La produccin comercial de ( beta - caroteno Dunaliella salina en estanques abiertos

El halfilas verde alga unicelular Dunaliella salina es una importante fuente comercial de caroteno . El proceso de cultivo de
algas utilizado en Australia Occidental se describe y se compara con el proceso utilizado en otros sitios , y se revisan las
ventajas y desventajas de estos procesos . Tambin se discuten " cosecha " de extraccin y formulacin
Caroteno es un carotenoide C40 que se encuentra en todas las plantas verdes en el que se localizan en el cloroplasto. Su
principal uso comercial es en la industria alimentaria , donde se utiliza como colorante en la margarina , productos de
panadera y otros productos alimenticios ( KHiui , 1982 ) . Caroteno tambin se ha demostrado ser un buen eliminador de
radicales libres y otras especies reactivas ( Krinsky , 1979 ) y parece tener un papel como agente protector contra el cncer.
En los ltimos aos , mucha evidencia clnica ha acumulado en esta actividad potencial de cncer de proteccin de
caroteno ( Ibrahim et a1, 1977 ; . Mathews -Roth , 1982 ; . Schwartz et a1, 1986 ) y , como una prueba ms acumula , esto
debe convertirse en una aplicacin importante adicional de caroteno. En la actualidad , la mayor parte de la JJ- caroteno
disponible en el mercado ( trans- JJ- caroteno ) es producido por medios sintticos ( Isler , 1979) y se vende por alrededor
de $ 600 AUS kg - 1 ( = $ U.S . 500 ) . En los ltimos aos , sin embargo , se ha desarrollado una creciente demanda de
mercado para JJ -caroteno natural
El volvocalean alga verde Dunaliella salina Teodoresco tiene el contenido ms alto de clulas JJ- caroteno de cualquier
organismo , con concentraciones de hasta el 14 % del peso seco de haber sido reportados ( Mil'ko , 1963; Aasen et al.,
1969 ) . Massyuk (1966 ) propuso por primera vez que esta alga podra ser una fuente natural adecuada de JJ- caroteno y
durante varios aos llevado a cabo ensayos sobre la cultura Dunaliella en Ucrania ( Massyuk y Abdulla , 1969) . En la obra
de la dcada de 1970 sobre la produccin de JJ- caroteno usando D. salina comenzado en varias otras partes del mundo , y
en 1986 la produccin comercial comenz en Australia , los EE.UU. y en Israel ( Borowitzka y witzka borohidruro , 1988a ) .
En este trabajo se describen varios aspectos del proceso de produccin JJ- caroteno comercial utilizando D. salina y
sealamos algunos de los pasos crticos en este proceso .
Dunaliella salina es el alga eucariota ms tolerante a la sal conocida y puede crecer en medios saturados ( > 30 % w / v)
con NaCl ( Borowitzka y Brown, 1979 ) . D. salina tambin es muy tolerante a las altas temperaturas y densidades de flujo
de fotones de alta ( Borowitzka y Borowitzka , 1988a) .
Desarrollo de condiciones de cultivo en masa ha requerido la optimizacin de las condiciones de crecimiento a fin de
producir la mxima cantidad de jj- caroteno por unidad de tiempo y volumen de cultivo . Esto se ha complicado por el hecho
de que las condiciones que conducen a un crecimiento celular mximo son diferentes de las que conducen a la acumulacin
mxima de , a- caroteno en la clula. Por ejemplo, D. salina tiene una salinidad ptima para el crecimiento de alrededor de
18 a 21 % de NaCl , mientras que el contenido mximo de jj- caroteno se alcanza a una salinidad de > 27 % de NaCl
( Borowitzka et al., 1984
Del mismo modo , la acumulacin de carotenos es ms alto en condiciones limitantes de nitrgeno donde se reduce el
crecimiento.
Con base en estas y otras observaciones, los primeros trabajadores propusieron un proceso de dos etapas para el
crecimiento (Chen y Chi, 1981), que consiste en una etapa de crecimiento en alrededor de 18% de NaCl y con suficiente
nitrgeno para alcanzar el mximo de biomasa, seguido de un carotenoide acumulacin etapa a una salinidad de
aproximadamente 27% condiciones de NaCl y N limitantes (Borowitzka et al., 1986). Sin embargo, los estudios de campo
temprana y anlisis econmicos mostraron pronto que tal proceso no era viable por varias razones: (1) En las bajas
salinidades, la depredacin por protozoos, especialmente por Cladotricha sigmoidea y Heteroamoeba sp. a menudo condujo
a una rpida destruccin de la biomasa de algas en los estanques (Post et al, 1983;. Borowitzka et al., 1986); (2) En las
bajas salinidades la especie Dunaliella no carotenognicos, D. viridis Teodoresco, que siempre se produce colaboracin con
D. salina en estanques al aire libre, podran superar D. salina (Borowitzka et al, 1986;. Moulton et al ., 1987b); y (3) El
proceso de dos pasos es una labor intensiva y requiere un mayor rea de estanque y es por lo tanto demasiado caro
Como resultado de estas consideraciones , un proceso semi- continuo , operando a una salinidad intermedia fue finalmente
elegido ( Borowitzka et al, 1986 ; . . Moulton et al, 1987a) . La salinidad se ha optimizado para una mxima produccin de l1
-caroteno por unidad
tiempo en el estanque. Las concentraciones de nutrientes tambin se han optimizado .
Los principales nutrientes aadidos a los estanques son nitrgeno , fosfato y una forma de quelatos de hierro. Dependiendo
de la salmuera utilizada , oligoelementos tambin puede tener que ser aadido (Ben Amotz et al, 1982 ; . Ben Amotz y Avron
, 1983 ; Borowitzka y
Borowitzka , 1988a , 1988b ) . El Ca : Mg y Cl : S04 - relacin de las salmueras utilizadas en la cultura tambin pueden
afectar el crecimiento y la carotenognesis ( Ben Amotz y Avron , 1983) y deben ser considerados cuando se selecciona la
fuente de las salmueras para el crecimiento
Otra consideracin para la cultura de masas comercial es el diseo del estanque. Por ejemplo, israeles y estadounidenses
operaciones usan variantes de la rueda de paletas "rodadura" estanques del diseo desarrollado originalmente por Oswald
(1988), mientras que las operaciones en Australia utilizan grandes estanques no agitadas (Borowitzka y Borowitzka, 1988a).
Los grandes estanques no agitadas (no agitado que no sea mediante la mezcla del viento) utilizados por Western
Biotechnology Ltd. en su planta de produccin en Hutt laguna, Australia Occidental, tienen una biomasa de algas ms bajo
que el que se lograra si se utilizaron estanques de tipo pista de rodadura; sin embargo, esta biomasa inferior est
compensado por el coste reducido en gran medida de la construccin de estanques y mantenimiento. Los estanques de
"naturales" utilizadas en Australia tambin tienen otra ventaja sobre los estanques alineados utilizados en otros lugares.
Forrados de plstico estanques casi siempre tienen problemas con la acumulacin de burbujas de gas bajo el forro de
plstico y estos deben ser superados de manera efectiva "esterilizar" el suelo bajo el revestimiento.
estanques de tierra sin forro no tienen este problema, aunque la turbidez puede ser mayor. En todos los casos la
profundidad del estanque se mantiene a aproximadamente 20 cm para una mxima penetracin de luz tracin
Una consideracin final para la produccin de aire abierto de D. salina es el emplazamiento de la instalacin de produccin .
Desde estanques al aire libre son sometidos a los caprichos del clima , la ubicacin de la planta debe tener un clima
adecuado . Un sitio ptimo, como Hutt laguna en el oeste de Australia , tiene un verano largo y caluroso , seco y est
situado en o cerca de una fuente adecuada de salmueras . La ubicacin tambin debe estar alejada de lo posible la
contaminacin producida por las actividades industriales o agrcolas (es decir , pesticidas o metales pesados) como el
producto final producido ser utilizado en la alimentacin humana . La tierra tambin debe ser bastante plana para
minimizar los costos de construccin de estanques .
Grandes estanques al aire libre tienen una serie de caractersticas que difieren de las de los cultivos a gran escala mixtos
de pozos en sistemas cerrados a causa de ( a) la importancia del clima ( viento, lluvia, temperatura) , (b) la contaminacin ,
(c) la distribucin heterognea de organismos en el estanque , y ( d) las diferencias en la ampliacin
Hemos encontrado que la ampliacin de los grandes estanques al aire libre debern proceder de una serie de pasos, cada
uno representando un factor de aumento de 10, para poder hacer frente a los cambios en ambos parmetros biolgicos y de
ingeniera.

En Hutt Lagoon se llevaron a cabo los experimentos al aire libre iniciales en los estanques de plstico de varios cientos de
litros de capacidad para probar los efectos de las condiciones climticas locales sobre cultivos. Estos fueron ampliadas al
estanques de tierra de paredes construidas en el lecho del lago Hutt laguna, que tiene una superficie de 100 m2 (aprox.
20.000 litros). estanques ms pequeos fueron abandonados (1) debido a la alta rea de la pared en relacin al volumen
del estanque que dio lugar a altas tasas de fugas; (2) una tendencia a perder la capacidad de retencin del estanque debido
a la erosin de los bancos; (3) la prdida de algas debido a la formacin de camellones de las clulas; y, (3) la reduccin de
la salinidad, la erosin de los bancos y el aumento de la turbidez resultante de la escorrenta del agua de lluvia. Todas estas
desventajas se redujeron en los estanques grandes.
Ampliacin en Hutt laguna progres desde los 100 m2 hasta 250 m2 estanques (50.000 litros) y 600 m2 (120.000 litros).
Estos estanques se utilizaron para explorar los efectos de la adicin de nutrientes, la profundidad del estanque, la salinidad
y el clima sobre el crecimiento y la gnesis caroteno-. Se evaluaron varios regmenes de manejo de estanques diferentes.
Antes de que se dise la planta de produccin final, ms experimentos se llevaron a cabo en estanques de 0,5-ha (es
decir, 1I1Oth el tamao de los estanques de produccin propuestos) para proporcionar datos para el anlisis econmico
preciso del proceso. Ampliacin de stos a los 5-ha-produccin estanques procedi sin problemas.
Es difcil de probar grandes estanques al aire libre en todas las etapas ( experimental , piloto y de produccin
) de manejo de los estanques . En grandes estanques hay algo de agregacin en la distribucin de D. salina
debido a los impuestos naturales de las algas ( Moulton et al, 1987b ; . Wangersky y Maass , 1988 ) .
Tambin, calentamiento diferencial de la superficie capas de la laguna , la estratificacin del agua de baja
salinidad en la superficie del estanque despus de la lluvia , y la mezcla variable debido al viento y la
conveccin como resultado una distribucin heterognea de algas . La figura I muestra un perfil de
profundidad tpica en un estanque despus de la lluvia de 100 m2 . Los primeros 3 cm tienen un menor
nmero de clulas de algas y la reduccin de la salinidad se concentran cerca de la superficie . El viento
tambin da lugar a cierta agregacin horizontal. La Figura 2 ilustra la cambios tanto en la distribucin
horizontal y vertical de las algas en un estanque de ms de 3 das . Durante este tiempo, la direccin
predominante del viento cambi de norte en el da 1 , al norte -oeste en el da 2 , y el este y el sur en el da
3. Estos datos muestran claramente la naturaleza dinmica de la distribucin de las algas en los estanques e
indican que el gran cuidado debe deben tomarse para obtener muestras representativas de los estanques
con el fin de obtener una imagen precisa del nmero de clulas , la salinidad y concentracin de nutrientes
Cosecha. - El siguiente paso crtico en la produccin IJ-caroteno est cosechando. D. salina es una pequea
alga (aproximadamente 25 x 12-16 / tamao OLM) y alcanza una densidad celular en estanques al aire libre
de aproximadamente 5.105 a 5.106 clulas ml-I extraccin de estos delicados algas de grandes
volmenes de salmuera es un importante se requiere problema y un proceso eficiente, de bajo costo. La
gama de opciones disponibles ha sido recientemente revisado por Mohn (1988) y varios mtodos de captura
especfico para Dunaliella han sido patentados. Estos incluyen filtracin usando tierra de diatomeas como un
coadyuvante de filtracin (Ruane, 1974a), el uso de gradientes de sal estacionarios o en movimiento (Bloch
et al., 1982), la explotacin de la conducta fototcticas de las algas junto con balsas flotantes que sostiene
fibras verticales a trampa de las algas (Kessler, 1982), y un mtodo que explota la hidrofobicidad
dependiente de la salinidad de la membrana celular D. salina (Curtain y Snook, 1982;. Curtain et al, 1987).
Uno de los mtodos de cosecha fue examinado estratificacin basada en la observacin de que D. salina
tiende a concentrarse en la superficie de estanques en la luz, y que esta concentracin es mayor si la
salmuera en el estanque est cubierta por una pelcula delgada ofless solucin salina agua. Bloch et al.
(1982) tambin discuten la estratificacin y su aplicacin a la cosecha de Dunaliella.
En nuestros experimentos , la estratificacin se inici por bombeo de una capa de 1 cm de agua de 0 a 3,5 %
de salinidad en la parte superior del estanque y dejndolo durante aproximadamente 6 h en la luz del sol .
Durante este perodo D. salina concentra preferentemente cerca de la salmuera : Interfaz de agua de baja
salinidad , mientras que D. viridis no ( Tabla 1 ) .Es importante evitar cualquier mezcla de las capas, como
por ejemplo por el viento, durante este paso. Al final de 6 h de la capa de superficie que contiene el D. salina
se puede ejecutar fuera o se bombea fuera y se utiliza como material de alimentacin para el siguiente paso
de la cosecha. Hemos logrado una concentracin de las algas 5-6 veces con una recuperacin 66-68 % de la
D. salina en el estanque utilizando este mtodo.
La estrategia ptima para la cosecha que parece ser una combinacin de varios mtodos ; por ejemplo , la
estratificacin de preconcentrado las algas seguido de una etapa de floculacin o sedimentacin. La cosecha
final se puede concentrar adicionalmente y se deshidrata por centrifugacin, si es necesario.
Tratamiento. -una Vez cosechada , la biomasa puede o bien ser secado (por lo general mediante secado por
pulverizacin ) para producir un polvo de algas , o puede ser extrado y se procesa adicionalmente para
producir puro IJ- caroteno. Se han patentado varios mtodos para la extraccin de la IJ- caroteno de D. salina .
Estos incluyen extraccin con disolvente de la biomasa con un hidrocarburo disolvente tal como tolueno o
hexano ( Ruane , 1974b ) o super- COl crtico > saponificacin de la biomasa seguido por extraccin con
disolvente ( Ruegg ,
1984 ) , o la extraccin en aceite caliente ( Nonomura , 1987 ) .
Despus de la extraccin o el secado , el producto debe ser procesado y estabilizado para producir un
producto comercializable. Los principales productos producidos y comercializados por las diferentes
empresas son: ( 1 ) se sec por pulverizacin Dunaliella salina conteniendo alrededor del 2-3% J3 -caroteno
para su uso en la alimentacin animal , especialmente en la acuicultura . ( 2 ) Una solucin 1,6-4 % de J3-
caroteno en aceite vegetal ( soja , cacahuete, etc.) para su uso como un suplemento diettico. Esto se puede
encapsular directamente para el consumo humano . ( 3 ) Una suspensin del 30% de cristalino J3- caroteno
en aceite vegetal para uso en la industria alimentaria para la coloracin de alimentos, etc. El producto debe
contener residuos de disolventes , por lo que un mtodo libre de disolvente de la fabricacin es deseable. La
Figura 3 muestra un anlisis de HPLC tpico de una suspensin de 30 % de Dunaliella J3- caroteno en aceite
COMPARACIN DE PROCESOS Dunaliella comerciales existentes
El proceso para la produccin de J3 - caroteno de Dunaliella salina utilizada por Western Biotechnology Ltd. se
muestra en la Figura 4. La planta de produccin se compone de diez 5 -ha de cultivo - estanques construidos
directamente sobre el lecho de la laguna Hutt , un lago de sal natural del lago en la costa de Australia
occidental , al norte de Geraldton . El suelo de los estanques es el lecho del lago existente, y las paredes del
estanque se construye a partir de piedra caliza compacta . Las salmueras de los estanques se toman
directamente de Hutt laguna y la salinidad es controlada por la adicin de agua de mar purificada que se
bombea desde el lado mar de la laguna Hutt . Esta agua de mar se utiliza para compensar las prdidas por
evaporacin . La salmuera se complementa con nutrientes ( NO} - , P04- , Fe , oligoelementos) y los
estanques se cosechan ms o menos continua , y el agua del estanque se recicla
El proceso utilizado por Betatene Ltd. en su planta en Wyalla , Australia del Sur es similar ( Cortina et aI . ,
1987) , salvo que utilizan varios grandes natura 11 copos de aproximadamente 100 ha de rea ( rea total
aprox . 350 ha) de algas crecimiento. La fuente de agua es agua de mar del Golfo de Spencer adyacente y
esta agua se concentra por evaporacin para aumentar la salinidad a alrededor de 3.5 a 5.5 m NaCl !. La
recoleccin es por el proceso patentado por la cortina y la Snook ( 1982) y utiliza nitrgeno disponible de una
acera cercanas para eliminar la necesidad de antioxidantes sintticos en el proceso de recoleccin
Por el contrario , Microbio Resources Inc. en su planta cerca del Mar de Salton en el uso de California ( l
acres ) de hormign ms pequea de paredes forradas y estanques de mezcla rueda de paletas . Sus
salmueras se componen usando artificialmente sal ( Klausner, 1986 )
CONCLUSIONES
La produccin de natural! 3 - caroteno de Dunaliella salina (a veces tambin llamado D. Bardawil ) est ahora
bien establecida y debera seguir aumentando durante algn tiempo . cultura aire libre de este alga se
simplifica enormemente debido a la naturaleza extremadamente halfilas de esta alga , sin embargo, un
proceso de este tipo no ser adecuado para todas las algas o productos de algas y otros mtodos tendr que
ser desarrollado en el futuro.
El proceso de Dunaliella , ilustra un aspecto fundamental de la explotacin comercial de microalgas , en que
todos los pasos del proceso (es decir, el crecimiento de algas , la cosecha , la extraccin y la formulacin del
producto ) debe ser optimizado. En la etapa actual de desarrollo de la biotecnologa de algas todava hay un
margen considerable para la mejora de todos estos pasos , y esas mejoras en la tecnologa permitir la
futura explotacin de otras especies de algas y productos tales como enoids carot- , cidos grasos y
polisacridos .