Universidad de San Carlos de Guatemala

Facultad de Agronoma
rea de Ciencias
Subrea de Ciencias Biolgicas
Laboratorio Fisiologa Vegetal
Aux. Camilo Wolford
Estudiantes: Melvin Estuardo Gmez Sija 201516703
Pedro Elmer del Cid Gmez 201400489

Practica 3. Pigmentos celulares.

1 INTRODUCCIN.
La fotosntesis es sin duda la reaccin de mayor importancia para la planta pues le
permite transformar la energa lumnica del sol en energa qumica que es clave
para su funcionamiento y desarrollo. En dicho proceso, como se ha explicado con
anterioridad, las plantas deben absorber la luz solar formando compuestos
energticos tales como el NADPH y el ATP. Dicha absorcin la llevan a cabo
dentro de la hoja diferentes pigmentos celulares entre los que se encuentran las
clorofilas, los carotenos, entre otros.

Es importante, por lo tanto, analizar dichos pigmentos y por tal razn, la presente
practica pretende discutir algunas de las caractersticas fotoqumicas de dichos
pigmentos as como cuantificar su presencia en hojas de espinaca y de esta
manera determinar su importancia en el proceso fotosinttico de las plantas.

2 OBJETIVOS
2.1 Extraer pigmentos fotosintticos de la hoja de espinaca y determinar la Rf de cada
uno de ellos.
2.2 Analizar y discutir los resultados de la Rf y determinar su funcionalidad en la
determinacin de pigmentos celulares.
2.3 Determinar cuantitativamente la presencia de clorofilas en la hoja de espinaca.

3 REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
3.1 Pigmentos fotosintticos.
Como se ha estudiado con anterioridad, el proceso fotosinttico dentro de las
plantas est afectado por muchos factores, entre los que podemos mencionar el
CO2, la temperatura, el pH y la luz. En este sentido la luz representa uno de los
factores ms heterogneos, espacial y temporalmente, de entre los que afectan a
las plantas. (Manrique, 2003) La importancia de la luz es fundamental para llevar
a cabo el proceso fotosinttico y la energa lumnica que procede de ella es
absorbida por la planta a travs de diferentes pigmentos celulares.
 Se podra asegurar sin miedo a equivocarse que los pigmentos fotosintticos son
las base de la vida sobre el planeta Tierra. Son las sustancias capaces de captar
energa lumnica y de transformarla en energa qumica mediante la fotosntesis.
(Manrique, 2003) Las plantas contienen una gran variedad de pigmentos que le
da a la planta sus caractersticos colores. Obviamente, las flores y los frutos
contienen muchas molculas orgnicas que absorben luz. Las hojas, tallos, y
races tambin contienen muchos pigmentos, que incluyen las antocianinas,
flavonoides, flavinas, quinonas y citocromos. Sin embargo, ninguno de stos debe
ser considerado como un pigmento fotosinttico. (USDA, 2015)

La planta, por lo tanto, posee, pigmentos primarios, son los que tienen como
finalidad principal la captacin de la energa lumnica (Manrique, 2003)tales como
las clorofilas A y B y posee asimismo pigmentos accesorios cuya funcin es por
una parte ampliar el espectro de absorcin de los pigmentos primarios y por otra
de servirles como sistemas de proteccin frente a la luz excesiva (Ibd)

3.2 Pigmentos primarios.

En la gran mayora de plantas podemos encontrar los dos principales pigmentos
primarios: Clorofila A y Clorofila B. (Chl a y Chl b). La diferencia entre ambas
clorofilas es que Chl a presenta un grupo metilo (-CH3) en el permetro del anillo
tetrapirrlico, mientras que en Chl b este grupo ha sido oxidado para formar un
grupo formol (-CH=O), tambin conocido como grupo formilo. Tal diferencia
permite que las clorofilas a y b absorban luz de longitudes de onda ligeramente
diferentes dentro del espectro visible. (USDA, 2015)La siguiente figura presenta
las estructuras de la clorofila a y clorofila b as como el grupo funcional que las
diferencia:
FIGURA 1. Estructura de la clorofila a y clorofila b.

Fuente: Los pigmentos fotosintticos, Universidad Nacional de Colombia.

Es importante resaltar que se han encontrado otras clorofilas pues tambin existe una
clorofila c, la cual se puede hallar en algas pardas pero es una clorofilina a la cual le
falta la cola de fitol y los tomos de hidrogeno en las posiciones 7 y 8 en el anillo IV.
La clorofila d ha sido encontrada en las algas rojas mientras que la bacterioclorofila es
el pigmento tpico de los bacterios fototrpicos. (UNAL)

3.3 Pigmentos accesorios

La otra clase de pigmentos fotosintticos conocidos como accesorios son los
carotenoides. La mayora de las plantas contienen una gran variedad de carotenoides,
incluyendo beta-caroteno, luteina, neoxantina y violaxantina. La estructura bsica de
todas estas molculas est compuesta de una unidad ramificada repetida de cinco
carbonos. (USDA, 2015) Se dividen, a su vez, en Carotenos que son hidrocarburos
insaturados y en Xantofilas que son derivados oxigenados de los anteriores. (UNAL)

Podemos asimismo encontrar FICOCIANINAS Y FICOERITRINAS que son

pigmentos de color azul-verdoso y rojo-morado estn limitados a las cianofceas (algas
verde-azules) y rodofceas (algas rojas), al lado de la clorofila a y algunos carotenoides.
Son compuestos emparentados con las clorofilas por ser compuestos del tipo
tetrapirrol, difieren de estas en sus propiedades fsicas y qumicas (UNAL)

Figura No. 1 Representacin grfica de los pigmentos fotosintticos.

El color verde en los vegetales es debido a la
presencia de dos pigmentos estrechamente
emparentados llamados clorofila a y clorofila b.
Asociados con las clorofilas, existen tambin en los
cloroplastos dos clases de pigmentos amarillos y
amarillo-anaranjados que son las xantofilas y
carotenos.

Fuente: (blafar.blogia.com, 2007)

4 METODOLOGA
Separacin de los pigmentos Fotosintticos y Fluorescencia de la Clorofila.
Macere completamente 2g de hoja mas 7 ml de acetona.
preparar camara cromatografica agrgando 10ml de toluol.
Saque el papel antes de que llegue al borde
Observe la fluorecencia.

Determinacin cuantitativa de las clorofilas

Macerar 1g de hoja mas 4ml de acetona pura mas 20 ml de acetona.
transfiera al embudi Buchner
Agregue 30ml de acetona a la pulpa de hojas y reanudar molienda
Lave mortero y embudo con 10 a 30ml de acetona
Llene la cubeta del especto fotometro con el extracto de clorofilas

Otros pigmentos no fotosintticos.

30gr de petalos de flores azules en 100ml de H2O
En 3 tubos de ensayo coloque 5ml de extracto y determine e pH y agregar acido
acetico
Introducir una flor azul una roja y una blanca y agregar NH4OH
Repetir procedimiento con otro grupo de flores.
Completar cuadros.
cortar llemas entrocitos agrgar 3ml de HCL 1%
Preparacion de placas cromatograficas. 5gr de celulosa, 2gr de silica gel y 40ml
de agua.
Dejar una pelicula de 0.3mm de grosor.
a 2.5cm de la placa marcar una linea aplicar gotas del extracto
Revelado, solvente n-butanol
Coloque la placa en la camara por una o dos horas
5 RESULTADOS Y DISCUSIN
En la figura siguiente se muestra los desplazamientos de los pigmentos de la muestra
vegetal obtenidos en el experimento de cromatografa.
FIGURA 2. Cromatoplaca utilizada para determinar distancias de pigmentos.

10.5cm
5.7cm

2.3 cm

0.68cm

Fuente: Grupo No. 3 Laboratorio Fisiologa Vegetal FAUSAC

Color Distancia (cm) Eluente (cm) Rf Tipo de pigmento

Verde 0.68 10.5 0.06 Clorofila a
Amarillo 2.3 10.5 0.22 xantoproteina
Verde-azulado 5.7 10.5 0.54 Clorofila b

0.68 2.3
RF1= 10.5 = 0.06 RF2= 10.5 = 0.22

5.7
RF3= 10.5 = 0.54

Al romper las clulas en el mortero los pigmentos que se hallaban encerrados en los
cloroplastos dentro de ellas pasan a la acetona. En la disolucin extrada del vegetal se
tendr tantos pigmentos como bandas coloreadas aparezcan en la cromatografa. Al
observar el papel se aprecian 3 bandas que corresponden a los distintos pigmentos
fotosintticos presentes en las hojas del vegetal usado, que en orden de menor a
mayor solubilidad en acetona.

En el cuadro siguiente se presentan los valores obtenidos de Absorbancia en clorofila

de una muestra vegetal.
La transmitancia nos da una medida fsica de la relacin de intensidad incidente y
transmitida al pasar por la muestra. Mientras que la absorbancia es un concepto ms
relacionado con la muestra puesto que nos indica la cantidad de luz absorbida por la
misma.
Segn J. Val, L. Heras y E. Monje la concentracin esperada en la clorofila a es de 2.71
y se obtuvo 2.348, la esperada en la clorofila b es de 1.652 y la obtenida es de 1.654 es
las absorbancias antes mencionadas. (Val, Heras, & Monje, 1985)
Las ecuaciones que permiten el clculo de las concentraciones su finalidad es
minimizar la contribucin del resto de componentes que tienen la misma longitud de
onda, las clorofilas al tener sus espectros muy semejantes y absorber casi en las
mismas longitudes de onda no cumplen lo anterior pudiendo influir una sobre otra
La diferencia entre lo esperado y lo calculado puede estar relacionado con el error
cometido en la extraccin de la clorofila o en la lectura de las absorbancias.
6 CONCLUSIONES
6.1 Las rf de los pigmentos fotosintticos obtenidos de la hoja de espinaca son 0.06,
0.22, 0.54.
6.2 El pigmento con rf=0.0.06 es una clorofila a, el pigmento con rf=0.22 es una
xantofila y el pigmento con rf=0.54 es una clorofila B.
6.3 La clorofila total presente en la hoja de espinaca es de 4.003 g* ml -1

7 Bibliografa
blafar.blogia.com. (2007). los pigmentos vegetales. Recuperado el 25 de Octubre de
2016, de blafar.blogia.com: http://blafar.blogia.com/2007/040901-los-pigmentos-
vegetales.php
Manrique, E. (2003). Los pigmentos fotosintticos, algo ms que la captacin de luz.
Recuperado el 24 de Octubre de 2016, de revistaecosistemas.net:
http://www.revistaecosistemas.net/index.php/ecosistemas/article/viewFile/250/24
6
UNAL. (s.f.). Los pigmentos fotosntetios . Recuperado el 25 de Octubre de 2016, de
virtual.unal.edu.co:
http://www.virtual.unal.edu.co/cursos/ciencias/2000051/lecciones/cap02/02_04.ht
m
UNAM. (2006). manual de prcticas de fotosntesis . Recuperado el 2016 de Octubre
de 2016, de books.google.com.gt: Disponible en:
https://books.google.com.gt/books?id=FanXSdIC-
oIC&pg=PA32&lpg=PA32&dq=rf+de+pigmentos+fotosinteticos&source=bl&ots=y
6Gwq8Y-La&sig=RkBX1sdjpRQ0NV
USDA. (2015). Los pigmentos vegetales y la fotosntesis . Recuperado el 24 de Octubre
de 2016, de passel.unl.edu:
http://passel.unl.edu/pages/informationmodule.php?idinformationmodule=101179
7732&topicorder=4&maxto=10&minto=1
Val, J., Heras, L., & Monje, E. (1985). Nuevas ecuaciones para determinacin de
pigmentos fotosintticos en acetona, Zaragoza. Recuperado el 25 de Octubre de
2016, de digital.csic.es:
http://digital.csic.es/bitstream/10261/13836/1/ANALES_17_3-4-
Nuevas%20ecuaciones.pdf Consultado el: 27/08