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Universidade Tecnolgica Federal do Paran

Curso de Engenharia Qumica

Disciplina QUI034
Engenharia Bioqumica

5. ESTERILIZAO
EQUIPAMENTOS, MEIOS, AR

Profa Dra Michele Di Domenico DAENQ


micheled@utfpr.edu.br

Francisco Beltro
Abril, 2017
5. ESTERILIZAO

VISO GERAL

1 Introduo Engenharia Bioqumica


2 Microrganismos e Meios de Cultura para Utilizao Industrial
3 Esterilizao do Equipamento, de Meios e de Ar
4 Cintica Enzimtica
5 Cintica Microbiana
Biorreatores: Classificao. Formas de conduo. Fermentao em estado
6 slido. Construo e operao. Agitao e aerao. Variao de escala.
Automao e controle.
7 Reatores com Clulas ou Enzimas Imobilizadas
8 Separao e Purificao de Produtos Biotecnolgicos
9 Tecnologias

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5. ESTERILIZAO

SUMRIO

1. Introduo
2. Esterilizao do Equipamento
a) Agentes Fsicos
b) Agentes Qumicos
3. Esterilizao de Meios por Calor mido
a) Tipos de processos em escala industrial
b) Cintica da destruio trmica de microrganismos
c) Destruio de nutrientes
d) Clculo do tempo de esterilizao
4. Esterilizao de Ar
a) Amostradores
b) Mtodos de esterilizao
Leitura Obrigatria

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5. ESTERILIZAO

1. INTRODUO

Por que esterilizar?


Penalidade econmica;
Perda de produtividade: gasto de meio para crescimento do contaminante;
Um nico contaminante pode repopular todo um reator;
Se o produto for as clulas, este vai estar contaminado;
Contaminante pode produzir compostos que dificultem a recuperao do
produto;
Contaminante pode consumir o produto...

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5. ESTERILIZAO

1. INTRODUO
Concepo do Biorreator:
Contato eficiente entre as fases;
Boa transferncia de O2 para a clula;
Boa transferncia de calor do meio 2
para a clula e vice-versa;
Proteger o MO de contaminaes. 1
5

3
Esquema geral de um processo fermentativo.
(SchmidellW. et al., 2001)

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5. ESTERILIZAO

1. INTRODUO
O sistema pode ser:
No assptico, no estritamente necessrio se operar com culturas puras.
Assptico, condies de assepsia so pr-requisitos para a formao do produto com
sucesso...

Questes...
Como efetuar a assepsia de grandes
volumes de meios e de ar?
Qual o mtodo usado para eliminar os
MO? Ex. filtrao ou aquecimento...
Se aquecimento (batelada ou
contnuo)... em qual regime de tempo
e temperatura?

Antibiticos
Vacinas
Vitaminas...
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5. ESTERILIZAO

2. ESTERILIZAO DE EQUIPAMENTOS
Significa eliminar todas as formas de vida de seu interior ou superfcie;
A eliminao pode ser parcial ou no... efeito na qualidade do produto, ex.:
Pasteurizao (80oC, laticnios): destroe parte dos MO - assepsia mais rigorosa destruiria
propriedades importantes do alimento e seus subprodutos.

DESINFECO no esteriliza,
ESTERILIZAO mas garante a assepsia adequada.

Na desinfeco, a populao de MO que no eliminada mantida sob controle pela


imposio de condies que impedem seu desenvolvimento, como refrigerao ou
aplicao de inibidores de crescimento.
Processos mais restritivos produo de bens destinados sade e alimentos enlatados.

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5. ESTERILIZAO

2. ESTERILIZAO DE EQUIPAMENTOS
Tcnicas de assepsia - aplicao de mtodos fsicos ou qumicos:
Mtodos fsicos: calor seco, calor mido, radiao UV, radiao ionizante e
ultrassom;
Mtodos qumicos: lquidos ou gases que matam ou danificam a capacidade
reprodutiva dos MO (hipoclorito, xido de etileno, O3).

Biorreatores, tubulaes, bombas,


Calor mido
filtros, centrfugas, etc.
Calor mido (autoclaves), seco (fornos) e
Material de laboratrio
mais raramente por radiao UV
Calor mido, filtrao em membranas (caso
Meios de cultura
ocorra inativao trmica de nutrientes)
Ar Filtrao em cartuchos esterilizantes

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5. ESTERILIZAO

2. ESTERILIZAO DE EQUIPAMENTOS

Esterilizao o processo fsico ou qumico que destri ou inativa


todas as formas de vida presentes em um dado material,
especialmente MO incluindo bactrias, fungos e vrus. Termo com
significado absoluto um material estril totalmente isento de
qualquer organismo ativo e essa condio se mantm.

Desinfeco um processo menos rigoroso de eliminao (parcial)


de MOs, envolvendo usualmente o uso de um agente qumico
(desinfetante ou germicida), geralmente lquido e Tamb ou
moderada. Eliminao direcionada aos MO prejudiciais.

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5. ESTERILIZAO

2. ESTERILIZAO DE EQUIPAMENTOS

Agentes? Fsicos ou qumicos, agem por


diferentes mecanismos...
Objetivo? MATAR O MO!
Como? Induzem a formao de substncias letais
no interior das clulas ou alteraes em molculas
essenciais para a manuteno celular.
Alvos? Enzimas (metabolismo), citoplasma
(integridade do contedo celular), parede celular
(resistncia mecnica).
Uma leso pode desencadear alteraes que levam
morte celular!

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5. ESTERILIZAO

2. ESTERILIZAO DE EQUIPAMENTOS
a) Agentes fsicos
CALOR SECO
Destri os MO pela oxidao de seus
constituintes qumicos; Calor seco
Mais lenta e menos eficaz do calor mido;
Vidrarias, metais e slidos resistentes ao calor
TC lenta e nvel de hidratao das clulas
tende a diminuir conferindo certa Fornos ou estufas (t2 h e T>150C)
proteo s protenas.
- transferncia de calor mais lenta
- MO com resistncia inativao
- t de 3 a 4 horas para garantir a eficincia

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5. ESTERILIZAO

2. ESTERILIZAO DE EQUIPAMENTOS
a) Agentes fsicos
CALOR MIDO
Vapor dgua saturado;
T elevada + alto grau de umidade: mtodo efetivo para a destruio dos MO!!
Vantagens: facilidade de obteno, manuseio, eficcia e baixo custo...
Na indstria obtido em caldeiras e distribudo em tubulaes de inox isoladas
termicamente;
Aplicaes: reatores (vazios ou carregados) e tubulaes;
Modo de ao: desnaturao irreversvel das protenas... essenciais na sobrevivncia e
multiplicao celular;
A resistncia das protenas ao calor uma funo da hidratao da clula:
Quantidade de gua: facilita entrada nas molculas de protena, promovendo
mudanas irreversveis.

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5. ESTERILIZAO

2. ESTERILIZAO DE EQUIPAMENTOS
a) Agentes fsicos
CALOR MIDO
Reatores vazios:
1. Injeo direta no interior e expulso do ar;
2. Fechar reator e pressurizar (1atm e 121oC): novas injees somente para manter P e
T;
3. Injeo de ar esterilizado para resfriamento e estabilizao da P interna.
4. Introduo do meio de cultura esterilizado (externamente);
5. Incio do processo.

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5. ESTERILIZAO

2. ESTERILIZAO DE EQUIPAMENTOS
a) Agentes fsicos
CALOR MIDO
Reatores com meio (processo descontnuo):
1. Circular vapor pela serpentina ou camisa at Tmeio > 96-97oC e introduzir vapor no
topo do tanque para expulsar o ar. Vlvulas, filtros e tubulaes tambm so
esterilizados;
2. Injetar vapor no meio at T=100C, fechar o reator, e manter injeo at T e P
adequadas pelo tempo necessrio;
3. Resfriar se necessrio (T constante) e injetar ar esterilizado no tanque para evitar
formao de vcuo devido a condensao do vapor.
Injeo direta de vapor no meio: preparado concentrado, devido sua posterior diluio
pelo condensado aumento de 10-15% do V.
Tempo de esterilizao: 20-40min, 121oC;
Reator multipropsito: limpeza qumica prvia, com esterilizao num t=60min.
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5. ESTERILIZAO

2. ESTERILIZAO DE EQUIPAMENTOS
a) Agentes fsicos
CALOR MIDO
Serpentinas/camisa:
Aquecimento entre Tamb e
T=96-97C etapa crica!
Uma relao adequada
entre a REA da
serpentina/camisa e o
VOLUME de meio
favorece o aquecimento.

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5. ESTERILIZAO

2. ESTERILIZAO DE EQUIPAMENTOS
a) Agentes fsicos Operao:
CALOR MIDO 1. Completar o nvel de gua indicado;
Autoclave: 2. Adicionar o material dentro da autoclave e fechar a
porta;
Esterilizao de reatores
3. Aquecer, com vapor gerado ocupando todo o espao
pequenos - at 30 L - e interno, devendo fluir para fora pela vlvula de descarga
vidrarias; (10-20min, expulsando o ar).
dimenses, os verticais 4. Fechar a vlvula de descarga, esperar T e P estabilizarem
apresentam a porta de (1atm e 121oC).
acesso na parte superior;
Aquecimento eltrico, mas
o vapor tambm pode ser
gerado externamente em
uma caldeira e injetado na
autoclave.

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5. ESTERILIZAO

2. ESTERILIZAO DE EQUIPAMENTOS
a) Agentes fsicos
CALOR MIDO
Autoclave: Curva de aquecimento:

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5. ESTERILIZAO

2. ESTERILIZAO DE EQUIPAMENTOS
a) Agentes fsicos
RADIAO UV
Absorvida por muitas substncias celulares, de modo significativo pelos c. nuclicos,
onde geralmente ocorrem as leses... efeito letal proporcional dose de radiao;
Morte celular depende do tempo de exposio;
Regio do espectro de UV com ao esterilizante 220-300 nm;
Baixa capacidade de penetrao;
Esterilizao de slidos: vidraria, metais, embalagens.

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5. ESTERILIZAO

2. ESTERILIZAO DE EQUIPAMENTOS
a) Agentes fsicos
RADIAO IONIZANTE
Radiaes ionizantes eletromagnticas , , , raios-X, etc.;
Causa grande variedade de efeitos fsicos e bioqumicos nos MO;
O principal alvo que leva perda de viabilidade a molcula de DNA;
Esterilizao de slidos: vidraria, metais, embalagens.

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5. ESTERILIZAO

2. ESTERILIZAO DE EQUIPAMENTOS
b) Agentes qumicos
GERMICIDAS QUMICOS (Sanitizantes lquidos)
Usados quando os equipamentos no admitem esterilizao por calor mido:
Incompatibilidade trmica: filtros, bombas, centrfugas, secadores, vlvulas, linhas
de fluidos e equipamentos de medio.
Modo de ao:
Em Tamb exigindo tempo de contato.
Eficcia tem relao com:
Propriedades fsicas do material: plstico, metal, liso, rugoso e porosidade;
Caractersticas qumicas do ambiente: pH, presena de matria orgnica
contaminante, depsitos no material e dureza da gua.

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5. ESTERILIZAO

2. ESTERILIZAO DE EQUIPAMENTOS
b) Agentes qumicos
GERMICIDAS QUMICOS
(Sanitizantes lquidos)
Tabela 3.2. Ordem decrescente de
resistncia a germicidas qumicos e
nvel de atividade requerido para
esterilizao (Schmidell et al. 2001).

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5. ESTERILIZAO

2. ESTERILIZAO DE EQUIPAMENTOS
b) Agentes qumicos
GERMICIDAS QUMICOS
(Sanitizantes lquidos)
Tabela 3.3. Utilizao tpica de
agentes qumicos (Schmidell et al.
2001).
C5H8O2
H2O2

CH2O

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N.A. = nvel de atividade
5. ESTERILIZAO

2. ESTERILIZAO DE EQUIPAMENTOS
b) Agentes qumicos
GERMICIDAS QUMICOS (Sanitizantes lquidos)
Protocolo para o ciclo de desinfeco/esterilizao qumica de um equipamento:
1. Desmontagem do equipamento;
2. Limpeza com o uso de detergentes;
3. Lavagem com gua de baixa dureza para remover os detergentes;
4. Montagem do equipamento, introduo do germicida, propiciando t necessrio de
exposio;
5. Drenagem da soluo germicida do sistema;
6. Remoo dos resduos de germicida pela circulao de gua.

Tempo de exposio varia de min at h e tipo de


germicida se baseia no nvel de desinfeco
requerido!
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5. ESTERILIZAO

2. ESTERILIZAO DE EQUIPAMENTOS
b) Agentes qumicos
AGENTES GASOSOS
Salas e laboratrios (vapores de formaldedo).
Agentes mais importantes:
xido de etileno: itens hospitalares e plsticos de laboratrio (cmaras semelhantes
autoclave);
xido de propileno: alimentos;
Vapores de formaldedo: cmaras, salas e ambientes onde assepsia desejvel.
Tempo de esterilizao depende:
Agente e sua concentrao;
Umidade relativa do ambiente;
T do processo.

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5. ESTERILIZAO

3. ESTERILIZAO DE MEIOS POR CALOR MIDO

a) Tipos de processos em escala industrial Descontnuo (batelada)

Contnuo
Processo descontnuo
Vapor direto: esterilizao in situ, meio colocado no fermentador, ocorrendo o
borbulhamento de vapor aquecido (ocorre diluio do meio);
Vapor indireto: vapor passa pela serpentina/camisa.
Agitao mecnica assegurando T homognea;
Ocorre em trs fases:

2. Esterilizao:
1. Aquecimento com vapor 3. Resfriamento
Manuteno da Te
(direto ou indireto): com gua:
por um dado de
T0 at Tel20C At T de fermentao
tempo

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5. ESTERILIZAO

3. ESTERILIZAO DE MEIOS POR CALOR MIDO


Processo descontnuo
Destruio trmica ocorre
nas trs fases!
Quando T > Tm (mnima Variao de T durante
letal, 80-100C) h a esterilizao em
destruio de MO! batelada

T de fermentao

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5. ESTERILIZAO

3. ESTERILIZAO DE MEIOS POR CALOR MIDO


Processo descontnuo
Vantagem: esterilizao simultnea MEIO+REATOR, contaminao na
transferncia do meio ao reator;
Desvantagens:
a) Meio em T por longos perodos (h), favorecendo RQ e alteraes na
composio;
b) consumo de vapor (aquecimento) e gua (resfriamento) devido a
eficincia na troca de calor;
c) Corroso pelo longo contato do fermentador com o meio aquecido;
d) t morto pois o fermentador usado apenas como tanque de
esterilizao no processo de destruio dos contaminantes...

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5. ESTERILIZAO

3. ESTERILIZAO DE MEIOS POR CALOR MIDO


Diluio 10-15%
Processo contnuo
Esterilizador contnuo
1. Meio enviado pela bomba (B) ao trocador
de calor (TC1), atuando como fluido de
resfriamento do meio j esterilizado e
quente;
2. O meio pr-aquecido se mistura ao vapor
(no injetor I) onde T rpido at Te.
3. O meio percorre o tudo de espera (TE)
isolado e dimensionado para tespera=;
4. O meio esterilizado e quente passa pela
vlvula de reduo de P (V) voltando ao TCl;

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5. ESTERILIZAO

3. ESTERILIZAO DE MEIOS POR CALOR MIDO


Processo contnuo
Esterilizador contnuo
5.O meio esterilizado segue ao TC2 e sua T
reduzida (gua o fluido de resfriamento)
at o valor desejado;
6. O mosto esterilizado e j na Tf (final)
enviado ao fermentador.
Condies de operao:
Pvapor=6,8-8,5atm
dTE=10-30cm, vTE=6-12cm/s, Re>36000
Te=130-165C
t enchimento do fermentador < 8h

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5. ESTERILIZAO

3. ESTERILIZAO DE MEIOS POR CALOR MIDO


Processo contnuo
Destruio trmica no aquecimento/resfriamento pode ser desprezada!

Variao de T durante
a esterilizao
contnua

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5. ESTERILIZAO

3. ESTERILIZAO DE MEIOS POR CALOR MIDO


Processo contnuo
Vantagens:
a) Tem-se T e t de aquecimento e resfriamento com (5-15min), destruio de
nutrientes: rendimento. Ex. produo de vitamina B12, 10;
b) O TE pequeno e pode ser construdo com ligas especiais, evitando a
contaminao por metais e/ou ataque parede do tubo pelo meio;
c) Para meios com ou (ex. mostos de cereais) dispensa motores potentes para
acionamento;
d) Economia de vapor e gua, quando do correto dimensionamento dos TC e do
isolamento trmico da tubulao;
e) Podem ser usados nos processos de cozimento e sacarificao de matrias-primas
amilceas.
Desvantagens: viabilidade tcnica depende das dimenses e do regime de
trabalho dos fermentadores da instalao industrial.

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5. ESTERILIZAO

3. ESTERILIZAO DE MEIOS POR CALOR MIDO

b) Cintica da destruio trmica de microrganismos


A velocidade de destruio depende do MO, do meio e da T:
MO - gnero, espcie, linhagem, idade da cultura, esporos;
Meio - composio, pH, slidos em suspenso.
Experimento com N vs. t
MO + MEIO + T>Tm

N = no de MO vivos
T3>T2>T1 Funo decrescente do t!
t ln(N)
0 N0
... ...

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3. ESTERILIZAO DE MEIOS POR CALOR MIDO


Comportamento de cintica de 1a ordem, onde:
N0 = no de MO vivos em t=0
N = no de MO vivos aps t de aquecimento a T constante
k = constante de velocidade de destruio trmica do MO

Experimento com N vs. t


MO + MEIO + T>Tm
Equao que permite, a
partir de dados
experimentais de medidas de
N para valores de t, calcular
a constante k do MO em
estudo, no meio considerado,
na T ensaiada. k=fn(T)
Encontrar k para T

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5. ESTERILIZAO

3. ESTERILIZAO DE MEIOS POR CALOR MIDO

Exemplo 1. Destruio trmica de esporos de Bacillus stearothermophilus T=105C.

t (min) N ln(N) 12
25 85000 11.4
= 0
10
50 35000 10.5 8
100 6000 8.7

lnN
200 200 5.3 6
250 40 3.7 4
100000 y = -0.0341x + 12.1626
2
R = 0.9998
80000 0
60000 0 100 200 300
t (min)
N

40000
105 = 0.03411 0 = 12.1626
20000
0
Linear
0 100 200 300
t (min)
0 = 191.000
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5. ESTERILIZAO

3. ESTERILIZAO DE MEIOS POR CALOR MIDO

Exemplo 1. Destruio trmica de esporos de Bacillus stearothermophilus T=105C.

Importante!!
Taxa de decrscimo da populao
inicialmente baixa e depois
aumenta.

Para a alta T>l20 C, se considera


pequeno o desvio da curva em
relao Equao 4.2!

105 = 0.03411
120 = 3.01
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5. ESTERILIZAO

3. ESTERILIZAO DE MEIOS POR CALOR MIDO


Tempo de reduo decimal (t=D):
Tempo para reduzir N a 1/10 do valor inicial, ou seja, destruir 90% dos MO:

= 0

ln(0,1 0 ) = 0
2,303
D=

Para o Exemplo 1: 105 = 0.03411


Os fatores que
afetam k tambm
= 67,5 afetam D!!

Ou seja, 90% dos MO sero destrudos em 67,5 min.

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5. ESTERILIZAO

3. ESTERILIZAO DE MEIOS POR CALOR MIDO


Correlao de k com T para a cintica de morte microbiana:

Onde: A,A e = constantes empricas


R = constante universal dos gases
T e T= temperatura absoluta e temperatura em oC ou oF respectivamente
= energia aparente de ativao de destruio do MO

Conhecendo os valores de k
para T encontramos:
A, A, e
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5. ESTERILIZAO

3. ESTERILIZAO DE MEIOS POR CALOR MIDO

Temperaturas de esterilizao variam muito!

B. stearothermophilus

E. coli

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5. ESTERILIZAO

3. ESTERILIZAO DE MEIOS POR CALOR MIDO


Exemplo 2. Destruio trmica de esporos de Bacillus stearothermophilus T.

Efeito da T no
valor de k T (K) 105/T (K-1) k (min-1)
373 ... ...
... ... ...
393 255 3

= 68,7 kcal/mol

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3. ESTERILIZAO DE MEIOS POR CALOR MIDO

Valores de energia de ativao de destruio trmica (E): quanto E k.

E (kcal/gmol)
cido flico 16,8
1
Vitamina B1 22,0 =
Vitamina C e B12 23,1

Vitamina A 14,6
B. stearotermophilus 67,7 MO 65<<85kcal/mol
B. subtilis 76,0
Clostridium botulinum 82,0

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5. ESTERILIZAO

3. ESTERILIZAO DE MEIOS POR CALOR MIDO

c) Destruio de nutrientes
Alteraes na composio pela longa exposio Te:
Velocidades das reaes indesejveis com T (ex. decomposio de vitaminas);
Prejudicam a atividade dos MO;
rendimento ou produtividade.

Quanto T destruio de nutrientes


Melhores os resultados de fermentao!

EMO > Enutrientes

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5. ESTERILIZAO

3. ESTERILIZAO DE MEIOS POR CALOR MIDO

Exemplo 3. Considere um dado volume de meio contendo N0 MO vivos, a ser


reduzido a Nf < N0. O meio contm um substrato cuja concentrao inicial S0.
Suponha que ser feita a comparao da esterilizao em duas temperaturas
constantes T1 e T2, sendo T2 > T1.
t1 = tempo para reduzir o no de MO de N0 a Nf, quanto a T de esterilizao for igual a T1;
t2 = tempo para reduzir o no de MO de N0 a Nf, quanto a T de esterilizao for igual a T2;
k1 = constante de velocidade da reao de morte celular na temperaturaT1;
k2 = constante de velocidade da reao de morte celular na temperaturaT2;
Ea = energia de ativao para a reao de morte celular;
S1 = concentrao final de substrato aps o tratamento na temperaturaT1;
S2 = concentrao final de substrato aps o tratamento na temperaturaT2;
k1 = constante de velocidade da reao de degradao do substrato na temperatura T1;
k2 = constante de velocidade da reao de degradao do substrato na temperatura T2;
Ea = energia de ativao para a reao de degradao de substrato.

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5. ESTERILIZAO

3. ESTERILIZAO DE MEIOS POR CALOR MIDO

d) Clculo do tempo de esterilizao


Conforme vimos, a destruio trmica do MO segue uma cintica de 1a ordem, logo:

0
= = 0 =

Permite, conhecendo k, calcular o t para reduzir o no de MO vivos de N0 at N!


Equao complexa... Problemas:
1) Na prtica, na dorna, existem gneros e espcies de MO (esporulados ou no)...
Como k depende do MO, como aplicar a Eq. 4.17?
Escolher um MO de referncia mais resistente ao calor;
Todos os MO do meio iro apresentar mesma resistncia destruio trmica
comum, Bacillus stearothermophilus.
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5. ESTERILIZAO

3. ESTERILIZAO DE MEIOS POR CALOR MIDO

d) Clculo do tempo de esterilizao


2) O valor de k tambm depende do meio e da T, logo:
Conhecer os valores de k na esterilizao do MO em T: testes preliminares;
Boa aproximao: k1min-1 (121C) e E=75kcal/mol.
3) Clulas dos MO nos meios podem estar na forma de aglomerados ou protegidas por
partculas em suspenso ocorre da resistncia dos MO destruio trmica!
4) Problema para clculo de decorre da prpria definio de esterilizao:
Operao que destri TODOS os MO vivos no meio Nf = 0!

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5. ESTERILIZAO

3. ESTERILIZAO DE MEIOS POR CALOR MIDO

d) Clculo do tempo de esterilizao


Definio de probabilidade de falha de uma esterilizao (P):
Ef = no de operaes de esterilizao que falharam (no conduzindo a
um meio esterilizado).
Et = no total de operaes de esterilizao feitas nas mesmas condies.
100 = %

Exemplo 4. Considerando um problema com P=0,03 (3%). A cada 100 partidas de


meio tratadas nas mesmas condies:
97 partidas esterilizadas 3
P= = 0,03 =
100
3 partidas no esterilizadas

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5. ESTERILIZAO

3. ESTERILIZAO DE MEIOS POR CALOR MIDO

d) Clculo do tempo de esterilizao

N0 no inicial de MO vivos em cada partida


100 N0 no inicial de MO vivos nas 100 partidas
N no final de MO vivos nas 100 partidas

Condio para que falhe a esterilizao de uma partida de meio: aps


o tratamento trmico existe 1 nico MO vivo!!!
O no final de MO vivos nas 100 partidas ser no mnimo = 3. Logo:

1 0 1 1000 1 0
t= = =
3 0,03
1 0
t =

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5. ESTERILIZAO

3. ESTERILIZAO DE MEIOS POR CALOR MIDO

Exerccio 5. Considere um dado volume de meio a esterilizar com 2,5.1010


MO vivos (com k= 3,4min-1). Calcule os tempos de esterilizao para que as
probabilidades de falha sejam iguais a: 0,1 (ou 10%); 0,01 (ou 1 %); 0,001 (ou
0,1 %)

1 0 1 2,51010
t = t= =7,7min
3,41 0,1

1 2,51010
t= =8,4min
3,41 0,01

1 2,51010
t
t= =9,1min P
3,41 0,001

DAENQ Engenharia Bioqumica 47


5. ESTERILIZAO

3. ESTERILIZAO DE MEIOS POR CALOR MIDO

d) Clculo do tempo de esterilizao


Processo descontnuo:
Variao de T
CLCULO DE ENVOLVE durante a
esterilizao
N1 no inicial de MO vivos no meio
em batelada
P probabilidade de falha
Curvas de aquecimento e resfriamento
Tm temperatura mnima letal
Te temperatura de esterilizao
Variao de k com T

N2
N3
DAENQ Engenharia Bioqumica 48
5. ESTERILIZAO

3. ESTERILIZAO DE MEIOS POR CALOR MIDO

d) Clculo do tempo de esterilizao


Processo descontnuo:
No aquecimento e no resfriamento k varia devido variao da T. Logo:

1. Escolher diversos valores de t;


2. Para cada t encontrarT;
3. Para cada T calcular k;
4. k = f(t).

DAENQ Engenharia Bioqumica 49


5. ESTERILIZAO

3. ESTERILIZAO DE MEIOS POR CALOR MIDO

Exerccio 6. Clculo do tempo de esterilizao de um mosto.


Dados:
Vmosto = 100 m3 (105 L) Curvas de Aquecimento e Resfriamento
CMO vivos = 7,2109
clulas/L
Te = l20 C
Tm = 80C;
P = 0,001 (ou 0,1 %)
k (min-1) varia com T' (oC) de
acordo com a Equao de Bigelow:
k=6,0410-11exp(0,200T)

DAENQ Engenharia Bioqumica 50


5. ESTERILIZAO

3. ESTERILIZAO DE MEIOS POR CALOR MIDO

Exerccio 6. Clculo do tempo de esterilizao de um mosto.

Aquecimento Resfriamento
t (min) T' (oC) k (min-1) t (min) T' (oC) k (min-1)
24 80 0.0002 0 120 1.5999
30 87 0.0022 2 114 0.4819
40 97 0.0161 4 109 0.1773
50 105 0.0797 6 105 0.0797
60 112 0.3230 8 101 0.0358
70 116 0.7189 10 97 0.0161
80 120 1.5999 15 88 0.0027
20 80 0.0005

DAENQ Engenharia Bioqumica 51


5. ESTERILIZAO

3. ESTERILIZAO DE MEIOS POR CALOR MIDO

d) Clculo do tempo de esterilizao


Processo contnuo: lembrando... aquecimento e resfriamento so desprezados no
clculo de !! Logo:

Variao de T durante a
esterilizao contnua

Exerccio 6.

DAENQ Engenharia Bioqumica 52


5. ESTERILIZAO

3. ESTERILIZAO DE MEIOS POR CALOR MIDO

Exerccio 7. Dimensionamento do tubo de espera.


Dados:
Vmosto = 100 m3 (105 L)
CMO vivos = 7,2109
clulas/L
Te = l30 C
P = 0,001 (ou 0,1 %) Dimensionamento do TE:
k (min-1) varia com T' (oC) de V = volume de meio para encher um fermentador
acordo com a Equao de Bigelow: te = tempo de carga do fermentador
= massa especfica do meio Te
k=6,0410-11exp(0,200T) = viscosidade do meio Te
= tempo de esterilizao = residncia do meio no TE
Re = nmero de Reynolds no TE (36000 < Re < 80000)
D = dimetro interno do TE ( 10 < D < 30)
v = velocidade do meio no TE (3 < v < 60 cm/s)
L = comprimento do TE.
DAENQ Engenharia Bioqumica 53
5. ESTERILIZAO

3. ESTERILIZAO DE MEIOS POR CALOR MIDO

Exerccio 7. Dimensionamento do tubo de espera (T constante, PFR ideal).

2 4
F= == 2 =
4
4 1
=

= =

L=
Dados:
V = 100 m3 = 1,0.108 cm3
te = 4 h = 1,44.104 s

= l,06 g/cm3 F = = 6,94 103 3 /
= 0,55 cp = 5,5.10-3 p
= 3,5 min = 2,1.102 s

DAENQ Engenharia Bioqumica 54


5. ESTERILIZAO

3. ESTERILIZAO DE MEIOS POR CALOR MIDO

Exerccio 7. Dimensionamento do tubo de espera.

Podemos calcular agora D, v e L para cada Re!

DAENQ Engenharia Bioqumica 55


5. ESTERILIZAO

4. ESTERILIZAO DE AR

Grande avano na Segunda Guerra Mundial: estratgias


para a conduo de processos em larga escala em condies
de assepsia!
Possibilidade de esterilizar grandes volumes de ar,
necessrio aos processos biolgicos aerbios.

Ar esterilizado para Contaminao = 103


reator de 100 m3 = partculas/m3 5x104
50 m3 ar/min partculas/min

Tempo de fermentao = 100 h:


Total de 3.108 partculas com MO!!!

DAENQ Engenharia Bioqumica 56


5. ESTERILIZAO

4. ESTERILIZAO DE AR

Aerossis microbianos: Espcies microbianas suspensas no ar atmosfrico.

Tipo, Concentrao, Dimenso Clima, localizao...


(bolores, leveduras, bactrias, Origem: solo, plantas,
esporos... at partculas de poeira) cursos de gua;

Contagem: para ar livre de radiaes solares e com umidade


aps longa exposio ao sol
aps chuva e aps perodo de ventos fortes
Local de captao de ar para o processo?

Concentrao mdia de MO: Tquio: 12103 partculas/m3, Londres: at 9103


partculas/m3 e So Paulo: at 3103 partculas/m3;
Dimenses: 0,5-1,0 m (bactrias e seus esporos) e 4 m (partculas de
poeira).
DAENQ Engenharia Bioqumica 57
5. ESTERILIZAO

4. ESTERILIZAO DE AR

a) Amostradores
Determinao da concentrao de MO suspensos no ar;
Verificao da esterilizao do ar destinado ao processo;
Forma de operao: i. Reteno dos MO em um dadoVar
ii. Condies para a proliferao das clulas
iii. Quantificao dos contaminantes no Var

Limitaes:
Reteno pode no ser total eficincias de coleta para amostradores;
Clulas aderidas as partculas de poeira;
MO se desenvolvem em meios.
Soluo? Uso de marcadores! MOs modelo, mais resistentes termicamente.

DAENQ Engenharia Bioqumica 58


5. ESTERILIZAO

4. ESTERILIZAO DE AR

a) Amostradores
Impinger
Lquido coletor: 10 mL de gua Entrada
destilada; Sada de ar
de ar
Liga-se a sada de ar a uma bomba
de vcuo, o ar entrar borbulhando
no lquido;
MO ficaro retidos no lquido!
Medidas de vazo e tempo: Var;
Problema: reteno de MO no tubo
de entrada de ar e Morte de clulas.

DAENQ Engenharia Bioqumica 59


5. ESTERILIZAO

4. ESTERILIZAO DE AR

a) Amostradores
Filtrao
Suporte de ao inoxidvel com
membranas de poros de 0,22 m;
Ar passa atravs do papel-filtro;
Vantagem: Incubao direta da
membrana em placa de Petri e
contagem.

DAENQ Engenharia Bioqumica 60


5. ESTERILIZAO

4. ESTERILIZAO DE AR

b) Mtodos de esterilizao
Aquecimento
Calor seco pouco eficaz;
Dificuldade em aquecer grandes Var pequenas instalaes (escala piloto);
Mtodo pouco utilizado.

T (C) Tempo de permanncia (s)*


218 24
246 10
274 5
300 3
*para destruio superior a 99,9999%
DAENQ Engenharia Bioqumica 61
5. ESTERILIZAO

4. ESTERILIZAO DE AR

b) Mtodos de esterilizao
Filtrao
Mais adequado, presente em quase todas as
instalaes industriais!
Filtros:
At 1970 carvo, algodo, papel.
Aps 1970 l de vidro, materiais sinterizados
(metais, vidros, cermicas), membranas polimricas
(nylon, teflon).
Filtros de membranas: reteno por tamanho
(absolutos), polmeros hidrofbicos com vida til
de 1-3 anos.

DAENQ Engenharia Bioqumica 62


5. ESTERILIZAO

4. ESTERILIZAO DE AR

b) Mtodos de esterilizao
Filtrao
Filtros de membranas:

DAENQ Engenharia Bioqumica 63


5. ESTERILIZAO

Leitura Obrigatria!

SCHMIDELL, W. et al. Biotecnologia Industrial: engenharia bioqumica.


So Paulo: Blucher, 2001. 560 p. v.2.
Captulo 3;
Captulo 4;
Captulo 5.

DAENQ Engenharia Bioqumica 64


5. ESTERILIZAO

Obrigada!

DAENQ Engenharia Bioqumica 65