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TALLER BIOQUIMICA
CINETICA ENZIMATICA
CINTICA ENZIMTICA
RESPONDA:
1. Qu se entiende por velocidad mxima (Vmax) de una reaccin enzimtica?
Rta: Es la actividad mxima que alcanza una concentracin enzimtica de substrato y una enzima en
particular.
La Vmax es un parmetro cintico importante y en una grfica esta velocidad mxima es el punto alto de
una curva parablica en donde toda la reaccin se est llevando a cabo en un tiempo determinado.
Se obtiene cuando la velocidad de reaccin se hace independiente de la concentracin de substrato,
cuando esto ocurre la velocidad alcanza un valor mximo. Este valor depende de la cantidad de enzima
que tengamos.
En una reaccin catalizada por una enzima, al principio hay una determinada concentracin de substrato
en el medio de reaccin, pero conforme transcurre la reaccin, el substrato, por la accin de la enzima, va
transformndose en producto, por lo que va disminuyendo progresivamente su concentracin y, al
disminuir la concentracin de substrato tambin disminuye la velocidad de reaccin. Por esta razn, para
indicar la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas se utiliza el trmino velocidad inicial (V0) que
indica la velocidad al principio de la reaccin antes de que disminuya la concentracin de substrato
3. Calcule el valor de Km cuando v = 1/2 de V. Deduzca una definicin de Km basado en este resultado.
Rta: La constante de Michaelis (Km) nos indica la concentracin de sustrato a la cual la velocidad de
reaccin es la mitad de la velocidad mxima. La Km tambin indica la afinidad que posee la enzima por el
sustrato.
Cuanto menor sea la Km menor ser la cantidad de sustrato necesaria para alcanzar la mitad de la
velocidad mxima, por lo que mayor ser la afinidad del enzima hacia ese sustrato.
Rta: Si, porque va depender del sustrato la afinidad o compatibilidad de la enzima frente a sustrato y una
enzima puede ser ms compatible con un sustrato que con otro.
7. En qu unidades deben expresarse las variables que se han medido para la determinacin del Km de
una enzima?
Rta: Las unidades de las variables que se han medido para la determinacin de km van hacer las mismas
del sustrato. Puede ser en mM, moles, depende de cmo me den las concentraciones del sustrato.
8. Cmo debe tabular sus resultados para calcular el Km de una enzima por el mtodo de Lineaweaver-
Burk (recprocos)?
EJERCICIOS
1. Las velocidades iniciales a varias concentraciones de sustrato para una reaccin catalizada por una
enzima hipottica son:
[S] (moles) V
( M/min)
5 x10 -2 0,25
5 x10 -3 0,25
5 x10 -4 0,25
5 x10 -5 0,20
5 x10 -6 0,071
5 x10 -7 0,0096
Si miramos la tabla podemos ver, si vamos de menor (5x10-7) a mayor (5x10-2) las velocidades van
aumentando hasta que se alcanza la concentracin de 5x10-4 , en la cual por mucho que aumente la
Bioqumica ejercicios cintica enzimtica
concentracin de sustrato la velocidad es constante, es decir sigue siendo la misma. Lo que puedo deducir es
que.
Vmax = 0.25 mol/min, ya que de 5x10-4 no aumenta.
Si no se aumenta la velocidad de enzima la velocidad va hacer esta.
-4
b. Por qu la velocidad inicial permanece constante a una [S] mayor de 5x10 M
Por mucho que aumente la concentracin de sustrato la velocidad va seguir siendo la misma esto
porque, no hay enzima.
Porque todas las enzimas se encuentra transformando el sustrato.
-4
c. Cul es la concentracin de enzima libre para una [S] de 5x10 M?
Cero, todos los enzimas se encuentran ocupados transformando el sustrato en producto, a esa [S] se da
la Vmax.
d. Cul es el Km de la enzima?
-5
2. En una enzima la constante de afinidad vale 4,5 x10 M y la velocidad inicial en un punto es
-4
10mmol/L min cuando la concentracin del sustrato es de 2,8x10 M
1 y = 0.8582x + 0.3369
0.8
0.6 1/Vo
y = 0.4843x + 0.1951
1/Vi
0.4
0.2
0
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1
Sin inhibidor
Vmax = 1/b Vmax = 1/ 0.1951 Vmax = 5.13 Mm/min
Km = Vmax * m Km = 5.13 x 0.4843 Km = 2.48 Mm
Con inhibicin
Vmax = 1/b Vmax = 1/ 0.3369 Vmax = 2.97 Mm/min
Km = Vmax * m Km = 2.97 x 0.8582 Km = 2.55 Mm
Comparando
Vmax sin inhibidor > Vmax con inhibicin
Km sin inhibicin Km con inhibicin
Por lo tanto es una inhibicin no- competitiva
[] 10
Ki = sin = 5.13 = 13.75
1 1
2.97
5. En un cultivo de bacterias, la velocidad de reaccin de un enzima fue de20g/min para una concentracin
de sustrato de 3 mM. Si la concentracin de sustrato es igual o superior a 7 mM, la velocidad no supera los
40g/min. Al aadir un inhibidor competitivo, la velocidad de la reaccin fue de 20 g/min para una
concentracin de sustrato de 8 mM.
a. Calcular: la Vmax
Si Para [S] 7 Mm la velocidad es de 40 g/min entonces la Vmax = 40 g/min
Si la concentracin de sustrato es igual o superior a 7 Mm, la velocidad no va a superar los 40 g/min.
Esto significa que se ha alcanzado la Vmax desde el momento en el cual por mucho que aumentemos la
[S] la velocidad no va a variar, y como me dice que a partir de 7 mmoles de concentracin de sustrato
la velocidad sigue siendo la misma por lo tanto la Vmax es 40 g/min.
Bioqumica ejercicios cintica enzimtica
La nica manera de aumentar la velocidad mxima no va a depender de la concentracin de sustrato.
Si yo quiero aumentarla lo que tengo que hacer es aumentar la cantidad de enzimas que hay en este
proceso. Porque toda la enzima se encuentra ocupada transformando el sustrato en producto.
b. la Km
El enunciado nos dice que cuando la velocidad de reaccin de una enzima es de 20 g/min para una
concentracin de sustrato de 3 mM. Utilizando la ecuacin de Michaelis calculo la Km
VO = Vmax [S] / Km + [S]
Vo = 20 g/min
Vmax = 40 g/min
[S] = 3 mM
Despejando Km
Km = 3 Mm
c. la Ki para este enzima, sabiendo que la concentracin de inhibidor aadido es de 6mM.
Tenemos que tener en cuenta que tipo de inhibicin tengo en el problema y el enunciado me dice que es
de tipo competitivo.
Entonces lo que debemos de saber por la teora es que Vmax del proceso en presencia o ausencia de
inhibidor es la misma, lo nico que tengo que tener en cuenta es que si quiero alcanzar la Vmax en
presencia de inhibidor tengo que aumentar la concentracin de sustrato.
En los dos procesos la Vmax va hacer 40 g/min y por lo tanto la mitad de Vmax va hacer 20 g/min.
El enunciado me dice tambin que la velocidad de reaccin fue de 20 g/min para una concentracin
de sustrato de 8 mM, entonces puedo aplicar la ecuacin de Michaelis para calcular Km en Presencia
de inhibicin.
20 = 40 x 80 / Km x 8
Km = 8 mM
Y con el Km puedo calcular Ki
Km = 8 mM
[I] = 6 mM
Km = 3 Mm en ausencia de inhibidor
Km = 1 + ([I]/Ki) / Km
Ki = 3,6 m M
Enzima B
[S] Velocidad
M M/min
0.005 0.3962
0.005 0.3857
0.01 0.6163
0.01 0.6413
Bioqumica ejercicios cintica enzimtica
0.05 1.5606
0.05 1.5689
0.1 1.9862
0.1 1.7909
0.25 2.2011
0.25 2.2047
3.5
Enzima A
[S] Velocidad 3 y = 0.0005x + 0.4223
M M/min 2.5
0.0002 0.3373
0.0002 0.3364 2
0.0005 0.6945 1.5 Series1
0.0005 0.6957 Linear (Series1)
0.001 1.0764 1
0.001 1.1407 0.5
0.005 1.9636
0
0.005 1.7706
0 2000 4000 6000
0.01 2.0641
0.01 2.0751
Figura 1.
Vmax = 16 mmol/Lmin
Km = 2,5 mmol/L aproximadamente
Figura 2
Vmax = 1/0.0331 = 30,2 mmol/L min
Km = 30,2 x 0.2653 = 8,01 mmol/L