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RELATRIO DE AULA PRTICA

REAO DE PRECIPITAO

ANA ISABEL DO NASCIMENTO


MONNYQUE JIULLY ROQUE SILVA
WANESSA FORNER

Campo Grande - MS
2017
1. INTRODUO

A conformao das protenas de extrema importncia para que possam cumprir as


funes as quais esto destinadas. Elas podem assumir diversas conformaes para o
cumprimento dos fins estabelecidos, havendo, todavia, a necessidade de estabilidade das
ligaes internas destas protenas para que no ocorra nenhuma alterao em suas funes.
O estado nativo de uma protena denominado, segundo Lehninger (2014, p. 143),
por quaisquer conformaes em que as ligaes internas estejam estveis, possibilitando a
funcionalidade das protenas. Por outro lado, a estabilidade de uma protena mantida por
ligaes internas fracas, o que torna a existncia destas instvel.
A perda de funo de uma protena ocorre pelo processo de desnaturao, que no
implica diretamente no desdobramento da protena, mas nas alteraes em sua estrutura;
alteraes suficientes para causar a perda de funes. Em sua grande maioria, as protenas
desnaturadas se encontram em estado meio dobrado, e no completamente desdobradas.
Determinados fatores podem levar desnaturao de protenas, tais como: exposio
altas temperaturas, elevao de pH, interaes com compostos polares ou apolares, entre
outros. Comumente h formao do chamado precipitado aps a desnaturao da protena.
Reaes de precipitao so aquelas que resultam na formao de precipitado.
O relatrio a seguir busca descrever e expor as reaes de precipitao
experimentadas na aula prtica do dia 8 de Maio.
2. OBJETIVO

O objetivo deste trabalho foi realizar a precipitao de protenas por meio de 4


mtodos distintos e discutir cada reao que levou desnaturao, isto , reao de
precipitao e com isso ampliar a viso das alunas sobre solubilidade de diferentes protenas.
Os mtodos utilizados foram: precipitao pelo calor, por reagentes para alcalides, por sais
de metais pesados e precipitao sem desnaturao por ao de solventes orgnicos.
3. METODOLOGIA

Durante a aula, para realizar todas as solues, foi necessrio a utilizao de alguns
reagentes e algumas protenas, tais como:
Clara de ovo;
Leite;
cido sulfossaliclico;
Acetato de chumbo;
gua destilada;
Cloreto de sdio;
Sulfato de amnio;
As reaes, com o intuito de analisar a ocorrncia de precipitaes, foram realizadas
da seguinte forma:

As trs primeiras reaes de precipitao ocorreram com base na solubilidade das


protenas utilizadas. Esta solubilidade depende da interao entre protena e gua, protena e
pequenos ons, e entre protenas.
Quando a interao protena-protena grande, no ocorre a solubilidade. Outro fator
que contribui para este caso a desnaturao da protena, tendo como resultado uma
precipitao. Desta forma, altera sua estrutura, seja quaternria, terciria ou secundria.
De outro modo, quando a interao protena-gua alta, haver a solubilidade.
Qualquer condio que interfira nesta interao, aumentando ou diminuindo, ir influenciar
tambm na solubilidade.

A primeira reao foi obtida pelo aquecimento da protena.


No tubo de ensaio foram acrescidos 2mL de clara de ovo (altamente rica em protenas
do tipo albumina).
Em seguida, o tubo de ensaio foi aquecido durante aproximadamente 2 minutos e
observou-se a formao de um precipitado (cogulo) de cor branca.
A segunda reao foi obtida com reagentes para alcalides.
Desta vez foram utilizados dois tubos de ensaio, um contendo leite e no outro, clara de
ovo. Em cada tubo foi adicionado 1mL de cido sulfossaliclico.
Aps este passo, ambos foram agitados e, ao reagirem com a substncia, as protenas
desnaturaram, formando precipitados.
A terceira reao foi obtida por sais de metais pesados.
Da mesma forma, foram utilizados dois tubos de ensaio contendo as mesmas protenas
que a reao anterior. Um tubo com clara de ovo e outro com leite. Nesse experimento,
utilizou-se como reagente o acetato de chumbo.
Ao adicionar o reagente em ambos os tubos, j contendo as protenas em cada, foram
agitados, observado as mudanas na forma de precipitados.
A quarta reao ocorreu sem que houvesse a desnaturao da protena. Em virtude da
fora inica do meio, sais neutros so capazes de aumentar ou diminuir a solubilidade de uma
protena, dependendo de sua concentrao, assim como da valncia de ctions e nions que o
formam. Em altas concentraes, um sal solvel contribui para a interao protena-protena,
que como citado anteriormente, resulta em precipitao. Este efeito chamado salting-out.
No entanto, em baixas concentraes deste tipo de sal, ocorre o efeito salting-in, aumentando
a solubilidade da protena com a qual interage.
Na primeira etapa, foi utilizada a tcnica salting-in.
No tubo de ensaio foram adicionados 3mL de clara de ovo, diludos em uma
quantidade no definida de gua destilada, formando assim, um precipitado.
Em seguida, foi adicionada uma quantidade no definida de cloreto de sdio, at que
houvesse a redissoluo do precipitado obtido anteriormente.
Na segunda etapa, foi utilizada a tcnica salting-out.
Em um segundo tubo de ensaio, foram adicionados 2mL da soluo obtida
anteriormente. Feito isso, adicionou-se sulfato de amnio at que houvesse uma nova
precipitao.
Por fim, novamente foi acrescida uma quantidade no definida de gua destilada, que
recomps, assim, a fora inica anterior redissolvendo o precipitado.

4. DISCUSSO E RESULTADOS
Como j exposto anteriormente, o objetivo deste trabalho foi realizar a precipitao de
protenas com quatro mtodos qualitativos diferentes. Houve uma reao diferente em cada,
em vista da tcnica utilizada. Assim, foram observados diferentes resultados.
Houve tubos que a reao se resultou em uma coagulao e outras em floculao. E
esse resultado se propagou em mais de um mtodo, entretanto, foram utilizados reagentes
diferentes em cada caso.
A primeira tcnica utilizada foi a precipitao pelo calor, que tem por objetivo
verificar o efeito da desnaturao na estrutura tridimensional da protena. Para realizar essa
tcnica foi utilizada uma quantidade de 2mL de clara de ovo, a qual composta de protenas.
Ao ser aquecida durante aproximadamente 2 minutos at que cozinhasse, ocorreu a
aglutinao e a precipitao da albumina, que a protena presente em maior quantidade na
clara do ovo, por isso que ela se torna branca, como ilustra a Figura 1. Segundo o livro
Princpios de Bioqumica de Lehninger, uma grande parte das protenas podem ser
desnaturadas pelo calor, que interferem nas ligaes fracas. Ao aumentar a temperatura da
protena, ocorre uma grande mudana em sua estrutura e, consequentemente na funo. No
experimento, quando a clara do ovo foi aquecida, houve uma desnaturao contribuindo para
a ocorrncia de uma precipitao da protena.

Figura 1- Precipitao por calor

Fonte - Autores
A segunda e terceira tcnica tem fundamentos similares, pois em ambos os
experimentos houve o resultado por conta das diferenas de cargas das protenas e dos
reagentes utilizados nas reaes. Os experimentos esto ilustrados nas Figura 2 e Figura 3,
respectivamente.
Na segunda tcnica, o experimento foi de precipitao por reagente para alcalides.
Para a realizao foram utilizadas duas protenas diferentes, a protena da clara do ovo e a
protena presente no leite, o reagente utilizado foi o cido sulfossaliclico.
Foi acrescido esta soluo o cido, que possui pH menor que o ponto isoeltrico da
protena, fazendo com que a carga lquida positiva dessa protena tenha interao com a carga
negativa gerada pela ionizao do cido. Pela interao dos nions do cido com os ctions
presentes no lquido das protenas, ocorre a precipitao, pois a desnaturam, conforme dito
por Donald Voet no livro de Bioqumica (2013, p. 134).

Figura 2 - Precipitao por reagente para alcalides

Fonte - Autores

A terceira tcnica utilizada, foi de precipitao por sais de metais pesados. O reagente
foi o acetato de chumbo, que um sal orgnico. Na reao, a precipitao das protenas
ocorreu, desta vez, por conta da interao dos ctions, formados atravs da ionizao do
metal pesado, com as cargas negativas presentes nas cadeias laterais dos aminocidos que
formam as protenas utilizadas. A adio dos ctions do metal pesado fizeram com que a
carga lquida da protena passasse a ser negativa, devido ao fato do pH do sal estar acima do
pI (ponto isoeltrico) da protena. Logo, houve a atrao dos ctions do sal com os nions do
lquido das protenas, conforme dito por Donald Voet no livro de Bioqumica.

Figura 3 - Precipitao por sais de metais pesados

Fonte - Autores

A quarta e ltima tcnica, foi realizada por reaes de precipitao sem desnaturao.
Essa reao foi dividida em duas partes. A primeira parte foi denominada como solubilizao
salting-in, que segundo o livro Bioqumica de Donald Voet, isso ocorreria quando houvesse o
aumento de sal na protena, sendo assim quanto mais sal possuir na soluo, mais solvel a
protena. Isso ocorre porque os ons de carga oposta do sal adicionado soluo protegem as
cargas da molcula de protena de maneira mais eficaz.
Nessa etapa foi utilizada clara de ovo e, aps adicion-la em um tubo de ensaio,
houve uma diluio com gua destilada (H2O), ocorrendo uma precipitao na parte inferior
do tubo. Deu-se isto pois, a protena insolvel e quando a gua foi adicionada formou um
precipitado, devido a interao protena-gua ser pequena. Aps ter sido observada a
formao do precipitado, foi acrescido cloreto de sdio (NaCl), momento em que o
precipitado formado anteriormente se dissolveu, pois a interao protena-gua aumentou, em
vista do NaCl ser um sal que possui uma grande solubilizao com a gua.
A segunda etapa, que foi denominada por precipitao salting-out. Ao contrrio do
salting-in, segundo o livro de Bioqumica de Donald Voet, o salting-out o efeito resultante,
principalmente, da competio entre os ons de sal com outros solutos pelas molculas de
dissoluo. Em grandes quantidades de sal, a concentrao tamanha que a quantidade
solvente torna-se insuficiente para dissolver outros solutos. Na termodinmica, isto dito
como a diminuio da atividade do solvente, sendo assim, as interaes soluto-soluto
possuem maior fora sobre as interaes soluto-solvente, fazendo com o que o soluto
precipite.
Aps concluir a primeira parte, foi utilizada a mesma reao para o segundo
experimento. Foram pipetados 2mL da reao anterior em um segundo tubo de ensaio. Feito
isso, foi acrescido sulfato de amnio ((NH)SO), causando uma nova precipitao, pois a
saturao deste sal aumentou a interao protena-protena, j que a quantidade de gua
anteriormente adicionada no foi suficiente para dissolver essa soluo. Aps a ltima
precipitao, acrescentou-se mais gua, fazendo com que a interao protena-gua
aumentasse e dissolvesse o precipitado novamente. Podem ser observados os resultados na
Figura 2.
Figura 4 - Salting in e Salting out

Fonte - Autores
5. REFERNCIAS

VIEIRA, C. E.; GAZZINELLI, G.; GUIA, M.M. Bioqumica Celular e Biologia Molecular.
Ed. Atheneu. Belo Horizonte, 1996.

VOET, D.; VOET J.G. Bioqumica. 4. Ed. Porto Alegre: Artmed, 2013.

NELSON, D.L; COX, M.M. Princpios de Bioqumica de Lehninger, 6. Ed. Porto Alegre:
Artmed, 2014.

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