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Mara Adelina Jimnez Arellanes, Nallely Rosalba Romn Corts, Ignacio Garca
Actividad antioxidante y antimicrobiana del extracto hexnico y compuestos puros del rizoma de Aristolochia
taliscana
Revista Mexicana de Ciencias Farmacuticas, vol. 42, nm. 3, julio-septiembre, 2011, pp. 35-41,
Asociacin Farmacutica Mexicana, A.C.
Mxico
www.redalyc.org
Proyecto acadmico sin fines de lucro, desarrollado bajo la iniciativa de acceso abierto
DE: FARMACUTICAS
Trabajo Cientifico
Resumen
Aristolochia taliscana es una especie medicinal conocida como guaco. Por fraccionamiento quimico del extracto hexanico se
aisl6 ()-Iicarina A y B, eupomatenoide 1 y 7, los cuales fueron identificados por comparaci6n de sus datos espectrosc6picos
y espectrometricos. La actividad antioxidante y el contenido de polifenoles se determin6 por el metoda ABTS y con reactivo
de Folin-Ciocalteau, respectivamente. La actividad antibacteriana se realiz6 por el metoda de diluci6n contra Escherichia coli,
Pseudomona f1uorescens y Listeria monocytogenes. La ()-Iicarina A, el eupomatenoide 7 y el extracto hexanico presentaron
significativa actividad antioxidante; la ()-Iicarina A y el eupomatenoide 7 resultaron positivos en la prueba de polifenoles.
EI extracto hex~nico y el eupomatenoide inhibieron el crecimiento de las bacterias, con CMI=0.5 mg/mL y 0.7 mg/mL,
respectivamente.
Abstract
Aristo/ochia taliscana is a medicinal species known as guaco. By chemical fractionation from the hexanic extract, ()-licarin A and
B, and eupomatenoid 1 and 7 were isolated. These compounds were identified by comparing spectroscopic and spectrometric
data with those described in the literature. Antioxidant activity and polyphenols were determined by ABTS method and Folin-
Ciocalteu reactive, respectively. Antibacterial activity was performed by broth dilution against Escherichia coli, Pseudomona
f1uorescens, and Lysteria monocytogenes. ()-Licarin A, eupomatenoid 7, and the hexanic extract exhibited significant antioxidant
activity; ()-Iicarin A and eupomatenoid 7 were positive in polyphenols test. The hexanic extract and eupomatenoid 7 inhibited
the growth of all bacteria strains, showing an MIC = 0.5 Land 0.7 mg/mL, respectively.
Palabras clave: Aristolochia taliscana, ()-Iicarina A y Keywords: Aristalochia taliscana, ()-Iicarin A and B,
B, eupomatenoide 1 y 7, antioxidante, antimicrobiano. eupomatenoid 1 and 7, antioxidant, antimicrobial.
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DE: FARMACUTICAS
Preparacion del =acto y obtencion de compuestos: el extracto empleado fue etanol y las referencias fueron: kido gilico (0-0.5
se preparo via maceracion con n-Hexano RA a partir 2.068 kg mM), acido ascorbico (0-2.5 mM), y quercetina (0-1.3 mM).
de rizoma seco y moUdo, a temperatura ambiente. Mediante Los resultados son cl promedio de tres determinaciones y se
este proceso se obtuvieron 24.55 g de =acto crudo, el cual fue reportan como AAO equivalente a cada referencia y fueron cal-
sometido a fraccionamiento quimico por CC- FN siguiendo la culados con la siguiente formula:
metodologfa descrita por Leon y Leon-Diaz.4,5
(A-b)
fueron incubadas 24 h a 38T. Finalmente, se tomaron las lec-
turas de absorbancia de cada muestra a 420 nm. Los controles
__ [_] mg de referencia
_m
C g de muestra positivos fueron estreptomicina y gentamicina (5 mg/mL). EI
blanco fue el medio con la muestra a evaluar sin bacterias. Los
A '" absorbancia despues de agrcgar la muestra 0 referencia resultados se reportan como CMI, a la cualla muestra inhibe
m '" pendiente de la curva patr6n de la referencia* totalmente el crecimiento de microorganismos y las determina-
b =ordenada at origen de la curva patr6n de la referencia*
ciones se reallzaron por triplicado.
C concentraci6n de la muestra problema (gIL)
Acido asc6rbico, a.cido galico y catecol
Resultados y discusi6n
c) Determinacion de la actividad antioxidante (AAO) por el
mOtodo ABTS: en este casu se empleo la t&:nica descrita por Obtention e identificacion de los compuestos: se obtuvieron
Re y col22, en la cual se genera el radical cation ABTS" que 24.55 g de =acto hex:inico crudo (rendimiento del 1.2%).
se obtiene tras la reaccion de ABTS (7 mM) con persulfato de Por fraccionamiento quimico primario se obtuvieron 8.6 mg de
potasio (2.45 mM, concentracion final), esta mezcla se incuba ()-licarfna A (p. 107-110C), 771.6 mg de ()-licarina B (p.
a temperatura ambiente durante 16 h. antes de emplearse y es 82-86C) Y1030 mg de eupomatenoide 7 (p. 100-104C). Los
estable por 48 h. aproximadamente. EI radical es dilnido con datos de los espectros de RMN-'H y RMN-13C de cada com-
etanol hasta obtener una absorbancia de 0.7 0.1 a 734 nm a puesto estan en concordancia con los descritos previamente.3,5
30"C. Posteriormente, se toma 1 mL del radical ABTS y se De manera adicional se obtuvieron 1003 mg de eupomatenoide
Ie adiciona 10 flL de las muestras preparadas en el inciso a. La 1, este compuesto, no se habia aislado en cl trabajo previo reallzado
mezcla se agito e incubO a 30"C, finalmente la absorbancia se por Le6n-Diaz5, poro se habia reportado en la especie vegetal.2,3
determino al minuto uno y al minuto 7 de reaccion. EI blanco En la Figura 1 se muestra el perfil en CLAR de la mezcla de
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Vo1umen 42 Nfunero 3 Julio - Septiembrc 2011
()-Iicarina A, B Ydel eupamatenoide 7; 1a ()-Iicarina A pre- las condiciones analIti.cas para. determinar ()-licarina A en
sent6 un T ll. 10.09 min, e1 eupomatenoide 7 present6 un T R. plasmaZ4 par 10 que los datos descritos en este trabajo servirtn
de 13.7 min y la ()-Iicarina B present6 un T R. 14.6 min. Las para. detectar y/o identificar 1a presencia de los compuestos en
condiciones analiti.cas empleadas para detectar estos compuestos mezcla mas complejas.
presentan buena reso1ud.6n, cabe seiiab.r que solo se ha descrito
'"0
14.59
'.00
licarina B
'"
;/
"
'.80
~
'.60
'" 0
'" ;/
'AO
~
'" OR .
,.20
'.00
eupomatenoide 7
~
0
{)
1.80
licarinaB
1.60 ;/
!;l
lAO '" cc~
1.20 '" 0
~ OR
1.00
13.67
0.80 eupomaten . 7
lkarinaA
0.60
OAO 10.00
licarinaA
0.20
0.00
E1 eupomatenoide 1 (1.0 g) Ie obtuvo como po1vo color crema Los datos en e1 espectro de RMN_IH fueron muy similares al
soluble en CHC~, con l\ de 0.7 en el sistema de CHC~:Hex del eupomatenoide 7 (Tabla 1) con 1a diferencia que el eupo-
(H) y ,on p.E de 154-155'C (158-159'C, 157-158'C) "', Y matenoide 1 presenta un gropo meti1endioxi entre los carbonos
present6 un T a de 13.7 min (Figura 2) al emplear un sistema 2'y 3', la sefia! para. este gropo aparece en 66.00, sefial que esta
isocritico de acetonitrilo:acido f6rmico 98:2. Dada 1a similitud ausente en el case del eupamatenoide 7 ya que en esta misma
estroctural de este compuesto con el eupomatenoide 7, en el posicion tiene un gropo metoxilo e hidroxilo (Tabla 1). En el es-
anaJi.si.s por CLAR ambos presentaron el mismo T R al emplear pectro de masa del eupomatenoide 1 Ie observa un pico base de
como sistema de eluci6n MeOH 100%, por 10 que fue nece- 322 que concuerda con el peso molecula:r (p.m.) reportado para.
sarlo utilizar un sistema de eluci6n difeImte para. detectarlo. este compuesto2>3 y presenta 2 unidades menos que el eupo-
La identificaci6n quimica de este Ultimo compuesto se reallz6 matenoide 7 (p.m. 324).2-5
por analisis de sus datos espectrosc6picos y espectromCtricos.
U.O
~
3.00
'00
Lq 0,
:1"&0
13.069
1.00 eapoma~l
000
:;1.00 4.00 6.00 8.00 10.00 11.00 14.Oll 16.00 18.00 20.00 22.00 24.00 26.00
minutos
Figura2
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DE: FARMACUTICA
Tabla 1. Datos de RMN-'H y 13Cparael CMl=0.7 mg/mL. La ()-licarina A, B y el eupomatenoide 7
eupomatenoide 1 y 7 aislados del rizoma deA. taJisclI1Ja resultaron inactivos presentando una CMl >1 mg/mL. Es im-
portante senalar que 1a actividad antibacteriana para A. talis-
Proton Eupomatenoide Carbona Eupomatenoide cana y para algunos compuestos puros no ha sido descrita, pem
7 1 7 1 existen algunos trabajos donde se describe esta actividad para
2 - .. 2 151.48 151.14 otras especies de Amtolothiel-6-2s y para compuestos semejantes,
3 -- 3 110.19 110.3 como el eupomatenoide 3, 5 y 6,29,30 por 10 que los resultados
4 7.03 n!03 3. 133.05 133.0 obtenidos de 1a evaluaci6n antibaeteriana aqui descritos consti-
aH-l.5) .....,..1.5)
6 6.82 n.6.82 4 109.16 109.2 toyen una contribuci6n sobre el potencial biol6gico de 1a especie
a~.1.5) H=1.5)
y de los compuestos puros. Cabe senalar que solo se ha descrito
2' 7.01 7.1 5 133.61 133.6
a1'--5,=2.0) 02'-5'=2) la actividad antimicrobiana para la ()-licarina A, el enal result6
5' 7.25 7.32 7.25-7.32 6 104.42 104.4 inactivo contra Staphylococcus aureus, S. epidermidis, P. aerugi-
a5"-4,=8.2) 05'-4'=8.2)
nosa, E. coli, Candida tropicalis, C. glabrata, C. dubliniensis (CMl
6' 6.98 6.98 7 177.82 177.8
a5'~'=0.6
"8:~) J 1"
05,-,,8.2,12'-
.=0.6)
7' 142.09 142.1 > 0.1 mg/mL), al ser evaluados por el metodo de microdiluci6n
a 6.49 6.5 l' 123.67 123.7 en medio." En este trabajo se encontrO que la ()-licarina A
P 6.15-6.27 6.15-6.27 2' 109.43 109.4 fue inactivo contra E. coli y E aeruginosa 10 que concuerda con 10
Y 1.90 191 3' 146.58 147.4 descrito previarnente por Barros."
CH, 2.40 2.4 4' 109.43 147.9
OCH. 3.97 4.03 5' 114.44 114.4
OCB. 4.03 3.89 6' 120.62 120.6 Cuantificaci6n de polifenoles totales: los estandares empleados
OCRO 6.0 Co 131.46 131.4 fueron acido galico, acido asc6rbico y catecol; en 1a Tabla 2 se
OH 5.75 5.62 C, 124.36 124.4
- muestra el contenido de polifenoles del extracto hex:inico de A.
C, 18.41 18.4
- CH. 9.57 .69 taliscana y de los compuestos puros. En el caso de las referencias
- OCH,O 101.2 empleadas se observa que fueron los compuestos puros los que
- OCH, 56.05 56.2 presentaron mayor contenido de PT que el extracto hex:inico.
Los acoplamientos csri.n dados en Hz,J~ =15.87 Hz,J..., ..1.7 Hz and],., ..6.5 Hz. Ademas encontrarnos que la ()-licarina A es el que presenta
mayor contenido de PT, Ie sigue el eupomatenoide 7 y el me-
Actividad antimicrobiana: el extraeto hex:inico fue el que re- nos activo fue el extracto hex:inico. La ()-licarina B yeupo-
sult6 mas activo presentando una CMl=0.5 mg/mL contra matenoide 1 resultaron inactivos.
las tres cepas de baeterias y el eupomatenoide 1 present6 una
Tabla 2. Contenido de polifenoles totales (PT) y actividad antioxidante (AAO) del extracto y de los
compuestos pums aislados de A. talisCIl1Ja.
Extraeto 104.9 6.5 160.5.9.75 1.63.0 33.9 1 140.3 4 109.2 56.6 0.2 265 1 192.3 0.9
4.5
lic B 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0
334.4 509.4 155.3 634.8 589.9 151.2 706.6 521.2
eup 7 24.1 36.1 162.6 11.2
7.4 30 33.4 12.8 58.6 53.7
1227.7 1859.6 411 348.8 143.4 670.1
licA 45.2 67.7 588.3 21.1 99.9 3.6 16.1 2.3 10.4 496.8 9.5
14.4
eup 10 .00 .00 .00 .00 .00 .00 .00 .00 .0
*mg de referencialg de muestra. AAEAG: Actividad antioxidante equivalente a acido gaIico; AAEAA: Actividad antioxidante
equivalente a :icido asc6rbico, AAEC: Actividad antioxidante equival.ente a catcco~ AAEQ;, actividad antioxidante equival.ente a
quercetina. Los wlores son presentados como promedio D.E,0=3.
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Actividad antioxidante: el ensayo de ABTS mide la capacidad tion and NMR spectral characterization of eupomatenoid
de compuestos para atrapar el radical ABTS. En la Tabla 2 derivatives.] Nat Prod.1984; 47(5):896-899.
se describen los resultados obtenidos y estan expresados como 4. Le6n DR. Potencial antimicobacteriano de dos especies me-
actividad antioxidante eqnivalente ala referencia (acido gilico, dicinales del generoAristolochia. Tesis de Maestria. Facultad
acido asc6rbico 0 quercetina), como se observa s610 e1 eupo- de Ciencias, UNAM. 2005. Mexico, D.F.
matenoide 7 y la ()-licarina A fueron los m:ls activos en ambos 5. Le6n-Dlaz R, Meckes FM, Said-Fernandez S, Molina-
puntos de la determinaci6n (minuto 1 y 7 de la reacci6n), el Salinas GM, Vargas-Villareal], Torres ], Luna-Herrera],
extracto hex:inico result6 poco activo. Cabe sefialar que tanto ]imenez-Arellanes A. Antimycobacterial neoliguans iso-
el eupomatenoide 7 como la ()-licarina A presentan en su es- lated from Aristolochia taliscana. Mem Inst Oswaldo Cruz.
tructura grupos fen6licos; a los cuales se les atribuye el efecto 2010; 105(1):45-5l.
AO. Estli bien establecido que a mayor contenido de grupos 6. Gangoue-Pieboji], Eze N, Djintchui AN, Ngameni B,
fen6licos existe mayor AAO,20 efecto que se observ6 para la Tsabang N, Peguyemb DE, Biyiti L, Ngassam P, Kou1la-
()-licarina A y eupomatenoide 7, en cambio la ()-licarina B Shiro S, Galleni M. The in-vitro antimicrobial activity of
y eupomatenoide 1 no presentan grupo fen6lico por 10 que el some traditionally used medicinal plants against beta-Iac-
valor de PT fue de cero y por 10 tanto no presentaron AAO. A la tam-resistant bacteria.] Infect Dcv Ctries. 2009; 3(9):671-
fecho, no se habla descrito el efecto AO para la especie vegetal, 680.
ni para los compuestos puros, solo se ha descrito que la ()-lica- 7. Falagas ME, Koletsi PI<, Bliziotis A. The diversity ofdefini-
rina A preserva la actividad de la super6xido dismutasa (SOD) tions of multidrug-resistant (MDR) and pandrug-resistant
en celulas dafiadas con glutamato; en este caso el compuesto (PDR) Acinetobacter baumanii and Pseudomona aeruginosa. ]
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("0,-) e inhibe la sobreproducci6n de 6xido nltrico y del radi- 8. Sagar I<, VidyasagarGM.Antimicrobial activityofu-(l-hy-
cal peroxinitrilo32. Este mismo compuesto present6 una signifi- droxy-2-methylpropyl)- ()) -(2-hidroxy-3-methylbut-2-en-
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