RADIOFARMACIA

Mara Victoria Garrido Rasmussen

Electiva; 2016
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Contenido
CLASE 1: INTRODUCCIN A LA RADIOFARMACIA ........................................................................................................... 3
CLASE 2: MOLCULAS MARCADAS Y MARCACIN CON IODO ....................................................................................... 9
CLASE 3: RADIOBIOLOGA .............................................................................................................................................. 23
CLASES 4 Y 5: MARCACIN CON TECNECIO Y RENIO .................................................................................................... 33
CLASE 6: MARCACIN CON GALIO Y OTROS RADIOMETALES ...................................................................................... 53
CLASE 7: MARCACIN CON 11C ...................................................................................................................................... 65
CLASE 8: MARCACIN CON 18F ....................................................................................................................................... 77
CLASE 9: RADIOFRMACOS DE DIAGNSTICO .............................................................................................................. 91
CLASE 10: RADIOFARMACIA HOSPITALARIA ................................................................................................................. 99
CLASE 11: RADIOFRMACOS EN TERAPIA ................................................................................................................... 105
FORMULAS Y COSAS IMPORTANTES ........................................................................................................................... 115

En el 2016 no se curs la Clase 12: Produccin de Radionucleidos

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CLASE 1: INTRODUCCIN A LA RADIOFARMACIA
MARTES - 17/05/2016

Qu es la Radiofarmacia?
La Radiofarmacia es una especialidad de las Ciencias Farmacuticas que se ocupa del diseo, preparacin, control y
dispensacin de preparados radiactivos de calidad farmacutica.
Los Radiofrmacos para su uso en Medicina Nuclear con fines diagnsticos o teraputicos.

Qu son los radiofrmacos?

Los Radiofrmacos son preparados radiactivos aptos para ser administrados en seres humanos. Su uso est autorizado en
humanos, pueden ser diferentes molculas que se marcan.

Por qu preparados radiactivos?

Incluyen diversidad de formas fsicas y qumicas de la sustancia radioqumica marcada:
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- Elementos por ejemplo O
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- Sales inorgnicas por ejemplo NaI, donde el I est bajo la forma de I, el cual se utiliza en terapia y diagnstico.
- Molculas orgnicas
- Compuestos de coordinacin
- Suspensin de partculas
- Clulas radio marcadas
Contienen tomos radiactivos (radionucleidos).
El denominador comn que tienen es el radiomarcado, la introduccin de ese agente qumico que va a permitir detectarlo
exteriormente cuando hacemos un estudio.

Qu son los radionucleidos?

Son tomos inestables que sufren una transformacin en su ncleo y emiten energa bajo la forma de partculas cargadas o
radiacin electromagntica.

Qu tipos de radiacin existen?

Tenemos la que son ncleos de He con 2 neutrones y 2

protones. Las que son electrones y los rayos son los
importantes en Radiofarmacia. Las partculas alfa tienen
bajo poder de penetracin por eso la trayectoria que
recorre antes de inactivarse (logre captar 2 electrones del
medio y se transforme en un tomo de He) es de muy corta
distancia, por lo que no representan un riesgo desde el
punto de vista de penetracin. Las beta son electrones y si
bien tienen bajo poder de penetracin es mayor que el de
las alfa y son detenidos por materiales de Z bajo (acrlico,
vidrio, plsticos). Las radiaciones gamma son ondas
electromagnticas, por lo que al no tener masa su poder de
penetracin es muy grande, por esto requieren de plomo, tungsteno o concreto para ser disminuida su intensidad, nunca llegan a
blindarse por completo.

Efectos biolgicos de las radiaciones y su aplicacin en terapia

Cmo podemos sacar provecho de este tipo de
radiaciones para la medicina nuclear a travs
de la Radiofarmacia? La radiacin gamma
como puede atravesar nuestro cuerpo la vamos
a utilizar como agente de imgenes, de manera
de que incorporamos en el organismo por
diferentes vas (oral, inyectables, inhalacin) el
radiofrmaco que contiene esa molcula
radiactivo, y esta se va a alojar en algn lugar
de nuestro organismo que sea de inters, y
como esta radiacin tiene alto poder de
penetracin va a atravesar y va a llegar con
facilidad a los detectores.
Tambin se puede sacar provecho de las
radiaciones alfa y beta, aunque las alfa no estn tan extendidas en el rea, por lo que hablaremos de las beta.

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 Una vez que la radiacin est en contacto con el cuerpo se habla de contaminacin, este tipo de contaminacin es inducida
porque nosotros queremos un beneficio de ese paciente que est siendo tratado al introducir en su organismo radiacin.
Cuando hablamos de terapia queremos que la energa de esa radiacin se quede circunscripta en un pequeo espacio y
deposite toda su energa en ese lugar haciendo dao sobre clulas patgenas. Este tipo de partculas depositan su energa y
generan excitacin y ionizacin traducindose en efecto fsicos donde se produce excitacin y ruptura de las molculas y estas
pueden generar daos biolgicos que se traducen en daos al DNA y ese dao puede derivar en muerte celular (que en caso de
la terapia es lo que se desea) o daos a largo plazo sonde hay una transformacin genotpica de la clula y se puede transmitir
ese dao a sucesivas generaciones de la clula con efectos hereditarios o incluso cncer (esto no es lo que se busca con la
terapia).

Qu es la Medicina Nuclear?
Es una especialidad mdica que utiliza las propiedades nucleares de los radionucleidos para la evaluacin diagnstica de la
condicin anatmica y/o fisiolgica del cuerpo y para la terapia con fuente no selladas.

Fuentes Radiactivas
Fuentes selladas
Fuentes abiertas

Se hace de una forma poco invasiva. Siempre utiliza fuentes abiertas porque las tiene que introducir dentro del paciente. Pero
tambin tenemos fuentes selladas donde estn en un recipiente que no permite ningn tipo de intercambio con el medio,
entonces una persona las puede manipular sin contaminarse, aunque si irradindose.

Tipos de procedimientos
Estudios diagnsticos: Permiten diferenciar una anatoma o fisiologa anormal de una normal, ya sea a travs de tcnicas de
anlisis de muestras o de obtencin de imgenes. Son los ms estudiados. Mediante la administracin de una molcula que
tiene un RN adecuado. Esa molcula va a tener afinidad por un tejido en particular y una vez en ese tejido de acuerdo a como
sea captado la informacin va a diferenciar si es un tejido normal o anormal, a travs de imgenes o de muestras en general de
sangre.
Procedimientos teraputicos: Tienen por objetivo destruir las clulas causantes de la enfermedad por accin de la radiacin
emitida por un radiofrmaco administrado en forma sistmica. Esa molcula para llegar tiene que tener cierta caracterstica
qumica particular que le permita arribar y quedar selectivamente en ese lugar liberando la energa.

Estudios de anlisis de muestras

Permiten realizar un diagnstico basndose en la absorcin, dilucin, concentracin o excrecin de radiactividad luego de la
administracin de un radiofrmaco.
El resultado se basa en el conteo de muestras de sangre, orina o heces.

Podemos administrar un radiofrmaco (RF) y luego de un tiempo determinado, establecido por un protocolo, podemos tomar
una muestra y realizar un conteo teniendo en cuenta el producto fsico y con el protocolo podemos inducir si hay una exceso de
perdida, si hay una retencin.

Ejemplos:
Estudio de sobrevida de glbulos rojos con Cr. Se le administra al paciente Cr que es absorbido por los glbulos rojos
51 51

y se le hace mediciones a lo largo del cuerpo, en este caso se mide el muslo del paciente a diferentes tiempo y se
determina si est teniendo una sobrevida adecuada de GR o est teniendo una patologa que hace que los elimine antes
de tiempo.
Absorcin de vitamina B12 con Co-cianocobolamina. Se hacen estudios de heces, donde se ve si hay eliminacin por
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esta va de la vitamina B12 lo que es indicativo de alguna patologa.

Obtencin de imgenes
El radiofrmaco es preparado y administrado al paciente, generalmente por va intravenosa
La radiacin emitida es medida externamente al paciente con equipamiento adecuado
El patrn de distribucin de la actividad en el rgano en estudio permite diagnosticar diversas patologas

Los qumicos solo participan en dos etapas: la preparacin del RF y sus respectivos controles y la administracin al paciente.
Posteriormente ese RF se biodistribuye en el organismo de la persona, tiene un tiempo que se le deja que llegue adecuadamente
y se aloje en el tejido de inters y despus se coloca bajo la cmara y mediante un detector trasmite la seal que recibe y la
transforma en imgenes.

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 El patrn de distribucin de la actividad en el rgano en estudio permite diagnosticar diversas
patologas

SPECT: Tomografa Computada de Fotn nico. Eso significa que la gran mayora de los estudios de
99m
medicina nuclear que se hacen corresponden a el uso de Tc, es el ms extendido y el ms fcilmente
99m
asequible por los diferentes pases para los estudios de medicina nuclear el Tc es emisor y emite
un fotn gamma de 140 KeV, por eso nos referimos a fotn nico.
Cuanto ms blanco o amarillo es el color de la tomografa es donde en general hay mayor captacin
de radiacin, lo que indica buena irrigacin sangunea que permite la llegada del radiofrmaco. Y si es
azul es la zona ms fra o de menor captacin de radiacin, lo que indica que no hay irrigacin, ese
tejido este muerto. El rojo es el punto intermedio

Estudios oncolgicos
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Se utiliza la F-desoxyglucosa, anlogo de glucosa que es introducido en la clula por transporte activo.
Se acumula en los sitios donde los requerimientos energticos son ms altos, ya que no puede ser degradado por las enzimas
que metabolizan la glucosa.

Lo que se utiliza ltimamente es la tecnologa PET: Tomografa de emisin de positrones. una vez que el positrn esta en un
medio determinado se encuentra con un electrn y se aniquila producindose dos rayos de igual sentido pero diferente
direccin de 511 KeV, esta tecnologa aprovecha esos dos fotones que se emiten y los detectas en cmaras especiales y
transforma esa diferencia de potencial en imgenes tomogrficas.
Para el PET se utiliza 18F-desoxyglucosa; se administra al paciente y por transporte activo entra a la clula (por similitud
estructural a la glucosa), pero no es degradado por las enzimas, entonces queda retenida y permite que se pueda detectar el
lugar en donde qued. Como las clulas oncolgicas con grandes consumidoras de energa y por lo tanto de glucosa, por lo que
por lo general se van a alojar en donde hay metstasis o tumores.
Este tipo de molculas no sirve para hacer anlisis cerebrales ya que el cerebro es el gran consumidor de energa del cuerpo, si
se utiliza otro tipo de molculas.

Estudios cardacos
99m
El radiofrmaco ms utilizado es el Tc-sestamibi, catin lipoflico que ingresa al corazn por difusin pasiva y permite
estudiar la perfusin miocrdica.
Comparando las imgenes en esfuerzo y en reposo es posible distinguir entre infarto e isquemia.

Radioterapia
La radioterapia convencional es externa y utiliza fuentes selladas de radiacin.
Consiste en irradiar al paciente con un haz de radiacin que incide en su cuerpo, liberando una parte de su energa en el sitio a
tratar.
Irradia tambin la piel y todos los rganos que encuentra en su trayectoria.

Se irradia al paciente exteriormente con algn tipo de radiacin que se aloja puntualmente en ese lugar donde deposita su
energa y daa las clulas patgenas. Esta radioterapia convencional es externa y utiliza fuentes selladas.

Terapia con radiofrmacos

Un radiofrmaco es administrado sistmicamente al paciente, se acumula selectivamente en el sitio a tratar y deposita la
mayor parte de su energa all.
La irradiacin de otros rganos depende de la selectividad de la captacin y de la energa de la emisin.

Utiliza fuentes abiertas y lo que se hace es administrar sistmicamente al paciente un radiofrmaco que se acumula
selectivamente en el tejido, y como es selectivo llega a ese lugar, se acumula y libera la energa, produciendo el dao.
131
Destruccin de tejido tiroideo con I
131
El Na I es administrado por va oral en pacientes con hipertiroidismo o cncer de tiroides.
Un alto porcentaje de la actividad administrada es captada por la tiroides.
131
Las partculas emitidas por el I destruyen las clulas tiroideas tanto normales como patolgicas.
El hipotiroidismo es el principal efecto secundario del tratamiento.

La Radiofarmacia, una Ciencia Farmacutica, se ocupa del diseo, preparacin, control y dispensacin de los radiofrmacos.
Por qu?

Esta terapia es til si el tejido tiene alta afinidad por captacin de iodo.
Cmo funciona? La tiroides tiene alta afinidad por el iodo para formar las hormonas tiroideas; entonces en un caso de cncer
de tiroides el paciente es sometido a una ciruga de extirpacin de la glndula tiroides, pero en general se dejan un resto de la

5
 131
glndula para no daar otros tejidos, que al administrar NaI con I producen la ablacin de ese tejido permanente, ya que por
131
afinidad del tejido, el ioduro es captado y el I libera sus partculas beta matando al resto de las clulas que estuvieron en
permanencia. De esta manera el paciente queda para toda su vida como hipotiroideo, entonces hay que administrarle de forma
externa hormonas tiroideas.

Son frmacos los radiofrmacos?

Los radiofrmacos no producen efectos farmacolgicos porque se administran en cantidades trazas.
An en el caso de los radiofrmacos teraputicos actan exclusivamente como transportadores del radionucleido hasta el sitio
blanco.
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Cuando administramos un RF estamos hablando en un orden de 10 molar, no tienen una accin farmacolgica propiamente
dicha, porque tan bajas concentraciones no pueden desencadenar una accin farmacolgica, la accin proviene en el caso de la
terapia de liberacin de energa o en el caso del diagnostico de la emisin de energa y su correspondiente llegada a los
detectores. entonces los RF se administran en cantidades traza pero sin embargo hay que hacerle controles y desarrollos.

Rol del Qumico Farmacutico en Radiofarmacia

A pesar de lo anterior, la OMS considera que los radiofrmacos son frmacos.
En consecuencia el Qumico Farmacutico debe ser responsable de su desarrollo, preparacin, control de calidad y
dispensacin.

Esto se debe a que hay un desarrollo, y tiene que haber un control. la mayora de estos son inyectables, por lo tanto no solo hay
que tratarlos como RF desde el punto de vista radiactivo y su estabilidad molecular, sino tambin como inyectables con todo lo
que eso implica (sus controles, esterilidad, etc.).

Subreas de especializacin en Radiofarmacia

DESARROLLO Laboratorio de Investigacin
Preparacin de precursores inactivos Radiofarmacia Industrial
Marcacin, control de calidad y dispensacin Radiofarmacia Hospitalaria
Radiofarmacia Centralizada

Implica primero que nada un desarrollo, donde identifica en su laboratorio de investigacin las necesidades de ese momento y
trata de desarrollar molculas que sean adecuadas para cubrir esa necesidad.
Despus se produce la preparacin de precursores inactivos, generalmente tenemos que obtener molculas que no sean
radiactivas para desarrollar un KIT o un juego de reactivos que pueda llegar a distintos hospitales donde se mezcle con el
material radiactivo y pueda ser administrado al paciente. Eso sucede en una Radiofarmacia industrial, que es la que produce esa
forma de reactivos no radiactivos para llegar al hospital.
En una Radiofarmacia hospitalaria (que es la que hay en nuestro pas) o en una Radiofarmacia centralizada es donde se
produce la marcacin, se hace el control qumico, se acepta o se rechaza el producto; si se acepta se dispensa en las distintas
dosis para los pacientes y se les administra.

Desarrollo en Radiofarmacia
El avance de la Medicina Nuclear requiere de nuevos Radiofrmacos que nos permitan introducirnos en la bioqumica
celular.

Algunas reas de inters

Nuevos RN - Emisores o de electrones*
Auger para terapia
Nuevas molculas - Pptidos bioactivos, ligandos para receptores, etc.
Nuevos mtodos de marcacin- Avances en la Qumica organometlica aplicadas a la marcacin de biomolculas

*Los emisores estn muy extinguidos porque son peligrosos de usar porque depositan mucha energa y no hay una qumica tan
verstil.

El siguiente paso es estudiar el riesgo que pueda estar asociado, porque si bien nosotros vamos a estar administrando en un
-9
orden de 10 molar puede haber algn riesgo implcito por lo que se debe hacer un estudio biomdico.

Diseo y Dosimetra
La administracin en humanos de sustancias radiactivas conlleva un riesgo.
Slo se justifica si el procedimiento significa tambin un beneficio para el paciente.
Para minimizar el riesgo, la dosis de radiacin absorbida por el paciente debe mantenerse tan baja como sea posible.
Esto se logra seleccionando un radionucleido y un radiofrmaco de propiedades ptimas.

6
 Tambin hay un riesgo asociado a la dosimetra porque sobre todo en el caso de RF de terapia queremos tener un RF que se
aloje en la zona de inters pero quiero que se quede mucho tiempo ah de forma que no irradie demasiado otra parte del cuerpo,
o que est dando vueltas en el cuerpo entonces pueda tener contacto con otros rganos. Entonces se hace un estudio dosimtrico
para completar el conocimiento y decir si se lo podemos administrar o no al paciente.
Una vez que lleguemos a la situacin ptima podemos administrarlo al paciente.

RADIOFARMACIA INDUSTRIAL
La preparacin de radiofrmacos para su uso clnico suele realizarse a partir de kits fros
Un kit es juego de reactivos constituido por 1 o ms viales que contiene todos los reactivos liofilizados necesarios para realizar
una marcacin.
La preparacin debe llevarse a cabo siguiendo todas las normas para frmacos de administracin intravenosa.

RADIOFARMACIA HOSPITALARIA
Dentro de cada Servicio de Medicina Nuclear se realiza:
la marcacin
el control de calidad de los radiofrmacos
la dispensacin de las dosis para los pacientes.
La preparacin de un radiofrmaco no implica e nicamente la reconstitucin de un kit fro utilizando una solucin del
radionucleido.
Se trata de un proceso qumico generalmente complejo que requieren de un estricto control de calidad.
La dispensacin al paciente requiere de registros, sujetos a las Buenas Prcticas en Farmacia Hospitalaria.
Al especialista en Radiofarmacia Hospitalaria le compete tambin la responsabilidad de la radioproteccin del paciente,
familiares y personal de salud.

La reaccin qumica que se produce en la reconstitucin del kit se deben controlar para que lo que la administremos al paciente
sea efectivamente lo que le queremos administrar, porque en la prctica si no est controlada puede que la reaccin no se
produzca en la extensin que yo quiero y que estn registrando ms 99mTc libre que lo que realmente quiero, entonces la
imagen no va a ser adecuada para el diagnstico.

RADIOFARMACIA CENTRALIZADA
A medida que los radiofrmacos y los mtodos de marcacin y control se vuelven ms complejos y la normativa sanitaria ms
estricta, resulta difcil poder preparar los radiofrmacos a nivel hospitalario debido a problemas de infraestructura.
Una alternativa se encuentra en la Radiofarmacia Centralizada.
Se trata de empresas dedicadas a la preparacin de dosis de radiofrmacos a pedido para varios clientes.
Cuentan con la infraestructura y el personal para cumplir estrictamente con las GMP.

Ventajas
Permite la optimizacin de los recursos econmicos.
Minimiza la exposicin del personal a radiacin. Una sola persona dispensa con mejores condiciones de administracin.
Mejora la calidad de los productos dispensados al paciente por los grandes controles GMP.
Facilita el registro; porque est industrializado.
Mejora la gestin de los desechos.
El uso de los servicios de una Radiofarmacia Centralizada no elimina la necesidad de la presencia de un Radiofarmacutico
a nivel hospitalario.
El Radiofarmacutico Hospitalario te tiene la responsabilidad de cooperar con el mdico para que el procedimiento sea
realizado con las mximas garantas para el paciente.

Formacin del Qumico Farmacutico en Radiofarmacia

El Ejercicio profesional en Radiofarmacia requiere conocimientos de fsica y biologa de las radiaciones, farmacologa y
farmacotecnia.

EL CURSO DE RADIOFARMACIA
TEMARIO BSICO
Molculas Marcadas
Radiobiologa
Marcacin con Tc, Re, Ga y otros
Marcacin C, F
Radiofrmacos de diagnstico
Radiofrmacos de terapia
Radiofarmacia Hospitalaria
Produccin de radionucleidos

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TEMARIO APLICADO
Molculas marcadas con 131I
99m
Molculas marcadas con Tc
68
Marcacin con Ga
18
Marcacin con F
Radiofarmacia hospitalaria

Estructura del Curso

12 clases tericas de 1.5 horas de duracin.
6 clases prcticas de 4 horas de duracin.
Cantidad de crditos totales: 5

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CLASE 2: MOLCULAS MARCADAS Y MARCACIN CON IODO
JUEVES - 19/05/2016

MOLCULAS MARCADAS TRAZADORES

Son aquellas que contienen uno o ms tomos que la diferencian de la original, los cuales se pueden usar para detectarla por
algn mtodo apropiado.
Un trazador es un indicador de la evolucin de una sustancia o un material dado en un determinado proceso fsico, qumico o
biolgico.
Para nosotros una molcula marcada es aquella que tiene un radioistopo radioactivo unido.
Las marcas pueden ser de distinta naturaleza:
Radiactiva
Fluorescente
Luminiscente
Enzimtica
tomos estables

Para qu se quiere marcar?

Es importante saber para qu queremos marcar una molcula ya que el uso (si la voy a usar in vitro, in vivo, si quiero marcar una
protena, una clula si es para estudios cinticos o si quiero hacer estudios medioambientales) me va a condicionar con que
radioistopo puedo marcar a la molcula

Qu se quiere marcar?
Las marcaciones no solo se hacen con radioistopos inestables en algunos casos se usan isotopos estables como es el caso del
13C pero nosotros en el curso cuando nos referimos a molculas marcadas siempre es con radioistopos radioactivos

MOLCULAS MARCADAS ISOTOPOS ESTABLES

MOLCULAS MARCADAS CON TRAZADORES RADIACTIVOS

99m 18
Tc-MIBI + 2- FDG: (2-fluordesoxy-D-glucosa)
99m
Tc-MIBI: The drug is a coordination complex consisting of the radioisotope technetium-99m bound to six (sesta=6)
methoxyisobutylisonitrile (MIBI) ligands.

MOLCULAS MARCADAS EN RADIOQUMICA = MOLCULA CONTENIENDO UN RADIONUCLEIDO (RN)

Lo primero que necesito para realizar la marcacin es tener a la molcula a marcar previamente aislada y purificada con el fin de
obtener una nica molcula radiactiva. No quiero tener una mezcla de cosas macadas para hacer el estudio de manera de tener
una alta pureza radioqumica de manera de tener una nica molcula radiactiva.

El introducir tomos radiactivos permite utilizar las emisiones del RN involucrado para establecer, entre otros:
Localizacin
Concentracin
Productos metablicos

9
 De la biomolcula o del sistema que se est analizando y dependiendo del uso que le quiera dar a la marcacin determina en
qu lugar de la molcula voy a unir al radioistopo

El proceso qumico que involucra la transferencia del RN desde un precursor a la molcula final se denomina marcacin.
La unin a la molcula final puede ser mediante formacin de complejos, enlaces covalentes, etc.

En el estudio de la sntesis de una molcula marcada con un RN se deben tener en cuenta primeramente las propiedades
fsicas del RN a usar, de los cuales las ms importantes son:

1) el t. Debe ser acorde con la experiencia. Esto significa que debe ser suficientemente largo como para permitir la
adecuada marcacin de la molcula y la medida de actividad posteriormente en la experiencia planificada LO principal es que
me de para la experiencia, tambin depende de donde lo voy a usar (si lo voy a usar in vivo, in vitre) Si lo voy a usar in vivo
tambin depende de uso si lo quiero con fines diagnsticos es bueno que luego del estudio el paciente no siga con el
radionucledo radioactivos en cambio s lo uso con fines teraputicos es conveniente que su t1/2 sea un poco ms largo de
manera que siga emitiendo para que llegue a todas las clulas tumorales como por ejemplo. SI lo quiero usar in vitro puede
ser til que tenga un t1/2 bastante largo para que pueda sacarle ms provecho a esa molcula marcada. Por lo tanto el t1/2
del radionucledo depende de para que lo vaya a usar.

2) el o los modos de desintegracin. alfa, beta- , beta +, CE, gamma (CI). Voy a elegir un modo de decaimiento que sea fcil
de detectar lo que se usa comnmente es radiacin gamma ya que sin fciles de medir o beta+ ya que al final me da
radiacin gamma. En el caso de la radiacin beta - ya son ms difciles de mediar porque es recomendable un detector de
centelleo liquido lo que complica la preparacin de la muestra. Los emisores alfa en general poseen un nmero msico
mayor a 140, por lo que difcilmente pueden ser introducidos en las molculas de inters biolgico. Aparte de este factor,
habra que considerar que la introduccin de este tipo de tomos alterara significativamente la estructura y peso de la
molcula, sin mencionar la alta probabilidad de dao radioltico de las emisiones alfa

3) la o las energas de las partculas y/o radiaciones emitidas. Ya que determina el tipo de detector a usar Los emisores -
de alta o media energa podrn ser detectados mediante Geiger, mientras que los de baja energa requerirn el uso de un
contador de centelleo lquido. Los emisores + as como los emisores gamma y los de captura electrnica, podrn ser
detectados y medidos mediante un contador de centelleo slido.

Sin olvidar que las propiedades qumicas del RN y la molcula deben permitir la sntesis. Ya que de nada sirve tener un
excelente radionucledo si no lo voy a poder unir a mi molcula de inters.

Para que los resultados obtenidos en el empleo de una molcula marcada sean extrapolables al comportamiento de la molcula
normal aquella debe cumplir una serie de caractersticas:
3
el trazador debe ser lo ms parecido posible a la molcula original ( H, I)
la unin del radionucledo a la molcula debe ser estable.
la posicin del marcado debe ser conocida para que los resultados puedan interpretarse adecuadamente.

ELECCIN DEL RADIONUCLEIDO

Muchos son los factores a considerar, la decisin final es la resultante de una serie de condicionantes
Es deseable un emisor gamma, pero... a veces no tengo emisores gamma
32 3
Cuando se necesita alta sensibilidad: Qu elijo P de alta energa o H de baja energa?
35 14 125 3
Cuando se necesita buena resolucin: S, C; I, H
Analizar si se usar in vivo o in vitro?
Analizar costo
32 33 35
Comparacin del uso de P, P y S para el marcado de productos de la reaccin de secuenciado de DNA.
En cada lnea se cargaron cantidades equivalentes de productos radiomarcados (misma
actividad) y luego de la electroforesis, el gel seco, se expuso toda la noche al film.

Por qu los tres dieron resultados distintos si se sembr la misma actividad y los tres son
beta menos?
Es por la diferencia en la energa. Ya que cuando se tiene un beta menos se libera
electrones los cuales van chocando con la materia y frenndose. Cuando sale el electrn del
ncleo este recorre una determinada trayectoria dejando energa en la placa y la trayectoria
depende de la energa de la partcula, Si tengo poca energa la partcula va a tener una corta
trayectoria sin embargo si tengo alta energa la misma va a recorrer una mayor trayectoria
dejando su energa en su camino. Por lo tanto es por esto que las machas la placa del 32P
se ven mucho ms grandes que las del 35S, el 35P al tener mayor energa sus partculas
recorren un mayor radio y dejan su energa en esa trayectoria.

10
 Esto no es trivial, en la terapia es importante ya que el radionucledo que voy a elegir va a depositar su energa en una distancia
mxima y dependiendo del tamao del tumor se elige el radionucledo que es mejor.
32 33 35
E (KeV): P = 1710 P = 248 S = 167

En Uruguay dos radionucleidos que se utilizan para la terapia son el 188Re el cual se utiliza para tumores de mayor tamao y el
177Dutesio se reserva para tumores de menor tamao ya que el primero es de mayor energa que el segundo.

Principales caractersticas fsicas de los radionucledo ms utilizados en la marcacin de molculas (Libertun, pg 26)
Estos son utilizados in-vitro, generalmente se utilizan radionucledo beta menos en estudios in vitro. Para a la terapia que son
emisores beta menos que se utilizan en imgenes se busca t cortos de horas o minutos como el Tc, los de PET minutos o horas,
y los de terapias horas o das de mayor T para tener efecto ms prolongado

En resumen para marcados

in vivo
Emisores de E intermedia (detectables pero seguros desde el punto de vista de la radioproteccin)
T corto.
in vitro
t largo (horas o das), ( o segn el objetivo del marcado)

TIPOS DE MARCADO
Marcado isotpico (Reaccin de intercambio de un tomo por otro, normal o inducido)
Marcado no isotpico:
- Simple
- Mltiple (uniforme, general)
- Mixto
Especfico (T, nominal)

De acuerdo con la definicin, la marcacin es un proceso qumico que implica la transferencia del radionucledo desde un
precursor a la molcula final. Dependiendo cmo ocurra este proceso, es que se pueden clasificar los distintos tipos de
marcados de molculas y, de hecho, existen distintos criterios para esto.
La mnima alteracin que puede producirse en la estructura, implica sustituir uno de sus tomos originales por un istopo del
mismo, pero radiactivo. A este tipo de marcado se le conoce como marcacin isotpica o intercambio isotpico. En este caso, la
diferencia de masas existente entre ambos istopos puede modificar en mayor o menor medida el comportamiento final de la
molcula, hecho denominado como efecto isotpico.
A su vez, se dice que el marcado es normal o inducido, siendo ste ltimo caso cuando se emplea una fuente gamma o una
descarga elctrica para labilizar los enlaces y facilitar el intercambio. Sin embargo, no siempre es posible realizar marcaciones
isotpicas por diferentes razones, entre ellas, por no disponer de los radionucleidos adecuados, o por no ser adecuado el tipo de
desintegracin o su energa para el uso final que se le dar a la molcula en cuestin. Por ello, tambin existe la marcacin no
isotpica, en la que el proceso implica el intercambio de un tomo de la molcula original por un radionucleido que no es
istopo de ste. En este caso, se debern maximizar los cuidados para que el mtodo produzca la mnima alteracin posible al
sistema
Dentro del marcado no Isotpico puede sub clasificarse en Simple / Mltiple / Mixta Este criterio de clasificacin tiene en
cuenta el nmero, tipo y distribucin de las marcas radiactivas dentro de la molcula. De esta manera, una marcacin simple se
da cuando la molcula contiene un nico radionucleido, mientras que una marcacin mltiple implica la presencia de dos o ms

11
radionucleidos en la estructura. A su vez, este marcado mltiple puede sub-clasificarse. Se dice que es uniforme cuando las
distintas marcas se encuentran estadsticamente distribuidas en forma homognea en todos los sitios posibles para ese
radionucleido en la molcula. En cambio, el marcado mltiple es general cuando la marca no se distribuye en todos los sitios
posibles, o cuando est presente en todos ellos, pero no con la misma actividad/tomo. Por ltimo, cuando la molcula posee
mltiples marcas, pero stas son de distintos radionucleidos, se dice que la marcacin es mixta.
Una marcacin es especfica cuando el/los radionucleido/s se encuentra/n en las posiciones declaradas. Esto sucede en la
mayora de los casos, pero es importante destacar el caso particular del marcado nominal, frecuente en las reacciones con tritio,
en el que existe cierta incertidumbre en cuanto a las posiciones que contienen la marca, debido a la frecuencia con la que
ocurren los intercambios de hidrgenos, principalmente si la marcacin se efecta en solventes protonados. Cuando esto
ocurre, las posiciones marcadas esperadas son sealadas con N.

NOMENCLATURA
No existe un criterio unificado:
En cuanto al radionucleido:
14
- se le puede nombrar como un sustituyente ms: L-valina-1- C, cido
3
actico-2- H
14
- o como parte del grupo en que se encuentra: L-valina (carboxil- C),
3
cido actico (metil- H)

Respecto al orden al nombrarlos:

- se le puede nombrar al final: Selenometionina-75Se
- o al principio entre parntesis: (2-14C) cido actico

IUPAC http://www.iupac.org/searchSubmit/

El marcado uniforme se indica con (U), y el general con (G): L-leucina 14C (U) o L-(U-14C)-Leucina.
Para los istopos del hidrgeno se usan sus nombres y smbolos particulares:
D para deuterio
T para tritio

MTODO IDEAL DE MARCADO

Actualmente se dispone de numerosos mtodos de marcacin, cada uno con sus ventajas y desventajas. Lamentablemente, no
existe un mtodo que resulte ideal, pero a la hora de seleccionar una ruta o desarrollar una nueva tcnica, se deber tener en
cuenta las caractersticas ideales que debera poseer
1) Conduce al ms alto estado de pureza de la molcula marcada o a una forma fcilmente purificable
2) Tiene alto rendimiento
3) Requiere un nmero mnimo de etapas
4) Modifica mnimamente la molcula
5) Econmico

12
Antes de realizar una marcacin:
- Planificar cuidadosamente la manipulacin considerando las precauciones necesarias para evitar irradiacin y contaminacin;
- Calcular tericamente la actividad a usar, considerando un rendimiento lgico y usando la mnima cantidad posible del
radionucleido que permita una deteccin adecuada;
- Durante el desarrollo de una nueva tcnica de marcacin, siempre es recomendable ensayar en fro el procedimiento de modo
de evitar imprevistos cuando se est trabajando con radiactividad y poder de esta manera, optimizar el procedimiento de
manera segura para el operador

MTODOS DE MARCACIN
Existen cuatro mtodos generales de marcacin: Intercambio, Sntesis qumica, Biosntesis o mediante Reacciones nucleares. A
continuacin, se comentan cada uno de ellos.
1) Intercambio:
- Isotpico
* Inducido
* Normal
- No isotpico
2) Biosntesis
3) Sntesis Qumica
4) Reacciones nucleares

1) MTODO DE INTERCAMBIO
Son reacciones en las que uno de los reactivos intercambia algn tomo con otro: AX* + BX BX* + AX

Este mtodo es muy utilizado y se trata de reacciones en las que uno de los reactivos (precursor) intercambia algn
radionucleido con la molcula que se desea marcar. Como ya se mencion anteriormente, este intercambio puede ser isotpico
o no isotpico. Consiste, en general, en mtodos sencillos y de bajo costo. Sin embargo, su principal desventaja es que en la
mayora de los casos se trata de reacciones reversibles, por lo que el radionucleido incorporado a la molcula podra perderse en
cualquier condicin que simule las condiciones empleadas para la marcacin.

Ejemplos: Tritiacin por el mtodo de Parker

125
Marcacin con I de triyodotironina

3) SNTESIS QUMICA
Se parte de un precursor marcado y se termina la sntesis para tener el producto
final marcado.
La sntesis qumica empleada en la marcacin de molculas abarca procesos muy
diversos y especficos en los que la marca radiactiva es introducida mediante una
reaccin qumica, o una serie de reacciones. Requiere personal altamente
entrenado en sntesis qumica y qumica orgnica, sin embargo, ofrece como
principal ventaja, la posibilidad de obtener un gran abanico de productos
marcados, dependiendo la estrategia utilizada en casa caso.
Un ejemplo que ilustra muy bien la versatilidad de este mtodo es la marcacin
14
del cido pirvico con C por diferentes vas obteniendo de esta manera,
productos diferentes.
Mezclando cantidades que contengan igual actividad de los tres productos de la imagen, la mezcla podra rotularse como:
14C(U)-cido pirvico.
18
Otro ejemplo muy conocido es la sntesis de la F-
fluorodeoxiglucosa (FDG), un derivado de glucosa utilizado a nivel
mundial en Medicina Nuclear para el diagnstico tumoral por
imgenes.
18
En este caso, se realiza un ataque nucleoflico del [ F]-fluoruro
sobre el carbono 2 del azcar, que contiene un grupo saliente que
favorece dicha reaccin. A continuacin, el resto de los grupos
hidroxilos presentes en la molcula son hidrolizados.
Sin embargo, este tipo de marcado tambin posee dificultades.
Entre ellas, se destaca las numerosas etapas que suele requerir el
proceso. Como consecuencia, el tiempo que involucra puede ser
extenso y, de hecho, numerosas estrategias sintticas son
inadecuadas para su aplicacin en marcaciones debido a la gran
cantidad de pasos de sntesis que involucra. Adems, una
impureza generada durante una de estas etapas podra disminuir

13
significativamente el rendimiento global del proceso y extendera el tiempo destinado a la purificacin del producto final. Por
ltimo, en muchas ocasiones se producen mezclas racmicas o de epmeros, cuya separacin puede ser muy compleja.

11 11 18
C-Metionina C-Colina F-FDG

2) BIOSNTESIS
Son mtodos que emplean seres vivos para efectuar la sntesis de la molcula marcada. Pueden emplearse microorganismos o
plantas intactas, homogenatos celulares, organelos enteros o enzimas puras.
Las principales ventajas de este mtodo son la posibilidad de obtencin de ismeros o epmeros naturales, evitando mezclas
complejas, y la obtencin de molculas uniformemente marcadas con elevada actividad especfica. No obstante, el
procedimiento conlleva tambin numerosas dificultades ya que requiere una estricta optimizacin de parmetros tales como
condiciones de crecimiento (si se trabaja con clulas, por ejemplo), tiempos, temperaturas, etc. Resultan ser mtodos costosos,
complejos, de bajo rendimiento y que requieren procesos de purificacin final de la molcula marcada. Una prctica muy comn
es la combinacin de los mtodos biosintticos con los de sntesis qumica.

4) REACCIONES NUCLEARES
Se utiliza la energa de la reaccin nuclear para realizar la marcacin, sera como irradiar un blanco para que se d la reaccin
nuclear y ah mismo se da la marcacin.
Este mtodo consiste en la produccin de ncleos de retroceso a partir de una reaccin nuclear, los cuales reaccionan
posteriormente con un compuesto orgnico o inorgnico blanco. Este tipo de mtodo no suelen emplearse en la rutina.

RADILISIS
Obviamente que en una molcula marcada tengo los mismos problemas de descomposicin que en el caso de la molcula no
marcada, los que son de la molcula intrnseca los tengo como por ejemplo si es estable, si se descompone con la luz, oxigeno del
aire, etc. A parte de eso tenemos los problemas de trabajar con elementos radiactivos, el problema ms importante de
descomposicin de las molculas por radiacin se denominan radilisis.
La radilisis es el proceso de destruccin de la molcula marcada por accin de las propias radiaciones, se trata de un
fenmeno no deseado que ocurre siempre en mayor o menor medida.
El fenmeno se puede dividir en tres eventos:
a) descomposicin primaria interna
b) descomposicin primaria externa
c) descomposicin secundaria, la ms importante

a) Descomposicin primaria interna:

El decaimiento genera un elemento nuevo con distintas propiedades qumicas por lo que su enlace con la molcula marcada
puede romperse. Como depende del decaimiento natural del RN no puede hacerse nada con respecto a este tipo de radiolisis
b) Descomposicin primaria externa:
La energa emitida por el RN de una molcula provoca ruptura de enlaces en otra molcula
Es ms importante para emisores beta dbiles, ya que la interaccin de la radiacin ocurre a cortas distancias, pudiendo
afectar a las molculas cercanas
Aumenta con la actividad especfica y la temperatura de almacenamiento, por lo que la dilucin es una posible solucin que
disminuye el fenmeno.
c) Descomposicin secundaria (es la ms importante de todas):
La radiacin incide sobre el solvente generando radicales libres
oxidantes (H, OH) o electrones solvatados, los cuales atacan a la
molcula marcada.
Como las molculas de solvente son mucho ms abundantes que
las de la molcula marcada, ste es el efecto ms frecuente y, por lo
tanto, importante seguido luego por la descomposicin primaria
externa y, finalmente, la descomposicin primaria interna.
Nuevamente se trata de un fenmeno ms importante cuando la marcacin se realiza con emisores de bajo poder de
penetracin y las molculas poseen marcas mltiples, ya que la destruccin de las mismas origina impurezas radioqumicas. La
dilucin es una herramienta para disminuir este proceso, ya que los radicales libres y los electrones solvatados tendrn menores

14
posibilidades de interaccionar con otras molculas marcadas y daarlas. Adems, existe la posibilidad del uso de scavengers o
agentes secuestrantes de radicales libres.

COMO REDUCIR LA RADILISIS:

a) Uso de solventes adecuados
b) Almacenamiento a baja temperatura
c) Dilucin de la muestra
d) Empleo de carriers.
e) Fraccionamiento
f) Liofilizacin (disminucin de la temperatura y eliminacin del solvente)

CONTROLES
Toda reaccin de marcacin implica necesariamente un mtodo de control y la determinacin de parmetros relevantes tales
como:
1) Rendimiento de marcado
2) Pureza (Qumica y Radioqumica)
3) Determinacin de la actividad especfica
4) Determinacin de la concentracin de actividad
5) Control de esterilidad, toxicidad y pirgenos si corresponde

1) Rendimiento de marcado (R)

2) Pureza
a) Qumica: ausencia de compuestos qumicos no radiactivos que puedan contaminar la reaccin. (TLC, HPLC, GC dependiendo
de las impurezas qumicas)
35 35
b) Radionucledica: la radiactividad en el trazador solo debe ser imputable al radionucledo empleado en el marcado. ( S, Cl).
(Se realiza por espectrometra gamma o beta dependiendo del caso)
125 126
c) Radioisotpica: cualquier actividad imputable a un istopo del trazador. ( I, I). (Est incluida en la radionucledica)
51 +3 51 -4
d) Radioqumica: la impureza es una especie qumica distinta de la especie del trazador ( Cr , CrO ). (TLC, HPLC, GC usando
detectores de radioactividad)

QUMICA DEL I
Z = 53
Grupo: VIIA
Familia: Halgenos
10 2 5
Configuracin [Kr] 4d 5s 5p
Estados de oxidacin -1, +1, +3, +5, +7
Electronegatividad dbil, puede ser desplazado por Cl o Br para dar compuestos interhalognicos (I+)
Los Radionucledo ms usados del iodo son:
123 125 131
I I I
t fsico 13 horas 60 das 8 das
modo de decaimiento CE CE /
Energa (KeV) 159 () 35 () 27 (X) 364/637, 608
t efectico (d) 41 7,6
Actividad especfica (carrier
17,4 120
free) mCi/g
Eficiencia de conteo NaI(Tl)
70% 30%
2''2''
Abundancia isotpica en
95% 30%
preparaciones comerciales

125
PRODUCCIN DEL IODO (EL RN MS UTILIZADO EN ESTUDIOS IN VITRO)
125
El I se puede producir en:
124 125 125
a) reactor, a travs de la reaccin: Xe (n,) Xe I
126
Con alta seccin eficaz para neutrones ( = 1180 barn) por lo que se genera I principal contaminante radionucledico.
125 125 125 125
b) aceleradores de partculas mediante alguna de las reacciones siguientes: Te (n, p) I; Te (d, n) I

15
 123
I
Alta pureza, sin portador
127 123 123
Va indirecta por medio de la reaccin I (p, 5n) Xe I
127 123 123
I (d, 6n) Xe I
131
PRODUCCIN DEL IODO (UTILIZADO EN LA MEDICIAN NUCLAR PARA TRATAMIENO DE TIROIDES)
131
El I es obtenido como subproducto de la fisin del uranio:

El material nuclear es procesado y se obtiene el ioduro de sodio con una elevada pureza.
125
CARACTERSTICAS DEL Na I COMERCIAL
Actividad especfica 14.4 mCi/mg
Concentracin de actividad 100 mCi/mL
-5
Pureza Qumica Reductores < 2x10 M
Pureza Radioqumica 99.8 % I-
126
Pureza Radionucledica I <0 .05 %
pH 7 - 11

Radioproteccin y Iodo
Recordar que el 131I es beta menos y gamma por lo tanto voy a blindar con acrlico (Z bajo) y plomo
a) Emplear doble guante de ltex para evitar la absorcin a travs de la piel
b) Utilizar sistemas de extraccin de aire adecuados para minimizar la inhalacin del I2
c) Evitar formacin de aerosoles
d) Utilizar blindaje adecuado (Acrlico y plomo)
e) En caso de ingesta, bloqueo de tiroides con lugol
f) Monitoreo semanal de la captacin tiroidea para los trabajadores ocupacionalmente expuestos
g) En caso de contaminacin de superficies descontaminar por ejemplo con la siguiente mezcla estabilizante de Iodo:
Na2S2O3 25 g (reductor)
Na I 2 g (diluyente o carrier)
NaOH 1 N (medio alcalino)

Acumulacin de I en la tiroides
a) El Iodo se acumula en tiroides, siendo en el interior del tirocito a 30 veces ms que en el plasma (pudiendo llegar a 400).
b) El mecanismo de captacin es a travs de un cotransporte con Na.
c) Luego hay una enzima, la peroxidasa tiroidea que oxida al iodo para poder incorporarse.

OXIDACIN DEL IODO A HIPOIODITO:

El iodo antes de ser incorporado a los grupos de tirosilo de

la tiroglobulina debe ser oxidado.

MARCACIN DE PROTENAS CON I

MTODOS DIRECTOS
La reaccin principal consiste en la oxidacin del ioduro a iodonio, el cual es atacado por el sistema aromtico de electrones de
la tirosina, produciendo la sustitucin de uno o los dos hidrgenos en posicin orto al grupo hidroxilo (Tambin se pueden
marcar los histidilos y triptofanilos pero menos eficientemente).
La reaccin tiene muy buen rendimiento (75 100 %) a pH neutro o ligeramente alcalino (7,5 - 8,0). Fuera de dicho rango de
pH, la incorporacin a tirosina disminuye notablemente. Dentro de ese rango de pH, el rendimiento depender bsicamente de
la concentracin de la protena. A pH superiores (8.0-8.5), se incrementa la incorporacin
Cualquier protena va a poder ser marcada ya que siempre algn grupo tirosilo va a haber y adems no modifica mucho a una
gran molcula como puede ser una protena o un anticuerpo cambiarle un hidrogeno por un iodo. La idea es formar el iodonio de

16
alguna manera con un oxidante y producir esa especie inestable que solo se forma en solucin y luego al ponerlo frente a un
compuesto ms electronegativo el, la nube pi de electrones me ataque al iodo y se produzca la sustitucin.
El rendimiento del marcado depende de la cantidad de protena que se incorpore, a mayor concentracin de protena mayor
rendimiento porque tengo mayor nmero de molculas que reaccionen con el iodonio.
Hay varios mtodos de marcacin directa pero todos se basan en lo mismo: De alguna manera obtener el i+ cambiando el
oxidante pero luego la reaccin es la misma el i+ se cambiar por uno de los H en posicin orto al grupo OH del tirosilo.

Mecanismo de reaccin:

Histricamente, se han ido modificando los agentes oxidantes para producir la yodacin. A continuacin, se har referencia a
algunos ejemplos de ellos.

Mecanismo de reaccin del mtodo de ClI MacFarlane (1958)

Rendimiento de marcado segn el contenido de protena:

Protena (mg/mL) Rendimiento (%)
1 100
0,3 80-90
0,05 60-70

Mtodos directos
Reactivo Autor (fecha)
ClI MacFarlane (1958)
I2 Yallow y Berson (1960)
Cloramina T (ClT) Huner y Greenwood (1962)
Electroltico Rosa (1964)
Peroxidasa: Nunez (1965)
Enzimtico
Lactoperoxidasa: Marchalonis (1969)
Cl2 Butt (1972)
CaClO Redishaw y Lynch (1974)
Iodogen Salarinski (1979)

ClI .

En el mtodo de Mac Farlane el Cl*I, se genera "in situ" por reaccin del KIO3 sobre el K*I en HCl.
Esencialmente la reaccin alcanza el equilibrio por lo que tambin se incorpora I fro y la actividad especfica lograda no es alta.

17
 Cloramina T (ClT) .

En realidad la cloramina T no es el verdadero oxidante sino que es la sal sdica de

la N-monocloro ptoluensulfonamida que en presencia de agua genera ClO-
(hipoclorito) que es el verdadero oxidante. Es una forma de generar el hipoclorito
"in situ" en condiciones controladas lo que asegura su estabilidad hasta el
momento de la incorporacin.

Factores a considerar:
1. La concentracin de protena debe ser alta, de modo que la marcacin se efecte en un volumen mnimo (<100mL). Cuanto
menor volumen mayor es el rendimiento.
2. El pH debe mantenerse entre 6.5 -8.5, por lo que el buffer a usar debe ser concentrado (0.1 - 0.5 M)
3. En el mtodo tradicional la reaccin se detiene por el agregado de un exceso de un reductor, como el metabisulfito de sodio.
Si la protena no soporta las grandes cantidad de hipoclorito producto por alto concentracin de ClT o por la reduccin de los
puentes disulfuro por el reductor, una alternativa esa trabajar con cantidades estequiomtricas de ClT y protena ("ClT
limitante"), si bien puede disminuir los rendimientos evita la descomposicin de la protena que quiero marcar
4. Purificacin por gel filtracin (Sephadex G-25, basta para separar el *I libre). Ya que la gel filtracin separa por peso molecular,
cuando hago una gel filtracin de una protena marcada con iodo lo que espero obtener es la protena marcada en los primeros
eluidos y luego eluye el iodo libre como ioduro de sodio.

Rendimiento de Marcado en funcin de la concentracin de ClT

Rendimiento de marcado en funcin del pH

Rendimiento de marcado en funcin de la concentracin de ClT y del tiempo de agitacin

IODOGEN .

Nombre comercial del 1,3,4-6tetracloro-3a-6a-difenilglicouril. Siendo insoluble en medio acuoso,

para efectuar la marcacin se le disuelve en un solvente orgnico (cloroformo o diclorometano), el
cual se evapora luego en corriente de nitrgeno, de manera que el Iodogen queda depositado como

18
un film sobre las paredes del tubo que lo contiene. La marcacin de la protena se consigue simplemente por el agregado de sta
y el ioduro de sodio al tubo que contiene el agente oxidante.
El mecanismo por el cual funciona como oxidante no est claro.

ENZIMAS: LACTOPEROXIDASA (LPO) .

Junto con el Iodogen y la ClT limitante son las mejores alternativas cuando el mtodo de ClT clsico provoca demasiado dao
a la molcula marcada.
- +
La LPO cataliza la transformacin del H2O2 en O2 mientras que el I se convierte en I y as se introduce en los restos tirosilo,
por el tamao de la enzima solo resultan accesibles a la marcacin las tirosina que de acuerdo a la conformacin tridimensional
estn expuestas.

Si las molculas no aguantan los mtodos directos esta la posibilidad de usar los mtodos indirectos

MTODOS INDIRECTOS
Se trata de reactivos con una estructura determinada que les permite ser yodados en una primera etapa y luego estos se
acoplan a la protena en una reaccin independiente posterior.
Reactivo de Bolton y Hunter (1972)
Metil-p-OH benzimidato (Wood, 1975)
Anilina diazotada (Hayes, 1975)
El reactivo de Bolton y Hunter (el ms usado del grupo), tiene en su estructura un anillo p-hidroxifenil que es donde se efecta
la yodacin en la primera etapa y un anillo succinimida que es por donde se acopla a la protena en un segundo paso.

El mtodo indirecto ms utilizado para la yodacin de protenas es el

que utiliza el reactivo de Bolton y Hunter.
En su estructura se distingue un anillo p-hidroxifenilo, sitio donde
ocurre la yodacin, y un grupo cido carboxlico activado mediante
una unidad de N-hidroxisuccinimida, que formar en la segunda etapa
de la reaccin un enlace amida con un grupo amino de la protena.
Este grupo amino de la protena podr pertenecer a un residuo de
lisina o un grupo N-terminal.
La incorporacin del iodo al reactivo se realiza en general mediante el
mtodo directo de Cloramina T y la conjugacin con la protena
ocurre bajo condiciones alcalinas suaves (pH = 8.0-8.5) de manera de
tener los grupos amino no ionizados disponibles para el ataque
nucleoflico.

Desventajas
1. El reactivo luego de yodado, se debe evaporar en corriente de nitrgeno (antes de acoplarse a la protena), lo cual aun en
campana presenta riesgos de contaminacin interna por inhalacin
2. El rendimiento global del proceso por ser en dos etapas es bastante menor que en los mtodos directos.

La eleccin del mtodo de yodacin depende de varios

factores. Los mtodos directos son generalmente rpidos
y convenientes, obtenindose altos rendimientos y
actividades especficas. Sin embargo, uno de los
problemas ms asociados a estos procedimientos es la
oxidacin no deseada de otros grupos susceptibles
presentes en la protena, tales como residuos de
metionina, cistena y triptfano. En el caso de los dos
primeros, la oxidacin del azufre puede originar sulfxidos
y sulfonas que conllevan un cambio estructural
importante con la correspondiente prdida de la actividad
biolgica o inmunolgica de la protena. Por ello, aquellos
procedimientos que utilicen fuertes agentes oxidantes
tienen como principal desventaja la formacin de especies
oxidadas cuya estructura y comportamiento variarn
significativamente de la molcula original que se desea
marcar

19
 PURIFICACIN
Separar la molcula marcada de las impurezas de bajo peso molecular.

IMPUREZAS:
I* libre en varias formas qumicas
Restos del agente oxidante y reductor
Otras impurezas formadas en la reaccin.

Tcnicas de purificacin
Columna de intercambio inico
Columna de AgCl
Precipitacin por cambio de pH
Extraccin por solventes
Gel filtracin en columnas de Sephadex (G-25 ,G100)
Siendo la gel filtracin el mtodo ms utilizado para la purificacin de protenas

Controles
A partir de la purificacin por gel filtracin
Clculo de:
- Actividad especfica. Actividad por unidad de masa, ya sea por mol o por gramo, etc
- ndice de incorporacin de yodo. Cuantas molculas de iodo por molcula realmente se incorporaron lo ideal es uno pero en
general es menor que uno
Electroforesis
Cromatografa
Precipitacin de protenas (TCA 20%)
Ensayos de unin

Para separar la protena marcada del resto del Na*I

que qued sin incorporarse basta purificarla por gel-
filtracin con Sephadex
G-25. La protena eluye en el volumen muerto de la
columna y el *I libre se recoge en un pico posterior.

RADILISIS
Precauciones para minimizarla:
1. Inmediatamente de la marcacin disminuir la actividad especfica de la MM mediante dilucin, a valores compatibles con el
experimento a realizar.
2. Agregar una protena inerte (BSA 1%, Gelatina 1%) para que la radiacin incida mayoritariamente sobre ella y no sobre la MM.
3. Si es posible adicionar recolectores de radicales libre (scavengers), como etanol o alcohol benclico.
4. Almacenar la MM a baja temperatura: 4C en solventes orgnicos (esteroides); -20C en glicerol al 50% para que no se
congele.

NDICE DE IODACIN ideal = 1

20
21
 VER BIBLIOGRAFA DE LA CTEDRA: MOLCULAS MARCADAS

22
CLASE 3: RADIOBIOLOGA
MARTES - 24/05/2016

La historia la oncologa integra varios componentes:

Clnica, Fsica, Dosimetra, Patologa, Radiobiologa
La Radiobiologa es el estudio de la accin de las radiaciones ionizantes sobre los seres vivos.

Las radiaciones no ionizantes,

donde las que tiene longitudes de
onda muy grandes, que
corresponden a las
radiofrecuencias por ejemplo las
torres de radio, telfonos mviles.
A medida que se va achicando la
frecuencia y por lo tanto aumenta
la energa, dentro de las no
ionizantes tenemos ondas que
tienen la amplitud del dimetro de
una pelota de futbol, un punto
ortogrfico, el tamao de una
clula todas estas siguen siendo
radiaciones no ionizantes. Luego
existen aquellas radiaciones
electromagnticas que tienen
unas longitudes de onda que es
parecido al tamao de una clula,
sera un intermedio entre el horno
microondas y los radiadores de
calefaccin. Si seguimos
achicando la frecuencia se encuentran con amplitud del ancho de una cadena de
ADN. En esa zona podramos asociar a la longitud de onda de los rayos x que
tienen una frecuencia muy alto, si miramos longitud de onda ms pequeas
todava, las cuales tienen la amplitud del tamao ms o menos de una molcula de
agua, ah ya serian rayos x fuertes o fuentes gamma, de mayor frecuencia, por lo
tanto mayor energa.

Por qu las radiaciones ionizantes son tan controvertidas?

Una absorcin de 4 Gy de dosis es letal para el 50% de los individuos

expuestos. Esto corresponde a la absorcin de 67 caloras por un hombre
estandar de 70 Kg.

Convirtiendo esas energas en calor correspondera al incremento de

o
0.002 C lo que no causa ningn dao.

23
 O sera equivalente a la energa potencial de elevar a una persona 40 cm
del piso

Entonces, Dnde radica el peligro? Lo que sucede es que la absorcin de las radiaciones ionizantes se dan puntualmente
concentrada en pequeos grupos y es ah que esa pequea energa que es despreciable si la tomamos repartida en todo el
cuerpo, si la concentramos en un punto tan pequeo como el tamao de una molcula se transforma en daina y letal.

La absorcin de energa de radiaciones ionizantes puede derivar en la excitacin o en la ionizacin de un medio.

Las radiaciones ionizantes liberan en forma localizada de grandes cantidades de energa.
En promedio un evento de ionizacin tiene 33 eV de energa, mientras que para romper un enlace C=C se requieren 4.9 eV.

Recordemos que de la forma en que los fotones pierden su energa, se encuentran:

Efecto fotoelctrico, llegaba la radiacin electromagntica arrastra un electrn

de la periferia y este es el inyectado (esta es una forma de ionizar)

La interaccin por Compton, llegaba una onda electromagntica, se desprende

un electrn ms interno ms energtico y tambin hay desprendimiento de
radiacin electromagntica

Produccin de pares, donde se llega directo al ncleo donde se produce un

tomo ionizado, un electrn y un positrn. Esa sera la forma que podramos estar
ionizando nuestra molcula.

Las partculas, en particular las y que son cargadas puede llegar produciendo
una ionizacin comn, un choque elstico con neutrones o captura electrnica que
tambin estara produciendo protones y electrones.

FACTORES QUE AFECTAN AL DAO CELULAR:

Cuando se producen esos iones la forma ms probable de dao
biolgico es mediante la formacin de radicales libres, tambin puede
ocurrir un dao directo donde el electrn llega y acta un dao directo
sobre la cadena de ADN. Estamos constituidos de ms de un 70% de
agua por lo tanto es mucho menos probable que ocurra este dao
directo a que se produzcan especialmente radicales libres provenientes
del agua. Entonces cuando un ion, ya sea un electrn o un positrn,
inciden sobre la molcula de agua se pueden formar los radicales libres
que se ven en la imagen.

Estos (imagen de la derecha) son radicales acuosos PRIMARIOS.

Actan directamente sobre molculas orgnicas.
24
 Se van a producir radicales libres tardos, secundarios que se forman en molculas orgnicas.
-5 -10
Las reacciones con radicales orgnicos y acuosos aparecen entre 10 a 10 segundos
posteriores a la incidencia de la radiacin.
Estos son los que van a daar nuestras clulas.

Rendimiento de Radicales

Producto Valor G
e aq- 2.6*

H 0.6*

OH 2.6
H2 0.45
H2O2 0.75
* En presencia de oxigeno (2.6 + 0.6 = 3.2). Esto nos est indicando que si adems en nuestro medio
contamos con presencia de oxgeno, el dao va a ser an mayor en esa clula.

El dao del ADN tiene consecuencias serias y a menudo letales para las clulas.
Los electrones generan Clusters o grupos de ionizaciones.
Muchas ionizaciones pueden ocurrir en unas pocas bases de ADN.
Turnover o recambio de molculas sanas limita las consecuencias del dao a unas pocas molculas de un mismo tipo.
ADN solo tiene 2 copias, su capacidad de Turnover es limitada, su tamao es muy grande y se transforma en un blanco fcil y
adems es central para el funcionamiento de todas las clulas. Por lo tanto, esta molcula es muy delicada y por todos estos
motivos el dao se transforma en una letalidad para la clula.

FACTORES QUE AFECTAN AL DAO CELULAR: Transferencia Lineal de Energa - LET

Es la energa depositada por unidad de trayecto medida en KeV/m debida a procesos de ionizacin y excitacin
LET = dE/dL

Diferencia de recorrido y alcance entre un electrn y una partcula

No todas las radiaciones tienen la misma incidencia en el dao que puedan

hacer. Cuanto ms tamao tiene una radicacin menos poder de penetracin,
entonces al tener menos recorrido va a dejar mucha energa en una escaso
recorrido, eso hace que su LET sea muy alto.

Ionizacin Especfica
Es el nmero de pares de iones que se producen por unidad de trayectoria.
Las partculas producen miles por mm.
Las generan 50-100 /mm
Depende del tipo de material del medio

FACTORES QUE AFECTAN AL DAO CELULAR: Rango de una partcula

El rango es otro concepto que est ntimamente ligado al LET y a la capacidad de ionizacin, es una medida que me va a indicar
cuanto va a penetrar una radiacin antes de detenerse por completo, antes de dejar toda su energa transformada en
ionizaciones.
A medida que una partcula pierde energa cintica, aumenta la transferencia de energa al medio. El rango de esa partcula
corresponde a la penetracin en el medio de la misma. sta partcula va dejando energa a medida que avanza, o sea va
transformando su energa cintica inicial en ionizaciones que va dejando a su paso. Por lo tanto cuanto ms lenta se una
partcula ms energa va a dejar.
25
 Ejemplo: Una radiacin presenta una trayectoria tortuosa y ms larga
que su rango. En el caso de una rango y trayectoria son casi iguales.
El rango es inversamente proporcional a la cantidad de energa perdida
por unidad de trayecto. Es decir cunto ms energa pierde por unidad de
trayecto menos puede penetrar.
RANGO es inversamente proporcional a LET

Curva de Bragg: Deposicin de energa a lo largo del trayecto de una

partcula (grfico de la derecha)

LET para varios tipos de radiaciones

LET es proporcional a la carga de la partcula incidente e inversamente proporcional a la energa cintica de la partcula
incidente
A mayor LET mayor probabilidad de dao biolgico

Trayecto de una partcula cargada

Esquema del pasaje de un electrn y de una partcula a

travs de una cadena de ADN. El electrn deposita 0.25 KeV/m
y la de 5MeV deposita unos 100 KeV/m

Densidad de prdida de energa y LET

a) Posibles eventos ionizantes en tramo de 200 m.

b) Posibles eventos ionizantes en un tramo de 200A=

0.02 m

26
 Tipo de dao celular

Efecto Biolgico Relativo (RBE Relative Biological Efect)

Es una forma de cuantificar el dao biolgico producido por un tipo de radiacin.

( )

60
Generalmente la dosis de referencia para una fuente de Co y por ejemplo en el denominados una cualquiera. En general este
cociente anda en el orden de 1 para ondas y , pero este cociente para ondas es alrededor de 20. De ah es donde sale ese
concepto de que las onda son 20 veces ms peligrosas que las ondas o .

Determinar RBE para neutrones de 14.7MeV. Es posible medir el dao en clulas con 250 KeV de RX y en otra poblacin
idntica con 14.7 MeV de neutrones. Se determinan las dosis de cada una siendo 150 mGy para los neutrones y 650 mGy
para los RX. Neutrones tiene ms masa por lo tanto van a tener ms LET que los rayos X, adems tenemos un orden mayor de
energa por lo tanto es esperable que la dosis (24 min 17)

El dao que nos puede hacer una irradiacin con neutrones es 4,3 veces mayor que el dao que nos puede hacer la irradiacin
con rayos X en las mismas condiciones.
El RBE nosotros lo podemos incrementar, aumentando la dosis que le damos al tejido pero va a llegar un momento que no va a
haber un aumento cuantitativo grande. Esa meseta que se alcanza en el dao es cuando la irradiacin va en el orden o por
encima de 100 KeV/nm.
RBE aumenta con el LET dado que a mayor LET mayor dao hasta un mximo de 100 KeV/nm por encima de esto se produce
OVERKILL

Overkill
Ocurre cuando se deposita toda la radiacin ionizante en un solo blanco. En este caso estamos matando una sola clula y no
a las vecinas que pueden ser malignas tambin.
Se malgasta la energa sin afectar clulas vecinas y esta es una mala estrategia en el caso de terapias
En el caso ptimo un solo pasaje de radiacin a travs de la clula es suficiente para matarla.
Un exceso de radiacin puede causar danos en tejidos sanos vecinos y es potencialmente inefectivo ya que no ataca a todas
las clulas cancergenas.

27
 FACTORES QUE AFECTAN AL DAO CELULAR: Efecto del Oxigeno
Cuando se producen radicales libres a partir del agua, estos causan danos
indirectos al ADN. Pero molculas R* pueden producir otros radicales
+
orgnicos RO 2 de mayor vida media, que lleva a funcin final ROOH en la
molcula blanco.
Esto se traduce en cambios estables en la composicin del blanco y el dao
queda qumicamente fijado.

Relacin de mejora de Oxgeno (Oxigen Enhancement Ratio OER)

El Efecto del Oxigeno implica dao inducido por radicales libres en presencia de
oxgeno.
En terapia es importante pues los tumores que crecen rpidamente limitan su
suministro de oxgeno y quedan pobremente irrigados lo que se traduce en
resistencia a la radioterapia.

La ORE la vemos en esta grfica de la derecha, donde muestra la fraccin de

supervivencia de clulas que estn oxigenadas, tambin llamadas xicas,
comparadas con la fraccin de supervivencia de clulas que tienen baja
concentracin de oxgenos tambin llamadas hipxicas. Se ve que se necesita 2,8
veces en este caso en particular ms de dosis para producir el mismo efecto en un
tejido que no tiene oxgeno que uno que tiene oxgeno. Porque el que tiene
oxgeno tiene esos radicales libres orgnicos que quedan permanentes y se
pueden trasladar y hacer dao, pero los que no tiene oxgeno no les pasa esto y
se hacen ms resistentes a el dao de los radicales libres.

ste concepto es muy importante al momento de realizar una terapia en tumores, porque stos crecen rpidamente. Pero si
estos tiene todava una buena cantidad de oxgeno, va a ser necesaria menos dosis para matarlo que la que necesitara si el
tumor es hipoxico.
Entonces la resistencia la radioterapia depende del tamao del tumor y de la relacin de la oxigenacin.

28
Impacto de la difusin de oxgeno en la curva de supervivencia vs dosis administrada.

Esto hace muy importante que el individuo

que va a recibir la terapia tenga una buena
oxigenacin.

Oxigenacin tumoral; Cmo establecer el nivel de hipoxia de un tumor?

Medidas de vascularizacin del tumor
Saturacin de hemoglobina/oxigeno
Medida de actividad metablica del tumor (cambia en estado de hipoxia)
Estimacin del dao del ADN (en clulas hipxicas es menor)
Marcadores de hipoxia (nitroaromticos)
Presin parcial de O2 en el tumor (cervicales y cuello) Esto es muy invasivo para el paciente, por eso se hace en esos lugares.

Si la hipoxia tiene impacto detrimental en el resultado de la terapia, qu acciones deben tomarse para minimizar este impacto?
Qu puedo hacer para que el tumor no est en estado hipxica?
Uso de cmara hiperbrica, esto hace que el paciente tenga una mayor presin de oxgeno en el organismo y por lo tanto se
favorece la oxigenacin de los tumores.
Uso de agentes radiosensibilizantes, que son coadyuvantes de la radioterapia y de la quimioterapia, los cuales facilitan las
oxigenacin de los tejidos.
Pre tratamiento con hemoglobina concentrada

Radioprotectores
El oxgeno es un gran agente radiosensibilizante, por otra parte existen otros agentes que actan como Radioprotectores
naturales y sintticos.
Se caracterizan por ser donadores de H como la cistena y cistamina que compiten con el oxgeno y pueden neutralizar
radicales libres favoreciendo la reparacin cistena

Los compuestos con SH son txicos pero esto puede compensarse introduciendo en la molcula grupos fosfato que actan
como pro-drogas. No se libera el SH hasta que enzimas degradan el enlace fosfato

AMIFOSTINE agente radio protector utilizado en terapia para reducir los efectos
secundarios. Es un tiofosfato activado in vivo por defosforilacin.
Una vez liberado, captura a los radicales libres generados en radio o
quimioterapia.

Objetivo de la Radioterapia

29
 Qu tipos de radioterapia existen?
La radioterapia externa casi siempre se administra a pacientes ambulatorios.
Se usa para tratar muchos tipos de cncer, incluso cncer de vejiga, cerebro, seno,
crvix, laringe, pulmn, prstata y vagina.
Adems, puede usarse radiacin externa para aliviar el dolor o aligerar otros
problemas que se presentan cuando el cncer se disemina a otras partes del cuerpo
desde el sitio primario.

La radioterapia interna (tambin llamada Braquiterapia) usa radiacin que se coloca muy cerca del tumor o dentro del
mismo. La fuente de radiacin esta ordinariamente sellada en un portador pequeo llamado implante.
La radioterapia intersticial se inserta en el tejido en donde est el tumor o cerca del mismo. Se usa para tratar tumores de
cabeza y cuello, prstata, crvix, ovarios, senos, y regiones perianal y plvica.
La radioterapia intracavitaria o intraluminal se inserta en el cuerpo con un aplicador. Se usa comnmente para tratar el
cncer de tero

La radioterapia sistmica usa materiales radiactivos como el yodo 131 y el estroncio 89,
Ytrio 90, Lutecio 177 entre otros. Los materiales pueden tomarse por via oral o
inyectable. Algunas veces se usa la radioterapia sistmica para tratar el cncer de
glndula tiroides y linfoma no Hodgkin en adultos.

La respuesta de clulas a mltiples dosis de radiacin dependen de factores como:

Cantidad de dosis
Intervalo
Momento del ciclo celular

La fase M, donde est la formacin del

huso mittico, donde se duplican los
microtbulos, los cromosomas y dems.
Fase G1, donde hay una
desorganizacin para que la clula se
rompa en dos.
Luego la formacin de nuevas cadenas
de ADN que es en el ciclo S.
Ciclo G2, la fase de duplicacin
propiamente dicha de la clula.

En Fase M el dao tiene mayor potencial

de causar muerte celular respecto a otras
fases.

Si justamente yo llego con mis radicales libres tanto orgnicos como primarios
o con accin directa y hago dao a esas hebras ah es donde el dao se va a
replicar y no hay vuelta atrs.

30
 Las 4 R de la Radioterapia
Reparacin Redistribucin Repoblacin Reoxigenacin

Reparacin
Recuperacin del dao celular por mecanismos celulares intrnsecos.
Se produce en unas pocas horas despus de la Irradiacin.

Redistribucin
Efectos en el Ciclo Celular
En la irradiacin de una poblacin celular, al ser diferente la sensibilidad en las distintas fases del ciclo, se produce
indirectamente un cierto grado de sincronizacin de la poblacin.

Fase M: Ocurren varios re arreglos cromosmicos crticos (condensacin,

alineamiento, separacin de cromtides). Si hay dao en esta fase, la clula no
se puede dividir. Por lo tanto las clulas que estaban en fase M al momento de
la irradiacin murieron.
Fase S: El ADN se replica y es ms fcil la reparacin del mismo. En este caso, las
clulas que estaban en esta etapa al momento de irradiar quedaron vivas.

Efectos sobre la progresin en el ciclo celular

Las clulas que sobrevivieron probablemente se encontraban en una fase resistente del ciclo celular y en las prximas horas
pasaran a una fase sensible (base de algunos fraccionamientos).
Fase S es menos sensible a los danos por radiaciones

Fase G1 es menos sensible a los danos por radiaciones

Las clulas que sobreviven a la primera dosis estan en una fase de
resistencia ejemplo S o G1 luego de un tiempo de recuperacin
llegan a Fase G2 o M y son Radiosensibles. Esto explica el
fraccionamiento de dosis en radioterapia

31
Reoxigenacin
Las clulas sobrevivientes pueden ser hipxicas (resistentes) pero luego de la dosis de
irradiacin pueden oxigenarse y aumentar la Radiosensibilidad.

Repoblacin
Fenmeno homeosttico desencadenado por la muerte celular.
Repoblacin de tejido normal: Dentro de las 4 semanas posteriores al tratamiento
Repoblaron de tejido maligno: La proliferacin aumenta el nmero de blancos en un curso prolongado de radioterapia. Es
un efecto indeseado y se puede contrarrestar con un hiper-fraccionamiento de las dosis en corto tiempo

Las 5 R de la Radioterapia
Reparacin Redistribucin Repoblacin Reoxigenacin Radiosensibilidad

Radiosensilidad
Caracterstica gentica intrnseca de cada tumor, dada por su estirpe celular.
Ejemplo de Clulas Radiosensibles: epiteliales, clulas madre, de origen hematolgico o sexual.
Ejemplo de Clulas Radioresistentes: miocitos, neuronas melanoma y sarcomas

LAS 5 R
Dos de ellas provocan Radioresistencia a una segunda dosis de irradiacin: Reparacin y Repoblacin
Dos de ellas aumentan la Radiosensibilidad: Redistribucin y Reoxigenacin
La Radiosensibilidad global depende de las 5 R

Tamao critico de un blanco de ADN

En general se ha visto que las clulas con menor tamao de ncleo

tiene mayor resistencia a las radiaciones.
Sparrow et al determinaron que el tamao celular dividido el nmero
de cromosomas de la interfase es un mejor parmetro para evaluar la
Radiosensibilidad

Cuadro comparativo de la Radiosensibilidad de diferentes seres vivos

Factores fsicos y biolgicos que influencian la LD 50

32
CLASES 4 Y 5: MARCACIN CON TECNECIO Y RENIO
JUEVES 26/05/2016 MARTES 31/05/2016

TECNECIO .

Es el elemento 43
Su nombre proviene del griego y significa artificial
Tiene 21 isotopos, todos ellos radiactivos
99m
El Tc es el radionucleido ms utilizado en Medicina Nuclear
Emisin pura
Alto rendimiento de fotones
Energa de 140 KeV
Perodo de semidesintegracin de 6 horas
Fcil disponibilidad a partir de generadores Mo/ Tc
99 99m

QUMICA DEL TECNECIO

El Tc es un metal de transicin perteneciente a la familia 7.
Debido a su configuracin electrnica [Kr] 4d 5s puede presentar estados de oxidacin entre +1 y +7.
5 2

Las formas reducidas del Tc tienen niveles d incompletos por lo que forman fcilmente compuestos de
coordinacin.
La marcacin con Tc se logra en la gran mayora de los casos mediante la formacin de compuestos de coordinacin.
99m

99m
MARCACIN CON Tc
Se realiza utilizando el TcO4 eludo del generador Mo/ Tc.
99m - 99 99m

El metal se encuentra en estado de oxidacin +7, por lo que el primer paso de toda marcacin implica una reduccin.
Los agentes reductores ms utilizados son: cloruro o tartrato estannoso, borohidruro de sodio, ditionito de sodio, cido
ascrbico, etc.
El siguiente paso es la formacin del compuesto de coordinacin con el ligando a marcar.

RENIO .

186 188
Re Re
t = 90,6 horas t = 17 horas
E mx. = 1,1 MeV E mx. = 2,1 MeV
E = 137 KeV E = 155 KeV
186/188
MARCACIN CON Re
Debido a la situacin del Re en la Tabla Peridica y a la contraccin de los lantnidos, la qumica del Re y la del Tc son muy
similares.
Adems, ambos radionucleidos se encuentran disponibles, generalmente, bajo forma de in perrenato.
Por tanto, los mtodos de marcacin con ambos radioistopos del renio son muy similares a los utilizados para tecnecio, con
algunas diferencias que se muestran a continuacin.

ANALOGA TECNECIO/RENIO
PROPIEDADES Tecnecio Renio
Radio Inico 0,56 A 0,56 A
Distancia M-O 1,75 A 1,97 A
Potencial de ionizacin 95 eV 79 eV
Potencial Redox < >

La mayor diferencia entre ambos metales es el mayor potencial redox del Re que determina la necesidad de condiciones de
reduccin ms enrgicas y determina un mayor riesgo de reoxidacin.

33
 COMPUESTOS DE COORDINACIN
Se forman por combinacin de un metal deficiente en electrones y
un ligando rico en electrones.
El ligando aporta electrones y el metal orbitales vacos donde
alojarlos.

REDUCCIN DE PERTECNECIATO
Se produce segn el siguiente esquema general:

ESTADO DE OXIDACIN DEL METAL

Depende de:
Caractersticas del ligando
Propiedades del reductor
Condiciones de la reaccin:
- pH
- temperatura

EJEMPLOS:
Influencia del Ligando:

Influencia de las condiciones de la reaccin:

El estado de oxidacin que adopta el metal va a depender de las caractersticas de los ligandos, de las propiedades del reductor
y de las condiciones, como ser el pH. Normalmente se usa un reductor fuerte en el kit de marcado, por lo que lo que ms va a
influir en las caractersticas del compuesto que se forme, ser el ligando. Segn la estructura del ligando, sern distintos los tipos
de compuestos que se formen.
Debido a que las marcaciones se realizan en medio acuoso, es muy comn que se encuentren radiofrmacos de tecnecio con
enlaces -oxo (con oxgeno); ver ejemplo arriba a la izquierda.
En algunos casos, el mismo ligando puede dar lugar a distintos compuestos, segn las condiciones de reaccin. Esto es
importante tener en cuenta, y si existe la posibilidad de formacin de varios complejos con el mismo ligando, se deber tener
especial cuidado en las condiciones de marcado.

CARACTERSTICAS DEL LIGANDO

Los ligandos actan como bases de Lewis (donadores de electrones) y el metal como cido de Lewis (aceptor de electrones).
Ligandos y metales pueden ser duros o blandos segn Pearson.
Metales duros se combinan con ligandos duros y metales blandos con ligandos blandos
Los ligandos blandos tienen grupos grandes capaces de deslocalizar la carga; tienen densidad electrnica deslocalizada.
Los ligandos duros poseen tomos o grupos pequeos que retienen toda la densidad de carga.

34
 As, cuando se tienen ligandos con grupos pequeos y muy cargados, va a preferir el Tecnecio en estado de oxidacin ms alto,
+5. Cuando se tienen fosfinas, nitrilos o aromticos (grupos que deslocalizan la carga), se van a tener el Tecnecio en un estado de
oxidacin ms bajo.
Si se observan los ejemplos presentados en la carilla anterior, en la parte superior izquierda se muestra un ligando con grupos
amino, un grupo pequeo que concentran una alta densidad de carga negativa, por lo que el Tecnecio est en estado de
oxidacin +5. Por otro lado, en el ejemplo de la derecha se observa un complejo con grupos oxonitrilo, aceptor de electrones,
ligando blando, por lo que el Tecnecio est en estado de oxidacin +1.

CORES DEL TECNECIO

El tecnecio forma distinto tipo de complejos de acuerdo fundamentalmente a su estado de oxidacin.
En cada uno de ellos adopta diversas configuraciones en su primera esfera de coordinacin, los llamados cores o ncleos,
alrededor de los cuales se acomodan un nmero variable de tomos donores de electrones de los ligandos que se desean
marcar.
Estos cores son relativamente inertes, no siendo alterados por sustitucin de los ligandos.

Puede ocurrir que el Tecnecio se una directamente al ligando, o puede ocurrir que forme una primera esfera de coordinacin,
o core, unido a grupos pequeos, como por ejemplo, el oxo.
No todas las posiciones de coordinacin que tiene el metal tienen que ser llenadas con grupos funcionales del ligando; pueden
haber algunas que sean ocupadas por otros grupos que forman ese core.
Los cores son inertes y aunque se sustituyan los ligandos suelen quedar incambiados.

CORES MS COMUNES
Los cores ms comunes son el Tecnecio mono-oxo, con el
V 3+
Tecnecio en estado de oxidacin +5, [Tc O] , el cual se une con un
grupo oxo y quedan 4 posiciones de coordinacin. Otro muy
comn, que en verdad no es un Core, es el que se muestra, ms
a la izquierda; se trata de la configuracin Tecnecio 1+, donde el
metal no est unido a ningn grupo pequeo y tiene 6 ligandos.
Eventualmente podra tener dos ligandos tridentados, o tres
bidentados, etc., es decir, tiene 6 posiciones de coordinacin.
EJEMPLOS

El ECD es un ejemplo con el Core mono-oxo. Se trata del

EtilenCisteinDimero, un radiofrmaco utilizado para estudio
de perfusin cerebral, para poder ver el flujo regional
sanguneo en el cerebro.

El otro ejemplo que se muestra a la izquierda es para el

caso de ligandos blandos, donde se observa al Tecnecio en
estado de oxidacin 1+, unido a oxo-nitrilos. Este radiofrmaco se utiliza para el estudio de
irrigacin del corazn; para ver si hubo un infarto o isquemia en el paciente.

MTODOS DE MARCACIN

En la prctica se pueden tener dos grades formas de marcacin que

son la marcacin Directa y la indirecta.
La marcacin directa es cuando se tiene un ligando que se agrega
en contacto con el metal y el reductor, con un pH adecuado, para
obtener el complejo buscado.
En la marcacin indirecta o por sustitucin, primero se forma un
complejo intermediario por reduccin del metal en presencia del
ligando intermediario. Luego se agrega el ligando especifico de forma
de obtener el complejo de inters. A veces es necesario en este
segundo paso, cambiar las condiciones de reaccin.

MARCACIN INDIRECTA (POR SUSTITUCIN)

Implica la utilizacin de precursores con cintica de formacin rpida pero con menor estabilidad termodinmica. Ejemplo:
glucoheptonato, citrato, etc.

35
Ventajas
Mejora el rendimiento de marcacin de ligandos fuertes pero de cintica lenta evitando la formacin de impurezas
causadas por reacciones competitivas.
Permite, adems, seleccionar y controlar el estado de oxidacin del complejo final.

La marcacin por sustitucin se hace cuando se tiene un ligando que se une fuertemente al metal pero que tiene una cintica
de marcacin lenta, es decir que la formacin del complejo ocurre de forma lenta. Si esto ocurre, existe la posibilidad de que se
tengan reacciones secundarias indeseadas. Lo que se busca con el mtodo indirecto es utilizar un intermediario que forme
enlaces con el metal ms dbil pero que lo haga ms rpido.
Como hay diferencias termodinmicas de estabilidad entre el complejo precursor y el complejo final, se ve favorecida la
formacin del complejo final. Como se mencion anteriormente, el Core normalmente no cambia con las sustituciones, se
mantiene. Es por esto que si se tiene el Tecnecio en el estado qumico final, el que se quiere tener al final, este va a permanecer
as.
Vamos a ver a continuacin con las impurezas, especficamente cul es la que se quiere evitar mediante el mecanismo
indirecto.

IMPUREZAS EN LA MARCACIN
Se tienen dos tipos de impurezas: las impurezas que dependen del metal (siempre se deben tener presentes, sobre todo cuando
se estan diseando los mtodos de control) y otras impurezas que dependen del ligando marcado (estas son especficas de cada
marcacin).
-
- Pertecneciato o Tecnecio libre: TcO4 -

Aparece por reduccin incompleta o por reoxidacin posterior

In vivo se acumula en la tiroides y el estmago
En marcados con baja concentracin del reductor puede aparecer si:
Se marca con actividad demasiado alta
Se utilizan eludos que contienen exceso de tomos de Tc o de radicales libres producidos por la radilisis del agua.
99

Hay gran cantidad de oxgeno disuelto en el vial de reaccin TcO4 (Pertecneciato o tecnecio libre)
-

El Pertecneciato es una de las primeras que se debe tener en cuenta, ya que se trata de uno de los reactivos de la marcacin. Es
muy comn en una reaccin qumica convencional que el exceso de reactivo sea una de las impurezas. Adems puede ocurrir que
por ciertas caractersticas de la solucin de marcado, haya una nueva oxidacin y aparezca ms Pertecneciato.
Si se estan desarrollando compuestos para administracin in vivo, para diagnstico de medicina nuclear, se debe tener en
cuenta esta impureza. El Pertecneciato in vivo tiene un comportamiento similar al ion ioduro, el cual se dirige a la tiroides. Si se
administra un radiofrmaco para hacer una imagen del cerebro por ejemplo, no se quiere que el paciente reciba Tecnecio en la
tiroides; es importante minimizar la dosis. Adems, se busca que no haya interferencias en la imagen. Por lo tanto se busca no
tener una impureza radioactiva con una biodistribucin diferente mezclada con el radiofrmaco.
Cundo aparece esta impureza? Cuando se tiene baja concentracin del reductor. Esto puede ocurrir cuando se marca con
una actividad muy alta (normalmente los fabricantes de los kit indican cual es la actividad mxima para marcar), cuando se
utilizan eludos que no son frescos (es decir, que el eludo es viejo o el generador paso mucho tiempo sin eluir), o cuando hay
oxigeno disuelto en el vial de reaccin (el oxgeno puede destruir parte del reductor y hace que se reduzca menos el
Pertecneciato).
99
VARIACIN DE LA CANTIDAD RELATIVA DE TOMOS DE Tc CON EL TIEMPO

Este grfico ayuda a ver por qu tener eludos viejos puede provocar problemas por
99
exceso de tomos de Tc.
99m 99 99
El Tc es emisor gamma y decae a Tc. EL Tc es emisor beta, pero tiene un
periodo de semidesintegracin muy largo, por lo que se lo considera como si fuese
99
estable; la cantidad de tomos de Tc no disminuye significativamente con el
tiempo.
En el grfico se observa la representacin de cantidad de tomos en funcin del
99 99 99m
tiempo. Se puede ver cmo el Mo baja con el tiempo, el Tc aumenta y el Tc
99
disminuye. Como el Tc prcticamente no decae, aumenta mucho. Si se observa la
99m
escala de tiempo, en las primeras horas se tiene mucho ms Tc y prcticamente
99
nada de Tc, pero al dejar pasar 12-15 horas, se igualan las cantidades. Para el
99 99m
reductor, es lo mismo Tc o Tc. Es por esto que al trabajar con un eludo viejo se
tiene que reducir muchos ms tomos de Tc, y eso puede llevar a que el
Pertecneciato radioactivo se acumule.

36
DESCOMPOSICIN POR RADICALES LIBRES
Ya se mencion que al trabajar con eludos viejos se puede tener dos
99
problemas: exceso de tomos de Tc o presencia de radicales libres. Los
radicales libres son oxidantes, y pueden destruir a la molcula marcada,
haciendo que el Tc vuelva a Pertecneciato.
La energa de decaimiento es la que produce la ruptura de las molculas de agua, generando los radicales libres.
Si hace mucho rato que se tiene el eludo, se van a tener muchos radicales libres oxidantes y esta puede ser una causa de
produccin de Pertecneciato.

MECANISMO DE ACCIN DE LOS ANTIOXIDANTES

En algunos casos se pueden utilizar antioxidantes. Los antioxidantes son

molculas que tienen muchos oxgenos y pueden deslocalizar los radicales libres.
As, protegen a la molcula porque los radicales libres atacan preferentemente a
estos compuestos antioxidantes.

Para disminuir la presencia de PERTECNECIATO como impureza se debe:

Optimizar la relacin ligando/reductor. Cuando se est desarrollando un producto, se debe ver cunto reductor se debe
agregar para que no quede Pertecneciato o Tecnecio libre.
Utilizar eludos frescos
Eliminar el O2 purgando con N2
Adicionar antioxidantes (no es muy comn).

- Tecnecio Reducido hidrolizado o coloide: TcO2nH2O -

El Tc (IV) forma diversas especies (TcO) , TcO(OH) o TcO2, segn el pH (para pH creciente), las que en medio acuoso se
+2 +

hidrolizan formando especies coloidales que in vivo se acumulan en hgado, bazo o mdula sea. TcO2.nH2O (Tecnecio
reducido hidrolizado o coloide).
Si la marcacin se realiza a pH neutro y con concentracin de ligando baja hay ms riesgo que aparezca esta impureza.
En el caso de ligandos dbiles o cuya cintica de marcacin es lenta ocurre lo mismo.

Se trata del Tecnecio es estado de oxidacin +4. Este estado de oxidacin +4 es bastante estable para el Tecnecio y en solucin
acuosa forma distintas especies, como el xido, el cual se hidroliza en solucin acuosa, dando las especies coloidales. Las especies
coloidales in vivo, se acumulan en hgado, bazo y mdula sea. Este es un inconveniente por los mismos motivos explicados para
el Pertecneciato; tiene una biodistribucin diferente a la del Radiofrmaco buscado.
Esta impureza se ve favorecida cuando se trabaja con pH cercanos a la neutralidad. Lo que ms conviene son las marcaciones
en medio cido.
Tambin se favorece cuando se tiene un ligando dbil o un ligando que tiene una cintica de marcacin lento. Es por esto que
esta es la impureza que se trata de evitar mediante el uso del mtodo de ligandos intermediarios. La formacin del coloide es una
reaccin termodinmicamente favorable, por lo que cuanto menos tiempo se tenga al Tc sin combinar en solucin acuosa, menos
probabilidad de que se formen estas especies.

Para disminuir la presencia de COLOIDE se debe:

Optimizar la relacin ligando/reductor.
Ajustar el pH
Utilizar ligandos intermediarios

Ms adelante se menciona el empleo del Estao como agente reductor. Sin embargo es importante tener en cuenta que el
exceso de Estao tambin puede dar lugar a la formacin de especies coloidales (aunque no especficamente Tecnecio reducido
hidrolizado, no se pueden distinguir de ste mediante el control). Es importante por lo tanto optimizar la relacin
ligando/reductor. Muy poco reductor favorece la aparicin de Pertecneciato, pero mucho reductor favorece la aparicin de
coloides. Se debe ajustar correctamente.

37
 IMPUREZAS DE LOS LIGANDOS
Recin se mencionaron las impurezas que dependen del metal radioactivo, pero tambin hay impurezas que dependen de los
ligandos. Estas impurezas se deben analizar en cada marcado en particular; para cada marcado se debe conocer qu especies
indeseadas se pueden formar para poder obtener y desarrollar el mtodo de control que permita distinguirlas de las molcula
final de inters.
99m 99m
Tc-ECD: ESPECIES DE-ESTERIFICADAS EN Tc-ECD

Como ya se mencion, este

Radiofrmaco se utiliza para
estudiar flujo sanguneo en el
cerebro.
A la izquierda se muestra el
ligando y a la derecha el complejo
con Tc.
Este compuesto ingresa al cerebro
por difusin pasiva a travs de la barrera hematoenceflica. Una vez adentro, se hidrolizan los enlaces ster (por hidrolisis
enzimtica), dejando al compuesto cargado, imposibilitando as la salida de la biofase. Esto es beneficioso, ya que permite que se
pueda tener tiempo para poder hacer el estudio.
Si el ligando sufre hidrolisis no enzimtica, qumica, cuando se est
almacenando, como los grupos ster no participan en la formacin del
complejo, se forman lo que se llama especies de-esterificadas, es
decir, se obtienen productos marcados, con un ligando hidrolizado.
Como estos complejos ya estan cargados, no atraviesan pasivamente la
barrera hematoenceflica, no pasan al cerebro, dando una
radioactividad en el cerebro del paciente menor, dificultando as el
estudio.
Hay tres especies distintas que se pueden obtener: dos que son mono-
hidrolizados (de uno u el otro ster) y una di-hidrolizada (donde se
hidrolizan los dos grupos ster).
Se debe buscar un sistema de control adecuado para poder separar y
cuantificar estas especies, como puede ser la cromatografa lquida. Ver
prctico de Tecnecio para ms detalles. A la izquierda se muestra un
cromatograma donde se logran separar las especies hidrolizadas de la no hidrolizada.
99m
COMPLEJOS SECUNDARIOS: Tc- HMPAO
Este complejo ya casi no se usa, pero sirve tambin para
analizar la perfusin al cerebro. Se trata de un complejo no muy
estable (el complejo con ECD es mejor).
Al igual que en el caso anterior, los compuestos secundarios
que se pueden formar, no logran llegar al cerebro, por lo que
tienen una biodistribucin diferente. Es por este motivo que al
hacer el control de este tipo de radiofrmaco, se debe tener en
cuenta cules son los complejos secundarios que se puedan
obtener; se debe encontrar una tcnica analtica adecuada.

EL SnCl2 COMO REDUCTOR

Como ya se mencion anteriormente, el Cloruro de Estao o Estaoso, SnCl 2, es el reductor ms utilizado. Las ventajas y
desventajas son las siguientes:
Ventajas
Buen poder reductor. Puede llevar al metal a cualquiera de sus Estados de oxidacin.
Efectividad a temperatura ambiente. Muy conveniente y prctico.
Solubilidad en agua. Importante ya que se quieren hacer las reacciones en un medio fisiolgico, para poder luego inyectar al
paciente.
Baja toxicidad en los niveles de dosis habituales
Posibilidad de adaptacin de la marcacin a tecnologa de kits

Desventajas
Es fcilmente oxidado por O2 disuelto y por radicales libres. Se debe cuidar la presencia de oxgeno, para que el reductor no
pierda fuerza, no se oxide.

38
 +2 +4
Sn y Sn sufren hidrlisis formando especies coloidales. Los coloides tienen mucha superficie, y suelen absorber
sustancias. Pueden absorber radiofrmaco. Es por esto que se mencion anteriormente que el exceso de reductor puede
llevar a la formacin de coloide; se tratan de coloides de estao, pero absorben radioactividad y se comportan de igual
forma que el Tc reducido hidrolizado.
Puede formar complejos con algunos ligandos, por ejemplo difosfonatos. Por tratarse de un metal, puede llegar a ocurrir
que el estao forme complejos con el ligando empleado para marcar, disminuyendo as la cantidad de ligando disponible.
No es muy frecuente pero si se ha demostrado por ejemplo para difosfonatos.

MARCACIN UTILIZANDO KITS

Cuando se trabaja a nivel de investigacin, se dispone del tiempo necesario para trabajar. Sin embargo, a nivel hospitalario en
la medicina nuclear, se debe tratar de tener una forma sencilla y rpida de obtener el producto. Este tipo de productos no son
como los medicamentos convencionales que se pueden producir en grandes cantidades y duran meses. Debido al periodo de
semidesintegracin del Tecnecio, los radiofrmacos se deben preparar cada da. La Radiofarmacia debe contar con un generador
y se debe realizar all la marcacin. Si se tuviera que pesar cada compuesto necesario para realizar la marcacin, disolver,
realizar la marcacin, esterilizar, etc., se pierde mucho tiempo. Es por esto que se ha desarrollado lo que se llama kits.
Un kit es juego de reactivos constituido por 1 o ms viales que contiene los reactivos necesarios para realizar una marcacin
99m
con Tc, generalmente liofilizados (excepto el radioistopo). Slo es necesario agregar el eludo de generador y realizar alguna
operacin simple (ajuste de pH o similar).
Est constituido bsicamente por el ligando y el SnCl2, pudiendo contener otros aditivos como antioxidantes, solubilizantes,
estabilizantes, etc.
Si la marcacin es por sustitucin, se puede contar con un segundo vial.
Originalmente, estos kits estaban congelados y se descongelaban al momento de usarse. Sin embargo se vio que esto disminua
su vida media; no duraban demasiado. Es por esto que se pas a usar estos kits liofilizados (secados por congelamiento a vaco).
De esta forma, el ligando y el reductor estan poco tiempo en solucin acuosa, por lo que se aumenta la estabilidad (menor
hidrolisis).

PREPARACIN DE UN KIT CLSICO

Si se tratase de un kit Clsico (es decir, aquel que solo tiene ligando y
reductor), la preparacin se realiza como se muestra a la izquierda (este
ejemplo es con pirofosato, ligando poco usado hoy en da).
Se disuelve el ligando en agua y se obtiene una solucin de pH
aproximadamente 10. Por otro lado, se disuelve el SnCl2, en cido
clorhdrico concentrado y se diluye, obtenindose una solucin de pH
aproximadamente 1.
Posteriormente se mezclan las dos soluciones, se ajusta el pH a 5. Se
burbujea nitrgeno para desplazar el oxgeno y se fracciona en viales
para poder proseguir con la etapa de liofilizacin.
El frasco final suele quedar relleno de nitrgeno o a vaco; sin nada de
oxgeno.
Cuando se le agrega a este kit terminado el Pertecneciato obtenido del
generador, se agita el tiempo indicado por el fabricante y se obtiene el
producto marcado, en cuestin de pocos minutos. Este producto se trata
de un producto estril, ya que normalmente cuando se realiza se lleva a
cabo en condiciones aspticas (filtros de 0,22 micras esterilizante).

EVOLUCIN DE LOS RADIOFRMACOS Y DE LOS MTODOS DE MARCACIN

La aplicacin clnica de compuestos marcados con Tc o Re ha sufrido una importante evolucin desde sus comienzos hasta la
actualidad y esta evolucin ha sido acompaada por los mtodos de marcacin.
En un principio el objetivo era visualizar procesos fisiolgicos simples que podan ser marcados mediante molculas
inespecficas (acumulacin y eliminacin renal, depuracin sangunea, acumulacin en hueso, etc.).
Los compuestos a marcar no tenan funcin fisiolgica propia sino que el metal era esencial para determinar las propiedades
y la distribucin biolgica de estos productos. Por ejemplo, dentro de los primeros compuestos que se marcaron est el EDTA,
debido a que se trata del agente quelante por excelencia; se emple simplemente por ser una molcula que se une bien a los
metales. De all surge el DTPA, derivado directo del EDTA (ver ejemplo en la siguiente carilla), radiofrmaco empleado para
estudios renales.
El comportamiento in vivo de los compuestos depende directamente del metal, es decir, la molcula de por si no tiene un
comportamiento biolgico de inters, pero al formal el compuesto con el metal termina teniendo una funcin que permite

39
 emplearlo en la medicina nuclear, ya sea por su carga, su estructura, o lo que fuese. Estos son los que se llaman
Radiofrmacos de Primera Generacin.

RADIOFRMACOS DE Tc DE PRIMERA GENERACIN

Son especies simples marcadas con Tc que
99m

permiten medir funciones orgnicas bsicas e

inespecficas.
La estructura no se conoce ya que no ha podido ser
elucidada. La estructura del complejo en si no se
conoce completamente, no est completamente
dilucidada, ya que para considerar que la estructura
de un compuesto esta dilucidada hay que tener
cristalografa de rayos X; muchos de estos
compuestos no se han podido cristalizar, por ende no
han podido ser estudiados por este mtodo.

La marcacin en este tipo de realiza siempre por

reduccin directa. Son compuestos sencillos; la
marcacin es la ms fcil de todas.
Aunque algunos de estos ligandos no son realmente
ligandos fuertes para el Tc o Re, generalmente se
encuentran presentes en muy alta concentracin, por
lo que la marcacin se realiza sin problemas.
El exceso de ligando acta tambin evitando las
reacciones de hidrlisis, tanto del Tc como del Sn.
La cantidad de reductor (Sn) tambin suele ser alta,
por lo que es muy poco probable que quede
Pertecneciato sin reaccionar, aunque no se usen
eludos frescos.

RADIOFRMACOS DE Tc DE SEGUNDA GENERACIN

Compuestos diseados utilizando los conocimientos de
qumica de coordinacin y realizando estudios sistemticos
estructura-biodistribucin para optimizar la captacin.
Estos radiofrmacos estan dirigidos a medir otras
funciones no tan bsicas y estn optimizados. Se tiene por
ejemplo los compuestos que se usan para estudiar flujo
sanguneo cerebral, como el HMPAO que se muestra a la
derecha.
El complejo con ECD se trata de un compuesto
relativamente sencillo que tiene coordinacin
con el Tecnecio bajo forma de mono-oxo. El
compuesto tiene una estereoisometra
adecuada; debe ser el L, L. Si no es este no
sirve ya que a su vez tiene dos grupos ster
que son atacados por esterasas, son
metabolizados tanto en el hgado como en el
cerebro solamente si se tiene la estereoisometra
L, L. Cuando estos grupos se hidrolizan en el
hgado, se favorece la eliminacin del compuesto;
cuando ocurre en el cerebro queda retenido ya
que no puede volver a atravesar la barrera
hematoenceflica. Ambas propiedades son muy
importantes para el radiofrmaco. Por otro lado,
el ECD tiene grupos amino y tiol que son buenos
coordinantes para el Tc, quedando una de las
aminas con el H, de forma de que queda neutro.
El MIBI se usa para estudio de la perfusin en el miocardio; permite distinguir entre isquemia e infarto. Se trabaj en este
compuesto ya que se tena la teora que los compuestos monocatinicos, por similitudes con el potasio, podan ser captados
en el corazn. Tcnicamente no es tan as, ya que este compuesto entra al corazn por difusin pasiva.

40
 La marcacin se realiza casi sin excepcin mediante sustitucin ya que los ligandos empleados son fuertes pero la cintica de
formacin del complejo suele ser lenta.
Ligandos y reductor se encuentran en concentraciones relativamente bajas por lo que es necesario cuidar especialmente las
caractersticas del eludo utilizado.
Se requiere el uso de ligandos auxiliares que formen complejos con el Sn, a fin de evitar su hidrlisis. Tambin se utilizan
ligandos intermediarios para evitar la hidrlisis del Tc.
El ligando auxiliar y el ligando intermediario pueden ser el mismo.

La marcacin de los complejos de segunda generacin, si bien son mejores, son ms complejas. Con estos complejos es que
surge la marcacin por sustitucin o intercambio de ligandos, ya que se tiene en muchos casos ligandos que son fuertes pero son
de cintica lenta. Adems, ligando y reductor se trabajan en concentraciones mucho ms bajas que las de primera generacin.
El ligando auxiliar evita que aparezcan los productos de hidrolisis del estao (coloidales) y tambin evita la competencia. Se
puede tener un ligando que funciona como ligando auxiliar e intermediario, o se pueden tener dos. Depende de cada
formulacin.
99m
Preparacin de Tc-ECD. (realizado en el Prctico)
El kit consta de 2 frascos: un frasco conteniendo el ligando + Sn + EDTA como ligando intermediario, todo esto en pH cido y
un segundo frasco conteniendo un buffer fosfato pH 7.6
El EDTA acta como ligando auxiliar e intermediario.
El Sn es ms estable a pH cido, pero la reaccin de sustitucin se produce mejor a pH cercano a la neutralidad.
99m
Preparacin de Tc-MIBI.
El kit consta de 1 nico frasco que contiene: ligando cistena, citrato y Sn.
Se marca por agregado de Pertecneciato y calentamiento a ebullicin.
El ligando est bajo forma de un complejo de Cu(I), porque libre es voltil, txico y con olor
desagradable. Para evitar par propiedades no deseadas del ligando libre (MIBI es txico) el ligando se
incorpora bajo forma de complejo de Cobre. El complejo de Cobre (I) es un slido, mientras que el
ligando libre es lquido y de muy mal olor.
La cistena y el citrato actan como ligandos intermediarios, formando complejos dbiles con el Tc. El citrato y la cistena que
forman parte del kit tienen varias funciones. Estos compuestos tambin forman complejos con el cobre, por lo tanto, cuando
se agrega el Tc se produce no solo una sustitucin de ligandos sino que tambin una sustitucin de metales. El Tc tiene ms
afinidad por el isonitrilo que el cobre por lo que el cobre liberado se une a la cistena y citrato, dejando al Tc unido al MIBI. A
su vez, tanto la cistena como el Citrato pueden actuar como ligandos intermediarios para el Tc y tambin pueden formar
complejos con el exceso de Sn para evitar las reacciones no deseadas del reductor.
Tambin forman complejos con el Cu liberado durante el calentamiento. Este es de los pocos casos en que la marcacin
requiere de calentamiento, debido a que el Tc est en estado de oxidacin +1; si bien el Sn es un reductor potente, para
llevarlo a un estado de oxidacin tan bajo se deben emplear calentamientos.
99m
Preparacin de Tc-MAG3.
El kit consta de 1 nico frasco que contiene: ligando, tartrato y Sn.
Se marca por agregado de Pertecneciato y calentamiento a ebullicin. El
ligando se encuentra protegido mediante un grupo S-benzoilo para
evitar oxidacin del grupo tiol libre. Este complejo se usa para estudios
renales. El compuesto tiene tres grupos amino y un grupo tiol. El tiol es
muy fcilmente oxidable, por lo que para mejorar la estabilidad de la
materia prima de lo tiene protegido con un S-benzoilo.
El grupo protector se elimina por calentamiento. En este caso la funcin del calentamiento no es la misma que la
anteriormente mencionada para el MIBI, ya que el Tc est en Estado de oxidacin +5; se emplea para lograr la desproteccin
del grupo SH.

RADIOFRMACOS DE Tc DE TERCERA GENERACIN

Complejos que imitan a molculas que participan
en procesos bioqumicos como sustratos de
receptores o enzimas.
Su diseo requiere el desarrollo de mtodos de
marcacin que preserven la bioactividad.

En este caso se parte de molculas que ya son

biolgicamente activas. Este tipo de marcacin comenz con los Anticuerpos monoclonales (aunque no tuvo tanta
aplicacin) y luego con pptidos.

41
 MARCACIN DE BIOMOLCULAS
En muchos casos, se quieren marcar molculas que tengan actividad biolgica, como puede ser un anticuerpo, un pptido, etc.
Estas tienen aplicaciones importantes en la medicina, como por ejemplo aplicaciones diagnsticas.
En el caso de biomolculas que interaccionan con receptores la unin del metal no debe afectar el reconocimiento especfico
del ligando in vivo.
En algunos casos, como en el caso realizado en el prctico de Iodo, al hacer la marcacin sobre la protena, ocurre un cambio
mnimo en la estructura de sta, por lo que no afecta su funcin. Sin embargo, en el caso del Tecnecio, la marcacin con un
complejo y el metal (que no estan en la estructura biolgica, ya que el Tecnecio no es un metal fisiolgico, y que tienen una cierta
estructura tridimensional) puede provocar distorsiones importantes en la molculas biolgicas. Esto puede llevar a la prdida de
la funcin como molcula biolgica, no tiene el mismo comportamiento in vivo.
CMO SE PUEDE REALIZAR ENTONCES LA MARCACIN DE BIOMOLCULAS?
Se desarrollaron mtodos de marcacin especficos para molculas biolgicas, de forma de buscar preservar al mximo sus
propiedades fisiolgicas.
1) MARCACIN DIRECTA
2) CONCEPTO PENDENT
3) CONCEPTO INTEGRADO

1) MARCACIN DIRECTA

Se muestra a la izquierda un pptido. Los aminocidos que forman parte del pptido
tienen grupos funcionales que pueden unirse al Tecnecio, como por ejemplo, en el caso
de la cistena que tiene grupos SH, u otros aminocidos con grupos amino, tioles, etc.
Es por esto que es posible realizar una marcacin directa.
El problema es que en la marcacin directa se tiene muy poco control sobre el lugar
en donde se va a dar la marcacin; hay poco control sobre la estructura que se vaya a
formar. Esto implica un riesgo importante de prdida de actividad biolgica.

Tc y Re pueden coordinarse con grupos SH del aminocido cistena presente en algunas protenas.
Se requiere una reduccin suave de los puentes disulfuro. En muchos casos los grupos funcionales SH de la cistena estn
formando puentes disulfuro, por lo que se deben reducir de forma de tener tioles libres para poder marcar. El reductor
empleado puede generar dao en la estructura de la molcula.
En la coordinacin pueden participar tambin grupos amino.
El metal se incorpora bajo la forma de complejo intermediario con un ligando dbil de tipo fosfato o fosfonaato. Cuando se
realiza una marcacin de este tipo, se debe formar primero un complejo intermediario dbil, para poder realizar la
marcacin. No se pone el reductor + el metal + el pptido, sino que primero se forma un complejo intermediario dbil y luego
se hace la sustitucin.
RIESGOS
Puede haber prdida de bioactividad si la cistena forma parte del sitio activo.
El agente reductor puede tambin daar la protena.

2) CONCEPTO PENDENT
Esta es la forma ms comn y exitosa de realizar la marcacin de
biomolculas (en particular biomolculas proteicas).
Se tiene una biomolcula a la cual se le agrega una serie de grupos
funcionales que unen al metal, llamado unidad quelante, en lo posible
una cadena (que puede ser una cadena hidrogenada o con algn otro grupo
funcional) que acta como linker o espaciador. La idea es tener al metal
lo ms separado posible de la parte biolgicamente activa de la molcula,
de forma de evitar que la formacin del complejo distorsione a la
biomolcula.
A la unidad quelante junto con el linker se lo llama Agente quelante
bifuncional. Bifuncional porque tiene una doble funcin: una que se une a la molcula y otra al metal. Hay muchos agentes
quelantes bifuncionales y se refieren a las molculas empleadas para la marcacin de molculas biolgicamente activas.

EJEMPLO
La cocana es un ejemplo porque hay un radiofrmaco llamado
Trodat, el cual se emplea para imgenes en el estudio de dopamina
para gente con Parkinson, cuya estructura deriva de la estructura de
la cocana (la cual interacciona con el sistema transportador de
dopamina).
Se puede observar que tienen una estructura similar, salvo que se

42
agreg una estructura espaciadora o linker (en este caso un solo carbono), y una unidad quelante con dos nitrgenos y dos
azufres, la cual une al metal.
En este caso el espaciador es muy pequeo debido a que esta molcula debe entrar al cerebro. Si la molcula es muy grande no
lo puede hacer. Este es un ejemplo en el cual cuanto ms lejos el Tecnecio mejor no se cumple. Intuitivamente, debido a lo
explicado anteriormente, uno pensara que es as ya que hay ms posibilidad de preservar la actividad de la molcula en sus
receptores, pero tambin se deben considerar otros aspectos como el transporte.

Para lograr el concepto Pendent se han desarrollado nuevos cores de Tc. Se busca que sean de pequeo tamao y
relativamente inertes para no alterar el comportamiento biolgico.
La marcacin utilizando estos cores se realiza casi sin excepcin mediante mtodo de sustitucin, preparando en primer
lugar el precursor ms adecuado.

Se estudiaron cules son las formas qumicas del tecnecio que favorecen la estabilidad y que son menos reactivos (por lo tanto
que afecten menos la actividad biolgica de los compuestos).
Como se vio en los ejemplos dictados a lo largo de la clase, la mayor parte de los compuestos empleados en la clnica de la
medicina nuclear son compuestos donde el Tecnecio est en estado de oxidacin +5 y bajo forma de mono-oxo. Esto tiene que
ver con la forma de marcacin; al ser en medio acuoso y usando Sn como reductor la forma qumica que se favorece es la
mencionada.
El core mono-oxo es bastante reactivo, por lo que no parece ser tan adecuado para tratar de mantener la actividad biolgica
de estos compuestos. Es por este motivo que se estudiaron otras formas qumicas del metal.

CORES DEL TECNECIO

El tecnecio forma distinto tipo de complejos de acuerdo fundamentalmente a su estado de oxidacin.
En cada uno de ellos adopta diversas configuraciones en su primera esfera de coordinacin, los llamados cores o ncleos,
alrededor de los cuales se acomodan un nmero variable de tomos donores de electrones de los ligandos que se desean
marcar.
Estos cores son relativamente inertes, no siendo alterados por sustitucin de los ligandos.

Como ya se mencion anteriormente, el Core se trata de la primera esfera de coordinacin del metal, donde se tiene grupos
pequeos unidos directamente al metal, dejando algunos sitios de coordinacin disponibles para que se pueda unir el ligando
deseado.
Luego de que se tiene el Core, normalmente en las etapas de sustitucin se prepara un precursor que tiene al metal en la
forma qumica deseada y se sustituye con el ligando de inters. En dicha sustitucin el Core no se altera.
Hay distintos tipos de Cores, dependiendo si se tiene al metal en estados de oxidacin altos o bajos.

Tc EN ESTADOS DE OXIDACIN ALTOS

Son metales duros y se unen con
ligandos duros grupos oxo, nitruro o
nitreno formando los cores. El metal es
un cido duro de Lewis que se debe unir a
bases duras de Lewis, que son aquellos
grupos pequeos y con carga elctrica
muy localizada.
Para tener N en vez de O en la primera
esfera de coordinacin con el metal, si
bien se va a trabajar en medio acuoso, se debe utilizar compuestos donadores de N.
De estos cores presentados a la derecha, el Nitreno (que es el que tiene el HYNIC; ver ms adelante), es el que ms se ha
usado para marcacin de molculas proteicas.
Quedan varias posiciones de coordinacin libres que se suelen llenar con diversos grupos donores del ligando a marcar.

Tc EN ESTADOS DE OXIDACIN BAJOS

Son metales blandos y se unen
directamente con ligandos blandos
generalmente aceptores como
isonitrilos, fosfinas o arenos.
Cuando se tiene al Tc en estados de
oxidacin bajos, muchas veces se tiene
directamente la unin del metal al ligando sin que haya una primera esfera de coordinacin. Esto es lo que pasa por ejemplo
en el MIBI.

43
 AGENTE BIFUNCIONAL HYNIC
Uno de los agentes bifuncionales empleado es el cido hidrazinonicotnico, o HYNIC, cuya estructura se
muestra a la derecha. Permite marcar biomolculas proteicas con alta eficiencia y elevada actividad
especfica.
El cido carboxlico terminal del HYNIC se puede conjugar con el extremo aminoterminal de una
protena o pptido. Por el otro lado, se forma un doble enlace Nitrgeno con el Tecnecio. El ligando
bifuncional HYNIC es monodentado, se une al Tecnecio por una sola parte cuando ste tiene otras 5
posiciones de coordinacin disponibles. Esto hace que se tenga que usar SIEMPRE un co-ligando que
complete la esfera de coordinacin.
La necesidad de usar un co-ligando es perjudicial de cierta forma, es decir, es el principal problema que presenta el HYNIC como
agente bifuncional, debido a que los co-ligandos utilizados tienen varias formas de unin posibles, se obtiene una mezcla de
distintas especies. No se obtiene un nico compuesto marcado sino que se tiene una serie de ismeros que se pueden inclusive
interconvertir unos en otros. En la mayora de los casos, esto no afecta significativamente a la biodistribucin ya que se marcan
molculas grandes. Sin embargo, el tener una mezcla compleja de estructura desconocida no es algo apreciado desde el punto
de vista farmacutico. Ms adelante se mencionan los distintos co-ligandos que se pueden usar.
Los productos resultantes son relativamente hidroflicos lo que favorece su depuracin o eliminacin del producto que no se
haya unido al receptor correspondiente. Esta propiedad tambin puede ser perjudicial si se buscara obtener un compuesto que
entre al cerebro; al ser tan hidroflico no atraviesa la barrera hematoenceflica.

Hay otros agentes bifuncionales que se pueden emplear para marcar

protenas. A la derecha se muestra un ejemplo donde se ven dos grupos
amino y un enlace Tecnecio dioxo. El pptido tiene una funcin cida que se
une al grupo amino.

COLIGANDOS MS COMUNES (para usar con el HYNIC)

Tris(hidroximetil)metilglicina = TRICINA cido etilendiamino-N.N-diactico = EDDA

Uno de los co-ligandos ms comunes es el TRICINA, que como se muestra a la izquierda, se pueden formar muchas especies
distintas. Lo mismo con el EDDA (derivado del EDTA), que se muestra ms a la derecha.

LIMITACIONES DEL CORE Tc-HYNIC

Posibilidad de formacin de mltiples ismeros
Desconocimiento de la estructura exacta de las especies formadas
Los complejos resultantes suelen ser negativamente cargados y no pueden atravesar barreras biolgicas como la barrera
hematoenceflica.

CORE Tc (V)-NITRURO
Las 4 posiciones de coordinacin disponibles pueden llenarse mediante 2 ligandos bidentados iguales o
diferentes, dando lugar a complejos simtricos o asimtricos.

Se ha utilizado ms en investigacin que en la clnica de la medicina nuclear.

44
 DISTINTOS TIPOS DE COMPLEJOS NITRURO

MARCACIN DE BIOMOLCULAS
La unin se realiza a travs del aminocido cistena por formacin de un complejo asimtrico.
Puede unirse a travs de los grupos donores NH2 y S o de los grupos O y S.
El complejo final presenta carga positiva o es neutro, respectivamente.
Tambin es posible formar un nitruro complejo 3 + 1 agregando la secuencia cys-cys al final de
la biomolcula (o con otra combinacin de aminocidos o pseudo-aminocidos).

Se pueden formar complejos de distintos tipos. Se pueden tener complejos simtricos, donde se
usa un ligando bidentado, unindose dos molculas del ligando al Core; se pueden tener
complejos asimtricos donde se tienen por ejemplo dos ligandos bidentados diferentes; se pueden
tener tambin complejos del tipo 3 + 1, donde se tiene un ligando tridentado y uno monodentado.

+
CORE [Tc (I)(CO)3]
Pequeo tamao.
Alta estabilidad frente a las reacciones de xido- reduccin debida al intenso campo de los ligandos
CO (que estabilizan mucho la estructura).
Alta estabilidad frente a la sustitucin tanto in vitro como in vivo.
Posibilidad de trabajar en medio acuoso

Se tienen tres molculas de monxido de carbono unidas directamente al metal, dejando tres posiciones de coordinacin
disponibles para la marcacin del ligando.
Se desarrollaron a partir de que un grupo suizo desarroll un mtodo para obtenerlos a baja presin, en medio acuoso (con
gases se suele trabajar a altas presiones). Se genera el CO in-situ. En este caso no se usa Sn como reductor, sino que se usa el
borohidruro de sodio, y si se trabaja con kit no se necesita reductor ya que el agente productor de CO in-situ tambin es reductor.

SUSTITUCIN MEDIANTE LIGANDOS TRIDENTADOS

+
En el caso del Core *Tc(I)(CO3)] , quedan tres posiciones de
coordinacin libres. La mejor opcin es que se sustituya con un ligando
tridentado, pero tambin existe la posibilidad de usar otros tipos de
grupos funcionales y ligandos.
La mejor combinacin es la presentada ms a la izquierda y abajo. Se
trata del aminocido histidina, donde se tiene una amina (un nitrgeno
aliftico), un nitrgeno aromtico y un cido carboxlico.

COMPLEJOS MIXTOS 2 + 1
Las 3 molculas de agua del precursor son sustituidas por la accin simultnea de un ligando bidentado y un
coligando monodentado.
La biomolcula puede conjugarse tanto a ligando como a coligando.

Tambin existe la opcin de usar ligandos bidentados, pero si se usa este tipo de ligandos, queda una posicin de
coordinacin ocupada por una molcula de agua; como estas molculas de agua son muy lbiles, no es conveniente que quede
as porque puede ocurrir luego una sustitucin in vivo. Por lo tanto, lo mejor es realizar lo que se llama la formacin de complejos
2 + 1, es decir, usar la combinacin de un ligando bidentado y uno monodentado. De esta forma no queda ninguna unin lbil en
el complejo que pueda luego sustituirse al ser inyectado.

45
LIGANDOS Y COLIGANDOS POSIBLES

Tc y Re forman en la mayora de los casos compuestos de coordinacin

anlogos y con un comportamiento biolgico que se espera sea muy
similar.

El Tecnecio y el Renio, por sus caractersticas qumicas, forman con los

mismos ligandos compuestos que son casi siempre de igual estructura e
igual comportamiento biolgico.
El principal problema o diferencia que se tiene con el Renio es que tiene
mayor potencial de oxidacin reduccin, lo cual hace que se requieran
condiciones ms drsticas para que se d la sustitucin. Adems, la
posibilidad de oxidacin de compuesto es mayor. Hay que usar
condiciones ms drsticas de reduccin y antioxidantes para evitar la
posterior oxidacin.

CONCEPTO PENDENT EN COMPUESTOS DE Re

Las marcaciones ms comunes del Renio y que han llegado a la

clnica son los pirofosfonatos, algunos coloides y algunos pptidos.
188 186
Tanto el Re como el Re son emisores beta, por lo tanto se usan
para terapia. Los fosfonatos por ejemplo se usan para la terapia
paliativa del dolor seo.
Los coloides se inyectan en las articulaciones en personas con
problemas de inflamacin (artritis por ejemplo). Se busca tener una
partcula que no pase a la circulacin sistmica, sino que quede all
retenida.
188
Re(CO)3-Dipicolylamino-Alendronato a la derecha.
46
 PAUTAS PARA LA MARCACIN CON RENIO
Los istopos de Re utilizados estn disponibles bajo forma de perrenato ReO4 .
-

Los mtodos de marcacin con Re son anlogos a los utilizados con Tc.
Debido al mayor potencial redox las condiciones de reduccin utilizadas deben ser ms enrgicas y existe mayor riesgo de
reoxidacin. Se deben usar mayor cantidades de reductor, Sn.
-
Impurezas esperables: ReO4 , ReO2. nH2O
Molculas de inters: Bifosfonatos, DMASA, coloides, pptidos, anticuerpos.

PRINCIPIO DE EXPANSIN DE LA ESFERA DE COORDINACIN

RESULTADOS
Con oxalato 90%
Sin oxalato 30%

La reduccin del Renio es ms difcil debido a su ms alto potencial de

oxidacin reduccin. Sin embargo, la geometra del compuesto influye
tambin en la energa necesaria para la reduccin.
Se parte de Perrenato, que tiene una geometra tetradrica y se debe llegar
a un complejo que es penta o hexa coordinado, es decir que adems de
reducirse debe cambiar sus caractersticas de coordinacin. Este es uno de los
componentes que dificulta la reduccin de los compuestos.
Lo que se propuso fue que se emplee un intermediario que tuviera al Renio
en Estado de oxidacin +7 (es decir un Renio para el cual no fuera necesaria la
reduccin), pero que ya tuviera la geometra final, penta o hexa coordinado. El proceso se divide en dos partes. Un primer paso
donde solo de cambio de geometra y un segundo paso solo de reduccin. De esta forma se logra, con menores cantidades de
reductor, un mejor rendimiento de marcacin.
Se lo denomina principio de expiacin de la esfera de coordinacin porque primero se expande la esfera de 4 a 6 y luego se hace
la reduccin. Sera una forma de mejorar las marcaciones con Renio.

La marcacin de fosfonatos como MDP con Tc se suele hacer con el mtodo directo, donde parte de los grupos OH se unen al
metal. As, parte de los grupos que se necesitan para unirse al hueso (en tratamientos seos), son tambin los grupos que se
necesitan para unir al metal. Esto podra disminuir la captacin y su efectividad. Por este motivo se realiz este trabajo de un
grupo que realiz una marcacin de un fosfonato pero utilizando el concepto Pendent. En vez de hacer la marcacin directa, se
agrega un espaciador. As, todos los grupos fosfonato quedan libres para unirse al hueso y la captacin fue mucho mejor.

3) CONCEPTO INTEGRADO
En el caso anterior, el caso pendent se le cuelga a la biomolcula
el quelante bifuncional (pendent en ingles significa colgado).
En este caso, el concepto integrado, implica que se forme un
complejo que tenga una estructura similar a la biomolcula, que la
imite (en el caso del ejemplo de la izquierda se muestra con Renio,
pero tambin podra ser con Tecnecio).
Como se ve a la izquierda, se tiene un complejo formado por dos
ligandos bidentados que estructuralmente es parecido a la
dihidrotestosterona.

47
 Se muestra el trabajo de la izquierda como ejemplo
del concepto Integrado. Lo que se hace es utilizar
complejos tricarbonlicos para mimetizar la estructura
de benzamidas, compuestos que se captan en
melanomas.
Se utiliz un grupo Ciclopentadienilo, no es un anillo
aromtico, es un ciclo que tiene una nube de
electrones. La coordinacin no se da con un grupo
funcional sino que se da directamente con la nube de
electrones.

COMPUESTOS ESTUDIADOS

Si se observa a la izquierda se puede ver que

estructuralmente el complejo se parece a las benzamidas.

EL CICLOPENTADIENILO COMO LIGANDO

El ligando tridentado Cp (Ciclopentadienilo) es
pequeo, tiene bajo peso molecular y en
medio cido forma un anin soluble capaz de
coordinar al Tc.

En medio cido, el Ciclopentadienilo tiene un

anin con una nube de electrones deslocalizada
que puede actuar como ligando tridentado y
unirse al tecnecio en estado de oxidacin +1.

EVALUACIN BIOLGICA

Buenos resultados, mostrando buena marcacin y buena captacin.

48
 CONTROL DE CALIDAD
Serie de anlisis destinados a comprobar la identidad, calidad y cantidad de todos los ingredientes. Tambin deben demostrar
que la tecnologa de formulacin y manufactura del producto es la correcta.

PARA MOLCULAS MARCADAS

Deben realizarse 2 tipos de controles:
Qumicos y radioqumicos
- Identidad del Radionucleido
- Medida de actividad
- Control de Pureza
Farmacuticos (los mismos que se le realizan a cualquier inyectable)
- Esterilidad
- Apirogenicidad
- Control de partculas, etc.

Identidad del Radionucleido

Se controla por espectrometra gamma normalmente. La energa de las emisiones gamma permite identificar.
Este anlisis es realizado normalmente por el proveedor del radionucleido. Ms adelante en el curso, cuando se vean las
marcaciones con C y con F, en la produccin PET, por tratarse de radionucleidos con perodos de semidesintegracin muy
cortos, se ver que el fabricante es la propia farmacia, por lo que en este caso si se realiza el control de identidad en la
farmacia. En el caso de Tecnecio, el fabricante del generador garantiza que se trata de dicho radionucleido y no es necesario
realizar la identidad.

Medida de actividad
Se realiza utilizando un calibrador de dosis (cmara de ionizacin; da la actividad absoluta) o contador de centelleo slido
previamente calibrado. El caso del centelleo solido no muy factible por los niveles de actividad que se suelen medir; en las
clnicas de medicina nuclear se usan actividades altas que saturaran este detector.

Control de pureza
El trmino pureza tiene varios significados:
Pureza qumica
Se define como la fraccin de la masa total presente en la forma qumica deseada.
Impurezas esperables:
- Impurezas qumicas de ligandos, agentes reductores y otros productos empleados en la marcacin
- In Al +3 en eludos de generadores de Tc y Re. Viene de posibles prdidas de la columna del generador. Es una
impureza que puede ser perjudicial para la marcacin. Se controla por colorimetra.
Pureza Radionucledica
Es la fraccin de la actividad total de la muestra correspondiente al radionucleido de inters.
Se pueden determinar por espectrometra gamma. En el caso del Tecnecio 99 se vio un mtodo alternativo con
blindaje selectivo (ver prctico de Fundamentos de la Radioqumica).
Una particularidad de esta pureza, es que vara con el tiempo. Como las impurezas son otros radionucleidos con
perodos de semidesintegracin diferentes, puede pasar que vare. En el caso del Tecnecio, si se tiene Molibdeno, la
pureza radionucledica va empeorando, ya que aumenta la impureza al ir decayendo el Tc a Mo. Se debera
calcular hasta que hora se puede emplear el radiofrmaco sin que la impureza supere lmites aceptados. En el caso
13 18 13
de otros radionucleidos, como ser el caso del N y F (ver ejercicio de Fundamentos de la Radioqumica), el N que
18
puede aparecer como impureza del F tiene un perodo de semidesintegracin mucho ms corto, 9 minutos frente a
18
110 minutos del F, por lo tanto, dejar pasar un cierto tiempo puede ser la forma de lograr la pureza radionucledica
adecuada.
Las impurezas radionucledicas esperables son otros radionucleidos vinculados con el mtodo de produccin que
se utiliz.
99m 99
- Para el Tc la principal impureza de este tipo es el Mo
188 188 192 191
- Para el Re las impurezas esperables son: W, Ir, Os, etc.
Pureza Radioqumica
Es la fraccin de la actividad total de la muestra presente en la forma qumica deseada. En el caso de un
radiofrmaco, la forma qumica deseada es la del complejo especfico que se est preparando.
Se controla por mtodos in vitro e in vivo. Los mtodos ms comunes de control son los cromatogrficos (in
vitro). A nivel de la clnica de la medicina nuclear, los radiofrmacos de Tecnecio se controlan con mtodos
cromatogrficos en papel, mtodos con poco poder de separacin pero suficiente para diferenciar las impurezas
clsicas de estos radiofrmacos, ya que tienen caractersticas qumicas muy diferentes al radiofrmaco.
99m
Las principales impurezas radioqumicas para molculas marcadas con Tc son el Pertecneciato, el coloide y los
complejos secundarios.

49
Mtodos in vitro
Cromatografa en papel o capa fina
Cromatografa en columna (intercambio inico y gel filtracin)
Electroforesis. Mtodo muy lento usado a nivel experimental y de investigacin pero no a nivel de la clnica.
Extraccin por solventes
HPLC. Mtodo ms sensible y con un poder de separacin mayor que el caso de la cromatografa en papel; til para los
casos en que se preparan radiofrmacos ms complejos.

Cromatografa en papel
Generalmente necesario emplear un sistema de al menos 2 cromatografas para poder cuantificar todas las impurezas posibles.
Ejemplos para control de molculas hidroflicas
Soporte: papel Soporte: papel
Fase mvil: acetona Fase mvil: NaCl 0.9%
Especie Y Rf: Especie Y Rf:
Complejo 0 Complejo 0.9 -1
Pertecneciato 0.9- 1 Pertecneciato 0.9- 1
Coloide 0 Coloide 0

Cuando se tienen radiofrmacos hidroflicos (ver radiofrmacos de primera generacin) se suele emplear el sistema de
cromatografas all mostrado.

HPLC
Es un mtodo sensible, verstil y confiable para sistemas en que aparecen otras especies.
99m
Tc-MAG3 ECD

Errores posibles:
Especies retenidas en la columna. El coloide queda retenido en la columna. Si se quiere cuantificar el coloide, se debe
realizar una cromatografa en papel, exclusivamente.
Exceso de Sn. Este tambin queda retenido en la columna y puede falsear los resultados
posteriores.
CONTROL POR BIODISTRIBUCIN
Permite conocer el comportamiento biolgico y estabilidad de compuestos nuevos.
Sirve para evaluar en forma cualitativa la presencia de impurezas como TcO4 o coloide.
-

No se realiza rutinariamente pero si en etapas de desarrollo y en el control de nuevas partidas de

kits.
Es necesario determinar la actividad en el rgano blanco y calcular la relacin con rganos o
muestras no blanco de importancia como sangre, hgado, pulmn, tiroides, etc.
Puede realizarse por mtodos no invasivos (imgenes centellogrficas) o invasivos (diseccin).

CMARAS PARA ANIMALES

En el caso de Radiofarmacia, a diferencia de los

controles de medicamentos clsicos, no se tiene
estndares; pueden haber estndares para el ligante, pero no para el complejo
(no siempre tienen el mismo comportamiento cromatogrfico). Es por esto que
no se puede estar 100% seguro de que el compuesto observado es el que se
busca. Por este motivo, todava se emplean los controles por biodistribucin de
los radiofrmacos. Es una forma de verificar que el compuesto va a los rganos
que se quiere que vaya. As, para algunos radiofrmacos, la Farmacopea pide
que se haga el control en animales.
Lo que se ve es lo que se llama rganos blanco, es decir, cules son los
rganos en los cuales se debera acumular y cules son los rganos en los que no debera. La farmacopea establece as una
relacin entre ambos e indica el porcentaje aceptado para determinados rganos blanco.

50
 En etapas de investigacin, la biodistribucin puede mostrar problemas como por ejemplo la inestabilidad in vivo. No se va a
usar un estudio en animales para ver si se tiene por ejemplo coloides, o Pertecneciato (esto se ve in vitro), pero si se puede
observar que el compuesto es estable in vitro y no in vivo, es decir, que se genera el Pertecneciato o el coloide una vez que est
dentro del animal. Alta actividad en irado o en tiroides pueden ser indicativos de que el compuesto se descompone in vivo.

Normalmente los estudios de biodistribucin se realizan por diseccin (como se realiza en el Prctico), midiendo la actividad de
los distintos rganos. Tambin existe la posibilidad de hacer imgenes del animal en cmaras especiales (se pueden realizar en
cmaras para humanos pero las imgenes no son tan buenas).

RESUMEN
La marcacin con Tc o Re se realiza mediante la formacin de compuestos de coordinacin de dichos metales.
La primera etapa suele ser una reduccin y el SnCl2 es el reductor ms ampliamente utilizado.
La marcacin puede realizarse por reduccin directa de TcO4 o ReO4 o mediante sustitucin utilizando un precursor
- -

adecuado.
Los principales puntos para lograr una marcacin exitosa son: utilizar eludos frescos, optimizar la relacin ligando/reductor y
eliminar oxgeno disuelto en el medio de reaccin.

51
 VER BIBLIOGRAFA DE LA CTEDRA: ESTRATEGIAS DE MARCACIN

52
CLASE 6: MARCACIN CON GALIO Y OTROS RADIOMETALES
JUEVES - 02/06/2016

Algunos radiometales de importancia en Medicina Nuclear

Galio-68 Diagnstico (PET)
Indio-111 Diagnstico (SPECT)
Cobre-64 Diagnstico (PET), Terapia
Itrio-90 Terapia
Lutecio-177 Terapia
68 99
El Ga es uno de los radionucleidos ms importantes en Radiofarmacia al igual que el Tc. Es usado en el diagnostico PET
111 64 90
como emisor +. El In tambin es usado para diagnstico, el Cu se usa tanto para diagnostico como para terapia, el Y se ha
177
usado por largo tiempo para terapia, mientras que el Lu est cobrando gran relevancia tambin en terapia. Si se trata de
diagnstico se usan emisores gamma o +, mientras que para terapia se usan emisores -.

GALIO .

Abundancia natural
Ga; 60,1%
69

Ga; 39,9%
71

Radioistopos del Galio en Radiofarmacia

Modo de Perodo de E+ mx.

Radioistopo E (KeV) Produccin
decaimiento semidesintegracin (KeV)

68
Ga + y CE 68 minutos 1889 1077 (3%) Generador

93 (39%)
67
Ga CE 78 horas - 185 (21%) Generador
300 (17%)
833 (6%)
66
Ga + (75%) y CE 9,5 horas 4153 1039 (37%) Generador
275 (23%)

68
Por qu el Ga para PET?
Qumica de coordinacin bien conocida.
T compatible con la farmacocintica de la mayora de los radiofrmacos de bajo peso molecular.
Disponibilidad a partir del generador Ge/ Ga.
68 68

68 67 66 68
El radioistopo ms utilizado del Galio es el Ga, aunque otros tambin utilizados en Radiofarmacia son el Ga y Ga. El Ga
18
es un emisor + con un tiempo de semidesintegracin de 68 minutos, no es de los ms largos ni de los ms cortos, el F tiene un
11
tiempo de 109 minutos mientras que para el C es de 20 minutos por lo cual 68 minutos es un tiempo razonable. Tiene una
energa + intermedia de 1889 keV y presenta una gamma propia de 1077 keV con un bajo porcentaje (3%), adems de la de 511
68 99m
keV. La gran ventaja del Ga es que se puede obtener desde un generador, similar al Tc.Obtener un emisor de positrones de
un generador es una gran ventaja, me evita el uso del ciclotrn. Adems tiene un qumica de coordinacin bien conocida lo cual
es importante para marcar pptidos.
Las marcaciones con Ga son todas iguales, se generan intercambios de estados de oxidacin, a diferencia del Tc que tiene
mltiples estados de oxidacin que depende de que reductor y ligando utilice.

Tomografa de emisin de positrones

68
El Ga es deficiente en neutrones, y por
lo tanto, inestable.
Si se quiere hacer una tomografa de
68
emisin de positrones, el Ga es deficiente
en neutrones por lo tanto es inestable y
decae por + en un 89% y por captura
electrnica en un 11%. Se cuenta con un
detector que capta las desintegraciones y
a partir de eso se construye una imagen.

53
 QUMICA EN SOLUCIN ACUOSA
Estado de oxidacin: Ga(III)
El estado de oxidacin ms estable en solucin acuosa es el +3.
En solucin acuosa, el Ga(III) libre hidratado slo es estable bajo condiciones cidas.
pH = 3-7: Ga(OH)3
Formacin de hidrxido de galio insoluble en concentracin mayor a la nM y en ausencia de agentes estabilizantes
- Como sabemos se encuentra debajo del Aluminio, es un metal anftero y cuando se le aumenta el pH por arriba de 4
llegando a pH neutro forman el hidrxido y precipita, esto sucede con cualquier metal anftero a pH neutro.
-
pH mayor a 7: Ga(OH)4
El hidrxido de galio slido se redisuelve
- Cuando se pasa a medios bsicos este tipo de metales se redisuelven ya que forman hidrxidos solubles.

O sea, que bajo forma cida lo tengo como catin hidratado libre, a pH entre 3 y 7 lo tengo bajo hidrxido del cual se le llama
coloide y precipita bajo forma coloidal y a pH bsicos se redisuelve como tetrahidrxido de Galio. Bajo qu forma vamos a
querer tenerlo para hacer las marcaciones? Bajo forma cida ya que est estable, cuando se inyecta debe estar a pH neutro,
se tiene un rango muy acotado de pH, una cosa es como lo tengo que tener en la formulacin pronto para inyectar y otra es
como lo tengo que tener para marcar, las condiciones de marcacin no tienen por qu ser las condiciones finales en las cuales
voy a administrar al paciente, eso es igual para cualquier radiofrmaco, en algunos casos puede coincidir pero no tiene por
qu.

QUMICA DE COORDINACIN
cido duro de Lewis (donores: S, N, O)
Similar al Fe
Nmero de coordinacin 6
Esfera octadrica

El Ga es un metal por lo tanto los radiofrmacos que forme a partir de l van a ser complejos de coordinacin. En estos ltimos
el Galio se comporta como un cido duro de Lewis y va a querer interaccionar con donores duros como S, N u O. El nmero de
coordinacin es 6, por lo que presenta seis lugares de coordinacin y forma una esfera octadrica. Uno de los grandes problemas
que tiene es que es muy similar al hierro en cuanto a su estado de oxidacin y su radio, a la hora de la marcacin por lo tanto se
da una competencia. El hierro es un material muy abundante, se encuentra en todos lados, esptulas, en algunos reactivos, el
vidrio contiene hierro, por lo que hay que cuidarse del hierro, no se puede usar esptulas de metal ni nada metlico hasta que
este marcado, despus de marcado que ya est estable es otra cosa. Se puede usar material de plstico.
68 68
Generador Ge/ Ga

Padre: Ge(IV)
68

Matriz: orgnica o inorgnica (los de uso actual son de TiO2).

Elucin: diaria, con solucin de HCl diluido.
Forma qumica bajo la cual se obtiene en Ga: Ga(III) libre hidratado.
68 68

Vida media del generador: 2,5 aos.

Problemas frecuentes:
68
- Baja concentracin del Ga.
68
- Presencia de contaminantes ( Ge y otros iones metlicos no radiactivos).
68 68
Como dijimos el Ga se obtiene de un generador, el padre es el Ge y tiene 271 das de perodo de semidesintegracin y decae
68
a Ga. El padre al tener un perodo de semidesintegracin muy largo este generador me va a servir por mucho tiempo, aunque la
actividad que se eluye es ms baja que en el caso de Tc, me da para administrarle a 2 o 3 pacientes nada ms, pero se puede
eluir diariamente cada 4 o 5 horas. Se obtiene bajo la forma de cloruro de Galio hidratado y se debe eluir con un cido debido al
hecho de que es estable en medio cido, en general se usa cido clorhdrico 0,1 o 0,05 M dependiendo del tipo de generador.

MTODO DE PURIFICACIN Y CONCENTRACIN DEL ELUDO

Adems de la baja concentracin que se
obtiene de eludo, otro problema que se tiene
68
es la presencia de contaminantes como Ge y
otros iones metlicos no radiactivos. Esto trajo
como consecuencia la necesidad del desarrollo
de un mtodo de purificacin y pre-
concentracin del eludo, basado en
intercambio inico.

54
 Estrategias para el desarrollo de radiofrmacos de Galio
Luego que tengo el eludo voy a coordinarlo con mi
molcula biolgica para formar mi radiofrmaco. La
estrategia de marcacin se basa en usar estructuras
moleculares capaces de, por un lado, coordinar al metal
por medio de grupos donores de electrones adecuados y,
por otro lado, unirse covalentemente a la molcula que se
quiera marcar por medio de grupos qumicos capaces de
reaccionar con grupos presentes en la molcula en
cuestin. Se tiene una unidad quelante donde se tiene un
agente bifuncional. Hay dos tipos de agentes
bifuncionales para el galio: los de cadena abierta y
cclicos. Los ms utilizados son los cclicos, en general hexadentados ya que yo quiero que mi unin quelante metal sea lo ms
estable posible, aunque existen casos de tetra- y pentadentados.

Agentes bifuncionales para el Galio

Ligandos polidentados
Cadena abierta Hexadentados
Cclicos Tetrapentadentados

Agentes bifuncionales de cadena abierta

Baja estabilidad in
vivo e in vitro

Agentes bifuncionales cclicos

Los agentes bifuncionales de

cadena abierta que se han usado
son el DTPA y EDTA, aunque estos
complejos mostraron baja
estabilidad in vivo e in vitro. Por
esto se empez a usar agentes
bifuncionales cclicos como el
NOTA, NODASA, los cuales
presentan tomos de N en sus
anillos y cidos carboxlicos libres.
En ese ciclo se va a tener que
acomodar el tomo de Galio
coordinando con los Nitrgenos y
en general con dos cidos
carboxlicos, uno por arriba y otro
por abajo, de la esfera de
coordinacin. Entre estos agentes
lo que cambia es el nmero de
tomos en el anillo.

Uno de los ligandos clsicos para

el Galio es el DOTA, este es el
agente bifuncional ms utilizado.

55
 FACTORES A TENER EN CUENTA
Presencia y tipo de buffer
pH
Temperatura y modo de calentamiento
Modo de marcacin
Cantidad de precursor
Eludo del generador

Modo de calentamiento: MICROONDAS

Incrementa el rendimiento.
Acorta los tiempos de reaccin.
Genera menos productos secundarios.
Incrementa la reproducibilidad.

Obviamente voy a usar un buffer para mantener fijo el pH por todo lo que ya vimos que puede cambiar de forma. Voy a tener
que trabajar con temperatura para aumentar la cintica de la reaccin para trabajar en un tiempo adecuado pero hay que tener
cuidado porque vamos a marcar pptidos y no queremos que se descompongan por accin de la temperatura. El modo de
marcacin se refiere a que agente quelante voy a utilizar, hay algunos que precisan ms calentamiento que otros. El DOTA es el
ms utilizado y se calienta alrededor de 100C por 5 minutos, el NOTA se utiliza a temperatura ambiente, se calienta un poco
para agilizar la reaccin. Importa la cantidad de precursor, los pptidos se van a unir a un receptor, si pongo mucho se satura, si
pongo mucha masa de mi ligando frio me baja la actividad especfica; hay una actividad especfica ptima. Adems tengo que
tener en cuenta con que cido y concentracin voy a eluir, que tipo de buffer prepar. Estas sales y reactivos que yo utilice deben
ser de buena calidad ya que como dijimos el hierro compite con el galio y este est presente en varios reactivos, cuanto ms
impuro los reactivos ms competencia va a haber y por lo tengo ms ligando voy tener que poner. Otro parmetro es el modo de
calentamiento, se pude calentar por la forma convencional o por microondas. Con este ltimo se incrementan los rendimientos,
se acortan los tiempos de reaccin, se generan menos productos secundarios y se incrementa le reproducibilidad. La forma
convencional calienta desde afuera hacia adentro mientras que usando microondas calentamos desde adentro hacia afuera.
Cuando se eluye el Galio puede pasar que quede como contaminante el padre Germanio, por esto se hace el control de calidad. Si
la concentracin de Galio obtenida es ms baja de la que yo quiero se permite preconcentrar, una forma es mediante el uso de
altas concentraciones de cloruros que se pueden lograr con cido clorhdrico, se forma el anin complejo cloruro de Galio, lo
puedo pasar por una resina de intercambio aninico para poder sacarles las impurezas entre ellas el Germanio y me quedo con el
Galio unido a la resina, luego con agua desionizada directamente lo eluyo y obtengo el Galio libre de Germanio y libre de
impurezas.

El mtodo de purificacin est basado en lo siguiente: en soluciones con cido clorhdrico, el galio forma fuertes complejos con
el anin cloruro. Los correspondientes complejos [GaCl6] 3- y [GaCl4] - son fuertemente adsorbidos en una resina de intercambio
aninico. Estos aniones se forman a concentraciones de cido clorhdrico mayores a 3 M, mientras que el germanio
prcticamente no se adsorbe en soluciones de concentraciones de cido clorhdrico por debajo de 5 M. El eludo tambin se
purifica de otros metales como el Al(III) e In(III) ya que su adsorcin disminuye rpidamente con el aumento de la concentracin
de cido y se mantiene insignificante por encima de 3 y 1 M, respectivamente. Tambin se logra la purificacin del titanio que
pudiera ser arrastrado, en un 90%. La elucin del galio retenido en la columna se realiza con agua desionizada.

Mdulos automatizados de sntesis

Sistema Gallea
Mdulo de sntesis Fastlab (FDG).
Cassette de sntesis descartable.

Recientemente se ha desarrollado el Sistema Gallea. Bsicamente consiste en un

mdulo al cual se le conecta un Cassette y que est dirigido por medio de un software
instalado en una PC cercana. El cassette consiste en una estructura plstica que
contiene un sistema de vlvulas y jeringas al cual se le conectan tubos y viales con
reactivos necesarios para la sntesis. El cassette contiene conexiones hacia desechos,
vial de reaccin, vial donde se colocar el producto final, soluciones y reactivos.
Tambin existe la conexin hacia y desde el generador, y el cartucho de intercambio
aninico para realizar la concentracin y purificacin del eludo.

56
 Control de la pureza radioqumica
Diseo del mtodo de control de PR
Propiedades fisicoqumicas del radiofrmaco.
Impurezas radioqumicas que pueden aparecer:
68
Ga libre HPLC y TLC
68
Ga(OH)3 TLC

Luego de realizado el marcado tengo que hacer el control de la pureza radioqumica. Las principales impurezas que pueden
aparecer son el Galio libre que no reaccion o hidrxido de Galio que se forma a partir del Galio libre que no reacciono cuando se
aumenta el pH. Lo que generalmente se hace es preparar un buffer de pH 4 4,3 donde se pone el eludo del generador y el
precursor, el pptido don el DOTATATE, se calienta el tiempo necesario, aproximadamente 10 minutos, para formar el complejo
Galio-DOTA-pptido. Luego generalmente se hace pasar por un cartucho C18 de extraccin en fase slida donde quedan
retenidos los pptidos y lo que no se marc sigue de largo y por ltimo se eluye el cartucho con etanol y otra elucin con suero
fisiolgico 0,9% de NaCl para llevar la concentracin de etanol a un valor aceptable para inyectables, donde lo que se permite es
una concentracin de etanol de un 10%.

El control de la pureza radioqumica de los radiofrmacos de 68Ga involucra tcnicas de HPLC y cromatografa en papel o TLC.
Para el correcto diseo del control de pureza radioqumica, es importante conocer las impurezas radioqumicas que aparecen con
frecuencia en las marcaciones con este metal, as como tambin las principales propiedades fisicoqumicas del radiofrmaco en
68
cuestin. El Ga libre suele ser una impureza radioqumica muy frecuente en las marcaciones, ya que en muchos casos el
rendimiento de la marcacin no es del 100%. ste puede ser detectado por HPLC o TLC, siendo el primer caso el ms frecuente. El
68
hidrxido de galio, Ga(OH)3, es la segunda de las impurezas ms comnmente encontradas en las marcaciones y por ser un
coloide, no puede ser determinado mediante un sistema de HPLC, ya que ste queda retenido en las columnas. Es por ello que en
este caso se requiere un sistema de TLC para su determinacin.
Lo ms usual es un tratar encontrar un sistema que separe el coloide y que tu pptido marcado corra con el frente y que este
quede retenido en el origen el coloide junto con el hidrxido de Galio. Por HPLC puedo ver el cloruro de galio solo, mientras que
por TLC veo cloruro de galio ms el coloide, pero con el dato obtenido por HPLC puedo saber cunto tengo de coloide. Puede
pasar que en HPLC salga un pico lindo de 100% pero en realidad no estoy viendo que tengo coloide, por esto adems de
controlarse por HPLC se debe controlar por TLC.

APLICACIONES
El octreotide y sus derivados son pptidos anlogos a la Somatostatina, que se une a los receptores de Somatostatina
sobreexpresados en algunos tumores neuroendcrinos. Radiofrmacos basados en este tipo de pptidos se han desarrollado
obtenindose muy buenos resultados. Uno de los primeros en surgir fue el 68Ga-DFO-octreotide, que mostr tener una alta
captacin tumoral y en corteza cerebral de ratas, aunque los estudios clnicos en humanos fueron poco prometedores por la baja
depuracin sangunea y elevada unin a protenas plasmticas. Sin
68
embargo, se han desarrollado tambin otros compuestos, como ser Ga-
68 68 68
DOTATOC ( GaDOTA-Tyr3 -octreotide), Ga-DOTATATE ( Ga-DOTA-Tyr3
68 68 68
-Thr3 -octreotide), Ga-DOTANOC ( Ga-DOTA-NaI3 -octreotide) y Ga-
DOTA-lanreotide. Con pequeas variantes entre ellos, en su mayora
mostraron buenos resultados tanto in vitro como in vivo.

DOTATOC - [DOTA-D-Phe1-Tyr3]-Octreotide
Pptido cclico anlogo a la Somatostina, se une a los receptores de
Somatostina sobreexpresados en algunos tumores neuroendcrinos.
En etapa clnica de investigacin
57
Otros derivados de Somatostina
3
DOTANOC: [DOTA,1-NaI ]-octreotide
3 8
DOTATATE: [DOTA-Tyr -Thr ]-octreotide
3 8
DOTA-lanreotide: [DOTA-2-NaI, Tyr , ThrNH2 ]-octreotide

Tambin se han diseado radiofrmacos basados en DOTA conjugado a pptidos derivados de la hormona alfa-MSH, con
afinidad por receptores MC1R, sobreexpresados en melanoma. stos mostraron una alta captacin tumoral y baja retencin
renal. Otros radiofrmacos tambin basados en DOTA se han conjugado a derivados de la bombesina, con una elevada tasa de
internalizacin en lneas celulares con receptores de bombesina AR4-2J. Los resultados mostraron una alta captacin tumoral as
como tambin en rganos que poseen este tipo de receptores (intestino, pncreas).

DOTA-hEGF, I. Velikyan, et. al.

Elevada afinidad in vitro sobre dos lneas celulares con EGFR.

Biodistribucin: buena acumulacin del radiofrmaco en tejidos que expresan el receptor.

El EGFR se encuentra sobreexpresado en algunos tipos de tumores.

Derivados de alfa-MSH
Hormona melanocito-estimulante.
Su receptor se encuentra sobreexpresado en melanoma.
Algunos pptidos derivados de esta hormona han sido conjugados a DOTA y marcados con 68Ga. Los resultados mostraron
alta captacin tumoral en animales, y baja captacin renal.

Derivados de Bombesina
Su receptor se encuentra presente en SNC y tracto gastrointestinal, adems de estar sobreexpresado en algunos tumores.
Algunos pptidos derivados de la bombesina conjugados a DOTA mostraron alta y especfica captacin en modelos animales
con tumor.

INDIO .

Modo de Perodo de
Radioistopo E (KeV) Produccin
decaimiento semidesintegracin
111
In y CE 2,83 das 173,247 Ciclotrn

114m 113m
In, In

Similitudes con el Galio

QUMICA EN SOLUCIN ACUOSA:
Estado de oxidacin +3.
Sufre hidrlisis a pH mayor a 4, formando In(OH)3, anftero.
QUMICA DE COORDINACIN:
cido duro de Lewis: donores con N-aminas, O-carboxilatos.
Similar al Fe(III).
AGENTES BIFUNCIONALES:
Los radiofrmacos de In(III) utilizan los mismos agentes bifuncionales que los utilizados en la sntesis de radiofrmacos de
Ga(III).
MARCACIN
La marcacin se produce por incubacin con el ligando en condiciones de pH y temperatura adecuadas sin necesidad de
reduccin previa.

Diferencias con el Galio

Tamao y densidad de carga: El Indio presenta mayor tamao y densidad de carga
Ga(III): 0,65 A

58
 In(III): 0,92 A
Nmero de coordinacin: Son distintos pero utilizan mismos ligandos
Ga(III): 6
In(III): 7 u 8
Diferente estructura del complejo final ya que el nmero de coordinacin es distinto.
Diferente comportamiento biolgico.
68 111
Ej.: Ga-DOTATOC y In-DOTATOC

Aplicaciones
Marcacin de clulas: LEUCOCITOS
Las clulas se vuelven a
inyectar al paciente, y son
utilizadas para identificar
sitios de inflamacin aguda
e infeccin.

Dentro de los desarrollos

ms relevantes, la
marcacin de leucocitos es
una de las ms destacadas.
La acumulacin de estas
clulas en sitios de infeccin
e inflamacin es bien
conocida en medicina, por lo
que la marcacin de stas
111
con In es una importante herramienta para el diagnstico de focos infecciosos e inflamatorios en pacientes. El procedimiento
de marcacin consiste en la extraccin de una muestra de sangre del paciente, la posterior separacin de leucocitos y la
correspondiente marcacin de los mismos. Una vez realizada esta etapa y comprobada la viabilidad de las clulas luego del
proceso, stas se vuelven a inyectar al paciente, al cual se le tomarn las imgenes que permitan hacer el diagnstico.
Este procedimiento se debe hacer bastante rpido y en condiciones aspticas.

Marcacin de PLAQUETAS

Las plaquetas se vuelven a inyectar

al paciente, y son utilizadas para
diferenciar trombocitopenias
causadas por defectos en la
produccin o destruccin
plaquetaria, por medio de sucesivas
extracciones a diferentes tiempos.

De la misma manera, es posible

marcar plaquetas en lugar de
leucocitos. El procedimiento es
bsicamente el mismo y el
mecanismo de marcacin tambin
involucra la primera fase con oxina. La indicacin para este estudio es la diferenciacin de las distintas causas de
trombocitopenia. Una vez inyectadas las plaquetas marcadas al paciente, se realizan sucesivas tomas de sangre a diferentes
tiempos determinados, y se determina el tiempo de vida media efectivo de la actividad en sangre, que normalmente es de 72
das. Un T1/2 disminuido es seal de defectos en la destruccin aumentada de plaquetas.

Marcacin de anticuerpos
111
In-ProstaScint
Anticuerpo IgG murino contra el antgeno prosttico PSMA (prostatic specific membrane antigen).
Conjugado a DTPA.
Se utiliza para determinar el avance del cncer prosttico una vez confirmado el diagnstico, para decidir el tratamiento
(prostactectoma o terapia hormonal).
Tambin se evala la recurrencia.
111
In-OncoScint
Anticuerpo contra el antgeno TAG-72, presente en el 94% de adenocarcinomas colorrectales y el 100% de cncer de ovario.
Conjugado a DTPA.
Se utiliza para diagnstico de la enfermedad, monitoreo del tratamiento y recurrencia.

59
Marcacin de pptidos
111
OctreoScan: In-DTPAoctreotide
111 68
In-OctreoScan vs. Ga-DOTATOC
68
El Ga-DOTATOC surge posteriormente en el tiempo, y muestra una sensibilidad en tumores neuroendcrinos que excede a
la del OctreoScan.
68 111
Se lleg a resultados similares al comparar Ga-DOTATOC con In-DOTATOC.

COBRE .

Modo de Perodo de E mx.

Radioistopo Produccin
decaimiento semidesintegracin (MeV)
64 + 0,653
Cu 12,7 horas Ciclotrn
CE Y - 0,578
60 61 62 64 67
Cu, Cu, Cu, Cu, Cu

64 64 64
El Cu se produce mediante el uso de un ciclotrn mediante la reaccin nuclear Ni (p ,n) Cu. Tiene un
perodo de semidesintegracin de 12,7 horas. Decae por captura electrnica, + y -. Con estos modos de
decaimiento se puede usar tanto para diagnostico como para terapia dependiendo de la dosis que se d.
Cuando se quiera usar para diagnstico se va a dar una dosis baja mientras que para terapia se va a necesitar dosis mayores,
hay que tener en cuenta que no se tienen los mismos requisitos para hacer terapia que para hacer diagnstico. En el caso del 64-
cobre con el mismo complejo final que forme, si tengo una buena captacin y una buena semivida, puedo hacer tanto
diagnstico como terapia. Si a un paciente le voy a administrar un radiofrmaco y voy a esperar un efecto teraputico el
complejo tiene que tener una afinidad mucho ms alta que si lo voy a usar solo para diagnstico. Adems para terapia se
requiere una pureza radioqumica mucho ms alta, una alta estabilidad y mayor afinidad por el tejido que voy a tratar.

QUMICA DEL COBRE

Cu(I)
Configuracin d .
10

Complejos con donores blandos (S-tioteres, Pfosfinas, isonitrilos).

Geometra tetradrica casi siempre.

Cu(II)
Configuracin d .
9

Complejos con donores fuertes (N-aminas, Ocarboxilatos).

Nro. de coordinacin 4, aunque a veces puede ser 5 o 6.
Geometra planar, aunque tambin piramidal y octadrica deformada.

Diseo de agentes quelantes para el Cobre

Una de las estrategias
Ligandos que forman complejos lipoflicos, neutros, estables en sangre, capaces de atravesar las membranas.
Complejos poco estables en el medio celular.
tiles para evaluar el flujo sanguneo en diferentes tejidos.

Los agentes de Cobre ms utilizados son ligandos que forman complejos lipofilicos, neutros, estables en sangre, capaces de
difundir a rganos y tejidos de inters como corazn, cerebro, rin o incluso un tumor. Una vez que alcanzan el medio celular,
estos complejos suelen perder su estabilidad, y como consecuencia, el Cu(II) es liberado. Esta es una propiedad ventajosa ya que
el metal queda atrapado en el tejido, y permite que dichos complejos sean utilizados para evaluar la perfusin sangunea de
varios tejidos. Un ejemplo son las Tiosemicarbazonas. Diversas variantes fueron evaluadas pero, sin duda, la que ha sido lder es
la conocida como Cu-PTSM. La descomposicin de estos complejos a nivel intracelular se da mediante la reduccin del Cu(II) a
Cu(I) mediada por grupos tioles presentes en la clula (por ej. glutatin). Al cambiar el estado de oxidacin del metal, el complejo
de disocia y de esta manera, el cobre pasa a formar complejos con macromolculas tales como protenas.
Si hay presencia de oxgeno normal me va a volver a oxidar el Cu(I) a Cu(II), mientras que en caso de hipoxia queda el Cu(I)
retenido dentro de la clula.

Tiosemicarbazonas

60
Cu-PTSM
Descomposicin intracelular del complejo, mediada por grupos tioles (ej. Glutatin).

Cu-ATSM: Agente para hipoxia

Su captacin, a diferencia del anterior, se da nicamente en clulas hipxicas.
Radiofrmaco en etapa clnica de investigacin con Cu.
60

Resultados efectivos en terapia con Cu.

64

La segunda estrategia
Ligandos que forman complejos con alta estabilidad in vivo (estables
termodinmicamente e inertes cinticamente).
Se utilizan agentes bifuncionales cclicos para marcar biomolculas.
Biomolculas marcadas: anticuerpos, pptidos, nanopartculas.

Aplicaciones
64
Marcacin de pptidos con Cu
Pptidos derivados de Somatostatina

Estudios in vitro e in vivo dan mejores resultados

111
que In-OctreoScan. Se han empleado como
radiofrmacos de terapia, mostrando una inhibicin
del crecimiento de los tumores en ratas.

61
 ITRIO Y LANTNIDOS (LUTECIO) .

Modo de Perodo de
Radioistopo E mx. (MeV) E (KeV) Produccin
decaimiento semidesintegracin
90 Generador
Y - 2,7 das 2,28 - 90 90
Sr/ Y
0,176 (12%) Irradiacin
177 176
Lu - y 6,75 das 0,384 (9%) 113 y 208 de Lu en
0,497 (79%) reactor

90 177 177
Otros radionucleidos usados para terapia son el Y y el Lu. El Lu ha cobrado importancia en este ltimo tiempo porque
forma compuestos similares a los que forma el Galio. Si tengo un buen radiofrmaco con un pptido que tiene una buena
afinidad por los receptores tumorales sobre expresados como son los receptores de Somatostatina, puedo obtener un compuesto
177
con Galio para hacer diagnstico y si tiene misma afinidad con Lu puedo usarlo para terapia. O sea que puedo hacer
68 177
diagnstico y terapia usando el mismo complejo con diferencia del radionucleido usado. Ga y Lu presentan caractersticas de
marcacin similares.
90 177
A diferencia del Y que es solo -, el Lu presenta adems gamma y aunque su porcentaje de emisin no sea muy alto
puedo no solo hacer terapia sino tambin imagen.

Qumica del Itrio y Lantnidos

Principal estado de oxidacin: +3.
Y(III) metal pseudo-lantnido (similar carga, radio inico y qumica de coordinacin)

HIDRLISIS Y PRECIPITACIN:
Los cationes Y(III) y Ln(III) en solucin acuosa precipitan fcilmente con aniones tales como:
- hidrxidos
- fosfatos
- carbonatos
Los fosfatos y carbonatos son capaces de competir contra los complejos por el metal
La alta afinidad de estos cationes por fosfatos y carbonatos puede explicar su afinidad por tejido seo, causando toxicidad en
mdula sea. El hierro compite menos que en el caso del Galio.

QUMICA DE COORDINACIN Itrio y Lantnidos

Agentes quelantes apropiados: aquellos que posean tomos donores duros.
Debido a sus grandes tamaos, los nmeros de coordinacin tpicamente se encuentran entre 7 y 10.
Aunque algunos complejos con nmero 6 son conocidos, 7 y 8 son los ms comunes con quelantes polidentados.
La alta selectividad para Y(III) y Ln(III) se consigue mediante el uso de macrociclos con 8 tomos donores o ms.

Cadena abierta vs. macrociclos

Anlogos de DTPA
Alto rendimiento de marcacin bajo condiciones suaves de reaccin.
Otros metales contaminantes tienen mnimo efecto en la reaccin entre DTPA y Y.
90

Complejos cinticamente lbiles, disociacin bajo condiciones fisiolgicas.

Anlogos de DOTA
Cinticamente inertes, complejos ms estables.
Cintica de marcacin muy lenta y dependiente de otros metales contaminantes.
Factores influyentes: concentracin, temperatura, tiempo de calentamiento, presencia de buffers y contaminantes (Fe, Zn).

Agentes bifuncionales para Itrio y Lantnidos

62
 Conjugacin de biomolculas a agentes bifuncionales

90 111
Y vs. In
Muchos agentes bifuncionales se han utilizado para marcaciones con ambos metales.
90
Y terapia
111
In imgenes y determinaciones dosimtricas
Sus perodos de semidesintegracin son prcticamente idnticos.
Comparten una qumica de coordinacin similar, aunque la diferencia de tamao hace que presenten algunas diferencias
estructurales que afectan los patrones de biodistribucin en algunos casos.

La ventaja que tiene el Lutecio es que se puede usar para dosimetra ya que se pueden hacer imgenes debido a su energa
gamma.
111 90
Antes de utilizar In previo a la marcacin con Y
Ambos complejos son biolgicamente equivalentes?
Qu factores contribuyen a la diferencia?
Cmo afecta al comportamiento de los complejos?
90 177
Aplicaciones del Y y Lu
Derivados de Somatostatina
- 90Y-DOTA-Tyr3-octreotide
- 177Lu-DOTA-Tyr3-octreotate

Ibitrumomab Tiuxetan o Zevalin

Anticuerpo monoclonar dirigido contra CD20, presente en linf. B normales y linf. B de linfoma NH.
Tiuxetan: anlogo de DTPA, con grupo isocianato benclico.
90 111
Su marcacin se realiza con Y para tratamiento de linfomas, y con In para realizar estudios diagnsticos, biodistribucin y
dosimetra.

63
 VER BIBLIOGRAFA DE LA CTEDRA: QUMICA DE LOS RADIOFRMACOS DE 68Ga Y OTROS METALES

64
CLASE 7: MARCACIN CON 11C
MARTES - 07/06/2016
11
Por qu el C?
El C est presente en todas las molculas orgnicas. Se puede agarrar cualquier molcula orgnica y sustituir cualquier
carbono con un C 11, obtenindose exactamente la misma molcula, con la misma actividad biolgica, biodistribucin,
farmacocintica, etc.
Permite realizar un marcado isotpico, por lo que no se ven alteradas las propiedades qumicas y biolgicas. El marcado
isotpico es lo que siempre queremos para que no se vea alterado el comportamiento de la molcula carrier. La mejor
manera de hacer esto es con un istopo del mismo elemento.
La qumica del carbono es muy verstil y es muy estudiada.

11
Propiedades del C
Modo de decaimiento:
99.81 % Emisin de positrones
0.19 % Captura electrnica

Como cualquier emisor de positrones, lo que yo voy

a detectar son los rayos gama de aniquilacin. Este
fenmeno ocurre cuando el positrn del ncleo pierde
su energa cintica y se combina con un electrn,
aniquilndose. Esto genera dos rayos gama en
direcciones opuestas, que es lo que vamos a detectar.

Producto de decaimiento: 5B ESTABLE. Este es uno de los objetivos de los radionucleidos utilizados en
11

Radiofarmacia: que decaiga por gama a algo estable. Tambin puede servir que decaiga a algo con un periodo de
semidesintegracin tan largo, que es prcticamente estable (como en el Tc).
Energa mxima: 0,96 MeV. La energa mxima no es de la ms altas. Recordemos que los + tienen el mismo
comportamiento que los -, con un espectro continuo, una energa ms probable y una energa mxima. Es decir que
siempre que hablamos de una energa mxima, estamos hablando de un rango mximo.
Mximo rango en agua: 4,1 mm.
Perodo de semidesintegracin: 20,3 min. Este es un perodo de semidesintegracin corto. Recordemos que yo debo
producir el radionucleido, marcar el radiofrmaco, realizarle los controles pertinentes e inyectarlo al paciente antes de
que el radionucleido decaiga, es decir, en menos de 20 minutos.
Todos los radionucleidos de PET (emisin de positrones) son utilizados para el diagnstico.
11
Produccin de C
Radionucleido producido en ciclotrn. Con este periodo de semidesintegracin, debo producirlo en el mismo lugar donde lo voy a
utilizar. Difcilmente voy a poder hacer un transporte.

Ciclotrn Cyclone 30 de IBA Ciclotrn PETtrace de General Electric

11
La primera produccin de C fue realizada en 1934. Los investigadores indicaron las caractersticas favorables de este
radionucleido para su uso mdico.

Reaccin:
La reaccin de produccin del carbono 11 es bsicamente una, consistente en el bombardeo del N 14 con protones, para dar el
14 11
11C. Es una reaccin (p, ), es decir que vamos a tener una partcula alfa que impacte contra el N, dando el C.

65
 14 11 11
N (P, ) C + O2 CO2
14 11 11
N (P, ) C + H2 CH4

Nuestro blanco va a ser un

blanco gaseoso de nitrgeno,
al que voy a bombardear con
protones. Esto me puede dar
dixido de carbono o metano.
Esto depende de que otro tomo tenga en el target. Si el nitrgeno esta impurificado con 0.5-1% de O2, entonces el producto va a
ser dixido de carbono. Si lo que tengo en la mezcla de reaccin es hidrogeno, voy a producir metano. Una de las tcticas
utilizadas es impurificar el target con oxgeno para producir dixido de carbono, y luego pasarlo a metano. La otra reaccin no
es muy utilizada (aunque desde el punto de vista qumico tendra ms sentido obtenerlo directamente como metano).

Hay dos aspectos a tener en cuenta: la corriente y la energa del gas incidente. La corriente se define por Amper: nmero de
partculas por unidad de tiempo. Cuanto ms corriente tenga, mas partculas incidentes voy a tener. Esto no quiere decir que
tenga ms energa. La energa la define el ciclotrn. La reaccin tiene una energa ms probable que depende del elemento que
estoy bombardeando, y la seccin eficaz de este blanco. Va a haber una energa ptima para hacer la produccin. Nunca voy a
tener una energa ms alta que la que me da el ciclotrn. Es decir que si para determinada reaccin necesito 20MeV y el ciclotrn
es de 15MeV, no la voy a poder llevar a cabo. La energa ms probable de la reaccin se debe dar en el centro del target. Es decir
que si necesito 10MeV en el centro del blanco, el ciclotrn me debe producir, por ejemplo, 20MeV. Se disea el target de tal
manera que en el centro de la reaccin tenga esa energa.

Cuidado con la actividad especfica!

La actividad especfica es la actividad por nmero de molculas marcadas (MBq/mmol o MBq/mg o cualquier otra unidad,
siempre es una unidad de radioactividad sobre unidad de cantidad de materia).
Decrece: Con el tiempo
Dilucin isotpica (por el CO2 del ambiente en la marcacin, sntesis, etc.). Recordemos que producimos el carbono bajo la forma
de CO2, y ste est en todos lados, por lo que ocurre la dilucin isotpica. El problema con el carbono es que esta por todos lados:
en el aire, en los reactivos, etc.
Mxima terica: 3,425 x105 GBq/mmol
11
Produccin de molculas marcadas con C
11
La primera aplicacin biolgica fue realizada por Rubens et al en 1939 empleando CO2 para el estudio de la fotosntesis. Este
11 14
experimento no fue exitoso debido al corto periodo de semidesintegracin del C. Es por ello que opto por el C. Participo en el
14
descubrimiento del C en 1940.
11
El primer experimento en humanos de C fue realizado por C.A. Tobias et al en1945, estudiando la fijacin del CO en los
glbulos rojos.
11
Produccin de trazadores con C
Consideraciones a tener en cuenta:
Es un radionucleido de corto periodo de semidesintegracin.
Presenta emisin gamma de una energa importante (511 keV). Al ser una energa importante, tenerla en cuenta para el
blindaje.
Tenemos una alta actividad luego de la produccin del mismo en el ciclotrn. Al tener un periodo de semidesintegracin
tan corto, debo producir actividades altas para luego poder inyectar al paciente. Con esto nos referimos a 3/4/5 Ci. A un
paciente se le va a dar en el entorno de 10mCi, por lo que se pierde mucho por los bajos rendimientos, y por el tiempo
consumido en los controles, etc. Tengo que producir mucho para administrar lo necesario al paciente.

Para trabajar con altos niveles de actividad:

Nos tenemos que adaptar a trabajar con altos niveles de actividad, y con gases (al menos en las primeras etapas). Para ello,
debemos realizar:
Automatizacin de los procesos. Difcilmente voy a trabajar con 5Ci de forma manual.
Procedimientos de reacciones One pot
Miniaturizacin. Debido a que son gases, se deben realizar reacciones en pequeos volmenes (denominado miniaturizacin).
Preparaciones en columnas o en loop cerrados (por estar trabajando con gases).
Empleo de ultrasonido y microondas
Cuidado con la cintica de la reacciones. Por qu? Debido al corto periodo de semidesintegracin, debo utilizar reacciones
rpidas, no pueden durar ni siquiera horas.
Cumplir con GMP: se debe recordar que se van a administrar por via intravenosa.

66
 Esquema general de marcacin
11
C-agente de marcacin + precursor 11C-molcula

Se debe obtener en un paso la molcula, no da el tiempo de realizar varias reacciones.

Para acelerar las reacciones se emplea:
Gran exceso del precursor. No es que usemos masas enormes, sino que se usa exceso de precursor en comparacin con la
cantidad de molculas radiactivas. Estamos hablando de 2-10mg.
Minimizacin de los volmenes de reaccin
Emplea: alta temperatura, alta presin, ultrasonido, microondas, reacciones en soportes slidos, sntesis en loop.

Las marcaciones deben de ser muy rpidas para que puedan emplearse en la preparacin de trazadores con 11C.
Ejemplo:
Reaccin: 1 h
Purificacin: 1 h
Tiempo total: 2 h = 6 t1/2.
Luego de 6 t1/2 la actividad remanente es < 2 % de la inicial.

Dos horas es un tiempo corto para realizar una reaccin orgnica, y esto ya implica 6 tiempos de semidesintegracin, lo que
quiere decir que tendramos un 2% de la actividad inicial. Esto es inaceptable, por lo que se deben reducir tanto los tiempos de
reaccin como de purificacin. Como mucho podr demorar media hora en producir y purificar. Una produccin no me puede
llevar ms de 2 periodos de semidesintegracin. Esto muestra como las reacciones deben ser muy rpidas.

Aspectos relacionados a la radiacin:

Recordemos que partimos de actividades muy altas, por lo que:
Reaccin y la purificacin deben de hacerse en una celda caliente (hot cell)
Debe de poder emplearse equipo automatizado o controlado va remota.
Emplear pequeos volmenes de reactivos.
Y todo esto cumpliendo GMP. Porque debemos administrarlo a un paciente. Debemos proteger al producto y a su vez
proteger al personal realizando la produccin y controles.

Aspectos relacionados al t :
El trazador debe de prepararse justo antes de su uso.
El tiempo total de preparacin no debe de exceder 2 a 3 t (40-60 minutos). No ms de 3 tiempos medios con el control de
calidad incluido.
La incorporacin del radionucleido debe de poder realizarse en el menor nmero de pasos posibles y debe conducir a la
mxima pureza posible.
El protocolo de sntesis debe de ser robusto.
11
Qumica del C:
La ventaja de este trazador es que su qumica es bien conocida.
Las rutas sintticas derivan de la escala de laboratorio. Ya se dijo que se realiza todo a pequea escala.
Tener presente que algunas de las tcnicas habituales de la qumica orgnica no pueden aplicarse (precipitacin, extraccin
con solvente, etc.). porque van a llevar mucho tiempo.
Cambios principales son:
- el empleo de alta temperatura
- el exceso de reactivos

PRODUCCIN
14 11 11
1) N (P, ) C + O2 CO2
14 11 11
2) N (P, ) C + H2 CH4
Las lneas ms comunes utilizadas son las mostradas. El primer paso es producir el radionucleido, en este caso en el ciclotrn.

67
 Lo ms comn es producir dixido de carbono, que luego puedo
transformar en metano o en otras molculas como las mostradas.

Principales vas de marcacin son:

Carbonilaciones
Metilaciones
- O-metilacin
- N-metilacin
- S-metilacin
Todas ellas son rpidas y en un solo paso.

CARBONILACIONES
11
C-Acetato
11
En general utilizan reactivos ya marcados con C.
Rpidas y con altos rendimientos.
Marcaciones se producen en un solo paso
Se obtienen cidos carboxlicos o acetatos.

11
Sntesis del [carbonil] C-WAY-100635

68
Reacciones con CO. Es otra de las vas que se puede utilizar. La imagen muestra la gama de reacciones producidas con CO.

Estas no son las ms empleadas, las ms comunes son las metilaciones.

METILACIONES
11
Son las ms empleadas en la sntesis de los radiofrmacos de C.
Qumica sencilla y rpida
Agentes secundarios empleados:
Ioduro de metilo. En general se utiliza este siempre que se pueda porque es ms fcil de producir.
Triflato de metilo. Implica otro paso ms de sntesis y da productos secundarios. Se prepara a partir de ioduro de metilo. Es
decir que siempre el primer paso es transformar el CO2 producido a partir del target en ioduro de metilo.
11
Produccin del CH3-I
Hay dos formas:
Va hmeda:
-Alto rendimiento
-Baja actividad especfica.
-Problemas por trabajar con el HI (muy corrosivo)

Desventaja: LiAlH4 es fuente de 12C, baja AE. El hidruro de litio y aluminio genera tambin carbono 12, por lo que da baja
actividad especfica.

Va gas: la tcnica ms utilizada.

Se hace una reduccin del CO2 en atmosfera de hidrogeno, catalizada por Ni. Se produce metano marcado con 11C. Este se
atrapa en una trampa de 75C y se hace reaccionar con iodo slido, calentado a 720C, produciendo una reaccin radicalaria con
el metano producido. De esta manera se forma ioduro de metilo.
Alta actividad especifica
Simple y rpido
Menor rendimiento (80 % entre 5 y 10
minutos).
Produccin del Ioduro de metilo:
Se calienta el iodo a 720 para producir iodo radicalario. Este se activa
automticamente y reacciona con el metano.
El problema es que puedo obtener bajo rendimiento porque es una reaccin
radicalaria, debo sacar el producto formado para que la reaccin avance.
Adems, debo tener en cuenta que todo esto es un medio gaseoso, por lo que
debo evitar fugas. Se recircula el loop con una bomba de gases (siempre en
pequea escala) para que el metano pase por donde est el iodo y reaccione.

69
 Hay una trampa que retiene el ioduro de metilo, de manera que voy reteniendo el ioduro de metilo y el metano que no
reacciono sigue recirculando. De esta manera, recirculo hasta obtener la actividad de ioduro de metilo que necesito. Voy
extrayendo el producto y dejo reaccionando el metano. Este relleno que atrapo el ioduro de metilo, luego se calienta para que lo
libere.

Produccin del Trifluorometansulfonato de metilo (triflato de metilo)

Se pasa el ioduro de metilo por una columna que tiene triflato de
plata y es calentada. Esta reaccin se produce en lnea a la anterior.

Una de los radiofrmacos ms comunes a producir son:

11
C-Metionina

Se utiliza para algunos tumores cerebrales, ya que algunos de estos

tienen incrementada la captacin de aminocidos.
Esto es una S-metilacin. Se parte del precursor cistidina tiolactona.
La tiolactona se pone en medio bsica con alcohol, produciendo su
apertura. Luego de que el anillo est abierto, se metila en el azufre.
Despus se hace la purificacin por extraccin en fase slida.

11
C-Colina:

Utilizada para los canceres de prstata, cuyos

tumores captan 11C-Colina.
Tenemos el precursor directamente como lo vamos a
usar, por lo que es ms sencillo. Es un precursor lquido
que se metila en el nitrgeno, para formar la colina
cargada. Esto tambin se hace sobre soporte slido. Se
carga el precursor directamente sobre una columna de extraccin de fase solida catinica. El precursor no va a quedar retenido
all, sino que va a quedar ah simplemente por adsorcin. Se le hace llegar el cloruro de metilo, lo que transforma el precursor en
colina. Esta est cargada positivamente, por lo que va a quedar retenida en el cartucho de extraccin en fase slida. Luego se
lava con alcohol para sacar el precursor, aunque la colina no se va a mover porque esta retenida en la columna. Luego, al pasar
suero fisiolgico (NaCl 0.9%) se recauda la colina del cartucho. Todo esto es muy rpido pero lleva por lo menos 20 minutos, por
lo que ya de entrada tengo menos de la mitad de la cantidad que me llego. Esto es solo contando el decaimiento, si cuento a su
vez el rendimiento y los otros factores, tengo an ms perdida.
11
C-Raclopride

11
C-PIB
Estos dos radiofrmacos no se hacen a partir del ioduro porque la
reactividad del ioduro no da. Se hace con el triflato de metilo que es
mucho ms reactivo.

N-Methyl-[11C]-2-(4'-methylaminophenyl)-6-hydroxybenzothiazole

70
 Otras reacciones orgnicas empleadas:
Reacciones de Witing
Acoplamientos de Stille
Acoplamientos de Suzuki
Acoplamiento Sonogashira
Estas son utilizadas sobre todo para desarrollo. En la clnica generalmente se utilizan ioduro de metilo o triflato de metilo.

MDULOS DE SNTESIS
Se coloca todo dentro del mdulo, se cierra y se controla todo a partir del
software. Esto es necesario para trabajar con actividades tan altas como 5Ci.
El radionucleido viene del ciclotrn como CO2 (ver imagen en siguiente pgina)
y pasa por un catalizador de nquel-paladio para pasar a metano. Se pasa por
una trampa de metano enfriada a 75C con N 2. El CO2 que no reacciona se va
para seguir reaccionando. Luego pasa por un loop de recirculacin donde estn
los reservorios de iodo y las trampas donde va quedando retenido el ioduro de
metilo. Entre medio hay sensores que me muestran cmo va la sntesis. Luego se
puede calentar y enviar al reactor donde va a reaccionar con el precursor, que
est en los viales (V1, 2 y 3). Luego de hecha la reaccin en el reactor, se enva al
HPLC para los radiofrmacos que requieren HPLC para su purificacin. Una vez
pasada esta etapa, se eluye en agua para sacar el acetonitrilo si es que se us
una fase mvil con este solvente (el mximo de ACN permitido en administracin
IV es 0.04%). Se eluye para ello con agua y etanol (porque puedo tener hasta un 10% de etanol). Luego se lleva a volumen con
suero fisiolgico. Si hago la extraccin en fase solida puedo cambiar las conexiones para bypasear esta ltima parte.

71
Ventajas de la Automatizacin de las reacciones
Menor irradiacin
Aceleracin de los tiempos
Posibilidad de validar el proceso para garantizar su robustez.

Mdulo TRACERlab FX C Pro.

A la derecha se muestra una pantalla

con el seguimiento de la produccin de
ioduro de metilo.
Los mltiples picos observados en la
primera imagen son tpicos de la
recirculacin: cuando se acercan al
detector sale un pico, y cuando se aleja
sale un valle.
Tambin se muestra la temperatura,
la rampa de metano y lo que est
quedando atrapado de ioduro de metilo. Cuando ocurre la recirculacin no tena nada de ioduro, y luego se fue atrapando hasta
llegar a un mximo. Cuando se llega a un plato se considera que se termin la reaccin. Si se deja ms tiempo estoy ganando
tomos de ioduro de metilo, pero decayendo los que yo ya tengo, por lo que no existe ganancia neta.
11
Preparacin de [ C]-Triflato de metilo
Agente alquilante ms reactivo.
Ventajas:
Es menos voltil y resulta atrapado de manera ms eficiente en pequeos volmenes dentro del reactor.
Metilaciones de rendimientos ms altos con tiempos ms cortos de reaccin y menores temperaturas.
Se necesitan menores cantidades de la molcula precursora (sin metilar), lo cual disminuye costos y facilita la purificacin
final.

72
Principal desventaja:
Poco selectivo, es posible obtener varios productos no deseados si el precursor contiene ms de una posicin susceptible de
metilacin.
Sntesis:
Se hace pasar una corriente de [11C]-ioduro de metilo a travs de una columna conteniendo triflato de plata pre-calentada a
200-300 C.

Comparacin
11 11
Condicin [ C]-Triflato de metilo [ C]-CH3I
Temperatura (C) 20 - 60 80 - 120
tiempo de reaccin (min) 1 2 a 10
precursor desmetilado <1 1 a 10

Las condiciones de temperatura son mayores para el ioduro que para el triflato porque es menos reactivo.
El ioduro requiere ms cantidad del precursor e insume ms tiempo de reaccin.
Sin embargo, siempre se prefiere trabajar con ioduro de metilo que con triflato, por ser ms sencillo y generar menos productos
secundarios. El triflato es un agente metilante que metila el agua si hay agua, por lo que hay que secar todo previamente. Por lo
tanto, todo el proceso previo puede llevar mucho ms tiempo que la sntesis en s.

Captulo 1015 USP 30

Dentro de la farmacopea hay un modulo de aparatos de sntesis de radiofrmacos automatizados.
1015 AUTOMATED RADIOCHEMICAL SYNTHESIS APPARATUS
The preparation and quality control of diagnostic radiopharmaceuticals labeled with the very short-lived positron-emitting
nuclides (e.g.,15O, 13N, 11C and 18F having half-lives of 2, 10, 20, and 110 minutes, respectively), are subject to constraints
different from those applicable to therapeutic drugs:
(1) Synthesis must be rapid, yet must be arranged to protect the chemist or pharmacist from excessive radiation exposure.
(2) Except to a limited extent for 18F, synthesis must occur at the time of use.
(3) With the exception of 18F, each batch of radiopharmaceutical generally leads to only a single administration.

Purificacin del compuesto obtenido

NO SE PUEDEN EMPLEAR TODAS LAS HERRAMIENTAS DE LA QUMICA ORGNICA TRADICIONAL, porque no puedo utilizar
tcnicas que demoren mucho.
Mtodos de separacin:
Separacin en fase slida (SPE)
HPLC semipreparativa
La separacin debe ser eficiente y rpida.

El detector UV-visible sigue la parte de los

precursores.

73
 Purificacin del producto en la sntesis
1- HPLC semipreparativa:
Separa el producto de sub-productos y del precursor que no ha reaccionado
Tienen un detector UV y un detector
gama.

2- Extraccin en fase slida (cartuchos C18):

Para eliminar la fase mvil del HPLC semipreparativo (solvente orgnico) y obtener el producto en una fase de etanol y buffer

Celda caliente en rea GMP: estos mdulos estn en esta rea. Existen corredores tcnicos donde el personal de mantenimiento
puede realizar ajustes sin necesidad de colocarse toda la ropa de trabajo.

CONTROLES DE CALIDAD
El control de calidad puede definirse como la parte de las normas de correcta fabricacin relacionada con el muestreo,
especificaciones, ensayos, y con la organizacin de la documentacin que asegura que la calidad del producto ha sido juzgada
como satisfactoria.
Controles de calidad necesarios:
Controles realizados a cualquier inyectable:
pH
Inspeccin visual (presencia de partculas, color...).
Pureza qumica (sustancias qumicas no radiactivas, generalmente por HPLC). Debo checkear que los lmites de precursores y
solventes residuales estn por debajo de lo que exige la monografa de la farmacopea.
Presencia de disolventes residuales (en el caso de que pudieran aparecer, deber determinarse su cantidad, generalmente
mediante cromatografa de gases)
Debo generar mtodos robustos, para poder realizar una sola corrida en el HPLC (o GC para solventes residuales). Si tengo que
repetir, el radiofrmaco decaera demasiado (adems de que el paciente ya este probablemente esperando a ser administrado el
radiofrmaco). En una sola corrida tengo que tener la confianza de que el resultado sea el correcto.
Test de endotoxinas (valor lmite). Es un inyectable y lleva los tests microbiolgicos pertinentes.
Esterilidad. Lleva 15 das y hay que realizarlo en dos medio, uno para microorganismos aerobios y otro para anaerobios (TSB y
tioglicolato). En este caso, no puedo tener los radiofrmacos en cuarentena hasta que microbiologa lo apruebe (a los 15 das no
queda rastro de radiactividad en el radiofrmaco). Por lo tanto, debo garantiza que el mtodo que produce radiofrmacos sea
estril.

Por ser un radionucleido:

Pureza radioqumica (diferentes especies qumicas que contienen el radionucleido de inters, generalmente por
HPLC)
Pureza radionucledica (distintos radionucleidos, generalmente por espectrometra gama)
Actividad especfica. Si el radiofrmaco va hacia un receptor, importa la actividad especfica. Si es de tipo metablico, la
actividad especfica no es relevante.

Est compuesto por dos anillos PET. Cada anillo PET consta de cuadraditos
de detectores. A su vez, casa cuadradito est compuesto por pequeos
detectores. Es por esto que logran una buena resolucin.

IMAGEN - PET/CT

GEs PET-CT

74
 11
Tumor neuroendcrino: C-HTP (hidroxitriptofano)
Imagen real de un paciente con un tumor neuroendocrino. La imagen
PET es funcional pero no anatmica, por lo que normalmente se fusiona
la imagen PET con una anatmica, como puede ser la resonancia
magntica o la tomografa.

ESTUDIOS CLNICOS
Los estudios en voluntarios normales (controles) y
pacientes con enfermedad de Allzheimer diagnosticada.
11
El C-PIB es un marcador de placas de amiloide. Es decir
que hay ms intensidad cuanto ms amiloide haya. Los
pacientes con Alzheimer tienen mucha deposicin de
placas de amiloide, por lo que cuanto ms intensidad,
ms avanzada la enfermedad.

11
Estudio PET C
En resumen, en un estudio PET voy a necesitar:
Un ciclotrn para obtener el C. Este se necesita en el
11

mismo lugar en el que se va a utilizar.

Celdas calientes en el rea limpia para comenzar la
sntesis de radiofrmaco.
Control de calidad (no mostrado en la imagen).
Parte clnica: para realizarle el estudio al paciente.
11
En el caso del C, dado el corto periodo de
semidesintegracin, se necesita tener todo en el mismo lugar.

75
76
CLASE 8: MARCACIN CON 18F
JUEVES 09/06/2016
18 11
El F es uno de los radionucleidos ms utilizados, junto con el C. Se utiliza principalmente con la FDG. Este
es el radiofrmaco ms utilizado en diagnostico PET.

Informacin general
11
Si bien el C tiene muchas ventajas en cuanto a sus propiedades qumicas, el tiempo de semidesintegracin
18
es una de sus princpiales desventajas. El F presenta un periodo de semidesintegracion ms largo: 109
minutos. Esto implica que se va a poder administrar en un mayor nmero de pacientes.
Es uno de los tomos ms pequeos luego del H, y es el ms electronegativo. Su qumica es relativamente
conocida, si bien no tanto como la del carbono.
Nombre, smbolo, nmero: Flor, F, 9
Serie qumica: Halgenos
Grupo, perodo, bloque: 17, 2, p
Masa atmica: 18,9984032 u
2 5
Configuracin electrnica: [He]2s 2p
Electrones por nivel: 2, 7
18
Es un emisor beta +. Decae a O, estable.

18
Propiedades del F:

Al ser un tomo muy electronegativo, puede actuar como

donador de un par de electrones (como nuclefilo) o como
aceptar de hidrgenos con base. Si lo tengo como flor
diatmico (F-F) es extremadamente reactivo.
Como fluoruro va a funcionar como nuclefilo, y su
reactividad es buena, pero va a haber que ayudarlo un poco.

18
Por qu el F?
Baja Emx. = 0.635 MeV. Tiene una baja beta mxima.
11
Alta actividad especfica (20-50 Ci/mol). En el C se daba la dilucin isotpica, porque el C esta en todos lados. Con el F no
19
tenemos esos problemas (difcilmente va a ocurrir una dilucin isotpica con F).
11
Produccin mediante ciclotrn en grandes cantidades (10Ci). No necesariamente se va a producir ms actividad que el C,
pero al tener un perodo de semidesintegracin ms largo, nos podemos permitir obtener menos actividad que en el caso
11
del C. De esta manera, puedo trabajar con actividades no tan altas, y puedo realizar la sntesis y los controles sin que haya
pasado siquiera un periodo de semidesintegracin.
Es el elemento ms electronegativo y puede reaccionar con diversos compuestos orgnicos e inorgnicos.
Las sntesis de trazadores suelen tener relativamente buenos rendimientos.
Adecuado t .
Aunque
Estrategias de marcacin limitadas.
Puede provocar grandes cambios en la molcula, a diferencia del carbono. Con un marcado isotpico, la molcula queda
12 11 19 18
exactamente igual (como pasa al cambiar desde un C a un C). Si yo cambio un F por un F la molcula se mantiene

77
 18
igual, pero muchas molculas no tienen flor. A pesar de que el flor es un tomo pequeo, el agregado del F puede llegar
a cambiar las propiedades de la molcula.
Buenas propiedades, diversas aplicaciones

PRODUCCIN

La produccin se da en el ciclotrn, mediante principalmente dos vas:

Bombardeando con protones o va nucleoflica: la ms clsica. Se bombardean ncleos de O con protones para dar
18
18 18 18
F bajo la forma de fluoruro. Lo que se irradia es agua enriquecida en O. El O es el isotopo natural del agua, pero la
16 18
principal forma de oxigeno presente en el agua es el O. El O en el agua es poco abundante, por lo que se requiere
enriquecer el agua y transformarla en la denominada agua pesada. La desventaja es que este tipo de agua es muy
cara. Se obtiene como fluoruro en solucin acuosa, lo que nos sirve para realizar reacciones nucleoflicas.
Bombardeando con deuterones o va electroflico: se bombardea el Ne con deuterones para dar F en la forma de
20 18

gas. Este puede dar reacciones electroflico.

Debo optar por una u otra va desde el inicio, porque el target es totalmente distinto. Lo ms usual es utilizar la primera va.

MTODOS DE MARCACIN
Por lo tanto, el mtodo de marcacin va a estar condicionado por el target utilizado. Si
tengo fluoruro voy a utilizar la sustitucin nucleoflica, y si tengo F 2 voy a utilizar la
sustitucin electroflico. Todos ellos pueden ser por mtodos directos o por mtodos
indirectos.

FLUORACIN ELECTROFLICA
Caracterizada por la reaccin del F altamente polarizado, como reactivo rico en
electrones
Utilizo ( F) F2 como agente fluorante
18

Mximo rendimiento radioqumico de 50%. Se obtiene solamente el 50% porque se le

agrega un carrier que es gaseoso, por lo que voy a obtener solamente la mitad de los
tomos.
Actividad especfica 0.04 0.4 GBq/mol
Fluoracin nucleoflica
Actualmente la fluoracin nucleoflica usando 18F libre de portador (non carrier added, n.c.a.) es el nico camino adecuado
para preparar trazadores de alta actividad especfica
El F tiene que ser activado para incrementar su nucleofilia y su solubilidad. El problema con esta fluoracin es que, si bien el F
es un nuclefilo, en general no es un excelente nuclefilo, por lo que necesito un paso de activacin para aumentar la
nucleofilia y hacer las reacciones.
El Kriptofix 2.2.2. es el agente de transferencia de fase ms comnmente utilizado en la qumica de fluoracin del 18F,
haciendo al anin F- de alta nucleofilicidad.
La fluoracin nucleoflica se ha realizado en una variedad de solventes (MeCN, DMSO, THF, .). Una reaccin nucleoflica con
F nunca se puede hacer en agua, debido a que el OH es ms nuclefilo que el F. Si tengo una traza de agua ya arruine todo,
porque introduje OH en lugar de F. Es por esto que se debe realizar un secado exhaustivo previo a la realizacin de la
reaccin. Recordemos que el F en este caso viene en forma acuosa (como fluoruro), y no podemos tener agua. Por lo tanto, la
primera etapa de estos marcados siempre es la eliminacin del agua o secado. En el mdulo se debe hacer una etapa de
secado previo a la sntesis para eliminar toda traza de agua en la tubuladura del mdulo.

SUSTITUCIN ELECTROFLICA

78
1. FLUORACIN DE ANILLOS AROMTICOS
En general transcurre mediante el intercambio de un H por el 18F.
Posibles agentes electroflicos:
[ F]F2
18

[ F]CH3COOF
18

[ F]XeF2
18

Altamente reactivos y poco selectivos!

Frecuentes reacciones radicalarias no deseadas, con disolvente.
Se requieren procedimientos de purificacin extensos.
Ejemplo: sntesis FluoroDOPA

Introduzco el flor en posicin orto a la cadena, que es la parte

activa de la molcula.

2. ADICIN SOBRE DOBLES ENLACES

En general parto de un F2 e introduzco el flor en ambas posiciones del

enlace.

Ejemplo: sntesis original de FDG

18
La primera sntesis de F-FDG se llev a cabo en el Brookhaven National Laboratory por Ido et al. en 1976 va floracin
electroflica.

Se parti desde la glucosa con los OH acetilados (protegidos) y el introdujo el F en uno de los tomos del doble enlace. Se puede
obtener la F-desoxiglucosa (FDG) o la F-desoximanosa (FDM), dependiendo de las condiciones utilizadas (ver tabla a la izquierda).

3. INTERCAMBIO HALGENO-METAL
Los precursores organometlicos se preparan mediante sntesis orgnica y los ms
comunes contienen Sn, Hg, Se y Ge, para cambiar la polaridad del C y formar un
carbanin que me permite unir un tomo de F en la posicin deseada.

El carcter de carbanin
que posee el tomo de
carbono que soporta el
metal es lo que facilita la
sustitucin electroflico,
aunque no en todos los
casos aporta
regioespecificidad, y an se
requieren procesos de
purificacin debido a la
formacin de mltiples productos.

79
 SUSTITUCIN NUCLEOFLICA
Son los mtodos ms utilizados.
El fluoruro rico en electrones (nuclefilo) reemplaza en una posicin electrfila de otra molcula a otro grupo, grupo saliente.
Para que sta ocurra, es fundamental que la molcula a marcar contenga un buen grupo saliente en una posicin electrfila,
porque de manera contraria no se va a dar una sustitucin nucleoflica.
Las condiciones de reaccin favorezcan el ataque nucleoflico del fluoruro. Como el fluoruro no es tan nuclefilo, se debe
acondicionar para aumentar la nucleofilia. Por lo tanto, implica unos pasos denominados acondicionamiento del nuclefilo.
Estos son los pasos de secado y activacin, que muchas veces implican ms tiempo que el marcado en s.

Acondicionamiento del nuclefilo.

Condiciones de reaccin: disolvente, temperatura. Se debe tener cuidado con estos parmetros. Las temperaturas en general
son bastante altas.
18 18
[ F]F- : En solucin acuosa: inactivado para sustitucin nucleoflica. Contaminado con pequeas cantidades de [ O]H2O. El
fluoruro se produce en el ciclotrn bajo la forma de fluoruro acuoso. Es decir que lo tengo en medio acuoso y lo necesito libre de
agua. Para ello, se siguen los siguientes pasos:
1. Resina de intercambio aninico: lo primero que se hace es pasar el agua que llega del ciclotrn con el fluoruro por una
resina de intercambio aninico. El F- me queda retenido en la resina y el agua pesada sigue de largo. Esta agua va a ser
18
rica en O, por lo que se suele recuperar. Separa el F- del agua pesada, y sta se recupera. El F- se eluye con una
solucin acuosa de K2CO3, para tener el fluoruro como fluoruro de potasio, que es lo que quiero. Esto lo requiero para el
Kryptofix.
2. Kryptofix 2.2.2 + Acetonitrilo: K222 debilita el enlace inico del K+ y el F- mediante formacin de un complejo con el K+.
El F- queda ms disponible para SN. El Kryptofix es un ter corona que tiene el tamao adecuado para meter el potasio
dentro del anillo. Al meter el potasio dentro del anillo, hace que la distancia K-F aumente, por lo que debilita el enlace
inico, haciendo mucho ms nuclefilo al fluoruro. El acetonitrilo se pone para luego hacer la destilacin azeotrpica del
agua, que me la quiero sacer de arriba. Si entra una gota al reactor la reaccin ya no da nada.
18
3. Destilacin azeotrpica del agua: El agua de la mezcla se debe evaporar por calentamiento. Ahora, el complejo K[ F]F-
K222 permite realizar la SN. El agua se mezcla con el ACN, formando un azeotropo. Luego se hace una destilacin del
azeotropo de agua para que me quede todo en ACN seco. Se realiza calentamiento, entrada de nitrgeno y vaco, por lo
que el fluoruro de potasio me queda pegado a las paredes del reactor (se evapora completamente el solvente).

Tipos de sustitucin nucleoflica:

Todas se llevan a cabo en mdulos automatizados para sntesis!!

Voy a producir radiofrmacos que van a ser introducidas por via IV,
por lo que debo proteger al producto del operador, y al operador del
producto.

1. SUSTITUCIN NUCLEOFLICA AROMTICA

Tengo un buen grupo saliente y un

buen grupo electrn-atrayente.
En general se usan solventes polares y
atrpicos y se hace por calentamiento
con kryptofix.

18
Ejemplo: trazador [ F]MPPF, ligando de los receptores serotoninrgicos 5-HT2A

Se hace a 180C, 20minutos, en

DMFO.
Otro mtodo consiste en
realizarla en acetonitrilo.

80
Ejemplos: mtodos indirectos de mltiples pasos.

2. SUSTITUCIN NUCLEOFLICA ALIFTICA

Debo tener un nuclefilo y un buen grupo saliente.
Las sustituciones nucleoflicas que se dan son de tipo
SN2, el nuclefilo entra por el lado opuesto al que sale
el grupo saliente.

Los mejores grupos salientes son los de mayor tamao. Los ms

utilizados son los tofilatos y triflatos.

18
Ejemplo: trazador [ F]FLT, indicador de proliferacin celular.
La FLT es un anlogo purnico y se
utiliza como marcador de proliferacin
celular. Los tumores tienen aumentado
el ndice de proliferacin celular, por lo
que sirven para detectar neoplasias.
Parto del precursor que tiene el
tosilato en la configuracin inversa a
donde va a entrar el fluoruro. Entra el
fluoruro por debajo y sale el grupo
protector. Si tengo otros grupos
funcionales factibles a ser atacados,
debo tenerlos protegidos para poder derivar mi ataque al punto de inters. En el grupo donde me interesa introducir el fluoruro
por lo general tengo el grupo saliente. El resto de los grupos deben estar protegidas. En la figura se muestra el OH protegido. Por
lo tanto, tengo dos etapas: marcacin (introduccin del fluoruro y salida del grupo saliente), y desproteccin (para obtener la
molcula final). Esta ltima etapa tambin debe ser muy rpida.
En la imagen se muestra el crecimiento de un mioma ubicado en el cerebro.
En la imagen C se muestra un marcado aumento de la proliferacin celular. La
imagen B fue una imagen de FDG. La FDG es utilizada para detectar tumores
con alta captacin de glucosa. El problema con el cerebro es que normalmente
tiene alta captacin de glucosa. Por lo tanto, se debe usar otro radiofrmaco
que imite otros metabolitos que normalmente no se capten en el cerebro.

81
Ejemplos: mtodos indirectos de mltiples pasos.

Puedo marcar algn reactivo

que luego reaccione con mi
molcula final. De esta manera,
hago la reaccin de introduccin
del F y luego la reaccin que
introduce esta otra molcula en
la molcula final.

3. SUSTITUCIN NUCLEOFLICA HETERO-AROMTICA

Ejemplo: sntesis de un ligando para receptores colinrgicos nicotnicos 42.

La amina donde no va
a ser introducido el
fluoruro est
protegida.

18
EJEMPLOS DE RADIOFRMACOS DE F:

18
F-FDG:
Como se mencion anteriormente, este tipo de radiofrmacos sirve para tumores que poseen
hipercaptacion de glucosa. No sirve para todos los tumores (por lo que no es universal), pero si sirve
para muchos. Es til tambin para otras patologas: estudios cardiacos o cerebrales, ya que ambos
rganos son grandes captadores de glucosa. Podemos detectar hipo o hipercaptacin de glucosa.
Mltiple captacin ganglionar de 18 F-FDG en paciente con Linfoma de Hodgkin.

82
 18
Na F:
Se puede utilizar el fluoruro de sodio directamente. El flor se intercambia en el hueso, por lo que se utiliza
para ver metstasis sea.

18
F-FMISO
Es un marcador de hipoxia. Es un fluoronitroimidazol, los cuales tienen la capacidad de
reducirse in vivo. Consta de una cadena radicalaria que termina en la formacin de la amina, las
cuales son muy reactivas y quedan retenidos. La caracterstica de este radiofrmaco es que el
potencial del nitroimidazol hace que se pueda reducir in vivo. Sin embargo, en los tejidos con
concentraciones de oxgeno normales, el grupo vuelve a nitro (se reduce y se oxida), por lo que
puede entrar y salir de la clula. Cuando el potencial de oxigeno es menor (en hipoxia), la
molcula no alcanza a oxidarse nuevamente, por lo que queda retenido en la clula como
amina. Por lo tanto, es un marcador para hipoxia tumoral. La hipoxia es importante, porque hay muchos tratamientos que fallan
a causa de la presencia de zonas hipoxicas. Esto se debe a que las clulas en zonas de hipoxia estn bastante alteradas, por lo
que son difciles de detectar. Estn lejos de los capilares, por lo que la quimioterapia no le llega adecuadamente. Cuando se le da
radioterapia tampoco se encuentra mayor eficiencia, ya que la radioterapia en su mayora produce su efecto por la formacin de
radicales libres del oxgeno. Como las clulas tienen bajo potencial de oxgeno, son bastante radioresistentes. Por lo tanto, al
mdico que realiza la radioterapia le sirve conocer las zonas hipoxias para dar mayor dosis de radioterapia.
18
Este es un glioma en donde se ve la zona de mayor captacin de F-FMISO, por lo que son zonas
hipxicas.

18
F-FLT
La FLT marca proliferacin celular. Se administr este
radiofrmaco al mismo paciente que se le haba administrado
FMISO. Se puede ver como las zonas de menor proliferacin
celular coinciden con las zonas de hipoxia.

18
F-Fallypride
Se utilizan para detectar receptores
de dopamina. Se utiliza mucho en
estudio de adicciones. La base de
muchas adicciones es la recaptacion
de la dopamina, y este frmaco
permite ver como varan los receptores en pacientes adictos. El nmero
de receptores va bajando, por lo que se pasa a necesitar mayor dosis.
El Racipride es muy similar (mostrado en la imagen a la derecha).

83
 SUSTITUCIN NUCLEOFLICA ALIFTICA - Sistemas automatizados, sustituciones nucleoflicas

Todas estas sntesis se realizan en

plataformas automatizadas de sntesis,
similares a las utilizadas para el 11C. Estos
estn ubicados dentro de celdas calientes
para poder manipular altos niveles de
actividad. Puedo cargar los reactivos,
colocar las columnas de intercambio, el
HPLC, etc, cerrar y producir radiofrmacos
marcados partiendo con altos niveles de
actividad. Me permite recibir altos niveles
de actividad desde el ciclotrn, manejarla en forma segura y seguir los pasos de sntesis a travs de un software. A la derecha se
muestra este software. Es como un esquema de todo lo que ocurre dentro de la hot cell: se muestra el reactor, los viales, las
vlvulas, etc. Se puede controlar la apertura de las vlvulas y todo lo dems desde el software sin necesidad de manipular
directamente. Adems, se protege al producto del operador ya que dentro de la celda hay aire calidad grado A, necesario para
sintetizar medicamentos a ser administrados por va IV. Todos los radiofrmacos intravenosos se deben filtrar con un filtro
esterilizante.
A su vez, la celda tiene acoplada detectores de radiacin en diferentes puntos, para poder ir siguiendo los pasos de sntesis
desde el software. En general se optimizan programas de sntesis y luego se cargan en forma rutinaria.
18
Ejemplo: trazador [ F]FDG, indicador de metabolismo celular.
Otro mdulo de sntesis
utilizado para SN aliftica es el
Fastlab (ver Clase 6, donde ya
se mencion este equipo),
utilizado para hacer
principalmente FDG.
La diferencia es que se emplea un casete que se calza en el mdulo, y tiene las vlvulas, las columnas, el precursor de FDG, el
acetonitrilo, el suero, las columnas para hacer la purificacin final y jeringas para mover el lquido de un lado al otro.
Es decir que este casete ya viene preparado para un nico uso. Se compra en condiciones GMP, se pone en el mdulo, se prende
el software y se utiliza para una sola sntesis. Permite hacer la sntesis ms rpidamente, pero tiene un costo mayor.
18 18
Produccin de F-2-fluoro-2-desoxi-D-glucosa: ( F-FDG) en el CUDIM
Corriente de p+: 20-50 mA
Tiempo de irradiacin: 10-120 min
Actividad de 18F producida: 0.34-12 Ci (12.6-444 GBq)
La sntesis de FDG comienza en el ciclotrn (mostrado en
la imagen). Se parte desde agua pesada que se
bombardea con protones por 15-20 minutos. Se obtiene el
fluoruro, transfirindose mediante caera hasta dentro de
la celda. Luego es transferido al mdulo de sntesis
(Fastlab).

18
SNTESIS DE F-FDG

Esta es una va nucleoflica, con triflato de

manosa como precursor. El fluoruro entra en la
posicin 2 y sale el grupo triflato. Luego se
realiza la desproteccin de los grupos hidroxilo
mediante hidrlisis alcalina.

84
 18
La preparacin de F- reactivo es bastante engorrosa y requiere:
Remover el agua del sistema (para que el F- acte como nuclefilo). Se pasa nitrgeno seco previo a la sntesis.
18

Purificar el F- por columna de intercambio aninico.

18

Eluir el F- con K2CO3 acuoso y obtener KF en solucin

18

Complejear el K+ con Kryptofix (K222) para hacer ms reactivo al F-

18

Disolver el precursor en solvente aprtico (MeCN).

ROL DEL CATALIZADOR DE TRANSFERENCIA DE FASE Y DE LA BASE

El kryptofix tiene el tamao adecuado para introducir el K+ dentro de su anillo y separar el
enlace K-F.
El otro agente utilizado es el mostrado ms abajo: tetrabutilamonio. Hace lo mismo que el
anterior. Al ser un catin tan voluminoso, el fluoruro no se le puede acercar mucho y aumenta la
distancia floururo-catin, separndolos.
A su vez, actan como catalizadores de transferencia de fase. Recordar que esto yo lo eluyo en
forma acuosa y lo quiero seco. El fluoruro de sodio como tal no va a ir hacia la capa orgnica.
Estos dos agentes ayudan a que el fluoruro de sodio se transfiera a la capa orgnica, para luego
poder secarlo (ver imagen abajo y a la izquierda).
Es decir que sirve para aumentar la nucleofilia y para catalizar la transferencia de fase.

Esto generalmente se hace en una base, que usualmente es el carbonato de potasio. El rol de
la base es prevenir la formacin del cido fluorhdrico. En el ciclotrn lo tengo bajo la forma de
cido fluorhdrico disuelto en agua, ya que esta en forma de anin y junto con agua. No se debe
formar cido fluorhdrico, ya que es voltil y se va a perder al calentar, perdiendo parte de la
actividad. Por lo tanto, se desea mantener como fluoruro. Adems, ayuda a completar el ion
fluoruro en la transferencia de fase.
Hay que tener cuidado, ya que muchas veces el precursor es sensible a la base y pueden catalizar ciertas reacciones. Es por esto
que se puede jugar con las diferentes bases de manera de ver cul es mejor para mi reaccin. Lo ms comn es utilizar carbonato
de potasio.

DESPROTECCIN

El ltimo paso siempre es la hidrlisis para

desproteger.

PURIFICACIN FINAL Y TRANSFERENCIA

Purificacin final, ajuste de pH y osmolaridad
Buffer citrato
Purificacin por 2da C18 y columna de Alumina (retiene fluoruros si se lleg a liberar alguno)

85
 Filtracin por 0.22
Dura 2 minutos

Dnde se realiza la sntesis de 18F-FDG?

En mdulos de sntesis automaticos.

Ejem. FASTlab (GE)
Se emplea casete conteniendo:
-Reactivos
-Columnas de extraccin en fase slida
-Jeringas
-Reactor

Casette para la sntesis:

HOT CELL en rea blanca: est ubicado dentro de una Hot cell.

18F- se enva a una celda caliente

Celda cuenta con:
- Filtros de aire al ingreso
- Filtro de carbn activado a la salida por si se libera fluoruro, para que no salga a la atmosfera.
- Suministro de gases de alta pureza: N2, He y aire comprimido
Adems, tiene presin negativa para evitar que la actividad salga de ah adentro.
La otra opcin es realizarla en el tracer lab, donde yo tengo que cargar todos los reactivos por
separado. Esto es mucho ms lento, porque la preparacin de reactivos debe realizarse en un
flujo laminar, con esterilizacin posterior, ya que el producto final va a ser administrado por va
IV.

Sustitucin nucleoflica aliftica

Ejemplo: trazador [18F]FLT, indicador de proliferacin
celular.

86
ABX kit for FLT synthesis on FXFLT

Synthesis steps, FLT

Los pasos son similares a los mostrados para la
FDG en el fast lab. El 18F viene del ciclotrn hacia la
celda, y se puede detectar la actividad para ver si
llego lo que yo esperaba. Primero debo atrapara el
fluoruro en la columna de intercambio. Se mueve a
travs de bombas de vaco. Luego se debe eluir el
fluoruro (lo eluye con lo que est en el vial 1) por el
kryptofix mediante vaco. De ah pasa al reactor,
donde lo seca. Aqu se entra nitrgeno y se hace
vaco, y luego se calienta con vaco, para secar bien.
Adems, se pasa ACN (generalmente en el vial 2).
Luego se marca (se agrega el precursor que est
en el vial 3 y se calienta). Una vez marcado, se le
agrega cido o base para realizar la hidrlisis. Para
ello se vuelve a calentar. Una vez realizado este
paso, se pasa a travs de una columna de almina
para poder retener todo el fluoruro que no reaccion. Despus viene la purificacin, en este caso en HPLC. Puedo recoger lo que
sale desde el HPLC, y mandar lo que no me interesa al waste y lo que sale dentro del pico al vial final.
Los pasos bsicos son: atrapamiento del fluoruro, elusin, acondicionamiento del fluoruro con kryptofix o tetrabutilamonio,
secado, agregado de precursor, marcacin, hidrlisis y purificacin. El paso de hidrlisis puede saltearse, si no tiene grupos
protegidos.
18
1. Entrapment of F-
18
F- are trapped on the ion exchange resin
18
* O]H2O passes through and is recovered in the water recovery vial
Identical step as in FX-FDG
2. Elution of 18F-
A mixture of potassium carbonate and kryptofix 2.2.2 are used to elute 18F- ions from the column into the reactor.
Similar step to FX-FDG
3. Drying step
Acetonitrile is added to the reactor (easier to get rid of water if acetonitrile present azeotropic destillation)
Drying takes place in two steps:
1. Reactor heated to 60 C , He flow on, vacuum on (7 min). Primero hace un calentamiento suave y luego ms fuerte.
2. Deep drying at 120 C, He flow off, vacuum on (5 min)
Synthesis steps, FLT
4. Labelling
10 mg of precursor in DMSO is added to the reactor
Labelling takes place at 160 in sealed reactor for 10 minutes
Same reaction mechanism (nucleophilic substitution) as in FX-FDG
5. Hydrolysis
NaOH is added and solution heated at 50 C for 10 minutes
Partial neutralization with disodium phosphate buffer
6. Purification
Unreacted fluorine absorbed on alumina Al2O3 cartridge
Product collected in HPLC injection reservoir

87
Example of quality control/HPLC,

Se muestra un perfil de HPLC preparativo para FLT. Se muestran los

cromatogramas de UV y gama (puedo seguir la sntesis a travs de ambos
detectores que estn dentro del mdulo). Se ve el pico del precursor y el pico del
radiofrmaco marcado. Yo le puedo decir al equipo desde donde hasta donde
tiene que juntar.

Pre-synthesis routines FLT en mdulo FxFN: no nos olvidemos que se produce para uso en humanos y va intravenosa, por lo que
se necesita realizar todo lo mostrado previo a la sntesis. Esto ocurre en el caso de los mdulos, y no en el caso del uso del casete.
Tracerlab FX-FLT necesita ser limpiado y acondicionado previo a cada sntesis:
The CLEAN method uses water to remove the remaining activity and residual salts
The CLEAN AND DISINFECT method uses isopropanol and 70 % ethanol as HPLC eluent 2 to clean the HPLC loop.
The DRY method uses acetone to remove moisture from the internal tubing
The HPLC column is flushed with 70 % ethanol, afterwards with the eluent used for separation of FLT.

CONTROL DE CALIDAD DE LAS MARCACIONES CON 18F

El control de calidad puede definirse como la parte de las normas de correcta fabricacin relacionada con el muestreo,
especificaciones, ensayos, y con la organizacin de la documentacin que asegura que la calidad del producto ha sido juzgada
como satisfactoria.
Controles de calidad necesarios:
pH: en general entre 4.5 y 7.5
Inspeccin visual (presencia de partculas, color...).
Pureza radioqumica (diferentes especies qumicas que contienen el radionucleido de inters, generalmente por
HPLC). En general se pide mayor a 90%.
Pureza qumica (sustancias qumicas no radiactivas, generalmente por HPLC). Hay otras especies qumicas que me pueden
contaminar: precursor, kryptofix, tetrabutilamonio, etc.
Pureza radionucledica (distintos radionucleidos, generalmente por espectrometra gama). Se realiza por centelleo slido, y se
ve el pico a 511keV.
Actividad especfica: en general es muy alta porque no tengo dilucin isotpica. Est ms relacionada con la cantidad de
precursor que debo utilizar.
Presencia de disolventes residuales (en el caso de que pudieran aparecer, deber determinarse su cantidad, mediante
cromatografa de gases). Recordar que vamos a usar ACN para secar y debemos controlar que est por debajo del lmite.
Test de endotoxinas (valor lmite). Existen mtodos rpidos que se pueden utilizar.
Esterilidad
Como dijimos en la clase anterior, yo debo asegurarme que
el mtodo sea estril, porque no puedo esperar 15 das para
esperar el resultado del test de esterilidad para inyectarlo al
paciente.
Monografa de la USP 30 NF 25 de 18F-FDG: si el
radiofrmaco est en la farmacopea, se debe seguir dicha
monografa.

MARCACIONES INDIRECTAS:
La imagen de la derecha muestra grupos prostticos que se
pueden marcar para luego unirlos a la protena. De esta
manera realizo una marcacin indirecta, que no es lo ms
comn.

88
ACTIVIDAD ESPECFICA

89
90
CLASE 9: RADIOFRMACOS DE DIAGNSTICO
MARTES - 14/06/2016

QU SON LOS RADIOFRMACOS?

Los Radiofarmacos son preparados radiactivos aptos para ser administrados en seres humanos.
Se administran a nivel de trazas con fines diagnsticos o teraputicos.
No producen efectos farmacolgicos sino que es la energa emitida en el decaimiento radiactivo (radiacin) la responsable de
su funcin.

PROCEDIMIENTOS DIAGNSTICOS
Tienen por objetivo diferenciar una anatoma, fisiologa o metabolismo anormal del normal o estudiar procesos bioqumicos
in vivo.
Se realizan mayoritariamente mediante obtencin de imgenes.
Tambin existen procedimientos de anlisis de muestras.

ESTUDIOS DE ANLISIS DE MUESTRAS

Permiten realizar un diagnstico basndose en la absorcin, dilucin, concentracin o excrecin de radiactividad luego de la
administracin de un radiofrmaco.
El resultado se basa en el conteo de muestras de sangre, orina o heces

En general las tcnicas de diagnstico se utilizan para obtencin de imgenes, pero tambin se hizo en un pasado para obtener
muestras. Un ejemplo de los estudios de diagnstico basado en muestras puede ser personas que tienen problemas de anemia
por mala absorcin o un dficit asociado a vitamina B12; en estos casos se administra una amina marcada con cobalto. Otro
ejemplo es la posibilidad de estudiar efectos de dilucin y a travs de este ver el volumen sanguneo. En dicho caso se administra
una cantidad conocida de una actividad, se inyecta en el lecho vascular, se muestrea y se determina cuanta actividad por mL
tiene. A partir de esto se determina cunto estuvo diluido y cunto es el volumen corporal. Es una determinacin del volumen
corporal sanguneo. Otra opcin es que se hagan estudios por concentracin o por excrecin de radiactividad luego de la
administracin de un frmaco. En este caso se estudia una muestra biolgica; si se quiere estudiar excrecin se toma una
muestra de orina, si se quiere estudiar el metabolismo se toma una muestra de sangre o plasma.
51
Ejemplo: Estudio de sobrevida de glbulos rojos con Cr.
Tiene por finalidad el estudio de pacientes con enfermedades de tipo hemoltico que disminuyen el tiempo de vida media de
los glbulos rojos.
Requieren la marcacin in vitro de los glbulos rojos del paciente y el estudio de la disminucin de la actividad sangunea
mediante extracciones seriadas a lo largo del tiempo.
51
Marcacin in vitro de glbulos rojos con Cr.

Existen enfermedades del tipo hemolticas,

en donde se ve una destruccin de los
glbulos rojos. Los glbulos rojos tienen una
semivida determinada y los pacientes que
tienen anemia hemoltica ven disminuida
dicha semivida.
Lo que se hace en este estudio es una
determinacin de la semivida de los glbulos rojos. Se realiza una marcacin in-vitro de los glbulos rojos (muestra antloga),
se toman extracciones seriadas a lo largo del tiempo y se va estudiando la concentracin sangunea lo largo del tiempo.
Se extraen 40 mL de sangre, que se le adiciona el cromo como cromato de sodio y se va a producir el marcado entre los
glbulos rojos. La hemoglobina se va a unir al Cromo reducindolo; va a quedar un excedente que no es captado.
El cromo 51 tiene una semivida de 2 meses por que permite el seguimiento a lo largo de ese tiempo y por lo tanto construir
curvas y ver si la semivida de los glbulos est dentro del comportamiento esperado o no.
91
 OBTENCIN DE IMGENES
El radiofrmaco es preparado y administrado al paciente, generalmente por va intravenosa
La radiacin emitida es medida externamente al paciente con equipamiento adecuado
El patrn de distribucin de la actividad en el rgano en estudio permite diagnosticar diversas patologas

La medicina nuclear convencional como la imagenologa molecular funciona en base a imgenes. Tenemos un radiofrmaco
que es una fuente abierta (caracterstica de medicina nuclear: se trabaja con fuentes abiertas), como puede ser una formulacin
en un vial. Una vez formulado y controlado debidamente, est apto para ser administrado. Para poder hacer la administracin
vamos a tener que cargar la jeringa en un protector de jeringa, para minimizar la tasa de dosis del personal que est
administrando. Se va a ver un patrn de biodistribucin, y a travs de esto llegar al diagnstico de diferentes patologas.

RADIOFRMACO IDEAL PARA DIAGNOSTICO POR IMGENES

Debe permitir mxima eficiencia de deteccin de la radiacin emitida con un mnimo de dosis absorbida por el paciente.
Para ello se debe seleccionar un radionucleido y un radiofrmaco de propiedades ptimas.

PROPIEDADES DEL RADIONUCLEIDO

Debe emitir radiacin electromagntica con mnima emisin de partculas.
Debe tener una energa de entre 30 a 300 KeV (para equipos con cristal de NaI (Tl) o 511KeV para cristales BGO o LSO.
El Periodo de semidesintegracion debe ser corto (pero no tan corto que no permita el estudio).
Debe encontrarse fcilmente disponible a bajo costo.

Hay ciertas propiedades que le tenemos que exigir a los Radiofrmacos de manera que obtener de manera ideal estas
imgenes. Primero que nada, se trabajar con una seal que se va a distribuir en el organismo del paciente, por lo que tenemos
que poder detectar dicha seal con la mxima eficiencia posible, pero que el paciente absorba la menor cantidad posible de
dosis; se debe pensar en la radioproteccin del paciente. Se necesita que sea un emisor gamma, es decir, que tenga emisin
electromagntica y que la emisin de partculas sea la menor posible, porque estas partculas van a interaccionar mucho con el
tejido que van a ir atravesando y van a ceder su energa y a ir ionizando el tejido que atraviesan.

TIPO DE EMISIN
Modo de decaimiento Radiacin electromagntica asociada
Transicin isomtrica Gamma
Captura electrnica Rayos X
Emisin de positrones Radiacin de aniquilacin

Tenemos diferentes modos de decaimiento. Transicin isomtrica es cuando se emiten rayos gamma. Captura electrnica va a
estar asociada a los rayos X y la radiacin de positrones da como resultado la emisin de un positrn, que va a encontrar
electrones y se va a aniquilar dando lugar a dos rayos gammas de igual direccin y sentidos opuestos de 511 KeV (esta
aniquilacin de positrones es lo que va a detectarse).

ENERGA DE EMISIN
En cuanto a la emisin de energa tenemos que si el radionucleido emite con energa
mayor a 300 KeV, parte de la radiacin emitida por el paciente va a seguir de largo y se va a
perder. Todo lo que sea entre 30 y 300 KeV va a ser detectado.
El colimador cumple la funcin de direccionar el haz de esa emisin para que pueda ser
visto por el detector.

PRINCIPALES RADIONUCLEIDOS PARA SPECT

RADIONUCLEIDO MODO DE DECAIMIENTO T ENERGA (KeV)
67
Ga CE 78,3 h 93, 185, 300
99m
Tc Transicin isomtrica 6h 140
111
In CE 2,8 das 172, 247
123
I CE 13,2 h 159
131
I - 8 das 80, 364, 638
201
Tl CE 73,1 h 135, 168
El I de acuerdo a la dosis que se administre puede cumplir funcin de diagnstico o tratamiento para hipo e hipertiroidismo.
El Tl tiene un comportamiento smil al potasio, por lo tanto sirve para el diagnstico de patologas cardiovasculares.

92
 PRINCIPALES RADIONUCLEIDOS PARA PET
RADIONUCLEIDO T ENERGA mx. (MeV)
11
C 20 min 1
18
F 110 min 0,7
68
Ga 68 min 1,9
13
N 10 min 1,7
15
O 2 min 1,2
Sacando al F y al Ga tenemos los radionucleidos de la semivida corta que son el C, O y N. CUDIM trabaja con estos
radiofrmacos.

GAMMACAMARA CIRCUITO POSICIONADOR X-Y

COLIMADORES

EQUIPO SPECT

El Spect permite tener cortes en torno a un volumen. Permite obtener cortes

sagitales, transversales y longitudinales, y de esa manera poder construir una
imagen.

EQUIPO PET

Los positrones se encuentran con un electrn de la periferia y se aniquilan,

produciendo la emisin de dos rayos gamma de 511 KeV. Eso es lo que van a
detectar los anillos de detectores.

93
 PROPIEDADES DEL RADIOFRMACO
1) Periodo efectivo corto
El periodo efectivo se define como el tiempo que demora en disminuir a
la mitad la concentracin sangunea de un frmaco o radiofrmaco.
Ocurre por una combinacin de decaimiento fsico y eliminacin biolgica
Si por ejemplo se administra un radiofrmaco que una vez administrado es captado por el sistema seo, el periodo de
semidesintegracin biolgico va a ser un nmero muy grande. Si se trata de un radiofrmaco de Tecnecio, el t es 6 horas. As,
el tiempo de semidesintegracion biolgico es mucho ms grande que el fsico.
Mientras exista en el sistema seo el radiofrmaco va a estar dando una dosis.
A menor periodo efectivo, menor va a ser la dosis de apareacin que se le suministra al paciente

2) Comportamiento biolgico acorde a la patologa que se quiere diagnosticar.

Esto incluye adecuada captacin en el rgano/rganos blanco y una relacin de actividad entre rgano blanco y no blanco
lo mayor posible.

CONTRASTE EN LAS IMGENES

Cuando se administra un compuesto que es un coloide, este es captado por el sistema retculo endotelial a nivel del hgado,
teniendo una distribucin uniforme a nivel del hgado. Si se observa la imagen, hay zonas donde no hay captacin. Esto estara
indicando que hay en ese lugar un comportamiento anormal.
Tambin tenemos una imagen de tiroides, tenemos un ndulo fri que es no captante, y en el otro caso hay una asimetra.

ADEMS SE REQUIERE:
Buena estabilidad in vivo. No sirve que tenga buena actividad in vitro y que luego al ser inyectado en el paciente se
degrade. Lo que se hace es un estudio de estabilidad por competencia; en este tipo de estudio se lo coloca frente a distintas
concentraciones de cistena o albmina y se observa el comportamiento. Se simulan in vitro condiciones que podran
encontrarse in vivo.
Alta pureza radioqumica. Se pide mayor a 90%
Propiedades farmacuticas adecuadas a la va de administracin elegida.

99m
RADIOFARMACOS DE Tc .

99m
El Tc es el radionucleido ms usado en la preparacin de Radiofrmacos de diagnstico debido a que
posee:
Emisin pura
Alto rendimiento de fotones
Energa de 140 KeV
T de 6 horas
Qumica verstil
Fcil disponibilidad a partir de generadores
99m 99
El Tc (blanco) decae a Tc (celeste), que es se considera estable y que nuestro cuerpo con el tiempo biolgicamente lo elimina.

RADIOFRMACO APLICACIN CLNICA

99m
Tc-leucocitos Imgenes de sitios de infeccin e inflamacin
67
Ga-citrato Imgenes de tumores, localizacin de lesiones inflamatorias
99m
Tc-macroagregados de albmina Imgenes de perfusin pulmonar, estudios de embolia pulmonar
99m
Tc-coloide de azufre Imgenes de hgado y bazo, imgenes de mdula sea
99m
Tc-MDP Imgenes seas
99m
Tc-DTPA Estudios de perfusin renal, estimacin de filtracin glomerular, etc.
99m 99m
Tc-MAG3, Tc-EC Imgenes renales, renografa
99m 99m
Tc-HMPAO, Tc-ECD Estudios de perfusin cerebral
99m
Tc-MIBI Estudios de perfusin miocrdica
99m
Tc-pptidos Imgenes de tumores, infecciones y trombos

94
RADIOFARMACOS DE Tc DE PRIMERA GENERACIN (ver pgina 40 en adelante)
Son especies simples marcadas con Tc que permiten medir funciones orgnicas bsicas e inespecficas (no tenan funcin
99m

especfica).
En general el marcado se realiza por reduccin directa del ligando. La estructura no se conoce exactamente ya que no ha
podido ser elucidada.
No haba herramientas para elucidar estructuras, lo que importaba era lo que daba y no su estructura. Era todo con mucha
incertidumbre, era otra lgica donde recin naca la medicina nuclear y la Radiofarmacia. Todava se siguen usando dichos
frmacos. Un 30% de la medicina nuclear es el estudio de centelleo gamma seo, que indica si es enfermedad localizada o
diseminada.
RADIOFARMACOS DE Tc DE SEGUNDA GENERACIN
Son compuestos diseados utilizando los conocimientos de qumica de coordinacin y realizando estudios sistemticos
estructura y biodistribucin para optimizar la captacin.
Se trata de radiofrmacos destinados a medir el flujo sanguneo o perfusin a nivel cerebral, cardiaco y renal.
Son productos de diseo, a fines de los 90 se comenz con esto por lo que es un rea de desarrollo muy nueva.
RADIOFARMACOS DE Tc DE TERCERA GENERACIN
Compuestos basados en ligandos biolgicamente relevantes que permitan estudiar procesos bioqumicos in vivo. Se trata de
protenas, pptidos, sustratos de enzimas o de receptores.
Se hicieron con targets especficos. El TRODAT tiene una estructura tipo simil al anillo de cocana y se usa para patologas del
cerebro como por ejemplo Parkinson.

ANEXINA V
Anexina V es una protena que se une especficamente a la fosfatidilserina,
la que es expuesta en la superficie celular de las clulas apoptticas.
La apoptosis es la muerte celular programada. En ese ciclo si lo miramos a
nivel de la membrana, actan protenas para que la glicerina (que est en el
interior celular) salga hacia el exterior. Eso permite que la Anexina V
reconozca estos residuos y se una. Es por esto que la Anexina V marcada es un
radiofrmaco que indica si hay o no apoptosis.

UTILIDAD CLNICA
ONCOLOGA
Los estudios de imagenologa se usan con varios propsitos. Por un lado para ubicar un tumor primario que tiene una ubicacin
desconocida. Tambin puede usarse para saber si tiene enfermedad localizada o diseminada.
Se requiere evaluar respuesta pretratamiento, ya sea intervencin quirrgica, quimio o radio. Se hacen estudios posteriores
para saber si la remisin es total o parcial, y se evala si hay que cambiar o no el tratamiento. Se hace una evaluacin del
tratamiento porque hay tumores que son Radioresistentes, crecen en condiciones de hipoxia.
CARDIOLOGA
En cardiologa se puede evaluar el rechazo a transponte, ver si hubo un infarto y se puede diferenciar entre una apoptosis y una
perfusin miocrdica.

RADIOFARMACOS PET
Otra ventaja fundamental es la existencia de emisores PET que son isotopos de elementos qumicos presentes en las molculas
11 13 15
biolgicas, principalmente C, N y O.
18
Si bien el F no se encuentra en molculas biolgicas, su qumica similar al H permite utilizar el F para muchas aplicaciones.
La deteccin en coincidencia de la radiacin de aniquilacin del positrn hace innecesario el uso de colimadores aumentando
notoriamente la sensibilidad.

PRINCIPALES RADIOFARMACOS PET

RADIONUCLEIDO T RADIOFRMACO INDICACIONES
11
C 20,40 m Metionina, Colina, PIB Tumores cerebrales, Tumores de prstata, Alzheimer
13
N 9,96 m NH3 Precursor, Flujo regional sanguneo
15
O 2,07 m O2, H2O Metabolismo O2, Flujo sanguneo
18
F 109,80 m FDG Oncologa, Epilepsia, Demencias, Parkinsonismo

Imagen de cuerpo entero utilizando el radiofrmaco 18F-desoxyglucosa (FDG)

La glucosa es hidroflica, tiene una eliminacin muy intensa a nivel renal. Vemos que a nivel del cerebro
se consume un 40%. Tenemos que interpretar las imgenes. Se puede observar en la imagen que a nivel
del pulmn hay una captacin que es anormal.

95
11
C-Metionina (ver pgina 13 y 70)
Diagnstico de tumores cerebrales.
Evaluacin del consumo de aminocidos metabolismo proteico.
11
C-PIB (ver pgina 70 y 75)
Tomando como base la estructura de la Tioflavina T el grupo del Dr. Klunk de la Universidad de Pittsburg, USA, desarrollo el
PIB, radiofrmaco para PET con afinidad por las placas de amiloide presentes en la enfermedad de Alzheimer.
11
Es un colorante, se marc el metilo de la amina con C.

RADIOFARMACOS MECANISMOS DE LOCALIZACIN

DE ACUERDO AL SUSTRATO DE ACUERDO AL TRANSPORTE
Sustrato no especficos Transporte pasivo
Sustrato especficos Transporte activo

CLASIFICACIN DE ACUERDO AL TRANSPORTE

Transporte activo
Requiere energa.
Soluto en contra del gradiente de concentracin (menor concentracin a mayor concentracin).
Se requiere el suministro de energa y puede habar pasaje en contra del gradiente de concentracin.
Transporte pasivo (difusin)
No requiere energa.
Soluto a favor del gradiente de concentracin (mayor concentracin a menor concentracin).
Hablamos de un proceso de distribucin, no requiere energa, no hay consumo.

TRANSPORTE PASIVO: EJEMPLOS

99m
El TcO4 es excluido de los tejidos cerebrales por una barrera permeable. Agente de scaning cerebral

- Trauma
99m
- Tumor o lesin metastsica Permeabilidad de la barrera es daada TcO4 puede entrar
-Accidente cerebrovascular

El Pertecneciato no debera pasar la barrera hematoenceflica, pero si hay un trauma, un tumor o un ACV hay una prdida de
la barrera, y eso permite que este ingrese. Se trata de un ejemplo de transporte pasivo en caso de alteracin por alguna situacin
anormal.
99m
ESTUDIOS CEREBRALES CON Tc -ECD
Complejo neutro y lipoflico.
Atraviesa la barrera hematoenceflica por difusin pasiva.
Permite estudiar la irrigacin cerebral (Para que atraviese la barrera hematoenceflica debe ser lipoflico)
Es posible mediante este estudio hacer un anlisis de la irrigacin a nivel del cerebro.

N-isopropil-p-iodo(123)anfetamina
Trazador pH-dependiente
Neutro y lipoflico al pH de la sangre (7.4) puede penetrar libremente la clula
Tejidos metabolizantes activos como corazn y el cerebro pH intracelular significativamente bajo
Ionizacin menos lipoflica
Atrapada dentro de la clula
123
Es anfetamina marcada con I que es un radiotrazador dependiente del pH. Cuando entra dentro de la clula, debido a su pH
se da una ionizacin, pierde lipofilia y eso hace que quede atrapada dentro ella.

CLULAS SANGUNEAS MARCADAS

Las clulas son aisladas de la sangre del paciente y marcadas con In o
111 99m
Tc
Se forman complejos lipoflico con oxinao tropolona (para In) o HMPAO para Tc
111 99m

Ligando transporta al radionucleido a travs de la membrana celular por difusin pasiva

Son ligandos que permiten atravesar la membrana celular por difusin

pasiva.

96
99m
Tc -MIBI PARA IMAGENOLOGA MIOCRDICA
Complejo catinico pero lipoflico que ingresa al corazn por transporte pasivo.
Se distribuye inicialmente en miocardio de acuerdo al flujo sanguneo
En Uruguay el fondo nacional de recursos, si un paciente tiene que hacerse un cateterismo le
piden obligatoriamente para evaluar si se va a ver beneficiado de la agionoplalstia, que se haga
un estudio con MIBI. El MIBI mide la funcional del miocardio
MECANISMO DE CAPTACIN Y RETENCIN
90% de la actividad en la mitocondria como complejo catinico libre original redistribucin
insignificante en el tiempo (marcador del miocardio especifico que se une nicamente a nivel
de la mitocondria del msculo)
Entrada dependiente de la perfusin miocrdica y acumulacin dependiente de la integridad funcional viabilidad miocrdica
(Principio por el cual se permite estudiar la viabilidad del miocardio)
Gradiente de carga negativa mitocondrial acumulacin y permanencia en el miocito, que slo puede mantenerse si el
miocito es viable (si el miocito no es viable, no hay permanencia. Por esto es un estudio de viabilidad del miocardio)

TRANSPORTE ACTIVO: EJEMPLOS

Captacin de:
Istopos de ioduro y Pertecneciato por tiroides
Agentes hepatobiliares
Derivados de cido iminodiactico marcados con Tc sistema transportador de aniones del hgado
99m

La tiroides capta activamente I para producir la sntesis orgnica de las hormonas tiroides, T3 y T4. Este es un ejemplo de
transporte activo.

CLASIFICACIN DE ACUERDO AL SUSTRATO

Sustrato no especficos
No hay participacin en una interaccin especfica del radiofrmaco con el sustrato.
Sustrato especficos
Hay participacin en una interaccin del radiofrmaco con un sustrato especfico.

MECANISMOS DE CAPTACIN SUSTRATO- NO ESPECFICOS Y ESPECFICOS

Sustrato no especficos
- Bloqueo capilar (por ejemplo, cuando hay un bloqueo por un trombo) y secuestro celular
- Intercambio inico
- Deposicin de aerosol (un paciente respira un aerosol y se puede ver que zonas del pulmn no estn ventilando)
- Fagocitosis y pinocitosis
Sustrato especficos
- Captura metablica / analoga metablica
- Unin a receptores (radiofrmaco de unin a receptores Ga-DOTATATE, que se une a receptores de Somatostatina)
- Mecanismos inmunolgicos (anticuerpos)

Bloqueo capilar y secuestro celular

Macroagregados de albmina humana Tc para estudios regionales de perfusin pulmonar
99m

Inyeccin intravenosa de una suspensin particulada captura de las partculas en el lecho capilar pulmonar si el tamao
de las partculas excede el dimetro precapilar (mayor a 1015mm).
Intercambio inico
Estudios seos con Tc.
99m

HUESO:
- Tejido vivo y funcional que experimenta continuos cambios metablicos.
- Consta de una matriz orgnica fundamentalmente proteica en la que se deposita el material inorgnico (hidroxiapatita),
constituido mayoritariamente por fosfato de calcio.
- Captacin de radiofrmaco resulta del intercambio inico rpido dentro o sobre las superficies cristalinas de la
hidroxiapatita y la lenta incorporacin de iones dentro de la estructura del cristal por intercambio inico lento.
- Captacin significativamente superior en las lesiones en las que el hueso se est continuamente destruyendo y volviendo
a formar.
- Tumores, lesiones metastsicas, fracturas, osteomielitis y cualquier otra afeccin que provoque un aumento en la
actividad metablica normal del hueso.
Deposicin de aerosol
Deposicin en vas areas de partculas marcadas
Partculas mayores a 5mm de dimetro son filtradas en la cavidad nasal o son depositadas en la boca o faringe.
Gotas menores a 0,1 mm de dimetro permanecen suspendidas y son exhaladas sin deposicin.

97
 Dimetro ideal para mxima penetracin de las pequeas vas areas junto con deposicin dentro de los pulmones 0,5
mm.
Estudios de ventilacin pulmonar suspensin de aerosol usada como alternativa al gas radiactivo. TcDTPA: la solucin
99m

se atomiza en forma de nube de partculas finas; se utiliza un nebulizador.

Tc como aerosol slido en una dispersin de partculas ultra finas de carbono penetra hasta los alvolos y se adhiere a
99m

las paredes alveolares.

Captura metablica/analoga metablica

Estudios PET con [ F]-fluorodesoxiglucosa (FDG). [ F]-fluorodesoxiglucosa (FDG) metabolismo de la glucosa (ver pgina 82
18 18

en adelante)
MECANISMO DE CAPTACIN
Incorporada por las clulas en forma anloga a la glucosa y utilizada en su metabolismo
No es reconocido por las enzimas responsables de la gliclisis acumulacin dentro de las clulas
La hexoquinasa la utiliza como sustrato, transformndola en FDG-6-fosfato
Mayor actividad metablica de un determinado tejido mayor captacin de FDG
Radiofrmaco til como marcador metablico tanto en cerebro, como en corazn y tambin en la localizacin de tumores
(de pulmn, cabeza, cuello, mama, vejiga, cerebro, etc.).
Hipercaptacin en tumores debida a aumento de los requerimientos metablicos de tejidos caracterizados por su alto grado
de proliferacin celular en relacin a los normales.
OTROS EJEMPLOS DE CAPTURA/ANALOGA METABLICA
Iodo radiactivo Escaning de tiroides
Seleno metionina, anlogo marcado con 75Se del aminocido metionina Escaning de pncreas
Derivados de esteroides marcados con 75Se, que son acumulados en la corteza adrenal como precursores de la sntesis de
colesterol Anlisis de la corteza adrenal

Unin a Receptores
Los receptores son macromolculas con las que una droga o radiotrazador interacta en forma especfica para producir un
efecto biolgico caracterstico.
Muchos receptores normalmente presentes en el organismo aumentan su concentracin (se sobreexpresan en distintas
enfermedades) permitiendo su utilizacin para el diagnstico de las mismas
ANLOGOS DE SOMATOSTATINA
- La somatostatina es un pptido endgeno cuyos receptores aparecen sobre expresados
en distintos tipos de tumores neuroendcrinos.
- La presencia de sitios de receptores para la somatostatina puede ser demostrada
usando pptidos radiomarcados de estructura similar, entre ellos el octeotride.

OCTREOTIDE
- Presencia de una secuencia de aminocidos similar, en la zona del sitio activo
99m 111 64 68
- Puede ser marcado con distintos radionucleidos ( Tc, In, Cu, Ga) y utilizado en el
diagnstico de tumores tales como carcinoides, tumores endocrinos pancreticos,
neuroblastomas y para gangliomas.

Mecanismos inmunolgicos
USO DE ANTICUERPOS MONOCLONALES MARCADOS COMO RADIOFRMACOS BLANCO PARA
DIAGNSTICO Y TERAPIA
Los Anticuerpos monoclonales o sus fragmentos son tericamente ideales tanto para diagnstico como para terapia debido a
su alta especificidad por el antgeno.
La marcacin con 99mTc no es tan dificultosa debido a su gran tamao. Puede ser realizada por mtodos directos o
mediante el uso de agentes quelantes bifuncionales.
INCONVENIENTES:
- La lenta depuracin sangunea y la alta captacin en hgado han limitado su aplicacin.
- Muy pocos productos han alcanzado aplicacin clnica: Sulesimab (Leukoscan), Trastuzumab (Herceptin), Arcitumomab
(Ceascan)
Leukoscan: Sulesomab. Anticuerpo antigranulocitos especfico para infeccin
CEASCAN: ARCITUMOMAB. Es el fragmento Fab de un anticuerpo monoclonal murino dirigido contra el antgeno carcino
embrionario. Permite diagnstico temprano y seguimiento de cncer colorrectal

VER BIBLIOGRAFA DE LA CTEDRA: RADIOFRMACOS DE DIAGNSTICO

98
CLASE 10: RADIOFARMACIA HOSPITALARIA
JUEVES - 16/06/2016

La OMS para preparados farmacuticos tiene recomendaciones dirigidas a los ministerios de salud pblica, y estos tienen que
internalizar la norma OMS como normativa.
Entonces las guas internacionales las elaboran un conjunto de expertos y dicen lo que el estado de arte indica sobre ciertos
temas, pero puede que no sea aplicable para la realidad del pas.

NORMATIVA EN URUGUAY:
Decreto Reglamentario de Ley 15.703, de 23 de enero de 2003. Esta ley regula todo lo que tiene que ver con la farmacia en
Uruguay. En el decreto reglamentario se agrega la farmacia hospitalaria, y ah establece reas de especializacin dentro de
la farmacia hospitalaria, una por ejemplo es reconstitucin de citostticos, monitoreo de drogas, y la Radiofarmacia.
Unidad de Radiofarmacia integrada al Servicio de Farmacia Hospitalaria (artculo 4). El CUDIM est autorizado como una
Radiofarmacia hospitalaria. se considera una farmacia hospitalaria porque solo se atienden pacientes de una agenda de
CUDIM, si el da de maana se preparan productos para vender a otros centros cambia de categora y pasa a ser una
Radiofarmacia industrial.
Norma UY 100 Reglamento bsico de proteccin y seguridad radiolgica.

Nos brindan criterios, normas, guas, especificaciones en:

Personal
Infraestructura/equipamiento
Registros
Procedimientos de trabajo
- Preparacin/produccin de radiofrmacos
- Control de calidad de radiofrmacos
- Control de calidad del rea y equipos
- Validacin de todas las tcnicas

La Unidad de Radiofarmacia Hospitalaria es la responsable de las siguientes funciones bsicas:

Gestin de todos los insumos necesarios para la preparacin de los radiofrmacos
Marcacin de juegos de reactivos u otros protocolos (ej.: marcacin de elementos sanguneos y biomolculas) de acuerdo a los
protocolos preestablecidos
Control de calidad de todos los radiofrmacos que se preparen
Dispensacin de dosis individuales
Gestin de desechos
Registro de todas las actividades realizadas

La Unidad de Radiofarmacia Hospitalaria puede ser la responsable de las siguientes funciones:

Responsable de la radioproteccin externa e interna del Servicio de Medicina Nuclear
Asesoramiento a todo el personal (tcnico y no tcnico) que ingrese al Servicio sobre el manejo seguro de fuentes radiactivas
abiertas
Asesoramiento al pblico que se realiza estudios diagnsticos y teraputicos sobre las dosis que recibe y cmo manejarse en
forma posterior al estudio
Responsable del control de calidad de los equipos e infraestructura que maneja la Unidad de Radiofarmacia Participar de la
formacin de personal tcnico
Participar en programas de investigacin y desarrollo de nuevos radiofrmacos en protocolos clnicos avalados por las
autoridades correspondientes
Registrar toda biodistribucin anormal o efecto adverso que pueda generar

Caractersticas de la unidad de Radiofarmacia

Preparacin/uso seguro y efectivo de los radiofrmacos
Proteccin del personal y del paciente
Establecimiento de un programa de aseguramiento de la calidad
mbito que requiere la experiencia de personal con formacin farmacutica y conocimientos/ habilidades del manejo de
fuentes radiactivas abiertas o no selladas.

BUENAS PRCTICAS EN RADIOFARMACIA HOSPITALARIA

Las buenas prcticas en el mbito de trabajo son el entorno de seguridad, para decir que el producto que se hace es seguro
para un paciente.

99
NIVELES DE RADIOFARMACIA
Tiene el objetivo de clasificar de acuerdo a la complejidad de los procedimientos que se llevan a cabo y el tipo de radionucleido:
Nivel operativo 1a: Dispensa radiofrmacos comprados o suministrados en su forma final por una Radiofarmacia Centralizada.
Esto incluye tanto dosis unitarias como dosis mltiples de los radiofrmacos ya preparados.
Nivel operativo 1b: Dispensa yodo radioactivo u otros radionucleidos de terapia, en su forma de uso y administracin. Compro
131
la cantidad necesaria para administrar a un paciente. Est en un nivel 1b porque el I voy a tener condiciones de seguridad
ms exigentes que si fuera el 1a.
Nivel operativo 2a: Preparacin de radiofrmacos a partir de juego de reactivos o radionucleidos (procedimientos cerrados).
Es el que en general est en las Radiofarmacias, donde no hay una farmacia radiocentralizada que haga la marcacin.
Nivel operativo 2b: Marcacin de clulas sanguneas autolgico.
Nivel operativo 3a: Modificaciones de radiofrmacos para aplicaciones diagnsticas. Produccin de juego de reactivos. Es
Radiofarmacia industrial.
Nivel operativo 3 b: Preparacin de radiofrmacos de terapia (procedimientos abiertos). Desarrollo e investigacin (I+D).
Nivel operativo 3c: Sntesis de radiofrmacos para PET. Preparacin de radiofrmacos a partir de generadores de largo
perodo. I+D.

Personal
Con formacin en Radiofarmacia.
Apoyarse en la Farmacia Hospitalaria para instrumentar el programa de aseguramiento de la calidad.
Prestar funciones en todo lo concerniente a la Radioproteccin del Servicio y de sus usuarios.
Manual de entrenamiento.
Conocimientos de uso y medida de material radiactivo, normas aspticas de trabajo, proteccin radiolgica y radiobiologa,
qumica de los radiofrmacos y el uso clnico de los mismos.

Infraestructura y equipamiento
rea separada, segura y de acceso restringido.
rea de preparacin de radiofrmacos diseado con seguridad radiolgica para el manejo de fuentes abiertas (estndares)
(rea caliente).
Permitir disponer el equipamiento bsico, accesorios y operar a dos miembros del personal en forma simultnea. Hay
Radiofarmacias que pueden entrar solo una persona, los inconvenientes son que la persona no trabaja todo los das de ao, por
lo que antes tiene que entrenarse el suplente; por eso es que tienen que operar dos personas en forma simultnea.
Mantener temperatura, luz y humedad adecuadas.
Control de calidad de todo el equipamiento preestablecido.
rea de desechos de materiales radiactivos y biolgicos.
rea administrativa, donde llevar toda la documentacin.
rea de almacenamiento de material radiactivo para su uso.
rea de decontaminacin del personal. Esto es una ducha cerca del lugar donde se hace la marcacin.
rea de decontaminacin del material (pileta), no ubicada en la zona de dispensacin.
rea de depsito de generadores.
rea de almacenamiento de juego de reactivos (heladera) y otros insumos.
rea de vestuario.

Documentacin
Manuales Calibrador de dosis, software, cmara de flujo laminar
Registros Controles de calibrador del filtro HEPA, dosis administradas, de limpieza de reas
Referencias normativa nacional e internacional
Especificaciones juegos de reactivos, equipamiento, materiales, etiquetas
Estndares de procedimientos de trabajo de todos los procedimientos de rutina
Hojas de trabajo tcnicas de marcacin de cada RF

NIVEL OPERATIVO 2a
Preparacin de radiofrmacos a partir de juego de reactivos y radionucleidos para diagnstico o terapia (procedimientos
cerrados)
Personal
- Formacin
- Capacitacin
- Normas de higiene
Infraestructura y equipamiento
- Flujo laminar (Clase II, Tipo B2) en ambiente Clase D al menos (ideal Clase C)
- Blindaje apropiado para el operador y para el calibrador de dosis

100
Documentacin:
De la recepcin del generador y control, de los juegos
De reactivos
De las eluciones del generador
De las marcaciones
De las dosis unitarias o multi-dosis dispensadas
Del control de calidad de los radiofrmacos
Del control de calidad de los equipos
De la gestin de desechos
De las limpiezas de reas
Del control microbiolgico de rea y de integridad del filtro
Del almacenamiento y gestin del generador

CAPTULO <797> DE LA USP

El captulo <797> de la USP se trata de productos
estriles preparados, y ah se establecen los requisitos y
dice quin debe cumplir con esos requisitos. Estos
requisitos son estndares que tienen esos preparados
estriles en hospitales, clnicas, etc.
Tiene que haber programas escritos, monitoreo
continuo, capacitacin del personal.
Y as se proponen distintos niveles de riesgo, de bajo
riesgo, medio, alto y de uso inmediato

Planificando los requisitos de infraestructura/reas

limpias: es necesario un equipo multidisciplinario
Aseguramiento de calidad
Aspectos regulatorios farmacuticos
Seguridad y salud ocupacional
Operaciones

Varios meses de planificacin. USP <797> Documentos.

Aprender los procesos. USP <797> Radiofarmacia
Reuniones presenciales del equipo multifuncional
Diseo de rea limpia. Opciones de materiales. Seleccin de vendedores.

De riesgo bajo: Preparados con manipulaciones aspticas enteramente en Clase ISO 5 o mejores, usando solamente
componentes estriles en una zona buffer ISO 8 y radiofrmacos preparados de componentes estriles en containers estriles
cerrados, con un volumen de 100 mL o menos para inyeccin de una nica dosis. Como ejemplo se pueden presentar las dosis
unitarias de RF
De riesgo medio: Preparados con manipulaciones enteramente aspticas en Clase ISO 5 o mejor calidad de aire usando
solamente componentes estriles en zona buffer ISO 7. El proceso de preparacin incluye manipulaciones aspticas complejas,
en lugar de transferencia a un volumen nico. ISO 5 son reas clase A y las reas clase C son ISO 7.
De riesgo alto: Ingredientes no estriles, incluyendo productos manufacturados no preparados para vas inyectables (por
ejemplo oral) que son incorporados , o un dispositivo no estril es empleado previo a la esterilizacin final. Cualquier tem que
es expuesto a calidad de aire pero que ISO 5 durante ms de una hora. Como ejemplo la marcacin de leucocitos.
Uso inmediato: El suministro de uso inmediato est previsto solamente para aquellas situaciones donde hay una situacin de
emergencia o administracin inmediata al paciente luego de su preparacin. Limitado a 1 h de uso luego de su preparacin
Esto son en general los productos PET. El riesgo en este caso es absolutamente menor porque no llega a haber crecimiento
bacteriano ya que se administra inmediatamente. Como ejemplo C-Radiofrmacos.

QUIEN EJERCE EL CUMPLIMIENTO?

Boards de Farmacia de cada estado: Esto rige en Estados Unidos, hay normativas diferentes para cada estado. Cada estado
tiene diferente consejo regional de farmacias.
Existen regulaciones relativas a preparados estriles.
Cambiando hacia USP <797>: los que no trabajen con respecto a este captulo de la USP lo van a observar
Cambios impulsados por la seguridad del paciente
Estndares de las empresas
Prioridad al cumplimiento
Expectativas de los usuarios para el cumplimiento de USP <797>
Exposicin por no cumplimiento a USP <797>

101
 Presiones competitivas
Marca el cumplimiento de USP <797> como diferencia
The Joint Comission
Joint Commission de acreditacin de organizaciones de salud (JCAHO) est aplicando USP Chapter 797 en sus estndares.
Puede requerir un cumplimiento an ms estricto del 797 than Board de Farmacia. Hace acreditaciones en calidad.

Los auditores de la Joint Commission miran si esta el 100%

del estndar, si tenes 14 puntos y solo uno est mal dicen que
no cumple <797>.
Hay presiones competitivas, cada una de las tres
radiosfarmacias de Estados Unidos va a decir que le ofrece a
sus clientes los mejores servicios y cada uno va a poner a sus
farmacuticos a que trabajen de acuerdo a lo establecido en la
<797>.
En los estndares hay un proceso de calidad y hay que tratar
de llegar a ellos y mantenerlos.

REGULACIONES EN RADIOFARMACIA EN USA

NRC (Nuclear Regulatory Commission)
Regulaciones de acuerdos en estados
DOT (Department of Transportation)
OSHA (Occupational Safety and Health Administration)
BOP (State Board of Pharmacy)
FAA (Federal Aviation Administration)
State Department of professional regulation

Buenas Prcticas en Radiofarmacia

Seguridad radiolgica
o ALARA
Dosimetra del personal
o Calibracin de equipos & QC de equipos
o Monitoreo de reas
o Entrenamiento en derrames
o Control de contaminaciones
o Ensear en evaluacin de riesgos

MTODOS DE DESCONTAMINACIN

* Comenzar con el
primer mtodo
listado, luego
proceder paso a
paso con el mtodo
ms agresivo si es
necesario.
Discontinuar
cualquier mtodo si
la piel se irrita
visiblemente

102
Higiene
Prctica asociada con asegurar la salud y limpieza.
Buena higiene prctica garantiza ausencia de contaminacin de los productos
Contaminacin puede traer serios efectos sobre pacientes y productos.

Daos de contaminacin microbiana

Los microorganismos pueden ser patgenos.
Pueden producir toxinas.
Las toxinas pueden ser: exotoxinas o endotoxinas
Personal: nosotros somos la primer fuente de contaminacin microbiana que puede tener un medicamento
Diseminamos aproximadamente 5- 10 millones de descamaciones de piel en 1 da. Con ellos salen principalmente bacterias
Gram + y levaduras, tanto del pelo como de la piel.

Medidas de control del Personal

Enfermedad
Reportar al responsable de cualquier enfermedad que pueda causar la diseminacin de microorganismos
Esto es porque:
a) Contamina al producto directamente.
b) Contamina al equipo usado
c) Disemina la enfermedad en otros integrantes del equipo.
La persona no debera realizar operaciones que impliquen el manejo de materiales de partida, intermediarios o productos
terminados hasta tanto esta condicin no desaparezca.

Higiene - Resumen:
Seguir los procedimientos de la organizacin en vestimenta e higiene:
No usar ropas sucias en el trabajo.
Lavar las manos completamente
Lavar las manos antes y despus de ir al bao
Lavar las manos antes de ingresar al rea limpia.
No tocarse la piel durante el tiempo de trabajo en el rea limpia.

Agua: El agua tambin es un vector, por lo que no debe haber en un rea limpia una pileta.
Toda el agua no-estril puede contener bacterias.
Bacterias gram negativas son los micro-organismos ms comunes encontrados en las fuentes de agua.
Las bacterias puede sobrevivir en agua destilada o purificada.
El agua clorada es menos probable que contenga bacterias.
Las fuentes de micro-organismos incluyen: Pileta de agua, Limpiar la vestimenta y Manos hmedas
Cuanto ms tiempo se deja un equipamiento mojado, ms probable que contenga bacterias
Cualquier fino film de agua va a permitir la diseminacin de bacterias
Las gotas de agua se puede diseminar como aerosoles

Materias primas, material de empaque y componentes

Materias primas y material de empaque puede traer contaminacin microbiana
Todo el material/componentes debe ser removido de los contenedores de embarque y transferido hacia contenedores de
plstico lavables antes de ser introducidos al rea de produccin y/dispensacin.
Los materiales de empaque tambin son una fuente de contaminacin. cualquier cosa que entre a un rea limpia no puede
entrar en caja de cartn, el mismo debe ser removido.

Medio ambiente
El aire que nos rodea contiene microorganismos tales como hongos y formadores de esporas.
Esporas pueden ser recogidas en corrientes de aire, germinar y crecer en donde aterrizan.
2-5% del polvo est compuesto por moho o esporas de bacterias.
Una sola cucharada de t de tierra contiene ms de 1,000,000,000 de bacterias, alrededor de 120,000 hongos y 25,000 algas.
Pallets de madera ayudan a llevar esporas a un rea.
El trabajo de obra crea polvo.
Las cortinas roller o plsticas ayudan a reducir el movimiento de aire entre un rea sucio y un rea limpia.
En reas de produccin se usan filtros HEPA para remover las partculas de polvo del aire.
La monitorizacin del medio ambiente debe hacerse regularmente. Esto puede implicar muestreo del aire directamente,
ubicar placas y placas de contacto para superficies y paredes.
Si el medio ambiente revela un nivel inaceptable de microorganismos, el rea debe ser limpiada y sanitizada.

103
Limpieza reduce la cantidad de polvo o suciedad que puede: ser la fuente de alimentacin de los
microorganismos y/o proteger los micro-organismos durante los procesos de sanitizacin. Es lo primero
Sanitizacin reducir el nivel de micro-organismos a un nivel aceptable. Puede no matar todos los micro-
organismos que estn presentes.
Dos mtodos de desinfeccin: calor y qumico.
Temperatura mayor a 85C por 30min mnimo.
Hipoclorito por encima de 250ppm por 30min mnimo
Alcohol isoproplico 70% estril
Compuestos de amonio cuaternario
Usar la concentracin correcta y el tiempo de contacto apropiado.
Enjuagar usando agua estril para remover los residuos y prevenir el dao.
Usar protectores del personal y del equipamiento adecuados para llevar a cabo la sanitizacin con productos qumicos.
Enjuague remueve todas las trazas del agente qumico sanitizante (si fuera necesario).

Control microbiolgico de productos

Determina controles durante el proceso tales como placas de sedimentacin, muestreos de aire y media fill test:
Calificar al personal de preparacin y procesos en tcnicas aspticas. Al personal hay que calificarlo y recalificarlo una vez al
ao
Asegurar que los procesos producen un producto estril.
Chequear el producto terminado.
Test de esterilidad: pasar una muestra a travs de un filtro que retiene microorganismos. Ubicar el filtro en un medio de
cultivo adecuado e incubar durante 14 das a 2 temperaturas.

Repaso:
La importancia de seguir lo establecido para vestimenta e higiene.
Fuentes de contaminacin microbiana.
Mtodos para reducir la contaminacin microbiana
Como se puede medir la contaminacin en un medio ambiente que se realiza preparaciones farmacuticas.
Mtodos para esterilizar productos y equipos.

Sistema de aseguramiento de la calidad (QMS)

Site Master File: define la poltica del lugar
Archivos del personal
Documentacin y PO
Poltica de validacin
Equipamiento e infraestructura bien controlada
PO sntesis bien controlados
PO control del de materiales
PO de control de calidad
PO de liberacin
PO de fuera de especificaciones
PO de recall, quejas y de control de cambios PO
Plan de auditoras internas

104
CLASE 11: RADIOFRMACOS EN TERAPIA
MARTES - 21/06/2016

PROPIEDADES IDEALES DE LOS RADIOFRMACOS DE TERAPIA

En general son de Administracin sistmica, sin embargo hay algunos ejemplos de administracin localizada en el rea a
trata. Por ejemplo: Tengo un problema en la rodilla y quiero revertir ese problema entonces puedo hacer una administracin
intra-articular.
Selectividad en la captacin en la zona a tratar, con alta relacin tejido blanco/no blanco. Siendo el tejido blanco aquellos
rganos que no quiero tratar
Energa y tipo de emisin adecuadas para el tipo de lesin/proceso a tratar. La energa del radionucledo depende de la zona
a tratar ya que determina el rango de accin del radiofrmaco
T eff (se correlaciona con Tbiolgico and T ) moderadamente largo. En el entorno de das, para que suministre la energa
de la radiacin en la zona a tratar durante un tiempo que asegure el xito del tratamiento.
Dosis de irradiacin adecuada al procedimiento teraputico de acuerdo al objetivo a lograr. De manera de individualizar los
tratamientos para evitar darle al paciente ms de la dosis necesaria evitando irradiacin innecesaria.
Baja toxicidad
Alta pureza radioqumica. En el caso de los radiofrmacos de terapia se requieren lmites de pureza ms estrechos que en
radiofrmacos de diagnstico. Comnmente el lmite de pureza en radiofrmacos de diagnstico es de 90% mientras que en
radiofrmacos de terapia es de 95%. En caso de tener 10% de impurezas ya es mucho porque esas impurezas tienen
patrones de biodristribucin distintos al radiofrmaco y va a estar irradiando tejidos sanos.
Estabilidad in vitro e in vivo.
La biodistribucin del radiofrmaco se correlaciona con sus propiedades fsico-qumicas
Deseable que presenten emisin de fotones. Si es un radiofrmaco de terapia es necesario que tenga emisin de partculas o
captura electrnica. Sin embargo, tambin es deseable que presenta emisin de fotos para poder obtener imgenes y
corroborar que la zona que quiero atacar sea la que realmente recibe la radiacin y para poder hacer el seguimiento del
paciente a travs de imgenes viendo cmo responde el paciente
Posibilidad de esquemas de reiteracin de dosis (dosis mltiples). Se inyecta una actividad y cuando se pierde efecto se
puede repetir el tratamiento

SE TRATA DE UNA METODOLOGA NUEVA?

El uso de radiaciones ionizantes con fuentes abiertas (distribucin sistmica o terapia con radiofrmacos) para proporcionar
dosis de radiacin a tejidos neoplsicos u otras patologas tiene ms de 60 aos de aplicacin. Hoy en da la Asociacin Europea
de Medicina Nuclear (EANM) ha creado Guidelines para las siguientes terapias:
Hipertiroidismo
Carcinoma de tiroides
Sinovitis refractaria
Metstasis seas
Terapia con MIBG
Terapia con P-32
Terapia con lipiodol
En general cuando se habla de radioterapia lo ms comn es pensar en cncer sin embargo hay muchos otros usos.

Radionucleidos de aplicacin potencial en procedimientos teraputicos

105
 APLICACIONES QUE SE ANALIZARAN
Terapia de procesos neoplsicos
Radiosinovectoma
Braquiterapia asociada a angioplastia

TERAPIA DEL CNCER

La terapia con radiofrmacos es una modalidad esencial de tratamiento de muchos tipos de cncer ya sea solo o combinado
con otras modalidades teraputicas como ser ciruga y quimioterapia
Ventajas frente a radioterapia externa:
- Dosis de radiacin selectiva al tejido tumoral, si as lo es la captacin del radiofrmaco y segn la energa del RN.
- Haz externo irradia piel y todos los tejidos que atraviesa
- Tratamiento de multimetastasis

El rango de accin de los las radiaciones depende de su energa y del tipo de

188
radiacin. Un radiacin de 1.7 MeV beta como en el caso del Re tiene 100mm
de rango lo equivalente al dimetro de 100 clulas, pudiendo atacar a una masa
tumoral de aproximadamente 10cm. El rango ya disminuye 10 veces al pasar a
una energa de 0.15 MeV, y como vemos las radiaciones alfa tienen menos
rango de accin.
Qu es lo que ve el PET? Ve algo de entre 5 y 7mm ve masas ya de una gran
cantidad de clulas

Modo de decaimiento Rango LET

- Multicelular 0,5-1,5 mm Bajo, 0,2 KeV/mm
Celular 30-80 um Alto, 100 KeV/
Auger/IC Sub-celular 3 < 0,1 m

Isotopos en la terapia: cirugas con radiacin

ANTICUERPOS MONOCLONALES Y RIT (RADIOINMUNO THERAPY)

Tenemos por ejemplo el anti-CD20 que fue el primero marcado

con iodo 131 aprobado por la FDA. No solo mata a la clula
tumoral sino que tambin mata a algunas clulas vecinas

90
YIbritumomab Tiuxetan (Zevalin)
Es un producto comercial usado para la Radio inmunoterapia de LNH
Linfomas de Clulas B. El costo depende del pas pudiendo estar entre 15.000
a 30.000 dlares. Esta mostrado que hay una mejora en la sobrevida del
paciente como de 4 o 5 aos ms cuando recibe Zevalin. El que lo puede dar
tiene que dar entre 2 o 3 dosis gastando entre 60.00 o 100.000 dlares el
tratamiento, y no est cubierto por ningn sistema de salud.
90
Se marca con Y

106
De Wikipedia:
Ibritumomab tiuxetan, que se vende bajo el nombre comercial Zevalin, es un tratamiento radio inmunoterapia anticuerpo
monoclonal para el linfoma de clulas B recurrente o refractario, de bajo grado o transformado no de Hodgkin, un trastorno
linfoproliferativo. El frmaco utiliza el ibritumomab anticuerpo IgG1 monoclonal de ratn, en conjunto con el quelante tiuxetan, a
la que se aade un istopo radioactivo (ya sea de itrio-90 o de indio-111
El anticuerpo se une al antgeno CD20 que se encuentra en la superficie de las clulas B normales y tumorales (pero no a clulas B
precursoras), lo que permite que la radiacin del istopo unido (principalmente por radiacin beta) para matar a la clula B y
algunas clulas vecinas. Adems, el anticuerpo puede desencadenar la muerte celular a travs de citotoxicidad dependiente de
unin a anticuerpo (ADCC), citotoxicidad dependiente del complemento (CDC), y la apoptosis. En conjunto, estas medidas
eliminan las clulas B del cuerpo, lo que permite que una nueva poblacin de clulas B sanas se desarrollen de las clulas madre
linfoides.

Rituximab
Es un anticuerpo monoclonal quimrico murino y humano, obtenido por ingeniera gentica. El rituximab se une
especficamente al antgeno CD20, una fosfoprotena transmembrana no glucosilada que se expresa en los linfocitos pre-B y B
maduros. Este antgeno se expresa en ms del 95 % de los linfomas no hodgkinianos (LNH) de linfocitos B.
El antgeno CD20 se expresa tanto en linfocitos B normales como en clulas tumorales, pero no en las clulas madre
hematopoyticas, clulas pro-B y las clulas plasmticas normales ni en otros tejidos normales. Este antgeno no se internaliza
tras la unin del anticuerpo ni se elimina de la superficie celular. El antgeno CD20 no se halla en la sangre como antgeno libre, y,
por esta razn, no compite por la unin con los anticuerpos.
El dominio Fab del rituximab se une al antgeno CD20 en la superficie de los linfocitos B, mientras que el dominio Fc puede
reclutar efectores de la respuesta inmune para mediar la lisis de los linfocitos B. Los mecanismos posibles de la lisis celular
mediada por efector incluyen citotoxicidad dependiente del complemento- (CDC) como resultado de la unin de C1q, y la
citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) mediada por uno o ms receptores Fc de la superficie de los
granulocitos, macrfagos y clulas NK (natural killer). Tambin se ha demostrado que la unin del rituximab al antgeno CD20 de
los linfocitos B induce la muerte celular por apoptosis.
Tras completarse la administracin de la primera dosis de rituximab, el nmero de linfocitos B perifricas disminuyeron por
debajo de lo normal. En los pacientes tratados de neoplasias hematolgicas, la repoblacin de linfocitos B comenz a los 6 meses
de tratamiento y se recuperaron los niveles normales entre los 9 y los 12 meses despus de finalizado el tratamiento.

90
Y-Zevalin
Ibritumomab (anticuerpo murino pariente del Rituximab)
Tiuxetan (MX-DTPA) conjugado al anticuerpo un fuerte enlace tipo urea
Retencin estable del 90Y
Ytrio-90
T1/2 = 64 hs
Administracin ambulatoria
Beta emisin 90 = 5 mm

Zevalin Estudio Fase III: Diseo. Linfoma de bajo grado recurrente o refractario

Esto es simplemente para saber cul es el protocolo del estudio en fase III. A un grupo poblacional con linfoma de bajo grado
recurrente o refractario se le administra 375mg/m3 de Rituximab durante cuatro semanas y al otro se le administra una pre-
carga de Rituximab que es un anticuerpo monoclonal de manera de bajar la radiacin inespecfica del Zevalin, y una dosis
111
pequea de In Zevalin de 5mCi (se marca con indio para verificar los lugares de captacin porque l Y es beta puro y no se
puede ver por imagenoelogia) para observar tolerancia del paciente al producto y 7 das despus se le administra una dosis de
90 90
0.4mCi/Kg de Y-Zevalin. Esto es un protocolo publicado pero en la prctica no se hace, se va directo al Y-Zevalin

107
Como se ve en la siguiente tabla las respuesta fueron menores en los pacientes que solo se le administro Rituximab.

Zevalin Rituximab
Tasa de respuesta
Remisin completa 30% 16%
Remisin parcial 45% 36%
Alguna respuesta 80% 56% p=0.002
Duracin de la respuesta luego de 6 meses 74% 52% p=0.02
Duracin de respuesta a los 12 meses 47% 30% p=ns

De Google:
EL TRASTUZUMAB (RHMAB HER2)
Es un anticuerpo monoclonal recombinante obtenido por ingeniera gentica que acta frente la protena HER2 y se utiliza en el
tratamiento de los carcinomas de mama que expresan esta protena. El trastuzumab es una inmunoglobulina IgG1 kappa que
contiene una regin idntica a la inmunoglobulina humana unida a una porcin de una protena murina susceptible de actuar
como ligando del receptor para HER2. Este tipo de anticuerpos monoclonales humanizados muestran una menor
inmunogenicidad. El trastuzumab es producido por cultivos clulas de ovario de hmster chino en las que se ha introducido el gen
productor de la molcula recombinada. En combinacin con el paclitaxel, el trastuzumab es considerado como un tratamiento de
primera lnea en el cncer de mama metastsico.
Mecanismo de accin: la sobre expresin de HER2 se observa en el 20-30 % de los cnceres de mama primarios, mostrando los
pacientes cuyos tumores sobreexpresan esta protena una supervivencia libre de enfermedad ms corta si se compara con los
pacientes cuyos tumores no sobreexpresan HER2. Esta protena es un receptor de membrana, cuya funcin no es bien conocida,
estructuralmente relacionada con el factor de crecimiento epidrmico
El trastuzumab ha demostrado, tanto en ensayos in vitro como en animales, inhibir la proliferacin de clulas humanas
tumorales que sobreexpresan HER2. Adems, el trastuzumab es un potente mediador de la citotoxicidad dependiente de
anticuerpos mediada por clulas (ADCC). Se ha demostrado in vitro, que la ADCC mediada por trastuzumab se ejerce
preferentemente sobre clulas que sobreexpresan HER2 si se compara con clulas cancerosas que no sobreexpresan HER2.

99
Es posible que este anticuerpo sea marcado con Tc para hacer estudios diagnsticos, adems tambin es posible marcarlo con
177 188
Lu o con Re para la terapia.

Blancos moleculares con anticuerpos Trastuzumab

Lo que se muestra (que no se ve nada) es que los tumores

neuroendocrinos son una familia muy grande, involucran a nivel
de los ganglios, a nivel del adrenal pero se caracterizan por
presentar receptores de somastatina y por eso en los campos
moleculares tenemos pptidos que identifican estos receptores.

108
Blancos moleculares anlogos de Somatostatina:
DOTATOC
DOTATATE
DOTANOC

68
Est la posibilidad de marcarlos con Ga que es emisor de protones, o de marcarlos con diferentes emisores de partculas y
usarlos para la terapia.
Formula estructural del DOTA-Tyr3-Octreotide
Vemos a modo de ejemplo formula estructural del DOTA-
Tyr3-Octreotide Radiopptido con alta afinidad al receptor de
receptores de Somatostatina subtipo 2 en el targeting de
tumores neuroendocrinos.
67 68
Vemos en particular el Ga o Ga donde se conjuga y vemos
que tenemos un residuo de tirosina modificado que tiene una
alta afinidad para ese subtipo de recetor de Somatostatina.

COMBINANDO DIAGNSTICO & TERAPIA

DOTA-bifosfonatos aplicable para
68 177
Diagnstico PET ( Ga) Y terapia ( Lu). Es
68
decir que si se marca con Ga vamos a poder
usarlo para diagnostico con imgenes PET y si
177
se marca con Lu se puede hacer un
tratamiento.

Estas imgenes a la izquierda son de un estudio realizado por H. Balter en la facultad de

ciencias.
Es por el lutecio que es emisor beta y gama que podemos tener este tipo de imgenes. Las
imgenes son de 30 minutos, 24 hs, 72 hs y 7 das luego de la inyeccin de 177LuDOTA-TATE.
Captacin progresiva en todas las lesiones metastsicas se visualiza desde los 30 minutos y
persiste en el da 7.

TUMOR DE PULMN NE
Carcinoma neuroendocrino de pulmn con
metstasis en hgado, hueso y ndulos
linfticos. Se muestra la progresin de la
enfermedad luego del tratamiento con 90Y-
DOTATOC

METAS DE LA TERAPIA DEL CANCER CON RADIOFARMACOS

La importancia del producto depende de la extensin de la patologa entonces en cierto momento cuando la persona ya no
puede ser salvada el objetivo es hacer un control de la sintomatologa como el tratamiento del dolor paliativo, queremos que el
paciente este lo mejor posible en su calidad de vida y controlar el sntoma principal que es el dolor invalidante. Cunto ms
avanzada la enfermedad vamos a estar ms arriba en la lista, cuando menos avanzada este la enfermedad podr ser posible
plantearse remisin total o parcial.
1. Control de sntomas
2. Mejorar calidad de vida
3. Detener progresin
4. Remisin parcial
5. Remisin total
METAS EN LA TERAPIA DEL CNCER CON RADIOFRMACOS
109
 Enfermedad avanzada
- Control de sntomas y del dolor
- Mejorar calidad de vida
- Reducir los requerimientos mdicos
- Estabilizar la enfermedad
Enfermedad limitada
- Igual que en enfermedad avanzada
- Reduccin en el tamao del tumor
- Reduccin en la secrecin hormonal que estimulan el crecimiento del tumor
- Remisin completa

CARACTERSTICAS DESEABLES DE LA TERAPIA DEL CNCER CON RADIOFRMACOS

- Preferible en pacientes no internados
- Mnima toxicidad
- Efectiva durante un perodo de tiempo definido
- Que pueda ser utilizada con terapia convencional
- Baja complejidad
- Mltiples tratamientos sean posible/deseable

RADIOFARMACOS DE TERAPIA PARA CNCER EN LA PRACTICA CLNICA

Siempre en la prctica mdica nos preguntamos
Es la tasa de dosis importante y cul? Son las diferencias de tasa de dosis significativas?
Presentan ventajas los tratamientos mltiples? Se verifica una supresin de mdula sea significativa?
Existe un costo/beneficio positivo en relacin a los resultados? Existe beneficio en la sobrevida del paciente?
Puede ser efectivo su administracin con terapias adyuvantes? Cules son los puntos finales apropiados?

VARIABLES DEL TRATAMIENTO

En funcin de las preguntas anteriores surgen las distintas variables
ADMINISTRACIN DE LAS DOSIS
Dosis nica mltiple - fraccionada
DOSIS ABSORBIDA
Dosis individual - Dosis colectiva - Tasa de dosis
VIA DE ADMINISTRACIN
TERAPIAS ADYUVANTES/MODIFICADORES

ENSAYOS DE FASE I
En el caso de Radiofarmacos y citostticos TIENE que ser con pacientes; no es tico hacerlo con voluntarios sanos.
Seleccin del agente para la evaluacin en humanos
Establecer la toxicidad
Establecer el escalado de dosis
Establecer la MTD (mxima dosis tolerada)
Establecer el principio de la prueba o de la evidencia
Biodistribucin y dosimetra

DEFINICIN DE RESPUESTA
Para ver si el tratamiento tuvo xito o no, se basa en ver los siguientes parmetros.
Tamao del tumor Excrecin de hormonas Nivel del dolor (status)
Nivel de analgesia Calidad de vida

TERAPIA PALIATIVA DEL DOLOR

Inyeccin intravenosa de un radiofrmaco, por ejemplo: Sr-89 o Sm-153 (imagen de la derecha)

TRATAMIENTO PALIATIVO DEL DOLOR METASTSICO SEO

Hay muchas alternativas entre las que se encuentran
QUIMIOTERAPIA
TERAPIA HORMONAL
RADIOTERAPIA
FRMACOS ANALGSICOS
*ANTIINFLAMATORIOS NO ESTEROIDEOS *ANALGSICOS MAYORES
188
RADIOFRMACOS DE TERAPIA: Re-HEDP

110
 188
METODOLOGA usada en terapia de Re-HEDP
Dosis trazadora o fraccionamiento de la dosis teraputica
Recoleccin de muestras urinarias durante 6 hs
Adquisicin del centellograma seo
Estimacin de la dosis absorbida
Dosis teraputica complementaria en 24 a 48 hs
Grupos de 30, 60 y 80 mCi de dosis administrada
99m 188
Centellograma con Tc-MDP (diagnstico) Centellograma con Re-HEDP (teraputico)

Como se ven en los centellogramas son pacientes muy complicados. En el paciente de la derecha se ve como una nube
alrededor eso es la radiacin de frenado del propio paciente
La caracterizacin completa se hizo con 5 pacientes internados durante 24 a lo que se le sacaron muestras de orina y sangunea
y se publicaron los siguientes resultados:
DISMINUCIN DE AINEs
78% disminucin del 62% o mayor
17% sin cambios
5% aumento de ingesta de AINEs
EVALUACIN DE DOLOR (ndice subjetivo)
78% mejora mayor al 60 %
11% aumento del dolor
11% sin cambios
DISMINUCIN DE ANALGSICOS MAYORES
57% disminucin de ingesta
43% ces ingesta
Dosis total a mdula sea (rad/mCi):
En funcin de la captacin sea (%) En funcin de la dosis administrada (mCi/kg)

CONCLUSIONES
80% de los pacientes reportaron mejora en calidad de vida en tres parmetros: disminucin del dolor, disminucin de
ingesta de analgsicos y aumento de actividades
Es necesario individualizar la dosis, siendo la captacin sea el parmetro que permite calcular la dosis a administrar para
limitar la dosis absorbida en mdula sea

TERAPIA RADIOFARMACUTICA
El iodo 191 es lo bsico en medicina nuclear, es muy comn su uso.
Se administra en forma lquida para el tratamiento del cncer de tiroides. Es distinto cuando se administra en solucin o en
capsula ya que cuando se administra en solucin queda en todo el recorrido del esfago y los aerosoles que genera la
persona al habar en seguida de la administracin son muy contaminantes, por lo tanto para el personal de la salud ser
131
ms seguro que el paciente lo tomara en capsulas fraccionadas con el I.

111
 El paciente irradia I por todos los fluidos biolgicos, este paciente queda internado durante tres o cuatro das hasta que el
131

medico nuclear verifica que a un metro la tasa de exposicin tenga el nivel permitido por la legislacin, de manera que
cuando vaya a su casa los familiares puedan acercase hasta 1m como hasta como una semana.
En los das de internacin toda la habitacin queda contaminada en particular la orina elimina mucho I, a la tiroides solo
131

va el 20% porque son pacientes a los que se le extirparon la tiroides y se quiere asegurar que no queden restos. El resto lo
elimina por los fluidos corporales como sudor, heces, saliva orina. La vajilla, las sabanas y todo elemento en contacto con el
131
paciente tiene que ser descartable y luego ir a un depsito para descartar el I por decaimiento.
Las muestras sanguneas y de orina deben ser rotuladas como radiactivas para que el laboratorio que las analiza lo tenga
en cuenta
Todo el que entra a la habitacin debe entrar con zapatones y guantes que al salir debe dejarlos en la habitacin
El personal debe estar capacitado en cmo manejarse dentro de la habitacin

RADIOPROTECCIN: Aspectos de seguridad radiolgica:

Previo a la terapia: posible embarazo, incluyendo consejo al paciente por el mdico y test de embarazo.
Da de la terapia: instructivo mdico, protocolo de
administracin, consejos al personal de enfermera y
acondicionamiento de la habitacin del paciente (pacientes
internados).
Durante la terapia (internacin): control de los desechos
radiactivos, incluyendo orina, heces, jeringas y otros
artculos que puedan estar contaminados, control de visitas y
monitoreo del paciente y del medio ambiente.
Alta: verificacin de lmites al alta e informacin a
suministrar al paciente
Posterior al alta: Consejos sobre futuros embarazos

RADIOSINOVECTOMA, YA NO ES CNCER!
La Radiosinovectoma es una
alternativa teraputica que implica el
uso de radiofrmacos para la ablacin
del tejido sinovial inflamado. El
objetivo de su uso es lograr el control
sintomatolgico del dolor y disminuir
la inflamacin, as como revertir la
historia natural de la enfermedad.
El procedimiento consiste en la
inyeccin intraarticular de un radiofrmaco cuya composicin
qumica es un coloide marcado con un radionucledo emisor de
partculas -

RADIONUCLEIDO IDEAL
32 188 90
P, Re, Y
- Para articulaciones grandes y de gruesa sinovia (rodilla)
186
Re adecuado para tobillos, hombros, codos y mueca
169
Er para pequeas articulaciones

Pacientes con artritis reumatoidea

Alivio leve
- 50% aproximadamente por ndice subjetivo
Disminucin de la inflamacin
-Menos del 20%
Ningn procedimiento con complicaciones

BRAQUITERAPIA ENDOVASCULAR POST-ANGIOPLASTIA

La Braquiterapia es terapia de cavidades, la cavidad a tratar en este caso en el lecho arteria a nivel de las arterias coronarias.
Cuando hay un colapso de las arterias coronarias el paciente sufre un infarto. Si tiene las arterias tapadas hay un desbalance
entre la oferta y la demando de oxgeno al corazn y si persiste en el tiempo se va a producir un infarto. La angioplastia es
destapar la arteria tapada por un depsito de placa de ateroma. El catter ingresa y sube por la vena femoral hasta que llega a
la vena cava ascendente hasta que llega al corazn. Todo esto se sigue en una sala de hemodinamia a travs d un tubo de rayos
x y un fluoroscopio, le van haciendo placas seriadas de rayos x. La punta del catter tiene un globo que al llegar a la zona de la
lesin la tcnica neurocardiologa llena con aire, y luego el medico hemodinamista lo mueve y desobstruye la arteria tapada. Hay
un 20-30% de las veces que al sacar la placa de ateroma el endotelio queda lesionado por lo que en un futuro va a volver a

112
formar una nueva placa de ateroma y tener una re estenosis. Para minimizar esto una alternativa es llenar el baln con una
sustancia radioactiva como puede ser Re-188 y darle una dosis alta (200mCi) durante uno o dos minutos. En total el
procedimiento no demora ms de 7 minutos porque el paciente no lo soporta. Otra alternativa es poner un alambre con Iridio
191 en el sitio de la lesin de aproximadamente 600mCi. Hay otra alterativa que es la ms comn, la cual implica ponerle un
stent el cual tiene un citotxico el que mata las clulas que causan la re aparicin de la enfermedad, el stent sale de 1500 a 3000
dlares el cual es optativo, el fondo nacional de recursos solo cubre la angioplastia y no el stent. La opcin ms barata es la del
Re-188 pero no esta tan difundida como el stent

CALIFICACIONES DEL STAFF DE TRABAJO

La Braquiterapia endovascular es un procedimiento que requiere experta y alta precisin de un equipo multidisciplinario, que
asegure la dosis correcta es proporcionada en el lugar preciso y el tiempo necesario.

INTEGRANTES DEL EQUIPO

Radiofarmacutico
- Prepara y concentra la actividad. Puede actuar como oficial de
radioproteccin en la Sala de Hemodinamia
Hemodinamista
- Posiciona el catter correctamente para asegurar que la dosis es proporcionada en el lugar preciso
Mdico Nuclear
- Calcula y suministra la dosis al paciente.

113
114
FORMULAS Y COSAS IMPORTANTES
10 4
1 Ci = 3.7 X 10 Bq = 3.7 X 10 MBq
7 1
1 mCi = 3.7 X 10 Bq = 3.7 X 10 MBq =37 MBq
4 3
1 Ci = 3,7 X 10 Bq = 37 X 10 Bq = 37 KBq
1 Gy = 100 rad
1 cGy = 1 rad
1 Sv = 100 rem
1 mSv = 0.1 rem
1 Sv = 0.1 mrem
Bq = dps (desintegraciones por segundo)

Ecuaciones de DECAIMIENTO .

( )
Ecuacin que vincula actividad y tiempo:
No es necesario adecuar unidades de t con unidades de actividad, pero si los tiempos entre ellos.

Ecuacin que vincula actividad y masa:

Actividad siempre en Bq (= dps) si se quiere sacar el nmero de tomos y t siempre en segundos. Si no se tiene la eficiencia se
puede en cps.
Aos a segundos: x 365 x 24 x 3600
-24
1UMA = 1.66 X 10 g. Importante para tener PM en g.
23
Nmero de Avogadro: 6,022 x 10 tomos. Importante para pasar a tomos (N).

Actividad especfica: Actividad x unidad de masa o por moles. (Por ejemplo, Bq/mmol). Importante cuando se trabaja con
sistemas saturables (como por ejemplo enzimas, receptores). Es el porcentaje de la muestra que tiene actividad. A MENOR
ACTIVIDAD ESPECFICA, MAS CANTIDAD DE MOLCULAS NO RADIOACTIVAS SE UNEN, SE UNE MENOS ACTIVIDAD.

Eficiencia:
( )
( )

ATENUACIN DE LA RADIACIN:
A = A0e-x
( )

115
 IODO .

IMPUREZAS COMUNES:

RENDIMIENTO CON PRECIPITADO

RENDIMIENTO MS EXACTO CON PERFIL DE ELUCIN

( ) ( )
( ) ( ) ( ) ( )
131 131
Siendo N y n el nmero de fracciones tomadas para I-LF e I respectivamente.

ACTIVIDAD ESPECFICA

NDICE DE IODACIN
Para calcular las molculas de protena:

Para calcular los tomos de Iodo:

ECUACIN DE DECAIMIENTO A = N
Recordar que para usar esta ecuacin, es necesario calcular la actividad en Becquerel (Bq) y el tiempo de semidesintegracin en
segundos (ya que Becquerel = desintegraciones por segundo).

116
NDICE DE IODACIN:

PUREZA RADIOQUMICA (TLC)

131
ORIGEN: Protena Marcada I-LF
131
FRENTE: I libre
Por lo general si se corre con metanol, la protena no corre porque precipita (ORIGEN). Si se corre con Suero fisiolgico el
radionucleido corre (FRENTE).

( ) ( )
131 131
Siendo N y n el nmero de fracciones tomadas para I-LF e I respectivamente.

117
118
119
120