UNIVERSIDAD DE TAPARAC

FACULTAD DE CIENCIAS
DEPARTAMENTO DE BIOLOGA
Prof. Sergio Alfaro Burgos

LABORATORIO N3 DE BIOLOGIA HUMANA

EL MICROSCOPIO PTICO

El microscopio es un instrumento de precisin. Aparentemente nos da la idea de ser indestructible,

pero en realidad es muy delicado y debe tratarse con cuidado.
El microscopio es un instrumento ptico que se utiliza para el estudio detallado de objetos que por su
tamao son invisibles o confusos, formando de ellos imgenes aumentadas, virtuales e invertidas.

El Microscopio Compuesto consta de los siguientes sistemas:

1.-- Mecnico o Esttico.
2. Sistema de Iluminacin.
3. Sistema ptico.

Una vez leda esta gua, observa el correcto uso del Microscopio en el siguiente link:
http://www.youtube.com/watch?v=AtjJuqFHL8o

Microscopio ptico Compuesto

saab
ocular

columna
revolver
objetivos
Carro de Vernier
macromtrico
platina
micromtrico condensador

Base o pie Fuente de luz

1. Sistema Mecnico:

Es la armazn metlica que sostiene a los Sistemas de Iluminacin y ptico, dndole la posicin adecuada
y permitiendo los movimientos necesarios para la correcta coordinacin entre ambos. Esta formado por:

a. Asa o pie: Es la base de sustentacin del Microscopio cuya forma vara segn el modelo del
Microscopio. El que utilizamos en el laboratorio presenta una forma rectangular que proporciona mayor
estabilidad. En el pie va incorporado una lmpara de iluminacin y un espejo.

b. Columna: Es el pilar que sostiene al tubo, platina , condensador y sobre el cual estn montados los
tornillos focalizadores: macromtricos y micromtricos.

c. Platina: Es una plataforma horizontal central que permite el paso de los rayos luminosos, sobre ella
se coloca el portaobjeto con el material a observar. Posee dos pinzas destinadas a sujetar la preparacin y
sistemas de tornillos, el carro que permite desplazarlas con movimientos verticales y horizontales y que
generalmente est graduado con un Vernier.

d. Tubo o Can: Es una cmara oscura unida a la columna mediante una cremallera. Tiene el revlver
con los objetivos en su parte inferior y los oculares en el extremo superior.
e. Revlver: Es un mecanismo situado en el extremo inferior del tubo que por simple rotacin moviliza
los diferentes objetivos del Microscopio. En el revlver los objetivos estn construidos de manera tal que
estando en foco uno de ellos, todos los dems quedan en foco al rotar el revlver. Esto se conoce con el
nombre de sistema parafocal.

f. Tornillos Focalizadores: El desplazamiento perpendicular del tubo respecto de la platina se realiza

mediante dos tornillos: macromtricos y micromtricos. El primero se utiliza para el enfoque aproximado y
el segundo de movimientos lentos, est destinado al enfoque de precisin, adems se emplea para
determinar el espesor del objeto.

2. Sistema de Iluminacin
 2
Se encuentra bajo la platina y consta de:
a. Fuente de Iluminacin: Se trata de una lmpara de intensidad graduable. Est situada en el pie del
microscopio. Se enciende y se apaga con un interruptor.
b. Condensador y Diafragma-Iris: Es un sistema de lentes situado bajo la platina su funcin es la de
concentrar la luz generada por la fuente de iluminacin hacia la preparacin. En la parte inferior del
condensador existe un diafragma-iris cuya funcin es limitar el haz de rayos que atraviesa el sistema de
lentes eliminando los rayos demasiado desviados (regula la cantidad de luz y ajusta la Apertura Numrica).
En este microscopio el diafragma-iris se puede ajustar para que coincida con la apertura numrica efectiva
de cada objetivo.
c. Anillo Portafiltro: Es el lugar donde se coloca un filtro, generalmente de color azul, para
obtener una luz homognea y parecida a la luz natural. En algunos modelos de microscopio el filtro est
incorporado a la lmpara o bajo el Diafragma-Iris.

3. Sistema ptico:

Est montado en el tubo y formado por dos sistemas de lentes convergentes centradas: Ocular y Objetivos.
a. Oculares: Estn colocados en la parte superior del tubo. Se denominan as, porque estn muy cercanos
al ojo. Su funcin es la de captar y ampliar la imagen formada en los objetivos. El microscopio que vamos
a utilizar presenta dos oculares (microscopios binoculares) que estn unidos mediante un mecanismo
que permite ajustar la distancia interpupilar. En general los ms utilizados son los de 10X (producen un
aumento de 10 veces).
b. Objetivos: Estn colocados en la parte inferior del tubo insertados en una pieza metlica, denominada
revolver, que permite cambiarlos fcilmente. Los objetivos son de 4, 10, 40, y 100 aumentos. En la
superficie de cada objetivo se indican sus caractersticas principales, aumento, apertura numrica, y llevan
un anillo coloreado que indica el aumento (rojo 4X, amarillo 10X, azul 40X y blanco 100X). Existen dos tipos
de objetivos: los objetivos a seco y los objetivos a inmersin. Los objetivos a seco son aquellos en los que
entre la lente y la preparacin existe una capa de aire (4x, 10x y 40x). Los objetivos a inmersin son
aquellos en los cuales se interpone entre la lente y la preparacin un lquido (aceite de cedro) el cual tiene
un ndice de refraccin que es semejante al del cristal.

Los objetivos se pueden clasificar:

Objetivos en seco Cuando entre la preparacin y el objetivo media aire. En estos se pierden muchos rayos
debido a la refraccin de la luz en el medio aire-vidrio (4x, 10x, 40x)
Objetivo de Inmersin Cuando entre la preparacin y el objetivo media una sustancia de ndice de
refraccin similar al del vidrio, permitiendo que los rayos luminosos no se desven de su trayectoria
determinando una imagen ms ntida y de mejor contraste (100x).

CUALIDADES DE UN OBJETIVO.

DISTANCIA FOCAL n.a AUMENTO TOTAL CAMPO DE VISION

OCULAR - OBJETIVO

16 mm 0,20 100x 1.500 u

4 mm 0,65 400x 350 u

2 mm 1,20 1000x 150 u

PROPIEDADES DEL MICROSCOPIO

1. Poder de aumento: El Microscopio Compuesto, posee un sistema ptico capaz de agrandar la imagen
y el aumento total es igual al aumento que da el ocular multiplicado por el aumento del objetivo.
2. Poder de Resolucin: Es la capacidad del Microscopio de dar imgenes ntidas de dos puntos situados
muy prximos entre s. Dos puntos luminosos pueden dar imgenes separadas, siempre que entre ellos
exista una distancia mnima (r) llamada lmite de resolucin. Si esta distancia es menor a r las imgenes
se confunden. El lmite de resolucin es inverso al Poder de Resolucin, de manera que cuando mayor es
el Poder de Resolucin, menor es el Lmite de resolucin.
3. Poder de Definicin: Es la capacidad de dar imgenes ntidas, de contornos precisos, libre de
aberraciones.
4. Poder de Penetracin: Es la capacidad de las lentes, que permite reconocer detalles de estructuras
que estn ubicadas a diferentes niveles de la preparacin. Esto nos da el grosor de lo observado.

FORMACIN DE LA IMAGEN EN EL MICROSCOPIO

 3
La imagen en un
objetivo ocular microscopio se forma
objeto por la transmisin de
los rayos provenientes
de una fuente luminosa
(observador a travs del objeto. Los
rayos luminosos
atraviesan el
diafragma, que a
manera de iris,
delimita el dimetro del
Imagen haz lumnico que
Imagen real, penetra por el
virtual, invertida y condensador. Este
invertida y aumentada ltimo, est formado
por un sistema de
aumentada lentes convergentes
que concentra y proyecta el haz lumnico sobre el objeto a examinar, a travs de la abertura de la platina.
El objetivo recoge la luz que atraves el objeto examinado y proyecta una imagen real, invertida y
aumentada (I1) que se forma dentro del tubo y que es recogida por el ocular que es la segunda lente, la
cual forma una imagen virtual, derecha y aumentada(I2) del objeto examinado. De manera, que la
imagen final que nos entrega el microscopio ser VIRTUAL, INVERTIDA Y AUMENTADA

MANIPULACIN DEL MICROSCOPIO PTICO (MO): Para trabajar correctamente con el microscopio ptico
debe seguir los pasos que se describen a continuacin:

ENCENDIDO Y PREPARACIN DEL INSTRUMENTO

1. Sacar la funda protectora y encender el microscopio (verificar que est conectado).

2. Verifique que el diafragma este abierto, que la platina este en su tope inferior y que el objetivo de
menor aumento este en posicin de enfoque.
3. Con un pao limpiar la platina y las otras partes que conforman la parte mecnica y fuente de luz. ES
PREFERIBLE NO PASAR EL PAO POR LOS LENTES DE LOS OBJETIVOS NI TOCARLOS CON LOS DEDOS.
4. Abrir los oculares segn su distancia interpupilar. Acercar la pinza hacia el cono luminoso.
5. Ajustar la luminosidad mediante la rueda reguladora que se encuentra en la base del MO

PARA LOGRAR UN CORRECTO ENFOQUE

6. Abra la pinza para colocar la preparacin (muestra a observar), luego deslice la preparacin hasta el
fondo de la pinza para asegurar una correcta posicin.
7. Centrar la muestra sobre el cono luminoso mediante los tornillos ubicados al lado derecho de la
platina.
8. Mediante el macromtrico suba la platina y haga un enfoque aproximado, y luego moviendo el
micromtrico logre el enfoque preciso.
9. Si la platina llego al tope superior y no logr enfocar DEBE REPETIR EL PASO 8 NUEVAMENTE,
para ello baje la platina completamente y suba lentamente.

PARA OBSERVAR A MAYOR AUMENTO

10. Una vez enfocado con objetivo de 4x, puede observar con mayor aumento haciendo girar el revlver
(tomndolo por la zona de la goma ranurada) al objetivo siguiente, el de 10x. La muestra quedar
prcticamente enfocada, slo deber mover el micromtrico para un enfoque ms preciso (sistema
parafocal).
11. Gire el revlver nuevamente para observar con objetivo de 40x. Utilice el micromtrico para un enfoque
preciso.
12. No olvide ajustar el diafragma-iris segn el objetivo que est utilizando.
13. Una vez finalizado el trabajo prctico, baje la platina y contine con los pasos N 24 al 34.

PARA OBSERVAR CON OBJETIVO DE INMERSIN (100x)

14. Una vez observado con objetivo de 40x debe centrar la zona de inters.
15. Baje la platina hasta su tope inferior, Girar el revlver hacia el objetivo de inmersin (100X) dejndolo
a medio camino entre ste y el de 40x
16. Agregue una gota de aceite de cedro sobre la muestra que est ubicada sobre el cono luminoso.
17. Gire el revlver para utilizar el objetivo de 100x o de inmersin
18. Use el macromtrico para acercar la muestra al objetivo de inmersin.
19. Observando por fuera, contine subiendo la platina lentamente hasta que la lente tome contacto con
la gota de aceite que aplico sobre la muestra.
20. Ajuste el Diafragma-Iris para una mejor luminosidad
21. Enfocar cuidadosamente con el micromtrico. La distancia libre de trabajo entre el objetivo de inmersin
y la preparacin es mnima. Una vez, que se ha puesto aceite de inmersin sobre la preparacin, ya
no se puede volver a usar el objetivo de 40x.
22. Una vez finalizada la observacin, se baja la platina y se elimina el aceite del objetivo con un extremo
de un pauelo limpio. Luego se humedece con alcohol-ter un extremo limpio del pauelo y se vuelve
 4
a limpiar el objetivo (mediante movimientos circulares). Se finaliza secando el objetivo con un extremo
limpio del pauelo.
23. Para finalizar el trabajo prctico contine con los pasos N 24 al 34.

PARA GUARDAR EL MICROSCOPIO (POSICIN INICIAL)

24. Colocar el objetivo de menor aumento en posicin de observacin.

25. Asegurarse que la pinza quede centrada y en el tope posterior.
26. Bajar la platina hasta el tope inferior.
27. Cerrar los oculares
28. Ajustar el diafragma-iris a la menor apertura (4x)
29. Disminuir la intensidad luminosa antes de apagar el instrumento.
30. Cerciorarse que se limpi el objetivo de inmersin.
31. Cerciorarse que el MO este a una distancia prudente del borde del mesn.
32. AVISAR AL PROFESOR O AYUDANTE PARA SU REVISIN
33. Por ltimo cubrir el MO con su funda protectora
34. Entregar las muestras o material de vidrio (previa limpieza del material)

MODELO DE REGISTRO DE OBSERVACIONES EN MICROSCOPIA

MATERIAL:

OBSERVACION:

TINCION:

AUMENTO:

DESCRIPCION:

El microscopio es uno de los instrumentos, que ha hecho posible observar, por primera vez una clula,
para posteriormente lograr establecer diferencias entre los distintos niveles de complejidad estructural y
funcional de ellas. Por lo general, las clulas se clasifican en Procarionte y Eucarionte.

LAS CLULAS PROCARIOTAS:

Los procariotas son el grupo ms antiguo de organismos sobre la Tierra, como as mismo los ms
abundantes. Pueden sobrevivir en muchos ambientes que no toleran otras formas de vida, por ejemplo en las
extensiones heladas de la Antrtida, en las oscuras profundidades del ocano y en las aguas casi hirvientes
de las fuentes termales naturales, pueden sobrevivir sin oxgeno libre, obteniendo su energa por procesos
anaerobios y si las condiciones le son desfavorables, pueden formar esporas de paredes gruesas (formas
resistentes inactivas), pudiendo permanecer latentes durante aos. El xito de los procariotas se debe a su
gran diversidad metablica y a su rpido ritmo de divisin celular.

Son unicelulares, aunque a menudo forman colonias o filamentos de clulas independientes. Son
diminutas, su tamao vara desde 0,2 a 5. Citoplasma: tiene aspecto finamente granular por la gran cantidad
de ribosomas que presenta y grnulos de almacenamiento que retienen glucgeno, lpidos o compuestos
fosfatados. Los ribosomas son ms pequeos (70S) que los ribosomas eucariotas pero su forma es igual.
Carecen completamente de organelos delimitados por membranas. Lo que ms se destaca en el
citoplasma es el cromosoma bacteriano ubicado en una zona denominada nucleoide, este cromosoma
consiste en una sola molcula de DNA circular, asociado con una pequea cantidad de RNA y protenas no
histnicas. Puede contener uno o ms plsmidos, pequeas molculas de DNA que se replican
independientemente del cromosoma bacteriano y la mayora son portadores de genes que confieren
resistencia a antibiticos.
- Utilice Internet para obtener la estructura de una bacteria (adjntela a sus apuntes).
La mayora de las clulas procariticas son hipertnicas en relacin al medio que las rodea, y presentan
rodeando a la membrana plasmtica una pared celular que evita que estallen. La resistencia de la pared se
debe a la presencia de peptidoglucano que consiste en dos tipos de azcares poco comunes unidos a
pptidos cortos. De acuerdo a sus propiedades de tincin a las bacterias con pared se las divide en dos
grandes grupos: Las Grampositivas (G+) y las Gramnegativas (G-). - Investigue cual es la diferencia entre
estos 2 grupo que les permite ser identificadas con la tincin de Gram.

LAS CLULAS EUCARIOTAS:

Las clulas eucariotas miden entre 10-100 um de dimetro, independientemente de la funcin que
realicen tienen en comn:
1) La presencia de una membrana citoplasmtica que delimita el contenido celular, del medio que la rodea.
2) Una matriz fluida (citosol) compuesta por una solucin de protenas, electrolitos y carbohidratos, en la
que est presente un sistema de endomembranas que delimitan: compartimentos (organelos) en los
 5
cuales se desarrolla el metabolismo celular y sus productos (inclusiones: lpidos, glucgeno, caroteno,
melanina y otros) y el mayor de los compartimentos, el ncleo
que contiene el material gentico, el ADN. 3) La presencia en la matriz citoplasmtica de estructuras
proteicas filamentosas (microtbulos, microfilamentos y filamentos intermedios), que constituyen el
citoesqueleto. 4) En el citoplasma, se produce, almacena y libera energa; se sintetizan protenas, lpidos y
polisacridos y se llevan a cabo otras mltiples funciones. Su organizacin, renovacin y generacin depende
de la informacin contenida en el ncleo.
El concepto compartimentacin define el hecho de que existan distintos espacios celulares, limitados
por una membrana, que realizan distintas funciones, lo cual crea en la clula una divisin del trabajo: por
ejemplo, en las mitocondrias se efecta la respiracin; en los lisosomas, la digestin celular; en el retculo
endoplasmtico, la sntesis de diversas sustancias, etc. Es por esto que podemos hablar de organelos
membranosos y organelos no membranosos. A partir de la utilizacin del microscopio electrnico (ME), cambi
totalmente la imagen estructural que se tena de la clula. Esto se debi a que en el citoplasma, se observaron
un conjunto de estructuras, algunas rodeadas de membrana, y otras no, que condujeron a la clasificacin que
actualmente tenemos de los organelos.
- Utilice Internet para obtener un esquema de la estructura de una clula eucariota (adjntela a sus
apuntes).
- Realice un cuadro comparativo de 5 aspectos que se presenten entre una clula procariota y una
eucariota.

ACTIVIDADES PRCTICAS.
OBSERVACIN DE CLULAS PROCARIOTAS:

OBSERVACIN DE CLULAS EUCARIOTAS:

1.- Unicelulares: Levaduras

- Al inicio del laboratorio, prepare un cultivo de levaduras de pan en 20 ml de solucin de glucosa.
- Aplique una gota de levadura en un portaobjeto y un gota de safranina, cubra. Observe con 400x.

2.- Clula vegetal: catfilo de cebolla

- Obtenga un trozo pequeo de tejido y extindalo con la aguja de diseccin sobre una gota de azul de
metileno. Espere 2 minutos.
- Coloque el cubreobjetos y Observe con 400x.

3.- Clula animal: mucosa bucal

- Realice un frotis de mucosa bucal sobre una gota de agua.
- Aplique sobre el frotis una gota de azul de metileno. Espere 5 minutos.
- Coloque el cubreobjetos. Elimine el exceso de colorante con papel secante. Observe y dibuje con 400x.

OBSERVACIN DE CLULAS PROCARIOTAS:

4. En la muestra de mucosa observe sobre la superficie celular unas agrupaciones de estructuras esfricas
o forma de bastn. Clasifique el tipo de bacteria y el tipo de agrupacin bacteriana segn el esquema ms
abajo descrito. Describa.

BIBLIOGRAFA:
1.- Robertis/Robertis, Biologa celular y molecular, 2002
2.- Junqueira Carneiro Biologa celular y Molecular 1999
3.- Mariano Di Fiore Atlas de Histologa Normal 1997

MATERIALES ( debe traerlo cada alumno en forma individual):

 6
1 hoja de afeitar (nueva).
1 juego de pauelos deshechables
doble hoja (sin aroma)
1 Aguja de diseccin
lpices de colores
1 lpiz mina
comps o tapita de alimentos
colados.
Pao de microfibra
Gua de trabajo

POR GRUPO DE LABORATORIO:

1 CEBOLLA
MONDADIENTES
LEVADURA

SE REALIZAR QUIZ, DEL LABORATORIO

ANTERIOR Y DE ESTE LABORATORIO.

TRAER DIBUJADO EN SU CUADERNO 4

CIRCULOS CON LOS MOTAD PARA
COMPLETAR EN CLASES. (Observar en hoja
4 de la gua el modelo de registro de
observaciones)