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1.1Titulo: Anlisis Fitoqumico de la planta Medicinal Amelia patens,


Chichipince
Subtitulo: Anlisis y caracterizacin de la actividad biolgica de la planta
Medicinal Amelia patens, Chichipince y su aplicacin en el campo de la
medicina Tradicional, alternativa y complementaria

1.2 Ubicacin del programa rea y prioridad del estudio: Programa de


Salud Pblica con la prioridad de estudiar las Condicionantes y
determinantes de la salud y enfermedad, Con prioridad en el campo de
las enfermedades relacionadas con la transmisin vectorial y los
tratamientos Naturales de la Leishmaniasis cutnea

Resumen
Hamelia patens cuyo nombre popular es Chichipince, es una planta medicinal
utilizada en Guatemala y pases vecinos para tratar afecciones, principalmente
lesiones de la piel. El anlisis fitoqumico de esta planta se realizar con
pruebas de carcter cualitativo y se llevarn a cabo separaciones de
cromatografa y reveladores coloridos para los compuestos de inters del
estudio como lo son los metaboltos para determinar la presencia de
flavonoides, alcaloides. Hipotticamente queremos comprobar que los
flavonoides tienen la funcin de fitoalexinas en las pomadas y jabones a base
de la planta Hamelia patens, Chichipince. Y que por lo tanto sean los
responsables de su actividad antiparasitaria, antimictica y antibacteriana.

El cido urslico est reportado en la literatura, as como es probable que


algn alcaloide indlicos presente en la planta pudiera conferirle actividad
antiparasitaria, especialmente contra la Leishmaniasis cutnea a H. patens,
Chichipince. Con el anlisis fitoqumico de la pomada y jabones cuya base es
la planta medicinal Hamelia patens tambin podemos comprobar si las
saponinas y taninos podran ser responsables de la actividad cicatrizante que
se le atribuye a Hamelia patens, Chichipince.

Palabras clave: Medicina tradicional, alternativa y complementaria


Cromatografa, Anlisis fitoqumico metaboltos Flavonoides alcaloides
saponinas taninos.
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2.1 Introduccin
Existe gran variedad de plantas medicinales que se usan en forma tradicional
para tratar diversas enfermedades dentro de la concepcin de la medicina
alternativa, complementaria y tradicional que aplican los terapeutas
tradicionales. Muchas de estas plantas medicinales se utilizan sin un protocolo
teraputico, y sin tener un conocimiento exacto sobre sus componentes, los
cuales podran en un futuro cercano, la base para el desarrollo de importantes
drogas. Hamelia patens, conocida como Chichipince, hierba del cncer,
cohetillo, Ixcann. El Chichipince pertenece a la familia de las rubiceas, la
misma familia a la que pertenece el caf y aproximadamente 10,300 especies
ms.

En la medicina popular, tradicional, alternativa y complementaria se le ha


dado uso como analgsico, antiinflamatorio y antisptico local, pero
principalmente se le ha usado para tratar heridas cutneas.

En la literatura se han reportados estudios fitoqumico sobre H. patens, pero


faltan estudios con un anlisis total y general de la planta. Debemos estudiar
ms la relacin entre los distintos componentes qumicos y su efecto medicinal.
Algunas de las propiedades medicinales del Chichipince se deducen a partir
del conocimiento emprico y del conocimiento general de la actividad biolgica
de cada uno de los metaboltos secundarios que posee; Otras propiedades
requieren estudios ms especficos .

En este proyecto de investigacin y con la asistencia de la Facultad de


Ciencias Qumicas y Farmacia llevaremos a cabo el anlisis fitoqumico
general de la planta medicinal Hamelia patens, Chichipince, empezando por el
resultado No. 21 de la investigacin Caracterizacin clnica y Epidemiolgica
de la enfermedad Leishmaniasis cutnea en el rea Norte del Departamento
de Petn 1999 -2009 , en este resultado se determin que el 24 % de los
pacientes con leishmaniasis cutnea utilizaron Hamelia patens como
tratamiento de las lesiones cutneas de la LC..

Cuando determinemos los principales grupos de metaboltos secundarios y


con otros resultados existentes en la literatura, estaramos comprobando que
esta planta medicinal tiene una importante aplicacin en el tratamiento de
heridas de distintos tipos, incluyendo lesiones causadas por infecciones
bacterianas, micticas y parasitarias, como es el caso de las ulceraciones por
amastigotes de la Leishmaniasis cutnea.
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A continuacin se presenta la metodologa utilizada para determinar los grupos


principales de metaboltos secundarios a estudiar

2.2 Planteamiento del problema


Leishmaniasis cutnea es una enfermedad endmica en el departamento de
Peten, encontrndose gradualmente casos en los municipios y localidades
rurales y urbanas de los municipios del rea de Peten norte.

Afecta principalmente a la poblacin econmicamente activa a partir de los 10


aos de edad y en ms del 80 % al gnero masculino. Con actividad agrcola
relacionada con el corte de chate, siembra de la milpa y extraccin de copal. *

El Nivel de educacin de las personas afectadas por Leishmaniasis cutnea


permite identificar la potencialidad en las practicas, actitudes y el
conocimiento y dispuestas al cambio en la prevencin de esta enfermedad. *

El cuadro clnico prevalente tiende a la cronicidad y se manifest con lesiones


secas en su mayora, pocos casos con sintomatologa relacionada con
lesiones contaminadas o infectadas, linfoadenopata centinela fiebre y
malestar general. El rea anatmica ms atacada por el vector fue la regin de
la cabeza, miembros superiores y trax posterior del cuerpo

El tratamiento institucional con glucantime no responde al protocolo


establecido, pudindose determinar que la mayora de dosificaciones tienen
una variabilidad cuya eficiencia no est comprobada segn la especie de
leishmania existente en el rea.

Las personas reconocen el tratamiento qumico, pero han dejado la opcin de


utilizar medicamentos qumicos y naturales de segunda y tercera lnea,
siempre y cuando estn disponibles y los instruyan en el uso de estas plantas
medicinales y las propiedades y uso de los mismos. Fue posible evidenciar en
algunos casos el uso de plantas naturales como el Chichipince (Amelia
Patens)

El principal tratamiento Gluconato de Glucantime, el cual es un derivado de


antimonio que como metal pesado tiene sus consecuencias en las personas
que lo utilizan, pero es el ms conocido y disponible en forma institucional. a
pesar de que en las comunidades hay disponibilidad de plantas medicinales
mencionadas en este estudio y que ya son procesadas en pomada y jabn en
otras latitudes de Centro Amrica y que pudieran ser utilizados en el campo de
la medicina complementaria y alternativa, siempre y cuando se lleve a cabo el
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ensayo clnico abierto o no ciego en las cuatro fases de ensayos clnicos y


despus de responder a las siguiente pregunta de Investigacin:

Existen metaboltos derivados de la planta medicinal Hamelia patens,


Chichipince que acten en el parasito de la Leishmaniasis cutnea ?

2.3 Objetivos
a. Objetivo General
Caracterizar el perfil fitoqumico de la planta medicinal Hamelia patens,
Chichipince a travs de reacciones coloridas especificas, para cada
grupo de metaboltos, y separacin cromatogrfico.

b. Objetivos especficos
Aislar los metaboltos secundarios relacionados con el patrn de
efecto mdico de la planta natural Hamelia patens, Chichipince
Describir la actividad farmacolgica atribuida a la planta H. patens
en funcin de los metaboltos secundarios encontrados.
Comparar los resultados experimentales con datos tericos y
prcticos
Establecer las bases para que los estudiantes de 3r. ao de la
carrera de Medicina de la Facultad de Ciencias Mdicas en el futuro
dispongan del protocolo para identificar los metabolitos secundarios
de las plantas medicinales que puedan identificar en el contenido
curricular de medicina biolgica y qumica, coordinados por el
laboratorio Multidisciplinario de nuestra Facultad.
De acuerdo a los resultados de esta investigacin, preparar el
protocolo para el ensayo clnico en pacientes, de acuerdo a la
Normativa para la Regulacin de ensayos clnicos en Humanos.
Acuerdo Ministerial SP-14-466-2007

2.4 Justificacin
De acuerdo a los resultados de la investigacin Caracterizacin Clnica y
Epidemiolgica de la Enfermedad Leishmaniasis cutnea en el rea Norte de
Petn Guatemala. C. A. El Dr. Otto HugoVelsquez, autor de dicho estudio,
consider que es pertinente realizar este estudio que dar nuevas lneas
estratgicas de prevencin, control y seguimiento de la enfermedad, dentro del
campo de la Medicina Biolgica dentro de una nueva concepcin de la
Medicina Tradicional, Alternativa y Complementaria.
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Los resultados de este estudio podran superar el paradigma del uso casi
exclusivo, 93 % de pacientes utilizaron de Antimoniato de metilglucamina,
comercialmente llamado glucantime, y la aplicacin de calor, hasta provocar
quemaduras de 1er. Grado en la piel, o aplicar otras sustancias como laca
(pintura de uas) y lquido de batera.

S logramos demostrar que la planta medicinal Hamelia patens, Chichipince en


presentacin de pasta y jabn pueden eliminar el parasito de la Leishmaniasis
cutnea, sin lesionar los glbulos blancos de la sangre de la persona afectada
por esta enfermedad, sera relevante para la poblacin del campo, del rea
rural y periurbana de las zonas tropicales y hmedas de Guatemala y de
pases circunvecinos.

En cuanto al aporte del estudio, estaramos armonizando e integrando las tres


funciones esenciales de nuestra universidad, ya que el proyecto y su ejecucin
sern utilizados en el proceso de aprendizaje de la Metodologa de
Investigacin, y con la participacin de estudiantes de medicina de Salud
Pblica II, en grupos de 5 a 6 estudiantes, podran alcanzar la competencia
para elaborar protocolos de investigacin y ejecucin de los mismos, con la
formulacin de proyectos ejecutables dentro del Marco Lgico y con evidencia
de beneficio para las comunidades dentro de la Extensin Universitaria.

El aporte metodolgico se evidenciar con la participacin del Laboratorio


Multidisciplinario de la Facultad de Ciencias Mdicas, La Facultad de Ciencias
Qumicas y Farmacia/USAC y si el presupuesto lo permite contrataramos los
servicios de Cromatografa y ADN del Laboratorio de la Universidad Mariano
Glvez de Guatemala.

2.5 Viabilidad y factibilidad de la Investigacin


El presente estudio ser sometido a prueba piloto en cuanto a aplicar la
metodologa para la determinacin de los metaboltos y ya en el proceso de
campo ser factible realizarlo con la participacin del Laboratorio
Multidisciplinario de la Facultad de Ciencias Mdicas/USAC, La Facultad de
Ciencias Qumicas y Farmacia/USAC y si el presupuesto lo permite
contrataramos los servicios de Cromatografa del Laboratorio de la
Universidad Mariano Glvez de Guatemala.
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2.6 Marco terico (Referente bibliogrfico)


a. Hamelia patens, Familia Rubiaceae
El Chichipince, Hamelia patens es una planta medicinal conocida dentro de la
herbolaria, como planta de la familia Rubiaceae, constituyen un grupo
numeroso de dicotiledneas, que comprende alrededor de 630 gneros y
10,400 especies. H. patens pertenece al gnero Rubia y como familia comparte
los rdenes rubiales con la familia Theligonaceae, la cual contiene nicamente
un gnero con 3 especies de hierbas ()

Rubiaceae o Madder la encontramos ampliamente distribuida y concentrada en


los trpicos conviviendo con especies madorosas, en climas clidos y
templados con plantas herbceas. Dentro de esta familia encontramos Coffea
(caf) de gran importancia econmica y otros productos tiles como lo
constituyen los tintes del gnero Rubia y algunas drogas, como las quininas,
del gnero Chincona, e Ipeca de las Cephaellis ( Arvigo and Balick, 1993)
H. patens es tambin cultivado para fines ornamentales, en jardines de de
consistencia rocosa y climas templados como la Mitchella y Cirucianella. Es
necesario mencionar que H. patens, por su flor vistosa y su fragancia es
cultivada con fines ornamentales e incluyen Gardenia, Hamelia como arbusto
escarlata y Cephalantus (Arvigo and Balick, 1993) Este arbusto es frecuente en
sitios ruderales en los trpicos hmedos. Es una planta ornamental y medicinal
importante de los trpicos.

b. Taxonoma , Hamelia patens

Reino -- Plantae
Filo -- Magnoliophyta
Clase -- Magnoliopsida
Orden -- Rubiaceae
Familia -- Rubiaceae
Gnero -- Hamelia
Especie -- Hamelia patens Jacq.

Algunos autores reconocen 2 variedades basndose en la densidad de la


pubescencia (Stevens et al., 2001). Y las siguientes categoras

Reino: Plantae; Subreino: Traqueobionta (plantas vasculares);


Superdivisin: Spermatophyta (plantas con semillas); Divisin:
Magnoliophyta (plantas con flor); Clase: Magnoliopsida (dicotiledneas);
Subclase: Asteridae; Orden: Rubiales.
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c. Caracterizacin botnica y hbitat

El Chichipince, Hamelia patens recibe diferentes nombres tradicionales, segn sea


su utilidad, como planta medicinal por lo que se conoce como Chichipince,
Ixcann, (guardin del bosque), Canuto, Pata de paloma. Koray, Cohetillo, Hierba
del Cncer y Sincunken (Cceres, 1996) Mazamorra (Stevens et al., 2001), hierba
santa cimarrn, coralillo, madura pltano y en ingles es conocida como
Scarletbush, redhead.
Descripcin tcnica basada en Elas 1976; Stevens et al., 2001 y observaciones
propias (A. Hanan).

Hbito y forma de vida: Arbusto o arbolito, a veces con pelillos erguidos o


reclinados.

Tamao: De 1, 3 y hasta 7 m de alto.

Hojas: Opuestas, sobre el tallo entre 2 hojas contiguas se presentan las estpulas
que son como hojillas triangulares, diminutas. De 2 a 4 hojas brotando del mismo
nudo, elpticas y a veces ms anchas hacia el pice, de 5 a 23 cm de largo,
puntiagudas, base variable; los pecolos de tamao muy variable.

Inflorescencia: En la punta de las ramas; sus ejes estn arqueados y


generalmente se dividen en 2, sobre ellos se disponen las flores erguidas.

Flores: De color amarillo oscuro, anaranjado o rojo; el cliz acampanado y


terminado en 5 dientecillos triangulares muy pequeos; la corola largamente
tubular y terminada en 5 lbulos, a veces cubierta con pelillos que pueden ser
erguidos o reclinados.

Frutos y semillas: El fruto carnoso, globoso, de color rojo, al madurar negro, de


hasta 1.3 cm de largo. Semillas numerosas, angulosas.

Tiene flores tubulares anaranjadas rojas, agradables para colibres y mariposa


para polinizar . Su corola vara mucho en longitud, hacindola atractiva a un rango
grande de polinizadores.3 Fruto drupa pequeo, rojo negruzco.

Los colibres atrados por sus flores y otras aves se alimentan de la fruta, y
tambin el forraje atrae a los pequeos insectos se encuentran en las
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proximidades, lo que ayuda a reducir las plagas. El fruto tiene un refrescante sabor
cido, adems de ser muy apreciado por algunos pjaros, tambin son
comestibles para los seres humanos, en Mxico, se utiliza en una bebida
fermentada

Sinonimia

Duhamelia patens (Jacq.) Pers. (1805).


Hamelia erecta Jacq. (1760).
Hamelia coccinea Sw. (1788).
Hamelia sphaerocarpa Ruiz & Pav. (1799).
Duhamelia sphaerocarpa (Ruiz & Pav.) Pers. (1805).
Duhamelia odorata Wild. ex Schult. in J.J.Roemer & J.A.Schultes (1819).
Hamelia suaveolens Kunth in F.W.H.von Humboldt (1820).
Hamelia latifolia Rchb. ex DC. (1830).
Hamelia patens var. erecta (Jacq.) DC. (1830).
Hamelia patens var. quinifolia DC. (1830).
Hamelia verticillata Moc. & Sess ex DC. (1830).
Hamelia lanuginosa M.Martens & Galeotti (1844).
Hamelia nodosa M.Martens & Galeotti (1844).
Hamelia patens var. glabra Oerst. (1853).
Hamelia corymbosa Sess & Moc. (1888).
Hamelia brachystemon Wernham (1911).
Hamelia brittoniana Wernham (1911).
Hamelia patens var. axillaroides Wernham (1911).
Hamelia pedicellata Wernham (1911).
Hamelia tubiflora Wernham (1911).
Hamelia viridifolia Wernham (1911).
Hamelia intermedia Urb. & Ekman (1932).5
El Chichipince crece en los bosques secos o hmedos o abiertos a la orilla
de caminos. Se encuentra distribuido por toda la Amrica tropical
(Germosn, 1996). En Guatemala ha sido identificada la planta en los
departamentos de Petn, Alta Verapaz, Chiquimula, , Escuintla,
Huehuetenango, Izabal, Boca costa de Quetzaltenango, San Marcos,
Quiche, Retalhuleu, Suchitepquez, Santa Rosa y Zacapa (Cceres, 1996).
Investigadores estudiantes de la Universidad del Valle de Guatemala
identificaron la planta a orillas de la carretera que lleva al lago de
Amantillan, departamento de Guatemala, y sus alrededores

d. Usos medicinales atribuidos a Hamelia patens, Chichipince


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Es un arbusto ornamental importante en los trpicos del mundo. En


regiones ms templadas, se cultiva como hierba perenne. Existen
variedades mejoradas. Adems, es una importante planta medicinal. Es
antihemorrgico (contra sangrado) y ayuda en la cicatrizacin. Adems, se
le atribuyen propiedades antiinflamatorias, analgsicas (contra dolores),
febrfugas y antifngicas.

El Chichipince, H. patens es una las planta que se utiliza en la medicina


popular, tradicional en Guatemala ya que contiene una serie de compuestos
activos, pero es necesario caracterizar y tipificar los metaboltos, as como
desarrollar ensayos clnicos y cientficos para verificar su utilidad en el campo
de la medicina.

Hasta la fecha se sigue utilizando la infusin de las hojas y tallos aplicados


localmente para tratar afecciones drmicas, para lavados vaginales y baos
para aliviar el reumatismo y piernas hinchadas, El polvo de hojas de Chichipince
tostadas al comal se aplica en llagas persistentes. La extraccin del jugo de
hojas alivia piquetes de insectos e irritaciones. A esta planta se le reconocen
propiedades antisptica, astringente, para cicatrizar la piel, desinflamante,
emoliente, estomaqumica y vulneraria (Cceres, 1996)

Finalmente podemos decir que H. patens, Chichipince es utilizada para tratar


problemas de la piel, alergias,, quemaduras, picazn, cortadas, infecciones de
la piel por hongos y en el caso de los piquetes por insectos.

Segn testimonio de pacientes con lcera del chiclero, Leishmaniasis cutnea,


el Chichipince en el rea del municipio de Melchor de Mencos, Petn.
Guatemala, lo preparan en la forma siguiente: Toman 2 manojos de hojas, flor
y tallos y se llevan a ebullicin en 2 galones de agua por 10 minutos; luego
baan o sumergen el rea afectada dentro de la mezcla a temperatura tibia.
Por otra parte se acostumbra principalmente en la LC, utilizar la planta seca y
en polvo, y se roca sobre las heridas o lceras despus del bao mencionado
anteriormente y posteriormente cubrir la lesin con una gasa limpia,
(testimonio en VH, adjunto, 2007 y Arvigo y Balik, 1993). Es un arbusto
ornamental importante en los trpicos del mundo. En regiones ms templadas,
se cultiva como hierba perenne. Existen variedades mejoradas. Adems, es
una importante planta medicinal. Es antihemorrgico (contra sangrado) y ayuda
en la cicatrizacin. Adems, se le atribuyen propiedades antiinflamatorias,
analgsicas (contra dolores), febrfugas y anti fngicas.

d. Propiedades farmacolgicas atribuidas a Hamelia patens (Chichipince)


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el estudio de las propiedades farmacolgicas de las plantas medicinales y en


particular de sus principios activos. Requiere que conozcamos de manera clara
y sucinta los mtodos qumicos y farmacolgicos utilizados hoy da en esta
rea de investigacin, as como los fundamentos en que se basan. Por lo que
definamos las propiedades farmacolgicas de la Hamelia patens. Diversos
estudios demuestran que los extractos acuosos y etanlicos de hojas de la
planta, son activos contra Staphylococcus aureus y que el extracto acuoso de
la corteza es activo para Escherichia coli.

Estudios clnico-epidemiolgicos realizados en pacientes con enfermedades de


la piel demuestran que la aplicacin de H. patens en pomada, aceite, o jabn a
base de extracto de la planta produce mejora que se manifiesta en el tiempo
de cicatrizacin de heridas infectadas (Cceres, 1996). Adems de la actividad
antimicrobiana mencionada, se determin que tanto el extracto acuoso de la
hoja como del tallo de la planta son activos in vitro frente a cepas de
Salmonella typhi, serratia marcescens y Shigella flexneri. Al aplicar slo el
extracto acuoso es activo frente a cepas de Salmonella b.

El extracto alcohlico de la hoja y tallo es activo adems frente a Salmonella b,


Salmonella typhi, Shigella flexneri y Staphilococcus albus. El extracto
alcohlico de la hoja es activo, adems, frente Salmonella Newport y Serratia
marcescens.

Los extractos acetnicos de hoja y tallo no son activos ante ninguna de las
cepas estudiadas (Germosn, 1993)

Por otra parte, se ha demostrado actividad analgsica en ratones de


laboratorio, a partir del extracto metanlico de la hoja seca, en una dosis de
770mg/Kg. Por otro lado, se demostr la actividad antifungal contra
Neurospora crassa con el extracto etanlico, acuoso, acuoso y de acetona, de
tallos secos o concentraciones del 50 % (Arvigo y Balik, 1993)

e. Composicin qumica

Hamelia patens es una planta utilizada en la medicina tradicional a la que se le


asocian propiedades antimicrobianas, analgsicas y antiinflamatorias. El contenido
de compuestos qumicos y su anlisis qumico, es posible identificar 10
productos naturales: 24-metilenecicloartan-3-ol, 24-metilcicloart-24-en-3-ol, 2E-
3,7,11,15,19-pentametil-2-eicosaen-1-ol, estigmasterol, -sitosterol, cido urslico,
aricina, aricina oxindol, cido rotndico y catequina, que fueron extrados mediante
maceracin de las hojas con acetona y purificadas por cromatografa en columna.
Se utilizaron mtodos espectroscpicos y espectromtricos para dilucidar las
estructuras qumicas de estos productos naturales.
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La identificacin de los diferentes compuestos qumicos como los metaboltos de


esta especie estn qumicamente en concordancia con el de otras especies de
Hamelia y con la familia Rubiaceae, (Dra. Mara Yolanda Rios y Dra. A. Berenice
Aguilar-Guadarrama 2006)

De acuerdo a autores consultados existen diferentes formas de clasificar las


partes de las plantas y sus componentes especficos. El Dr. Armando Cceres
considera que las hojas contienen alcaloides axidlicos como la maruqina,
isomaruqina, palmirrina, pteopodina, isopteropodina, rumberina, especiofilina,
seneciofilina,, as como saponsidos, esteroides, taninos, y triterpenos,
flavonoides (apigenina, rutina), beta sitosterol y cido Urslico. La corteza contiene
taninos y la raz contiene alcaloides, flavonoides y antocianinas como malvidina y
petunidina. (Cceres A. 1996)

De acuerdo con lo determinado por Germosn, 1996 la Hamelia patens contiene


alcaloides indlicos: miriquin, isomaruquina, pamirina, rumberina y especiofilina,
pteropodina, isopteropodina; las hojas y las ramas jvenes contienen efedrina. Sus
partes areas contienen adems, acido rosmarnico y los flavonoides narirutina y
flavonona-tetrahidroxy-rutinsido. Con una seleccin fitoqumica preliminar se
mostr que la hoja presentaba, adems de alcaloides, saponsidos, esteroides y
taninos.

f. Farmacognosia

En la revisin de literatura realizada no se encontraron referencias sobre la


relacin entre la actividad farmacolgica atribuida a su composicin qumica, ni
estudios sobre la formulacin de productos fitofarmacuticos. Por no ser una
planta oficial, no se encuentra en ninguna farmacopea. (Cceres, 1996)

g. Toxicologa

Los extractos acuosos y etanlicos de hojas, corteza y raz, han mostrado


cierta toxicidad contra peces del gnero Mollinesia (Cceres, 1996). En Brasil
se report la toxicidad de la planta. La aplicacin tpica de la hoja fresca y del
zumo sobre lesiones con prdida de la solucin de continuidad de la piel de la
planta de los pies, no produce manifestaciones objetivas ni subjetivas de
toxicidad, intolerancia o efectos indeseables en pacientes bajo tratamiento
fitoteraputico. (Germosn, 1996)

De acuerdo a los trabajos de TRAMIL, la DL50 del extracto etanlicos al 95 %


de hoja por va intraperitoneal en ratas es de 1540g/Kg. Las dosis se
expresaron en mg de planta seca. La toxicidad subaguda con una
administracin cotidiana durante 10 das por va intraperitoneal, mostr
resultados negativos, sin mortalidad durante el periodo establecido; con la
mitad de la dosis letal, 30 % con un tercio de la dosis letal, 30 % de
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mortalidad; con 3 cuartos de la dosis letal, 50 % de mortalidad segn


Germosn, 1996

h. Indicaciones teraputicas

Por su consistente uso popular y su aparente falta de toxicidad , los


participantes del taller TRAMIL, recomendaron el uso de Hamelia patens en
aplicacin tpica en la cicatrizacin y desinfeccin de heridas, raspones y
llagas. Por su accin antiinflamatoria y vulneraria puede combinase con
Apacn, Calndula, Llantn, Madrecacao, Quilete y Zarzaparrilla. (Cceres A.
1996)

2.7 Hiptesis
Existen metaboltos derivados de la planta medicinal Hamelia patens,
Chichipince que actan en el proceso de cicatrizacin y atacan al parasito de
la Leishmaniasis cutnea ?

Existen alcaloides indlicos en el Chichipince, Hamelia patens, que pudieran


tener actividad antiparasitaria contra la Leishmaniasis ?

3. Seccin II
Mtodo

3.1 Diseo Experimental


a. Metodologa usada para preparar los extractos y elaboracin
de pasta y jabones de Hamelia patens, Chichipince
La preparacin de la materia prima de hojas, semilla y flor de Hamelia patens
serializa a travs de la colecta de la planta en el campo, por la maana
debindose clasificar en hojas adultas, tiernas, flor y semilla y su
deshumidificacin y desecacin en el menor tiempo posible en papel manila por 48
hrs. o en horno a 45 grados por 24 hrs triturar y pulverizar para su clasificacin y
almacenamiento previo al anlisis de laboratorio y al estudio cromatogrfico.
(Verificar la validacin y prueba piloto realizada durante los meses de agosto a
octubre 2010).

Para la Preparacin de la pomada de Chichipince, Lavar, triturar y secar las


plantas a la sombra, colocar vaselina a fuego lento o en bao de mara hasta que
se derrita. Luego se procede a agregar la planta seca y revolverla, esperar hasta
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que el olor y color de la planta, sacar del fuego y colocar en los embases de
almacenamiento previamente desinfectados. Dejar enfriar y tapar el recipiente de
la pomada.

Para elaborar el jabn se procede a lavar y desmenuzar la planta. Moler hasta


obtener una pasta. A parte cortar finamente el jabn, y agregar las plantas
molidas el agua necesaria y calculada para la cantidad de jabones requeridos,
revolver. Pasar por un pao. Este lquido debe colocarse en una olla grande que
contenga el jabn ya cortado previamente. Cocer a fuego lento, moviendo
constantemente con una paleta. La mezcla est en su punto, cuando la mezcla
tiene consistencia y color de miel; esto ocurre aproximadamente a las dos horas
de fuego. Para una caja de 50 jabones, se utilizan 800 grs. de la planta
desmenuzada y 25 tazas de agua.

Las hojas de H. patens se pueden, tambin, recolectar incluyendo sus peciolos,


se cortan a mano por la maana. Parte de las hojas se secan a la sombra sin
exposicin al sol y otra parte se seca en un horno convencional a 45 grados
durante 24 horas.

El material vegetal seco se tritura con las manos usando guantes y luego se
coloca en un recipiente de poliuretano; se cubre con metanol (aproximadamente 2
galones) y se deja en reposo durante 2 semanas. Al terminar el perodo de
maceracin se procede a concentrar el extracto metanlico con un rota vapor (foto
adjunta), a 60 grados y al vaco. El slido remanente se vuelve a extraer con el
metanol recuperado hasta que quede de color pardo-verdoso. El extracto
concentrado es el que se usa para todas las pruebas. Mientras no se usa se
mantiene en refrigeracin a cerca de 4 grados Celsius.

b. Identificacin de metaboltos secundarios


Flavonoides
Los flavonoides se identifican por medio de las siguientes pruebas cualitativas:
Cromatografa en papel (para antocianidinas):
cido actico: HCI: agua (10:3:30), Forestal
cido actico al 50%
n-butanol: cido actico: agua (4:1:5), BAW agua
Fenol saturar con agua usando como reveladores: UV, FeCl3:k3Fe (CN)6 (1:1),
vainillina, AICl3 en etanol
Cromatografa de capa fina (para furanocumarinas):
Cloroformo
Cloroformo con 1.5% etanol
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Usando reveladores: UV (KOH al 10% intensifica colores), Domnguez,1973

Cuadro 1
Pruebas coloridas para flavonoides

PRUEBA PARA REACTIVOS OBSERVACIN

Cianidinas HCl y Mg Cambio de color

Cambio a rojo es +
Leucoantocianidinas HCl y calor

Shinoda (flovanos, Color rojo, naranja o


flavanoles, flavonoles, Mg y HCl violeta es +
xontonas o
flavononas)

Flavononas y H2S04 concentrado Amarillo es +


flavonoles Rojo guinda es +

5 hidroxiflavonas cido brico al 3% en Color naranja o rojo


anhdrido actico es +

Para pruebas cualitativas (extraer antes con ter de petrleo)


(Domnguez, 1973)

Alcaloides

Cuadro 2
Pruebas coloridas y cromatogrficas para alcaloides
(Domnguez, 1973; Wagner et al, 1984)
PRUEBA REACTIVOS OBSERVACIONES

Mayer Cloruro de mercurio (II), agua, Precipitado es +


KI, HCl

Wagner Yodo, agua, KI Precipitado marrn


es +
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Draggendorf Subntrate de bismuto, HNO3, Precipitado es +


KI, agua

CHCl3: acetona: dietilamina Asperjar con


(5:4:1) Dragendorff
Xileno: metilacetona: modificado:
metanol: diatilamina Se observan
(20:20:3:1)
manchas naranjas
n-butanol: cido actico:
agua (4:1:1) que permanecen 24
Cromatografa n-butanol: cido actico: horas (+)
en capa fina agua (10:2:1)
tolueno: acetato de etilo:
dietilamina (70:20:10)

Tolueno: acetato de etilo: cido sulfrico


dietilamina concentrado y
UV365mm:
manchas acules,
Tolueno: cloroformo: etanol violeta o
(28.5:57:14.5) amarillas.
Reactivo de Van
URK, manchas
violeta

Saponinas
a. Pruebas generales

La presencia de saponinas se averigua con pruebas como la de la


espuma o la de hemlisis.

Prueba hemoltica. Las saponinas destruyen la pared celular de los


glbulos rojos, dispersando la hemoglobina. El dimetro de la zona
hemolizada es proporcional a la concentracin.

La prueba de la espuma. Si se sacude una solucin que contiene


saponinas sta producir espuma abundante y relativamente estable.

b. Pruebas coloridas
16

Cuadro 3
Coloraciones con varios reactivos cidos para saponinas
(Domnguez, 1973)

PRUEBAS REACTIVOS OBSERVACIN

Lieberman- Buchard Anhdrido actico, Color azul, verde, rojo,


(esteroles) CHCl3, H2SO4 anaranjado, que
cambian con el tiempo

Salkowski (esteroles) Cloroformo, H2SO4 Color rojo, amarillo es +

Molisch (carbohidratos) 5% naftol en etanol, Anillo violeta es +


H2SO4

Antrona (carbohidratos) H2O, antrona al 0.01% Anillo azul-verdoso es +


en H2SO4

Rosenthaler Vainillina al 1% en Colores caractersticos


(sapogeninas) etanol, HCl para esteroides y
triterpenoides

Noller (triterpenoides) Cloruro de tionilo con Cambios de color en 60


0.1% de SNCl4 minutos

Pseudosapogeninas cido actico, Coloracin azul es +


cloroformo
17

c. Pruebas cromatogrficas

Cuadro 4
Pruebas cromatogrficas para saponinas
(Wagner et al, 1984)
SISTEMA DE SOLVENTES ASPERIADORES OBSERVACIN

Reactivo de sangre Zonas blancas en


fondo rojo

CHCl3: metanol: agua Reactivo de Zonas visibles azules


(64:50:10) vainillina-cido o azul violeta, a
n-butanol: cido sulfrico veces amarillo
actico glacial: agua
(5:1:4)
CHCl3:metanol:agua
(70:30:4) Reactivo de Colores son
anisaldehdo-cido similares al anterior
sulfrico

Reactivo de SbCl3 Colores rojo-Violeta


(vis); rojo- violeta,
azul y verde (UV365)

Reactivo de vainillin- Vis: rojo-violeta;


cido fosfrico
UV365:rojizo o azul

Reactivo de Zonas azules,


Komarowsky amarillas o rojas en
vis
18

5. Quinonas

a. Reacciones coloridas

Cuadro 7
Reacciones coloridas de las quinonas
(Domnguez, 1973)

PRUEBA REACTIVOS OBSERVACIN

p-benzoquinonas y 1,4 Cianoacetato de etilo, Coloracin azul o


naftoquinonas amoniaco, 0.2% p- violeta
nitrofenilacetonitrilo y
NaOH

Quinonas que carecen o-aminotiofenol en Color rojo-azul


de OH en C-2 metanol, HCl

Hidroxiantraquinonas Calor (5min), 0.5% Diferentes colores


acetato de magnesio en
metanol

Quinas (general) Alcali concentrado y Colores rojos o


H2SO4 prpuras

Borntrager KOH al 2-5% y llevar a Fase benceno


(naftoquinonas y ebullicin (10 min), decolorada y alcalina
antraquinonas) acidular y extraer con roja es + Derivados de
benceno antrona, fase alcalina
queda amarillenta con
fluorescencia
19

Cromatografa
Se suele usar cromatografa en papel. Solventes como BAW, y revelado en UV.
Revelado con azul de leucometileno, aparecen como puntos azules.

B. Flavonoides y compuestos afines

a.Mtodo para detectar flavonoides, flavonas y glicosiflanovonas

i. Se humedecieron 7.24 g de hojas secas y pulverizadas de H. patens con HCl 2


N dentro de un baln de 100 ml. La mezcla se reflujo por 1 horas con 15 minutos
a 100 grados Celsius
ii. El extracto fri se filtr con ayuda de vaci y se hicieron cuatro extracciones con
acetato de etilo; las primeras dos con porciones de 20 ml y las ltimas con
porciones de 15 ml.
iii. El acetato de etilo se concentr hasta sequedad y el residuo slido se redisolvi
con 1-2 gotas de etanol.
iv. Luego, a la fase acuosa se le hicieron 4 extracciones con porciones de 10 mL
c/u de alcohol amlico
v. El extracto de alcohol amlico se concentr hasta secarse y el residuo se disolvi
en unas cuantas gotas de cido clorhdrico al 1% en metanol.
vi. Las alcuotas se analizan por cromatografa en una dimensin en cinco
solventes: Forestal, cido actico al 50% BAW, fenol y agua
vii. Se hace el mismo procedimiento para un control (consistente en flores coloridas)
viii. Para revelar los cromatogramas se usaron los siguientes reactivos:
Cloruro de Aluminio (Touchstone and Dobbins, 1983) Reactivo: preparar
una solucin al 1% de cloruro de aluminio en etanol absoluto.
Procedimiento: asperje la solucin y vea la placa bajo luz UV de onda
larga. Resultados esperados: los flavonoides se ven como puntos amarillo
fluorescente.
Cloruro Frrico ferricianuro de potasio (Domnguez, 1973)Reactivo:
solucin (I) cloruro frrico al 0.3% en agua
Solucin (II) ferricianuro de potasio al 0.3% en agua
Prepare una mezcla 1:1 de (I)II) inmediatamente antes de usar

Procedimiento: el papel se imerge en el disolvente; luego se imerge en cido


clorhdrico diluido (0.2N) y finalmente en agua; se deja secar.
20

Resultados esperados: Reactivo indica la presencia de fenoles en general

Fast Blue (FBS) (Wagner, et al. 1984)


Reactivo: disuelva 0.5g de sal fast bue B en 100 mL de agua.
Procedimiento: La placa se asperja con 6-8 mL de la solucin, se deja
secar y se inspecciona en visible. Se puede asperjar nuevamente con
NaOH 0.1M para intensificar los colores.
Resultados: para la deteccin de principios amargos de botones y
compuestos fenlicos en general. Vainillina cido clorhdrico (Domnguez,
1973)
Reactivos: solucin (I) vainillina al 10% en etanol
Solucin (II) cido clorhdrico concentrado, se mezclan las soluciones
(I):(II) 2:1 inmediatamente antes de usarse
Procedimiento: El papel se inmerge brevemente en la mezcla y se seca.
Debe anotarse el tiempo que tarden en aparecer las manchas. El papel
se puede calentar a 100 grados Celsius.
Resultados: Los flavandioles y catequinas aparecen como puntos de color
rosa

b. Mtodo para detectar flavonoles


i. Se prepara un hidrolizado en la misma manera que en el mtodo
anterior. La solucin se filtr y dej enfriar.
ii. El hidrolizado se extrajo con dos proporciones de 15 mL y con una de
20mL de ter dietlico. Se form una gelatina, probablemente muclagos
de las hojas.
iii. LA solucin etrea se concentra y luego el concentrado se analiza por
cromatografa en capa fina con slica gel como fase estacionaria. Se
usan dos sistemas de solventes: cloroformo puro y etanol al 1.5% en
cloroformo.
iv. Los reveladores que se usan para los cromatogramas son los
siguientes:
a. 1 g de vainillina disuelto en 10 mL de HCL concentrado.
b. Vainillina al 10% en etanol y cido sulfrico concentrado (2:1)

Mtodo para detectar antocianidinas

i. A un mililitro de extracto metanlico concentrado de H. Patens se le


extrae con 15 mL de ter de petrleo cada una.
ii. La fase metanlico se disolvi en 30 mL de metanol grado industrial y se
filtra la solucin.
iii. Se usan 7 tubos de ensayo y en cada uno se colocan 2 mL de filtrado.
21

iv. El tubo 1 se usa como control


v. Los otros 6 tubos se usan para hacer las siguientes pruebas:

Hidrxido de sodio 2M (Harborne, 1984)


Reactivo: hidrxido de sodio (NaOH) 2M
Procedimiento: se agrega la solucin gota a gota en un tubo de ensayo que
contenga el flavonoide de inters.
las antocianinas cambian a un color azul-verdoso que se desvanece con el
tiempo. Las betacianinas cambian a un color amarillo

Prueba de Shinoda (Domnguez 1973; Robinsn, 1980)


Reactivo: Magnesio y cido clorhdrico concentrado
Procedimiento: a un extracto alcohlico incoloro o ligeramente amarillo se le
agrega un trocito de magnesio y unas pocas gotas de cido clorhdrico
concentrado si la solucin produce colores rojos, es seal de la presencia
de flavonoles, flavanonas, flavanonoles y xantonas. Las chalconas y
auronas dan colores rojos inmediatamente al agregar el cido. Los colores
verdes o azules son caractersticas de las flavanonas y flavononoles. Las 4-
fenilcumarinas forman soluciones inicialmente verdes, que cambian a rojo.

Reactivo de Dimroth (Domnguez, 1973)


Reactivo: cido brico al 3% en anhdrido actico
Resultados: Las 5-hidroxiflavonas dan soluciones naranja o rojas

cido Clorhdrico (Domnguez, 1973)


Reactivo: cido clorhdrico 2N
Procedimiento: se hierve el material vegetal con cido clorhdrico
Resultados: las leucoantocianidinas dan un color rojo y las catequinas dan
un color caf amarillento. Las antocianidinas que se forman durante la
hidrlisis se pueden extraer con alcohol amlico y se pueden identificar por
cromatografa en papel.

Prueba de cianidinas
Reactivo: unas gotas de HCl concentrado y magnesio; luego octanol
Procedimiento: se agregan unas gotas de HCl y magnesio a la solucin. En
caso que aparezca un color definido despus de 10 minutos se agrega 1
mL de octanol a la solucin, se agita y se deja que separen las capas.
Observa el color de cada capa.

cido Sulfrico
Reactivo: cido sulfrico concentrado
Resultados esperados: las flavononas y flavononoles dan colores amarillos;
las flavononas dan un color anaranjado o guinda. Las chalconas dan
coloraciones rojo guinda.
22

3. Alcaloides

Se toma una porcin no determinada de extracto metanlico de H. patens,


se filtr y luego se concentr.
Se agregan 10mL de HCl 12N y se filtra la solucin por gravedad en
embudo de vidrio con cuello largo (proceso tom 24 horas).
Con una pipeta Pasteur se colocaron unas cuantas gotas del filtrado en tres
tubos de ensayo distintos. Se prepar un control positivo con papaverina
disuelta en cido actico (se coloc un poco de esta solucin en otros tres
tubos de ensayo distintos).
Se realizan las siguientes pruebas cualitativas en cada tubo de ensayo:

o Prueba Mayer
Reactivo: a) 1.36 g de MgCl2 en 60 mL de agua
b) 5 g de Kl en 10mL de agua

Procedimiento: se mezclan las soluciones de a) y b) y se afora a 100mL.


Este reactivo se debe agregar a soluciones aciduladas con HCl (si las
soluciones contienen cido actico o etanol se disuelve el precipitado). A la
muestra se le agregan 3 gotas de reactivo. Se debe usar papaverina como
control. Se espera que los alcaloides del tipo de papaverina formen un
precipitado.

o Prueba de Wagner
Reactivo: disolver 1.27 g de yodo re sublimado y 2 g de Kl en 20 mL de
agua; aforar a 100 mL
Procedimiento: agregar unas gotas del reactivo a la muestra
Resultados: si hay alcaloides presentes se forma un precipitado marrn.

o Prueba de Dragendorff
Reactivo: Disolver 8 g de subnitrato de bismuto en 20mL de cido ntrico al
30% y 27.2 g de Kl en 50mL de agua. Mezclar y dejar reposar por un da.
Luego aforar a 100mL
Procedimiento: se agregan unas gotas del reactivo a la muestra
Resultados: se observar un precipitado

Se realizar una prueba cromatogrfica en capa fina con slica gel como
fase estacionaria. Como fases mviles se us: cloroformo (5): acetona(4):
dietilamina(1); xileno(20):metuiacetona(2):metanol(3):dietilamina(1); n-
butano(4):cido actico(1); y n-butanol(10)cido actico(2):agua(1).
23

La deteccin de los cromatogramas permitir observar, primero las placas


con luz UV y luego asperjndolas con reactivo de Dragendorff modificado:
o Prueba de Dragendorff modificada
Reactivo: a) Disolver 0.85 g de subnitrato de bismuto en una mezcla de
10mL de cido actico y 40mL de agua.
b) Disolver 8 g de yoduro de potasio en 20mL de agua
Procedimiento: antes de usar el reactivo se mezclan 5mL de cada solucin
y se aaden 30mL de cido actico y luego 80mL de agua.
Resultados: si aparecen manchas naranjas o rojas que duran ms de 24
horas la prueba es positiva.

4. Taninos y polifenoles
Se har un extracto del material vegetal en metanol grado industrial y se
tomaron 10mL de este para hacer esta prueba.
El extracto metanlico se dividi en dos tubos.
A una parte se le agreg sal (NaCl) y a la otra se le agreg gelatina
comercial incolora al 1% en agua.
El procedimiento anterior se repite con polvo verdoso que se forma en el
fondo del beaker hasta abajo del extracto metanlico antes de pasarlo por
el rotavapor.
Se evapora el equivalente a 10g del extracto metanlico, se seca en una
cpsula de porcelana y se le agrega 25mL de agua destilada, se calienta y
se observa si se disuelve.
Se deja que llegue a temperatura ambiente y se le agregan 4 gotas de
cloruro de sodio al 10% para formar el precipitado.
Esto se divide en cuatro tubos:
1. 4 gotas de gelatina al 1%
2. 4 gotas de reactivo de sal y gelatina (1% gelatina y 10% sal)
3. 4 gotas de cloruro frrico
4. 4 gotas de solucin salina al 10%

5. Esteroles

Se evaporan 10mL de extracto metanlico de H. patens en una cpsula de


porcelana.
Despus de enfriar extraer el slido con 20 porciones de 5mL cada una de
bencina (ter de petrleo). Luego se hacer lavados con porciones de 10mL
bencina hasta que el extracto etreo sea incoloro.
Al slido en la cpsula se le hace una extraccin con 10mL de benceno y el
extracto se espera que se seque con sulfato de magnesio. Se filtra el
extracto seco y la solucin se reparte en tres tubos de ensayo.
Como control se usa una solucin de ergostereol en benceno; los otros dos
tubos se usan para las siguientes pruebas:

o Prueba de Lieberman-Burchard
24

Reactivo: anhdrico actico y cido sulfrico.


Procedimiento: a la muestra se le agregan 3 gotas de anhdrido actico y
se mezcla suavemente; luego se agrega 1 gota de cido sulfrico
concentrado.
Resultados: se observan cambios de color durante 1 hora. Si el color final
es rojo o rosado la prueba es positiva.

o Prueba de Salkowski
Reactivo: cido sulfrico
Procedimiento: se agrega el cido sulfrico lentamente a manera de
formar una interfase.
Resultados esperados: se observan los cambios de color en la interfase.
Un color cereza indica una prueba positiva; si no se forma el color
inmediatamente, se mezcla la solucin y se espera una hora.

5. Deoxiazcares

a. Prueba del anillo


Se toma 10mL del extracto metanlico en una cpsula y se secaron encima de
una estufa.
Se hacen 5 lavados con 10mL de benzina de petrleo y luego se evapor para
eliminar el ter.
Se le agrega 3mL de reactivo de cloruro frrico (1 gotas cloruro frrico
saturado en 10mL de cido actico glacial).
Se agita y se transfiri a un tubo de ensayo.
Sosteniendo el tubo a 45 grados se le agregaron gotas de cido sulfrico por la
pared del tubo.

b. Tcnicas de cromatografa
Se toma 1 g del extracto metanlico y se extrajo bafo reflujo durante 20
minutos con 20mL de etanol al 50% junto con 10mL de solucin cido actico.
Se hace una extraccin con tres porciones de 15mL de diclorometano, con
alutacin suave para evitar emulsiones.
Las fases inferiores no se filtraron sobre sulfato anhidro, sino que nicamente
se evapora a sequedad, dentro de la campana.
El residuo se disuelve en 10mL de una solucin de diclorometano: etanol (1:1).
Esta solucin es la que se utiliza para realizar las cromatografas de capa fina.

o Solventes de la cromatografa
Acetato de etilo: piridina: agua (5:4:1)
Acetato de etilo: metanol: agua (16:1:1)
Acetato de etilo: metanol: agua (81:11:8)
Acetato de etilo: metanol: agua (81:11:4:8)
Cloroformo: metanol: agua (65:35:10)

25

Asperjadores
o Reactivo de Kedde (cido 3,5 dinitrobenzico al 2% en metanol + KOH
al 5.7% en agua)
o Cloruro de antimonio (III) al 20% en cloroformo
o Reactivo de cido sulfrico (5% en etanol)
o Reactivo de cido sulfrico (10% en etanol)

8. Saponinas y sapogeninas

Para identificar saponinas en las hojas de H. patens se usa la prueba de la


hemlisis en agar de sangre de cordero. En la caja petri con agar sangre se
perforaron dos pozos de 1cm de dimetro, uno para el extracto metanlico
concentrado de H. patens y otro para el control (solucin al 0.1% p/v de
saponinas purificadas marca Merck).
Los pozos se perforan usando un tubo de vidrio que tena unido a un extremo
una conexin al vaci. Antes de hacer los pozos se calent el extremo libre de
la varilla; luego se presion la superficie de agar y se conect el vaco para
retirar el bocado. Los pozos se sellaron con una varilla de vidrio caliente para
darle uniformidad a sus paredes.
Se coloca la muestra y el control casi simultneamente. Los resultados se
observaron a las 2 horas, 24 horas y 72 horas.

9. Quinonas

Se mezclan 5mL de extracto metanlico concentrado de H. patens con 10mL


de KOH al 5%.
La solucin se deja hervir por 10 minutos en un baln de 50mL sin reflujo.
Despus de enfriar, se acidula la mezcla con 1.5mL de HCl concentrado.
La solucin cida se extrae con 5 porciones de 10mL c/una de benceno.
A 30mL de la solucin bencnica se le agregan 20mL de KOH al 5%
Se observ un cambio de color en la fase acuosa y en la orgnica (si la fase
orgnica se decolora y la acuosa se torna roja hay presencia de
naftoquinonas).
A la fase orgnica se le agrega un poco de perxido de hidrgeno concentrado
y se espera observar un cambio de color (si la solucin se torna roja hay
presencia de antraquinonas).

A partir de un lote 50 envases de pomada y otro lote de 50 jabones de


Chichipince, Hamelia Patens, vamos a obtener una muestra representativa, y a
partir del extracto obtenido (50 a 60 grs.) estudiaremos y determinaremos los
metaboltos secundarios que contengan estas presentaciones de la planta.

Dentro del proceso de clasificacin y homogenizacin de la pasta y el jabn sern


preparados hasta obtener el extracto til dentro del proceso de codificacin de la
muestra diferenciada y clasificada para los registros de laboratorio.
26

Para la identificacin y aislamiento de los metaboltos secundarios se utilizarn


cuadros referenciales que identifiquen la estructura de los compuestos
determinados a travs del anlisis de datos espectroscpicos y espectromtricos
respectivamente.

3.2 Anlisis de la Informacin


A partir de un lote 50 envases de pomada y otro lote de 50 jabones de
Chichipince, Hamelia Patens, vamos a obtener una muestra representativa, y a
partir del extracto obtenido (50 a 60 grs.) estudiaremos y determinaremos los
metaboltos secundarios que contengan estas presentaciones de la planta.

Dentro del proceso de clasificacin y homogenizacin de la pasta y el jabn sern


preparados hasta obtener el extracto til dentro del proceso de codificacin de la
muestra diferenciada y clasificada para los registros de laboratorio.

Para la identificacin y aislamiento de los metaboltos secundarios se utilizarn


cuadros referenciales que identifiquen la estructura de los compuestos
determinados a travs del anlisis de datos espectroscpicos y espectromtricos
respectivamente. (ver metodologa).

Para el procesamiento de las muestras y la interpretacin de los resultados a


travs del Laboratorio Unificado de la Facultad de Ciencias Mdicas/USAC ser
necesario presentar la informacin y los resultados del anlisis en cuadros de
cotejo que contenga la siguiente clasificacin de los componentes qumicos
obtenidos y cualificados:

Grupo Fracciones Sistema eluyente Constituyentes

Plan de Tabulacin y Anlisis

Se creara un instrumento de recoleccin de datos, y se utilizar como para el


procesamiento de datos el programa EPIINFO y como elementos de anlisis se
tomarn los criterios siguientes: Que sean resultados representativos sujetos a
criterios de estadstica inferenciales y a medidas de tendencia central, y
dispersin con sus respectivas presentaciones en grafitablas. Finalmente Se
elaborar el informe final y se entregar a la Direccin General de Investigacin de
la USAC para su calificacin y su respectiva presentacin.
27

4. Seccin III: Administracin


4.1 Recursos Humanos

Md. Infieri Manuel Fuentes

Md. Infieri ?

Md. Infieri ?

Md. Infieri ?

Md. Infieri ?

Coordinador del proyecto: Otto Hugo Velsquez Recinos Ms. Mph

Atribuciones y responsabilidades: elaborar y presentar el protocolo a DIGI.

En los tiempos definidos y en las condiciones requeridas en la convocatoria.

Establecer los vnculos necesarios y arribar a acuerdos con el Laboratorio


Multidisciplinario de la Facultad de Medicina/USAC (Dra. Patricia Velez y con la
Facultad de Ciencias Qumicas y Farmacia (Dr. Arana, Dr. Oscar Manuel Cobar
Pinto)

4.2 Plan de trabajo

Manifiesto que estoy en la disposicin de ejecutar este proyecto durante 6 meses


calendario, por lo que planteo el siguiente plan de trabajo:

Coordinar con las instituciones involucradas en el proyecto durante el presente


ao 20010

Llevar a cabo el ensayo para su validacin como prueba piloto, utilizando el


material necesario de la planta medicinal Hamelia patens, elaborar pasta y
jabn en su localidad de practica del Ejercicio Profesional Supervisado ***y en
su defecto estara recolectando la planta en el municipio de Melchor de Mencos,
Petn hasta acumular 800 g de las hojas secas de H. patens y lograr extraer
exhaustivamente con acetona durante tres das (3L x 3). El disolvente de
maceracin ser recuperado a presin reducida con ayuda de un evaporador
rotatorio para producir 60 gramos de extracto
28

1. Aislamiento de los metaboltos secundarios y Identificacin de


los constituyentes qumicos

2. Evaluacin de resultados validados en esta prueba piloto


2.3 Cronograma de Grant

ACTIVIDADADES 20010 2011/02 2011/03 2011/04 2011/05 2011/06 2011/07


Aos/meses

Presentacin
del proyecto a
DIGI
Reuniones de
coordinacin
con
instituciones
participantes

Prueba piloto
Estandarizacin
metodolgica

Recolecta y
extraccin de
material a
utilizar
Aislamiento de Prueba
los metaboltos piloto
secundarios e
Identificacin de
los
constituyentes
qumicos de la
planta Amelia
patens

Recoleccin y
anlisis de
resultados
29

Evaluacin de
resultados y
preparacin de
informe final

Resultados esperados

Identificacin de fracciones qumicas obtenidas del proceso cromatogrfico del


extracto de H. patens, (Chichipince) de la mezcla de disolventes utilizados para su
purificacin, las fracciones reunidas en cada grupo, la identidad de sus
constituyentes qumicos, la cantidad obtenida de cada uno de ellos y su
rendimiento respecto al peso seco del extracto.

A partir de las pastas y jabones de H. patens esperamos perfilar los productos


naturales como metaboltos secundarios: alcaloides, flavonoides, esteroles.
Esperamos aportar nuevas perspectivas en el conocimiento sobre la composicin
qumica de esta planta de uso popular en el tratamiento de la enfermedad
Leishmaniasis cutnea. Los resultados que obtengamos sern comparativos con
otros perfiles fitoqumico realizados, pero con mayor nfasis en el tratamiento del
parsito (amastigotes) relacionado con el cido urlico.

5.2 Impacto: Este estudio experimental en el campo de la fitoqumica contribuir


a solucionar y rescatar el tratamiento tpico de la Leishmaniasis cutnea,
principalmente por la especie Mexicana; y abrir las puertas para llevar a cabo los
ensayos abiertos no ciegos con pacientes con esta enfermedad. Adems limitar
el dao colateral y costos del tratamiento con Glucantime (Antimoniato de
metilglucamina)

5.3 Difusin y publicacin: Adems de publicar los resultados en la revista


resumen de Investigaciones 2011, en el rea Tecnolgica de la Direccin General
de Investigacin, ser presentado el estudio para su discusin en los foros
relacionados, al MSPAS, en Las reas de Salud de Peten.

5.4 Vinculacin: La investigacin ser incorporada al sistema de Centros de


Informacin de las Universidades, colocado en las plataformas disponibles para su
difusin.

5.5 Formacin y aporte a la docencia: Se editar el DVD con los vnculos


respectivos, que contenga adems del proyecto y el Informe final, las referencias
bibliogrficas, otros estudios relacionados y diarios reflexivos, grabaciones, video
Type y grabaciones en medios como la TV/USAC Radio Universidad.
30

El estudio, la metodologa y el conocimiento compartido con otras instancias ser


aplicado e integrado dentro del proceso de las tres funciones esenciales de la
Universidad de San Carlos de Guatemala:

1. Docencia 2. Investigacin y 3. Extensin.

5.6 Coherencia del estudio

Anlisis y caracterizacin de la actividad biolgica de la planta Medicinal Amelia


patens, Chichipince y su aplicacin en el campo de la medicina Tradicional,
alternativa y complementaria

Caracterizar el perfil fitoqumico de la planta medicinal Hamelia patens,


Chichipince a travs de reacciones colorimetricas especificas, para cada grupo de
metaboltos, y separacin cromatogrfico.
Aislar los metaboltos secundarios relacionados con el patrn de efecto mdico de
la planta natural Hamelia patens, Chichipince referido en la literatura mdica

Describir la actividad farmacolgica atribuida a la planta H. patens en funcin de


los metaboltos secundarios identificados en las muestras procesadas. Los
metaboltos secundarios que encontremos podrn ser comparados con resultados
experimentales generados en otros estudios prcticos y tericos referidos en la
literatura
Los resultados de esta investigacin, servirn de base en la preparacin del
protocolo para el estudio de ensayo clnico en pacientes, de acuerdo a la
Normativa para la Regulacin de ensayos clnicos en Humanos. Acuerdo
Ministerial SP-14-466-2007.

Titulo: Anlisis Fitoqumico de la planta Medicinal Hamelia patens, Chichipince


Subtitulo: Anlisis y caracterizacin de la actividad biolgica de la planta
Medicinal Amelia patens, Chichipince y su aplicacin en el campo de la medicina
Tradicional, alternativa y complementaria
Objetivos Metodologa Resultados

Caracterizar el perfil A partir de un lote 50 Identificacin de fracciones


fitoqumico de la planta envases de pomada y qumicas obtenidas del
medicinal Hamelia otro lote de 50 proceso cromatogrfico del
patens, Chichipince a jabones de extracto de H. patens,
travs de reacciones Chichipince, Hamelia (Chichipince) de la mezcla
coloridas especificas, Patens, vamos a de disolventes utilizados
para cada grupo de obtener una muestra para su purificacin, las
31

metaboltos, y representativa, y a fracciones reunidas en


separacin partir del extracto cada grupo, la identidad de
cromatogrfico. obtenido (50 a 60 grs.) sus constituyentes
Aislar los metaboltos estudiaremos y qumicos, la cantidad
secundarios determinaremos los obtenida de cada uno de
relacionados con el metaboltos ellos y su rendimiento
patrn de efecto mdico secundarios que respecto al peso seco del
de la planta natural contengan estas extracto.
Hamelia patens, presentaciones de la
Chichipince referido en planta. Dentro del A partir de las pastas y
la literatura mdica proceso de jabones de H. patens
clasificacin y esperamos perfilar los
homogenizacin de la productos naturales como
pasta y el jabn sern metaboltos secundarios:
preparados hasta alcaloides, flavonoides,
obtener el extracto til esteroles. Esperamos
dentro del proceso de aportar nuevas
codificacin de la perspectivas en el
muestra diferenciada y conocimiento sobre la
clasificada para los composicin qumica de
registros de esta planta de uso popular
laboratorio. Para la en el tratamiento de la
identificacin y enfermedad Leishmaniasis
aislamiento de los cutnea. Los resultados
metaboltos que obtengamos sern
secundarios se comparativos con otros
utilizarn cuadros perfiles fitoqumico
referenciales que realizados, pero con mayor
identifiquen la nfasis en el tratamiento
estructura de los del parsito (amastigotes)
compuestos relacionado con el cido
determinados a travs urlico.
del anlisis de datos
espectroscpicos y
espectromtricos
respectivamente.Aislar
los metaboltos
secundarios
relacionados con el
patrn de efecto
32

mdico de la planta
natural Hamelia
patens, Chichipince
referido en la literatura

5.7 Referencias y Bibliografa


1. Velsquez O. Caracterizacin Clnica y Epidemiolgica de la
Enfermedad Leishmaniosis cutnea en el rea Norte del Petn.
Guatemala. C. A. Facultad de Ciencias Mdicas/USAC 2009.
1. Meja F., Mills K., Monteros. Anlisis fitoqumico de Hamelia patens.
Universidad
del Valle de Guatemala, Facultad de Ciencias y Humanidades Depto. De
Qumica. 1999

2. Mrquez C, Lara F, Esquivel R, Mata R. Plantas Medicinales de Mxico II.


Composicin, usos y actividad biolgica. Mxico DF: Universidad Autnoma
de Mxico;1999.
3. Yasunaka K , Abe F, Nagayama A, Okabe H, Lozada-Prez L, Lpez-
Villafranco E, Estrada E, et al. Antibacterial activity of crude extracts from
Mexican medicinal plants and purified coumarins and xanthones. J
Ethnopharmacol. 2005;97:293-9.
4. Chaudhuri PK , Thakur RS. Hamelia patens: a new source of ephedrine.
Planta Medica. 1991;57:199-200.
5. Aquino R, Ciavatta ML, De Simone F, Pizza C. A flavanone glycoside from
Hamelia patens. Phytochemistry. 1990;29:2358-60.
6. Borges J, Manresa MT, Martn-Ramn JL, Pascual C, Rumbero A. Two new
oxindole alkaloids isolated from Hamelia patens Jacq. Tetrahedron Lett.
1979;34:3197-200.
7. Borges J, Manresa MT, Martn JL, Rodrguez F, Vzquez P, Joseph-Nathan
P. Study of oxindole alkaloids from Hamelia patens Jacq. by carbon-13
NMR. An Quim Ser C. 1982;78:126-8.
8. Arias-Adams A, Lee EF, Mabry TJ. HPLC study of oxindole alkaloids from
Hamelia patens. Rev Latinoamer Qum. 1989;20:71-2.
9. Martnez JA, Durand E, Viamontes AJ, Montero O, Forte A, Moya AD.
Alkaloids of Hamelia patens growing in Cuba. Rev Cubana Quim.
1996;8:75-9.
10. Tiwari KP, Rathore YK, Tripathi RD. Flavonoids from flowers of Hamellia
patens. J Indian Chem Soc. 1978; 55:622-4.
33

5.8 ANEXOS

PRENSA CIENTFICA
Encuentro Cientifico ao 2010 Facultad de Ciencias Mdicas USAC

INVESTIGACIN, DOCENCIA
Y SERVICIO EN GUATEMALA
La importancia de la recoleccin de datos en la investigacin cientfica
SEGURIDAD ENFERMEDADES
ALIMENTARIA TRANSMTIDAS POR
VECTORES

C0NTROL
MATERNO

ESTRS EN
ESTUDIANTES Y

Amelia Patens
PROFESORES

ENFERMEDADES

(Chicipince)
RESPIRATORIAS\
ROTAVIRUS

MEDICION CLINICA NO ES IGUAL A


MEDICION EN INVESTIGACION CIENTIFICA f

Trabajo de campo realizado para en la preparacin de la prueba piloto

1. Recoleccin de materia prima en condiciones de campo en el Municipio de


Sonsonate, El Salvador C. A. marzo y agosto 2010 (1 kilo de hojas. 400 grs. de flor y
semilla ramas no cuantificadas ni pesadas, solamente resacadas pero, no trituradas, lo
cual est pendiente.
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3. Deshumidificar la planta y desecamiento de las partes de la planta hasta lograr triturar y


concentrar ms de 1.5 kilos de hoja, y 400 gramos de la flor y semilla.
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