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Captulo I
1.1. Introduccin
La cebolla es de las hortalizas ms cultivadas en el Ecuador, cuya produccin est
valorada en ms de 1 000 millones de dlares anuales. En trminos de produccin y
consumo nacional, o como producto de exportacin, Allium sepa es un producto
importante (Yumbay, 2011).
El cultivo de cebolla es afectado por algunas plagas y enfermedades que comprometen la
calidad del bulbo, afectando su comercializacin; una de ella es la pudricin caf o botritis
producida por el hongo fitopatgeno Botrytis cinerea, el mismo que produce una
disminucin en la productividad de un 5 a 10%. A este mismo se lo controla eficazmente
con fungicidas qumicos (Quinche, 2009).
La aplicacin de microrganismos para controlar plagas llega con la necesidad de producir
alimentos libres de elementos qumicos o txicos para la salud. De esta manera el gnero
de microrganismos Micorrizas sp. Tiene resultados favorables en control biolgico de
ciertos patgenos como Fusarium, Phytophthora etc. igualmente en nematodos y
bacterias (Carreon et al., 2008).
Sin embargo, la mayora de estos estudios han sido realizados bajo condiciones ex vitro,
en invernadero o campo. Hasta el momento no se han realizado estudios de la respuesta
de la cebolla (Allium cepa) al control biolgico de fitopatgenos in vitro (Quinche, 2009).
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1.2.Formulacin del problema
La cebolla (Allium cepa) es un cultivo que se presenta dentro de las operaciones agrcolas
de pequea y gran escala en tiempo real, pues hay gran nmero de variedades con distinta
adaptacin a los diferentes medios en donde son producidas. La superficie total plantada
de cebolla en el mundo asciende a ms de 2 millones de hectreas, producindose 32.5
millones de toneladas anuales. Es por esto que a la cebolla se le da un extenso cuidado
durante su desarrollo ya que esta es vulnerable a varias enfermedades, entre ellas est la
ms comn que es la Botrytis o pudricin caf producida por el hongo llamado Botrytis
cinerea (Herbario virtual, 2013).
Las enfermedades causadas por Botrytis cinerea quiz sean las ms comunes y ms
ampliamente distribuidas de hortalizas, plantas ornamentales, frutales, etc. Las cuales
aparecen principalmente en forma de tizones de inflorescencias y pudriciones del fruto,
pero tambin como pudriciones del tubrculo, como el bulbo y races. Esta enfermedad,
es uno de los problemas ms graves de los cultivos que aqueja a pequeos, medianos y
grandes productores hoy en da. (Museo Nacional de Historia Natural, 2015)
Los productores cada ao invierten mucho dinero para controlar y evitar la enfermedad
con productos qumicos que pueden contaminar al planeta y ser perjudiciales en la salud
del hombre. Para ello se platea nuevas alternativas de control biolgico como el empleo
de micorrizas ya que estas pueden inhibir en el desarrollo de la Botrytis cinerea,
generando as un tratamiento amigable con el bolsillo y el medio ambiente (Museo
Nacional de Historia Natural, 2015).
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1.3.Justificacin
La ubicacin geogrfica del pas, es una ventaja para la produccin de cebolla. Por lo
general, esta hortaliza est presente en todas las comidas diarias de los ecuatorianos.
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1.4.Objetivos
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1.5. Fundamento Terico
I) Botrytis cinrea
El moho gris (Botrytis cinerea) y sus cepas causan la necrosis de las flores, las hojas, las
yemas, los brotes, las plntulas y las frutas de las plantas. Tanto las plantas herbceas
como las leosas son susceptibles a esta enfermedad. Esta enfermedad no tiene
hospederos especficos. El moho gris puede infectar a cientos o miles de plantas. La
infeccin ocurre en condiciones de humedad. Cuanto ms hmeda est la planta, ms
riesgo correr de infectarse de moho gris. La cantidad de zonas infectadas ha aumentado
como as tambin la cantidad de plantas atacadas y el grado de gravedad de las infecciones
(desarrollo ms rpido de la enfermedad y necrosis del tejido). (Enriquez , 2012)
El botritis a veces se confunde con los daos que se manifiestan cuando las plantas
envejecen o con el dao que causan los trips. Revise los ptalos atentamente para
diferenciar la marchitez causada por el envejecimiento de la que causa la enfermedad. La
marchitez causada por el envejecimiento debe ocurrir primero en los ptalos externos y
en los bordes o en la punta. Cuando los ptalos internos o el centro de los ptalos
desarrollan lesiones marrones primero, la causa probablemente sea el moho gris. En las
hojas delgadas como las del rbol de Judea, las lesiones son irregulares de color marrn
claro a marrn. En las hojas ms carnosas como las del rododendro se ven anillos
concntricos de distintos tonos del marrn. (Enriquez , 2012)
Los sntomas varan segn el tipo de planta atacada, la parte de la planta atacada y las
condiciones de crecimiento. Cuando hay mucha humedad se puede ver un entretejido fino
gris (micelio). Generalmente, en ese tejido se forma una estructura denominada
conidiforo que contiene esporas. Las plantas infectadas liberan las esporas de la
enfermedad en forma de nubes cuando por alguna razn se mueven. La humedad tambin
acelera la liberacin de las esporas. La mala circulacin de aire tambin contribuye a la
supervivencia y al desarrollo de la enfermedad. Cuando la temperatura oscila entre los 68
y 76 F y la humedad es elevada, la enfermedad demora aproximadamente 20 horas para
comenzar a infectar. El clima clido a muy caluroso y seco contribuye a reducir o detener
el desarrollo y la diseminacin de la enfermedad. (Gonzlez, 2006)
Imagen1: Micrografa electrnica de una cepa de Botrytis cinrea. Imagen obtenida de Google imgenes
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II) Micorrizas
La palabra micorriza, de origen griego, define la simbiosis entre un hongo (mycos) y
las races (rhizos) de una planta. Como en muchas relaciones simbiticas, ambos
participantes obtienen beneficios. En este caso la planta recibe del hongo principalmente
nutrientes minerales y agua, y el hongo obtiene de la planta hidratos de carbono
y vitaminas que l por s mismo es incapaz de sintetizar mientras que ella lo puede hacer
gracias a la fotosntesis y otras reacciones internas. Se estima que entre el 90 y el 95% de
las plantas terrestres presentan micorrizas de forma habitual. (Carren, Gmez, &
Martnez, 2008)
La asociacin simbitica se establece entre las races de plantas leosas de las
familias Pinaceae, Fagaceae, Nothofagaceae, Myrtaceae y Dipterocarpaceae, las hifas de
hongos de los filos Glomeromycota, Basidiomycota y Ascomycota. Al inicio de la
colonizacin el hongo forma un manto constituido de hifas fngicas que rodean el pice
de la raz; luego otras hifas penetran el espacio intercelular entre las clulas radiculares,
formando lo que se conoce como la red de Hartig. Es aqu en la red de Hartig donde se
lleva a cabo el intercambio de nutrientes, minerales y agua: el hongo absorbe agua y
minerales que luego transloca hacia la planta y en retorno la planta le provee azcares y
otros productos de la fotosntesis al hongo. Dentro de varios de los efectos positivos que
le brindan los hongos ectomicorrcicos a su hospedero, el ms importante se le atribuye
al micelio extra radical que aumenta la cantidad de toma de minerales disueltos. (Herbario
virtual, 2013)
La movilizacin de nutrientes se puede dar por una va enzimtica que le permite al hongo
utilizar nitrgeno orgnico y fsforo, o por la liberacin de cidos orgnicos
movilizando calcio, magnesio y potasio, entre otros. Las hifas excretan
principalmente cido oxlico que ayuda a desgastar las superficies rocosas; adems el
dimetro que presenta el pice de una hifa comparado con el pice de una raz, le confiere
una gran ventaja a la planta pues le permite explorar sustratos a los cuales no podra
alcanzar sin la asociacin con su hongo ectomicorrcico. (Perez , 2011)
Es posible que un hongo forme micorrizas con ms de una planta a la vez, establecindose
de este modo una conexin entre plantas distintas; esto facilita la existencia de
plantas parsitas (algunas de las cuales ni siquiera realizan la fotosntesis, como las
del gnero Monotropa), que extraen todo lo que necesitan del hongo micobionte y las
otras plantas con las que ste tambin establece simbiosis. As mismo, varios hongos (en
ocasiones de especies diferentes) pueden micorrizar una misma planta al mismo tiempo.
(S.N, 2015)
Imagen2: imagen de una asociacin simbitica entre un hongo y la raz de una planta de papa. Imagen obtenida de http://agriculturers.com
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III) Cebolla (Allium cepa)
Es una planta herbcea bienal perteneciente a la familia de las amarilidceas. Es la
especie ms ampliamente cultivada del gnero Allium, el cual contiene varias especies
ms que se denominan cebollas y que se cultivan como alimento. Ejemplos de las
mismas son la cebolla de verdeo (Allium fistulosum), la cebolla escalonia (Allium
ascalonicum) y la cebolla de hoja o ciboulette (Allium schoenoprasum). (Vera, 2009)
La cebolla es el bulbo subterrneo y comestible que crece en la planta del mismo nombre.
Se trata de una hortaliza de origen asitico cultivada desde 6.000 a.C. Desde Asia se
extendi por Europa, de donde pas a Amrica. Actualmente existe una amplia gama de
variedades, que pueden clasificarse en funcin del color del bulbo, forma, tamao, usos,
origen y precocidad. Tiene muchos usos culinarios, pudiendo usarse de distintas maneras,
ya sea cruda o cocinada. Adems, se le conocen distintas propiedades medicinales. (Perez
, 2011)
Imagen3. Imagen de una Cebolla (Allium cepa) comn obtenida de Google imgenes.
1.6. Hiptesis
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El control biolgico de Botritis cinerea en el cultivo de cebolla (Allium cepa)
utilizando micorrizas, genera un mtodo ms sustentable para tratamiento de la
enfermedad en la planta, dejando de lado el uso de agroqumicos.
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Bibliografa
Carren, Y., Gmez, N., & Martnez, M. (2008). Las micorrizas arbusculares en la proteccin
vegetal. Morelia-Michoacn-Mxico.
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Captulo II
2. Materiales y mtodos
2.2. Materiales
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Autoclave Botrytis cinrea PDA (Agar papa
dextrosa)
Cmara de flujo laminar Trichoderma spp.
Cajas petri Micorriza sp.
Parafilm
Incubadora
Mechero
Asa de inoculacin
Matraz graduado
Balanza
2.3. Mtodos
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Se coloc nuestro cultivo a la incubadora de laboratorio, la cual se encontro a 23 C,
procurando que la tapa de la caja Petri est boca abajo para proporcionar una adecuada
humedad al medio de cultivo.
2.3.4. Cultivo del hongo benfico:
Se encendi el mechero para proceder con el cultivo de la muestra.
Se desinfecto y flameo el asa de inoculacin.
Con el asa de inoculacin estril se tom una pequea muestra de un medio de cultivo
adulto de Trichoderma viridae, recordando que todo este proceso se debe realizar detrs
de la llama del mechero de Bunsen para evitar que el cultivo se contamine.
Se coloc la muestra de Trichoderma viridae en el medio de cultivo de agar papa
dextrosa.
Se procedi a flamear los bordes de la caja Petri.
Luego se sell la caja Petri con papel para film.
Se llev a nuestro cultivo a la incubadora de laboratorio, la cual se encontraba a 23 C,
procurando que la tapa de la caja Petri est boca abajo para proporcionar una adecuada
humedad al medio de cultivo.
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Caja Petri 2: Colocar en un extremo de la caja Petri 2 un disco de 5 mm de diametro, del
medio de cultivo que contenia el antagonista (Botrytis cinrea) y en el otro extremo de la
caja un disco del medio que contena el biocontrolador (Micorriza sp.)
Captulo III
3. Resultados
- En el antagonismo entre Botrytis cinrea y Micorriza spp. se observ que el hongo
predominante es Botrytis cinrea con un amplio crecimiento en casi toda la caja
Petri dejando a la micorriza sin espacio para desarrollarse y crecer se aproxima un
crecimiento de 2 y 0,5 cm por da respectivamente.
- En la caja Petri con Thricoderma spp. y Botrytis cinrea ubicados en los extremos
de estas se logr observar que la Trichoderma spp. se desarroll de manera ms
amplia de manera que la Botrytis spp. tuvo que de manera inmediata inhibir su
crecimiento se aproxima un crecimiento de 2 cm y 1cm por da respectivamente.
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dejndolo en un lugar sumamente aislado a la micorriza impidiendo totalmente
desarrollo de este, se aproximan medidas de crecimiento de 3cm y 3mm diarios
respectivamente.
- Finalmente se coloc en una caja Petri los tres hongos netamente como prueba
de observacin y el resultado obtenido fue predominio de Trichoderma sp.
aislando a los otros dos hongos.
Captulo IV
4. Discusin
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- Por otra parte queda demostrado la eficacia de Trichoderma spp. como bio
controlador de plagas como el caso de Botrytis cinrea que afecta a varios
tipos de cultivos y en caso de esta investigacin, en cultivo de rosas, el mismos
que pudre los tallos y petalos de la flor.
Captulo V
1.1. Conclusiones
2.- Al aislar Micorriza spp. en una caja Petri se identific colonias helicoidales de color
blanco brillante- cristalino creciendo a medida de 1cm diario con gran cantidad de esporas
(observadas en microscopio) y con hifas largas y abundantes.
3.- Trichoderma sp. aislada en caja Petri present un color verde-gris-cenizo con una
apariencia similar a arena con grumos gruesos y un tanto brillantes con pequeos crculos
(colonias) de dimetro y altura considerable los cuales son observables a simple vista,
este hongo tuvo un crecimiento de 1.5 2 cm diarios.
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4.- Se observ que al aislar el hongo Botrytis cinrea este present un color verde fuerte
con pequeas colonias en toda la caja Petri y gran cantidad de esporas; se consider un
desarrollo de 0.5 a 0.8 cm por da.
Captulo VI
6.1. Recomendaciones
- Los estudios realizados son exclusivamente pruebas in vitro, las mismas que
pueden tener otros resultados en campo variando en los efectos que pudimos
obtener.
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- Realizar un seguimiento de cultivos de rosas y de su incidencia en la
contaminacin con Botrytis cinrea, y determinar causas o patrones de su
aparicin.
Bibliografa
Carren, Y., Gmez, N., & Martnez, M. (2008). Las micorrizas arbusculares en la proteccin
vegetal. Morelia-Michoacn-Mxico.
Cobos, G. M. (2010). EVALUACIN DE CEPAS NATIVAS DE Trichoderma spp. PARA EL
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MUOZ, S.,
1998. El
enemigo
oculto Botrytis
cinerea pers.
Colombia.
Editorial.
Acopaflor. 18-
19 pp.
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Antagonismo Figura N.2 Antagonismo Botrytis
spp. y Botrytis cinerea y Micorriza spp.
erea
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