UNIVERSIDAD ALAS PERUANAS

FACULTAD DE INGENIERAS Y ARQUITECTURA

ESCUELA ACADMICO PROFESIONAL DE INGENIERA AMBIENTAL

TCNICA DE DILUCIONES
SUCESIVAS EN PLACAS

PRESENTADO POR:

CUYA PILLACA, Anglica

ASIGNATURA: MICROBIOLOGA

DOCENTE: Blgo: JOYO ZAGA, Gilmer

CICLO: V

AYACUCHO-PER

2015
 II: INTRODUCCIN

El gnero Salmonella pertenece a la tribu Salmonelleae, de la familia

Enterobacteriaceae.
Los miembros del gnero Salmonella son bacilos gram-negativos, de 0,7-1,5 x
2,0-5m,
Generalmente mviles por flagelos pertricos (excepto S. Gallinarum),
anaerobios facultativos, no esporulados.
El gnero Salmonella fue objeto de sucesivas modificaciones, a travs de los
aos, en lo que respecta a su nomenclatura y taxonoma. Sin embargo, todava
siguen vigentes las ideas desarrolladas por P.R. Edwards y H.W. Ewing, en la
dcada del 40, cuando definieron e identificaron las primeras cepas del gnero
Salmonella y de otros miembros de la familia Enterobacteriaceae.
En ese entonces existan especies y subespecies que eran muchos de ellos
pero como por ejemplo: las subespecies de Salmonella entrica y la especie
Salmonella bongori se dividen en ms de 2400 serovariedades, que estn
definidas en funcin de diferentes asociaciones de factores antignicos
somticos O y flagelares. Puede haber muchas ms algo de esto importante
que no est escrito ni publicado por el Centro Colaborador de la OMS de
Referencia e Investigacin de Salmonella, del Instituto Pasteur de Pars.
Los miembros del gnero Salmonella estn ampliamente distribuidos en la
naturaleza, se los encuentra como comensales y como patgenos en el tracto
gastrointestinal de mamferos domsticos y salvajes, reptiles, aves e insectos,
causando un amplio espectro de enfermedades en el hombre y los animales.
Los miembros del gnero se pueden clasificar en tres grupos:
a) Los que no tienen preferencia por algn husped en especial, por lo que
infectan tanto al hombre como a los animales. En este grupo se encuentran la
mayora de las serovariedades responsables de las salmonelosis.
b) Los que infectan slo al hombre: Salmonella Typhi, Salmonella Paratyphi A y
Salmonella Paratyphi C
c) Los que estn adaptados a un husped animal: S. Abortusovis, a los ovinos;
S.Abortusequi, a los equinos y S. Gallinarum, a las aves
La salmonelosis es una zoonosis de distribucin mundial. La tasa de incidencia
de la infeccin es mayor en los lactantes y en nios de corta edad.
Epidemiolgicamente, las infecciones por Salmonella pueden causar pequeos
brotes en la poblacin en general, sin embargo el 60 - 80% de los casos son
espordicos; a veces se producen grandes brotes en hospitales, jardines
maternales, geritricos, restaurantes.
Es una enfermedad fundamentalmente de origen alimentario, la fuente ms
frecuente de infeccin son los alimentos contaminados, incluido agua. Tambin
puede ocurrir la transmisin de persona a persona.
A pesar de todos los controles que se han puesto en prctica, las infecciones
por Salmonella debidas al consumo de alimentos contaminados contina
siendo un problema serio con millones de casos que ocurren anualmente en
todo el mundo.
La vigilancia de Salmonella spp. Y shiguella en todas las etapas de la cadena
de procesamiento de los alimentos constituye un elemento importante en la
investigacin de la epidemiologa de la salmonelosis transmitida por alimentos
y en el desarrollo e implementacin de estrategias eficientes de control de la
misma.
En programas de monitoreo y control es esencial contar con mtodos de
laboratorio eficientes para el aislamiento, identificacin y tipificacin de
Salmonella spp y shiguella spp.
Se debe destacar que hay muchos procedimientos distintos para el aislamiento
de Salmonella y Shiguella. En aguas podemos ver las diferentes formas de
ambos y la distincin ya que el agua era sumamente contaminada, un agua
que fue extrada de la zona de totorilla donde procesan y tratan el agua.
Esta agua que tiene alto contenido de bacterias ya que se recogi del recinto
de un desage en la zona de totorilla para poder aislar y cultivar el
microorganismo y as poder determinar las sepas de shiguella y salmonella ya
que ambas pueden presentar colonias incoloras o colonias con el centro negro
y de bordes transparentes y es as como llegaremos a obtener los resultados
en el cultivo.
 I: TITULO: AGAR SS (SALMONELLA
SHIGUELLA)
III: OBJETIVO GENERAL
Conocer e interpretar la tcnica de diluciones sucesivas en placas (agar
ss.)

OBJETIVO ESPECIFICO
Conocer, diferenciar, clasificar y preparar (pesada, preparacin
esterilizacin y conservacin) los diferentes medios de cultivo en el
laboratorio de microbiologa.
Familiarizarse con los medios de cultivo y los procesos de esterilizacin.
Identificar las unidades formadoras de colonias.
Evidenciar el crecimiento microbiano.
Obtener un resultado claro de los microorganismos.

VI: FUNDAMENTO TEORICO

El medio de cultivo Salmonella Shigella Agar .Es un medio de cultivo selectivo y
diferencial.
Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de Salmonella spp. Y de algunas
especies de Shigella spp. A partir de heces, alimentos y otros materiales en los
cuales se sospeche su presencia.
La selectividad, est dada por la sales biliares y el verde brillante, que inhiben
el desarrollo de bacterias Gram positivas, de la mayora de los coliformes y el
desarrollo invasor del Proteus spp.
Es diferencial debido a la fermentacin de la lactosa, y a la formacin de cido
sulfhdrico a partir del tiosulfato de sodio.
Los pocos microorganismos fermentadores de lactosa capaces de desarrollar,
acidifican el medio haciendo virar al rojo el indicador de pH, obtenindose
colonias rosadas o rojas sobre un fondo rojizo.
Salmonella, Shigella y otros microorganismos no fermentadores de lactosa,
crecen bien en el medio de cultivo, y producen colonias transparentes.
La produccin de cido sulfhdrico se evidencia como colonias con centro
negro debido a la formacin de sulfuro de hierro.
 Frmula (en gramos por litro) Instrucciones

Pluripeptona 5.0

Extracto de carne 5.0

Lactosa 10.0

Mezcla de sales biliares 8.5

Suspender 60 g del polvo por litro de

agua destilada. Reposar 5 minutos y
Citrato de sodio 8.5 mezclar hasta homogeneizar. Calentar a
ebullicin durante 2 o 3 minutos. NO
ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE. Enfriar
Tiosulfato de sodio 8.5 a 45-50C y distribuir unos 20 ml por
placa. Secar la superficie del medio unos
minutos en la estufa.

Citrato frrico 1.0

Agar 13.5

Verde brillante 0.00033

Rojo neutro 0.025

pH final: 7.0 0.2

*Ajustada y/o suplementada para satisfacer los criterios de rendimiento.

SIEMBRA
Sembrar por estriado la superficie del medio de cultivo.

INCUBACIN
Durante24-48 horas a 35-37 C, en aerobiosis.

RESULTADOS

Microorganismos Colonias
 Salmonella typhimurium ATCC 14028 Transparentes, centro negro

Shigella flexneri Incoloras

Shigella sonnei Incoloras

Proteus mirabilis ATCC 43071 Transparentes, centro negro

Escherichia coli ATCC 25922 Rosadas a rojas

Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Rosadas cremosas y mucosas

Enterococcus faecalis ATCC 29212 Incoloras, de muy escaso crecimiento

V: MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS

MATERIALES:
Placas de Petri
Asa de kolle
Mechero de alcohol
Pinzas y tijeras de acero inoxidable
Matraces Erlenmeyer 100ml
Probetas
Pipetas estriles de 10 mL y 1 mL.
Algodn
Botellas esterilizadas
Papel
Muestra (1ml para cada uno)
Marcador
Cinta

EQUIPOS
Autoclave
Balanza de precisin o analtica
Estufa de incubacin

REACTIVOS
Agua esterilizada o destilada 100ml
Peptona 100ml
Agar SS (salmonella shiguella) (5.5g)

VI: PROCEDIMIENTO

ESQUEMA DE PROCEDIMIENTO
100 ml de agua destilada o agua
peptona
AGAR SS (SALMONELLA
1ml de muestra SHIGUELLA)
 10-1

1ml

Diluciones decimales

10- 10- 10-4

1ml 1 1ml

S.
salmonella
Incubacin
Estras
44c / 24 horas

S. shiguella

Colonias con centros negros la salmonella shiguella tienden a ser

incoloradas (recuento de ss)

Paso 1:
Seleccionar todos los instrumentos o materiales a usar en el medio de cultivo
para esterilizar en el autoclave a 15lb15121C (La esterilizacin, para la
destruccin de todas las formas de vida microscpicas, incluidos virus y
esporas.)
Esperamos a que se se
termine de autoclavar los materiales al tercer soplo de la maquina lo
apagamos, esperamos a que enfre el autoclave para evitar accidentes, si
deseamos que el enfriamiento sea ms rpido, levantamos las espitas para que
el aire caliente salga y enfre ms rpido.

Paso 2:
Pesamos el AGAR SS en la balanza analtica (5.5g de AGAR SS para 100ml de
agua destilada o peptonada).
 *separamos el agua
destilada al matraz
(100ml de ello) para
hacer la disolucin y
hervirlo x 2 minutos.
OJO: el AGAR SS no
se autoclava

*despus de separar el agua destilada hacemos la combinacin del agar y el

agua destilada hasta diluirlo bien para ponerlo a hervir.
Paso 3:
Llevamos a hervir el AGAR SS por 2 minutos en el mechero

Paso 4:
Dejar enfriar a temperatura de ambiente y controlar para que no se coagule el
agar, luego depositamos el AGAR SS en las placas Petri, siempre con la ayuda
de un mechero, para obtener lo siguiente:

Paso 5:
Preparamos la muestra en 4 botellas esterilizadas para cultivar los
microorganismos.
*muestra: agua contaminada de totorilla
Una vez obtenido las muestras en cada botella y taparlos muy bien con el
algodn procedemos con lo siguiente:

Paso 6:
Cultivamos el microorganismo en las placas Petri por el mtodo de estras y
para eso utilizamos el aza de kolle.
La tcnica de siembra en estra es usada para aislar cepas puras en una placa
Petri a partir de un inculo o muestra con diferentes especies. La tcnica
consiste en, mediante un asa de siembra previamente esterilizada, rayar la
superficie de cultivo de una placa Petri de forma que en cada pasada sea
menor el nmero de clulas depositado, las ltimas pasadas debern
depositar un nmero tan bajo de clulas que, una vez incubadas, se formen
colonias puras.
*hacemos de la siguiente manera: esterilizamos el aza de kolle para sacar unas
gotas de la muestra, en medio del mechero y lo cultivamos en las placas Petri,
que contienen el agar.

*luego llevamos a la estufa de incubacin y lo dejamos Durante24-48 horas a

35-37 C, en aerobiosis. Y obtenemos los resultados.
VII: RESULTADOS
En el final resultado despus de incubar por 48 horas obtuvimos ciertos
resultado como estas, las cuales contamos la ltima placa que era igual a 10-4.
En la placa 4 en el conteo obtuvimos 120 colonias formadoras de
microorganismos que ser a igual a lo siguiente:

120 x 10000 = 120000 ss

As podemos determinar la salmonella en las placas.

 VIII: CONCLUSIONES
Durante el cultivo que realizamos nos dimos cuenta que al instante no
salen los microorganismos sino que tenemos que llevar a una
temperatura adecuada para que pueda reproducirse y as procrear toda
una poblacin de microorganismos y as poder Identificar las unidades
formadoras de colonias.
Tambin podemos Conocer, diferenciar y darnos cuenta que tipo de
microorganismos crecen y Evidenciar el crecimiento microbiano.
Durante el cultivo tambin nos familiarizamos con los medios de cultivo
y los procesos de esterilizacin.
En conclusin llegamos al punto que queremos obtener: la salmonella o
shiguella un medio de cultivo muy contagioso y transmitible fcil de
contraerlo ya que existen en muchos medio ya sea fsico o qumico y
tambin biolgicamente, en este caso fue el de aguas contaminadas.
IX: RECOMENDACIONES
Tener siempre puesto los guantes quirrgicos, cabello recogido,
etc.
Mantener en todo momento las batas y los vestidos abrochados.
No abandonar objetos personales en mesas de trabajo.
No ingerir alimentos en el laboratorio.
No guardar alimentos ni bebidas en las heladeras del laboratorio.
No fumar en el laboratorio.
Lavarse las manos antes de abandonar el laboratorio.
Llevar recogidos los cabellos.
No llevar pulseras, colgantes o mangas anchas que pudieran
engancharse en los montajes.
Conocer la aplicacin de los productos de primeros auxilios del
botiqun y los mecanismos para recibir posibles ayudas exteriores.
No inhalar, probar u oler los productos qumicos en ningn caso.
Es preciso ser corts y hacer uso del sentido comn en el
laboratorio. No se tienen que gastar bromas, correr, jugar,
empujar o gritar.
Debe mantenerse limpia y ordenada, sin libros, abrigos, bolsas o
equipos innecesarios. Los productos qumicos derramados tienen
que ser recogidos y eliminados inmediatamente, siguiendo los
protocolos establecidos.
Es obligatorio usar gafas de seguridad y no llevar lentes de
contacto.
 X: REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

1. Acevedo, F; Gentina, JC; Illanes, A. (2002). Fundamentos de Ingenieria

Bioqumica, Ediciones Universitarias deValparaso. PUCV.
2. Brock, D; Madigan, M; Martinko, J; Parker, J. (2004) Biologa de los
Microorganismos, M. Prencite Hall.
3. DAVIS, B.D., DULBECCO, R., EISEN, H.N. y GINSBERG, H.S. 1990.
Microbiology (4 edicin). J.B. Lippincott Co., Philadelphia.
4. Jay, James Monroe. 2002. Microbiologa moderna de los alimentos.
edicin: Acribia, D.L.
5. MADIGAN, M.T., MARTINKO, J.M. y PARKER, J. (2004): Brock Biologa
de los Microorganismos (10 edicin). Pearson Educacin S.A.Madrid.
6. MEYER, H.-P., O. KPPELI, A. FIECHTER (1985): Growth control in
microbial cultures. Ann. Rev. Microbiol. 39: 299-319.
7. Microbiologa Clnica. Mdulo 1. Taxonoma y Fisiologa Microbiana.
Recoleccin y transporte de muestras para el diagnstico de infecciones.
AAM- Colegio de Bioqumicos de la Provincia de Entre Ros- Facultad de
Bioqumica y Ciencias Biolgicas Universidad Nacional del Litoral. 1997.
8. Prescott L, Harley J, Klein D. Microbiologa. Cuarta Edicin. 1999.
9. Vullo D, Waschman M, Alche L. Microbiologa en prctica. Manual de
tcnicas de laboratorio para la enseanza de la microbiologa bsica y
aplicada. Ed. Atlante. 2000. Cap. 7, 47-50.
ANEXO