ANLISIS DEL EFECTO DE LA RADIACIN ULTRA VIOLETA-B EN UN

CONSORCIO DE MICROALGAS CULTIVADAS EN FOTOBIOREACTORES

ARTESANALES EN LA UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA MOLINA
ANALYSIS OF EFFECT OF ULTRA VIOLET -B RADIATION IN A
CONSORTIUM MICROALGAE GROWN IN PHOTOBIOREACTORS AT
UNIVERSITY AGRARY NATIONAL THE MOLINA
Guido Geronimo Maldonado1, Jackeline Aida Mendoza Soto1, Juan Juscamaita Morales2, Orlando Advncula
Zeballos3
1Facultad de Ciencias, Universidad Nacional Agraria la Molina s/n Per, Av. La Molina, Lima-Per. edu.ggm@gmail.com,
20121018@lamolina.edu.pe
2Laboratorio de Biotecnologa Ambiental y Biorremediacin Universidad Nacional Agraria la Molina- Departamento de Biologa. s/n Per,

Av. La Molina, Lima-Per. jjm@lamolina.edu.pe

3 Instituto de Biodiversidad y Paisajes IBP. Jr. Jos Glvez 1083-204.Cercado De Lima. Lima. orlandoad@gmail.com

RESUMEN

Las microalgas son organismos vivos que involucran una serie de parmetros que deben ser considerados, evaluados, determinados y
medidos para realizar con xito un cultivo y mejorar la produccin de biomasa en un medio de agua del rio Rmac. Por lo cual, en el presente
trabajo se tiene como objetivos determinar cuantitativamente la biomasa por el efecto de la radiacin UV-B (RUV-B, 280-315nm) aplicada en
distintos intervalos de tiempo (0, 15, 30, 45 y 60 minutos) a un consorcio de microalgas: Nitzschia sp., Anabaena sp., Scenedesmus sp., Chlorella
sp. y Oscillatoria sp., Vanicula sp. Se evalu el desarrollo del trabajo en condiciones controladas en el Laboratorio de Biotecnologa Ambiental
y Biorremediacin, y en condiciones ambientales en el techo de la Facultad de Ciencias, ambos ubicados en la UNALM. Luego de la irradiacin
se cultivaron en Fotobioreactores artesanales durante 22 das entre los meses de Junio y Julio del presente ao. Los resultados obtenidos
demuestran que s ocurri interaccin significativa (P< 0.05) permitiendo obtener mayor biomasa con respecto al control, confirmando que la
exposicin frente a la RUV-B provoc una respuesta de las microalgas. La biomasa producida por los Fotobioreactores si present una correlacin
significativa (R=0.55, P< 0.05), dada la no especificidad del crecimiento del consorcio de microalgas. Se concluye, que los Fotobioreactores
condiciones controladas sometidos 60 minutos tienen mayor biomasa promedio 4.5mg/ml a diferencia del control que present 2.5mg/ml, lo cual
demuestra que hay un efecto de la RUV-B (470W cm-2). En cuanto a los Fotobioreactores en condiciones ambientales de 15 y 30 minutos
present 2.83mg/ml y 3.0mg/ml respectivamente.

Palabras clave Consorcio microalgas; Biorremediacin; Biomasa; fotosntesis

Abstract

Microalgae are living organisms involve a number of parameters that must be considered, evaluated, determined and measured for mass
cultivation and improve the production of biomass in water as Rimac river. Therefore, in this work it self aims to quantitatively determine the
biomass by the effect of UV-B radiation (UV-B, 280-315nm) applied at different time intervals (0, 15, 30, 45 and 60 minutes) to microalgae
consortium: Nitzschia sp., Anabaena sp., Scenedesmus sp., Chlorella sp. y Oscillatoria sp., Vanicula sp. Conditions under controlled were
developed at the Laboratory of Biotecnology and Bioremediation, and environmental conditions on the roof of the Faculty of Science was
evaluated, both located at the University Agrary National the Molina. After irradiation were cultured in photo-bioreactors for 22 days between
June and July in this year. The results show that did happen Significant interaction (P <0.05) allowing get biomass more than control, confirming
that the front exposure to UVR-B gotten a response of microalgae. Produced by biomass photo-bioreactors present a significant correlation (R =
0.55, P <0.05), given the non-specificity of the growth of microalgae consortium, but a very similar trend. It is concluded that under controlled
conditions one 60 Minutes had a greater biomass, its average was 4.5 mg / ml, the control presented 2.5 mg / ml, which demonstrates that there
is an effect of UVR-B (470W cm-2). As for the photo-bioreactors on environmental conditions of 15 and 30 minutes the biomass obtained were
2.83 mg / ml and 3.0 mg / ml respectively.

Keywords Microalgae consortium; Bioremediation; biomass; photosynthetic

INTRODUCCIN
L
a existencia de un cambio climtico ha hecho que se realicen
numerosos estudios se han centrado en el secuestro del CO2
por parte de las algas, debido al efecto invernadero del gas y al
hecho de que las microalgas y cianobacterias pueden fijar CO2 con una
eficiencia entre 10 y 50 veces mejor que las plantas terrestres(1).
El rpido desarrollo industrial impone un alto riesgo a la
disponibilidad y calidad de las aguas y del aire, debido a la cantidad de
productos contaminantes generados, como nutrientes y CO2(2). En este
contexto, el desarrollo de tecnologas orientadas al cuidado del
medio ambiente, a la reutilizacin de los residuos y a la generacin de
energas limpias de bajo costo se ha tornado indispensable. Entre
estas tecnologas, los cultivos de microalgas adquieren un gran
protagonismo, al ser considerados eco-amigables, ya que reciclan
eficientemente contaminantes desde medios lquidos y gaseosos(1),
incorporndolos a su metabolismo para generacin de
biomasa(3).Estos compuestos contaminantes son captados por la
biomasa algal y pueden ser recuperados mediante su cosecha. Esta
capacidad resulta en un sistema de cultivo con el propsito de
eliminacin de contaminantes, as mismo, la produccin de biomasa otros.
con fines comerciales. El objetivo depende del sistema de
Fotobioreactor, o las especies cultivadas y los factores ambientales(4).
El ro Rmac, es uno de los recursos hdricos ms importante del Se pes papel filtro (peso inicial) en una estufa de calor 60C del
departamento de Lima, nace en las alturas de la localidad de Ticlio, en
su recorrido atraviesa las provincias de Lima y Huarochir con
direccin noreste-suroeste; la cuenca tiene una longitud de 140 km; y,
sus afluentes principales son los ros Chinchn, Blanco, Aruri, Santa
Eulalia y Huaycoloro(5). As mismo, tambin es una fuente de sustrato
(compuestos orgnicos, inorgnicos como metales pesados entre otros)
provenientes de distintas plantas de industrias que vierten residuos al
ro directamente, siendo estos cuerpos de agua se ha evidenciado una
alta tasa de bioabsorcin y bioacumulacin de minerales y metales
pesados(6) .Tambin se han reconocido como microorganismos que
contribuyen de forma significativa a la mitigacin de concentraciones
elevadas de carbono, biorremediacin o la produccin de
biocombustible(6). Por ello, se realizan distintos estudios para analizar
los efectos de la radiacin UV-B y otros factores que causan estrs en
distintas especies de algas para mejorar la produccin de biomasa u
obtener metabolitos secundarios, ya que proporcionan una amplia
gama de productos biotecnolgicos con usos en la industria
alimenticia, salud y medicina humana, alimentacin animal,
compuestos orgnicos y biocombustibles (7).
Nuestro trabajo se aplic RUV-B (470W cm-2) no Ionizante y
Fotobioreactores Artesanales, a una concentracin inicial STOCK de
0.8mg/ml de Biomasa Algal se utiliz un 15% del volumen total. El
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Diseo Factorial que se utiliz se cont con un software Estadstico-
InfoStat 2014. Los objetivos del presente trabajo es determinar
cuantitativamente el efecto de la radiacin UV-B aplicada en distintos
intervalos de tiempo (0, 15, 30, 45 y 60 minutos) sobre un consorcio de
algas cultivadas en condiciones controladas y ambientales en la
UNALM en Fotobioreactores artesanales
2. MATERIALES Y MTODOS
2.1. Obtencin de muestra
La solucin madre se obtuvo inicialmente del estanque la Facultad de
Pesquera de la Universidad Nacional Agraria la Molina, a partir de 12
litros, la obtencin de la muestra fue con la Gua de IMARPE para la
recoleccin de informacin y de muestras de campo, utilizando
materiales como: Botellas, botas, mangueras, probetas y pipetas(8).
Luego el Peso fue 0.8mg de microalgas por ml de solucin, antes de
someterlos a radiacin UV-B se realizaron los clculos correspondiente
para las 30 unidades experimentales (u.e.) cuya concentracin inicial
fue de 15% equivalente a 300ml en 2 litros (9). Cabe mencionar que
las especies de microalgas presentes en esta solucin fueron:
Phaeodactylum tricornutum, Scenedesmus dimorphus, Chlorella sp y
2.2. Cuantificacin de la muestra STOCK
laboratorio y se llev a la bomba de vaco BLA para verter 20ml de
algas sobre papel filtro que estaba en un embudo de laboratorio
conectado a la bomba, determinando la concentracin de microalgas en
12litros.
2.3. Irradiacin y vertimiento de las muestras a los
Fotobioreactores
Se utiliz 40 placas Petri para verter 7.5ml en cada placa que hace un
total de 300ml (15% del total STOCK) ver (Fig.1), antes de someterlos
a radiacin se pudo observar en el microscopio a los microorganismos
para tener como referencia si ha ocurrido algn cambio al Radiarlos
(Fig.2). Luego se sometieron a Radiacin Ultravioleta No Ionizante
con las frecuencias 280 nm y 320 nm en la cmara de Flujo Laminar
Horizontal(10), teniendo a oscuras por 20 minutos para que no ocurra
la reparacin cromosmica despus de la Radiacin(11). Seguido,
fueron observados al microscopio como en la (Fig3.) y se llevaron
todas las placas Petri para verterlos a los Fotobioreactores y enrazarlas
a 2 litros con agua proveniente del Ro Rmac. Los 15 Fotobioreactores
(FB) que se instalaron en el techo de la facultad estuvieron sometidos
a condiciones ambientales; por otro lado, los 15 Fotobioreactores del
laboratorio de Biotecnologa Ambiental y Biorremediacin, fueron
iluminados las mismas horas del da con bombillas de 100Watts
encerrados con papel platino para que se reflejase la luz y genere calor.
1
 Fig.1 Radiacin Ultravioleta de las microalgas puestos en placas Petri en la cmara de flujo laminar horizonal de la UNALM

Figura2. Fotos del consorcio de Microalgas antes de someterlo a RUV-B

Figura3. Foto del consorcio de Microalgas despus de someterlo a RUV-B

2.4. Fotobiorreactores artesanales
Inicialmente la idea es simular los Fotobioreactores sofisticados(12),
con materiales muy sencillos de conseguir. El sistema discontinuo
abierto constituido por 15 botellas, cada una con un filtro de pecera,
fue empalmada con mangueras que estuvieron conectadas a motores
aireadores. La fuerza del burbujeo fue de 40 Hertz y se control con
los reguladores para tener todo uniforme en la reparticin del burbujeo.
La radiacin a condiciones de laboratorio fue artificial, a travs de 6
bombillas de 100 Watts que estuvieron encendidos las mismas horas
del da (Fig.4b), por otro lado la (Fig.4a) que estn en condiciones
naturales no fue radiada con focos, ya que est presente el Sol. Se
estim que la radiacin Ultravioleta incidente fue de 6 puntos en el mes
de noviembre del 2015 segn(13).

Fig. 4a Fotobioreactor artesanal a condiciones ambientales y 4b presenta los Fotobioreactores a condiciones Controladas

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2.5 Cuantificacin de la biomasa

Se utiliz papel filtro de forma circular cuyo peso inicial fue
cuantificado en la balanza analtica, tuvo un dimetro mayor del
embudo que est conectado a la bomba de vaco para evitar que
solucin se rebase (Fig.6). Una vez encendido el equipo, se vertieron
las alcuotas de 20 ml que se extrajeron de cada fotobiorreactor bien
homogenizados para obtener los pesos finales con microalgas.
Finalmente, se llevaron a la estufa por un periodo de 20 minutos a una
temperatura de 60 C para obtener el peso en seco, al realizar la
diferencia con el peso inicial del papel filtro se logr estimar la biomasa
del consorcio de microalgas.

Fig. 6 Sistema de cuantificacin de la biomasa con papel filtro seco sin humedad

3. RESULTADOS Y DISCUSIONES
3.1. RESULTADOS
La presenta tabla 1 se muestra los pesos en miligramo por cada mililitro aumentado 1.7mg/ml a diferencia del Stock y en los dems tratamiento
que se extrajo de cada Fotobioreactor que se ubica en que se cuantific si presenta aumento significativo de la biomasa algas; sin embargo, en
con la Bomba de vaco, los tratamientos (1) en el laboratorio de el tratamiento (2) presenta disminucin de la biomasa algal
Biotecnologa Ambiental y el tratamiento (2) en el Techo de la facultad
de Ciencias. Se puede observar que ha tiempo cero minutos a

Tabla 1. Pesos (mg) del consorcio de Microalgas mediante bomba de vaco por cada 1ml

Tiempo 0 Tiempo15 Tiempo30 Tiempo45 Tiempo60

Promedio de Promedio de Pesos Promedio de Pesos Promedio de Pesos Promedio de Pesos
Tratamientos Pesos de de microalgas de microalgas de microalgas de microalgas
microalgas mg/ml mg/ml mg/ml mg/ml
mg/ml

1 2.5 3.3 2.83 3.16 4.5

2 2.0 2.83 3.0 1.5 1.0

La temperatura es un factor importante en el sistema de los
Fotobioreactores, ya que es una influencia en su crecimiento (densidad
celular) y tambin en el desarrollo de la biomasa, teniendo como
promedio en el tratamiento (1) como mnimo 30.8C y como mximo
32C, que segn (14) la temperatura ptima es 18 C-20 C. Se
mencion que se utiliz bombillas, puesto que, la temperatura fue
elevando por el acercamiento directo de los fotobioreactores a los focos
a distancia de 10 centmetros, lo externo como internamente la
temperatura se elev, cabe mencionar que como estaba a condiciones
controlada el laboratorio no hubo inconvenientes con la luz ni mucho
menos con las bombillas

Tabla 2. Temperaturas de los Fotobioreactores del tratamiento(1)

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 Minutos UV-B Promedio
0 32
15 31
30 30.83
45 31.16
60 31

En el tratamiento (2) las temperaturas son mucho menores que el (1), muy hmedo y no hubo presencia de sol para por lo menos aumentar
teniendo un promedio mnimo de 19.67C y como mximo de 19.96C, la temperatura.
esto se puede presumir que es factible ya que al estar en el techo de la
facultad present condiciones de baja temperatura porque el tiempo
est muy fro en los meses de Junio y Julio. Y por las maana amaneca

Tabla 3. Temperaturas de los Fotobioreactores del tratamiento (2)

Minutos UV-B PROMEDIO

0 19.96

15 19.93

30 19.67

45 19.83

60 19.67

El en presente anlisis se verific la interaccin del Tratamiento y el
tiempo, mediante LSD-Fisher, presentando un valor de P-valor de
Tiempo*Tratamiento menor que el 5% con este resultado se puede
trabajar de manera conjunta los datos y seguir con el Diseo Factorial.
Tambin se hall el coeficiente de Pearson se utiliz para determinar la
Correlacin entre la temperatura y el aumento de la Biomasa; a pesar,
que el coeficiente es un 55% y un P-valor menor a 5% si hay correlacin.
Tambin calculo la homogeneidad de varianza con un P<0.05 y la el r
para la Normalidad resulto ser mayor a 0.94, cumpliendo la Normalidad,
ambos resultados se calcul con INFOSTAT-SOFTWARE
ESTADSTICA.

Fig.7. Presenta interaccin entre Tiempo y tratamiento, pero dando mis resultados en el crecimiento de microalgas

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4. DISCUSION
En base a los estudios realizados por (14)(15)(16), que han utilizado la
Radiacin Ultravioleta Ionizante que es de mayor frecuencia y ocurre
directamente la ruptura cromosmica y demostrando mayor absorcin
de CO2, as mismo, mayor biomasa (16). Sin embargo, el efecto de la
radiacin UV-B en el consorcio de microalgas fue de 280-320 nm y de
longitud de onda y de energa 470uW cm-2(14) que incidi por
distintos tiempos 0, 15, 30, 45 y 60 minutos en ambos tratamientos con
3 repeticiones. Dicho efluente presenta tambin una caracterstica
interesante para el cultivo de microalgas: elevada su alcalinidad (pH:
6.74-8.54) que a diferencia de (6) que presenta un pH de 4 a 7.5, siendo
diferente no hubo inconvenientes en el crecimiento de nuestro cultivo;
as mismo, le permite a stas tomar el carbono inorgnico que precisa
para su desarrollo, o parte de ste, en forma de carbonatos presentes en
el medio(1); sin embargo, fuerzan a sus microalgas a crecer con
hormonas (17) sin contar con otro medio como lo hicimos nosotros que
es el agua del ro Rmac.
El efecto de la UV-B es altamente reactiva desde el punto de vista
biolgico, y los seres vivos han tenido que hacer frente a sus efectos
genotxicos desde el principio de la evolucin de la vida en nuestro
planeta(18), siendo una de las razones que se recolect muestran en el
mes de noviembre 2015 cuyo ndice de RV fue de 6.0 segn (13). En
particular, la RUV-B puede daar el material gentico de las
microalgas(19). Para la mayora de los efectos biolgicos de la RUV,
tales como letalidad, mutacin y transformacin, el ARN es
considerado el blanco principal(18) a 37C, siendo muy probable que
el nuestro cultivos hayan tenido el mismo destino, ya que su
temperatura promedio mxima fue de 32.0C .
El experimento se llev a cabo del 11 de Junio hasta el 2 de Julio siendo
este tiempo requerido para poder observar la variacin de la coloracin
de los FB en ambos tratamiento; sin embargo, el cultivo de microalgas
que presenta en otros experimentos como los de (20) son 3 4 das
observado un color claro de poco crecimiento o desbalance de
nutrientes, tambin otros cultivos de 15 o ms das que inician un
deficiencia de nutrientes generalmente se toman turbios y algunos otros
cultivos de color claro. Los refuerzos por recobrar estos cultivos ya
carentes de nutrientes son intiles(20).
Los resultados cuantificados se obtuvieron por el peso en miligramos
por cada mililitro que se extrajo de cada fotobioreactor artesanal (30
unidades), fueron aleatoriamente distribuidos, cabe mencionar que el
cualquier experimento, la variabilidad proveniente de un factor de
tiempo de radiacin UV-B puede afectar los resultados (21).
Cabe mencionar que los Fotobioreactores que estn controlados
presentan Radiacin de los focos incandescentes de 100W generando
calor y acelerando la actividad enzimtica, crecimiento del consorcio
de microalgas y elevando su temperatura como se observa en la
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(Tabla2) que a diferencia de Fotobioreactor con luz blanca no
Incandescente; adems, al someterlos a estrs a parte de la radiacin,
tambin se cumplira la hiptesis de acelerar la biomasa en cada FB
que se puede notar minutos, pero no se podr definir quin produce
ms biomasa sino se realiza el peso, por otro lado el tratamiento no
controlado que se encuentra en el Techo de la Facultad de Ciencias
presenta diferencias significativa como se observa en la (Tabla1) con
respecto al experimento de (22) que presenta un crecimiento mayor por
la ruptura cromosmica.
En la (Figura2y3), se observa la muestras en microscopio, en la (2) es
la muestra que no fue sometida a radiacin y se observa celular que
estn en procesos de divisin y tambin se puede observar las
zoosporas, ya que las algas son eucariotas tiene reproduccin sexual,
en cambio en la (3) al someterlos a RUV-B la divisin comenz a
acelerar la reproduccin asexual y asociarse en conjunto para que
ocurra el reparo gentico en (material gentico en ncleo, mitocondria
y cloroplastos) de manera de azar(16). Por otro lado, otras
investigaciones como(18) contaron con instrumentos muy sofisticados
para observar el efecto diurno de las micro algas y su calidad del
genoma para ver diferencias de muta gnesis.
Los Fotobiorreactores modernos constan de canales inclinados con
cuatro deflectores espaciados 0.25cm cada uno y un espesor de capa
fina de 6mm segn (23), y que son cultivadas en grandes FB, que
producen en masa como materia prima para la obtencin de biodiesel
y otras bondades. Para aumentar la productividad y una alta produccin
de lpidos, consecuencia del estrs generado en las microalgas es
alcanzado de forma eficiente mediante el uso de Fotobiorreactores con
un elevado costo, cuya inversin, mantenimiento, costos operativos y
equipamiento resulta ser mayor dificultad a la hora de implementar
proyectos de produccin de biocombustibles con microalgas (24), por
esa razn se simul FB de modelo FB Batch discontinuo con botellas
Cielo reciclables de 2.5L.
El trabajo contribuye a la biorremediacin de aguas residuales dando
un valor agregado como la produccin de biomasa que puede ser
aprovechado en la industria de Biocombustible como alternativa al uso
de combustibles fsiles, a la industria alimentara como complemento
nutricio Omega3 y Omega6 entre otros. Fue sometida a estrs de
Radiacin UV-B (P<0.05) presentando la interaccin de
(Tratamiento*tiempo de nuestro DISEO FACTORIAL) como se
puede observar en la (Fig.7) presenta la letra E siendo promedio de 3.5
mg por ml cuyo valor es menor que los estudios de (1)(16)(17)(25)
porque presentamos menor sofisticacin para la extraccin y
separacin de la biomasa Algal. Por otro lado, el tratamiento (2) de 15
y 30 minutos de RUV-B no presenta diferencia significativa e igual.
5
5. CONCLUSIONES
Los Fotobioreactores Artesanales que se
construyeron de manera sencilla y prctica a partir de
residuos reciclado y el aprovechamiento de agua residual
fueron sometidos a condiciones controladas sometidos 60
minutos tienen mayor biomasa promedio 4.5mg/ml a
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demuestra que hay un efecto de la RUV-B. En cuanto a los
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CONGRESO NACIONAL DE ESTUDIANTES DE BIOLOGA (CONEBIOL) Piura del 04 al 09 de septiembre de 2016

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