UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE NICARAGUA

UNAN MANAGUA

Estudiante: Orbely yanesky Garca Urbina

Docente: Dra. Clara Mendoza

Asignatura: microbiologa

Tema: medios de cultivo

Cuestionario de microbiologa laboratorio de cultivo
Cul es el propsito de los medio de cultivos?
a) fomentar el crecimiento microbiano en forma que puedan comprarse la
caractersticas de cultivo
b) facilitar algunas reacciones bioqumicas que luego puedan ser
demostrada por la observacin directa, o bien indirectamente por la
reaccin en presencia de algunos reactivos adicionales

A que se llama medio de cultivo?

A cualquier material que presente una adecuada combinacin de nutrientes
para permitir el crecimiento o el incremento del nmero de clulas de una
poblacin microbiana.

Enumere los constituyentes bsicos de los medios de cultivos

Fuente de energa Componentes estructurales Agua
celulares
Orgnicos: Componentes principales: carbono,
carbohidratos, protenas, hidrogeno, oxigeno, nitrgeno, azufre,
polisacridos, grasas, fosforo, potasio, magnesio, calcio,
cido orgnico hierro, sodio
Inorgnico: amonio, Elementos trazas:
nitrilo, azufre Cobalto, zinc, molibdeno, cobre y
manganeso.
Luz Factores de crecimiento:
compuesto orgnico que un
microorganismo requiere
como constituyente de su material orgnico
celular, pero que no
puede sintetizarlo a partir de sus fuentes de
carbono
. Ej. aminocidos, purinas, pirimidinas y
Vitaminas.
Describe como se clasifican los medios de cultivos

estado segun su segun su

fisico naturaleza finalidad

Medios naturales o complejos Un medio de enriquecimiento

Lquidos Estn constituidos por sustancias
Usualmente se denominan caldos complejas de origen animal o
ya que contienen los nutrientes vegetal y
disueltos usualmente se complementan con
en agua. el aadido de minerales y otras
sustancias.
puede contener sustancias que
favorezcan el crecimiento
selectivo:slidos y estn
diseados para el aislamiento de
microorganismos especficos.

Slidos
Se pueden preparar a partir de
medios lquidos a los cuales se les
aaden agentes solidificantes
como agar, gelatina o slica gel.
Medios sintticos o qumicamente
definidos
Se preparan a partir de
ingredientes qumicamente puros
Medios diferenciales
No contienen sustancias
inhibidoras, es decir, permiten
el crecimiento de muchos tipos
selectivos diferenciales
A veces se combinan en un mismo
medio las caractersticas de ser
selectivo y
diferencial

Enumera las condiciones ambientales que afectan el crecimiento de los

microorganismos
1. Temperatura

Cada microorganismo tiene una temperatura ptima en la cual su crecimiento

es ms rpido; El rango de temperaturas entre las que un microorganismo
puede crecer es variable, hay microorganismos con un rango estrecho
llamados ESTENOTERMALES y se encuentran en hbitat de temperatura
relativamente constante. Los microorganismos de rangos ms amplios se
encuentran en medios ambientales donde la temperatura vara
considerablemente y stos son llamados EURITERMALES.
 2. Actividad del agua (aw)

Como los microorganismos dependen del agua para la sntesis de sus

componentes celulares, es necesario que sta se encuentre disponible en el
medio de cultivo para que los microorganismos la puedan utilizar para su
crecimiento.
Se define como la centsima parte de la humedad relativa del aire
Que est en equilibrio con ese sustrato.

3. pH

Para la mayora
De las bacterias el pH ptimo de crecimiento est entre 6,5 y 7,5; es probable
que este pH cambie como resultado del metabolismo de esos
microorganismos, el cambio de pH puede ser tan grande que eventualmente
podra inhibir el crecimiento de esos microorganismos. Para mantener un pH
relativamente constante durante el crecimiento microbiano, se le aaden
sustancias buffer a muchos medios
De cultivo.

4. Oxgeno

Une el concepto con el trminos correspondiente, segn los

requerimientos de oxigeno

a) requieren oxigeno
b) pueden crecer en presencia o ausencia de oxigeno
c) crecen e ausencia de oxigeno
d) crecen e ausencia de oxgeno, pero la presencia de tal no los
perjudica en el crecimiento
e) requieren pequeos concentraciones de oxgeno para crecer

Microaerofilicos E
Anaerobios aerotolerantes D
Anaerobios estrictos C
Aerobios facultativos B
Aerobios estrictos A
 De acuerdo al rango de temperatura a la que crecen los
microorganismos, complete las siguientes divisiones de esta
Psicrfilos Microorganismos capaces de crecer a bajas temperaturas. Existen

Mesfilos Microorganismos cuya temperatura ptima de crecimiento se encuentra

Dentro de un rango de 25 40 C.

Termfilos Microorganismos cuya temperaturas ptima es de 50 - 60 C,

Hipertermfilos con temperaturas ptimas an ms altas 80 - 121 C,

El valor ptimo de la actividad del agua vara con respecto a algunos

microorganismos, cada concepto corresponde a su trmino, segn la
forma
Pueden crecer en medios con elevadas
concentraciones de solutos
Halofilicos
facultativos

Crecen a
concentraciones de
sales capaces de
inhibir a la mayora
De las bacterias.
Halofilicos estrictos

Requieren iones Na+ para

crecer y lo hacen
ptimamente en medios a
los que
Se les ha aadido NaCl
para obtener valores de aw
Osmofilico
menores de 0,80

son aquellos que

para crecer
necesitanelevadas Osmotolerantes
concentraciones de
soluto
Cules son los rangos de temperatura

Esternotermales: son aquellas clulas que se mantienen en un hbitat de temperatura

contante

Esuritermales: son aquellas clulas que su temperatura varia considerablemente

Mencione los tres mtodos para cultivo de anaerobios

reaccin qumica, el
oxgeno disponible se
convierte en CO2, esto
ocurre si se
Utilizando agentes enciende una vela
Por remocin mecnica
reductores en el medio dentro de un recipiente
de oxgeno y
para disminuir el cerrado o utilizando
reemplazndolo por
contenido de oxgeno. jarras Gaspak, en esta
otro gas (nitrgeno);
Ej. el ltima
la reaccin del
bicarbonato de sodio y
el borohidruro de sodio
en presencia de agua

Cules son los materiales que se utilizan para el cultivo de bacterias?

a) tubos de ensayo
b) cajas o placas Petri
c) matraces de florescencia o Erlenmeyer
d) tubos de fermentacin

Explique con detalle el ciclo de crecimiento

Ciclo de crecimiento

La multiplicacin implica el aumento del nmero, pero no del tamao bacteriano. Estas, se reproducen
normalmente por fisin binaria. El primer paso es la duplicacin del CIDO DESOXIRRIBONUCLEICO.

Posteriormente, la membrana citoplasmtica y la pared celular se invaginan, separando en dos regiones

el CIDO DESOXIRRIBONUCLEICO cromosmico. Finalmente, las paredes en crecimiento se unen
formando dos clulas individuales, cada una de las cuales es esencialmente idntica a la clula parental.
Si en el laboratorio se tiene un cultivo puro bacteriano, en condiciones ptimas de desarrollo, uno puede
predecir el aumento y disminucin de la poblacin microbiana. Al hacer un recuento de las bacterias vivas
en diferentes intervalos de tiempo y trazar un grfico, podemos obtener una curva de crecimiento con
cuatro etapas o fases caractersticas: Fase de latencia, logartmica o exponencial, estacionaria y de
regresin o muerte.

Latencia: La fase de latencia dura aproximadamente 4 hrs. No hay crecimiento visible y de hecho puede
haber una reduccin en el nmero de bacterias. Es un perodo de adaptacin, en que las bacterias
tienen una gran actividad metablica, pero no se dividen.

Logartmica: Despus de 6 hrs, aproximadamente, de haber sembrado las bacterias en un medio

ptimo, las bacterias comienzan a dividirse en forma constante y mxima. El nmero de bacterias
aumenta en progresin geomtrica y la resultante es una lnea recta ascendente. Este perodo
termina ms o menos a las 12 hrs, debido a la disminucin de los nutrientes disponibles.

Estacionaria: Debido a la acumulacin de desechos metablicos y disminucin de los nutrientes, la

actividad metablica decae. Las bacterias se dividen con menor frecuencia y el nmero total de
bacterias vivas permanece constante, puesto que el nmero de muertes se equilibra con el de
multiplicacin. En la mayora de las bacterias esta fase se produce entre las 18 a 24 hrs.

Regresin: En esta fase, conocida tambin como fase de muerte, las bacterias dejan de multiplicarse
y mueren con el tiempo, debido al trmino de nutrientes, acumulacin de material de desecho y
disminucin del espacio fsico. No todas las bacterias del cultivo se encuentran en esta fase al mismo
tiempo, por lo tanto se representa como una pendiente, que no llega a 0.

Realice el grafico de fases del crecimiento bacteriano

Qu es in inocul?
Es una suspensin de microorganismos vivos que se han adaptado para
reproducirse en un medio especfico o Nmero de Grmenes infectantes que
son introducidos accidental o voluntariamente en los tejidos vivos o en medios
de cultivos especiales.
Qu es siembra?
Sembrar o inocular es introducir artificialmente una porcin de muestra
(inculo) en un medio adecuado, con el fin de iniciar un cultivo microbiano, para
su desarrollo y multiplicacin. Una vez sembrado, el medio de cultivo se incuba
a una temperatura adecuada para el crecimiento.

Cmo debe ser el procedimiento de inoculacin?

El asa de cultivo debe calentarse al rojo sobre la llama inmediatamente antes y
despus de hacer la transferencia. La flama destruye cualquier forma de vida
sobre la superficie de la aguja. Se mantiene el asa hacia abajo.

Cmo debe ser el procedimiento durante la siembra?

Durante la siembra se mantiene el tubo en la mano izquierda y se
sostiene el tapn o capuchn entre los dedos meiques y anular de la
mano derecha
no se debe nunca depositar el tapn sobre la mesa
mantener e tubo lo ms cerca posible de la flama durante la siembra
las bocas de los tubos de donde tomamos los cultivos y las de aquellos
donde van a ser transferidos deben tambien flamearse inmediatamente
antes y despus de que la aguja sea introducido y sacada
adems de destruir cualquier organismo del borde del tubo, la flama
tiende a crear corrientes de conveccin hacia fuera, decreciendo as el
riesgo de contaminacin
despus de inocular el cultivo bacteriano se conserva en un lugar
apropiado.

Cules son las tcnicas de inoculacin o de siembra?

diseminacin en placas
Estra: cruzada, en Z, simple (en ngulos rectos), masiva
Vaciado en placa
inoculacin de medios semislidos
inoculacin de medios lquidos
inoculacin de medios solidos
Explique sobre la diseminacin en placas?
En el caso de la estra cruzada el inoculo con un movimiento hacia atrs y
adelante en cada cuadrante girando la placa a 90c. El propsito de esta
tcnica consiste en diluir el inoculo en forma suficiente del agar para que sea
posible obtener colonias.

El mtodo de dilucin o vaciado en placa proporciona por lo general con un

nmero apropiados de colonias y se basa en una dilucin cuantitativa de la
muestra original en un medio slido.

En qu consiste la inoculacin de medios semislidos en

tubo?
Por picadura en forma vertical: se utiliza agar en un tubo inclinado, que se
coloc de esta forma durante su enfriamiento. Constituye un medio adecuado
para el desarrollo de bacterias, especialmente de aerobios y anaerobios
facultativo.

Cuando se inocula agar semislido, en un tubo para pruebas es importante que

el asa de inoculacin sea retirada a lo largo del mismo camino que se us para
atravesar inicialmente, se utiliza asa recta..

Cmo se observa la inoculacin de medios lquidos?

a) enturbiamiento , opacidad ms o menos densa
b) formacin de velo, pequea masa de clulas que flotan en la parte
superior del cultivo
c) sedimento, depsito de clulas que permanece en la parte inferior del
cultivo, pero que se pone nuevamente en suspensin si el tubo se
sacude suavemente.

Cmo pueden inocularse los medios lquidos?

el tubo debe inclinarse aproximadamente 30c
con un asa de inoculacin se toca la superficie interna del vidrio,
formando un ngulo agudo
se puede utilizar el asa con arillo
posteriormente se vuelve a colocar el tubo en posicin recta, as se
queda sumergida el rea de inoculacin
agitar suavemente cada tubo
 no dejar que le liquido salpique la tapa del tubo

Describa la clasificacin de inoculacin de medios solido?

a) por puncin(picadura)
b) por estra
c) por puncin y estra

En qu consiste el pico de flauta dentro de la inoculacin de

medios solidos?
a) primero se atraviesa todo el fondo del agar con el asa recta de
inoculacin.
b) posteriormente este se retira con un movimiento en S a travs del agar
que se disemina en el inoculo, se utiliza el asa recta.

En qu consiste el mtodo de siembra por estras?

La tcnica de siembra en estra es usada para aislar cepas puras en una placa
Petri a partir de un inculo o muestra con diferentes especies. La tcnica
consiste en, mediante un asa de
siembra previamente esterilizada, rayar
la superficie de cultivo de una placa Petri
de forma que en cada pasada sea
menor el nmero de clulas depositado,
las ltimas pasadas debern
depositar un nmero tan bajo de clulas
que, una vez incubadas, se formen colonias puras.

A qu se refiere con siembra por puncin?

Con una aguja se toma el material que se quiere sembrar y se lo introduce en
el tubo, con medio semislido. Introducir la
aguja hasta el fondo, formando un canal de
puncin, trayecto por el cual la retiraremos
luego. Este mtodo se utiliza para estudiar la
movilidad de las bacterias.

Medio de cultivo. Semislido

Instrumento: aguja bacteriolgica

Finalidad: Estudiar la movilidad de las bacterias

Mencione la utilidad de la siembra volumtrica

Este mtodo de siembra consiste en sembrar una muestra liquida cuyo
volumen no puede ser predeterminado, en medio de cultivo slidos o lquidos.
Por ejemplo

En que consiste siembra masiva

Cuando se desea realizar una siembra masiva se puede utilizar la esptula de
Driglaski. En este caso la gota de muestra liquida se esparce con la esptula
por toda la superficie del medio de cultivo slido imprimiendo un movimiento en
espiral. La siembra masiva tambin se puede realizar con un hisopo grueso
embebido de un cultivo lquido, procediendo a su deslizamiento sobre toda la
superficie de una placa de agar.

Principal clasificacin de Mtodos de aislamiento

Mtodo de siembra para aislamiento por agotamiento o en estra: Con el
asa estril tomamos la muestra y hacemos extensiones en la placa. Volvemos
a esterilizar el asa de siembra y extendemos parte de la extensin anterior en
otra direccin. Volvemos a esterilizar el asa de siembra y volvemos a extender
parte de la segunda extensin en otra direccin. Esterilizamos y repetimos la
operacin. Incubamos a 37 durante 24 horas y, en la primera zona, habr un
amasijo de clulas. En la segunda, parte de la primera zona estar mejor
extendida, y en la tercera y en la 4 mejor an. Si tomamos una colonia y la
ponemos sobre una placa Petri, tendremos un cultivo puro.

Mtodo de siembra para aislamiento por diluciones sucesivas: Consiste en

diluir una muestra hasta conseguir muy pocas clulas que, tras inocularse en
un medio de cultivo, generen colonias aisladas.

Aislamiento por dilucin Siembra por extensin o baado: Se extiende el

inculo uniformemente con una varilla acodada estril por la superficie del
medio de cultivo. Las clulas diseminadas sobre la superficie formarn colonias
aisladas
Cules son las pruebas bioqumicas para la identificacin de
bacterias?
Variedad de procedimientos y tcnicas que permiten obtener resultados en
menos tiempo que las pruebas diagnsticas convencionales. Existen mtodos
rpidos aplicables a la microscopa, tcnicas de identificacin bioqumicas,
pruebas de deteccin de antgenos y de anticuerpos. Incluso en las tcnicas de
diagnstico molecular existe una gradacin de celeridad, siendo algunas de
estas pruebas tan rpidas como la PCR a tiempo real.

fermentacin de carbohidratos: la fermentacin es un proceso

de xido-reduccin que ocurre en un medio ambiente anaerobio; en los
sistemas de prueba bacteriolgicas, este proceso se detecta observando
cambios de color en indicadores de PH a medida que se forman
productos cidos.

Interpretacin:
Positiva= color amarillo(acido)
Negativa= color rosa- rojizo (alcalino)

Aplicaciones:
Fermentadores de glucosa; todos los miembros de las Entero
bactericea
Fermentadores de glucosa y lactosa; echi. coli,
Fermentadores de manitol; estafilococos

prueba de citrato: determina si un microorganismo es capaz de

utilizar citrato como nica fuente de carbono para el metabolismo y
crecimiento, provocando alcalinidad

Inoculacin: se toma una colinia bien aislada de la superficie del medio

de aislamiento primario y se inocula como una estria nica en la
superficie del pico de flauta; incubacin 24-48 hr; temp 35-37c

Interpretacin:
Positivo; crecimiento aquq no exista cambio de color, azul intenso
Negativo; no se observa crecimiento, color verde

Aplicaciones: microorganismos positivos

Salmonella
 Arizona
Citrobacter
Enterobacter

Prueba de licuefaccin de gelatina: determinar la capacidad de

un organismo de producir enzimas de tipo proteoltico (gelatinasas) que
licuan la gelatina

Interpretacin:
Positivo; medio licuado ( estado lquido)
Negativo; medio solido

Aplicaciones: microorganismo positivos

Estafilococos aereus
Estafilococos epidermidis
Serratia liquefaciens
Pseudomonas Aeruginosa
especie de flavo protena

prueba de leche con tornasol: permite diferenciar organismos

sobre la base de sus mltiples metablicas en su medio lcteo como;
fermentacin lactosa, caseolisis y coagulacin de la casena. el tornasol
incorporado a la leche es un indicador del pH y de oxidacin-reduccin
que hace que el medio pueda indicar diversas funciones metablicas

Interpretacin:
Rojo rosado; cido fermentacin de lactosa
Azul purpureo: no fermentacin de lactosa, sin cambio del indicador
de pH
Azul; alcalino ausencia fermentacin de lactosa
Blanco: reduccin del tornasol a una leucobase

reaccin de la ureasa: determina la capacidad de un organimo de

desdoblar la urea formando dos molculas de amonio por la accin de la
enzima ureasa produciendo un cambio de color rojo en el medio

Interpretacin:
Positivo; rojo rosado intenso en el pico de flauta
Negativo; amarillo

Aplicaciones: se usa para diferenciar los organismos proteus

rpidamente ureasa positivos de otros miembros de los enterobacterias,
otros gneros pueden ser positivos retardos
Klebsiella

Qu es antibiograma?

Mtodo para la realizacin de antibiograma