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Arch. Med. Vet.

XXXV, N 1, 2003

ARTICULOS ORIGINALES

Estudio histopatolgico de hgado y rin de caninos y su relacin con

las concentraciones de urea, creatinina, protenas,

enzimas (ALT y SAP) en sangre premortem y en humor acuoso

a las 0 y 24 horas postmortem

Histopathological study of canine liver and kidney and their relationship with
blood and postmortem aqueous humour samples concentrations of urea,
creatinine, proteins and enzymes activities (ALT and SAP)
C. GALLARDO1, M.V., M. N. Sc.; E. PAREDES2, M.V., Dr. med. vet.; J. PREZ2, M.V.

1
Instituto de Ciencias Clnicas Veterinarias.

2
Instituto de Patologa Animal, Universidad Austral de Chile, Casilla 567, Valdivia, Chile

SUMMARY

The goal of this study was to characterize histopathological lesions of the liver and kidney of canines, and
their relationship with blood and postmortem samples of aqueous humor concentrations of urea, creatinine,
proteins and ALT and SAP plasmatic activity.
Thirty one animals were used in this study. They did not have clinical history of hepatic or renal diseases.
Plasma samples were obtained before euthanasia. A sample of aqueous humor was obtained from the right eye
of each dog just after euthanasia and a similar sample was obtained 24 hours later from the left eye. Urea,
creatinine and protein concentrations and plasmatic activity of ALT and SAP were determined and samples of
liver and kidney were obtained at postmortem and preserved in formaline (10%). Histophatological findings
were characterized according to the following scale: none (0), mild (I), moderate (II), marked (III) and severe
(IV).
The results showed that all dogs have some degree of renal and hepatic damage (R.D.L. and H.D.L.
respectively). Glomerulonephritis and interstitial nephritis were found in 100% and 88% of cases, respectively.
Histophatological findings of circulatory type were the main changes found in the liver (100%), characterized
mainly by diffuse congestion (63.3%).
The values of urea, creatinine and proteins concentration and ALT and SAP activity were higher in plasma
than in aqueous humour, but there was not a correlation between them, with exception of urea (c = 0.99). In
addition, there was not a significant correlation between histophatological findings and plasmatic values studied.

Palabras claves: canino, histopatologa, hgado, rin, humor acuoso.


Key words: canine, histopathology, liver, kdiney, aqueous humour.

INTRODUCCION el examen postmortem el que determina la


enfermedad del animal. La necropsia puede verse
La muerte de un animal representa un desafo limitada en la determinacin de un diagnstico
diagnstico cuando no se cuenta con debido a la ausencia de lesiones evidentes o a la
antecedentes previos ni signos clnicos, siendo avanzada autlisis o putrefaccin de los tejidos,
lo que con frecuencia hace infructuoso el examen
Aceptado: 17.10.2002. histopatolgico (Lane y Lincoln, 1985a).

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C. GALLARDO, E. PAREDES, J. PEREZ

Tanto el hgado como el rin son como una medida de la tasa de filtracin
susceptibles de sufrir injurias. El hgado por su glomerular (Macdougall, 1991). Sin embargo,
participacin en mltiples procesos metablicos algunos factores extrarenales pueden afectar
est expuesto a la accin de diversos agentes transitoriamente el nivel de la creatinina como
infecciosos, metablicos y txicos (Hardy, 1992); la mionecrosis masiva o el ejercicio extenuante
por su parte, los riones reciben un alto prolongado (Chew y Dibartola, 1992).
porcentaje del gasto cardaco, lo que incrementa Debido a que en muchas ocasiones no se
su exposicin a toxinas llevadas por la sangre. dispone de una muestra de sangre premortem
Por otra parte, las clulas tubulares renales son (Appleby y col., 1990) y a que la descomposicin
muy susceptibles a la hipoxia (Forrester y col., y contaminacin de la sangre ocurre rpidamente
1994). despus de la muerte, se han utilizado como
Los rganos poseen una reserva funcional, alternativas fluido cerebroespinal y fluido
razn por la cual, los signos de una enfermedad intraocular para determinar algunos parmetros
heptica pueden no ser aparentes hasta que un (Palmer y col., 1985; Scott y col., 1995); esto se
70 a 80% de la capacidad funcional est perdida debe a que el globo ocular es una estructura
(Dunn, 1992). En el caso de los riones, un aislada y bien protegida anatmicamente (Lane
animal con slo un tercio de su capacidad renal y Lincoln, 1985a), permitiendo que el humor
funcional, no mostrar signos clnicos bajo acuoso y el humor vtreo se mantengan estables
circunstancias normales (Winter y Majid, 1984). en su composicin y bien preservados por
El dao heptico puede ser de origen algunas horas despus de la muerte (Lane y
hepatocelular o biliar, pudiendo valorarse en Lincoln, 1985b, Meyer y Hardvey, 2000).
sangre a travs de la actividad de varias enzimas En el ojo se pueden distinguir tres regiones:
hepticas (Dunn, 1992). Adems, se utiliza la la cmara anterior, situada entre la crnea y el
determinacin de protenas totales, en virtud de iris, la cmara posterior entre el iris y el cristalino
que el hgado es el sitio primario de sntesis de y el espacio vtreo situado detrs del cristalino y
gran parte de las protenas plasmticas (Center, rodeado por la retina (Junqueira y Carneiro,
1992). 1996). Ambas cmaras contienen el humor
La capacidad funcional renal puede verse acuoso, ste es un lquido claro, transparente y
disminuida, conduciendo a una falla en las de consistencia acuosa (Bloog y Coles, 1970),
funciones metablicas y endocrinas del rin, producido en el epitelio ciliar de los procesos
llevando a la acumulacin de sustancias que ubicados en el cuerpo ciliar en la cmara
normalmente son excretadas y a una disminucin posterior, a travs de un proceso que combina
en la habilidad para mantener la homeostasis del difusin pasiva, transporte activo y ultrafiltracin
volumen extracelular de fluidos (Gleadhill, 1994; (Junqueira y Carneiro, 1996). Desde la cmara
Confer y Panceira, 1995). posterior el fluido avanza a travs de la pupila y
La funcionalidad renal en sangre puede ser circula en la cmara anterior (Rathbone, 1995).
valorada a travs de la determinacin de urea, El humor acuoso est compuesto por: agua,
que es el producto terminal del metabolismo aminocidos, enzimas proteolticas, histamina,
proteico, formada en el hgado a partir del cloro, bicarbonato, lactato, ascorbato, fosfato,
amoniaco y posteriormente eliminada por el piruvato, sodio, potasio, magnesio,
rin (Wittwer y Bhmwald, 1986), as como a prealbminas, albminas, globulinas (Bloog y
travs de la determinacin de creatinina, que es Coles, 1970), urea y creatinina (Lane y Lincoln,
un producto del desdoblamiento no enzimtico 1985a), LDH y CK (Stewart y col., 1985). Es
espontneo de la fosfocreatina en el msculo importante mencionar que las protenas presentes
(Chew y Dibartola, 1992), siendo excretada sin en el humor acuoso, estn en mucho menor
cambios a travs del rin; en la mayora de las cantidad que en el plasma, representando
especies esto ocurre slo por filtracin, alrededor del 0.5% (Slatter, 1990). La
tomndose los niveles de creatinina en el plasma composicin del humor acuoso es modulada por

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CANINO, HISTOPATOLOGIA, HIGADO, RION, HUMOR ACUOSO

un mecanismo de permeabilidad selectiva importancia cuando no se dispone de una


denominado barrera hematoacuosa (Isumisawa muestra de sangre premortem y el examen
y Kotani, 1991), la que se ubica entre la sangre histopatolgico es insuficiente para llegar a un
de los capilares del estroma ciliar y el humor diagnstico o simplemente no es posible
acuoso de la cmara posterior (Slatter, 1990; realizarlo debido al avance de los cambios
Rathbone, 1995). postmortem.
Las funciones del humor acuoso son
mantener la forma y funcionalidad del ojo MATERIAL Y METODOS
(Izumisawa y Kotani, 1991), llevando nutrientes
a los tejidos que baa como el iris y la crnea, Se examinaron 31 caninos adultos de
recibiendo los desechos del metabolismo de estos diferentes razas, sexo y edad, recibidos por el
tejidos (Slatter, 1990), adems, preserva la Hospital Veterinario de la Universidad Austral de
transparencia de la crnea (Bloog y Coles, 1970) Chile para ser eutanasiados entre diciembre de
y mantiene la presin intraocular relativamente 1995 y mayo de 1996. Previo a la eutanasia se
constante (Rathbone, 1995). realiz un examen clnico general a cada animal
El anlisis del humor acuoso ha sido utilizado a fin de descartar signos indicativos de patologas
como diagnstico en seres humanos (Stewart y renales o hepticas. Como mtodo de eutanasia
col., 1985), existiendo tambin estudios en se utiliz una solucin sobresaturada de
animales tanto de humor acuoso como de humor Tiopental sdico. Tambin, previo a la eutanasia
vtreo (Lane y Lincoln, 1985a; Urcull, 1991). de cada individuo, se obtuvo una muestra de
Stewart y col. (1985), realizaron una sangre con heparina desde la vena ceflica para
evaluacin de las concentraciones de protenas, la obtencin de plasma.
CK y LDH en humor acuoso de perros, gatos, De cada animal se obtuvieron dos muestras
caballos y vacas sanas. Tambin se han analizado de humor acuoso, la primera del ojo derecho
los niveles de urea postmortem en caninos como inmediatamente despus de efectuada la
un indicador de urea antemortem (Palmer y col., eutanasia y la segunda 24 horas despus, desde
1985), en gatos se han determinado las el ojo izquierdo. La obtencin de la muestra se
correlaciones entre los niveles de urea en humor efectu introduciendo una aguja de 21 Gx11/2
acuoso y el diagnstico postmortem (Appleby y a nivel del lmite crneo-escleral (limbo), hacia
col., 1990). Por su parte, Izumisawa y Kotani la cmara anterior del ojo, obteniendo en cada
(1991), determinaron concentraciones de caso entre 0.5 y 1.5 ml de humor acuoso,
protenas totales e inmunoglobulinas en humor traspasndose a tubos eppendorf, en los que se
acuoso en caninos. mantuvo a 20C hasta ser analizados.
Palmer y col. (1985), establecieron una A cada animal se le efectu una necropsia
relacin en caninos que presentaban elevados (Instituto de Patologa Animal de la Universidad
niveles de urea en suero premortem con varias Austral de Chile), de acuerdo a la pauta descrita
lesiones renales diagnosticadas postmortem, las por Paredes y Cubillos (1995), obteniendo
cuales correspondieron a cambios degenerativos muestras de hgado y de riones en formalina
e inflamatorios en variados estados y de distinta tamponada al 10%.
duracin. Cada una de las muestras de plasma y de
En el presente estudio se analiz la relacin humor acuoso fueron procesadas en el
entre los hallazgos histopatolgicos de hgado y Laboratorio de Patologa Clnica del Instituto de
rin de caninos con las concentraciones de urea, Ciencias Clnicas de la Universidad Austral de
creatinina, protenas y enzimas en sangre Chile, determinndose la concentracin de las
premortem y en humor acuoso a las 0 y 24 horas siguientes variables: urea, por el mtodo de
postmortem, con la finalidad de evaluar si estas ureasa Berthelot modificado a 37C (623 nm);
concentraciones pueden ser utilizadas como creatinina, por el mtodo de Jaffe sin
diagnstico postmortem, adquiriendo especial desproteinizacin a 25C (492 nm); protenas,

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C. GALLARDO, E. PAREDES, J. PEREZ

por el mtodo de Biuret a temperatura ambiente principalmente de grado II y III, adems se


(546 nm); ALT (alanino amino transferasa), por observaron infartos corticales (19.35%). El nico
el mtodo recomendado por la International trastorno pigmentario observado fue la
Federation of Clinical Chemistry (IFCC), a 37C lipofucsinosis tubular (22.58%).
(340 nm); SAP (fosfatasa alcalina), por el mtodo Los trastornos degenerativos corticales se
estndar optimizado, segn la Deutsche presentaron con mayor frecuencia que los
Gesselschaft der Klinischen Chemie (DGKC), a observados a nivel medular; siendo lo ms
37C (405 nm). Se utilizaron kits Boehringer- frecuente la tumefaccin turbia cortical
Mannheim y fotmetro Hitachi 4020. (77.41%), el grado de severidad fue
Las muestras de hgado y riones para principalmente moderado (grado II).
examen histolgico fueron fijadas por 48 horas La totalidad de los riones de los caninos
en formalina tamponada al 10%, posteriormente examinados present alguna alteracin de tipo
fueron laminadas y procesadas en autotcnico a inflamatorio o necrtico, destacndose por su alta
fin de ser deshidratadas e impregnadas en frecuencia la glomerulonefritis (100%), la nefritis
parafina. Una vez incluidas en parafina slida intersticial en corteza (87.09%) y la fibrosis
fueron cortadas con micrtomo a un grosor de 5 crtico-medular (38.7%) y medular (51.61%), el
a 6 para ser teidas con hematoxilina-eosina grado de alteracin de estas lesiones fue
(Luna, 1968), a fin de caracterizar las principalmente intermedio (grado II y III). Las
alteraciones microscpicas. En aquellas muestras restantes alteraciones inflamatorio-necrticas de
en que se observ pigmento intracelular en los rin se manifestaron menos frecuentemente; sin
tbulos renales, se efectu la tincin de Schmorl embargo, a pesar de que la fibrosis renal se
para lipofucsina (Luna, 1968). observ slo con una frecuencia intermedia,
Las alteraciones microscpicas observadas en llama la atencin que la severidad de dicha
las muestras de hgado y riones fueron clasificadas alteracin fue mayormente alta (grados III y IV).
en trastornos: circulatorios, del crecimiento celular, La presencia de protenas y depsitos
del metabolismo celular, del metabolismo minerales en el lumen tubular de corteza y
pigmentario, inflamatorios, necrticos y mdula fueron las alteraciones miscelneas ms
miscelneos. La magnitud de las lesiones fue frecuentes observadas en los riones, con un
semicuantificada utilizando la siguiente escala de grado de severidad principalmente bajo (grado
grados: 0 (ausente); I (leve); II (moderado); III I-II).
(marcado); IV (severo) (Foster, 1997). Dentro de las alteraciones histolgicas
hepticas (cuadro 2), el trastorno del crecimiento
RESULTADOS celular ms frecuentemente observado fue la
atrofia de hepatocitos (43.33%), principalmente
De los 31 caninos examinados, 18 de grado moderado.
correspondieron a machos y 13 a hembras. El Al igual que en rin, el trastorno circulatorio
mayor porcentaje correspondi a mestizos, las que ms se observ en hgado fue la congestin
edades fluctuaron entre 7 meses y 14 aos difusa (63.33%), seguida de la congestin periportal
(promedio 5.3 aos). El peso fluctu entre 6.5 y (36.66%), ambas alteraciones se manifestaron con
30 kilos (promedio 16.3 kilos). una intensidad marcada (grado III).
Dentro de las alteraciones histolgicas La mayora de los trastornos degenerativos
renales (cuadro 1), los trastornos del crecimiento se presentaron en grados intermedios (II y III),
celular ms frecuentes en riones fueron siendo la alteracin ms comn la degeneracin
dilatacin e hiperplasia tubular a nivel crtico vacuolar centrolobulillar de los hepatocitos
medular y medular (9.67%), siendo ms severa (40%). Al igual que en riones, slo se manifest
la lesin a nivel medular. una nica alteracin en el metabolismo de los
El trastorno circulatorio ms comn en pigmentos, que correspondi a hemosiderosis
riones fue la congestin difusa (35.58%), (23.33%).

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CANINO, HISTOPATOLOGIA, HIGADO, RION, HUMOR ACUOSO

CUADRO 1: Frecuencia de alteraciones renales histolgicas por grado lesional y segn tipo de trastorno

en 31 caninos.

Frecuency of histological renal alterations for injury degree and according to type of disorder in 31 canines.

Casos con
Grado Lesional Alteracin

TIPO DE TRASTORNO Grado Grado Grado Grado Grado Total %


0 I II III IV

DEL CRECIMIENTO:
Dilatacin e hiperplasia tbulos
Corticales 30 0 1 0 0 1 3.22
Crtico-medulares 28 0 3 0 0 3 9.67
Medulares 28 0 0 0 3 3 9.67

CIRCULATORIOS:
Congestin difusa 20 2 5 4 0 11 35.58
Infartos corteza 25 3 0 3 0 6 19.35

METABOLISMO PIGMENTARIO:
Lipofucsinosis tubular 24 2 3 2 0 7 22.58

DEGENERATIVOS:
Tumefaccin turbia corteza 7 2 15 6 1 24 77.41
Tumefaccin turbia mdula 23 2 4 1 1 8 25.8
Degeneracin vacuolar corteza 16 1 6 6 2 15 48.38
Degeneracin vacuolar mdula 28 0 1 1 1 3 9.67

INFLAMATORIOS Y NECROTICOS:
Glomerulonefritis 0 3 13 12 3 31 100
Nefritis Intersticial corteza 4 6 7 13 1 27 87.09
Nefritis Intersticial mdula 21 2 2 5 1 10 32.25
Nefritis Intersticial crtico-medular 30 0 1 0 0 1 3.22
Fibrosis corteza 24 0 0 3 4 7 22.58
Fibrosis mdula 15 2 3 8 3 16 51.61
Fibrosis crtico-medular 19 3 3 5 1 12 38.7
Fibrosis subcapsular 30 0 0 0 1 1 3.22
Granulomas 27 0 0 4 0 4 12.9
Necrosis medular 29 2 0 0 0 2 6.45

MISCELNEOS:
Protenas lumen tubular corteza 6 16 6 3 0 25 80.64
Cilindros proteicos en mdula 6 13 3 6 3 25 80.64
Depsitos minerales en corteza 29 0 0 0 2 2 6.45
Depsitos minerales en espacio de Bowman 26 4 0 0 1 5 16.12
Depsitos minerales en tbulos medulares 11 7 8 3 2 20 64.51
CIIN eosinoflicos cristaliformes 27 4 0 0 0 4 12.9
Quiste congnito crtico medular 30 0 1 0 0 1 3.22
0: Ausente; I: Leve; II: Moderado; III: Marcado; IV: Severo; I.If.: Infiltrado inflamatorio; CIIN: Cuerpos de inclusin
intranucleares.

Dentro de la amplia variedad de alteraciones infiltrados inflamatorios, de ellos, el ms frecuente


inflamatorio-necrticas que se presentaron en hgado, fue el de tipo multifocal linfocitario (26.66%). La
la fibrosis periportal fue la que ms se present presencia de cuerpos de inclusin intranucleares en
(63.33%), principalmente en grados intermedios (II el interior de los hepatocitos constituy el trastorno
y II); adems, se observaron distintos tipos de miscelneo de mayor presentacin (53.33%).

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C. GALLARDO, E. PAREDES, J. PEREZ

CUADRO 2: Frecuencia de alteraciones histolgicas hepticas por grado lesional y segn tipo de trastorno

en 30 caninos.

Frecuency of histological hepatic alterations for injury degree and according to type of disorder in 30 canines.

Casos con
Grado Lesional Alteracin
TIPO DE TRASTORNO Grado Grado Grado Grado Grado Total %
0 I II III IV
DEL CRECIMIENTO:
Atrofia 17 3 7 3 0 13 43.33
Hiperplasia y proliferacin de conductos biliares 27 2 0 1 0 3 10
Megalocitosis 0 0 0 1 0 1 3.33
CIRCULATORIOS:
Congestin periportal 19 0 1 10 0 11 36.66
Congestin difusa 11 2 3 10 4 19 63.33
Edema periportal 26 1 1 2 0 4 13.33
Focos de hemorragia 28 2 0 0 0 2 6.66
DEGENERATIVOS:
Tumefaccin turbia difusa 24 0 4 2 0 6 20
Tumefaccin turbia periportal 21 0 4 5 0 9 30
Degeneracin vacuolar difusa 23 0 2 5 0 7 23.33
Degeneracin vacuolar centrolobulillar 18 1 6 4 1 12 40
Degeneracin grasa 25 1 1 2 1 5 16.66
DEL METABOLISMO PIGMENTARIO:
Hemosiderosis 23 4 2 1 0 7 23.33
INFLAMATORIOS Y NECROTICOS:
Infiltrado Inflamatorio Periportal
Histioneutroflico 25 0 1 4 0 5 16.66
Histiocitario 25 4 1 0 0 5 16.66
Mixto 24 0 4 2 0 6 20
Infiltrado Inflamatorio Centrolobulillar
Plasmohistiocitario 26 3 1 0 0 4 13.33
Histiocitario 29 0 1 0 0 1 3.33
Infiltrado Inflamatorio Multifocal
Linfocitario 22 4 3 1 0 8 26.66
Linfohistiocitario 26 1 2 1 0 4 13.33
Histiolinfocitario 25 1 4 0 0 5 16.66
Mixto 29 0 1 0 0 1 3.33
Histiolinfocitario ms clulas gigantes 29 0 1 0 0 1 3.33
Infiltrado Inflamatorio Sinusoidal
Neutroflico 28 1 0 1 0 2 6.66
Mixto 29 0 0 1 0 1 3.33
Infiltrado Inflamatorio Subcapsular
Histiocitario 27 0 0 3 0 3 10
Fibrosis Periportal 11 4 8 7 0 19 63.33
Fibrosis Subcapsular 26 0 1 3 0 4 13.33
Granulomas 26 0 0 4 0 4 13.33
I.If. Focal Histioneutroflico y Fibrosis 29 0 0 1 0 1 3.33
I.If. Mixto:clulas Gigantes. fibrosis 29 0 0 0 1 1 3.33
y huevos de nemtodos
Foco de necrosis 27 2 0 1 0 3 10
Necrosis multifocal con reaccin 28 0 1 1 0 2 6.66
neutrohistiocitaria
MISCELANEOS
CIIN Eosinoflicos Cristaliformes 14 13 2 1 0 16 53.33
CIIN Incoloros 29 1 0 0 0 1 3.33
0: Ausente; I: Leve; II: Moderado; III: Marcado; IV: Severo; I.If.: Infiltrado inflamatorio; CIIN: Cuerpos de inclusin
intranucleares.

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CANINO, HISTOPATOLOGIA, HIGADO, RION, HUMOR ACUOSO

Con relacin a las concentraciones de urea, significativa con sus concentraciones sanguneas
creatinina, protenas, ALT y SAP en plasma y (p<0.05). Adems, las concentraciones de urea
humor acuoso a las 0 y 24 horas postmortem y creatinina en H.A.24 h, tambin presentaron
(cuadro 3), se estableci que las concentraciones una correlacin significativa (p<0.05), con sus
en plasma para cada uno de los metabolitos valores observados en plasma y H.A.0 h. Destaca
fueron mayores a las observadas en las muestras el alto valor de correlacin observado entre las
de humor acuoso a las 0 y 24 horas postmortem concentraciones de urea en H.A.0 h con las de
(p<0.05). sangre (0.9906).
Al analizar las concentraciones de estos Al comparar las concentraciones promedio en
metabolitos en humor acuoso a las 0 horas sangre, H.A.0 h y H.A.24 h de urea y creatinina
postmortem (H.A.0 h) y las muestras de humor entre los perros con un grado de alteracin renal
acuoso a las 24 horas postmortem (H.A.24 h), I-II con las de los perros con alteracin renal III
se aprecia que las concentraciones de urea, IV (cuadro 4), se observa que no existieron
creatinina y SAP en H.A.24 h fueron mayores a diferencias significativas en los valores medidos
las observadas en H.A.0 h (p<0.05); por su parte, en sangre, H.A.0 h y H.A.24 h (p>0.05). La
las concentraciones de protenas y ALT en excepcin lo constituy la concentracin de
H.A.24 h fueron similares a las del H.A.0 h creatinina en H.A.24 h, la cual fue
(p>0.05). significativamente mayor en los caninos que
Las concentraciones de urea, creatinina y presentaban un grado de alteracin renal III-IV
ALT en H.A.0 h, presentaron una correlacin (p<0.05).

CUADRO 3: Concentraciones (promedio desviacin estndar) de urea, creatinina, protenas, ALT y


SAP en plasma y humor acuoso a las 0 y 24 horas postmortem en caninos.
Concentrations (means standard deviation) of urea, creatinine, proteins, ALT and SAP in plasm and postmortem
aqueous humour to the 0 and 24 hours in canines.

VARIABLE MUESTRA
Humor acuoso Humor acuoso
Plasma 0 hrs. 24 hrs.
(premortem) (postmortem) (postmortem)
UREA x 5.8 4.98 a 5.48 ab
mmol/l d.e. 3.52 3.2 3.14
n 31 31 31
CREATININA x 94.94 36.84 a 46.65 ab
mol/l d.e. 37.99 16.95 21.23
n 31 31 31
PROTEINAS x 77.47 1.6 a 3.20 a
g/l d.e. 9.71 3.24 4.34
n 30 30 30
ALT x 59.4 6.74 a 5.00 a
U/l (37C) d.e. 89.03 3.74 3.16
n 30 19 19
SAP x 98.23 3.05 a 10.42 ab
U/l (37C) d.e. 102 3.6 13.77
n 30 19 19
a: Diferencia con plasma (p<0.05). n: N de casos.
b: Diferencia con humor acuoso a las 0 horas (p<0.05).

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C. GALLARDO, E. PAREDES, J. PEREZ

CUADRO 4: Concentraciones (promedio desviacin estndar) de urea y creatinina en plasma y humor


acuoso a las 0 y 24 horas postmortem en 31 caninos, segn el grado de alteracin renal.
Concentrations (means standard deviation) of urea and creatinine in plasm and postmortem aqueous humour to the
0 and 24 hours in 31 canines, according to degree of renal alteration.

VARIABLE Grado de Alteracin Renal Significancia


I-II III-IV
PLASMA (premortem)

UREA x 4.96 6.81 n.s


mmol/l d.e. 1.77 4.76
n 17 14
CREATININA x 85.71 106.14 n.s
mol/l d.e. 19.75 51.2
n 17 14
HUMOR ACUOSO 0 h (postmortem)
UREA x 4.28 5.84 n.s
mmol/l d.e. 1.78 4.27
n 17 14
CREATININA x 32.29 42.36 n.s
mol/l d.e. 15.12 17.93
n 17 14
HUMOR ACUOSO 24 h (postmortem)
UREA x 4.64 6.5 n.s
mmol/l d.e. 1.64 4.17
n 17 14
CREATININA x 38.88 56.07 s
mol/l d.e. 16.65 22.89
n 17 14
n.s: No significativo (p>0.05). n: N de casos.
s: Significativo(p<0.05).

Al relacionar las concentraciones de esta alta susceptibilidad a sufrir lesiones al hecho


protenas, ALT y SAP en plasma, H.A.0 h y de que ambos rganos reciben un alto porcentaje
H.A.24 h (cuadro 5) en caninos con un grado del gasto cardaco e intervienen en muchos
de alteracin heptica leve o moderada (I-II), procesos metablicos, lo que hace que no slo
se observa que no presentaron diferencias se vean afectados por enfermedades propias, sino
significativas (p>0.05) con respecto a los que tambin se afecten por disfunciones o
caninos con alteracin heptica marcada o cambios patolgicos de otros tejidos (Kelly,
severa (III-IV). 1993; Maxie, 1993).
A nivel renal, los trastornos de tipo
DISCUSION inflamatorio-necrtico fueron encontrados en el
100% de los individuos, destacndose la
La alta variedad de lesiones histolgicas glomerulonefritis (GN) y la nefritis intersticial
observadas en hgado y rin concuerdan con lo (N.I.), esto es coincidente con lo descrito por
descrito por distintos autores, quienes atribuyen Peters (1977).

68
CANINO, HISTOPATOLOGIA, HIGADO, RION, HUMOR ACUOSO

CUADRO 5: Concentraciones (promedio desviacin estndar) de protenas, ALT y SAP en plasma y


humor acuoso a las 0 y 24 horas postmortem en caninos, segn grado de alteracin heptica.
Concentrations (means standard deviation) of proteins, ALT and SAP in plasm and postmortem aqueous humour to
the 0 and 24 hours in canines, according to degree of hepatic alteration.

VARIABLE Grado de Alteracin Renal Significancia


I-II III-IV
PLASMA (premortem)
PROTEINAS x 77.47 77.47 n.s.
g/l d.e. 10.2 9.56
n 15 15
ALT x 62.4 56.4 n.s.
U/l (37C) d.e. 118.54 48.4
n 15 15
SAP x 92.13 104.33 n.s.
U/l (37C) d.e. 66.93 130.35
n 15 15
HUMOR ACUOSO 0 h (postmortem)
PROTEINAS x 1.27 1.93 n.s.
g/l d.e. 2.19 4.1
n 15 15
ALT x 7 6.38 n.s.
U/l (37C) d.e. 3.58 4.17
n 11 8
SAP x 3.336 2.63 n.s.
U/l (37C) d.e. 4.46 2.13
n 11 8
HUMOR ACUOSO 24 h (postmortem)
PROTEINAS x 3.27 3.13 n.s.
g/l d.e. 4.64 4.19
n 15 15
ALT x 4.91 5.13 n.s.
U/l (37C) d.e. 3.78 2.3
n 11 8
SAP x 7.45 14.5 n.s.
U/l (37C) d.e. 9.17 18.3
n 11 8
n.s.: No significativo (p>0.05). n: N de casos.

Llama la atencin que la totalidad de los El dao glomerular primario a menudo es


perros examinados manifestaran algn grado de consecuencia de trombosis, embolismo o
dao glomerular; esto concuerda con lo descrito infeccin directa de los componentes del
por Mller-Peddinghaus y Trautwein (1977a), glomrulo (Confer y Panceira, 1995), sin
quienes luego de examinar 101 perros embargo, la GN usualmente resulta del depsito
encontraron evidencias de dao glomerular en el de complejos inmunes en el glomrulo (Gleadhill,
90% de los casos. 1994). Dos mecanismos inmunolgicos han sido

69
C. GALLARDO, E. PAREDES, J. PEREZ

identificados; en el primero los anticuerpos La congestin difusa renal fue la alteracin


reaccionan con antgenos de la membrana basal circulatoria ms observada (35.58%). El rin
glomerular; en el otro, los anticuerpos reaccionan puede sufrir congestin aguda o crnica; en el caso
con antgenos no glomerulares en la circulacin, agudo, se produce un aumento en la cantidad de
formndose complejos inmunes que se depositan sangre en el lado venoso del sistema circulatorio
en el glomrulo (Slauson y Lewis, 1979). debido a un impedimento sbito del flujo
Entre las lesiones inflamatorias, que tambin sanguneo desde el corazn a los pulmones (Jones
se presentaron en un alto porcentaje en riones, y col., 1997). El mtodo de eutanasia empleado
se encuentran la nefritis intersticial (87.09%) y causa un paro cardio-respiratorio, lo que podra
la fibrosis renal (51.61%). La alta presentacin explicar la presencia de congestin renal.
de N.I., concuerda con lo sealado por Mller- Los infartos renales aun cuando no
Peddinghaus y Trautwein (1977b), quienes constituyeron una alteracin de alta (19.35%),
encontraron un 71% de N.I.; por otra parte, representan una alteracin de importancia, ya que
Peters (1977), encontr N.I. en el 76.25% de los son reas de necrosis coagulativa como resultado
riones estudiados. de isquemia o una oclusin vascular debido a una
El alto porcentaje de riones con fibrosis se trombosis o a un mbolo asptico (Confer y
explica principalmente por la alta presentacin Panceira, 1995).
de N.I., ya que en su forma crnica cursa con La alta presentacin de trastornos de tipo
fibrosis; sta puede ocurrir como un evento degenerativo (83.87%), sobre todo a nivel
primario en el rin, pero ms frecuentemente cortical, puede deberse a que esta rea es
es una manifestacin crnica de la fase de metablicamente muy activa y por ende,
curacin de una lesin renal preexistente. vulnerable a la hipoxia, la cual causa tumefaccin
Microscpicamente se caracteriza por un celular de los tbulos renales, comprometiendo
aumento en la cantidad de tejido conectivo el flujo de sangre al resto del rin y provocando
intersticial y por atrofia o desaparicin de los algn grado de obstruccin tubular (Gleadhill,
tbulos renales asociados (Confer y Panceira, 1994).
1995). La presentacin de un alto nmero de perros
Los trastornos del crecimiento a nivel renal con protenas en el lumen tubular de la corteza,
constituyen una alteracin de segundo orden en podra relacionarse con la alta frecuencia de
este estudio, dada su baja frecuencia de glomerulonefritis observada ya que la barrera
presentacin (22.58%), siendo los tbulos normal de filtracin glomerular se ve daada,
dilatados o qusticos la nica alteracin de este permitiendo el paso de protenas plasmticas
tipo encontrada, estos tbulos estn delimitados hacia la orina; adems, inflamaciones del
por un epitelio de clulas aplanadas que son el parnquima renal o dao del epitelio tubular
resultado de cpsulas de Bowman dilatadas o pueden causar prdida de protenas hacia el
segmentos tubulares secuestrados que quedan espacio urinario (Relford y Lees, 1996).
aislados por tejido conectivo (Confer y Panceira, La presencia de cilindros proteicos en los
1995). tbulos de la mdula y la presencia de depsitos
La lipofucsinosis fue el nico trastorno minerales a este mismo nivel, se observan
pigmentario diagnosticado a nivel renal. Las cuando el pH es bajo y existe algn dao
lipofucsinas son pigmentos endgenos glomerular o condiciones inflamatorio
anhemoglobingenos, grasos, de ubicacin degenerativas dentro del tejido renal (Doxey,
intracelular que se encuentran en clulas en 1983).
envejecimiento y en procesos crnicos; el A nivel heptico, los trastornos de tipo
pigmento es de color pardo-dorado y se inflamatorio-necrtico, al igual que en el rin,
encuentra en cuerpos residuales como manifestaron un alto porcentaje (96.66%),
inclusiones al final de la actividad lisosmica destacndose los distintos tipos de infiltrados
(Banks, 1996). inflamatorios y la fibrosis periportal, adems, a

70
CANINO, HISTOPATOLOGIA, HIGADO, RION, HUMOR ACUOSO

pesar de su escaso porcentaje, llaman la atencin En trastornos miscelneos destacaron la


los granulomas (13.33%), de los cuales uno presencia de cuerpos de inclusin intranucleares
present huevos de nemtodo asociado a una (C.I.I.N.), eosinoflicos cristaliformes (53.33%);
fuerte reaccin inflamatoria. Entre los parsitos stos son un hallazgo frecuente en los hepatocitos
a los que podran pertenecer estos huevos se y en el epitelio renal de los perros, su origen y
destaca Capillaria heptica (MacLachlan y significado es desconocido, pero se sugiere que
Cullen, 1995). corresponden a protenas cristalizadas. Berros y
La fibrosis a nivel heptico puede ser secuela Gonzlez (1978), encontraron un 30.66% de
de una injuria txica crnica, desrdenes C.I.I.N. en los hgados de 75 perros, lo que indica
metablicos de los hepatocitos o inflamaciones que se trata de un hallazgo comn, sin embargo,
crnicas; en el caso de colangitis crnica y/o en este estudio se observ una frecuencia de
obstruccin biliar puede producirse fibrosis, la presentacin superior.
cual es ms pronunciada a nivel periportal Las concentraciones de todos los metabolitos
(MacLachlan y Cullen, 1995). en estudio medidas en el humor acuoso a las 0
Los trastornos del crecimiento ms horas postmortem fueron menores (p<0.05), que
observados en hgado fueron la atrofia de las encontradas en plasma, esto puede ser
hepatocitos (43.33%) y la hiperplasia y explicado por la presencia de la barrera
proliferacin de conductos biliares (10%). La hematoacuosa, la que impide el paso de
atrofia es un trastorno de tipo adaptativo donde molculas de gran peso molecular desde la
la sobrevivencia de la clula todava es posible. sangre hacia el humor acuoso (Stewart y col.,
La hiperplasia y proliferacin de conductos 1985); la permeabilidad de esta barrera est dada
biliares estn presentes en lesiones crnicas por el tamao de las partculas y en parte por su
(Kelly, 1993) y son el resultado de una variedad solubilidad lipdica (Lane y Lincoln, 1985a).
de injurias, sin embargo, el origen y mecanismo El mecanismo de permeabilidad selectiva de
de esta proliferacin es desconocido la barrera hematoacuosa puede explicar que las
(MacLachlan y Cullen, 1995). concentraciones de protenas en el humor acuoso
La hemosiderosis fue el nico trastorno sean muchsimo menores que en el plasma
pigmentario observado en hgado (23.33%). La (Izumisawa y Kotani, 1991), a diferencia de
hemosiderina es un pigmento frrico que se metabolitos con tamaos moleculares inferiores
forma por degradacin de la hemoglobina como la urea, los que podran atravesar la barrera
cuando se lisan los eritrocitos (Cheville, 1980; hematoacuosa casi sin ser filtrados (Wittwer y
Banks, 1996). col., 1992).
El 100% de los hgados examinados present Las concentraciones de urea, creatinina y
alteraciones de tipo circulatorio, destacndose la SAP observadas en el humor acuoso 24 horas
congestin que puede ser aguda o crnica. La posterior a la muerte fueron mayores (p<0.05)
congestin aguda suele ser consecuencia de una que en el humor acuoso al momento de la muerte
falla miocrdica, la que puede tener mltiples (0 horas), al respecto, Wittwer y col. (1992),
causas (Jones y col., 1997), entre las cuales atribuyen este aumento a la inactivacin de la
podra estar el tipo de eutanasia utilizada. La barrera hematoacuosa y a la libre difusin de los
congestin crnica generalmente est asociada metabolitos desde los tejidos vecinos.
a una falla cardaca congestiva derecha Si bien existen diferencias estadsticamente
(Dunn,1992). significativas entre las concentraciones
Los trastornos de tipo degenerativo en hgado plasmticas de los metabolitos en estudio y sus
fueron frecuentes (90%), variando desde concentraciones en humor acuoso a las 0 horas
tumefaccin turbia de hepatocitos (expresin postmortem (H.A.0 h), cabe destacar que urea,
inicial de alteracin), a degeneracin grasa creatinina y ALT presentaron una correlacin
(manifestacin ms avanzada de dao celular) significativa (p<0.05), entre sus concentraciones
(Cheville, 1980). en sangre y H.A.0 h. Sin embargo, en el caso de

71
C. GALLARDO, E. PAREDES, J. PEREZ

creatinina y ALT estas correlaciones no fueron siendo la congestin difusa la lesin ms


muy altas, por lo que pese a ser significativas, encontrada (63.33%).
no permitiran estimar con seguridad su valor en Las concentraciones de los metabolitos
sangre a partir de la concentracin en H.A.0 estudiados fueron mayores en sangre premortem
horas. que en humor acuoso a las 0 y 24 h postmortem
En el caso de la urea, la determinacin (p<0.05). Los valores de correlacin entre las
postmortem de su concentracin en humor concentraciones de sangre con las de humor
acuoso hasta las 24 horas posterior a la muerte acuoso a las 0 y 24 h postmortem fueron bajas o
permite realizar una buena estimacin de los no significativas (p>0.05), a excepcin de la urea
valores plasmticos antemortem. que present una correlacin de 0.99 (p<0.05).
Se compararon las concentraciones de urea
RESUMEN y creatinina en sangre y humor acuoso a las 0 y
24 h postmortem entre los perros con G.A.R. I
Se necropsiaron 31 caninos, sin historia II con respecto a los con G.A.R. III-IV; a la vez,
clnica de patologas hepticas o renales. Previo se compararon las concentraciones de protenas,
a la eutanasia, realizada con solucin ALT Y SAP entre los perros con G.A.H. I-II con
sobresaturada de tiopental sdico, se obtuvo una respecto a los con G.A.H. III-IV. En general, no
muestra de plasma; una vez efectuada la existi relacin significativa entre el examen
eutanasia, se obtuvo una muestra de humor histopatolgico de hgado y rin con las
acuoso desde el ojo derecho y otra 24 h despus concentraciones de urea, creatinina, protenas,
del ojo izquierdo. En cada muestra se determaron ALT y SAP en sangre premortem y humor
las concentraciones de urea, creatinina, protenas, acuoso a las 0 y 24 h postmortem de los caninos
ALT y SAP. Se caracterizaron las lesiones examinados (P>0.05).
histolgicas de hgado y de rin de caninos a
fin de relacionarlas con las concentraciones de BIBLIOGRAFIA
urea, creatinina, protenas, ALT y SAP en sangre
premortem y en humor acuoso a las 0 y 24 h APPLEBY, E. C., A. H. S. HAYWARD, G.
postmortem. STODULSKY, P. RENYARD. 1990. Urea levels
A cada perro se le practic una necropsia, in aqueous humour-an aid to diagnosis in cat. Vet.
Rec. 127: 619-620.
obtenindose muestras de hgado y rin en BANKS, J. W. 1996. Histologa Veterinaria Aplicada.
formalina al 10%. Para la caracterizacin 3ed., El Manual Moderno. Mxico, D.F.
histolgica de las lesiones se utiliz la siguiente BERRIOS, A., H. GONZALEZ. 1978. inclusiones
escala: ausente (0), leve (I), moderado (II), cristalinas intranucleares en el hgado del perro.
marcado (III), y severo (IV). A cada rgano se Arch. Med. Vet. 11: 40-41.
le asign un grado de alteracin histolgica BLOOG, D.V.M., E.H. COLES.1970. Aqueous
utilizando una escala similar (I a IV); este grado humour proteins. Vet. Bull. 40: 347-351.
CENTER, S. A. 1992. Fisiopatologa y diagnstico de
de alteracin fue comparado con las
laboratorio de las enfermedades del hgado. En:
concentraciones de los metabolitos estudiados en Ettinger, S.J. Tratado de Medicina Interna
sangre y humor acuoso a las 0 y 24 h Veterinaria: Enfermedades del perro y el gato. Vol.
postmortem. 2, 3 ed, Inter-Mdica. Buenos Aires, Argentina.
El 100% de los perros manifest algn grado CHEVILLE, N. F. 1980. Patologa Celular. Acribia.
de alteracin renal y heptica (G.A.R. y G.A.H.). Zaragoza, Espaa.
Los trastornos de tipo inflamatorio necrtico a CHEW, D. J., S. DIBARTOLA. 1992. Diagnstico y
fisiopatologa de la enfermedad renal. En: Ettinger,
nivel renal fueron observados en el 100% de los
S.J. Tratado de Medicina Interna Veterinaria:
perros, destacndose la glomerulonefritis (100%) Enfermedades del perro y el gato. Vol. 3, 3 ed.,
y la nefritis intersticial (87.09%). A nivel Inter-Mdica. Buenos Aires, Argentina.
heptico los trastornos de tipo circulatorio fueron CONFER, A. W., R. J. PANCEIRA. 1995. The urinary
los ms frecuentemente observados (100%), system. In: Carlton, W.W., McGavin. M.D.

72
CANINO, HISTOPATOLOGIA, HIGADO, RION, HUMOR ACUOSO

Thomsons Special Veterinary Pathology. 2nd ed., Veterinary Pathology. 2nd ed., Mosby-Year Book.
Mosby-Year Book. Inc. St. Louis, USA. Inc. St. Louis.
DOXEY, D. L. 1983. Clinical Pathology and MAXIE, M. G. 1993. The urinary system. En: Jubb,
Diagnostic Procedures. 2nd ed., Baillire Tindall. K.V.F., P.C. Kennedy, N. Palmer. Pathology of
London, England. domestic animals. Vol. 2, 4th ed., Academic Press.
DUNN, J. 1992. Assessment of liver damage and San Diego, EEUU.
dysfunction. In Practice 14: 193-200. MEYER, D. J., J. W. HARDVEY. 2000. El
FORRESTER, S. D., S. E. LITTLE. 1994. The Laboratorio en Medicina Veterinaria.
etiopathogenesis of acute renal failure. Vet. Med. Interpretacin y diagnstico 2 edicin. Inter
89: 204-211. mdica. Buenos Aires, Argentina.
FOSTER, C. 1997. Estudio antomo e histopatolgico MLLER-PEDDINGHAUS, R., G. TRAUTWEIN.
de las patologas digestivas en terneros de crianza 1977a. Spontaneous glomerulonephritis in dogs.
artifcial muertos en el primer mes de vida. Tesis, I. Classification of glomerulonephritis and
M.V. Universidad Austral de Chile, Facultad de Immunopathology. Vet. Pathol. 14: 1-13.
Ciencias Veterinarias, Valdivia, Chile. MLLER-PEDDINGHAUS, R., G. TRAUTWEIN.
GLEADHILL, A. 1994. Differential diagnosis of renal 1977b. Spontaneous glomerulonephritis in dogs II.
failure in the dog. In Practice 16: 216-223. Correlation of glomerulonephritis with age,
HARDY, R. M. 1992. Enfermedades del hgado y su chronic interstitial nephritis and extrarenal lesions.
tratamiento. En: Ettinger, S. Tratado de Medicina Vet. Pathol. 14: 121-127.
Interna Veterinaria: enfermedades del perro y el PALMER, D. G., P. OSSENT, M. M. SUTER, H.
gato. Vol. 2, 3 ed., Inter-Mdica. Buenos Aires, LUTZ. 1985. Postmortem urea levels in aqueous
Argentina. humour as a reliable indicator of antemortem
IZUMISAWA, Y., T. KOTANI. 1991. Immunoglobulin uraemia. Vet. Rec. 116: 411-412.
concentrations in normal aqueous humor and their PAREDES, E., V. CUBILLOS. 1995. Manual de
changes in the secondary aqueous humor of dogs. necropsia en animales domsticos y envo de
J. Vet. Med. Sci. 53: 543-544. muestras a laboratorio. Universidad Austral de
JONES, T. C., R. D. HUNT, N. W. KING. 1997. Chile. Valdivia.
Veterinary pathology. 6th ed, Lippincott Williams PETERS, S. 1977. Patologa renal en perros (Canis
& Wilkins. Baltimore, EEUU. familiaris) de la ciudad de Valdivia. Tesis, M. V.
JUNQUEIRA, L., J. CARNEIRO. 1996. Histologa Universidad Austral de Chile, Facultad de
Bsica Texto y Atlas. 4 ed., Masson, S.A. Ciencias Veterinarias, Valdivia, Chile.
Barcelona, Espaa. RATHBONE, J. 1995. Recognizing and managing
KELLY, W. R. 1993. The liver and biliary system. En: acute and chronic cases of glaucoma. Vet. Med.
Jubb, K.V.F., P.C: Kennedy, N. Palmer. Pathology 90: 265-275.
of domestic animals. Vol.2, 4th ed., Academic RELFORD, R. L., G. E. LEES. 1996. Nephrotic
Press. San Diego, EEUU. syndrome in dogs: diagnosis and treatment.
LANE, V. M., S. D. LINCOLN. 1985a. Changes in Compend. Contin. Educ. Pract. Vet. 18: 279-292.
urea nitrogen and creatinine concentrations in the SCOTT, P. R., N. D. SARGISON, C. D. PENNY, W.
vitreous humour of cattle after death. Am. J. Vet. D. STRACHAN. 1995. Aqueous humour and
Res. 46: 1550-1552. cerebrospinal fluid collected at necropsy as
LANE, V. M., S. D. LINCOLN. 1985b. Postmortem indicators of antemortem serum 3-OH Butyrate
chemical analysis of vitreous humour as a concentration in pregnant sheep. Br. Vet. J. 151:
diagnostic aid in cattle. Food Animal. 66: 883-886. 459-461.
LUNA, L. G. 1968. Manual of histologic staining SLATTER, D. 1990. Fundamentals of Veterinary
methods of the Armed Forces Institute of Ophthalmology. 2 nd ed., W. B. Saunders.
Pathology. 3rded., McGraw-Hill Book Company. Philadelphia.
New York, USA: SLAUSON, D. O., R. M. LEWIS.1979. Comparative
MACDOUGALL, D. F. 1991. Diagnosis, monitoring pathology of glomerulonephritis in animals. Vet.
and prognosis of renal disease. In Practice 13: Pathol. 16: 135-164.
250-254. STEWART, J., M. A. HULL, G. A. SEVERIN, L. H.
MACLACHLAN, N. J., J. M. CULLEN. 1995. Liver, LAUERMAN, J. D. LAVACH. 1985. Laboratory
biliary system, and exocrine pancreas. In: Carlton, evaluation of aqueous humour in the healthy dog,
W. W., McGavin, M. D. Thomsons Special cat, horse and cow. Am. J. Vet. Res. 46: 657-659.

73
C. GALLARDO, E. PAREDES, J. PEREZ

URCULLU, F. 1991. Concentraciones de calcio, WITTWER, F., H. BHMWALD. 1986. Manual de


magnesio, fsforo, potasio, sodio, urea y creatinina Patologa Clnica Veterinaria. Universidad Austral
en el humor acuoso y vtreo de vacas postmortem de Chile, Facultad de Ciencias Veterinarias,
y su relacin con sus concentraciones sanguneas Valdivia.
premortem. Tesis, M. V. Universidad Austral de WITTWER, F., F. URCULL, P. CONTRERAS, H.
Chile, Facultad de Ciencias Veterinarias, Valdivia, BHMWALD. 1992. Concentraciones
Chile. postmortem de minerales, urea y creatinina en
WINTER, H., N. H. MAJID. 1984. humor acuoso y vtreo en vacas como indicadores
Glomerulonephritis-an emerging disease?. Vet. de sus concentraciones sanguneas premortem.
Bull. 54: 327-335. Arch. Med. Vet. 24: 61-68.

74