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Doenas Humanas Associadas Forma e Funo do Complexo de

Golgi

Resumo
O complexo de Golgi situa-se no corao da via secretora e responsvel pela
modificao de protenas e lipdios, bem como pela triagem de molculas recm-
sintetizadas para o seu destino correto. Como consequncia destes importantes papis,
quaisquer alteraes no seu proteoma podem afetar negativamente a sua funo e, por
sua vez, levar doena. Recentemente, foram identificadas algumas protenas que,
quando esgotadas ou mutadas, resultam em doenas que afetam vrios sistemas de
rgos. Aqui descrevemos como estas protenas foram ligadas ao complexo de Golgi, e
especificamente como elas afetam a morfologia, o trfego de membrana ou a
capacidade de glicosilao dessa organela.
Introduo
Clulas eucariticas superiores desenvolveram um sistema endomembranar altamente
compartimentado, a fim de aumentar a eficincia e a diversidade dos processos
bioqumicos que eles podem realizar. Para assegurar que o complemento correto de
protenas e lpidos necessrios para manter a homeostase celular esteja presente em cada
organela, existem vias de trfego de membrana altamente discretas que ligam as vrias
organelas limitadas membrana. A interrupo de etapas especficas do transporte entre
o retculo endoplasmtico (RE), o complexo de Golgi, o sistema endossomal-
lisossmico e a membrana plasmtica pode ter conseqncias dramticas sobre a clula
e cada vez mais defeitos na maquinaria molecular que regula o trfego de membrana
esto sendo ligados a doenas hereditrias.
Em clulas de mamferos, o complexo de Golgi tem uma arquitetura distinta, que ao
nvel ultraestrutural caracterizada por uma srie de membranas longas em forma de
fita fortemente opostas uma outra. No nvel macro, esta organela usualmente
posicionada centralmente na clula, prxima ao ncleo, e como tal considerada como
tendo uma localizao juxta-nuclear. Alm da sua localizao fsica no centro da clula,
esta organela tambm est no corao das vias de trfico que atravessam o sistema
endomembranar. No caso da via secretora, ambas recebem protenas recentemente
sintetizadas da ER e, subsequentemente, exportam estas mesmas protenas para o
sistema endossomal-lisossmico e para a superfcie celular. Durante o trnsito atravs
do complexo de Golgi modificaes chave so feitas para a maioria das protenas,
incluindo alteraes ao seu perfil de glicosilao, sulfatao, fosforilao e tambm
clivagem proteoltica. Como tal, se a homeostase de Golgi perturbada, ento isto
susceptvel de afectar a sua funo, que por sua vez pode resultar em doena. Vrias
doenas relacionadas com Golgi foram identificadas, mas nos ltimos anos tem havido
um aumento na identificao de novos genes relacionados com a doena. Aqui, focamos
nossa ateno em vrios desses genes e discutimos os principais fentipos com respeito
ao complexo de Golgi: trfico, alteraes morfolgicas, defeitos de glicosilao e,
finalmente, perda de funo dos residentes de Golgi.
Quando o trfego pra
Devido ao seu papel central na via secretora, espera-se que qualquer alterao no
proteoma do complexo de Golgi afecte a sua homeostase e, consequentemente, o fluxo
de protenas atravs dele. Nos ltimos anos, vrias doenas tm sido associadas de
vrias maneiras com o trfico no Golgi, tanto em termos de recepo de material da ER,
como tambm na direo retrgrada de reciclagem componentes de volta para o ER. No
entanto, desentrapar se o defeito de transporte antergrado ou retrgrado muitas
vezes difcil, uma vez que ambos os caminhos so altamente dependentes uns dos
outros. Um exemplo recente de uma molcula que afecta o transporte a este nvel a
protena proteolipdica 1 (PLP1), que um dos principais componentes da mielina. As
mutaes em PLP1 foram ligadas a um largo espectro de patologias hipomielinadoras
tais como a doena de Pelizaeus-Merzbacher [5]. Nesta doena, PLP1 mutante
misfolded e acumula no ER, que por sua vez inibe Golgi-a-ER trfico retrgrado. Como
conseqncia, os chaperones que abrigam um motivo KDEL e a reciclagem entre o ER
e o complexo de Golgi ficam esgotados do ER e acumulam-se no cis-Golgi, levando
assim fragmentao do complexo de Golgi [6]. Outra doena neurodegenerativa que
tambm tem em suas alteraes centrais no trfico de membrana a atrofia muscular
espinhal proximal. Em clulas normais, o gene SMN1 codifica a sobrevivncia da
protena do neurnio motor 1, envolvida na montagem de snRNP e que se mostrou se
mover ao longo do axnio neuronal em grnulos. No entanto, na atrofia muscular
espinal proximal, que resulta da perda de expresso de SMN1, observa-se um bloqueio
global da exportao de grnulos a partir da rede trans-Golgi e ocorre acumulao de
grnulos. Isto finalmente resulta em nveis diminudos de SMN1 em neurites e
correspondentes defeitos de cone de crescimento.
Outros tipos de clulas e tecidos tambm so sensveis ao bloqueio do trfico do
complexo de Golgi. Por exemplo, dischromatosis universalis hereditaria uma
desordem caracterizada pelo aparecimento de mculas assintomticas hiper e hipo-
pigmentadas na pele. Recentemente foram identificadas trs mutaes missense no gene
da subfamlia de ligao de ATP 8 membro 6 (ABCB6), que codifica uma protena
expressa na epiderme e que normalmente localizada a compartimentos tipo endossoma
e s pontas de dendrite. Todas as mutaes levaram reteno da protena no complexo
de Golgi [8], mas no est claro atualmente se isso devido a um bloqueio geral no
trfico de membrana ou se as mutaes afetam o direcionamento desta protena apenas.
Quando a forma muda
Uma conseqncia possvel de mutaes em protenas do complexo de Golgi que elas
causam mudanas grosseiras na morfologia de toda a organela e da deslocalizao da
protena, que juntas resultam em problemas funcionais, tais como o comprometimento
da glicosilao. No entanto, ainda no est claro quanto importncia da integridade
fsica deste organelo no que diz respeito s suas vrias funes. Por exemplo, as
experincias com imagens de clulas vivas demonstraram que, na presena do
nocodazole, o agente nociceptivo dos microtbulos, que tambm fragmenta o complexo
de Golgi, o trfego secretrio entre ER e o complexo de Golgi inicialmente retardado
[9], embora com tratamento prolongado com nocodazole, De ER para Golgi
restaurado [10]. Em contraste, em clulas tratadas com nocodazol, o complexo de Golgi
para o transporte de superfcie celular ainda ocorre com cintica normal [11]. No
entanto, existem exemplos em que as alteraes morfolgicas deste rgo podem ter
consequncias funcionais e a ligao doena pode ser encontrada. Num modelo
celular de doena de Parkinson em clulas PC12, verificou-se que a fragmentao de
Golgi observada dependente dos nveis de expresso de certos membros da famlia
Rab de protenas de ligao a GTP pequenas [12]. Ao nvel celular, a doena de
Parkinson est associada acumulao da protena pr-sinptica a-sinuclena e a um
bloqueio no transporte de ER-Golgi [13]. Neste novo estudo, a fragmentao foi
correlacionada com alteraes nos nveis de RAB1, RAB2, RAB8 e da protena de
fuso SNARE sintaxina-5 (STX5), mas que o fentipo poderia ser resgatado quando
RAB1 e RAB8 foram overexpressed e RAB2 e STX5 foram esgotados [ 12]. Todas
estas protenas so bem estabelecidas molculas de maquinaria de via secretria
precoce, no entanto este estudo indicou que a fragmentao de Golgi ocorreu antes da
agregao de -sinuclena e pode, de facto, promov-lo, conduzindo assim formao
dos corpos de incluso. Outras protenas Rab do complexo de Golgi esto tambm
implicadas na doena; Mutaes no RAB33B recentemente demonstraram levar a Golgi
inchao e fragmentao em Smith-McCort displasia [14]. Embora outras experincias
ainda sejam necessrias, abordagens de imagem centradas no comportamento Rab em
clulas vivas [15] so altamente susceptveis de aprofundar a nossa compreenso destas
molculas de trfego de membrana chave na doena.
Protenas que modulam a funo de membros da famlia Rab de protenas tambm tm
estado envolvidas na patognese de doenas relacionadas com Golgi. A protena Ras e
Rab interactor 2 (RIN2), um fator de troca de nucleotdeo de guanina para o regulador
de via endoctica precoce RAB5 [16], foi encontrado no corao de dois distrbios
conexos do tecido conjuntivo, nomeadamente macrocefalia, alopecia, cutis laxa e
Escoliose (MACS) ea sndrome RIN2 [17,18]. Nestas doenas, foram descritas duas
mutaes independentes de mudana de quadro que conduzem a uma diminuio dos
nveis de expresso de mRNA e ausncia da protena em fibroblastos de pacientes. No
caso da sndrome MACS, os autores relatam um acmulo de vacolos no Golgi, mas
nenhuma outra alterao na organela [17]. Em contraste, na sndrome RIN2, observou-
se dilatao da ER e cisternas de Golgi dilatadas e rarificadas [18]. Neste ltimo,
tambm foi detectado o comprometimento do trfico do ER para o complexo de Golgi e
do Golgi para a membrana plasmtica, demonstrando que as conseqncias das
mutaes afetam o organelo em mais de uma maneira. Tcnicas como a interferncia de
RNA (RNAi) em clulas de mamferos em cultura devem ajudar-nos ainda a
compreender as consequncias celulares de alteraes em protenas como RIN2. Ao
nvel macro, os estudos de imunofluorescncia mostram claramente que a depleo de
RIN2 afecta efectivamente a morfologia global do complexo de Golgi, quando
comparada com as clulas de controlo (Figura 1). Uma anlise mais profunda dos dados
dos estudos de RNAi em grande escala que observam a funo da via secretiva [19] ea
morfologia de Golgi [20] fornecero inevitavelmente mais candidatos associados
morfologia e funo de Golgi, que podem estar ligados doena.
Um ltimo exemplo recente que relata uma ligao potencial entre uma protena do
complexo de Golgi e a doena centrado na protena transmembranar TMEM165
anteriormente no caracterizada. Esta protena pode estar envolvida no transporte de
protes / clcio e verificou-se estar ligada a desordens congnitas da glicosilao do tipo
II. Quatro diferentes mutaes causadoras de doenas que levam diminuio da
expresso proteica foram identificadas em TMEM165, uma das quais resulta em
splicing alternativo do mRNA sem expresso da protena mutante. Verificou-se que a
protena de tipo selvagem se localiza no complexo de Golgi e tambm no sistema
endossomal-lisossmico, ao passo que cada um dos quatro mutantes analisados foi
encontrado em diferentes localizaes na clula. O fato de que o complexo de Golgi
parece estar inchado e que a rede trans-Golgi est fragmentada tem sido sugerido para
indicar que esta protena est envolvida na manuteno da morfologia da organela. A
depleo celular de TMEM165 utilizando RNAi parece apenas ter um efeito suave no
complexo de Golgi a nvel macro.
Quando a glicosilao prejudicada
A literatura referente a doenas de glicosilao tem sido extensivamente revista em
outro lugar. No entanto, uma vez que quase todas as protenas que passam atravs da via
secretora sofrem alguma forma de glicosilao, altamente provvel que ainda haja
mais doenas associadas a este processo a ser descoberto.
Os defeitos na glicosilao da protea levam a doens de vias etiologias que
variam de distbios musculares a multi-sistema, tais como os trastornos de
glicosilao humana dependentes do complexo de Golgi (COG) oligomicos
conservados. De notar o facto de a deteco destas doenas muitas vezes
serendipitous e aqueles identificados at agora so principalmente graves sndromes
algumas das quais so ainda fatais. Embora muitos distrbios de glicosilao sejam
causados por mutaes de perda de funo em glicosiltransferases ou transportadores de
acar, mutaes tambm foram descritas em protenas associadas ao complexo COG,
uma montagem multiprotena envolvida nos processos de trfico de vesculas no
complexo de Golgi.
Foi descrito um pequeno nmero de doenas que resultam de uma alterao na
acidificao do complexo de Golgi. Aumentos no pH intra-luminal Golgi perturba a
morfologia da organela, afeta o processamento de protenas e lipdios e glicosilao, e
altera a classificao de carga. Na sndrome de Angelman, uma doena grave e rara do
neurodesenvolvimento, tem sido relatado que a falta de expresso da ubiquitina protena
ligase E3A (UBE3A) leva a um aumento no pH de Golgi, que por sua vez provoca o
inchao osmtico das cisternas de Golgi com uma reduo simultnea Na sialilao de
protenas, um processo altamente dependente do pH. Cutis Laxa tipo II e sndrome da
pele enrugada, doenas que afetam o tecido conjuntivo, e em particular a pele, so
causadas por mutaes de ATP6V0A2, uma ATPase vacuolar que est localizada no
complexo de Golgi e est envolvida na sua acidificao. Embora os mecanismos exatos
pelos quais essas mutaes causam a doena ainda permaneam a ser estabelecidos,
pode-se especular que as perturbaes ao pH intra-luminal de Golgi conduziro
inevitavelmente glicosilao anormal da protena e possvel trfico aberrante de Golgi.
Interessantemente, tambm provvel que sejam encontradas mais ligaes entre
defeitos na glicosilao e morfologia do complexo de Golgi aberrante. Isto porque, para
que os eventos de glicosilao sejam rigorosamente regulados, classes distintas de
enzima de glicosilao precisam ser fisicamente particionadas umas das outras e, por
conseguinte, quaisquer rearranjos morfolgicos das cisternas individuais podem
comprometer esta situao. Conforme descrito acima, mutaes em TMEM165
induzem alteraes morfolgicas no complexo de Golgi, no entanto, alm disso, os
autores destes estudos tambm descrevem uma reduo na glicosilao da protena
[21,22]. Uma vez que a funo de inmeras protenas envolvidas no metabolismo sseo
ou pertencentes matriz extracelular pode ser afetada pela glicosilao anormal, o
comprometimento deste processo fornece uma explicao para as manifestaes
esquelticas observadas na doena [34].
Quando a funo est perdida
Finalmente, abordamos a questo dos efeitos que podem ser causados quando a
expresso de uma protena residente em Golgi perdida devido a mutao. Talvez o
caso mais conhecido seja na distrofia muscular de Duchenne, onde a protena da
distrofina (DMD) no expressa, levando organizao aberrante de Golgi [35] (Figura
1). No entanto, como essa condio em particular foi recentemente revisada em outra
parte [36], focalizaremos nossa ateno em outras protenas complexas de Golgi, cuja
perda induz a doena.
O primeiro exemplo o RAB33B, um membro da famlia Rab de protenas de ligao a
GTP pequenas, que est localizado no complexo de Golgi e foi proposto para estar
envolvido em trfego retrgrado de volta para o ER [37, 38] e tambm mais
recentemente tem sido Conectado autofagia [39,40]. Duas mutaes missense no
domnio GTPase de RAB33B foram identificadas em pacientes com duas displasias
esquelticas diferentes. Curiosamente, na doena de Dyggve-Melchior-Clausen no
foram detectadas alteraes ao nvel do complexo de Golgi [41], enquanto que na
Smith-McCort a reduo dos nveis de expresso da protena RAB33B foi
correlacionada com um complexo de Golgi inchado e fragmentado. Outra observao
que a mutao encontrada na doena de Dyggve-Melchior-Clausen ocorre em um
resduo de lisina que conservado em orthologs RAB33B em todas as espcies [41]. De
facto, este resduo de lisina encontrado na pasta de ligao de GTP de todos os
membros da famlia Rab, demonstrando assim a importncia deste resduo para a funo
da protena. Vale ressaltar o fato de que ambas as doenas tambm podem ser causadas
por mutaes em outra protena residente em Golgi, a dymeclin [42], pelo que sero
necessrios mais estudos para estabelecer para essas doenas a relao entre esta
protena e RAB33B.
Um segundo exemplo de perda de expresso de uma protena de Golgi tambm
observado com outro membro da famlia Rab GTPase. Em X-linked Retardo mental
associado com autismo, epilepsia e macrocefalia um estudo encontrou duas diferentes
perda de funo mutaes em RAB39B. Esta protena Rab particular foi originalmente
descrita como sendo expressa em uma ampla variedade de tecidos [43], embora este
estudo mais recente destaque o seu papel no complexo de Golgi de clulas neuronais
[44]. Ambas as mutaes relatadas resultam na perda da expresso protica nos
neurnios, o que, por sua vez, leva a um nmero alterado e morfologia dos cones de
crescimento neurite e reduo de botes pr-sinpticos. Este trabalho importante no
s no que diz respeito elucidao dos mecanismos da doena, mas tambm til para
comear a compreender a funo de RAB39B no nvel celular. De fato, os resultados
sugerem que esta protena est de alguma forma envolvida no desenvolvimento de
neurnios e capacidade intelectual humana.
Outro exemplo tambm com ligaes funcionais potenciais famlia Rab
SCYL1BP1 / GORAB, um golgin que interage com RAB6. As mutaes neste gene
foram encontradas para causar Gerodermia osteodysplastica [45, 46]. A maioria das
mutaes identificadas neste gene conduzem a uma perda da expresso da protena,
entretanto em uma famlia afetada a mutao conduziu ainda expresso da protena
mas a funo foi perdida [46]. Em todos os casos no foram detectadas alteraes
detectveis na morfologia do complexo de Golgi.
Um exemplo final o GOSR2, um Qb-SNARE residente no Golgi envolvido no trfico
intra-Golgi, que tem sido associado epilepsia progressiva do mioclo- nio "Mar do
Norte", uma doena neurodegenerativa progressiva associada a deformidades
esquelticas [47,48]. Os autores deste estudo descrevem uma mutao missense num
resduo de glicina conservado entre espcies e presente em todas as trs isoformas
GOSR2. Embora esta mutao ainda leve expresso da protena, no consegue
localizar o complexo de Golgi. Alm disso, os estudos realizados com uma estirpe de
levedura sem o ortlogo GOSR2 demonstram que a sobreexpresso da protena mutante
incapaz de resgatar o fentipo e as clulas morrem, sugerindo que a mutao
associada doena equivalente a uma mutao de perda de funo.
Concluso
Nos ltimos cinco anos, um nmero significativo de doenas humanas est sendo
associado a protenas complexas de Golgi. No s estas descobertas so importantes do
ponto de vista da sade, mas tambm fornecem um caminho adicional de compreenso
para que possamos compreender a funo desta organela a nvel molecular e celular at
ao nvel organizacional. Embora a lista de protenas aqui reunidas esteja longe de ser
completa, est ficando claro que o nmero de protenas relacionadas doena
associadas homeostase de Golgi pode eventualmente rivalizar com as conhecidas
como importantes para doenas associadas a outras organelas chave como a ER E
lisossomas.
Muitas das protenas que destacamos nesta reviso so, sem surpresa, associadas ao
trfico atravs do complexo de Golgi (por exemplo, a famlia de protenas Rab),
enquanto outras desempenham um papel na manuteno da homeostase da organela
(por exemplo, ATP6V0A2). Um desafio no entanto, desvendar a causa eo efeito de
cada fentipo celular. Por exemplo, a mutao de um transportador do complexo de
Golgi pode afectar o pH luminal, o que por sua vez afecta as eficincias de glicosilao
de enzimas particulares, o que pode, em ltima instncia, alterar o fluxo de todas as
protenas que passam atravs do organelo. Por outro lado, defeitos em protenas
associadas ao trfico podem causar alteraes morfolgicas na organela, o que por sua
vez pode afetar reaes bioqumicas ou enzimticas especficas que requerem um
micro-ambiente discreto. At data, apenas em alguns casos foi possvel ligar com
preciso a protena a um fentipo particular, enquanto que em muitos outros casos a
forma como a etiologia da doena derivada dos eventos celulares continua a ser
estabelecida.
No entanto, a identificao de mutaes causadoras de doenas em protenas especficas
muito til para os mdicos, uma vez que lhes permite realizar diagnsticos mais
precisos e, finalmente, fornecer melhores conselhos s famlias afetadas. No entanto,
ainda h muito a ser feito, como na maioria dos relatrios que destacamos aqui, apenas
uma quantidade limitada de informaes moleculares e celular foi recolhida. De fato,
para muitas dessas protenas agora ligadas doena ainda no sabemos suas
caractersticas bioqumicas fundamentais no nvel celular - por exemplo, elas so
degradadas mais rapidamente do que a protena de tipo selvagem, agregam ou as
interaes protena-protena so prejudicadas? Somente um conhecimento mais
completo das bases moleculares da doena permitir, em ltima instncia, desenvolver
terapias apropriadas. Outro obstculo elucidao dos mecanismos moleculares de
muitas dessas doenas que elas afetam sistemas de rgos que so desafiadores para
trabalhar, como o sistema nervoso central. Alm disso, a disponibilidade limitada de
tecidos de pacientes (uma vez que muitos destes distrbios so raros) tambm
problemtica.
Nos prximos anos, espera-se que mais mutaes causadoras de doenas sejam
identificadas em protenas que esto fisicamente e funcionalmente associadas ao
complexo de Golgi. Mais de 100 anos aps a descoberta desta organela, s agora que
estamos comeando a perceber a importncia do complexo de Golgi em clulas em todo
o corpo humano eo papel crtico que desempenha no corao do sistema
endomembrana.

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