ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGA

Aislamiento de Bacterifagos
ASIGNATURA :

Virologa

DOCENTE :

Dra. Graciela Albino Cornejo.

ALUMNO :

Rmulo Aycachi Inga.

CICLO :

2007 - I

Lambayeque, Agosto del 2007.

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 PRCTICA N 02: Aislamiento de
Bacterifagos
I. Introduccin :
Bacterifago, tambin llamado virus bacteriano o, abreviadamente, fago,
virus capaz de infectar las bacterias. Los bacterifagos estn presentes en los
desechos humanos, en el suelo y en las aguas residuales. Fueron descubiertos en
1915 por el investigador ingls Frederick W. Twort, y tambin de forma
independiente, por el cientfico franco-canadiense Flix H. D'Hrelle en 1917. La
mayor parte de los virus bacterianos que se han estudiado infectan principalmente
bacterias como Escherichia coli o Salmonella typhimurium, aunque se conocen
virus que infectan tanto eubacterias como arqueobacterias. El material gentico de
este tipo de virus puede ser tanto ARN como ADN. Unos cuantos poseen una
envoltura de lpidos, pero la mayora carecen de ella. Muchos bacterifagos
presentan estructuras complejas con cabeza y cola. En este ltimo caso la
infeccin de la bacteria se produce por la penetracin del cido nucleico, ya que la
cabeza y la cola se quedan en la superficie de la bacteria, y las partculas vricas
se forman en el interior de sta hasta producir el estallido o lisis de la misma.
Al infectar un virus o una bacteria ocurre lo siguiente : adsorcin del virus y
penetracin en las clulas, dilucin o lisis de la bacteria con liberacin del virus.
Esta fase de lisis se pone de manifiesto por el aclaramiento de los cultivos
bacterianos en medios lquidos o por la formacin de calvas o placas en cultivos
en medios slidos. Esta lisis se puede inhibir por medio de sueros
antibacterifago.
Los bacterifagos han servido para estudiar muchos conceptos bsicos en
virologa que luego se aplicaron a virus de organismos superiores. En la dcada
de 1960, las investigaciones pioneras de los sistemas husped-parsito en los
fagos fueron dirigidas por los fisilogos estadounidenses Max Delbrck, Alfred
Hershey y Salvador Luria, gracias a las cuales compartieron el Premio Nobel de
Fisiologa y Medicina en 1969. En 1980, estas investigaciones permitieron conocer
el modo de penetracin de los fagos en el interior de las bacterias, as como la
existencia de recombinacin gentica entre virus o el fenmeno de restriccin-
modificacin de las clulas bacterianas para hacer frente a la infeccin. En
general, supusieron un apoyo importante a la hiptesis de que el ADN constitua el
material gentico de los seres vivos.
Al estudiar las propiedades fsicas y qumicas as es necesario preparar un
gran lote del mismo purificado, libre de material celular (husped) y esto se
considera como el medio del aislamiento de fagos.
Los bacterifagos se emplean actualmente como vectores de clonacin en el
campo de la ingeniera gentica y su estudio tiene implicaciones importantes en la
medicina y la gentica, en concreto en la comprensin de las infecciones virales,
defectos genticos, problemas de desarrollo, causas del cncer y la resistencia de
las bacterias a los antibiticos.

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II. Objetivo:
Aislar virus bacterianos utilizando tcnicas adecuadas.

III. Materiales:

Material Biolgico:
Cepa bacteriana (Escherichia coli o Pseudomona sp.), para nuestro grupo
se utiliz E.coli.
Agua residual o servida (en nuestro caso se uso aguas residuales del Dren
de Pimentel).

Material de Laboratorio:
Medio de cultivo: Caldo Doble Concentrado
Caldo triptosa
Caldo Triptosa o Caldo Nutritivo.
Agar triptosa
Filtro de porcelana.
Frascos y botellas estriles.
Viales, placas, pipetas, papel filtro, tubo para centrifugar, anzas
bacteriolgicas (en anillo y en punta).
Centrfuga refrigerada.
Estufa
Bomba de vaco
Matraz

IV. Procedimiento:
En una botella estril colocamos 50 ml. de caldo doble concentrado
(CDC).

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 Luego, sembramos la cepa problema en el CDC (1 azada si la cepa
est en medio lquido o 4 colonias si est en placa). En este caso,
sembr E. coli de cepa pura (vial).
Incubamos por 4 a 5 horas en el caso de E. coli.
Luego, agregagamos el agua servida a la botella (previamente se lo
pasa por papel filtro), 50 ml.
Luego, incubar a 37C por 18 a 24 horas.
Pasado el tiempo, volvemos a filtrar en papel filtro, para luego
centrifugar ese filtrado a 1500 rpm por 5 a 10 min., de esta manera
libramos a la muestra de macroimpurezas.
Luego el sobrenadante lo filtramos con el filtro bacteriolgico de
porcelana (aqu se usa el un matraz estril y la bomba de vaco).
Luego, el filtrado obtenido, de manera asptica, lo pasamos a viales
(estriles), luego taponamos y lo guardamos en refrigeracin.

Comprobacin de fagos:
En una placa con agar triptosa sembramos con hisopo la cepa
problema (en este caso E. coli), luego incubamos de (4 a 6 horas).
Pasado el tiempo, con el asa aadimos 1 gota de filtrado sobre la
placa.
Por ltimo, incubamos a 37C por 18 a 24 horas (observar la
formacin de calvas o placas).

V. Resultados:

- En el caso del grupo de la segunda mesa, primer turno, no se logr aislar

de las muestras los bacterifagos necesarios para la prctica.
- En la prctica, nuestro grupo repiti los procedimientos por cuatro
oportunidades (las dos ltimas en el tiempo que dur la huelga de
profesores universitarios), no obtenindose ningn resultado.

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 - Se trat aguas residuales del dren de Pimentel, dren de Santa Rosa, dren
Ferreafe y posa de oxidacin de Nuevo Mocce (Lambayeque).
- Aunque se contaba con cepas de E. coli de muestras clnicas y cepas
aisladas de las mismas aguas residuales, se obtuvo resultados negativos
para la obtencin de fagos.
- Pueden haber muchas explicaciones para los resultados obtenidos, por
ejemplo, que las cepas obtenidas (cepas problema) no hayan sido
especficas para los fagos a aislar, que las aguas hayan sido pobres en
concentracin de fagos, fallas de manejo y desarrollo de la prctica,
problemas de filtracin, medios de cultivo mal formulados, falta de tiempo
de incubacin de las cepas, tiempo de reserva de la muestra de agua
residual (en algunos casos 24h en refrigeracin) y otros.

VI. Referencias:

ACTON, J. (1967) Virologa. Edit. Interamericana. Mexico D.F.

MADIGAN, M. y J. PARKER (1997) Brock Microbiologa de los
Microorganismos. 8 Edic. Edit. Mc Graw Hill. Mexico D.F.
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