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ACTIVIDAD PRCTICA N 2
PREPARACION DE MUESTRAS PARA EL ANALISIS MICROBIOLOGICO.
PREPARACION DE MEDIO DE CULTIVO

2.1.- OBJETIVOS:
Preparar muestras de alimentos (slidas y lquidas) para el anlisis
Microbiolgico, basado en la Norma COVENIN 1126-89
Clasificar los medios de cultivo segn su origen, estado fsico y
aplicaciones.
Preparar medios de cultivos (slidos y lquidos) de mayor uso en el
laboratorio.

2.2.- MATERIALES Y REACTIVOS:

Materiales: Tubos de ensayos, pipetas, matraces, beakers, placas de petri,
tubos de fermentacin, Cilindros graduados, mecheros, esptulas, pizetas,
tomamuestras, botellas de dilucin, cuchillos, propipetas
Equipos: Autoclave, estufas, balanzas, cocina, horno, refrigeradores.
Reactivos: Peptona, Caldo nutritivo, Agar nutritivo, otros.

2.3. - INTRODUCCIN
El laboratorio de microbiologa es un espacio destinado para realizar
anlisis que permitan determinar la calidad microbiologa del alimento, para
ello es necesario preparar las muestras de una manera adecuada para
garantizar que los resultados a obtener sean valederos, confiables y
reproducibles. Una de las condiciones ms importantes que debe ser
considerada es la ASEPCIA para as evitar contaminaciones que ocasionen
interferencias en el estudio.

Para la preparacin de la muestra debe seguirse de manera general el

siguiente procedimiento:
a.- Identificacin de la muestra: Aqu se debe tomar nota acerca de
las condiciones en que se recibe la muestra entre ellas: Temperatura, aspecto
externo del envase, aspecto externo del producto (si puede ser observado).
Tambin se debe considerar como conservar la muestra previa su anlisis, de
no ser evaluada de inmediato. Al realizar el anlisis debe tomarse nota del
aspecto general de la muestra: color, olor, consistencia, textura, evite
evaluar el sabor.

b.- Preparacin de la muestra: Este paso depende del estado fsico

en que se encuentre la muestra a analizar, la cual puede ser slida o lquida.
En ambos casos lo que se requiere es obtener una porcin representativa que
permita obtener resultados confiables.

c.- Homogeneizacin y preparacin de las diluciones: Consiste en

preparar las diferentes diluciones que permitirn realizar la respectiva

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siembra. La muestra se trata con una cantidad determinada del diluyente

(agua peptonada) y se homogeneiza mezclando 25 veces en un ngulo 45.
Una vez lista la muestra la siembra debe realizarse en los 20 minutos
siguientes

En el anlisis Microbiolgico se desea determinar la cantidad de

microorganismos presentes en una muestra de determinado alimento. En la
prctica microbiolgica se emplean medios de cultivo para el aislamiento,
conservacin de cultivos puros y para la identificacin de especies, de
acuerdo a sus propiedades fisiolgicas.
Un medio de Cultivo es cualquier material, sustancia o mezcla de
sustancia que permita el crecimiento de uno o varios microorganismos. Se
debe recordar que para crecer los microorganismos deben obtener del medio
ambiente todas las sustancias que ellos requieren para la sntesis de sus
materiales celulares y para la produccin de energa. Un medio debe
contener cantidades apropiadas de requerimientos especficos de los
microorganismos para los cuales han sido diseados. Los microorganismos
son extraordinariamente diversos en sus propiedades fisiolgicas especficas
y como consecuencia en sus requerimientos nutricionales especficos.

Existe una gran variedad de medios de cultivo, los cuales se clasifican

en :
A.- Atendiendo a su origen:
A.1.- Medios Naturales:
A.2.- Medio Artificial o Sinttico:

B.- Atendiendo a su estado fsico:

B.1.- Slidos
B.2.- Semi Slidos
B.3.- Lquidos

C.- Desde el punto de vista de su aplicacin o de su utilidad:

C.1.- Medios Corrientes
C.2.- Medios Enriquecidos
C.3.-Medios Selectivos
C.4.- Medios Diferenciales

En el laboratorio Microbiolgico los medios de cultivo pueden

prepararse utilizando individualmente los ingredientes que intervienen en su
composicin los medios deshidratados, tales como Difco,B.B.L, Merck,etc.

En la composicin de los medios deshidratados ya viene

integrados todos los ingredientes y la cantidad a utilizar por unidad de
volumen (gr/L) se encuentra especificada en las indicaciones. Este ltimo

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procedimiento es el ms utilizado actualmente en los laboratorios de

Microbiologa, como agente diluyente se utiliza agua destilada.

Antes de la actividad prctica investigue:

Caractersticas de los medios de cultivo segn la clasificacin indicada
en la introduccin de la prctica.
Indique ejemplos de medios de cultivo segn la clasificacin antes
mencionada y su utilidad en el anlisis microbiolgico.
Leer Obligatoriamente: Norma COVENIN 1126. (deben traerla el da de
la actividad). Pueden acceder a dicha norma en la web, en la siguiente
direccin: www.sencamer.gov.ve

2.4 DESARROLLO EXPERIMENTAL

2.4.1.- TRABAJO PRACTICO N1. PREPARACIN DE UNA MUESTRA DE

ALIMENTOS PARA EL ANLISIS MICROBIOLOGICO
1.-Homogenizar la muestra y mezclar 25 veces en un ngulo de 45
2.-Medir 10g o mL de la muestra y transferir a un frasco de dilucin con 90
mL de agua peptonada al 0.1%, agitar 25 veces (1era dilucin 10-1)
3.- A partir de la primera dilucin, repetir el procedimiento del paso 2 hasta
obtener 5 diluciones.
4.-Utilizar una pipeta diferente para cada dilucin.
5.- La siembra debe realizarse durante los 20 min. siguientes de la
preparacin de las diluciones.
Frasco de Frasco de
Muestra Dilucin Dilucin
homogenizadada (90 mL diluyente) (90 mL diluyente)

10ml de dilucin. 10-1

10ml

Dilucin 10-1 Dilucin

10-2

Figura N 1 Preparacin de diluciones para el anlisis de una muestra de

alimentos

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2.4.2.- TRABAJO PRACTICO N2. PREPARACIN DE MEDIOS DE

CULTIVO.
1.- Clasifique los medios presentados por su profesor segn la clasificacin
mostrada en la introduccin.
2.-Prepare los medios que indique su profesor siguiendo las instrucciones del
fabricante.
3.-Utilize agua destilada como diluyente.
4.- Repartir en fiolas o en tubos, segn sea el caso, y esterilizar en autoclave
a 15 lb de presin a 121C por 15 minutos.

Tabla 1: Clasificacin y Preparacin de Medios de Cultivo

MEDIO DE CULTIVO CLASIFICACION PREPARACION

BIBLIOGRAFA

ICMSF, Microorganismos de los Alimentos ecologa microbiana de los

productos, editorial Acribia, Zaragoza - Espaa
Garca Rojas, Carmen Elena, Anlisis Microbiolgico de los Alimentos,
editorial Ciencia 3 S.A
F.S Thatcher y D.S Clark, Anlisis Microbiolgico de los Alimentos,
editorial Acribia, Zaragoza - Espaa

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