UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO RUIZ GALLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS

ESCUELA PROFESIONAL DE MICROBIOLOGIA

ALUMNO:

Chozo Mestanza Ivan Franco

Cobeas Chvez Jackeline Aracelli
Gutirrez Santa Maria Astrid .

DOCENTE:

Jaramillo Llontop Adela

CURSO:

Bacteriologa

TEMA:
 Obtencion de Cultivo puro (Enterobacterias)

PRACTICA N2:
Enterobacteriaceae

INTRODUCCIN

Esta familia est compuesta por especies bacterianas bacilares, Gram

negativas, mviles por flagelos peritricos o inmviles. Metabolizan la
glucosa por fermentacin, con produccin de gas o sin l. Son bacterias
oxidasa negativos.
Los bacilos suelen ser aerobios o anaerobios facultativos, no formadores
de esporas; algunas especies forman una amplia cpsula que se reflejan
en colonias viscosas y mucoides; otras son hemolticas en agar sangre,
como sucedes en cepas de Escherichia y Proteus. Rara vez producen
pigmentos bajo ciertas condiciones de cultivo, Serratia produce un
pigmento rojo y en Erwinia las colonias tienen una coloracin que va del
crema al amarillo.
En medios bacteriolgicos ordinarios, las colonias muestran tendencia
ser lisas, convexas, con bordes enteros, hmedos brillantes y de color
grisceo. Con frecuencia se pueden observar colonias rugosas.
La familia Enterobacteriaceae lo constituyen un gran nmero de
especies estrechamente relacionadas, que habitan en el intestino grueso
del hombre y animales; suelo, agua y materia en descomposicin.
Debido a su hbitat normal en el hombre, se les llama bacilos
entricos. En este grupo se incluyen a los patgenos intestinales
(Salmonella, Shiguella), tambin otros que no causan enfermedad, pero
el husped alterado pueden tener la oportunidad de invadir otros sitios
del cuerpo (Klebsiella y Escherichia). Por otro lado, las enterobacterias
han desempeado un papel importante en el campo de la Biologa
molecular y la gentica.
OBJETIVOS

Aplicar correctamente las tcnicas de aislamiento para la obtencin

de una cepa pura.
Identificar la bacteria aislada mediante caractersticas
macroscpicas, microscpicas (tincin de Gram) y pruebas
bioqumicas.

MATERIALES

Vial con Klebsiella.

Mechero.
Asa bacteriolgica en punta y anillo.
Batera gram.
Laminas porta objetos.
Microscopio.
Aceite de inmersin.
Tubos estriles.
Medios LIA, TSI, citrato, caldo peptonado y caldo glucosado.

PROCEDIMIENTO

Realizar tincin de Gram al vial con cultivo de Klebsiella y observar al

microscopio para la descripcin de las caractersticas microscpicas.
Hacer el aislamiento secundario de la colonia al vial con medio.
Realizar las respectivas pruebas bioqumicas para comprobar que se
trata del microorganismo en cuestin.
RESULTADOS

Caractersticas microscpicas: Tincin Gram

Morfologa
Forma Bacilar
Disposicin
Reaccin Gram
tintorial negativo
Endospora -

PRUEBAS BIOQUMICAS
 INDOL Negativo
RM Negativo
VP Positivo
TSI K/A+,++
LIA K/K
CITRATO Positivo
FUNDAMENTO

Prueba de Indol: El indol es un compuesto que se genera mediante la

desaminacin reductiva del triptfano, esta reaccin es llevada a cabo
por algunas bacterias que poseen las enzimas denominadas en su
conjunto triptofanasas. Se siembra el cultivo puro en caldo peptonado, la
lectura se hace por adicin de 3 a 5 gotas del reactivo de Kovacs.
Interpretacin: anillo rojo indica indol positivo y un anillo marrn es indol
negativo.

Prueba de Rojo de Metilo y Voges Proskawer: : evala la capacidad de la

bacteria de utilizar la glucosa por la va cido mixta o por la va del
butilenglicol. Se utiliza un tubo con caldo glucosado, el cultivo se divide
en dos tubos, a uno se agrega de 3 a 4 gotas del reactivo Rojo de Metilo;
y al otro 2 gotas del reactivo a-naftol y 4 gotas de KOH. Interpretacin:
rojo de Metilo positivo si el cultivo se tie de color rojo intenso y voges
proskawer positivo si el medio se torna de color rosado.
Prueba de utilizacin de Citrato: Esta prueba permite diferenciar un
grupo de bacterias que son capaces de crecer con citrato como nica
fuente de carbono y sales amnicas inorgnicas como nica fuente de
nitrgeno, provocando la alcalinizacin del medio. Se siembra un tubo
con agar citrato, por picadura y superficie inclinada, incubar 35 C por48
hrs. Interpretacin: utilizacin de citrato si el medio vira a color azul.

Prueba del TSI: Es una prueba usada para la fermentacin de la glucosa,

lactosa y sacarosa as como la produccin de H2S por parte de la
bacteria sumndole produccin de gas. Se realiza por inoculacin de la
cepa en medio TSI, empleando la tcnica de picadura y estriado en
superficie inclinada, se incuba a 37C por 24 hrs. Lectura: Acidez, se
manifiesta por el viraje del indicador rojo de fenol a color amarillo y e
Simboliza con Ia Ietra A. La presencia de gas, por el resquebrajamiento
del medio o burbujas de aire, se simboliza su intensidad de 1+ a 4+.La
produccin de hidrgeno sulfurado (H2S) se manifiesta por el color negro
en el medio y se simboliza de acuerdo a su intensidad 1+ a 4+. La
alcalinidad en este medio se manifiesta por el cambio al color grosella y
se simboliza con la letra K. Se interpreta de la siguiente manera: La
fermentacin slo de la glucosa, se manifiesta por la alcalinidad en la
parte inclinada (K) y acidez en el fondo (A). La fermentacin de lactosa
y/o sacarosa se manifiesta por el cambio total del medio al color
amarillo. La simbologa: A/A ++, - significa: Acidez en superficie
inclinada, acidez en el fondo, gas positivo, e hidrgeno sulfurado
negativo.La simbologa: K/A -, + significa: Alcalinidad en la superficie
inclinada y acidez en el fondo, gas negativo, e hidrgeno sulfurado
positivo. La simbologa: K/A ++, ++++ significa: Glucosa fermentada,
produciendo acidez, gas positivo 2+, e hidrgeno sulfurado positivo 4+.
En estos casos el negro es tan abundante que no es posible observar el
color amarillo del fondo.

-Prueba de utilizacin de la lisina: Permite la deteccin enzimas que

descarboxilan o desaminan la lisina en bacilos gram negativos.
Adicionalmente detecta enzimas que producen H2S y gas proveniente
de la glucosa. Se realiza en medio LIA, con el asa que se inocul el
medio TSl (sin volver a tomar colonia); se pica el medio 3 veces hasta el
fondo del tubo, terminando en estra en la superficie inclinada, se incuba
los tubos a 35 37C por 18 - 24 hrs. Lectura: Descarboxilacin de la
lisina, produce alcalinidad en todo el medio, por lo tanto se intensifica el
color violeta. Se simboliza K/ K, se considera lisina positiva.
Desaminacin de la lisina, empieza en la parte inclinada, virando a un
color rojo ladrillo, el fondo se torna amarillo. Se interpreta como lisina
negativa y se simboliza R/A. Negativos: es decir no se producen las dos
reacciones anteriores, puede observarse adems violeta e n la superficie
y amarillo en el fondo; tambin se simboliza K/A; si es totalmente
amarillo se simboliza A/A. En ambos casos se interpretan como lisina
negativa.

CONCLUSIN

Se determin que efectivamente la bacteria estudiada es del gnero

Klebsiella, pro lamentablemente no se pudo concluir exitosamente la
prctica debido a problemas de contaminacin de la cepa pura.

BIBLIOGRAFA
Tortora. Introduccin a la microbiologa. 9 ed.
Koneman. Diagnostico Microbiologico. 6 ed.2008.
http://microbiologiabioanalisis.blogspot.pe/2012/06/prueba-de-
rmvp-rojo-de-metilovogues.html.
https://sites.google.com/a/goumh.umh.es/practicas-de
microbiologia/indice/identificacion-bacteriana/utilizacion-del-citrato