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Posteriormente, Rudolph Virchow (1821-1902) amplio la Teora Celular y afirm: " Todas las
clulas proceden de otra preexistente" . Por lo tanto, las clulas no surgen por generacin
espontnea a partir de materia inanimada.
Otra importante conclusin de la Teora Celular afirma que todas las clulas actuales,
tienen un origen comn. La evidencia ms importante, sobre el origen comn de todas las
formas celulares, radica en las similitudes bsicas de sus estructuras y principalmente de
su composicin molecular.
Las clulas procariontes poseen una caracterstica nica, una pared de peptidoglicanos, un
gran polmero de glcidos y aminocidos.
MEMBRANA PLASMTICA
SISTEMA DE ENDOMEMBRANAS
ORGANELAS
Fig. 1.7- Esquemas de una clula vegetal (izquierda) y tridimencional de un cloroplasto con
sus componentes (derecha)
- Las infecciones crnicas, donde de una persona enferma siempre es posible obtener virus
infeccioso, aun por periodos muy prolongados de tiempo. Por ejemplo, virus de la hepatitis
B, Epstein-Barr, virus de la rubola.
Organelas pequeas,
macromolculas grandes.
Angstrom 10-10 m Microscopia electrnica.
Mtodos de difraccin de
rayos X. Molculas y tomos.
Las tcnicas aislamiento y separacin especfica de clulas, organelas y
macromolculas y el preparado de cultivos celulares para el estudio detallado son
herramientas invalorables para el avance de la biologa celular y molecular.
El microscopio ptico nunca puede resolver detalles menores a 0,2mm, la medida de una
pequea bacteria. Esta resolucin es limitada por la longitud de onda de la luz visible usada
para iluminar la muestra. Los microscopios pticos o de luz pueden aumentar efectivamente
alrededor de 1000 a 1500 veces el tamao de la muestra real; si se incrementase el
aumento la imagen proyectada sera borrosa. La mayora de las mejoras en microscopia de
luz del comienzo de este siglo ha involucrado nuevos mtodos para aumentar el contraste.
Sin estas tcnicas sera imposible para el ojo humano el conocimiento del mundo celular.
La mayora de las organelas son demasiado pequeas para ser visualizadas por la
microscopia de luz. La Biologa Celular avanz rpidamente hace un poco ms de cincuenta
aos con la introduccin del microscopio electrnico. En lugar de luz visible, el microscopio
electrnico utiliz un haz de electrones [2] a travs de la muestra. El poder de resolucin
est inversamente relacionado con la longitud de onda (l) de la radiacin que un microscopio
usa y un haz de electrones tiene longitudes de onda mucho ms cortas que la luz visible.
Para mayores precisiones al respecto, consulte el cuadro 1.4
A su vez,
AN = n . seno a
La mayora de los microscopios electrnicos modernos pueden lograr una resolucin de 0,2
nm, unas 1000 veces mejor que la obtenida con el microscopio ptico.
Los bilogos usan el trmino ultraestructura celular para referirse a la anatoma celular
cuando se resuelve por un microscopio electrnico.
El ME revela muchas organelas que son imposibles de resolver con MO. Pero el MO ofrece
muchas ventajas especialmente para el estudio de la clula viva. Una desventaja de ME es
que los mtodos qumicos y fsicos usados para preparar la muestra, no slo matan a las
clulas sino que puedan introducir artefactos, estructuras peculiares vistas en micrografas
que no existe en una clula viva.
En la tabla 1.9 se comparan los pasos a seguir en ambos tipos de microscopia para la
preparacin de la muestra:
Tabla 1.12 -Tcnicas para Preparar una Muestra en Microscopia ptica y
Electrnica
Paso Microscopia ptica Microscopia Electrnica
OBTENCIN: Se hace
cuidadosamente con
instrumental adecuado.
FIJACIN: se destina a Pueden usarse Se realiza con
impedir la autodegradacin fijadores qumicos paraformaldehido, con
enzimtica (autlisis)de las (formol, etanol, tetrxido de osmio o,
clulas tratando de evitar, metanol o mezclas ltimamente, con
en lo posible, la alteracin fijadoras). Tambin glutaraldehido, en
de las estructuras se utilizan mtodos soluciones acuosas de pH
originales y su fsicos como la neutro y concentracin
autodigestin. desecacin, el calor salina semejante al
seco, el fro o la medio. Luego se lava la
congelacin. pieza y se post-fija con
tetrxido de osmio
durante una hora; el
osmio se une a
estructuras
lipoproteicas
(membranas celulares)
ofreciendo mayor
contraste en la imagen.
Esto se conoce
como coloracin o
contrastado.
DESHIDRATACIN: retira Pasajes sucesivos por Baos con alcohol o
el agua de las piezasalcoholes de acetona.
fijadas, para que luegoconcentracin
puedan ser incluidas en uncreciente.
elemento que es insolubles
en solventes acuosos.
ACLARACIN Se realiza para No requiere
eliminar de la muestra
restos de alcohol y
toda sustancia
hidrosoluble. Se
impregna la muestra
con un solvente no
acuoso, orgnico y
soluble en parafina,
como xileno, tolueno o
benceno.
INCLUSIN Se incluye el material Se utilizan resinas
en parafina o celoidina sintticas tipo epoxi que
previamente luego de secarse se
calentada, la que al transforman en un
solidificarse sirve de material muy duro, apto
sostn de la muestra para que se le efecten
y posibilita su corte. cortes extremadamente
Se forma eltaco. delgados.
CORTE Es lo suficientemente Debe obtenerse un corte
delgado como para ser de la muestra tal que el
atravesado por la luz. haz de electrones logre
Esto se logra atravesarla.
utilizando Elultramicrtomo realiza
elmicrtomo con el cortes de 20 a 100 nm
que se realiza cortes de espesor con cuchillas
uniformes del tejido a de vidrio o diamante.
un dado espesor.
REHIDRATACIN Se retira la parafina
con xilol y se lava con
alcoholes de
concentracin
creciente. Al ser los
colorantes solubles en
agua resulta
indispensable
rehidratar
COLORACIN Las clulas y los
tejidos son coloreados
para lograr mayores
contrastes facilitando
la observacin. La
coloracin de
hematoxilina-eosina
es una de las ms
comnmente
utilizadas. Tie el
ncleo de azul y el
citoplasma de rosa.
MONTAJE El corte se monta Estas muestras se
sobre un montan en pequeas
El corte se coloca sobreportaobjetos. El grillas de cobre
ciertas clases decubreobjetos puede
estructuras. colocarse por encima
para proteger el
preparado. Este puede
conservarse durante
dcadas si el
cubreobjetos se sella.
CONTRASTADO La pieza se impregna en
acetato de uranilo,
citrato de plomo u otras
sustancias.
Las diferencias ms notables de los principales componentes del MO y del ME y sus
caractersticas singulares se especifican en la siguiente tabla.
El microscopio de luz polarizada puede proveer datos sobre la estructura a nivel molecular
de las clulas y los tejidos no slo en las clulas vivas sino en preparados post-mortem.
Ciertos componentes celulares y tisulares se comportan peculiarmente cuando la luz
polarizada (luz que gira nicamente en un plano) los atraviesa.
El objetivo del fraccionamiento celular es disgregar las clulas separando las organelas
principales de modo que, sus funciones individuales puedan ser estudiadas. El instrumento
usado para fraccionar las clulas es la centrfuga capaz de girar a diversas velocidades. La
ms poderosa, llamada ultracentrfuga puede dar vueltas tan rpidamente como 80000
revoluciones por minuto (RPM) y aplicar fuerzas sobre las partculas de 500000 veces
mayores que la fuerza de la gravedad (500000g).
Fig. 1.19- Esquema del Proceso de Fraccionamiento Celular
Este instrumento posee un tubo muy delgado por donde se hacen pasar a las clulas una
tras otra. Un determinado tipo celular emitir fluorescencia, previo tratamiento
con fluorocromo (pigmento fluorescente). Esto permite la discriminacin y, por lo tanto, la
separacin de las clulas as tratadas de acuerdo a la fluorescencia que emitan.
LAS CLULAS VIVAS PUEDEN SER ESTUDIADAS MEDIANTE EL CULTIVO CELULAR
Con el objetivo de preservar toda la informacin que sea posible sobre todos los tipos
celulares, se han desarrollado tcnicas de disociacin de las clulas.
A nivel molecular, los organismos estn formados por relativamente pocos tipos de
compuestos. El agua constituye alrededor del 70% de la mayora de los seres vivos. De los
dems compuestos, los principales son los glcidos, los lpidos, las protenas y
los nucletidos, muchos de ellos combinados para formar los cidos nucleicos, cido
ribonucleicos (ARN) y cido desoxirribonucleico(ADN). Aunque hay muchos otros
compuestos presentes, estas cuatro categoras constituyen la mayora de las molculas
orgnicas de los seres vivos y son los actores de los procesos metablicos. Por lo tanto, su
localizacin y funcin dentro de la clula como un estudio ms detallado fuera de ella se
hace necesario.
DIFRACCIN DE RAYOS X
Este mtodo consiste en el bombardeo de la molcula por un delgado haz de rayos X y
provoca la dispersin (difraccin) de la radiacin a travs de los electrones de los tomos
de la muestra. Este haz disperso debe alcanzar una placa fotogrfica. La estructura
molecular tridimensional se deduce de las posiciones y las intensidades de las manchas
registradas en la placa fotogrfica.
Los compuestos qumicos se identifican "in situ" por medio de mtodos citoqumicos.
Cuando los vertebrados superiores, los animales e incluso el hombre, son expuestos a la
actividad de los microorganismos o a molculas ajenas a sus ultraestructuras, ya sea
naturalmente o por inyeccin, aquellos sintetizan anticuerpos. Estos son protenas que
pueden fijarse selectivamente a los materiales extraos que desencadenaron su sntesis.
Por lo tanto, el organismo produce tantos anticuerpos como partculas extraas (antgenos)
son reconocidas. As, se puede obtener una gran variedad de anticuerpos.
CUESTIONARIO DE AUTOEVALUCIN
1. Cul de los siguientes organoides no forman parte del Sistema de Endomembranas?:
a. envoltura nuclear
b. cloroplasto
c. aparato de Golgi
d. retculo endoplasmtico
a. la divisin celular
b. la respiracin celular
c. la fotosntesis
d. la sntesis de protenas
a. cloroplasto
b. pared celular
c. mitocondria
d. centrolos.
a. mitocondria
b. ribosoma
c. cloroplasto
d. retculo endoplasmtico
8. Si Ud. tuviera que argumentar acerca de que los virus son organismos vivos, qu
caractersticas estructurales y funcionales del virus podra utilizar para apoyar su
argumentacin?
9. Qu tipo de clulas pensara Ud. que alcanzaran el mayor tamao: una clula muy
aplanada o una esfrica? Por qu?
10. Por qu casi todas las clulas casi siempre son microscpicas?
11. Cules son las propiedades fundamentales que comparten todas las clulas? Describa
la importancia de cada una de ellas.
14. Enumere los pasos de la infeccin viral, y describa brevemente cada paso.
15. Utilizando el Sistema Mtrico Decimal resuelva las equivalencias en metros de: a) 1 nm;
b) 1 mm.
20. Explique qu tcnicas utilizara para crear suficiente contraste cuando se usa el M.O. y
el M.E.
22. Cules son las ventajas de estudiar las clulas con el M.E.T. y el M.E.B.?
27. Cuando una clula de forma esfrica crece, los mm2 de superficie de la membrana
plasmtica por mm3 del volumen celular:
a. decrece
b. aumenta
c. se mantiene constante
d. se vuelve ms delgada
a. citometra de flujo
b. b) microscopia electrnica
c. fraccionamiento celular
d. difraccin de rayos
30. Las muestras de clulas vivas o preparados fijados se pueden estudiar indistintamente
con:
a. microscopia electrnica
b. microscopia de interferencia
d. difraccin de rayos X.