce una intoxicacin pro CCl4?
BIBLIOGRAFA

2. Snyder, R., Andrews, L. Toxic effects of solvents and vapors. In: Casarett &
Doulls Toxicology. The basic science of poisons. Klaassen, C.D. (Ed.). 5th ed.,
McGraw Hill, New York, 1996.
3. Treinen, M. Responses of the liver. In: Casarett & Doulls Toxicology. The basic
science of poisons. Klaassen, C.D. (Ed.). 5th ed., McGraw Hill, New York, 1996.
PRCTICA N 5
DETERMINACIN DE ETANOL EN SANGRE DE RATA
INTRODUCCIN
El alcoholismo es un desorden multifactorial en el que intervienen factores

biopsicosociales y genticos. No debe ser considerado como un vicio, sino como
una enfermedad que afecta al 10% de los hombres y entre el 3 al 5% de las
mujeres.
Aunque el etanol ejerce acciones sobre la totalidad de los sistemas orgnicos, son
de importancia los desrdenes que ocasiona sobre todos los niveles del sistema
nervioso central (SNC), que es quizs el ms importante sitio de accin. Se ha
sugerido que la variedad de efectos que produce puede ser causada por mltiples
factores, tales como el efecto deletreo del alcohol mismo o sus metabolitos,
factores nutricionales y predisposicin gentica, entre otros.
El alcohol etlico es siempre un depresor del SNC; en ningn momento, ni en

ninguna dosis por pequea que sta sea, puede ser un estimulante. Es un
depresor descendente e inespecfico de dicho sistema; deprime los centros
inhibitorios, lo cual se manifiesta por el corte de frenos ticos, morales, sociales y
de tradiciones, adquiridos a travs de mucho tiempo (Crdoba, 2001).
La intoxicacin aguda por ingestin se clasifica segn Repetto (1995) en:
- Ligera (concentraciones de alcohol en sangre de 0.05-0.15%; 0.5-1.5 mg/mL).

Se produce disminucin de las inhibiciones, ligeros trastornos de la visin y de
la coordinacin muscular, as como lentitud en el tiempo de reaccin.
- Moderada (de 0.15-0.3%; 1.5-3 mg/mL). Hay franco trastorno de la visin,

prdida sensorial, falta de coordinacin muscular, lentitud en el tiempo de
reaccin y lenguaje entrecortado.
- Grave (de 0.3-0.5%; 3-5 mg/mL). Existe marcada falta de coordinacin

muscular, visin borrosa o doble, estado prximo al estupor. La muerte puede
producirse dentro de estos lmites.
- Coma (por arriba de 0.5%; 5 mg/mL). Inconsciencia, respiracin lenta, reflejos

disminuidos y prdida completa de las sensaciones. La muerte es frecuente a
estas concentraciones.
En el alcoholismo crnico influye de forma importante el factor gentico. El
consumo de grandes cantidades en pocos das o de pequeas cantidades
frecuentemente por periodos prolongados, puede producir toxicidad crnica, la
cual se caracteriza por dependencia fsica, hepatotoxicidad, nefrotoxicidad,
adems de la neurotoxicidad, llegando hasta la demencia.
El contenido de alcohol est determinado en cada bebida por su tipo y forma de

elaboracin, y se expresa por medio del grado alcohlico. As una bebida de 39
contiene 390 mL de etanol puro por litro.
Se han propuesto dos vas para la biotransformacin del alcohol a acetaldehdo

(Parkinson, 1996):
1. Va de la deshidrogenasa alcohlica:
CH3 CH2 OH + NAD+ CH3 CHO + NADH + H+
2. Sistema microsomal de la oxidacin del etanol (Cit P450), que utiliza al NADPH
como cofactor:
CH3 CH2 OH + NADPH + H+ + O2 CH3 CHO + NADP+ + 2H2O
El acetaldehdo es oxidado hasta CO2 y H2O por accin de la enzima aldehdo

deshidrogenasa.
Con excepcin de concentraciones muy bajas, la biotransformacin del etanol en

el hombre es en esencia constante (alrededor de 10 mL/h en promedio), sin
importar la concentracin y variando considerablemente de persona a persona
(Crdoba, 2001).
Para la determinacin del alcohol etlico en sangre existen mtodos fsicos,

qumicos, fisicoqumicos y enzimticos, difiriendo cada uno de ellos en su
sensibilidad.
Entre los mtodos qumicos se encuentran el de Conway y el de Widmark (este

ltimo es recomendado para micromuestras). Se basan inicialmente en la
oxidacin del alcohol con dicromato de potasio en medio cido, dando lugar a la
reaccin siguiente:
2K2Cr2O7 + 3CH3 CH2 OH + 8H2SO4

2K2SO4 + 2Cr2(SO4)3 + 3C2H4O2 + 11H2O
En el mtodo de Widmark, el exceso de dicromato reacciona con yoduro de

potasio:
K2Cr2O7 + 6KI + 7H2SO4 Cr2(SO4)3 + 4K2SO4 + 3I2 + 7H2O

El yodo liberado reacciona con tiosulfato de sodio dando lugar a tetrationato de
sodio (incoloro en presencia de solucin indicadora de almidn):
2Na2S2O3 + I2 2NaI + Na2S4O6
En el mtodo de Conway se determina la absorbancia a la que da lugar el

remanente de dicromato.
OBJETIVO GENERAL
Determinar el grado de alcoholemia de una rata intoxicada con etanol.
Reactivos
Solucin de heparina 1:10 cido sulfrico
ter etlico Agua destilada
Mtodo de Conway
Solucin de dicromato de potasio (4.615 mg/mL en cido sulfrico al 25%)
Solucin saturada de carbonato de potasio
Material diverso
6 Cmaras de Conway 2 Celdas de vidrio para
1 Cnula para administracin oral en espectrofotmetro
rata
1 Pipeta pasteur
1 Bulbo para pipeta
1 Vaso de precipitados d 50 mL
EQUIPO
Balanza analtica
Espectrofotmetro
Estufa
MATERIAL BIOLGICO
2 ratas hembra de 200 g aproximadamente
Administrar por va oral a los animales de experimentacin, una dosis de 0.5 mL

de alcohol etlico por cada 250 g de rata, la cual equivale a 150 mL de etanol en
un humano de 70 kg. Transcurridos 10 minutos, obtener una muestra de sangre y
depositarla en un tubo de ensayo heparinizado.
Mtodo de microdifusin de Conway
1. En el compartimento interno de la cmara, agregar 2 mL de la mezcla oxidante;

en el externo, 1 mL de la solucin saturada de carbonato de potasio (agente
liberante) y 1 mL de la sangre por analizar, cuidando de que sta ltima no se
adhiera a la pared. Hacer simultneamente un blanco de reactivos con el
mismo tratamiento que el problema.
1. Cerrar la cmara con su tapa de vidrio, empleando silicn o vaselina para
sellarla.
2. Con un movimiento rotatorio, mezclar las soluciones que se encuentran en el
compartimento externo.
3. Dejar en reposo a la temperatura del laboratorio durante tres horas, o una hora
en estufa a 50C.
4. Transferir la mezcla oxidante de la cmara (compartimento interno) a un
matraz volumtrico de 10 mL, lavando varias veces con agua destilada; aforar
y agitar.
5. Colocar 2 mL de la solucin de dicromato de potasio en un matraz volumtrico
de 10 mL y aforar con agua destilada, para hacer el blanco de reactivos
(estndar de dicromato de potasio).
6. Leer las soluciones en un espectrofotmetro, a una longitud de onda de 430
nm, empleando como referencia agua destilada.
1. Anotar los datos obtenidos para la determinacin de alcohol en sangre por los
dos mtodos, en la tabla correspondiente.
78
2. Calcular la concentracin de alcohol en sangre tomando como base la
absorbancia obtenida del blanco para el mtodo de Conway, la cual evala el
reactivo oxidante sin reaccionar. Hacer el clculo estequiomtrico, de acuerdo
a la reaccin correspondiente.
Tabla 1. Determinacin de alcohol en sangre por el mtodo de Conway.
Muestra Absorbancia Alcohol/sangre

(g/100 mL)
Blanco
Problema
CUESTIONARIO
1. Describa el procedimiento de otros mtodos alternativos para la
determinacin de etanol en fluidos biolgicos
2. Explique el fundamento qumico de los alcoholmetros porttiles.
3. Indique cual es el proceso toxocintico que cursa el alcohol en un
organismo.
BIBLIOGRAFA
1. Crdoba, D., Gmez, U.E. Alcoholes. En: Toxicologa. Crdoba, D. (Ed.). 4a
ed., El Manual Moderno, Bogot, 2001.
2. Parkinson, A., Biotransformation of xenobiotics. In: Casarett & Doulls
Toxicology. The basic science of poisons. Klaassen, C.D. (Ed.). 5th ed.,
3. Repetto, M. Toxicologa del alcohol etlico. En: Toxicologa Avanzada. Repetto,
M. (Ed.). Daz de Santos, Madrid, 2004.
79
PRCTICA N 7
EVALUACIN DE LA TOXICIDAD AGUDA (DL50) DEL METIL PARATIN, EN

RATN.
INTRODUCCIN
En los estudios toxicolgicos de rutina se somete a los animales de

laboratorio a dosis y tiempos de tratamiento variables, que ponen de manifiesto los
efectos producidos por el agente de prueba. Esto constituye la base fundamental
de la evaluacin toxicolgica e indica el rgano o sistema sensible, as como la
naturaleza de la toxicidad, evidenciando los cambios a seguir para profundizar en
estudios posteriores (Lu, 1992).
Los efectos de los txicos son dependientes del tiempo y frecuencia de la

exposicin, el tipo de toxn y la concentracin del mismo. Sin embargo, existen
diversos factores que pueden modificar la respuesta txica producida por un
xenobitico, entre los que podemos mencionar: especie, sexo, edad y estado
patolgico del individuo, entre otros.
Los ensayos de toxicidad aguda son aquellos en los que se administra una
sola dosis del toxn, o bien varias administraciones distribuidas en un perodo de
24 horas. La mayor parte de estos ensayos son diseados para determinar la
dosis letal media (DL50) del xenobitico, la cual se define como la estimacin
estadstica de una dosis nica de un agente qumico que produce la muerte al
50% de los animales de experimentacin. Este estudio permite adems determinar
el efecto txico de una sustancia, los rganos o sistemas diana y proporciona las
bases para establecer las dosis de los estudios a largo plazo (Eaton y Klaassen,
1996).
Los mtodos generalmente usados para la realizacin de estudios de

toxicidad aguda estn basados en la relacin dosis-respuesta para un grupo de
animales de experimentacin, en la cual est involucrada la relacin entre la dosis
y el nmero de individuos que mueren como resultado de la exposicin a un
txico.
Dentro de los factores que modifican la respuesta txica se encuentra el

sexo. Est demostrado que las hormonas sexuales desempean un papel
80
importante en la biotransformacin de los txicos, dado que los estrgenos
inducen la sntesis de diferentes enzimas. Cuando stas son detoxificantes, el
fenmeno es favorecedor porque disminuye el riesgo; sin embargo, cuando las
enzimas estimuladas son las que producen metabolitos ms txicos, se
incrementa la toxicidad. Por lo anterior, es necesario realizar las pruebas de
toxicidad aguda con individuos de ambos sexo (Repetto, 1995).
Por otra parte, debido al incremento poblacional se requiere aumentar

constantemente la capacidad de produccin, almacenamiento y proteccin de los
alimentos, y en consecuencia la utilizacin de plaguicidas.
El metil paratin pertenece a los insecticidas organofosforados; es un

lquido liposoluble y altamente txico. Su actividad insecticida depende de una
bioactivacin por el sistema citocromo P 450, que lo transforma en metil paraoxn.
ste es un inhibidor de las colinesterasas, lo que genera una acumulacin de
acetilcolina, la que inicialmente estimula y luego paraliza la transmisin colinrgica
de la sinapsis.
Clsicamente se han dividido los signos y sntomas producidos por la

exposicin a este compuesto en tres grandes sndromes: muscarnico, neurolgico
y nicotnico (Crdoba y cols., 2001; Klaassen y Watkins, 2001).
OBJETIVO GENERAL
Determinar el poder txico del metil paratin en ratn y el efecto antidotal de un

antagonista
REACTIVOS
Soluciones de metil paratin en un intervalo de concentracin de 1 a 10 mg/mL
Aceite de maz
Solucin de sulfato de atropina 10 mg/10mL
Solucin de Carbn activado 1g/10mL
MATERIAL DIVERSO
6 Cnulas para administracin oral en 1 Matraz volumtrico de 100 mL
ratn 7 Matraces volumtricos de 10 mL
12 Jeringas hipodrmicas de 1 mL, 7 Frascos mbar de 10 mL
con aguja removible 14 Jaulas para ratn
1 Propipeta 14 Bebederos
1 Pipeta graduada de 10 mL Aserrn
2 Vasos de precipitados de 50 mL Alimento para roedores
81
Desecador
Algodn
82
EQUIPO
Balanza para ratones
ANIMALES DE EXPERIMENTACIN
24 ratones macho de aproximadamente 30 g (en ayunas)
1. Etapa
1. Marcar, pesar y distribuir aleatoriamente el material biolgico en cuatro lotes
homogneos.
2. Administrar por va intragstrica la dosis de metomilo asignada a cada lote.
3. Observar a los animales durante las primeras 2 horas posteriores a la
administracin y registrar la sintomatologa presentada.
4. Transcurridas 24 horas, contar el nmero de animales muertos.
2. Etapa: Terapia antidotal

1. Transcurridos 10 minutos, administrar:
Lote 2: Atropina 1 mg/kg va intraperitoneal cada 10 minutos
Lote 3: Carbn activado 1 g/kg por va oral cada 10 minutos
NOTA: Antes de administrar el carbn activado debe agitarse fuertemente
la suspensin para homogeneizar y ser administrada lo ms rpidamente
posible evitando tapar la cnula.
2. Anotar los signos de neurotoxicidad observados.
3. Continuar la observacin hasta 2 horas despus de la administracin de
metomilo.
1. Etapa
1. Llenar las tablas 1 y 2 con los datos obtenidos.
2. Trazar la curva con los resultados, tanto para hembras como para machos,
relacionando el % de muerte con el logaritmo de la dosis. Obtener la DL50
directamente de la grfica.
3. Calcular la DL50 para cada sexo, mediante el mtodo de Probits.
4. Comparar las DL50 obtenidas para cada sexo, as como la sintomatologa
presentada.
5. Clasificar al metil paratin, de acuerdo a su poder txico.
Tabla 1. Toxicidad aguda del metomilo por administracin i.g en ratn.
83
MACHOS HEMBRAS
Dosis Log de No. de No. de % de Unidades No. de No. de % de Unidades
(mg/kg) dosis muertos vivos muertos probits muertos vivos muertos Probits
Tabla 2. Sintomatologa.
SNTOMAS MACHOS HEMBRAS

Irritabilidad
Pasividad
Anestesia
Salivacin
Sangrado
Diarrea
Piloereccin
Convulsiones
2. Etapa
1. Informar de acuerdo a cada tratamiento los signos presentados y el % de
incidencia.
2. Construir un grfico en el que se comparen los tratamientos y signos
observados vs. % de frecuencia sintomtica
3. Discutir de acuerdo a los resultados y literatura cual fue el mejor
tratamiento, ventajas y desventajas del uso de las terapia antagonista
empleadas en la prctica.
4. Investigue los diferentes antdotos empleados en la actualidad para
intoxicaciones con plaguicidas organofosforados y carbamatos.
BIBLIOGRAFA
1. Crdoba, D., Cadavid, S., Ramos, J.I. Inhibidores de colinesterasas. En:

Toxicologa. Crdoba, D. (Ed.). 4a ed., El Manual Moderno, Bogot, 2001.
84
Mxico, D.F., 1992.
5. Repetto, M. Toxicologa Fundamental. 4 ed., Daz de Santos, Madrid, 2009
PRCTICA N9
INTERACCIN ENTRE FENOBARBITAL Y EL INSECTICIDA

METIL PARATIN
INTRODUCCIN
Se define a la interaccin como la modificacin de la actividad biolgica de una

sustancia qumica por la presencia simultnea de otra, o bien por la intervencin
de agentes fsicos como temperatura, ruido y radiaciones entre otros.
Si el efecto combinado es igual a la suma de las acciones de cada agente

administrado solo, se denomina aditivo; si es mucho mayor, se conoce como
sinergismo. Cuando un xenobitico no tiene actividad sobre un cierto rgano o
sistema, pero su presencia hace que otra sustancia qumica sea mucho ms
txica, se lleva al cabo una potenciacin.
El antagonismo resulta cuando dos sustancias qumicas interfieren mutuamente

con sus efectos, disminuyendo la toxicidad (Eaton y Klaassen, 1996).
85
La interaccin tiene lugar en los diferentes procesos orgnicos a diferentes
niveles:
a) Toxocintico. Una sustancia qumica determina cambios en la absorcin,

distribucin, biotransformacin o excrecin de otra.
b) Toxodinmico. La accin de una sustancia qumica sobre los tejidos diana, se
modifica por la actividad de otra.
c) Mixto. A pesar de que en la mayora de las interacciones es posible reconocer
un mecanismo toxocintico o toxodinmico preponderante, en un buen nmero
de ellas es mixto.
La exposicin a una gran variedad de compuestos qumicos modifica la actividad

enzimtica, ya sea por induccin de su produccin o por estimulacin del sitio
activo o del alostrico, lo cual da como resultado que dichas sustancias sean
biotransformadas ms rpidamente. Cuando los metabolitos producidos son
inactivos o menos activos, la toxicidad disminuye en presencia de una sustancia
inductora del sistema de enzimas hepticas. Tal es el caso de los barbitricos,
algunos anticoagulantes, fenitona, antipirina, anfetamina, corticosteroides y
estrgenos. Otros xenobiticos son biotransformados a compuestos ms activos y
en consecuencia, su toxicidad aumenta (Repetto, 2009).
Entre los xenobiticos que producen aumento en la actividad de las enzimas, uno
de los ms estudiados en animales de experimentacin es el fenobarbital. ste
estimula, entre otros, al sistema microsomal de oxidacin, formado por la NADPH-
citocromo reductasa y el citocromo P450. Este compuesto estimula no solo su
propia biotransformacin, sino la de numerosos agentes qumicos tales como el
metil paratin (Parkinson, 1996).
OBJETIVO GENERAL
Determinar el efecto del fenobarbital sobre la toxicidad aguda del metil paratin.
REACTIVOS
Solucin de metil paratin en aceite de maz (DL50 de la prctica)
Fenobarbital sdico (3.5 mg/mL) en solucin salina isotnica
Solucin salina al 0.9%
Aceite de maz
ter etlico
MATERIAL DIVERSO
86
6 Cnulas para administracin oral de
ratn
12 Jeringas hipodrmicas de 1 mL,
con aguja removible
4 Jaulas para ratn
4 Bebederos
Aserrn estril
Alimento para roedores
1 Propipeta
1 Pipeta graduada de 10 mL
1 Bureta de 10 mL
1 Soporte
1 Pinzas para bureta
2 Vasos de precipitados de 50 mL
1 Frasco mbar de 10 mL
2 Frascos de 100 mL
1 Desecador
Algodn
40 Cubrebocas
Marcadores indelebles
87
EQUIPO
Balanza para ratn
Balanza analtica
ANIMALES DE EXPERIMENTACIN
60 ratones macho de aproximadamente 30 g (en ayunas)
1. Marcar, pesar y distribuir aleatoriamente a los animales en 4 lotes de 15

ratones cada uno; asignarlos a los siguientes tratamientos:
A. Lote testigo sin estimular
B. Lote de metil paratin sin estimular
C. Lote testigo estimulado con fenobarbital
D. Lote de metil paratin estimulado con fenobarbital
2. Administrar a los lotes A y B durante 5 das, por va intraperitoneal, solucin
salina al 0.9%, en volumen constante por kilogramo de peso. A los lotes C y
D, administrar fenobarbital a una dosis de 35 mg/kg.
3. Transcurrido este tratamiento, administrar a los lotes A y C por va oral,
aceite de maz y a los lotes B y D, metil paratin (DL50 determinada en la
prctica anterior).
4. Registrar el nmero de animales muertos en cada lote a las 24 horas.
1. Llenar la tabla 1 con los datos obtenidos.

2. Determinar si existe diferencia significativa entre la respuesta de los
siguientes pares de lotes; A vs B., A vs C, A vs D, B vs C y C vs D,
aplicando la prueba de ji2 modificada por Yates, con una p< 0.05.
Tabla 1. Interaccin entre el fenobarbital y el metil paratin.
Lote No. de muertos No. de vivos
88
BIBLIOGRAFA
2. Parkinson, A. Biotransformation of xenobiotics. In: Casarett & Doulls
3. Repetto, M. Toxicologa Fundamental. 4 ed., Daz de Santos, Madrid,
2009.
89
V. NORMATIVIDAD APLICABLE AL MANEJO DE ANIMALES DE
LABORATORIO PARA EL DESARROLLO DE ESTUDIOS TOXICOLGICOS
EN NUESTRO PAS SE CUENTA CON LA
NORMA Oficial Mexicana NOM-062-ZOO-1999, Especificaciones tcnicas

para la produccin, cuidado
y uso de los animales de laboratorio.
Esta norma seala en su presentacin algunas de las razones por las que se
requiere hacer un manejo adecuado de los animales de laboratorio por
ejemplo:
Que en la actualidad, la falta de planeacin en la produccin de animales de

laboratorio, la carencia de
criterios uniformes relacionados con las actividades encaminadas al cuidado,
manejo y utilizacin de
animales con fines de investigacin cientfica, desarrollo tecnolgico e
innovacin, pruebas de laboratorio y
enseanza, han provocado que el cuidado, el trato y la aplicacin de tcnicas
experimentales practicadas en
estos animales, sea ejercida en forma inadecuada, representando graves
daos en el bienestar de los
mismos.
Que para lograr resultados confiables en la investigacin cientfica, la docencia
biomdica y el control de
calidad, as como utilizar el menor nmero de animales posible, es necesario
contar con animales de
laboratorio en condiciones ptimas.
Que cuando se utilizan para fines experimentales procedimientos
cuestionables, inaceptables o
contrarios a los principios de tica, stos pueden causar graves daos en el
bienestar de los animales.
Que el trato y la atencin inadecuada relacionada con las maniobras para la
movilizacin de los
animales de laboratorio, contribuye a elevar los factores de estrs que los
hacen susceptibles a contraer
enfermedades.
Que en virtud de lo anterior y como consecuencia del proceso de globalizacin
en el que Mxico se
encuentra inmerso, es necesario establecer criterios uniformes que permitan
regular eficientemente la
operacin de las actividades relacionadas con la produccin, cuidado, manejo y
uso de los animales de
laboratorio, a fin de favorecer el bienestar de stos, protegiendo al mismo
tiempo su salud.
90
En esta norma se encuentran contenidos los lineamientos generales y
condiciones para el cuidado y alojamiento de diferentes especies de animales
que son empleados en los estudios de laboratorio para diferentes fines de
experimentacin, Tambin indica las vas de administracin de sustancias
recomendadas, los mtodos de anestesia, y eutanasia, las medidas de
seguridad por lo que
Es recomendable que todos los estudiantes conozcan el contenido de la

misma, adicionalmente, existe la tendencia a nivel internacional de aplicar el
criterio de las tres R en el diseo de estudios que requieran el manejo de
animales de experimentacin, esto se refiere a
Reducir. Emplear el menor nmero de animales que sea posible,

Remplazar. Sustituir hasta donde sea posible el uso de organismos vivos
(perros, gatos, conejos, ratas, ratones) por mtodos alternativos como cultivos
de tejidos y organismos ms simples (Daphnias, lombrices, etc)
Refinar. Emplear los mtodos y diseos experimentales mas apropiados para
obtener la mayor cantidad de informacin durante un estudio, reduciendo hasta
donde sea posible el dolor al organismo de prueba.
vi. Vas de administracin y obtencin de muestras biolgicas
Mximo volumen permitido de soluciones de sustancias que pueden ser

administrados a travs de diferentes vas
ANIMAL I.V. I.M. I.P. ORAL

RATON (20-30
0.5 0.05 1.0 1.0
g.)
91
RATA (100 g.) 1.0 0.1 2.0 - 5.0 5.0
COBAYO (250
1.0 0.25 2.0 - 5.0 10.0
g.)
CONEJO (2.5
5.0 - 10.0 0.5 10.0 - 20.0 20.0
Kg.)
PERRO (50
10.0 - 20.0 5.0 20.0 - 50.0 100.0
Kg.)
No se puede mostrar la imagen. Puede que su equipo no tenga suficiente memoria para abrir la imagen o que sta est daada. Reinicie el equipo y, a continuacin, abra el archivo de nuevo. Si sigue apareciendo la x roja, puede que tenga que borrar la imagen e insertarla de nuevo.
vii. Mtodos de eutanasia
92
Mtodos de identificacin:
93
viii. Manejo de residuos peligrosos y biolgico-infecciosos
Durante las diferentes prcticas de este curso se emplearn sustancias o

soluciones que pueden representar cierto nivel de riesgo por lo cual queda
estrictamente prohibido desechar alguna sustancia o solucin al drenaje. Con
el fin de dar cumplimiento a la normatividad existente para el manejo adecuado
de residuos peligrosos o biolgico infecciosos se debern seguir los
lineamientos establecidos por la Facultad
94

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1.- Ariens. Lehman. Introduccin a la Toxicologa General. 2 Edicin. Ed. Diana

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