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Gnero

Mycobacterium
Prof. Adjunto Ary Fernandes Junior
Departamento de Microbiologia e Imunologia
Instituto de Biocincias - UNESP
Distrito de Rubio Jnior s/n
CEP 18618-000/ Botucatu/ SP /Brasil
Tel. 14 3880.0412
ary@ibb.unesp.br
Ordem Actinomycetales
Famlia Mycobacteriaceae

Genero Mycobacterium

Aproximadamente 172 espcies e


13 sub-espcies no gnero Mycobacterium

Euzby: List of Prokaryotic names with Standing in Nomenclature (2015)


Classificao Clnica das
Micobactrias
Grupos Exemplos

1. Patgeno obrigatrio M. tuberculosis, M. bovis, M. leprae, M. avium


subsp. paratuberculosis (doena de Crohn)

2. Patgeno cutneo M. marinum, M. ulcerans.

3. Patgeno oportunista M. kansasii, M. avium intracellulare, M. xenopi.

4. No ou raramente patgeno M. gordonae, M. smegmatis.

5. Patgeno animal M. lepraemurium, M. caprae, M. pinnipedii


Classificao
Famlia: Micobacteriaceae
Gnero: Mycobacterium

Mycobacterium leprae
Complexo M. tuberculosis
Complexo M. avium
Micobactrias no tuberculosas (MNT).
Mycobacterium tuberculosis, M. bovis,
M. africanum, M. microti (roedores),
M. caprae (caprinos),
M. canetti (var. do M. tuberculosis Somlia),
M. pinnipedii (lees)

Complexo Mycobacterium tuberculosis

99,9% de identidade gentica (RNAr 16S)


Mycobacterium avium subsp. avium
M. avium subsp. hominissuis
M. avium subsp. paratuberculosis
M. intracellulare

Complexo M. avium

Infeces oportunistas em pacientes com


AIDS
Micobactrias no tuberculosas (MNT)

Classificao Runyon tempo crescimento


(1959) produo pigmento carotenide
(Grupos I, II, II e IV) organismos atpicos

Infeces linfticas, pulmonares, esquelticas,


cutneas e disseminadas.
Micobactrias no tuberculosas ou atpicas (MNT) patognicas para o
homem segundo classificao de Runyon
Grupos Espcies de crescimento Apresentao clnica comum Tempo

Grupo I Fotocromognicas
M. kansasii Pulmonar e ganglionar Lento
M.marinum Leses cutneas Rpido
M.simiae pulmonar Lento
M. asiaticum pulmonar Lento
Grupo II Escotocromognicas
M. scrofulaceum Pulmonar e ganglionar Lento
M. xenopi Pulmonar Lento
M. szulgai Pulmonar Lento
M. gordonae *No patognica
M. flavencens *No patognica
Grupo III No cromognicas
Complexo M. avium (inclui Pulmonar, ganglionar ou
M.intracellulare) disseminada Lento
M. malmoense Pulmonar Lento
M. hemophilum Cutnea e de tecidos moles Lento
M. terrae * No patognica Lento
M. ulcerans lceras cutneas Lento
M. noncromogenicum lceras cutneas Lento
Grupo IV De Crescimento Rpido-
Complexo
M. fortuitum (inclui
M.chelonae), M.abscessus Pulmonar, tecidos moles, ssea Rpido
M. thermoresistible * No patognica Rpido
M. neoaurum *Nopatognica Rpido
* Usualmente saprfitas, porm h registros de doenas provocadas por elas.
Fonte: adaptado de Runyon ( ATS Statement, 1997) In: Ministrio da Sade,2007
Caractersticas das micobacterias de maior importncia clnica
Tuberculose Infeco 90 a 95% dos infectados
Tuberculose Doena 5 a 10% dos infectados
(bito - 50% 2,7 milhes/ano), (Doena Crnica - 25%),
(Cura natural - 25%)

Doena Grave 100% curvel


O Brasil ocupa o 19 lugar entre os 22 pases responsveis
por 80% do total de casos de tuberculose no mundo;

2010 : 71 mil casos 47/100.000 hab.


notificados e
4.600 mortes

41/100.000 hab.

40/100.000 hab.

Brasil=38/100 mil hab.

71/100.000 hab.
4,5 mil mortes/ano Tuberculose (TB)
Coeficiente de deteco de Hansenase

20 a 30 % dos casos evoluem com incapacidades fsicas


Caractersticas Gerais
Bacilos pleomrficos: retos ou encurvados,
cocobacilos, filamentosos ou formas ramificadas. (0,2-
0,6 m por 1-10 m)
No formam esporo, flagelo ou
cpsula

Parede: Complexa
Lipdeos (60% PS) Natureza hidrofbica
(30% do genoma produo destes lipdeos
(cido miclico = 70 a 80 carbonos)
(* caractersticas importantes)
(cido N-glicolilmurmico)

AG: Arabinogalactana
mAG: micolil arabinogalactana
mAGP: mAGpeptideoglicano

LAM: Lipoarabinomanana
LM: Lipomanana
PIM: Fosfatidil inositol-manose
Caractersticas Gerais
* Bacilos lcool cidos Resistentes (BAAR)
(Ziehl-Neelsen)
Caractersticas Gerais
Intracelulares - infectam e proliferam-se no interior de
macrfagos

M. intracellulare
Caractersticas Gerais
Cultivo: Meio de cultura

Lowenstein-Jensen (Albumina, Lecitina (Ovo), Glicerol,


Asparagina, Sais Minerais e Verde Malaquita (agente
inibidor)
Middlebrook (agar e caldo)
(sais especficos, vitaminas, cofatores, acido olico,
albumina, catalase, glicerol, asparagina) cresce
menos contaminantes que o contendo ovo
Stonebrink (Sem glicerol, com piruvato) M. bovis
Dubois, Ogawa
Caractersticas Gerais

Cultivo: Condies de cultivo


Aerbios Estritos (requer O2) ou Microaerfilos,
pH 6,8-7,0,
ToC: 33-39oC (Mamferos), 25 e 45oC (Avirio)

Crescimento
lento (12 - 24horas) 10 dias a 3 semanas)
*tempo de gerao de 18 a 24 horas);
rpido 3 a 7 dias (normalmente as saprofticas)
Lowenstein-Jensen

Stonebrink
Cultura de Mycobacterium canettii em Middlebrook (cultura de 4
semanas)

Somoskovi A et al. J. Clin. Microbiol. 2009;47:255-257


Mycobacterium tuberculosis
Mycobacterium tuberculosis

1882- Robert Koch "Bacilo de Koch (BK)


Tuberculose era causa de 1 a cada 4 bitos na Europa h 100 anos atrs,

Estreptomicina (1944) cura da Tb

1993: OMS declara tuberculose emergncia global.


Estratgia do Tratamento Diretamente Observado
(DOTS)

1998: Decifrado o genoma do M.tuberculosis.


Mycobacterium tuberculosis

Principal agente de tuberculose no homem

Dimenses 0,3 a 0,6 mm por 1,0 a 4,0 mm


Tempo de gerao de 24 horas
Fosfolipases C, lipases e esterases
Virulncia: Propriedades metablicas e/ou
estruturais Modulam a resposta imune
Patogenia
Sem Fatores de Virulncia Clssicos

*Componentes lipdios esto envolvidos na patognese


(Intracelulares facultativas e no destrudos no interior
dos fagcitos Evita fuso do fagossoma com o
lisossoma )
(Resposta mediada por clulas)

Infeces que podem durar a vida toda do indivduo


Outras bactrias e

Warner & Mizrahi, 2007. Nature Medicine 13, 282 - 284

A maioria das bactrias e micobactrias no patognicas so rapidamente mortas quando


fagossomo fundi-se com lisossomos. Por outro lado, o M. tuberculosis permanece dentro dos
fagossomos e a bactria libera PknG (proteina kinase G) para bloquear a fuso do fagossomo
com lisossomo. As bactrias que no possuem gen pknG so rapidamente transferidas para
os lisossomos e eliminadas.
Transmisso Interpessoal Inalao gotcula

Contgio
Um indivduo bacilfero de uma comunidade pode infectar
entre 10 e 15 pessoas num ano.
-Tipo de ambiente
-Durao da exposio
Ingesto com leite contaminado
(atualmente incomum devido pasteurizao)

Inoculao
- pessoal laboratrio
- patologistas
Transmisso area
Patogenia
(propagao no ar de Alvolo pulmonar
partculas produzidas por
pacientes bacilferos)
Fagocitose por Macrfagos

DESTRUIO Multiplicao intra celular com lise dos


TECIDUAL macrfagos e liberao de lisossomas

RESPOSTA
Acmulo de polimorfonucleares
INFLAMATRIA

CANCRO DE
FORMAO DE GRANULOMA
INOCULAO

Disseminao principalmente
nos Rins e Ossos longos (Olhos, SN, TI,
Leses secundrias por Linfonodos, Pncreas, Pele, Cavidade Oral,
Contiguidade - Tuberculose miliar etc)
Necrose caseosa Devido fofolipdios
rgos mais frequentemente acometidos:
Pulmes, gnglios, pleura, rins, crebro, ossos
Tb cutnea
www.anaisdedermatologia.org.br
2 - 10 semanas aps contamino

90% -Infeco 10% -Doena

Tuberculose Infeco 5% : metade nos primeiros 2 anos


(sem doena)
bacilos presentes 5% Tuberculose doena
qualquer fase da vida
sistema imune macrfagos
granulomas
sistema imune
deteco= prova tuberculnica
multiplicao
no transmitem bacilos
bacilos
Risco progresso da infeco para doena

Maior para infeces ou


doenas que debilitam o sistema
imunolgico

Diabetes mellitus
Infeco pelo HIV
Tratamento prolongado com corticosteride
Terapia imunossupressora
Doenas renais crnica
Desnutrio
Sintomas
Tosse (por mais de 15 dias),
Dispnia, Cansao fcil, Dor
torcica, Rouquido,
Febre (mais comum ao
entardecer), Sudorese
Noturna, Falta de apetite,
Emagrecimento
Diagnstico
Diagnstico Clnico Histria Clnica
Exame Fsico

Exame radiolgico

Prova tuberculnica

Exame bacteriolgico Baciloscopia


(laboratorial) Cultura
Outros mtodos
Diagnstico Laboratorial
Amostras Clnicas Exame Direto para pesquisa de BAAR (BK)
(Ziehl-Neelsen ou Kinyoun) Limite de deteco -104 bacilo/mL material

(2 a 3 amostras)

Frasco estril boca larga

Kinyoun
Baciloscopia

Permite descobrir fontes de infeco = Bacilferos

Detecta 70 a 80% casos Tb

Indicaes:
- pacientes adultos com sintomas respiratrios
- pacientes com alteraes ao RX
- contato com pacientes com casos de Tb
M. bovis
(BCG-Bacille Calmette et Gurin)

M. intracellulare
Diagnstico Laboratorial

Cultura (Lowestein-Jensen, Middlebrook) limite de


deteco-102 bacilo/mL
(O aumento da tenso de CO2 intensifica o crescimento)

Indicaes:

- Suspeita de TB pulmonar com exame direto negativo;

- Diagnstico de forma extra-pulmonares;

- Casos suspeitos de resistncia bacteriana s drogas


(testes de sensibilidade a drogas).
Diagnstico Laboratorial
Diagnstico Laboratorial
BACTEC 460TB System Mycobacterial Culture Media Este sistema detecta
o crescimento das micobactrias num meio lquido de Middlebrook (7H12 e 7H13,
para as hemoculturas) que contm cido palmtico marcado com C14. A
metabolizao deste cido leva libertao de 14CO2, que medido e
transformado num valor numrico
Diagnstico Laboratorial

Identificao Bioqumica: Produo de Niacina, Reduo


de nitrato a nitrito (Nitrato redutase), Hidrlise do Tween,
Catalase a 68oC, Urease

Testes moleculares:

Sondas M. tuberculosis
PCR
Amplificao de sequncias espcies especificas RNAr 16S
Diagnstico clnico Histria Clnica

Contato com pessoas com Tb

Sintomas e sinais sugestivos:

Histria de tratamento anterior para Tb

Presena fatores de risco: infeco pelo HIV, cncer,


etilismo
Diagnstico Laboratorial

Imunodiagnstico: Teste da Tuberculina Protenas de


transporte e porinas da parede (Teste Cutneo)

Hipersensibilidade mediada por clulas


X
Tuberculina ou PPD (Purified Protein Derivative) (0,1 mL
de soluo de tuberculina = 0,04 g)

Reatora Presena de infeco (No suficiente para


diagnstico da Tb doena)
Recentemente (fase de testes) ensaios in vitro de liberao
de INF- (Clulas T CD4 sensibilizadas do paciente)
leitura:
48 a 72 horas (96h)
dimetro mm
Hipersensibilidade do tipo IV Reaes Granulomatosas
Radiografia do Trax Casos suspeitos e
baciloscopia negativa
Drogas para Tratamento

Padronizado e durao de
6 meses - Esquema Bsico

Nos dois primeiros meses:


Isoniazida, Rifampicina e
Pirazinamida e Etambutol

Nos quatro ltimos meses:


Isoniazida e Rifampicina

Tratamento responsabilidade
exclusiva do setor pblico de sade
Vacinao

BCG (Bacilo de Calmette e Gurin) (1921)


(M. bovis modificado) (50% de proteo)

Resistncia as condies ambientais

Sensveis a temperaturas elevadas (pasteurizao )

* Resistncia as condies ambientais


(dessecao e desinfetantes)
Natureza hidrofbica da superfcie e crescimento em agregados
(corantes e antibacterianos adicionados em meios seletivos)
Mycobacterium leprae

Dasypus novemcinctus
Mycobacterium leprae
Gerhard Henrick Armauer Hansen (1841-1912)
Agente da lepra (1873) bipsias de leses cutneas
Hansenase ou mal de Hansen)
1970 Infeco Sistmica em Tatu (semelhante a
hansenase lepromatosa em humanos)
Calcula-se cerca de 12 milhes de pessoas no mundo com
hansenase (Brasil 4,6/10 mil Hab.)

Isolamento compulsrio dos pacientes de hansenase


em hospitais colnias vigorou no Brasil at 1976.
Caractersticas Gerais

Morfologia semelhante ao M. tuberculosis


(bacilos retos ou ligeiramente encurvados);
Dimenses 0,3 a 0,6 mm por 4,0 a 7,0 mm;
BAAR;
No mveis e no produtores de esporos;

No cultivados em meios de cultura artificiais


(culturas de clulas);
Caractersticas Gerais

Temperatura tima de crescimento 30C


Intracelular obrigatrio sendo o homem nico a
apresentar a doena
Afinidade por clulas cutneas e por clulas dos
nervos perifricos

Baixa patogenicidade - alta infectividade


(infectar grande nmero de indivduos)
Colorao de Ziehl Neelsen
Aspectos Gerais da Doena

Afeta principalmente a pele e os nervos, mas pode atingir


outros orgos

Tecidos mais frios como pele, nervos superficiais, nariz,


faringe, laringe, olhos e testculos (ToC tima = 30oC)

Leses cutneas na forma de mculas plidas e anestsicas,


ndulos eritematosos ou infiltrao cutnea difusa.

Distrbios: anestesia, neurite, reabsoro ssea e


encurtamento dos ossos.
Hansenase

Modo transmisso:

Pessoa doente eliminando bacilo para meio


Vias reas superiores
Necessrio contato direto
Hansenase

Aparecimento doena Relao parasita/hospedeiro


(2 - 7 anos)

Afeta todas idades e ambos sexos (mais frequente


homens (2:1)
(raramente crianas perodo longo de incubao da
bactria)

Risco adoecer Condies individuais


Condies socioeconmicas
Patogenicidade
(Classificao de Ridley e Jopling)
Hansenase Tuberculide: Curso benigno e no
progressivo com mculas cutneas (perda de sensibilidade e
alopcia). Ausncia ou pequena quantidade de bacilos nas
leses (no bacilfera)

Hansenase Lepromatosa (Hanseniase Virchowiana):


Progressiva e maligna, com leses cutneas e formas
nodulares que desfiguram o corpo. Grande quantidade de
bacilos nas leses contendo secrees serosanguinolentas)
(Altamente contagiosa (109 bac/grama de tecido; 105 bac/mL
sangue)
Hansenase

As caractersticas genticas tem importncia relevante


na destruio ou multiplicao do bacilo no sistema
macrofgico do hospedeiro (classificao OMS).

Paucibacilares - apresentam resistncia ao bacilo


(< 5 leses) abrigam pequeno nmero bacilo
no infectam outras pessoas
cura espontnea

Multibacilares/ (> 5 leses) Lepra lepromatosa


Na forma paucibacilar- A resposta imune parece
ser regulada pela subpopulao celular com padro
Th1 que libera as citocinas IL2, IL12, IL15, IL18 e
IFN , que promovem ativao dos macrfagos,
resultando em uma resposta vigorosa contra os
bacilos e desencadeia a resposta celular

Na forma multibacilar - Apresenta o padro Th2


que promove a liberao de IL4, IL10 e IL13,
responsveis pela desativao dos macrfagos,
aumentando a proliferao bacilar.
Mais branda e caracterizada por Leses de pele desfigurante, ndulos,
manchas de pele no pigmentada placas, espessamento da derme e
envolvimento da mucosa nasal.
Hansenase Aspectos clnicos
Sinais e sintomas dermatolgicos
- Leses
- Alterao sensibilidade
- Mais frequentes: face, orelhas, ndegas, braos,
pernas e costas
Hansenase Aspectos clnicos

Sinais e sintomas neurolgicos

-Dor e espessamento nervos perifricos


-Perda sensibilidade rea inervadas (olhos, mos
e ps)
-Perda fora msculos inervados (plpebras)
-Neurite
Hansenase
Hansenase - Diagnstico
Laboratorial

Baciloscopia Colorao de Ziehl-Neelsen:


Raspados de pele, mucosa nasal ou amostras de
bipsia da pele do lobo da orelhas

Apoio ao diagnstico clnico : Pesquisa de


sensibilidade nas leses

Cultura

Teste de Lepromina ou Mitsuda (para lepra


tuberculide apenas) (leitura feita aps 28 dias)
Hansenase - Tratamento

PQT (poliquimioterapia) oral com dose mensal na


unidade de sade (dose supervisionada)
Demais doses auto-administradas (pelo paciente em sua
moradia)
Cuidados com os olhos, mos e ps, para preveno de
incapacidades

Incio do tratamento transmisso da doena interrompida

Tratamento completo e correto cura da doena.


Hansenase - Tratamento
ESQUEMA PAUCIBACILAR (PB)- PACIENTES COM AT 5
LESES

RIFAMPICINA
6 doses em at 9 meses
DAPSONA
Hansenase - Tratamento
ESQUEMA MULTIBACILAR (MB)- PACIENTES COM MAIS DE
5 LESES

RIFAMPICINA
Durao do tratamento: 12 doses em
CLOFAZIMINA at 18 meses.
DAPSONA
Hansenase - Preveno

Auto-cuidados so procedimentos e exerccios que


a prpria pessoa, devidamente orientada e
supervisionada, pode e deve realizar, para
prevenir incapacidades e deformidades.

Vacina BCG na preveno da hansenase: o nvel


de proteo variou de 20 a 80%, maior proteo
para as formas multibacilares da doena.
Hansenase - Epidemiologia
Necessrio identificar a fonte de contgio do
doente, descobrir novos casos de hansenase entre
os contatos intradomiciliares - toda e qualquer
pessoa que resida ou tenha residido com o doente,
nos ltimos cinco anos.

Fcil diagnosticar e tratar

Tem cura

Tardiamente = graves conseqncias


(incapacidade fsica)
Mycobacterium ulcerans (lcera tubercultica no HO)