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Microbiologia
2008
Introduo Microbiologia
Introduo
Archaea
Bactrias Fungos
Vrus Algas
Protozorios
Tipos de microrganismos
estudados pelos microbiologistas.
(Adaptado de Tortora et al., Microbiology, 8 ed)
Esta rea do conhecimento teve seu incio com os relatos de Robert
Hooke e Antony van Leeuwenhoek, que desenvolveram microscpios que
possibilitaram as primeiras observaes de bactrias e outros
microrganismos, alm de diversos espcimes biolgicos. Embora van
Leeuwenhoek seja considerado o "pai" da microbiologia, os relatos de
Hooke, descrevendo a estrutura de um bolor, foram publicados
anteriormente aos de Leeuwenhoek. Assim, embora Leeuwnhoek tenha
fornecido importantes informaes sobre a morfologia bacteriana, estes dois
pesquisadores devem ser considerados como pioneiros nesta cincia.
Recentemente foi publicado um artigo discutindo a importncia de Robert
Hooke para o desenvolvimento da Microbiologia.
Monera: Procariotos
Plantae: Vegetais
Animalia: Animais
Classificao dos seres vivos, de acordo com Whittaker (1969)
(Adaptado de Pommerville, J.C.(2004) Alcamo's Fundamentals of Microbiology)
Archaea: Procariotos
Bacteria: Procariotos
Eukarya: Eucariotos
Classificao dos seres vivos, de acordo com Woese (1977)
(Adaptado de Pommerville, J.C.(2004) Alcamo's Fundamentals of Microbiology)
A Microbiologia na atualidade
Microscopia
de luz polarizada,
revelando os
grnulos de enxfre
no interior da
bactria
Thiomargarita
namibiensis.
Comparao
entre a bactria
Thiomargarita
namibiensis e uma
Drosophila.
(Adaptado de
Schulz, H. N. et al.
(1999). Science,
284:493-495 -
Clique no autor,
caso deseje ler o
artigo original)
uma rea da Biologia que tem grande importncia seja como cincia
bsica ou aplicada.
Bsica: estudos fisiolgicos, bioqumicos e moleculares (modelo comparativo
para seres superiores). => Microbiologia Molecular
Aplicada: processos industriais, controle de doenas, de pragas, produo de
alimentos, etc.
reas de estudo:
Microscopia eletrnica de
varredura das clulas
apresentadas acima.
Microscopia eletrnica de
varredura das clulas
apresentadas acima.
Os bacilos tm forma de bastonetes, podendo apresentar
extremidades retas (Bacillus anthracis), arredondadas (Salmonella, E. coli),
ou ainda afiladas (Fusobacterium). Como seu plano de diviso fixo,
ocorrendo sempre no menor eixo, os bacilos exibem uma menor variedade
de arranjos, sendo via de regra encontrados isolados, como diplobacilos ou
ainda como estreptobacilos. H ainda um arranjo, denominado em
paliada, tambm denominado letras chinesas, que tpico do gnero
Corynebacterium. Tal tipo de arranjo ocorre porque a parede celular desses
organismos dupla e no momento da diviso celular ocorre a ruptura de
apenas uma das camadas, deixando as clulas unidas pela camada de
parede que no se rompeu. Os bacilos podem ainda apresentar-se como
pequenas vrgulas (Vibrio cholerae) ou em forma de meia lua
(Selenomonas).
Microscopia eletrnica de
transmisso, de um bacilo em
processo de diviso celular.
Microscopia ptica de
fluorescncia, de um organismo
espiralado.
Microscopia ptica,
utilizando um procedimento de
impregano com sais de prata,
revelando a bactria causadora
da sfilis, Treponema pallidum
(observe os grandes neutrfilos
prximos s bactrias)
Ultraestrutra Bacteriana
A Camada S
Algumas bactrias e vrias Archaea apresentam uma camada de natureza
protica ou glicoprotica estruturada (como um piso de tacos), denominada
camada S. Esta camada, as bactrias, encontra-se acima da parede celular e
at o momento, suas funes no se encontram totalmente esclarecidas.
Acredita-se que esta camada proteja a clula contra flutuaes osmticas,
de pH e ons, alm de auxiliar na manuteno da rigidez da parede. Alguns
autores especulam que a camada S pode mediar a ligao dos orgnaismos a
superfcies.
Bactria lofotrquia
Bactria lofotrquia
(Adaptado de Tortora et al., 1998 -
(Adaptado de Atlas, 1997 - Principles of
Microbiology)
Microbiology)
Bactria peritrquia Bactria peritrquia
(Adaptado de Tortora et al., 1998 - (Adaptado de Tortora et al., 1998 - Microbiology)
Microbiology)
Em Gram negativas, tem grande importncia, pois vrias enzimas e outras protenas
esto localizadas, incluindo hidrolases, protenas de ligao envolvidas no transporte e
quimiorreceptores. Bactrias quimiolitotrficas e denitrifcantes apresentam muitas vezes
protenas transportadoras de eltrons no periplasma, outras apresentam enzimas envolvidas na
sntese de peptideoglicano. A presena do periplasma bactrias Gram positivas ainda motivo
de controvrsias, devido ao enorme potencial secretor que este grupo apresenta.
Membrana Citoplasmtica - Estrutura delgada, com cerca de 8 nm, composta por uma
bicamada fosfolipdica (podendo apresentar 7 tipos de fosfolipdeos diferentes), entremeada de
protenas (cerca de 200 tipos distintos), atuando como importante barreira osmtica, altamente
seletiva. Normalmente, as membranas de organismos procariotos apresentam maiores
concentraes de protenas que as membranas eucariticas, tendo em vista a ausncia de
organelas citoplasmticas nas bactrias.
Via de regra, exceto no caso dos micoplasma (bactrias desprovidas de parede celular),
micoplasmas, as membranas procariticas no apresentam esteris, como observado em
eucariotos. Entretanto, muitas bactrias apresentam molculas pentacclicas, semelhantes a
esteris, denominadas hopanides, talvez conferindo maior rigidez membrana. A presena de
esteris na membrana citplasmtica de micoplasmas pode ser justificada pela ausncia da
parece celular, neste grupo de organismos.
Matriz Citoplasmtica - composta por cerca de 70% de gua, alm dos demais
compostos celulares, tais como o DNA, incluses e plasmdeos. Caracteristicamente, o
citoplasma celular apresenta um grande concentrao de ribossomos e protenas, tais como
protenas atuando como um sistema de citoesqueleto.
Clulas apresentando
magnetossomos em seu interior Preparao de magnetossomos
(corpsculos negros enfileirados) (Adaptado de Prescott et al., Microbiology,
(Adaptado de Prescott et al., Microbiology, 2000) 2000)
Esquema de uma vescula de ar,
indicando como as protenas que a
formam se associam
(Adaptado de Madigan et al., Brock Biology of
Bactrias se movendo em direo a Microorganisms, 2003)
um campo magntico
(Adaptado de Prescott et al., Microbiology, 2000)
Domnio Archaea
Consideraes Gerais
Por volta da dcada de 70, vrios organismos procariticos foram isolados a partir de
uma srie de ambientes considerados extremamente inspitos, quase que incompatveis com a
presena de seres vivos. Estes ambientes naturais caracterizavam-se por apresentar
temperaturas bastante elevadas (prximas a 100C), extrema acidez (pH prximo a 2), altas
salinidades (cerca de 10 a 15%) e, muitas vezes, ausncia completa de oxignio. Como vrias
destas caractersticas correspondiam s possveis condies encontradas na Terra primitiva,
os pesquisadores acreditavam que os organismos procariticos presentes nestes ambientes
deveriam corresponder a clulas primitivas, talvez "fsseis vivos", representando as formas de
vida ancestrais das bactrias modernas. Por esta razo, estes organismos foram denominados
"arqueobactrias".
Outro aspecto que a rvore permite deduzir o fato das "arqueobactrias" ocuparem
uma posio intermediria entre os domnios Bacteria e Eucarya, sugerindo que estas
correspondem a um grupo de organismos diferentes de bactrias e de clulas eucariticas. De
fato, estudos genticos e fisiolgicos posteriormente revelaram que tais organismos
apresentam caractersticas de bactrias, de eucariotos, alm de caractersticas exclusivas, no
encontradas em qualquer outro domnio. Por esta razo, deixaram de ser denominadas
"arqueobactrias", recebendo a denominao archaea.
O filo Euryarchaeota um grupo fisiologicamente diverso, sendo composto por dois grupos: 1)
as archaea metanognicas, que so anaerbias, (Methanococcus, Methanobacterium e
Methanosarcina), encontradas em ambientes de condies extremas, e 2) as haloflicas
extremas, que so aerbias (Halobacterium, Halococcus). As metanognicas compreendem os
organismos mais anaerbios conhecidos, ou seja, o oxignio mesmo em concentraes
baixssimas, exerce um efeito extremamente letal sobre estes organismos. Neste filo h ainda o
gnero Thermoplasma, composto por bactrias acidfilas, termoflicas, que no apresentam
parede celular. As haloflicas geralmente coram-se como Gram negativas, no apresentam
esporos e, em sua maioria, so imveis, geralmente apresentando grandes plasmdeos,
contendo cerca de 25 a 30% do DNA da clula. Dentre as metanognicas, encontra-se o
gnero Methanopyrus, que cresce em temperaturas de at 110C.
Lago hipersalino no Egito,
rico em carbonato de sdio. O pH
destas guas encontra-se na faixa de
10, sendo habitado por archaea
halfilas extremas, tais como
Halobacterium salinarum. A colorao
vermelha decorrente da presena
de pigmentos carotenides, presentes
nestes organismos.
O filo Korarchaeota composto quase que somente por isolados identificados apenas a
partir do sequenciamento de 16S rRNA, sendo considerado um grupo de hipertermfilos. At o
momento, poucos espcimes de Korarchaeota foram cultivados em laboratrio.
Micrografia de fluorescncia
empregando corantes especficos para os rRNAs
de Igniococcus (verde) e Nanoarchaeum
(vermelho)
Quando coradas pelo mtodo de Gram, algumas archaea comportam-se como Gram
positivas e outras como Gram negativas, embora suas paredes sejam completamente distintas
daquelas de eubactrias. Como observado na figura acima, suas paredes celulares
apresentam uma grande diversidade quanto composio qumica e, diferentemente das
eubactrias, no apresentam peptideoglicano. Alm disso, existem tambm outras archaea que
no exibem parede celular (Thermoplasma).
Vrias archaea exibem uma parede espessa, rgida, semelhante parede Gram positiva
(Methanobacterium, Methanopyrus, Halococcus), entretanto, os polmeros que compem a
estrutura podem ser: pseudopeptideoglicano ou metanocondroitina.
Aquelas archaea que coram-se como Gram negativas podem ter paredes compostas
por protenas, polissacardeos ou glicoprotenas. As paredes proticas podem variar entre si,
podendo ser do tipo monocamada de natureza cristalina, ou policamadas, de protenas
tubulares. As glicoprotenas so tambm comuns, muitas vezes contendo grandes quantidades
de aminocidos carregados negativamente. As halobactrias so um exemplo do modelo
descrito acima, onde as cargas negativas da parede interagem com os ons Na+ do ambiente,
estabilizando a parede.
Sulfolipdeos,
glicolipdeos,
Composio lipdica fosfolipdeos hidrocarbonetos Fosfolipdeos
ramificados, isoprenoides,
fosfolipdeos
Estrutura dos
cadeia linear cadeia ramificada cadeia linear
lipdeos
Flagelos: Muitas archaea, inclusive aquelas sem parede celular, podem apresentar
flagelos. Estes diferem totalmente dos flagelos bacterianos, uma vez que no apresentam a
estruturao em corpo basal, gancho e filamento. Nas Archaea, o flagelo no apresenta os
anis observados nas bactrias e, geralmente, composto por vrios tipos de flagelina, que
exibe composio similar a vrias fmbrias. Ao que parece, o flagelo composto por flagelina,
que se organiza a partir da membrana citoplasmtica, projetando-se para o exterior da clula.
Metabolismo
Ecologia de archaea
Dados recentes indicam, por outro lado, que este grupo de microrganismos pode
tambm ser isolado de ambientes frios. Atualmente sabemos que estes organismos so
importantes membros da microbiota aqutica de regies frias do planeta. Ao que parece, as
archaea podem corresponder a at 34% da biomassa procaritica das guas costeiras
superficiais da Antrtida.
De maneira geral, e pelo fato da maioria das archaea conhecidas serem isoladas de
ambientes quentes, salinos e/ou anaerbios, este domnio didaticamente dividido em trs
grandes grupos: termoflicos, halfilos e metanognicos.
No entanto, vale ressaltar mais uma vez que dados mais recentes comprvam a ampla
distribuio geogrfica e ecolgica desse grupo de organismos.
Pyrolobus fumarii foi isolado de uma fenda no Oceano Atlntico, a uma profundidade de
3.650 metros, crescendo em uma faixa de temperatura de 90 a 113C, pH de 4 a 6.5 e
concentraes de NaCl variando de 1 a 4%. Experimentos realizados em laboratrio mostram
que culturas na fase exponencial de crescimento sobrevivem ao tratamento em autoclave
(121C) por 1 hora.
Metanognicos: Este foi o primeiro grupo de archaea descrito, sendo nico por sua
capacidade de sintetizar metano. Sua distribuio geogrfica muito ampla, sendo
encontrados no intestino de ruminantes, em cupins, em lagoas, lodos de esgoto, etc. Podem
ser quimiolitotrficos ou quimiorganotrficos e, via de regra, so anaerbio estritos, exibindo
enorme sensibilidade ao oxignio.
Interaes microbianas
Nutrio de microrganismos
Introduo
Os microrganismos exibem os mais diversos mecanismos nutricionais. Em relao aos
procariotos (Bacteria e Archaea), a nutrio ocorre predominantemente pela absoro, uma vez
que a grande maioria destes organismos possui uma espessa parede celular, impossibilitando
a realizao de fagocitose.
Os seres vivos podem ser classificados de acordo com as fontes de energia e de
carbono que utilizam para seu crescimento. Assim, em relao s fontes de energia, tempos os
organismos fototrficos (que utilizam a energia luminosa) e os quimiotrficos (que utilizam a
energia proveniente de reaes qumicas). Em relao s fontes de carbono, temos os
organismos autotrficos (fontes inorgnicas) e os heterotrficos (fontes orgnicas). Dentre os
procariotos, iremos encontrar exemplos em todas as possveis classes de organismos.
Nutrientes
Principais Macronutrientes
Magnsio: necessrio geralmente em grandes quantidades, uma vez que tem papel na
estabilizao de ribossomos, membranas e cidos nuclicos, sendo tambm importante para o
funcionamento de diferentes enzimas, especialmente aquelas envolvidas na transferncia de
fosfato.
Zinco: tem papel estrutural em vrias enzimas (DNA e RNA polimerases) e outras
protenas de ligao ao DNA.
Molibdnio: presente em certas enzimas como a nitrato redutase assimilativa.
Nutrio em Gram positivos: Estas bactrias caracterizam-se por sintetizar uma srie
de exoenzimas, as quais so liberadas no meio, clivando os nutrientes, que so capatados por
protenas transportadoras. Os fungos (clulas eucariticas), posuem um sistema de nutrio
semelhante ao das bactrias Gram positivas, nutrindo-se pela absoro, aps a clivagem
extracelular de compostos complexos.
A parede celular das bactrias Gram positivas composta por vrias camadas de
peptdeoglicano, enquanto nas Gram negativas observa-se uma maior complexidade qumica e
estrutural da parede, decorrente da presena de camadas lipoprotica e lipopolissacardica,
localizadas externamente camada de peptdeoglicano, originando a membrana externa. Estas
diferenas, por si s, contribuem em grande parte s diferenas observadas na forma de
captao dos nutrientes.
A membrana citoplasmtica, estrutura vital para qualquer tipo de clula, uma barreira
que separa o contedo celular do meio externo. A membrana corresponde a uma barreira
altamente seletiva, permitindo que as clulas concentrem metablitos especficos em seu
interior. No domnio Bacteria, a membrana apresenta-se como uma bicamada fosfolipdica,
contendo protenas dispersas por toda sua superfcie. A estutura global da membrana
estabilizada atravs de interaes do tipo pontes de hidrognio, interaes hidrofbicas e pela
presena de ons Ca++ e Mg++, os quais se combinam com as cargas negativas dos
fosfolpides. Embora em archaea, a membrana apresente estrutura totalmente distinta,
podendo ser do tipo bicamada ou monocamada, muitas vezes desprovida de fosfolipdeos, tal
estrutura desempenha os mesmo papis fisolgicos descritos para as membranas de qualquer
ser vivo.
Assim, a membrana tem papel essencial nos processos de nutrio procaritica, uma
vez que todos os nutrientes e produtos de degradao devem atravess-la. Devido sua
permeabilidade seletiva, a maioria das molculas so incapazes de simplesmente atravessar a
membrana de forma passiva. Ao contrrio, estas devem ser ativamente transportadas atravs
da membrana.
Difuso facilitada
Translocao de grupo
Neste tipo de transporte, o nutriente sofre uma alterao qumica durante sua passagem
atravs da membrana. Uma vez que o produto translocado para o interior da clula agora
diferente daquele presente no meio externo, no h a formao de um gradiente de
concentrao.
Molculas de acares tais como glicose, frutose, N-acetilglicosamina, purinas e pirimidinas
so exemplos de translocao de grupo, sendo fosforiladas durante o processo pelo sistema
fosfotransferase.
Tranporte ativo
Alguns acares, a maioria dos aminocidos, vrios ons inorgnicos e cidos orgnicos
so transportados atravs deste tipo de mecanismo. A energia necessria para efetuar os
processos advm ou do ATP ou, mais comumente, da formao de um gradiente de prtons
(ons hidrognio) por toda a membrana, denominado fora prton motiva. Como resultado, a
membrana fica energizada e este potencial eletroqumico responsvel pela captao dos
nutrientes.
Cada transportador tem stios especficos tanto para o substrato como para os prtons.
Com a entrada do nutriente, o prton tambm atravessa e membrana e com isso vai diminuindo
o gradiente e a fora motiva.
+
Ctions tipo K podem ser transportados ativamente por uniportadores, em resposta
diferena de cargas, uma vez que o interior da clula fica carregado negativamente.
Cultura pura: corresponde a uma cultura contendo um nico tipo de organismo. Esta
importante, uma vez que permite o estudo dos microrganismos isoladamente. Para isso,
precisamos conhecer as necessidades nutricionais e ambientais dos microrganismos.
Crescimento microbiano
N=No.2n, onde N= nmero final de clulas, No= nmero inicial de clulas, n= nmero de
geraes.
n= log(N) - log(No)/0.301
t
g = /n , onde g= tmpo de gerao, t= tempo de crescimento e n= determinado acima.
O crescimento dos microrganismos pode ser mensurado por diferentes tcnicas, tais
como pelo acompanhamento da variao no nmero ou peso de clulas, por exemplo. Dentre
as diferentes tcnicas utilizadas, descreveremos alguns exemplos.
Contagem total de clulas: esta metodologia envolve a contagem direta das clulas
em um microscpio, seja de amostras fixadas (e coradas) ou analisadas a fresco, (sendo
aplicados cerca de 10 l da suspenso, na maioria dos casos), utilizando-se cmaras de
contagem. A contagem direta uma tcnica rpida, mas tem como principais limitaes a
impossibilidade de distino entre clulas vivas e mortas (o que pode ser contornado pelo uso
de corantes vitais, para leveduras) e contagens errneas, devido s pequenas dimenses de
algumas clulas, ou pela formao de agregados celulares.
A fase lag tambm observada quando as clulas sofrem traumas fsicos (choque
trmico, radiaes) ou qumicos (produtos txicos), ou quando so transferidas de um meio rico
para outro de composio mais pobre, devido a necessidade de sntese de vrias enzimas.
Assim, durante este perodo observa-se um aumento na quantidade de protenas, no peso seco
e no tamanho celular.
Foram detectados alguns genes (sur) que so necessrios sobrevivncia das clulas
na fase estacionria. Alm destes, existem outros genes (fatores s alternativos da RNA
polimerase, protenas protetoras contra dano oxidativo).
Declnio: A maioria das clulas est em processo de morte, embora outras ainda
estejam se dividindo. A contagem total permanece relativamente constante, enquanto a de
viveis cai lentamente. Em alguns casos h a lise celular.
Culturas descontnuas tendem a sofrer mutaes que podem repercutir na populao como um
todo. As prprias condies ambientais tendem a promover variaes de carter fenotpico
(reversvel) nas culturas.
Crescimento em culturas contnuas: tcnica muito usada nos processos industriais
de obteno de produtos microbiolgicos. Nestes casos, tem-se o interesse em manter as
clulas em fase log ou estacionria. Utilizam-se fermentadores ou quimiostatos, que permitem
um crescimento em equilbrio dinminco, havendo assim um controle da densidade
populacional e da taxa de crescimento. Estes so respectivamente controlados pela
concetrao do nutriente limitante (fonte de C ou N) e pela taxa de fluxo (taxa de diluio). Em
baixas concentraes do nutriente limitante, a taxa de crescimento proporcional
concentrao do nutriente (que virtualmente zero).
Mesfilos: crescem numa faixa de 20 a 40C, com um timo em torno de 37C, sendo
os principais microrganismos encontrados em animais de sangue quente.
Fatores adicionais:
Fonte luminosa para fototrficos autotrficos. Presso atmosfrica, para aqueles que
vivem em profundidades.
Reproduo em procariotos
Introduo
At o momento, os estudos indicam que a maioria dos procariotos se divide por fisso
binria, originando duas clulas filhas idnticas logo aps a duplicao e segregao
cromossomal. O ciclo celular bacteriano pode ser divido em duas fases: 1) Um ciclo de DNA,
que inclui a replicao e segregao dos cromossomos e 2) um ciclo de diviso, com a
citocinese e separao das clulas filhas.
No entanto, estudos com outras bactrias, tais como a bactria pedunculada Caulobacter
crescentus, revelam um processo mais complexo de diviso, originando clulas distintas
morfolgica e fisiologicamente. Relatos mais recentes da literatura descrevem a ocorrncia de
diferentes procesos de reproduo no domnio Bacteria.
Vrios so os aspectos ainda pouco elucidados sobre a diviso celular. Por exemplo,
como ocorre a segregao do DNA? Como o septo de diviso localizado corretamente? Os
estudos vm mostrando que as bactrias possuem uma srie de protenas citoplasmticas que
atuam como um verdadeiro citoesqueleto, sendo responsveis pela correta migrao do DNA e
posicionamento do septo. Existem autores que vm utilizando o termo "replissomo" para
descrever a complexa maquinaria celular envolvida no processo de diviso. Alm disso, dados
recentes tambm revelam que os lipdeos de membrana so importantes componentes do
replissomo. Dentre os diversos componentes da maquinaria, uma protena denominada MreB,
semelhante actina, est implicada na segregao do DNA.
Um dos componentes mais estudados corresponde protena FtsZ, um homlogo estrutural da
tubulina que, durante a fisso binria, se organiza como um anel no centro da clula e atua
como ponto de ancoragem de outros elementos do aparato. Estes outros componentes
redirecionam o crescimento da parede celular e protegem o DNA de danos enquanto o
envelope invagina. FtsZ uma protena muito conservada e uma das primeiras protenas a
se organizar no fututro stio de diviso. Nos prximos tpicos discutiremos a protena FtsZ em
maior detalhe.
O fato da regio oriC estar sempre localizada nas vizinhanas do polo celular sugere
que esta regio poderia conter uma sequncia do tipo centrmero. Alm disso, pela sua
localizao sempre igual, foi especulado que deveria haver a participao de uma ou mais
protenas, desempenhando o papel dos cinetcoros ou das protenas motoras dos eucariotos.
Tais achados no so surpresa, uma vez que os eucariotos e os procariotos devem ter
evoludo a partir de um ancestral comum, que era eficiente na segregao cromossomal.
Assim, no teria porque este evento ser to distinto nas bactrias, onde a grande maioria dos
processos ocorrem de forma similar aos eucariotos.
Modelo proposto para a segregao cromossomal, em bactrias
(Adaptado de Errington, J. ASM News 64:210-217, 1998)
Estudos com mutantes de E. coli indicam que as clulas contm trs stios potenciais de
diviso: na regio central e nos plos. Normalmente, para que ocorra uma diviso na regio
central, os stios polares devem ser inibidos, sem a inibio do stio potencial mediano. Nestas
clulas, parece que tal processo se d pela ao cooperativa de um inibidor de diviso com um
fator topolgico de especificidade, os quais so codificados pelos genes minC, minD e minE.
Dados mais recentes indicam que alm das protenas Min, os fosfolipdeos de
membrana tambm teriam papel na seleo do stio de septao. Uma das primeiras protenas
que participam do processo de septao, FtsA ou ZipA, poderiam reconhecer e interagir com
um domnio fosfolipdico situado da poro central da membrana da clula, permitindo assim a
ligao de FtsZ.
Adaptado de Mileykovskaya, E. & Dowhan, W. (2005) Curr. Op. Microbiol., 8:135142.
Esquema do ciclo celular. (a) A nova clula filha apresenta a origem e a terminao
de replicao do DNA ("o" verde, oriC e "T" vermelho, de lado, respectivamente); o sistema Min
(bolas verdes e rosas) ligado aos plos, ou oscilando entre os plos; domnios lipdicos nos
plos (vermelho). (b) O cromossomo sofre uma rotao, trazendo a oriC para a poro central,
onde formado um domnio lipdico rico em cardiolipina (vermelho). O DNA comea a ser
replicado pela DnaA, e pela montagem do replissomo (pentgono). (c,d) As origens recm-
replicadas se movem em direo aos plos, liberando o domnio lipdico central para agora
interagir com FtsZ (prpura). (e) Organizao da maquinaria de diviso (multicolorida) e
converso do domnio central em futuros plos. (f) Em E: coli, MinD (rosa) e seu domnio C-
terminal (cinza) trocam ADP por ATP (direita), expondo a poro C-terminal, que interage com
lipdeos de membrana nos plos. O polmero de MinD-ATP pode crescer em direo ao centro.
Prximo ao centro, a ligao de MinE (verde) induz a hidrlise de ATP, levando MinD para a
conformao MinD-ADP, despolimerizando-o e voltando para os plos. (g) Vrias molculas de
DnaA (amarelo) associadas a ATP ou ADP.
Somente quando ligada a ATP a DnaA (diagrama da direita) capaz de se ligar prximo
oriC (azul e verde), abrir o DNA e permitir a montagem do replissomo. A forma inativa, DnaA-
ADP ligada oriC reciclada na membrana (vermelho).
Estudos indicam que uma protena presente em E. coli, denominada FtsZ, desempenha
importante papel na formao do septo e separao das clulas filhas, durante o processo de
diviso celular.
A protena FtsZ forma um anel no stio da diviso celular, sugerindo um papel estrutural para
esta protena neste processo. Atualmente sabe-se que a FtsZ tem homologia com as pores
que se ligam ao GTP da tubulina, sendo os cristais das duas muito semelhantes e que tambm
atua como GTPase.
Durante a diviso, vrias protenas so recrutadas para o anel formado por FtsZ: FtsA,
FtsQ, FtsW, FtsL, FtsN, FtsK, FtsI (PbP3) e ZipA, que se organizam em um complexo para
realizar a diviso. Exceto por FtsZ, FtsA e ZipA, todas as demais apresentam dominnios
transmembranosos e periplasmticos, indicando que atravessam a membrana citoplasmtica.
O anel FtsZ localiza-se exatamente no centro de uma clula vegetativa bacilar, como E. coli,
sugerindo uma pr-determinao do local, provavelmente mediada por MinE.
Durante a diviso o anel FtsZ comea a se contrair, pela remoo sucessiva de suas
subunidades, as quais migram para as futuras regies centrais das novas clulas filhas. Assim,
acredita-se que os stios de diviso da prxima gerao j esto presentes nas clulas me,
sendo o processo de montagem e desmontagem bastante rpido.
Formao do septo e separao das clulas filhas
(Adaptado de Margolin, W. ASM News 65, 1999)
Esta bactria Gram positiva habita o trato GI de cobaias e produz mltiplos (at 9)
endosporos. O ciclo de vida desta bactria requer que o organismo circule pelo trato GI, ou
seja, depende da natura coprfaga de seu hospedeiro. Esporos de M. polyspora so isolados
das fezes do hospedeiro e somente estes esporos maduros sobrevivem passagem pelo
estmago, indo germinar no intestino delgado (figura abaixo). Algumas clulas fazem fisso
binria neste estgio, mas a maioria esporula. A partir do intestino delgado, as bactrias se
depositam no ceco, ondem terminam de esporular. Ao que parece, os pr-esporos ou
endosporos maduros no so capazes de realizar fisso binria. Os esporos passam pelo ceco
e finalmente so eliminados nas fezes, podendo ser novamente ingeridos pelo hospedeiro,
recomeando o ciclo.
A esporulao em M. polyspora diferente, com uma diviso iniciada nos dois plos e o
DNA vai para os dois compartimentos. Aps o englobamento, o pr-esporo pode se dividir,
produzindo outros pr-esporos que amadurecem. Assim, existem 3 ou mais cpias do genoma.
Metabolismo Microbiano
Reaes de oxi-reduo
3) Fotosforilao: que ocorre em clulas que contm pigmentos que absorvem luz.
Neste caso, a energia luminosa, convertida em ATP e NADPH, que sero utilizados para a
biossntese, empregando tambm uma cadeia de transporte de eltrons.
Processos onde h a produo de energia, em quimiotrficos
- Respirao: oxignio ou outro agente oxidante atua como aceptor final (aerbia ou
anaerbia).
Uma vez que estes trs processos envolvem reaes de oxirreduo, podemos
diferenci-los genericamente, de acordo com os doadores inciais e aceptores finais de eltrons.
Assim, temos:
Por exemplo, aps a quebra da glicose, originando cido pirvico, este pode ser
convertido a outro composto orgnico, por um processo de fermentao. Assim, a fermentao
um processo que no depende do ciclo de Krebs, ou da cadeia de transporte de eltrons.
Ltica (homo ou heteroltica) => cidos ltico, actico, frmico, etanol (Lactobacillus,
Streptococcus, Leuconostoc).
Exemplos de fermentaes
(Adaptado de Tortora et al., Microbiology, an introduction, 1996)
Respirao: Processo onde o doador inicial de eltrons oxidado, tendo como aceptor
final de eltrons um composto inorgnico. Quando o aceptor final o oxignio, a respirao
denominada aerbia e quando o aceptor outro composto (Sulfato, nitrato), denominada
anaerbia. Em todos os processos de respirao temos a participao de uma cadeia de
transporte de eltrons.
Respirao Aerbia
Aps a gliclise, o cido pirvico convertido a actil-CoA, que entra no ciclo de Krebs,
onde ocorrem uma srie de reaes de oxirreduo, que transferem a energia para coenzimas,
principalmente NAD+, reduzindo-as. Esta energia armazenada ser transferida, levando
formao de ATP, pela cadeia de transporte de eltrons, localizada na membrana
citoplasmtica.
Formao de ATP: A enzima ATPase (um canal para o transporte de prtons), ligada
membrana, possui 2 partes: uma cabea em multi-subunidades, presente na face interna, e
uma cauda, condutora de prtons, que atravessa a membrana. Ela cataliza a reao entre ATP
e ADP + Pi. Atuando em uma direo, ela cataliza a formao de ATP (fosforilao oxidativa)
pela entrada controlada de prtons (a formao do gradiente dada com gasto de energia,
enquanto sua dissipao controlada libera energia).
A fotofosforilao pode ser de dois tipos: cclica e acclica. No processo cclico, o eltron
retorna clorofila, enquanto na acclica, processo mais comum, os eltrons liberados no
retornam clorofila, sendo incorporados ao NADPH. Os eltrons perdidos so subsitudos por
outros, provenientes da gua ou outro composto oxidvel, tal como H2S. (Na cclica, quanto h
a absoro dos quanta pela bacterioclorofila, a molcula se excita, perdendo um eltron,
tornando-se um agente oxidante potente. O eltron transferido num processo semelhante a
CTE (Ferredoxina-ubiquinona-cit b-cit f) e retorna bacterioclorofila.
Introduo
Assim, embora possam ter uma existncia planctnica independente, este tipo de vida
parece ser eventual.
Comportamento coletivo
(Adaptado de Davey & OToole, Microbiol. Mol. Biol. Rev., 64:847-867, 2000)
Diferentes vias genticas podem ser utilizadas na formao de biofilmes. Por exemplo,
V. cholerae parece ter diferentes vias para realizar a aderncia inicial, dependendo da
superfcie. Assim, quando no intestino, este organismo utiliza a fmbria Tcp para realizar a
colonizao, embora tal estrutura no tenha papel na etapa inicial de formao de biofilmes em
superfcies abiticas, sendo o processo mediado por um outro tipo de fmbria, denominada
Msh.
A partir de estudos com linhagens mutantes de P. aeruginosa, foi relatado que, quando
as clulas no sintetizam flagelos, so incapazes de realizar as interaes iniciais com as
superfcies. Mutantes que no produzem a fmbria tipo IV (associada movimentao das
clulas em uma superfcie) so capazes de se aderir formando uma monocamada, ao invs de
microcolnias. Existem uma protena, denominada Crc que, alm de atuar regulando o
metabolismo das clulas, tambm regula a expresso de dois genes que codificam protenas
importantes na montagem da fmbria tipo IV.
Maturao do biofilme
Aps a etapa de interaes iniciais, comea a haver a formao das microcolnias,
normalmente associada produo de EPS. Outra etapa importante corresponde
organizao da arquitetura do biofilme que, em P. aeruginosa parece ter a participao do
"quorum sensing".
(C) V. cholerae, tambm usa os flagelos na aproximao, sendo a ligao mediada por
fmbrias MshA e talvez outras protenas.
(Adaptado de Davey & OToole, Microbiol. Mol. Biol. Rev., 64:847-867, 2000)
Disperso
Quorum Sensing
Introduo
Atualmente est bem definido que este sensoriamento populacional realizado por
meio de pequenas molculas, denominadas autoindutores (AI). Os autoindutores podem ser de
diferentes naturezas qumicas: em organismos Gram negativos, via de regra os autoindutores
so do tipo N-acil homoserina lactonas (AHL), que correspondem a pequenas molculas que
se difundem livremente para dentro e para fora das clulas. Em Gram positivos, normalmente
os autoindutores correspondem a pequenos petdeos (hepta ou octapeptdeos) que se ligam a
receptores localizados na superfcie das clulas bacterianas.
O regulon lux composto por dois operons que so transcritos em direoes opostas,
sendo separados por uma regio intergnica regulatria. O operon da esquerda contm o gene
luxR, que codifica o ativador transcricional LuxR, que tambm atua como receptor do
autoindutor. O operon da direita contm o gene luxI, que codifica a OHHL sintase. Abaixo do
gene luxI, encontram-se os genes estruturais luxCDABE, que codificam as protenas
necessrias ao desenvolvimento da bioluminescncia (subunidades a e b da luciferase - luxA e
luxB, a redutase - luxC, transferase - luxD e sintetase - luxE).
- produo de antibiticos
- fixao de nitrognio
Alm destas atividades, cada vez mais est se tornando claro o papel ecolgico
desempenhado pelo quorum sensing. Sabe-se que os microrganismos sintetizam autoindutores
bastante especficos, reconhecidos apenas por membros da mesma espcie. No entanto,
pesquisas revelam que organismos de espcies prximas podem sintetizar autoindutores
semelhantes, capazes de interferir no quorum sensing de outros organismos. Por exemplo,
Staphylococcus epidermidis, um habitante da microbiota normal, sintetiza autoindutores que
interferem no quorum sensing de S. aureus, um microrgnaismo potencialmente patognico.
Acredita-se que este tipo de interferncia tenha como principal funo impedir ou dificultar a
colonizao do hospedeiro por organismos invasores.
H alguns anos foi descoberto um segundo tipo de autoindutor, denominado AI-2, que
parece estar envolvido em um processo mais "geral" de cominucao microbiana. Este AI-2
seria reconhecido por um grande nmero de espcies, talvez atuando como uma molcula que
sinaliza aos diferentes organismos a presena de outros microrganismos. Este seria um tipo de
molcula que realizaria um "censo" geral da populao.
Controle Microbiano
Definies
Os principais agentes fsicos que promovem o controle microbiano so: Calor, Filtrao
e Radiaes. Eventualmente, outros agentes, tais como as baixas temperaturas, dessecao,
podem ser utilizados.
CALOR - Uso disseminado desde pocas remotas, correspondendo ainda um dos
agentes fsicos mais prticos e eficientes para a esterilizao e/ou desinfeco. O calor pode
ser empregado sob duas formas: seco e mido, tendo a vantagem de apresentar, basicamente,
apenas 2 parmetros a serem controlados: tempo e temperatura.
Calor seco
Flambagem (D): processo onde o material submetido diretamente ao fogo, seja seco
ou embebido em lcool. Bastante utilizado na desinfeco de alas de vidro.
Estufa esterilizante (E: 160C/2 hs ou 180C/1 h). Amplamente utilizado para vidrarias e
outros materiais.
UHT (E): 141C/2 segundos - processo bastante utilizado para o leite e outros alimentos
lquidos.
O ar tambm pode ser filtrado, em fluxos laminares contendo filtros HEPA (High
Efficiency Particulate Air filters), que removem 99,97% de partculas de 0,3 m.
Como sua maior eficincia se d a 260 nm, que corresponde ao comprimento de onda
onde se d a maior absoro pelo DNA, a radiao UV afeta primariamente este tipo de
molcula. Sua ao principalmente decorrente da formao de dmeros de pirimidinas
(timina), efeito este que pode ser revertido por sistemas de fotorreativao (enzima de reparo
ativada pela luz) ou por sistema de reativao independente da luz (polimerase).
Por outro lado, no podem ser descartados outros efeitos deletrios do UV, uma vez
que quando a 340 nm, observa-se dano celular, sem estar primariamente relacionado s
mutaes, uma vez que neste comprimento de onda os cidos nuclicos no tm mais uma
grande capacidade de absorver este tipo de radiao.
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A radiao gama originada geralmente a partir de fontes de Co ou Ce.
Estas radiaes vm sendo amplamente utilizadas em produtos termolbeis, tais como
plsticos e alguns tipos de alimentos (frutas, vegetais, alimentos marinhos). Nos alimentos seu
uso interessante, uma vez que inativam enzimas autocatalticas que participam do processo
de degradao natural.
1) Compostos orgnicos:
2) Halognios:
3) Metais Pesados:
Foram muito usados no passado como germicidas (prata, mercrio, zinco e cobre),
sendo atualmente substitudos por compostos menos txicos. Os mais usados so compostos
orgnicos de mercrio, prata, cobre e zinco.
Nitrato de prata: usado em soluo 1%, para prevenir a oftalmia neonatorum, sendo
substitudo em vrios hospitais pela eritromicina (que protege contra Chlamydia tambm).
Temos ainda o Mercurocromo e mertiolate, usados como como preservantes de soros e
vacinas. O sulfato de cobre usado na desinfeco de guas, especialmente contra algas.
Estes atuam combinando-se com protenas, geralmente nos grupos SH, inativando-as.
4) Outros
Corantes: dividem-se em dois grupos, acridina (que interage com o DNA) e derivados
de rosanilina (Cristal violeta, verde malaquita), que atuam inibindo G+, Candida e Trichomonas.
Tem ao aparentemente ao nvel da parede celular das bactrias.
Gases esterilizantes: xido de etileno, atua pela interao com protenas, com alta
capacidade de penetrao. Como explosivo, dissolvido em misturas de 10 a 20% com CO2
ou freon. Importante a presena de umidade no ambiente e tambm temperatura.
Condies: 38C/5-8 hs ou 54C/3-4 hs, com 50% de umidade e EtO de 400 a 800
mg/litro.
Abaixo temos uma tabela, listando alguns dos principais agentes qumicos utilizados no
controle microbiano.
Antibiticos e Quimioterpicos
Introduo
Mais recentemente, outro aspecto que vem sendo cada vez mais levado em
considerao refere-se ocorrncia dos biofilmes e sua importncia na teraputica
antimicrobiana, pois o conhecimento sobre a ocorrncia de biofilmes microbianos em nosso
organismo levou a uma quebra do paradigma de tratamento das doenas infecciosas.
Certamente, para que os antibiticos possam ser empregados de forma mais eficaz, ser
necessrio um maior conhecimento acerca dos biofilmes formados naturalmente em nosso
organismo. Pois, somente a partir da elucidao da ecologia dos biofilmes naturais do homem,
teremos maiores chances de tratar de forma adequada as vrias doenas infecciosas.
Conceitos
1904 - Uso prtico do vermelho de tripan, composto ativo contra o tripanossoma que
causava a doena africana do sono.
Ehrlich & Hata: realizao de testes com compostos arsenicais, em coelhos com sfilis.
Descobriram que o composto 606, arsfenamida, era ativo => Em 1910, foi lanado o
medicamento Salvarsan (nome comercial da arsfenamida), para o tratamento da sfilis.
1927 - Na I. G. Farbenindustrie (Bayer) - G. Domagk: testava corantes e outros
compostos qumicos, quanto ao em microrganismos e toxicidade em animais.
Diferentes etapas da traduo que podem ser afetadas por agentes antimicrobianos
(Adaptado de Atlas, R.M., Principles of Microbiology, 1997)
estreptomicina e gentamicina: Liga-se subunidade ribossomal 30S, bloqueando-a e
promovendo erros na leitura do mRNA. Interferem com a formao do complexo de iniciao.
Sulfas e derivados: inibio da sntese do cido flico, pela competio com o PABA.
Resistncia microbiana
Modificao de enzima ou estrutura alvo: Por exemplo, alteraes na molcula do rRNA 23S
(no caso de resistncia eritromicina e cloranfenicol), alterao da enzima, no caso de drogas
que atuam no metabolismo, ou uso de vias metablicas alternativas.
Introduo
Como uma clula absorve poucos fragmentos, apenas uma pequena proporo de
genes podem ser transferidos.
Inicialmente, para que o processo ocorra, necessrio que a cl. encontre-se
competente, isto , deve apresentar stios de superfcie para a ligao do DNA da clula
doadora e apresentar a membrana em uma condio que permita a passagem deste DNA.
Esta propriedade , provavelmente, uma caracterstica inerente de certas linhagens e, ao que
parece, envolve o mecanismo de quorum sensing. O estabelecimento da competncia um
fenmeno controlado, envolvendo a participao de diferentes protenas (protena de ligao
ao DNA, presente na membrana, autolisinas, nucleases), sendo um processo varivel entre os
microrganismos.
A captao do DNA tambm diferente entre Gram positivos (G+) e Gram negativos
(G-): Nas G+ o DNA captado como dupla hlice e absorvido como fita simples, sendo uma
das fitas degradadas. Nas G-, o DNA absorvido como fita dupla, embora apenas uma das
fitas participe do processo de recombinao. Independente do tipo celular, a ligao do DNA
clula mais eficiente quando est como fita dupla.
Em gram negativos, a conjugao pode ser de dois tipos: entre clulas F+ e F-,
resultando em duas clulas F+ e entre clulas Hfr e F-, resultando em uma clula Hfr e outra F-
. Nos dois processos, acredita-se que o mecanismo provvel de transferncia do DNA seja pelo
crculo rolante, onde apenas uma das fitas transferida, sendo a fita complementar sintetizada
pela clula receptora. Provavelmente, o estmulo para o disparo do processo seja o contato das
clulas. Assim, a conjugao envolve a passagem de DNA de uma clula F+ para outra F-, que
torna-se ento F+ tambm.
Quando o plasmdeo encontra-se incorporado ao cromosso, a conjugao passa a
envolver a transferncia de genes cromossomais, sendo que nestes casos, a clula receptora
permanece F-, porque a regio tra a ltima a ser transferida, o que raramente ocorre na
natureza. Nestes casos, passam grandes blocos de DNA da clula Hfr para a receptora,
promovendo extensas recombinaes.
(b)
(a)
(c)
(d)
Transduo: (Lederberg & Zinder, 1952) transferncia mediada por vrus, podendo ser
generalizada (qualquer fragmento de DNA) ou especializada (determinados genes, passados
por fagos temperados).