Manual de Cultivos

MANUAL DE
Andrea Melissa Santana Canto
MEDIO DE
CULTIVO
Manual de medio de cultivo
NDICE
1..Portada
2Presentacin
3ndice
4Medio de cultivo
5Medio de cultivo
6Clasificacin de medio de cultivo
7Agar
8Preparacin de medios de cultivo deshidratados
9Esterilizacin
10-67Medios de cultivo
ANDREA MELISSA SANTANA CANTO 2
ANDREA MELISSA SANTANA CANTO

Medio de cultivo.
Un medio de cultivo es un gel o una solucin

que contiene los nutrientes necesarios para
permitir, en condiciones favorables de pH y
temperatura, el crecimiento de virus,
microorganismos, clulas, tejidos vegetales o
incluso pequeas plantas. Segn lo que se
quiera hacer crecer, el medio requerir unas
u otras condiciones. Generalmente se
presentan desecados en forma de polvo fino
o granular antes de ser preparados; ya
preparados pueden encontrarse en estado
slido, semislido o lquido. El objetivo ltimo
del cultivo es variado: antibiograma,
identificacin, multiplicacin.


Medio de cultivo.
Para que las bacterias crezcan

adecuadamente en un medio de cultivo
artificial debe reunir una serie de condiciones
como son: temperatura, grado de humedad y
presin de oxgeno adecuadas, as como un
grado correcto de acidez o alcalinidad. Un
medio de cultivo debe contener los
nutrientes y factores de crecimiento
necesarios y debe estar exento de todo
microorganismo contaminante.
Clasificacin de medio de cultivos:

o Segn sus cualidades fsicas
o Segn su origen
o Segn su formulacin
o Segn su uso

Clasificacin de medio de cultivo.
Segn sus cualidades fsicas:

o Lquidos
o Semislidos
o Slidos
Segn su origen:
o Naturales
o Sintticos
o Semisintticos
Segn su formulacin:
o Qumicamente definidos
o Complejos
Segn su uso:
o medio general
o medio selectivo
o medio diferencial
o medio de enriquecimiento
o medio mnimo
o medio de transporte

AGAR
Agente solidificante en medios de cultivo bacteriolgicos y en

otras aplicaciones (cultivo de tejido, difusin inmunolgica,
estudios nutricionales, etc.).
El Agar es un poligalactsido que se obtiene a partir de algas
rojas marinas. La mayora de microorganismos son incapaces
de degradarlo.
Las concentraciones ms habitualmente utilizadas en los
medios de cultivo bacteriolgicos es de 13-20 g/l para medios
slidos y 5-7 g/l para medios semi-slidos. En las distintas
aplicaciones, se precisan distintos grados de pureza. El
tratamiento de un Agar y los mtodos utilizados en su
purificacin dan, bsicamente, 4 tipos de Agar:

Preparacin de medios de cultivos

deshidratados.
Por regla general los ingredientes de los medios de

cultivo se disuelven por agitacin y calentando
ligeramente en agua destilada. Los medios que
contienen agente gelificante se suelen hervir
durante 1 minuto para conseguir su disolucin.
Aunque en la mayor parte de los medios hay que
calentar, hay que evitar sobrecalentamientos
innecesarios.
Al distribuir el medio debe hacerse de forma

uniforme, para que el precipitado quede bien
repartido. Posteriormente a la disolucin se
procede a la esterilizacin del medio. En algunos
casos existen componentes lbiles que no pueden
aadirse en el medio de cultivo deshidratado y que
ser necesario su esterilizacin por separado y una
posterior incorporacin de forma asptica para
obtener el medio completo.


Esterilizacin.
En la etiqueta de los productos CULTIMED se indican las

condiciones de esterilizacin. De todas formas se describen
unas pautas de carcter general.
Autoclavado: Exposicin durante 15 minutos a 121C. Con

este tratamiento mueren las clulas vegetativas y las
endosporas bacterianas. Sin embargo, los medios que
contienen hidratos de carbono, deben esterilizarse a
temperaturas no superiores a los 116-118C, para prevenir su
descomposicin y la posible formacin de compuestos txicos
que inhiban el crecimiento bacteriano.
Filtracin: Es el medio ms habitual cuando existen

productos lbiles. Habitualmente el producto a esterilizar se
filtra a travs de una membrana de acetato de celulosa o
nitrocelulosa de un poro de 0,22 m. Las soluciones de
antibiticos, las de carbohidratos, las vitaminas, etc., se
suelen esterilizar por este mtodo y aadir al medio de cultivo
ya esterilizado, cuando este est a temperatura no superior a
los 45-50C.
Tindalizacin: Exposicin a 100C durante 30 minutos. Con

este tratamiento mueren las clulas vegetativas, pero no las
endosporas. Cuando el medio est frio, se incuba bajo
condiciones de germinacin de las endosporas y, si ello
ocurre, se repite el tratamiento trmico. El aparato utilizado
en este tipo de esterilizacin es el Arnold.

MEDIOS
DE
CULTIVO

Bilis-Verde Brillante, Agar

Brilliant Green Bile Agar
Cd.: 413747 Envase: 500 g
Se emplea como medio selectivo y diferencial para determinar
la densidad relativa de bacterias Coliformes en agua, aguas
residuales y alimentos.
FUNDAMENTO
La presencia conjunta del verde brillante y de la bilis hacen
que el medio sea selectivo para bacilos Gram-negativos, los
cuales al fermentar la lactosa dan lugar a colonias
intensamente rojas rodeadas de un halo rosa, que contrastan
con el fondo verde azulado del medio.
FORMULA (POR LITRO)

o Bilis de Buey ... 0.00295gr
o Erioglaucina ... 0.0649gr
o Hierro(III) Cloruro ... 0.0295gr
o Peptona de Gelatina ... 8.25gr
o Sodio Sulfito ... 0.205gr
o Verde Brillante...0.0000295gr
o Fucsina Bsica... 0.0776gr
o Lactosa ... 1.9gr
o Potasio di-Hidrgeno Fosfato ... 0.0153gr
o Agar ... 10.15gr

PREPARACION
Suspender 20.6gr en 1 L de agua destilada; calentar y
esterilizar a 121C durante 15 minutos.
MODO DE EMPLEO
El medio preparado es fotosensible por lo que se recomienda
almacenarlo al abrigo de la luz, y prepararlo poco antes de su
utilizacin. Incubar a 37C de 18 a 24 horas.

Brucella, Base de Agar

Brucella Agar Base
Cd.: 413837 Envase: 500 g
FUNDAMENTO
Se trata de un medio muy nutritivo dado el elevado contenido
de peptonas. El extracto de levadura es una fuente de
complejo vitamnico B. La glucosa aporta la energa necesaria
para el desarrollo de los microorganismos. Como base permite
aadir sangre y otras vitaminas segn se desee. Para hacerlo
ms selectivo se pueden aadir antibiticos como la
Polimixina B, la Bacitracina y la Cicloheximida, sobre todo si
se trata de investigar Brucella, tambin puede aadirse
Violeta de Metilo. Las concentraciones de estos aditivos con
los que se suplementa este medio son:
Bacitracina... 25000 UI/l
Polimixina-B ... 6000 UI/l
Cicloheximida ... 100 mg/l
Violeta de Metilo ... 1.25 mg/l
FORMULA (POR LITRO)

o Extracto de Levadura ... 2.0gr
o D(+)-Glucosa ... 1.0gr
o Peptona de Carne ... 10.0gr
o Peptona de Casena ... 10.0gr
o Sodio Cloruro ... 5.0gr
o Sodio Hidrgeno Sulfito ... 0.1gr
o Agar... 15.0gr

Calcio Caseinato, Agar

Calcium Caseinate Agar
Cd.: 413830 Envase: 500 g
Se emplea como medio selectivo para el recuento de
microorganismos proteolticos (degradadores de pro- tenas)
en alimentos.
FUNDAMENTO
El medio preparado ha de ser opalescente debido a la
presencia de casena. El procedimiento se fundamenta en que
los microorganismos proteolticos degradan la protena
producindose un halo de transparencia alrededor de las
colonias. Si no se produce este halo el resultado de la
determinacin es negativo. Si se desea intensificar la turbidez
del medio se pueden aadir de 5 a 10 g de leche descremada
en 1 L de medio.
FORMULA (POR LITRO)

o Calcio Cloruro ... 0.05 gr
o Calcio Hidrxido 0.05 gr
o Casena (Hammarsten)... 2.5 gr
o Extracto de Carne ... 3.0 gr
o Peptona de Carne ... 5.0 gr
o Sodio Cloruro ... 5.0 gr
o Agar ... 13.5gr

PREPARACION
Suspender 29 g en 1 L de agua destilada; calentar y agitar
hasta ebullicin. Esterilizar a 121C durante 15 minutos.
Distribuir en placas de Petri estriles mezclando bien el
precipitado que se forma. El medio debe ser opalescente.
MODO DE EMPLEO
Se puede inocular por extensin en superficie o por vertido en
placas y la incubacin puede durar de 2 a 3 das. Para facilitar
el recuento de las colonias, con halo de transparencia, se
puede cubrir la superficie de la placa con cido actico entre
el 5 y el 10%.

Cerebro Corazn (BHI), Infusin

Brain Heart Infusion (BHI)
Cd.: 413777 Envase: 500 g
Cerebro Corazn (BHI), Agar

Brain Heart Infusion Agar (BHI)
Cd.: 413772 Envase: 500 g
Se emplea para el cultivo de bacterias exigentes como
Estreptococos, Neumococos, Meningococos y otros. Por la
adicin de Estreptomicina, Gentamicina o Cloranfenicol
resulta un medio selectivo para hongos.
FUNDAMENTO
Por la presencia de peptona, infusin de cerebro de ternera e
infusin de corazn de res, se tienen los componentes
necesarios para nutrir microorganismos exigentes. La gluco-
sa se emplea para la fermentacin y el fosfato como tampn.
Por la adicin de antibitico es un medio adecuado para el
estudio de hongos patgenos. Debido a su contenido de
glucosa es menos indicado para la caracterizacin de
hemlisis, pero puede utilizarse suplementado con sangre.
FORMULA (POR LITRO) DE CEREBRO CORAZON (BHI),

INFUSION
o Infusin de Cerebro de Ternera (a partir de 200 g) ...
12.5gr
o Infusin de Corazn de res (a partir de 250 g) ... 5gr
o D(+)-Glucosa ... 2gr
o Peptona de Gelatina ... 10gr
o Sodio Cloruro ... 5gr
o di-Sodio Hidrgeno Fosfato ... 2.5gr

FORMULA (POR LITRO) DE CEREBRO CORAZON (BHI), AGAR

o Infusin de Cerebro de
o Ternera (a partir de 200 g) ... 12.5gr
o Infusin de Corazn deRes (a partir de 250 g) ... 5gr
o D(+)-Glucosa ... 2gr
o Mezcla de Peptonas... 10gr
o di-Potasio Hidrgeno Fosfato ... 2.5gr
o Sodio Cloruro5gr
o Agar...15gr
PREPARACION
Suspender 52 gr (Agar) 37 gr (Infusin) en 1 L de agua
destilada; calentar y agitar hasta ebullicin y hervir durante 1
minuto. Distribuir y esterilizar a 121oC durante 15 minutos.
Agitar el medio antes de usar. Para preparar un medio
selectivo para hongos, el medio esterilizado y fundido se debe
enfriar hasta 50C y aadir aspticamente 20.000 UI de
penicilina y 40 mg de estreptomicina por litro de medio. Se
obtiene un medio ms estable aadiendo 0.05 mg de
cicloheximida y 0,5 mg de cloranfenicol por litro, antes de
esterilizar.
MODO DE EMPLEO

Incubar a 37oC de 24 a 72 horas.

Cereus (BCA), Base de Agar Selectivo

Bacillus Cereus Selective Agar Base
Cd.: 414119 Envase: 500 g
Se emplea para el aislamiento y recuento de Bacillus cereus,
en todo tipo de alimentos.
FUNDAMENTO
La adicin de Polimixina-B Sulfato a esta base de agar inhibe
el crecimiento de la flora secundaria. B. cereus es manitol-
negativo, lo que permite su distincin de la flora acompaante
manitol-positiva, que hace virar el Azul de Bromotimol a
amarillo. Al tratarse de un microorganismo con actividad
lecitinasa se forma un halo de precipitados blancos alrededor
de la colonia, como resultado de la degradacin de la lecitina
del huevo.
B. cereus en condiciones normales y cuando su nmero es
limitado no se considera patgeno, sin embargo es capaz de
producir intoxicacin alimentaria al hombre cuando un
alimento esta muy contaminado o cuando las condiciones de
conservacin no son adecuadas. Se utiliza, tambin, como
indicador del mantenimiento de la cadena del fro en los
alimentos.
FORMULA (POR LITRO)

o Azul de Bromotimol ... 0.12 gr
o D(+)-Manita ... 10gr
o Peptona Bacteriolgica... 1gr
o di-Sodio Hidrgeno Fosfato ... 2.5gr
o Sodio Piruvato ... 10 g
o Potasio di-Hidrgeno fosfato ... 0.2gr
o Magnesio Sulfato ... 0.1gr
o Cloruro Sdico2gr

o Agar... 14gr
PREPARACION
Suspender 40gr en 950 ml de agua destilada. Calentar y
agitar hasta disolucin total. Distribuir y esterilizar a 121C
durante 15 minutos. Enfriar a 50C; aadir aspticamente
100.000 UI de Polimixina B y 50 ml de emulsin de yema de
huevo estril por litro de medio. Mezclar bien y distribuir.
MODO DE EMPLEO
Las placas sembradas se incuban a 30C de 18 a 24 horas.
Pueden existir confusiones con colonias de otros bacilos
Gram-positivos.
Las pruebas confirmativas a realizar son: fermentacin de
glucosa, la utilizacin de la gelatina y reduccin de nitratos,
pruebas positivas para Bacillus cereus.

Citrato de Simmons, Agar

Simmons Citrate Agar
Cd.: 413811 Envase: 500 g
Se emplea para la diferenciacin e identificacin de
Enterobactericeas y ciertos Hongos, basndose en la
utilizacin del Citrato.
FUNDAMENTO
Este medio se fundamenta en el distinto comportamiento de
los Coliformes fecales y los Aergenos en un ambiente que
contiene sales inorgnicas de amonio como nica fuente de
nitrgeno y citrato como nica fuente de carbono. En tal
situacin los primeros muestran su incapacidad de desarrollo,
mientras que los segundos lo hacen sin dificultad. La
presencia de azul de bromotimol hace que el medio,
inicialmente verde, pueda cambiar de color por la produccin
de lcali, a un azul oscuro.
Para caracterizar Klebsiella es preciso aadir Inosita a razn
de 10 g/l antes de esterilizar.
FORMULA (POR LITRO)

o tri-Sodio Citrato ... 2gr
o Amonio di-Hidrgeno Fosfato 1gr
o Azul de Bromotimol ... 0.08gr
o Magnesio Sulfato 0.2gr
o di-Potasio Hidrgeno Fosfato ... 1gr
o Agar... 15gr

PREPARACION
Suspender 24,2 g en 1 L de agua destilada; calentar y agitar
hasta ebullicin y hervir durante 1 minuto. Distribuir y
esterilizar a 121C durante 15 minutos. Si se distribuye en
tubos de ensayo dejar enfriar en posicin inclinada, dejando
un fondo de 2-3 cm y una superficie inclinada de 4-5 cm.
MODO DE EMPLEO
El medio preparado es de color verde, cuando se siembra en
los tubos se hace en la columna vertical y por estra en la
superficie inclinada.
Incubar entre 35 y 37C de 18 a 24 horas.

CLED, Medio
CLED Medium
Cd.: 413753 Envase: 500 g
Se emplea para el recuento, aislamiento e identificacin
orientativo de grmenes en orina. Tambin se emplea como
medio de transporte para inculos en inmersin.
FUNDAMENTO
El Azul de Bromotimol cambia de color por la fermentacin
cida de la Lactosa. La Cistina favorece el crecimiento de las
Enterobactericeas y el bajo contenido en electrolitos reduce
la difusin de Proteus. Las peptonas, el extracto de carne y la
Lactosa constituyen los elementos nutrientes del medio.
FORMULA (POR LITRO)

o Azul de Bromotimol ... 0.02gr
o L-Cistina ... 0.128gr
o Extracto de Carne ... 3gr
o Lactosa ... 10gr
o Peptona de Casena ... 4gr
o Agar ... 15gr
Preparacin
Suspender 36,1 g en 1 L de agua destilada; calentar y agitar
hasta ebullicin y hervir durante 1 minuto. Esterilizar a 121C
durante 15 minutos. Homogeneizar y distribuir en placas de
Petri estriles.
MODO DE EMPLEO
Sembrar por estra en la superficie del medio. Incubar a 37C de
18 a 24 horas.

Columbia, Base de Agar

Columbia Agar Base
Cd.: 413751 Envase: 500 g
Se emplea para el cultivo y aislamiento de microorganismos
en general y en particular de aquellos que son especialmente
exigentes a partir de una amplia variedad de muestras.
Permite la adicin de sangre, de componentes selectivos o
factores de crecimiento.
FUNDAMENTO
Las peptonas aportan la base nutritiva del medio, el almidn
se constituye como fuente de energa, el Sodio Cloruro
mantiene el nivel salino necesario para el buen desarrollo de
los grmenes y la sangre desfibrinada, que se suele aadir,
permite la observacin de las reacciones hemolticas. A partir
de esta base se prepara el agar sangre y el agar chocolate;
tambin puede utilizarse para ensayos de toxicidad de
Corynebacterium (Herman y col. 1958), como base para la
preparacin de Agar vaginalis (Greenwood y col. 1977), para
el aislamiento de Campylobacter (Karmaly y col. 1986),
adems de otras muchas variantes.
FORMULA (POR LITRO)

o Almidn de Maz ... 1gr
o Peptona 10gr
o Peptona Biotriptasa ... 10gr
o Peptona Msculo Cardaco ... 3gr
o Sodio Cloruro 5gr
o Agar... 13.5gr

PREPARACION
Suspender 42.5gr en 1 l de agua destilada; calentar y agitar
esterilizar a 121oC durante 15 minutos. Se enriquece con
diversos materiales, segn la determinacin que se vaya a
realizar:
Agar Sangre Columbia
A 950 ml de Base de Agar Columbia aadir 50 ml de sangre
de carnero desfibrinada y estril.
Medio selectivo Gardnerella vaginalis

A 940 ml de Base de Agar Columbia, aadir 50 ml de suero de
caballo o de conejo y 35 mg de Acido Nalidxico; 4 mg de
Gentamicina y 2 mg de Amfotericina B disuelto en 4 ml de
Etanol.
Medio COBA
A 930 ml de Base de Agar Columbia aadir 50 ml de sangre
de caballo desfibrinada y estril. Aadir 10 ml de Solucin
acuosa (0,1%) de Sulfato de Colistina y 10 ml de Solucin
acuosa (0,05-0,1%) de Acido Oxolnico.
MODO DE EMPLEO
Utilizar segn los fines a conseguir.

Dermasel (Agar Micobitico), Agar

Dermasel Agar (Mycobiotic Agar)
Cd.: 413846 Envase: 500 g
Se emplea para el aislamiento de hongos patgenos, en
especial de dermatofitos, en medios muy contaminados.
FUNDAMENTO
La cicloheximida acta de forma selectiva en el aislamiento
de dermatofitos, mientras que el cloranfenicol inhibe
notablemente el crecimiento de bacterias y mohos. No
obstante, dado que en segn que casos pueden ser tambin
inhibidos ciertos hongos patgenos es conveniente sembrar
un medio exento de sustancias inhibidoras.
FORMULA (POR LITRO)

Cicloheximida ... 0.40gr
Cloranfenicol ... 0.05gr
D(+)-Glucosa ... 10gr
Peptona de Soja ... 10gr
Agar ... 15.5gr

PREPARACION
Disolver 36 g en 1 L de agua destilada; mezclar bien, calentar
y agitar hasta ebullicin. Distribuir y esterilizar a 118C
durante 15 minutos. Dejar enfriar y usar de inmediato. Una
vez fro no refundir ms de una vez. No sobrecalentar. Si se
desea enriquecer, emplear Caldo Infusin Cerebro Corazn en
lugar de agua.
MODO DE EMPLEO
El medio se puede emplear en placas o en tubos, en este caso
solidificndolo en plano inclinado.
Debe incubarse a temperatura ambiente (22C) por un
perodo de tiempo que puede llegar hasta las tres semanas.

Desoxicolato, Agar
Desoxycholate Agar
Cd.: 413754 Envase: 500 g
Se emplea para el aislamiento de bacilos entricos Gram-
negativos. Tambin se usa en el recuento de Coliformes en
leche y productos lcteos.
FUNDAMENTO
Los Coliformes dan lugar a colonias rojas mientras que los
microorganismos entricos al no ser capaces de fermentar la
lactosa dan colonias incoloras, al tiempo que las bacterias no
entricas quedan inhibidas por la presencia de citrato y
desoxicolato. En algunos casos se puede aadir sacarosa a
concentracin del 1% para ciertos Coliformes que fermentan
la Sacarosa ms fcilmente que la Lactosa.
FORMULA (POR LITRO)

Sodio Desoxicolato ... 1gr
Hierro(III) Citrato... 1gr
Lactosa ... 10gr
Mezcla de Peptonas ... 10gr
di-Potasio Hidrgeno Fosfato ... 2gr
Rojo Neutro ... 0.033gr
tri-Sodio Citrato ... 1gr
Sodio Cloruro ... 5gr
Agar ... 16gr

PREPARACION
Disolver 46gr en 1 l de agua destilada; calentar y agitar hasta
ebullicin y hervir durante 1 minuto. No sobrecalentar. No
esterilizar en autoclave. Dejar enfriar hasta 45C y distribuir
en placas de Petri estriles.
MODO DE EMPLEO
Sembrar el medio en superficie o por el mtodo de
incorporacin en gelosa.
Incubar a 37C de 18 a 24 horas.

Desoxicolato Citrato, Agar

Desoxycholate Citrate Agar
Cd.: 413755 Envase: 500gr
Se emplea como medio altamente selectivo para el
aislamiento de patgenos entricos, especialmente de
Salmonella y de Shigella.
FUNDAMENTO
Este medio es ptimo para el asilamiento de patgenos
entricos en muestras muy contaminadas. La presencia de
citrato y desoxicolato inhibe o reduce el crecimiento de
bacterias Coliformes e inhibe las Gram-positivas, mientras que
la Salmonella y la Shigella crecen sin dificultad alguna.
El producto resultante de la fermentacin de la lactosa
acidifica el medio, ello provoca colonias rosas con precipitado
biliar.
Si se encuentran presentes microorganismos productores de
Hidrgeno Sulfuro se producir la precipitacin de Hierro
Sulfuro resultando colonias con el centro ennegrecido.
FORMULA (POR LITRO)

Sodio Desoxicolato ... 5gr
Amonio Hierro(III) Citrato ... 2gr
tri-Sodio Citrato ... 20gr
Infusin de Cerdo ... 9.5gr
Lactosa... 10gr
Proteosa Peptona no 3 ... 10gr
Rojo Neutro ... 0.02gr
Agar... 13.5gr

PREPARACION
Suspender 70 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar
hasta ebullicin. No sobrecalentar. No esterilizar en autoclave.
Dejar enfriar hasta 45-50c y distribuir en placas de Petri
estriles.
MODO DE EMPLEO
Sembrar el medio de cultivo en superficie.
Incubar entre 35 y 37C de 18 a 24 horas. Si no se produce
fermentacin de la lactosa la colonia es incolora. En caso
contrario la colonia aparecer rosada rodeada de una zona de
precipitacin biliar

Estreptococos KF, Agar

KF Streptococcus Agar
Cd.: 413773 Envase: 500 g
Se emplea para el aislamiento de Enterococos en agua, ya
sea por siembra directa o previa filtracin por membrana y
aplicando el procedimiento correspondiente.
FUNDAMENTO
La maltosa y la lactosa son los hidratos de carbono
fermentables, que con la peptona y el extracto de levadura
constituyen el conjunto nutriente del medio. El Sodio Azida es
el agente selectivo. La adicin del 2,3,5-Trifenil-2H- Tetrazolio
Cloruro da lugar a que los Enterococos, capaces de reducirlo,
presenten colonias de un color rojo oscuro.
FORMULA (POR LITRO)

Extracto de Levadura ... 10gr
Lactosa ... 1gr
Maltosa... 20gr
Mezcla de Peptonas... 10gr
Sodio Azida ... 0.4gr
Sodio Glicerofosfato ... 10gr
Agar.... 20gr

PREPARACION
Suspender 76.4 g en 1 L de agua destilada; calentar y agitar
hasta ebullicin y disolucin total y hervir durante 1 minuto.
Esterilizar cuidadosamente en autoclave a 121C durante 10
minutos. Dejar enfriar hasta 50C y aadir 1 ml de 2,3,5-
Trifenil-2H-Tetrazolio cloruro al 1% por cada 100 ml de medio.
MODO DE EMPLEO
Se recomienda la tcnica de filtracin por membrana o el de
numeracin en placa.
Incubar entre 34 y 37C durante 48 horas.
Proceder al recuento de las colonias de color rojo oscuro.

Extracto de Glucosa y Triptona, Agar

Tryptone Glucose Extract Agar
Cd.: 413844 Envase: 500 g
Se emplea para el recuento de aerobios en placa en aguas
potables y de drenaje. Tambin se emplea en el recuento de
bacterias en leches y derivados.
FUNDAMENTO
Este medio presenta una combinacin de nutrientes que se
acomoda ptimamente a los fines apetecidos.
FORMULA (POR LITRO)

Extracto de Carne 3gr
Peptona de Casena ...5gr
Agar...15gr
PREPARACION
Suspender 24 g en 1 L de agua destilada; mezclar bien,
calentar y agitar hasta ebullicin y hervir durante 1 minuto.
Distribuir y esterilizar a 121C durante 15 minutos. Dejar
enfriar a 45C y verter en cpsulas de Petri estriles.
MODO DE EMPLEO
Habitualmente se utiliza la tcnica de incorporacin en
gelosa.
Incubar entre 31 y 33C de 24 a 48 horas.

Extracto de levadura, agar

Yeast Extract Agar
Cd.: 413897 Envase: 500 g
Medio para el cultivo de mohos y levaduras en leche y
derivados lcteos.
FUNDAMENTO
Los nutrientes de este medio permiten el crecimiento de una
gran variedad de microorganismos (bacterias, hongos y
levaduras). Para hacer recuentos de hongos y levaduras debe
suplementarse con antibiticos por ejemplo Cloranfenicol a
razn de 0,05 g por litro de medio.
FORMULA (POR LITRO)

Extracto de Levadura ... 5gr
Agar 20gr
PREPARACION
Suspender 35 g en 1 L de agua destilada. Calentar y agitar
hasta ebullicin y hervir hasta disolucin total. No
sobrecalentar. Esterilizar a 118oC durante 15 minutos.
MODO DE EMPLEO
Sembrar la placa segn los fines a conseguir.
Habitualmente se hacen siembras en
incorporacin en gelosa y se incuba a 37C
durante 24 horas o 20-22C durante 3 das.

Extracto de Malta, Agar

Malt Extract Agar
Cd.: 413781 Envase: 500 g
Extracto de Malta, Caldo
Malt Extract Broth
Cd.: 413832 Envase: 500 g
Se emplea para el aislamiento y recuento de mohos y
levaduras. Tambin se puede emplear para pruebas de
esterilidad en relacin a la presencia de estos
microorganismos.
FUNDAMENTO
En medio cido, el extracto de malta que es rico en glcidos,
es capaz de aportar todos los nutrientes necesarios para el
desarrollo de mohos y levaduras. Por el carcter cido del
medio, se inhibe el crecimiento de la mayor parte de los
grmenes contaminantes.
FORMULA (POR LITRO) DEL AGAR

Extracto de Malta12.75gr
Dextrina ... 2.75gr
Glicerina... 2.35gr
Peptona de Gelatina ... 078gr
Agar ... 15gr
FORMULA (POR LITRO) DEL CALDO

Extracto de Malta... 6gr
Extracto de Levadura... 1.2gr
D(+)-Glucosa... 6gr
Maltosa... 6gr

PREPARCION
Suspender 33.6gr (Agar) 19 g (Caldo) en 1 L de agua
destilada. Calentar y agitar hasta ebullicin y hervir durante 1
minuto. Esterilizar a 118oC durante 10 minutos.
MODO DE EMPLEO
Incubar entre 20o y 30oC de 3 a 5 das.

Gelatina Nutritiva
Nutrient Gelatin
Cd.: 413801 Envase: 500 g
Se emplea en estudios de microorganismos proteolticos que
degradan la gelatina por la produccin de gelatinasa
FUNDAMENTO
Antes de emplear el agar como agente gelificante en la
elaboracin de los medios de cultivo se empleaba la gelatina.
No obstante, presentaba inconvenientes tales como la
presencia de determinados microorganismos que eran
capaces de utilizar la gelatina, el medio se licuaba debido a la
produccin de gelatinasa. Actualmente, la capacidad de
degradar la gelatina por parte de algunos microorganismos se
utiliza como carcter en la determinacin e identificacin
oficial.
FORMULA (POR LITRO)

Gelatina ... 120gr
Peptona de Gelatina...5gr
Extracto de Carne de Res 3gr
PREPARACION
Suspender 128 g en 1 L de agua destilada; mezclar bien y
calentar ligeramente (50C) hasta disolucin total. Distribuir
en tubos de ensayo y esterilizar a 121C durante 15 minutos.

MODO DE EMPLEO
Sembrar la muestra por picadura. Incubar el medio con el
microorganismo a estudio a 20-22C, o bien a la temperatura
ptima para el microorganismo. Si la incubacin se realiza a
temperatura superior a los 20-22C (la gelatina ser lquida)
antes de proceder a la lectura los cultivos deben enfriarse en
la nevera para no dar falsos positivos.
Por regla general se aconsejan incubaciones mximas de 14
das con lecturas cada 3, pero debe tenerse en cuenta que
ciertos organismos pueden tardar hasta varios meses en
licuar la gelatina.

Glucosa, Agar
Glucose Agar
Cd.: 413840 Envase: 500 g
Se emplea para recuento de una amplia variedad de

microorganismos. Por la adicin de sangre se puede usar
como agar sangre con glucosa.
FUNDAMENTO
La glucosa constituye una fuente de energa muy importante
para una gran variedad de bacterias, consiguindose unos
crecimientos rpidos y abundantes. En el caso de anlisis de
alimentos congelados es necesario acidular el medio con
cido tartrico. Es importante tener en cuenta que un medio
acidulado y solidificado ya no se puede volver a refundir,
porque su acidez hidrolizara al propio agar. Para realizar un
estudio de fermentacin de la glucosa, complementar el
medio con 0,02 g/l de Prpura de Bromocresol; el indicador
cambiar de color si existe fermentacin de glucosa. Este
estudio tambin se puede realizar con el Agar Glucosa y
Triptona.
FORMULA (POR LITRO)

Extracto de Carne ... 3gr
Peptona... 10gr
Agar... 15gr

PREPARACION
Suspender 43 g en 1 l de agua destilada; mezclar bien,
calentar y agitar hasta ebullicin y hervir durante 1 minuto.
Esterilizar a 121C durante 15 minutos. Si se desea acidular el
medio, dejar enfriar hasta 45-50C y aadir 7,1 ml de Acido
Tartrico al 10% estril. Homogeneizar y distribuir en Placas
de Petri estriles. Para fabricar placas de Agar sangre con
glucosa aadir 5% de sangre al medio esterilizado y a una
temperatura entre 45-50C.
MODO DE EMPLEO

Glucosa y Patata, Agar

Potato Glucose Agar
Cd.: 413758 Envase: 500 g
Se emplea para la identificacin, cultivo y recuento de
levaduras y hongos, principalmente en productos lcteos y
otros productos alimenticios.
FUNDAMENTO
Por una parte la infusin de patata propicia un desarrollo sin
restricciones de los hongos, complementado a su vez por el
contenido de glucosa del medio. Por otra parte su pH
ligeramente cido (5,6), selecciona el crecimiento de los
hongos en relacin al de las bacterias. Incluso se puede bajar
ms el pH con cido lctico o cido tartrico para hacerlo an
ms selectivo. Se puede llegar hasta un pH de 3.5.
FORMULA (POR LITRO)

D(+)-Glucosa...20gr
Infusin de Patata (a partir de 200 g)...4gr
Agar... 15gr
PREPARACION
esterilizar a 121C durante 15 minutos. Para obtener un pH de
3.5 aadir aproximadamente 12 ml/l de Acido Tartrico al 10%
estril. No refundir el medio.
MODO DE EMPLEO
Sembrar por incorporacin en gelosa o en superficie por
estra.
Incubar entre 20 y 25C de 3 a 5 das.

Lactosado, Caldo
Lactosed Broth
Cd.: 413776 Envase: 500 g
Se emplea para el estudio de procesos de fermentacin de la
lactosa y en especial para la investigacin de
microorganismos Coliformes, especialmente E. coli en aguas,
leches y productos alimenticios. No contiene indicadores ni
inhibidores.
FUNDAMENTO
Por la composicin del medio, el contenido en elementos
nutritivos y energticos hace que permita el desarrollo sin
restriccin de bacterias Coliformes. La fermentacin de
lactosa producir desprendimiento de gas que se pondr de
manifiesto en la campana de Durham.
FORMULA (POR LITRO)

Lactosa ...5gr
Extracto de Carne ...3gr
Peptona de Gelatina ...5gr
PREPARACION
Disolver 13 g en 1 L de agua destilada. Distribuir en tubos de
ensayo con campana de Durham y esterilizar a 121C durante
15 minutos. Enfriar lo ms rpidamente posible.

MODO DE EMPLEO
Utilizar el medio segn los fines de aplicacin previstos.

Lauril Triptosa, Caldo

Lauryl Tryptose Broth
Cd.: 413827 Envase: 500 g
Se emplea para el recuento y deteccin de microorganismos
Coliformes en aguas, leches y productos alimenticios. Tambin
se emplea en estudios del proceso de fermentacin de la
lactosa.
FUNDAMENTO
Por la presencia de Sodio Laurilsulfato queda inhibida la
prctica totalidad de la flora secundaria. El resto de los
componentes constituyen los soportes nutritivo, energti- co,
salino y regulador del pH necesarios para el buen desarrollo
de los Coliformes. La deteccin de gas se hace con campanas
de Durham. El medio no lleva ningn indicador de produccin
de cido, pero puede incorporarse. Un buen indicador de pH
puede ser el Prpura de Bromocresol a una concentracin de
0.02 g/l de medio o el Rojo de Fenol a una concentracin de
0,2 g/l. Este caldo es idneo para ser suplementado con MUG,
a razn de 50 mg por litro de medio; MUG es un fluorocromo
que permite la deteccin de E. coli. Adems se puede detectar
la produccin de Indol, aadiendo al cultivo el reactivo de
KOVACS, o con las tiras reactivas del Indol. Esta determinacin
permitir la confirmacin de E. coli.
FORMULA (POR LITRO)

Sodio Laurilsulfato ... .10gr
Triptosa... 20gr
Lactosa... 5gr
Potasio di-Hidrgeno Fosfato ... 2.75gr
di-Potasio Hidrgeno Fosfato ... 2.75gr

PREPARACION
Suspender 35.6 g en 1 L de agua destilada y agitar hasta
disolucin total. Distribuir en tubos de ensayo con campana
Durham y esterilizar a 121oC durante 15 minutos. Cuando el
medio se almacena en el frigorfico puede enturbiarse, pero
se aclara notablemente en la incubacin. La transparencia no
es fundamental y slo la formacin de gas es crtica.
MODO DE EMPLEO
Incubar a 37oC de 24 a 48 horas.


MacConkey, Agar
MacConkey Agar
Cd.: 413779 Envase: 500 g
Medio de cultivo utilizado en la investigacin de organismos
coliformes.
FUNDAMENTO
Por la presencia de las sales biliares y el cristal violeta se
inhibe el crecimiento de las bacterias Gram-positivas. Por la
presencia de la lactosa, las bacterias capaces de fermentarla
acidifican el medio, cambiando el color del rojo neutro y
formando colonias rojas o rosadas, pudiendo presentar un
halo turbio correspondiente al precipitado biliar. Las bacterias
lactosa-negativas dan colonias incoloras.
FORMULA (POR LITRO)

o Lactosa ... 10gr
o Peptona ... 3gr
o Sales Biliares ... 1.5gr
o Peptona de Gelatina 17gr
o Rojo Neutro ... 0.03gr
o Violeta Cristal ... 0.001gr
o Agar... 13.5gr

PREPARACION
durante 15 minutos. Dejar enfriar hasta 45C y distribuir en
placas de Petri estriles con 20 ml en cada una. Dejar
solidificar las placas parcialmente destapadas.
MODO DE EMPLEO
Sembrar por estra en la superficie de la placa. Incubar a 37C
de 18 a 24 horas.

MacConkey, Caldo
MacConkey Broth
Cd.: 413780 Envase: 500 g
Se emplea para la investigacin de Coliformes en aguas,
leches, productos alimenticios y otras muestras de inters
sanitario.
Fundamento
Por la presencia de la Bilis fresca de buey se inhibe el
crecimiento de los microorganismos Gram-positivos. A su vez
los grmenes capaces de fermentar la Lactosa acidularn el
medio con el consiguiente cambio de color a amarillo y se
observar la produccin de gas en la campana de Durham.
Para la tcnica de NMP se darn como tubos positivos,
aquellos que presenten turbidez, viraje a amarillo y gas en la
campana de Durham.
Frmula (por litro)

o Bilis de Buey... 5gr
o Lactosa... 10gr
o Prpura de Bromocresol 0.01gr
PREPARACION
Disolver 35 g en 1 l de agua destilada. Si las muestras a
analizar son de un volumen superior a 1 ml preparar un caldo
doble concentrado. Distribuir en tubos de ensayo con
campana de Durham y esterilizar a 121C durante 15
minutos.

MODO DE EMPLEO
Incubar entre 30 y 37C durante 24 horas, para determinar
Coliformes totales.
Si se estudia la presencia de Coliformes fecales
principalmente E. coli, incubar a 44C 1C durante 24 horas.

MacConkey sin Violeta Cristal, Agar

MacConkey Agar without Crystal Violet
Cd.: 414679 Envase: 500 g
Medio utilizado en la deteccin de Enterobactericeas y
Enterococos.
FUNDAMENTO
Este medio es menos selectivo que el MacConkey tradicio- nal
por la ausencia del cristal violeta, la inhibicin de los gram-
positivos se hace por la mezcla de sales biliares, pero en este
medio se desarrollan Enterococos e incluso algunos
Estafilococos debido a la ausencia de este colorante. Ello lo
hace indicado como medio de aislamiento de microorganismos
entricos en general.
FORMULA (POR LITRO)

o Lactosa... 10gr
o Polipeptona ... 3gr
o Rojo neutro ... 0.04gr
o Sales biliares... 5gr
o Agar ... 12gr
PREPARACION
Suspender 52 g en 1 l de agua destilada. Calentar y agitar hasta
ebullicin y hervir durante 1 minuto. Esterilizar a 121C durante
15 minutos.
MODO DE EMPLEO
En este medio las colonias de Coliformes son de color rojo-
rosado, mientras que despus de la incubacin las

Enterobactericeas no fermentadoras son incoloras o

ligeramente amarillentas.
Los Enterococos presentan colonias pequeas de color rojo y los
Estafilococos colonias rojas-rosadas.
Manitol Movilidad, Medio

Mannitol Motility Medium
Cd.: 413782 Envase: 500 g
Se emplea para la diferenciacin rpida de
Enterobactericeas en funcin de su movilidad, poder de
fermentacin del manitol y capacidad de reducir el nitrato.
FUNDAMENTO
Al tratarse de un medio semislido las bacterias con
capacidad de movimiento se difundirn a partir de la lnea de
inculo dando lugar a un enturbiamiento homogneo debido a
la distribucin aleatoria de los microorganismos. Al contrario
las bacterias inmviles permanecern en la misma lnea de
aplicacin. Si adems los grmenes son capaces de fermentar
el manitol acidularn el medio y se producir un cambio de
color al amarillo. Cuando esto no sea as se conservar el
color rojo inicial. Si a su vez son capaces de reducir el nitrato
a nitrito, la presencia de este ltimo se puede poner de
manifiesto al aparecer un cambio de color en el medio al
aadir los reactivos de Griess-Ilosvay.
FORMULA (POR LITRO)

o D(-)-Manita... 7.5gr
o Peptona de Casena ... 10gr
o Potasio Nitrato... 1gr
o Rojo de Fenol ... 0.04gr

o Agar ... 3.5gr
PREPARACION
Suspender 22 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar
hasta ebullicin. Distribuir en tubos de ensayo hasta tener un
fondo de 6 a 7 cm y esterilizar a 121C durante 15 minutos.
MODO DE EMPLEO
Sembrar a partir de un cultivo puro con el asa de picadura.

Mueller-Hinton, Agar
Mueller-Hinton Agar
Cd.: 413787 Envase: 500 g
Mueller-Hinton, Caldo
Mueller-Hinton Broth
Cd.: 413788 Envase: 500 g
Se emplea para ensayos de sensibilidad de los
microorganismos frente a antibiticos y sulfamidas. Tambin
en aislamiento primario de Gonococos y Meningococos.
FUNDAMENTO
En la preparacin de este medio es fundamental que las
concentraciones de timina, timidina y cido 4-aminobenzoico,
sean lo suficiente bajas para no inhibir la actividad
antibacteriana de antibiticos y sulfamidas. Las dos primeras
inhiben los antibiticos y el ltimo las sulfamidas. El ensayo
de sensibilidad de un microorganismo frente a un antibitico
se puede realizar sobre placas de agar Mueller-Hinton por
procedimientos de difusin, por diluciones seriadas o por
tcnicas turbidimtricas en el Caldo Mueller-Hinton. En las
tcnicas de difusin se mide el halo de inhibicin del
crecimiento confluente alrededor del depsito de antibitico
(discos, torrecillas, etc.). El dimetro del crculo de inhibicin
es inversamente proporcional a la concentracin mnima
inhibitoria (CMI) del agente antibacteriano.
FORMULA (POR LITRO) DEL CALDO

o Almidn ...1.5gr
o Infusin de Carne (a partir de 300 g) ...2gr
o Peptona de Casena Hidrolizada... 17.5gr

FORMULA (POR LITRO) DEL AGAR

o Almidn ...1.5gr
o Infusin de Carne (a partir de 300 g) 2gr
o Peptona de Casena Hidrolizada... 17.5gr
o Agar...17gr
PREPARACION
Suspender 38 g (Agar) 21 g (Caldo) en 1 L de agua
destilada; calentar y agitar hasta ebullicin y hervir durante 1
minuto. Distribuir y esterilizar a 121C durante 15 minutos. Si
se desea aadir sangre, dejar enfriar hasta 45C y aadir
aspticamente sangre estril desfibrinada; la mezcla con
sangre debe chocolatearse calentando a 80oC durante 10
minutos, si se desea obtener desarrollo de Neisseria. No
sobrecalentar. Si se precisa refundir el medio, calentar el
menor tiempo posible.
MODO DE EMPLEO
El antibiograma debe ser efectuado sobre cultivos puros. En
las tcnicas de difusin se inoculan las placas de Agar para
que formen un confluente. Los discos u otros contenedores
del antibitico deben apoyarse sobre el medio de manera que
queden adheridos a l. Incubar a la temperatura ptima del
microorganismo durante 24 horas.

Pseudomonas- F,
Agar
Pseudomonas-F Agar
Cd.: 413796 Envase: 500 g
Se emplea para la diferenciacin de Pseudomonas
productoras de fluorescena de las que no lo son. El medio en
s favorece la produccin de fluorescena.
FUNDAMENTO
Hay Pseudomonas que elaboran fluorescena sin piocianina,
otras elaboran slo piocianina y otras que elaboran las dos. Se
trata de un medio que potencia la produccin de fluorescena
e inhibe la de piocianina. Ambos colorantes se difunden en el
medio dando una coloracin amarilla fluorescente el primero y
azul el segundo. Si se obtienen colores intermedios ms o
menos verdosos indica que se han producido ambos
pigmentos y que por lo tanto la piocianina no ha quedado
completamente inhibida.
FORMULA (POR LITRO)

o Magnesio Sulfato1.5gr
o Peptona... 20gr
o di-Potasio Hidrgeno Fosfato 1.5gr
o Agar... 14gr

PREPARACION
Suspender 37 g en 1 L de agua destilada, aadir 10 ml de
glicerina y mezclar bien. Dejar humectando de 10 a 15
minutos. Calentar y agitar hasta ebullicin y hervir durante 1
minuto. No sobrecalentar. Esterilizar a 121C durante 15
minutos. Si se distribuye en tubos de ensayo dejar solidificar
en plano inclinado.
MODO DE EMPLEO
Sembrar en superficie para obtener colonias lo ms aisladas
posibles.
Incubar a 37oC durante una semana e inspeccionar cada da.

Raka-ray, base de agar

Raka-Ray Agar Base
Cd.: 413797 Envase: 500 g
Se emplea como medio selectivo para el aislamiento de
bacterias cido lcticas en la cerveza y en el control del proceso
de fermentacin.
FUNDAMENTO
Este medio se encuentra entre los que mejores resultados han
dado en la deteccin de Lactobacilos en la cerveza durante su
proceso de fermentacin. Su uso fue recomendado por la
Convencin Cervecera Europea. Los metabolitos que producen
los Lactobacilos pueden alterar sensiblemente el sabor del
producto final y de aqu la importancia de su deteccin. Por otra
parte, como son grmenes con requisitos nutricionales
complejos y de cultivo en atmsferas muy restringidas, se han
ensayado muchas formulaciones y maneras de incubar, y de
todas ellas la que mejor resultados ha dado es la que
corresponde a este medio. Por la presencia de la Cicloheximida
se inhibe el crecimiento de las levaduras. Por la adicin del
Feniletanol se inhiben los grmenes Gram-negativos. Los
azcares constituyen la fuente energtica del medio y el resto
de los componentes son el grueso de los elementos
nutricionales
FORMULA (POR LITRO)

o N-Acetil Glucosamina ...0.5gr
o di-Amonio Hidrgeno Citrato ...2gr
o Betana Clorhidrato ...2gr
o Cicloheximida 7mg
o Extracto de Hgado ...1gr
o Extracto de Levadura 5gr
o D(-)-Fructosa ...5gr

o D(-)-Glucosa5gr
o Magnesio Sulfato ...2gr
o Maltosa...10gr
o Manganeso(II) Sulfato ............................. 0,66 g
o Potasio Aspartato ...2.5gr

o tri-Potasio Fosfato ... 2gr
o Potasio Glutamato ... 2.5gr
o Triptona ... 20gr
o Agar ... 17gr
PREPARACION
Suspender 77.1 g en 1 l de agua destilada a la que previamente
se ha aadido 10 ml de Tween 80 (polisorbato). Calentar y
agitar hasta disolucin total. Esterilizar a 121C durante 15
minutos. Dejar enfriar hasta 50-55C y aadir aspticamente 3
g de Feniletanol.
MODO DE EMPLEO
Se realizan siembras en superficie o por incorporacin en
gelosa.
Incubar de 25 a 30C durante 4 das en atmsfera semi-
anaerobia. Si el crecimiento es lento la incubacin puede durar
hasta 7 das.


Rappaport, Caldo
Rappaport Broth
Cd.: 413798 Envase: 500 g
Se emplea para el enriquecimiento selectivo de Salmonella a
excepcin de S. typhi en muestras clnicas, aguas y productos
alimenticios en general.
FUNDAMENTO
Por la elevada concentracin de Magnesio Cloruro y la presencia
de Verde de Malaquita se consigue frenar el crecimiento de los
microorganismos que forman parte de la flora intestinal,
mientras que la mayora de Salmonellas no ven afectado su
desarrollo; generalmente S. typhi y las Shigellas son inhibidas
por el Verde de Malaquita. El pH cido del medio refuerza su
accin selectiva.
FORMULA (POR LITRO)

o Extracto de Levadura... 1.6gr
o Magnesio Cloruro ... 30gr
o Potasio di-Hidrgeno Fosfato0.78gr
o Sodio Cloruro 7gr
o di- Sodio Hidrgeno Fosfato ... 0.26gr
o Tripticasena 4.3gr
o Verde de Malaquita ... 0.1gr
PREPARACION
Disolver 44 g en 1 l de agua destilada. Distribuir y esterilizar a
115C durante 15 minutos. No sobrecalentar. El medio
conservado en la nevera puede presentar precipitados, ello no
influye en sus caractersticas selectivas.

Modo de empleo
Sembrar en el menor tiempo posible, ya sea a partir de heces
lquidas directamente o bien de una suspensin, aadiendo 0.1
ml de inculo en un tubo con 5 ml de Caldo Rappaport. Si se
supone que el nmero de Salmonellas es bajo, aumentar la
cantidad de muestra a enriquecer. Agitar e incubar a 35-37C de
18 a 24 horas. Despus del enriquecimiento sembrar sobre una
placa de medio selectivo.

Rappaport-Vassiliadis (RVS), Caldo

Rappaport-Vassiliadis (RVS) Broth
Cd.: 414959 Envase: 500 g
Caldo de enriquecimiento para Salmonella, con excepcin S.
typhi en alimentos y otros materiales.
FUNDAMENTO
El Verde de Malaquita y el Cloruro de Magnesio inhiben el
crecimiento de la flora intestinal normal. En este medio respecto
al Caldo Rappaport se han reducido las concentraciones de los
mencionados inhibidores, consiguiendo un mejor crecimiento de
Salmonella a una temperatura de 42C. La peptona de Soja es
el aporte nutritivo y los fosfatos mantienen el pH del medio.
FORMULA (POR LITRO)

o Peptona de soja ... 4.5gr
o Potasio di-Hidrgeno Fosfato ... 1.26gr
o di-Potasio Hidrgeno Fosfato ... 0.18gr
o Magnesio Cloruro (anhidro) ... 13.58gr
o Sodio Cloruro 7.20gr
o Verde de Malaquita ... 0.036gr
PREPARACION
Disolver 26.75 g en 1 L de agua destilada. Agitar hasta
disolucin y esterilizar en autoclave 115 C durante 15 minutos.

MODO DE EMPLEO
La siembra se hace con material procedente directamente de la
muestra o de un pre-enriquecimiento en Agua de Peptona
Tamponada. Habitualmente se siembra 0.1 ml de muestra en 10
ml de Caldo. Se incuba 24 horas a 42C 1C y se resiembra en
medios selectivos.

Salmonella y Shigella, Agar

Salmonella Shigella Agar
Cd.: 413805 Envase: 500 g
Se emplea para el aislamiento de Salmonella y Shigella a partir
de muestras de productos alimenticios u otros que pudieran
contener estos grmenes. Se trata de un medio altamente
selectivo.
FUNDAMENTO
Por la presencia de las sales biliares, verde brillante y citra- to
se consigue la inhibicin de las bacterias Gram-positivas. Por el
mismo citrato conjuntamente con el tiosulfato se frena
notablemente el desarrollo de Coliformes y Proteus que podran
acabar cubriendo todo el cultivo. Las bacterias que no
fermentan la lactosa dan colonias incoloras, mientras que las
que la fermentan hacen virar el rojo neutro por la produccin de
cido y quedan claramente diferenciadas. Tambin se
diferencian los microorganismos productores de Hidrgeno
Sulfuro que da un precipitado negro de Hierro(II) Sulfuro, que se
observa en el centro de la colonia. La peptona y el extracto de
carne son aportes nutritivos suficientes para estas especies
patgenas, aunque algunas Shigellas muy exigentes se
desarrollen lentamente.
FORMULA (POR LITRO)

o Extracto de Carne5gr
o Hierro(III) Citrato1gr
o Lactosa ... 10gr
o Peptona...5gr
o Sales Biliares ...8.5gr
o Rojo Neutro0.025gr
o tri-Sodio Citrato ...8.5gr
o Sodio Tiosulfato...8.5gr

o Verde Brillante0.330gr
o Agar ...13.5gr
PREPARACION
hasta ebullicin y hervir durante 1 minuto. No esterilizar en
autoclave. Dejar enfriar hasta 45-50C y distribuir en placas
de Petri estriles, empleando 20 ml por placa. Dejar solidificar
el medio.
MODO DE EMPLEO
Sembrar abundantemente por estra en la superficie del
medio. Incubar a 37C de 24 a 48 horas.

Sangre, Base de Agar

Blood Agar Base
Cd.: 413806 Envase: 500 g
Se emplea, aadiendo sangre o sangre cocida, para el cultivo
y aislamiento de microorganismos exigentes, sobre todo
patgenos y para su determinacin. Si no se aade sangre, es
adecuado como base para la preparacin de otros medios
especiales.
FUNDAMENTO
Dada la excelente base nutritiva, permite el crecimiento de
prcticamente todos los microorganismos que pudieran estar
presentes. Si se aade sangre se pueden determinar las
distintas formas de hemlisis que pudieran tener lugar. Si se
calienta se obtiene el Agar Chocolate, tambin muy
empleado. Por la adicin de distintos antibiticos se obtienen
medios con caracteres selectivos.
FORMULA (POR LITRO)

o Infusin del MsculoCardaco (a partir de 375 g)... 10gr
o Peptona de Carne 10gr
o Agar 15gr
PREPARACION
Suspender 40g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar
durante 30 minutos (para cantidades de ms de 1 litro).
Homogeneizar y distribuir en tubos de ensayo y esterilizar a
121C durante 15 minutos.

Para preparar placas de Agar Sangre incorporar 5 a 8% de

Sangre desfibrinada antes de distribuir en placas.
Para una mejor conservacin de la placa de Agar Sangre y
para obtener halos hemolticos ms claros ajustar el pH a 6,8
0,2.
Si se utiliza como medio basal se obtendrn mejores
crecimientos a pH 7,3 0.2.
MODO DE EMPLEO
Sembrar las placas en la superficie del medio. Incubar a 37C
de 24 a 48 horas

Urea, Base de Agar

Urea Agar Base
Cd.: 413821 Envase: 500 g
Se emplea para la diferenciacin de bacilos entricos. Est
indicado para detectar aquellas bacterias capaces de producir
ureasa.
FUNDAMENTO
Este medio es menos tamponado que el Caldo Urea adems
tiene componentes nutritivos y energticos, lo que permite un
crecimiento ms diversificado de microorganismos y una
deteccin ms amplia de ureasa positivos.
A su vez el Sodio Cloruro aporta la salinidad necesaria para el
buen desarrollo de los microorganismos. En el proceso de
degradacin de la urea se produce amonaco, ste hace variar
el color del indicador Rojo de Fenol (de amarillo a rojo)
ponindose as de manifiesto la actividad ureasa.
FORMULA (POR LITRO)

o Urea... 20gr
o D(+)-Glucosa1gr
o Potasio di-Hidrgeno Fosfato ... 2gr
o Rojo de Fenol ... 0.012gr
o Sodio Cloruro 5gr
PREPARACION
Disolver 29 g en 100 ml de agua destilada. Esterilizar por
filtracin. Disolver 15 g de Agar Bacteriolgico en 900 ml de
agua destilada. Esterilizar la solucin del agar a 121C
durante 15 minutos, dejar enfriar hasta 50C y aadir los 100

ml de medio urea, estril. Mezclar bien y distribuir

aspticamente en tubos de ensayo estriles. Dejar endurecer
el medio en posicin inclinada pero con fondos de unos 2 cm
de profundidad. A pH 6,8-7.0 el medio debe tener un color
amarillo rosado dbil. No refundir el medio.
MODO DE EMPLEO
Sembrar en toda la columna del medio Incubar a 37C de 18 a
24 horas.

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Tindalizacin: Exposicin a 100C durante 30 minutos. Con

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Bilis-Verde Brillante, Agar

FORMULA (POR LITRO)

ANDREA MELISSA SANTANA CANTO 12

ANDREA MELISSA SANTANA CANTO

ANDREA MELISSA SANTANA CANTO 13

ANDREA MELISSA SANTANA CANTO

Brucella, Base de Agar

FORMULA (POR LITRO)

ANDREA MELISSA SANTANA CANTO 14

ANDREA MELISSA SANTANA CANTO

Calcio Caseinato, Agar

FORMULA (POR LITRO)

ANDREA MELISSA SANTANA CANTO 15

ANDREA MELISSA SANTANA CANTO

ANDREA MELISSA SANTANA CANTO 16

ANDREA MELISSA SANTANA CANTO

Cerebro Corazn (BHI), Infusin

Cerebro Corazn (BHI), Agar

FORMULA (POR LITRO) DE CEREBRO CORAZON (BHI),

ANDREA MELISSA SANTANA CANTO 17

ANDREA MELISSA SANTANA CANTO

FORMULA (POR LITRO) DE CEREBRO CORAZON (BHI), AGAR

ANDREA MELISSA SANTANA CANTO 18

ANDREA MELISSA SANTANA CANTO

Incubar a 37oC de 24 a 72 horas.

ANDREA MELISSA SANTANA CANTO 19

ANDREA MELISSA SANTANA CANTO