Quim. Nova, Vol. 29, No.

1, 113-123, 2006

ESTRESSE OXIDATIVO: RELAO ENTRE GERAO DE ESPCIES REATIVAS E DEFESA DO ORGANISMO

Divulgao
Andr L. B. S. Barreiros e Jorge M. David*
Instituto de Qumica, Universidade Federal da Bahia, 40170-290 Salvador-BA
Juceni P. David
Faculdade de Farmcia, Universidade Federal da Bahia, 40170-290 Salvador-BA

Recebido em 1/7/04; aceito em 18/5/05; publicado na web em 24/8/05

OXIDATIVE STRESS: RELATIONS BETWEEN THE FORMATION OF REACTIVE SPECIES AND THE ORGANISMS
DEFENSE. This work describes the mechanism of action of some reactive oxygen species (ROS) and reactive nitrogen species
(RNS) in the oxidative stress of the human body, and their consequences on damage to DNA, RNA, proteins and lipids. It also
illustrates the defense system of our organism against these ROS and RNS species. The action of nonenzymatic protection systems
is reported, with emphasis on micromolecules like Q10 coenzyme, vitamin C, -tocopherol, carotenoids and flavonoids. The
importance of flavonoids is also emphasized, and their body protection mechanism is detailed.

Keywords: oxidative stress; antioxidants; reactive species.

INTRODUO aplicao na indstria, para a proteo de cosmticos, frmacos e

Atualmente existe um grande interesse no estudo dos anti-
oxidantes devido, principalmente, s descobertas sobre o efeito dos
radicais livres no organismo. A oxidao parte fundamental da
vida aerbica e do nosso metabolismo e, assim, os radicais livres
so produzidos naturalmente ou por alguma disfuno biolgica.
Esses radicais livres cujo eltron desemparelhado encontra-se
centrado nos tomos de oxignio ou nitrognio so denominados
ERO ou ERN1-4. No organismo, encontram-se envolvidos na pro-
duo de energia, fagocitose, regulao do crescimento celular, si-
nalizao intercelular e sntese de substncias biolgicas impor-
tantes. No entanto, seu excesso apresenta efeitos prejudiciais, tais
como a peroxidao dos lipdios de membrana e agresso s prote-
nas dos tecidos e das membranas, s enzimas, carboidratos e DNA5.
Dessa forma, encontram-se relacionados com vrias patologias, tais
como artrite, choque hemorrgico, doenas do corao, catarata,
disfunes cognitivas, cncer e AIDS, podendo ser a causa ou o
fator agravante do quadro geral6.
O excesso de radicais livres no organismo combatido por
antioxidantes produzidos pelo corpo ou absorvidos da dieta. De
acordo com Halliwell3 Antioxidante qualquer substncia que,
quando presente em baixa concentrao comparada do substrato
oxidvel, regenera o substrato ou previne significativamente a oxi-
dao do mesmo. Os antioxidantes produzidos pelo corpo agem
enzimaticamente, a exemplo da GPx, CAT e SOD 2 ou, no-
enzimaticamente a exemplo de GSH, peptdeos de histidina, prote-
nas ligadas ao ferro (transferrina e ferritina), cido diidrolipico e
CoQH2. Alm dos antioxidantes produzidos pelo corpo, o organis-
mo utiliza aqueles provenientes da dieta como o a-tocoferol (vita-
mina-E), -caroteno (pro-vitamina-A), cido ascrbico (vitamina-
C), e compostos fenlicos onde se destacam os flavonides e
poliflavonides4,7. Dentre os aspectos preventivos, interessante
ressaltar a correlao existente entre atividade antioxidante de subs-
tncias polares e capacidade de inibir ou retardar o aparecimento
de clulas cancergenas, alm de retardar o envelhecimento das
clulas em geral8. Outro interesse ligado aos antioxidantes a sua
*e-mail: jmdavid@ufba.br
alimentos, prevenindo a decomposio oxidativa desses pela ao
da luz, temperatura e umidade9.
O ESTRESSE OXIDATIVO
O organismo humano sofre ao constante de ERO e ERN gera-
das em processos inflamatrios, por alguma disfuno biolgica ou
provenientes dos alimentos. As principais ERO distribuem-se em
dois grupos, os radicalares: hidroxila (HO), superxido (O2),
peroxila (ROO) e alcoxila (RO); e os no-radicalares: oxignio,
perxido de hidrognio e cido hipocloroso. Dentre as ERN inclu-
em-se o xido ntrico (NO), xido nitroso (N2O3), cido nitroso
(HNO2), nitritos (NO2), nitratos (NO3) e peroxinitritos (ONOO)10.
Enquanto alguns deles podem ser altamente reativos no organismo
atacando lipdios, protenas e DNA, outros so reativos apenas com
os lipdios. Existem ainda alguns que so pouco reativos, mas apesar
disso podem gerar espcies danosas.
O radical HO o mais deletrio ao organismo, pois devido a
sua meia-vida muito curta dificilmente pode ser seqestrado in
vivo. Estes radicais freqentemente atacam as molculas por abs-
trao de hidrognio e por adio a insaturaes. Nos experimen-
tos de laboratrio o HO pode facilmente ser seqestrado in vitro
por inmeras molculas, devido a sua alta reatividade. No entan-
to, para que os resultados in vitro se reproduzam in vivo, neces-
srio ministrar alta concentrao do antioxidante para que este
alcance o local onde o radical HO est presente em concentrao
suficiente para suprim-lo. Existem duas maneiras de controlar a
presena do radical HO: reparar os danos causados por ele ou
inibir sua formao.
O radical HO formado no organismo principalmente por dois
mecanismos: reao de H2O2 com metais de transio e homlise
da gua por exposio radiao ionizante6 (Equao 1). A inci-
dncia de radiao no ultravioleta, radiao e raios X podem pro-
duzir o radical HO nas clulas da pele. O ataque intensivo e fre-
qente deste radical pode originar mutaes no DNA e, conseqen-
temente, levar ao desenvolvimento de cncer em seres humanos no
perodo de 15 a 20 anos.
luz UV
H2O HO + H (1)
114 Barreiros et al.
O perxido de hidrognio isoladamente praticamente in-
cuo, porm pode se difundir facilmente atravs das membranas
celulares como, por ex., a membrana do ncleo. Devido ao fato da
clula possuir metais de transio, ocorre gerao do radical HO
em seu interior5 (Equao 2).
Mn+ + H2O2 M(n+1)+ + HO + HO (2)
Em nosso organismo, os metais de transio mais importantes
para a ocorrncia dessa reao so Cu1+ e Fe2+. Nesse sistema, a
importncia do ferro mais pronunciada devido a sua maior
biodisponibilidade e, no organismo, na maior parte do tempo ele
encontra-se complexado com protenas de transporte (ex. trans-
ferrina), e armazenamento (ex. ferritina e hemosiderina). A reao
do Fe2+ com o H2O2 (reao de Fenton) pode ser representada de
maneira simplificada na Equao 3 ou de forma mais complexa na
Equao 4.
Fe2+ + H2O2 Fe3+ + HO + HO (3)
(4)
O radical hidroxila causa danos ao DNA, RNA, s protenas,
lipdios e membranas celulares do ncleo e mitocondrial. No DNA
ele ataca tanto as bases nitrogenadas quanto a desoxirribose (Fi-
gura 1). O ataque ao acar pode ser realizado por abstrao de
um dos tomos de hidrognio (1-3) e quase sempre leva ruptura
da cadeia de DNA10. O mecanismo dessa ruptura tem como prin-
cipais produtos 5-8-ciclo-2-desoxiadenosina 8OHdA (4) e 5-
8-ciclo-2-desoxiguanosina 8OHdG (5). A eletrofilicidade do HO
possibilita sua interao com as bases nitrogenadas por adio s
insaturaes em stios de alta densidade eletrnica. Assim, reage
Figura 1. Principais produtos da oxidao do DNA por ERO e ERN
Quim. Nova
com as bases pricas por adio a C-4 e C-8, e em menor propor-
o com C-5, gerando 2,6-diamino-4-hidroxi-5-
formamidopirimidina (FapyG) (6), 4,6-diamino-5-formamido-
pirimidina (FapyA) (7), 8-oxo-7,8-diidro-2-desoxiguanosdeo (8-
oxoG) (8), 8-oxoA (9)11 (Figura 1). O ataque s bases pirimidnicas
d-se por adio ligao dupla 5,6, e produz os radicais livres
em C-6 e C-5 nas propores aproximadamente de 70 e 30%,
respectivamente (14 e 15), gerando 5-hidroxi-6-hidrocitosina (16),
6-hidroxi-5-hidrocitosina (17), 5-hidroxi-6-peroxicitosina (20),
6-hidroxi-5-peroxicitosina (21), 5-hidroxi-6-oxocitosina (22) e 6-
hidroxi-5-oxocitosina (23). Os radicais peroxila (18 e 19) podem
decompor-se gerando citosinaglicol (24) como produto majorit-
rio. A timina sofre a adio do radical ligao dupla 5,6, for-
mando os radicais livres em C-5 e C-6 (25 e 26), e em menor teor
o radical decorrente da abstrao de um prton da metila em C-5
(27), que gera 5-hidroxi-6-hidrotimina (28), 6-hidroxi-5-
hidrotimina (29), 5-hidroxi-6-oxotimina (36) e timinaglicol (37)
como principais produtos10. A fragmentao completa da citosina
e da timina mostrada na Figura 2.
Figura 2. Fragmentao oxidativa das bases pirimidnicas
Nos aminocidos e protenas, HO pode reagir na cadeia late-
ral, onde ataca preferencialmente cistena, histidina, triptofano,
metionina e fenilalanina, e, em menores propores, arginina e
asparagina11. Os ataques aos aminocidos que compem as prote-
nas podem gerar danos como clivagens de ligaes com ou sem
gerao de fragmentos e ligaes cruzadas, o que pode ter como
Vol. 29, No. 1 Estresse Oxidativo: Relao entre Gerao de Espcies Reativas
conseqncia perda de atividade enzimtica, dificuldades no trans-
porte ativo atravs das membranas celulares, citlise e morte celu-
lar. O ataque ocorre por adio do radical ou por abstrao de hi-
drognio. Todos os aminocidos podem sofrer abstrao do hidro-
gnio do carbono C -COO ligado ao carboxilato e ao grupo amino.
Essa abstrao, com exceo da glicina, leva perda de CO2 e
formao de carbono radicalar11. Na Figura 3 so mostrados os
principais produtos dessas reaes, destacando-se o tio-
hidroperxido (42), cistina (43)12, 2-oxo-histidina (44) em equil-
brio com a 2-hidroxi-histidina (45)13, metionina sulfxido (46),
metionina sulfona (47)14, derivados da arginina, lisina e prolina
(48, 49 e 50), nitroacetato (51), oxima (52), hidroxilamina (53)14,
oxalato (54)11 e derivados da tirosina (55-60).
Figura 3. Principais produtos da oxidao dos aminocidos e protenas por
ERO e ERN
O exemplo mais comum do ataque de radicais hidroxila a
lipdios a ao deste nos lipdios de membrana. Os radicais livres
centrados no oxignio (HO) atacam a cadeia lipdica em stios
susceptveis como o grupo metilnico allico, convertendo-o em
novo centro de radical livre. O carbono radicalar facilmente adici-
ona oxignio gerando o radical lipdio-peroxila, que pode facil-
mente atacar as protenas de membrana, produzindo danos nas c-
lulas A Figura 6 traz exemplos dessa atuao. Os cidos graxos
poliinsaturados so mais susceptveis ao ataque por radicais livres,
devido ao carbono metilnico bis-allico. O radical formado pela
abstrao do hidrognio gera os cidos decadienicos HPODE, 13-
Z,E-HPODE (61), 9-E,Z-HPODE (62), 9-E,E-HPODE (63) e 13-
E,E-HPODE (64) e a decomposio destes gera os aldedos ,-
insaturados 4-hidroperoxi-2-nonenal (65), 4-hidroxi-2-nonenal (66),
115
4-oxo-2-nonenal (67) e 4,5-epxi-2(E)-decenal (68). Aldedos ,-
insaturados so conhecidos por sua ao genotxica, pois em pre-
sena do 2-desoxiguanosdeo e do 2-desoxiadenosdeo sofrem
adio gerando heptanona-eteno-desoxiguanosdeo (69), heptanona-
eteno-desoxiadenosdeo (70), eteno-desoxiadenosdeo (71), eteno-
adenosdeo e hexanol-1,N-2-propano-desoxiguanosdeo (72). A de-
composio dos cidos graxos com trs ou mais insaturaes gera
como produto adicional o aldedo malnico (73), que pode se adi-
cionar ao 2-desoxiguanosdeo gerando pirimidol-[1,2a]purin-10-
ona desoxiguanosdeo (74)15 (Figura 4).
Figura 4. Compostos genotxicos produzidos pela oxidao dos lipdios por
ERO e ERN, e produtos resultantes de seu ataque ao DNA
A forma mais deletria do oxignio ao organismo o oxig-
nio singleto (1O2), pois a causa ou o intermedirio da toxicidade
fotoinduzida do O2 em organismos vivos. O seu tempo de meia-
vida depende muito do meio onde se encontra. Em meio aquoso,
sua meia-vida muito pequena, pois ele se choca com as molcu-
las de H2O transferindo sua energia, desativando-se e retornando
forma de oxignio tripleto. Em meio orgnico mais comum a
ocorrncia de choque com transferncia de energia, sem reao
qumica, seguida da dissipao dessa energia na forma de calor.
Esse tipo de choque denominado quenching colisional e re-
presenta a forma como a gua desativa o 1O2. Porm, em meio
orgnico, a meia-vida do oxignio singleto maior e, portanto,
pode causar algumas reaes qumicas com determinados
aceptores por incorporao do O2. O oxignio singleto reage com
algumas classes de biomolculas e, em geral, essas reaes so
do tipo eno (Equao 5) e dieno (reaes de Diels-Alder) (Equa-
o 6). Os compostos naturais mais reativos frente ao 1O2 so os
carotenides, devido as mltiplas insaturaes conjugadas. As-
sim, o 1O2 reage mais lentamente com os cidos graxos que com o
-caroteno, e quanto maior o nmero de insaturaes presentes

116 Barreiros et al.
nos cidos graxos, mais rapidamente eles iro reagir. Essa reao
se d por incorporao do oxignio cadeia com conseqente
migrao da ligao dupla, formando cidos hidroperxidos como
os HPODE16 (Figura 4).
(5)
(6)
1
Na Figura 3 esto representados os produtos da reao do O2
com os aminocidos cistena, metionina, triptofano, tirosina e
histidina27. A reao do oxignio singleto com os cidos nuclicos
significativa apenas para a base guanina, que origina 8OHG (8).
O perxido de hidrognio (H2O2) pouco reativo frente s
molculas orgnicas na ausncia de metais de transio. No entan-
to, exerce papel importante no estresse oxidativo por ser capaz de
transpor as membranas celulares facilmente e gerar o radical
hidroxila. Ele somente oxida protenas que apresentem resduos de
metionina ou grupos tiol muito reativos, GSH por ex.
O H2O2 gerado in vivo pela dismutao do nion-radical
superxido (O2 ) por enzimas oxidases ou pela -oxidao de ci-
dos graxos. As mitocndrias so importantes fontes de O2 e, como
a presena deste nion-radical pode causar srios danos, elas so
ricas em SOD que o converte em H2O2. O perxido de hidrognio
gerado ento parcialmente eliminado por catalases, glutationa
peroxidase e peroxidases ligadas tioredoxina, mas como essa eli-
minao tem baixa eficincia, grande parte do H2O2 liberado para
a clula18. O H2O2 tambm pode ser encontrado em bebidas como
chs e principalmente caf instantneo e, rapidamente se difunde
pelas clulas da cavidade oral e do trato gastrintestinal. Pode tam-
bm ser produzido por bactrias presentes na boca, sendo utilizado
pela peroxidase salivar para oxidar o tiocianeto (SCN) em tiocianato
(OSCN), um produto txico para certas bactrias. Ele utilizado
pelos fagcitos na produo de cidos hipoalogenosos, que so
oxidantes muito efetivos no combate a vrus, bactrias e outros cor-
pos estranhos, mas que por outro lado apresentam efeitos deletrios
quando expostos s molculas biolgicas14,18.
A maior fonte de energia para os organismos aerbicos est na
terceira etapa da respirao, que ocorre no interior da mitocndria,
onde uma molcula de O2 reduzida a duas molculas de H2O, com
consumo de 4 eltrons (Equao 7). Nas equaes seguintes (Equa-
es 8-11) esto descritas as etapas da reduo de O2, formao de
radical hidroxila e a segunda molcula de gua (Equao 11)19.
O2 + 4e + 4H+ 2H2O (7)
O2 + e O2 (8)
O2 + e + 2H+ H2O2 (9)
H2O2 + e + H+
OH + H2O (10)
OH + e + H+ H2O (11)
O radical nion superxido (O2 ) ao contrrio da maioria dos
radicais livres inativo. Em meio aquoso, sua reao principal a
dismutao, na qual se produz uma molcula de perxido de hidro-
gnio e uma molcula de oxignio (Equao 12). Ele tambm
uma base fraca cujo cido conjugado, o radical hidroperxido

Quim. Nova
(HOO) mais reativo (Equao 13).
2O2 + 2H+ H2O2 + O2 (12)
O2 + H+ HOO (13)
O radical nion superxido (O2 ) participa de certos processos
qumicos importantes no contexto biolgico. O principal deles
auxiliar na produo de radical HO, atravs da reduo de quelatos
de Fe (III) (Equao 14), formando Fe+2. Assim, o HO pode ser
obtido atravs da reao de Haber-Weiss6,20 (Equao 15).
Fe3+ + O2 [Fe3+ O2 Fe2+ O2] Fe2+ + O2 (14)
Fe
O2 + H2O2 HO + HO + O2 (15)
Alm disso, o radical nion O2 possui a habilidade de liberar
2+
Fe das protenas de armazenamento e de ferro-sulfoprotenas, tais
como ferritina e aconitase, respectivamente. O radical nion O2
tambm reage com o radical HO produzindo oxignio singleto 1O2
(Equao 16) e com o xido ntrico (NO) produzindo peroxinitrito
(ONOO) (Equao 17).
O2 + OH 1
O2 + HO (16)
NO + O2 ONOO (17)
A atuao do radical nion superxido (O2 ) como oxidante
direto irrelevante. Dentre os aminocidos, o nico que sofre oxi-
dao com o radical O2 a cistena. A partir dessa reao forma-
se um superxido (42) e o tio-radical (43) (Figura 3)18. Alm disso,
o radical nion superxido O2 presente no organismo eliminado
pela enzima superxido dismutase, que catalisa a dismutao de
duas molculas de O2 em oxignio e perxido de hidrognio (Equa-
o 12). Este ltimo, quando no eliminado do organismo pelas
enzimas peroxidases e catalase, pode gerar radicais hidroxila18.
Apesar destes efeitos danosos, o radical O2 tem importncia
vital para as clulas de defesa e sem ele o organismo est
desprotegido contra infeces causadas por vrus, bactrias e fun-
gos. O radical O2 gerado in vivo por fagcitos ou linfcitos e
fibroblastos durante o processo inflamatrio, para combater cor-
pos estranhos. Os fagcitos o produzem com auxlio da enzima
leuccito NADPH oxidase, que catalisa a reduo por um eltron
do O2 com gasto de uma molcula de NADPH (Equao 18)18,19.
2O2 + NADPH 2O2 + NADP+ + H+ (18)
O radical nion superxido formado bactericida fraco, capaz
de inativar protenas ferro-sulfurosas das bactrias, porm gera al-
guns produtos que possuem forte atividade antimicrobiana, tais
como cido hipocloroso (HOCl), perxido de hidrognio (H2O2) e
peroxinitrito (ONOO ) que so os principais responsveis pelo com-
bate a corpos estranhos.
Em alguns casos o radical nion O2 age como antioxidante,
reduzindo semiquinonas para que elas possam retomar suas ativi-
dades metablicas na clula. Um exemplo a reduo da ubiquinona
para ubiquinol, no interior da mitocndria18,19.
Por fim, o radical nion superxido funciona como sinalizador
molecular atravs da sua capacidade de oxidar grupos SH em li-
gaes dissulfeto (Equao 19), podendo ativar e desativar enzimas
que contenham metionina.
2O2 + 2RSH 2HOO + RSSR (19)
Vol. 29, No. 1 Estresse Oxidativo: Relao entre Gerao de Espcies Reativas
O radical xido ntrico (NO) pode ser produzido no organismo
pela ao da enzima xido ntrico sintase a partir de arginina, oxi-
gnio e NADPH, gerando tambm NADP+ e citrulina21. Esse radi-
cal tambm pode ser produzido em maiores quantidades atravs
dos fagcitos humanos, quando estimulados10,18. O nitrato pode
transformar-se em nitrito, que reage com os cidos gstricos ge-
rando o cido nitroso (HNO2). O xido nitroso (N2O3) tambm
precursor do HNO2 atravs da sua reao com a gua. O HNO2
promove a desaminao das bases do DNA que contm grupo
NH2 livre que so citosina, adenina e guanina, formando-se uracila,
hipoxantina (11) e xantina (12), respectivamente (Figura 1)10. O
xido ntrico NO no suficientemente reativo para atacar o DNA
diretamente, mas pode reagir com o radical nion superxido O2,
produzido pelos fagcitos, gerando peroxinitrito. Esse ltimo, por
sua vez, pode sofrer reaes secundrias formando agentes capa-
zes de nitrar aminocidos aromticos, a exemplo da tirosina geran-
do nitrotirosina (59) e as bases do DNA, em particular a guanina,
na qual o produto principal a 8-nitroguanina (13)10,18,22. A presen-
a do tampo CO2/HCO3 contribui para a nitrao de biomolculas
pois o carbonato ao ser protonado forma o radical HCO3 e este
oxida anis aromticos, produzindo bicarbonato (HCO3) e o radi-
cal aromtico correspondente, facilitando a entrada do radical
NO2 23.
A PROTEO AO ORGANISMO CONTRA O ESTRESSE
OXIDATIVO
Os radicais livres promovem reaes com substratos biolgi-
cos podendo ocasionar danos s biomolculas e, conseqentemen-
te, afetar a sade humana. Os danos mais graves so aqueles cau-
sados ao DNA e RNA. Se a cadeia do DNA quebrada, pode ser
reconectada em outra posio alterando, assim, a ordem de suas
bases. Esse um dos processos bsicos da mutao e o acmulo de
bases danificadas pode desencadear a oncognese. Uma enzima
que tenha seus aminocidos alterados pode perder sua atividade
ou, ainda, assumir atividade diferente. Ocorrendo na membrana
celular, a oxidao de lipdios interfere no transporte ativo e passi-
vo normal atravs da membrana, ou ocasiona a ruptura dessa, le-
vando morte celular. A oxidao de lipdios no sangue agride as
paredes das artrias e veias, facilitando o acmulo desses lipdios,
com conseqente aterosclerose, podendo causar trombose, infarto
ou acidente vascular cerebral. As protees conhecidas do organis-
mo contra as ERO e ERN abrangem a proteo enzimtica ou por
micromolculas, que podem ter origem no prprio organismo ou
so adquiridas atravs da dieta.
As macromolculas so representadas pelas enzimas e podem
atuar diretamente contra as ERO e ERN ou, ainda, reparar os da-
nos causados ao organismo por essas espcies. Um exemplo a
catalase (CAT) que converte o perxido de hidrognio em H2O e
O2. Outras so capazes de eliminar a molcula ou a unidade dessa
que se encontra danificada, como por ex., as enzimas responsveis
pela exciso das bases nitrogenadas danificadas e substituio por
outras intactas 10,19. So conhecidos trs sistemas enzimticos
antioxidantes: o primeiro composto por dois tipos de enzimas
SOD, que catalisam a destruio do radical nion superxido O2,
convertendo-o em oxignio e perxido de hidrognio. A decompo-
sio do radical nion superxido O2 ocorre naturalmente porm,
por ser uma reao de segunda ordem, necessita que ocorra coliso
entre duas molculas de O2, de forma que h necessidade de mai-
or concentrao do radical nion superxido. A presena da enzima
SOD favorece essa dismutao tornando a reao de primeira or-
dem, eliminando a necessidade da coliso entre as molculas. A
ao desta enzima permite a eliminao do O2 mesmo em baixas
117
concentraes. Existem duas formas de SOD no organismo, a pri-
meira contm Cu2+ e Zn2+ como centros redox e ocorre no citosol,
sendo que sua atividade no afetada pelo estresse oxidativo. A
segunda contm Mn2+ como centro redox, ocorre na mitocndria e
sua atividade aumenta com o estresse oxidativo19. O segundo siste-
ma de preveno muito mais simples, sendo formado pela enzima
catalase que atua na dismutao do perxido de hidrognio (H2O2)
em oxignio e gua19 (Equao 20).
(20)
O terceiro sistema composto pela GSH em conjunto com duas
enzimas GPx e GR. A presena do selnio na enzima (seleno-
cistena) explica a importncia desse metal e sua atuao como
antioxidante nos organismos vivos. Esse sistema tambm catalisa
a dismutao do perxido de hidrognio em gua e oxignio, sen-
do que a glutationa opera em ciclos entre sua forma oxidada e sua
forma reduzida19. A GSH reduz o H2O2 a H2O em presena de GPx,
formando uma ponte dissulfeto e, em seguida, a GSH regenerada
(Equaes 21-23).
(21)
(22)
(23)
Dentre os antioxidantes biolgicos de baixo peso molecular,
podem ser destacados os carotenides, a bilirrubina, a ubiquinona
e o cido rico. Porm, as mais importantes micromolculas no
combate ao estresse oxidativo so os tocoferis e o cido ascrbico
(vitamina C)19.
Vitamina C no ciclo oxidativo
O cido ascrbico ou vitamina C comumente encontrado em
nosso organismo na forma de ascorbato (75). Por ser muito solvel
em gua, est localizado nos compartimentos aquosos dos tecidos
orgnicos. O ascorbato desempenha papis metablicos fundamen-
tais no organismo humano, atuando como agente redutor, reduzin-
do metais de transio (em particular Fe3+ e Cu2+) presentes nos
stios ativos das enzimas ou nas formas livres no organismo24. Por
ser um bom agente redutor o ascorbato pode ser oxidado pela mai-
oria das ERO e ERN que chegam ou so formadas nos comparti-
mentos aquosos dos tecidos orgnicos. Sua oxidao produz inici-
almente o radical semidesidroascorbato (76), que pouco reativo.
Esse radical pode ser reconvertido em ascorbato, ou duas molcu-
las dele podem sofrer desproporcionamento originando uma mol-
cula de desidroascorbato (77) e regenerando uma molcula de
ascorbato. O desidroascorbato pode ser ento regenerado para
ascorbato atravs de um sistema enzimtico, ou ser oxidado
irreversivelmente gerando oxalato (78) e treonato (79)19,24 (Figura
5). Tendo em vista que o ascorbato converte as ERO e ERN em
espcies inofensivas e que os derivados do ascorbato so pouco
reativos, esse age como antioxidante in vivo. Devido a estas pro-
priedades, muitos autores sugerem a ingesto diria de doses mai-
ores de ascorbato, para proteo contra o desenvolvimento de do-
enas crnicas, cardiovasculares e de alguns tipos de cncer24.
O ascorbato possui tambm propriedades pr-oxidantes pois
os ons Fe2+ e Cu1+ reagem com o perxido de hidrognio (rea-
o de Fenton, Equao 3) gerando o radical hidroxila. Indire-
tamente, o ascorbato pode induzir as reaes de radicais livres.
118
Figura 5. Ciclo oxidativo do ascorbato
Porm, em funo do Fe encontrar-se, na maior parte do tempo,
ligado a protenas de transporte ou armazenamento, em situa-
o normal, as propriedades antioxidantes do ascorbato suplan-
tam suas propriedades pr-oxidantes24. O ascorbato pode atuar
contra a peroxidao de lipdios de duas maneiras: no plasma
sanguneo, atua na preveno atravs da reao com as ERO e
ERN presentes, ou na restaurao doando hidrognio ao radical
lipdio (80). Isso explica seu papel na preveno de doenas
cardiovasculares, devido ao fato de que sem a formao dos ra-
dicais lipdio-peroxila (81) no ocorre o ataque s protenas das
paredes dos vasos e artrias sanguneos, causando o acmulo de
lipdios nessas paredes e, conseqentemente, seu entupimento.
Por outro lado, nas membranas celulares ele atua em parceria
com o -tocoferol (82). O radical livre normalmente abstrai um
prton do carbono metilnico allico, e o radical lipdio forma-
do (80) rapidamente adiciona oxignio tripleto gerando o radi-
cal lipdio-peroxila (81). Nesta etapa, o tocoferol (82) age do-
ando um hidrognio para esse radical formando o lipdio-hidro-
perxido (83) e o radical tocoferoxila (84). O ascorbato (75) na
interface da membrana celular regenera o tocoferol doando um
hidrognio, transformando-se em semidesidroascorbato (76) (Fi-
gura 6). As enzimas fosfolipase A2, fosfolipdio hidroperxido
glutationa peroxidase, GPx e cido graxo coenzima A restau-
ram o lipdio25.
Figura 6. Ataque membrana celular e proteo pelo tocoferol e ascorbato. Esquema baseado na ref. 25
Barreiros et al. Quim. Nova
O papel do ascorbato na proteo oxidao do DNA e, conse-
qentemente, sua ao preventiva no cncer ambguo. Estudos
indicam que o consumo de ascorbato inferior ao recomendado (40-
60 mg/dia), por ex., consumo de 5 mg/dia aumentou os nveis de
8OHdG (5) em 91%. O consumo de 60 mg/dia reduziu os nveis de
8OHdG e 8OHG (8) no organismo reduzindo-se, assim, o risco
de cncer. Foi verificado que uma suplementao superior a
500 mg/dia de ascorbato fez com que os nveis de 8OHdG e 8OHG
decrescessem ainda mais, porm ocorrendo aumento nos nveis de
8OHA (9), Fapy-A (7) e Fapy-G (6). Mesmo com o aumento des-
sas espcies, o processo pode ser considerado benfico, pois o
8OHdG e o 8OHG tm maior poder mutagnico que 8OHA, Fapy-
A e Fapy-G. No est estabelecido se a queda nos nveis de 8OHdG
e 8OHG conseqncia direta da ao do ascorbato como
antioxidante ou da sua atuao como cofator das enzimas de repa-
ro. Alm disso, os nveis de 8OHA, Fapy-A e Fapy-G s aumentam
expressivamente quando a concentrao de ascorbato no plasma
sanguneo est acima de 70 M. Como a ingesto de 100 mg/dia
promovia uma concentrao de 60 M no plasma, recomendou-se
uma ingesto entre 100-200 mg/dia, para otimizar suas proprieda-
des antioxidantes sem causar danos ao DNA24.
A vitamina E no ciclo oxidativo
A vitamina E constituda principalmente por quatro tocoferis,
e secundariamente por quatro tocotrienis, sendo o -tocoferol (82)
o mais ativo26. Estudos comprovam que a vitamina E um eficien-
te inibidor da peroxidao de lipdios in vivo. Estas substncias
agem como doadores de H para o radical peroxila, interrompendo
a reao radicalar em cadeia. Cada tocoferol pode reagir com at
dois radicais peroxila e, nesse caso, o tocoferol irreversivelmente
desativado. Para que eles no se desativem, necessitam do meca-
nismo de regenerao sinergtico com o ascorbato nas membranas
celulares e com a ubiquinona na membrana mitocondrial25,27 (Fi-
gura 6).
A reao de doao do H radicalar fenlico para os radicais
peroxila acelerada pela presena de um grupo metoxi em para,
pois este estabiliza o radical formado por ressonncia, e grupos metila
em orto ou em orto e meta que apresentam pequeno impedimento
estrico. Ao mesmo tempo, essa reao retardada quando a hidroxila
fenlica se encontra estericamente impedida por grupos alquila mai-
ores em orto, ou quando em presena de um grupo retirador de el-
trons em para. Deste modo, no possvel prever qual dos tocoferis
tem maior atividade. No entanto, estudos cinticos realizados in vitro
Vol. 29, No. 1 Estresse Oxidativo: Relao entre Gerao de Espcies Reativas 119

Essa diferena de atividade justificada por uma distribuio mais

uniforme na bicamada lipdica das membranas, que leva interao
mais eficiente do anel cromano com os radicais lipdicos e maior
eficincia na reciclagem do radical cromanoxila26.

O papel dos carotenides e da vitamina A no ciclo oxidativo

Dentre os carotenides, o -caroteno a mais importante fonte

de vitamina A29. Eles formam um tipo incomum de agentes reduto-
res biolgicos, pois reduzem melhor os produtos de oxidao a
baixos nveis de oxignio. Altos nveis de oxignio levam des-
truio dos carotenides. Na maioria dos tecidos biolgicos, o n-
vel de oxignio baixo, de modo que os carotenides adquirem
importncia como antioxidantes. Os carotenides agem in vivo
como desativadores do oxignio singleto ou como seqestradores
dos radicais peroxila, reduzindo a oxidao do DNA e lipdios, que
Figura 7. Representao das estruturas dos radicais 4-metoxifenoxil, TMMP
est associada a doenas degenerativas, como cncer e doenas
e PMHC com os orbitais dos tomos de oxignio. Reproduzido da ref. 28,
cardacas29.
com permisso da American Chemical Society
A principal atividade antioxidante dos carotenides a desati-
vao do oxignio singleto, sendo que a velocidade para essa rea-
o superior dos tocoferis. A desativao do 1O2 pode se dar de
demonstram que o -tocoferol possui uma constante de velocidade duas formas, pela transferncia fsica da energia de excitao do
grande (k= 235 50 M-1 s-1) para a transferncia do H para um radi- 1
O2 para o carotenide e pela reao qumica do carotenide com o
1
cal peroxila. Essa constante maior que para a maioria dos O2. Em condies normais no organismo, 95% da desativao do
1
antioxidantes sintticos e ligeiramente superior aos outros tocoferis: O2 fsica, restando somente 5% para reagir quimicamente, o que
-tocoferol (k= 166 33 M-1 s-1), -tocoferol (k= 159 42 M-1 s-1) e torna os carotenides antioxidantes mais efetivos. Os produtos des-
-tocoferol (k= 65 13 M-1 s-1). Esses resultados esto em acordo tas reaes so apresentados na Figura 8 29,30.
com o observado em testes in vivo28.
As observaes do efeito cintico em -tocoferol com a hidroxila
fenlica marcada com deutrio confirmam que a reatividade reside na
poro fenlica da molcula. Com base nessa observao foram avali-
adas as constantes de velocidade de doao do H para o 2,3,5,6-
tetrametil-4-metoxifenol (TMMP) (85) e o 2,2,5,7,8-pentametil-6-
hidroxicromano (PMHC) (86). Observa-se que a constante de veloci-
dade para o TMMP (k= 21 2 M-1 s-1) representa apenas 9% da ati-
vidade do a-tocoferol, enquanto que para o PMHC (k= 214 81 M-1 s-1)
aproximadamente idntica atividade do -tocoferol. Esta aparente
incoerncia pode ser explicada por efeitos estricos. A presena do
grupo metoxi em para nos fenis (87) aumenta a velocidade de doa-
o do H radicalar. Isso devido ao fato que o eltron no ligante do
oxignio metoxlico pode se deslocalizar migrando para o oxignio
do radical fenxido (88) formando o on fenolato, que estabilizado
por sua deslocalizao com o anel aromtico. O radical TMMP no
apresenta esse aumento de velocidade na doao do H, devido ao
impedimento estrico dos grupos metila. Esses grupos promovem o
deslocamento da metoxila por efeito estrico para fora do plano do
anel aromtico, de modo que o orbital p com o seu par de eltrons
fique no plano do anel aromtico, inviabilizando a migrao do el-
tron. Com o PMHC e os tocoferis ocorre o aumento da velocidade
de doao do H. Esse fato explicado pela presena de um segundo
anel com o oxignio, que impede o giro do grupo e mantm o orbital
p perpendicular ao anel aromtico. Assim, torna-se possvel a migra-
o do eltron no ligante do oxignio do anel para o orbital
semipreenchido do oxignio radicalar (89). Embora o -tocoferol e o
PMHC apresentem atividades semelhantes in vitro, o PMHC apre-
senta pouca ou nenhuma atividade in vivo. Esse fato explicado pela
cadeia carbnica lateral dos tocoferis que aumenta sua solubilidade
nas biomembranas, stio onde eles atuam28. Figura 8. Principais produtos do ciclo oxidativo do -caroteno
Com base em observaes estruturais de se esperar que os
tocotrienis apresentem atividade semelhante dos tocoferis pe- Uma outra atividade recentemente estudada do seqestro de
rante as ERO e ERN. Porm a atividade do -tocotrienol contra a radicais peroxila. Os radicais peroxila adicionam-se dupla liga-
peroxidao de lipdios maior que a do -tocoferol, assim como o 5-6, 5-6 ou 15-15 da cadeia do caroteno. Estudos de meca-
a atividade dos tocotrienis maior que a dos respectivos tocoferis. nismo revelaram a preferncia pela adio em 5,6 ou 5,6, geran-
120 Barreiros et al.
do o radical altamente estabilizado por ressonncia (93). Esse ra-
dical sofre, ento, uma substituio homoltica intramolecular, ori-
ginando os teres cclicos (91 e 92), interconversveis em meio
cido, alm do radical alcoxila30 (Figura 8).
O processo completo de oxidao dos carotenides pode ser
dividido em duas etapas. Na primeira, ocorre a formao de teres
cclicos e compostos carbonlicos. Na segunda etapa os produtos
primrios so convertidos em compostos carbonlicos de cadeias
menores, com liberao de CO2 e cidos carboxlicos. O processo
completo descrito por Woodall et al.30,31. Os mecanismos propos-
tos esclarecem a atividade dos carotenides frente ao oxignio
singleto e aos radicais peroxila, porm no esclarecem a atividade
contra outros radicais e se esses so capazes de interromper a rea-
o radicalar em cadeia. Observa-se tambm a menor atividade
antioxidante para os carotenides que possuem substituio em 4
e/ou 4, em relao aos outros. Essas observaes podem ser
explicadas pela presena de carbonos metilnico em 4 e 4 vizi-
nhos s insaturaes conjugadas, que doam um hidrognio para os
radicais livres, devido ao fato do radical gerado ser extremamente
estabilizado por ressonncia (94)31.
Outro aspecto da atividade dos carotenides diz respeito po-
laridade. Aqueles que possuem grupos polares nos anis A e B so
efetivos na preveno da oxidao das membranas. Essa polarida-
de os localiza de maneira tal que esto em contato mais prximo
com a fase aquosa, reagindo com os radicais que penetram a mem-
brana. Os apolares, tais como o licopeno e o -caroteno so mais
regeneradores que preventivos, combatendo os radicais formados
com mais eficincia no interior da membrana31. Os retinides (vi-
tamina A) possuem grupos polares que os localizam na membrana
celular na regio prxima fase aquosa. No entanto, eles apresen-
tam atividade antioxidante cerca de cinco vezes menor que a do -
caroteno sendo, provavelmente, a menor extenso da conjugao29,31.
Coenzima Q10 no ciclo oxidativo
A coenzima Q10 uma ubiquinona lipossolvel que possui uma
cadeia longa isoprenide lateral. A ubiquinona o nico lipdio
endogenamente sintetizado que apresenta funo redox32. Embora
de forma diferenciada e bem especfica essa biossintetizada por
todas as clulas, o que a torna o maior constituinte da membrana
mitocondrial interna, membrana do complexo de Golgi e membra-
na dos lisossomos. Por outro lado, apenas poucas molculas so
encontradas na membrana do LDL. Essa variao na distribuio
sugere funes diferentes para diferentes membranas biolgicas.
A ubiquinona ingerida como suplemento alimentar distribui-se prin-
cipalmente entre o fgado e o plasma sanguneo, no sendo absor-
vida pelas membranas com concentrao elevada desta substncia.
Nos humanos, sua biossntese muito ativa at os 30 anos de ida-
de, poca que ocorre a estagnao de sua produo e, a partir desta
idade, os nveis de ubiquinona comeam a decrescer. Estudos indi-
cam que a administrao de suplementos de ubiquinona possui efeito
benfico no tratamento de doenas do corao, degenerao mus-
cular e outras doenas degenerativas 33 . Sua forma reduzida
ubiquinol-10 (CoQH2) uma hidroquinona que ocorre predomi-
nantemente no corao, rins e fgado e a forma oxidada ubiquinona
(CoQ10) abundante no crebro e no intestino34. A principal funo
da ubiquinona acontece na membrana mitocondrial interna, onde
participa da cadeia de transporte de eltrons e translocao de
prtons H+ na mitocndria, juntamente com os citocromos e as
desidrogenases mitocondriais. As desidrogenases oxidam os NADH,
NADPH e FADH2 e transferem prtons e eltrons para a ubiquinona,
convertendo-a em ubiquinol. Este por sua vez transfere prtons
para a matriz mitocondrial e eltrons para os citocromos. Dessa
Quim. Nova
forma, citocromos reduzem o O2 para H2O com esses eltrons e
prtons da matriz. Todo esse processo indispensvel para produ-
o de ATP33.
O ciclo redox da ubiquinona, porm, tambm capaz de trans-
ferir eltrons desemparelhados para aceptores que no participam
da cadeia respiratria. A oxidao do ubiquinol d-se pela doao
de hidrognio para um radical livre, gerando a respectiva
semiquinona. O prosseguimento da oxidao leva formao da
ubiquinona com a desativao final de dois radicais livres. Dessa
maneira, essa substncia possui grande poder antioxidante atravs
do seqestro de radicais livres, bem como se mostra eficiente na
interrupo de reaes radicalares em cadeia. Tal atividade est
limitada ao meio lipossolvel, devido a sua longa cadeia lateral16,33.
Outra importante funo da ubiquinona a regenerao do
tocoferol na membrana mitocondrial, onde exerce a mesma funo
regenerativa que o ascorbato exerce na membrana celular. O
ubiquinol (101) doa um hidrognio radicalar para o radical tocoferil
(84), gerando ubiquinona semiquinona (102) e -tocoferol (82). O
prosseguimento dessa reao gera ubiquinona e regenera mais uma
molcula de -tocoferol25,27,35 (Figura 9).
Figura 9. Regenerao do tocoferol pelo ubiquinol
A ubiquinona tambm exerce papel considervel na desativao
do radical nion superxido, pois este aps ser gerado na
mitocndria prontamente oxidado pela ubiquinona formando
oxignio e a forma reduzida ubiquinol 18,19. A cadeia lateral da
ubiquinona e ubiquinol tambm exerce funo importante na ativi-
dade desses, uma vez que suas insaturaes participam na
desativao do oxignio singleto 1O2, tanto por desativao fsica
colisional quanto por adio s insaturaes16. Uma ltima ativi-
dade relevante da ubiquinona na mitocndria a reduo do nitrito
(NO2-) a xido ntrico (NO), que um agente bioregulador33.
Toda essa atividade antioxidante est favorecida na mitocndria
devido estabilizao do radical livre intermedirio (102) pelos
seus pares redox, atravs do fluxo de eltrons da cadeia respirat-
ria. Em pH = 6,0 da mitocndria esse radical encontra-se predomi-
nantemente na forma desprotonada. Nesse estado, sem a presena
de seus pares redox ele se desestabiliza em presena de oxignio,
gerando ubiquinona e radical nion superxido O2. Porm, em
situaes de acmulo de NADH e/ou NADPH, tal como na isquemia,
ou em outras membranas que no possuem tal estabilizao, o
acmulo da forma desprotonada aumenta a reao de formao do
radical nion superxido. Como o ubiquinol possui atividade an-
loga SOD, o superxido dismutado gerando H2O2. O contato da
ubiquinona semiquinona desprotonada com o perxido de hidro-
gnio ou o radical peroxila desastroso, gerando radicais hidroxila
(HO) e alcoxila (RO), respectivamente.
Na membrana dos lisossomos a atividade apresentada pela
Vol. 29, No. 1 Estresse Oxidativo: Relao entre Gerao de Espcies Reativas
ubiquinona diferente. Esta membrana muito rica em ubiquinona,
com a peculiaridade de que a espcie dominante a CoQ9, que se
encontra 70% na forma reduzida desprotonada. Sua funo o trans-
porte de H+ para o interior do lisossomo, alm de ter uma funo
prooxidante. Nesse caso, a gerao de radicais livres auxilia na
funo do lisossomo33,34. Nas outras membranas e no plasma, o
papel da ubiquinona fundamentalmente de antioxidante. Como
no h a presena dos pares redox da mitocndria para estabilizar
as ubiquinonas semiquinonas, elas so controladas por despropor-
cionamento onde duas molculas de semiquinonas geram uma
molcula de ubiquinol e uma de ubiquinona. Outra forma de elimi-
nao do excesso de semiquinonas sua regenerao pelo ascorbato,
gerando ubiquinol e semidesidroascorbato. Os efeitos deletrios
das semiquinonas so eliminados em condies normais. Isso fa-
vorece os efeitos benficos da ubiquinona, tornando-a til como
antioxidante para o organismo33,34.
cido rico no ciclo oxidativo
O cido rico a principal forma de excreo de nitrognio
das aves e dos rpteis. Nos mamferos, produto secundrio de
excreo, derivado das bases purnicas. Na maioria dos tecidos or-
gnicos encontra-se na forma de nion urato (pKa1=5,4). Somente
a partir dos anos 80 foi demonstrado que um antioxidante efetivo
nos sistemas biolgicos, capaz de proteger o DNA e lipdios de
ERO e ERN. A alta polaridade do cido rico restringe sua ativi-
dade ao meio aquoso. A sua concentrao nos compartimentos aquo-
sos do organismo encontra-se muito prxima do limite de solubili-
dade (300 M). Indivduos com aterosclerose podem apresentar
nvel elevado de cido rico no sangue, que indicativo da existn-
cia de um mecanismo compensatrio encontrado pelo organismo
para controlar o estresse oxidativo16,36.
O mecanismo antioxidante do urato (103) pode ser resumido
pela reao com a maioria dos agentes oxidantes em velocidade
superior a das outras purinas (Figura 10). Nessa reao, h forma-
o do radical urato (104) estabilizado. Devido ao baixo pKa=3,1
do radical urato, esse se encontra na forma de nion radical urato
(105), o que facilita a doao de um prton em conjunto com o
eltron. O pKa de segunda ionizao de 9,5 no permite que o
radical urato se encontre na forma de um dinion no organismo36.
Figura 10. Sumrio das reaes envolvendo a atividade antioxidante do cido
rico
O urato reage rapidamente com o radical hidroxila HO, no
entanto, o urato inerte s espcies superxido (HOO), radical
121
nion superxido (O2 ), perxidos (ROOH) e perxido de hidro-
gnio (H2O2). Sozinho no capaz de desativar o oxignio singleto
1
O2, porm no meio biolgico ele causa indiretamente sua desa-
tivao atravs da desativao de outras espcies excitadas. Sua
reao mais importante com os radicais peroxila (ROO) e NO2
(gerando NO2). Essa grande atividade contra os radicais peroxila
a base do seu efeito antioxidante protetor do DNA e lipdios.
Como ocorre em meio aquoso, o urato reage com os radicais peroxila
antes desses penetrarem a membrana e iniciarem seus danos.
O urato capaz de recuperar estruturas j atacadas que se tor-
naram radicais livres atravs da doao de um eltron e um prton.
Ele tambm responsvel pela estabilizao do ascorbato no plas-
ma sanguneo, inibindo a reao de Fenton16,36 atravs de sua capa-
cidade de quelar ons metlicos como Fe+3, Fe+2, Cu+2 e Cu+ (106 e
107) (Figura 10).
O nion radical urato pode ser regenerado a urato pelo ascorbato,
gerando semidesidroascorbato. Porm, o urato no capaz de re-
generar a vitamina E. A decomposio oxidativa irreversvel do
urato leva formao inicialmente da alantona (108) e prossegue
gerando o cido alantonico (109), cido cianrico, cido
parabnico, cido oxlico e cido glioxlico36.
O papel da hemoglobina no ciclo oxidativo
A degradao da hemoglobina libera o grupo heme no organis-
mo. A ferroporfirina ou grupo heme da hemoglobina liberada no
bao, originria das clulas vermelhas mortas. A sua degradao
libera Fe+3 e produz a biliverdina, um intermedirio tetrapirrolico
linear, que reduzido pelo NADPH sob ao da enzima biliverdina
redutase a bilirrubina, que pode se apresentar na forma lactmina
ou lactmica. O heme no diretamente transportado pelo sangue
devido sua atividade prooxidante. Devido ao Fe central, esse
capaz de reagir com perxidos ROOH ou H2O2 originando vrios
radicais livres (Equaes 24-28).
ROOH + Heme-Fe+3 ROO + Heme-Fe+2 + H+ (24)
ROOH + Heme-Fe+2 RO + Heme-Fe+3 + HO (25)
2ROOH ROO + RO + H2O (26)
RSH + Heme-Fe+3 RS + Heme-Fe+2 + H+ (27)
Heme-Fe+2 + O2 Heme-Fe+3 + O2 (28)
Tanto a biliverdina quanto a bilirrubina possuem propriedades
pr e antioxidantes, alm de propriedades txicas in vitro e in vivo.
O aumento da biliverdina detectado em indivduos com necrose
heptica e pode ampliar a atividade de certos oncogenes do fgado,
ocasionando cncer. No entanto, em condies normais a atividade
antioxidante da bilirrubina suplanta sua atividade prooxidante38.
A atividade antioxidante da bilirrubina ocorre principalmente
quando se encontra ligada albumina srica, sendo esse complexo
considerado um dos antioxidantes naturais dos fluidos extra-
celulares. Essa atividade acontece principalmente devido sua gran-
de reatividade com radicais peroxila (ROO). No entanto, ela tam-
bm reage com radicais superxido a 1/10 da velocidade do
ascorbato. A reao da bilirrubina com o oxignio singleto vari-
vel, podendo ser tanto um gerador a partir do oxignio tripleto,
quanto um desativador fsico efetivo. Por ltimo, essa exerce o pa-
pel de regeneradora do -tocoferol, embora com menor importn-
cia que outros regeneradores, tais como o ascorbato (75) e a CoQ10
(101)16,38.
122
Flavonides como antioxidantes
De modo geral, os polifenis e em particular os flavonides
possuem estrutura ideal para o seqestro de radicais, sendo
antioxidantes mais efetivos que as vitaminas C e E. A atividade
antioxidante dos flavonides depende da sua estrutura e pode ser
determinada por cinco fatores: reatividade como agente doador de
H e eltrons, estabilidade do radical flavanoil formado, reatividade
frente a outros antioxidantes, capacidade de quelar metais de tran-
sio e solubilidade e interao com as membranas.
A atividade de seqestro est diretamente ligada ao potencial
de oxidao dos flavonides e das espcies a serem seqestradas.
Quanto menor o potencial de oxidao do flavonide, maior
sua atividade como seqestrador de radicais livres. Flavonides
com potencial de oxidao menor que o do Fe+3 e Cu+2 e seus
complexos podem reduzir esses metais, sendo potencialmente
prooxidantes, tendo em vista que o Fe+2 e o Cu+ participam da
reao de Fenton geradora de radicais livres39. Quanto maior o
nmero de hidroxilas, maior a atividade como agente doador de
H e de eltrons40. Flavonides monoidroxilados apresentam ati-
vidade muito baixa, por ex. a 5-hidroxi-flavona tem atividade abai-
xo dos limites de deteco. Flavonas possuindo apenas uma
hidroxila em 3, 6, 3 ou 4, assim como flavanonas apresentando
apenas uma hidroxila em 2-OH, 3-OH, 4-OH, 6-OH tambm
mostram fraca atividade. A 7-hidroxi-flavanona representa uma
exceo, que pode ser justificada pela tendncia maior da 7-OH
em doar H devido estabilizao do radical formado por
deslocalizao com a carbonila em C-4 (110 e 111) (Figura 11).
Figura 11. Flavonides antioxidantes e mecanismo da estabilizao eltron
desemparelhado
Barreiros et al. Quim. Nova
Entretanto, apesar dessa exceo, para proteger os lisossomos e
outras membranas contra o estresse oxidativo foi constatada a
necessidade de no mnimo duas hidroxilas fenlicas no flavonide,
demonstrando que os monoidroxiflavonides no so efetivos.
Entre os flavonides diidroxilados, destacam-se aqueles que pos-
suem o sistema catecol (3,4-diidroxi) no anel B. Os flavonides
com mltiplas hidroxilas como a miricetina (118), quecertina
(117), luteolina (119), fustina (120), eriodictiol (121) e taxifolina
(122) possuem forte atividade antioxidante quando comparados
ao -tocoferol, cido ascrbico, -caroteno, glutationa, cido rico
e bilirrubina40,41 (Figura 11).
A estabilidade do radical livre flavanoil formado depende da
habilidade do flavonide em deslocalizar o eltron desemparelhado.
A presena de hidroxilas em orto o principal fator que auxilia
nessa deslocalizao. Os outros fatores so a presena de insaturao
no anel C e hidroxila em C-4 em B conjugada com a carbonila;
ngulo do anel B do flavonide e do radical formado em relao ao
restante da estrutura, sendo que esse ngulo regulado pela pre-
sena ou ausncia de hidroxila em C-3; presena de duas
insaturaes em C; conjugao da carbonila em C-4 com hidroxila
em C-5 e, presena de hidroxila em C-7 42. A doao do H ocorre
principalmente nas posies 7-OH > 4-OH > 5-OH, seguindo a
seqncia das constantes de dissociao42. Os flavonides, devido
ao seu carter fracamente cido encontram-se, em geral, parcial-
mente ionizados, o que aumenta a estabilidade na posio C-4 e
favorece a deslocalizao do eltron desemparelhado do radical
formado entre os anis A, B e C [por ex., quercetina parcialmente
ionizada em C-4 (112)]. A doao do H radicalar para o radical
livre ocorre principalmente nas posies C-4 (113) e C-7 (114).
Ambos os radicais livres formados podem ter seu eltron
deslocalizado pela estrutura, com maior estabilidade para os radi-
cais 113, 115 e 116, devido estabilizao resultante das ligaes
de hidrognio4,42,43.
A remoo de metais de transio livres no meio biolgico
fundamental para a proteo antioxidante do organismo, visto que
esses catalisam as reaes de Fenton (Equao 3) e de Haber-
Weiss (Equao 15). Para a atividade de quelao de metais de
transio fundamental a presena de grupos orto-difenlicos,
onde o mais comum o sistema 3,4-diidroxi, unidade catecol
em B e/ou estruturas cetol como 4-ceto-3-hidroxi e 4-ceto-5-
hidroxi. A substituio de qualquer uma das hidroxilas envolvi-
das na quelao de metais reduz essa atividade devido, principal-
mente, ao impedimento estrico provocado. Outros sistemas orto-
difenlicos em flavonides menos comuns tambm podem quelar
os metais de transio, como por ex. o 6,7-diidroxi ou 7,8-
diidroxi 4,39,43.
O ltimo fator importante que influencia a atividade antioxi-
dante dos flavonides a sua interao com as biomembranas. A
lipofilicidade do flavonide indica a incorporao desse pela mem-
brana, que alvo da maioria das ERO e ERN. Assim, deve haver
uma concentrao mnima do flavonide por cido graxo, de modo
a assegurar a presena de uma de suas molculas prxima ao stio
de ataque do radical44. Flavonides que possuem uma cadeia de
acares ligada em sua estrutura so muito polares, no sendo as-
similados pela membrana, porm, nesta forma eles podem ser ar-
mazenados em vesculas, possuindo um tempo maior de perma-
nncia no organismo. Os flavonides que so assimilados pelas
membranas exercem a funo de moduladores de fluidez. Restrin-
gindo essa fluidez os flavonides geram um impedimento fsico
para a difuso das ERO e ERN, de modo que decresce a cintica
das reaes responsveis pelo estresse oxidativo. Esse tipo de ati-
vidade antioxidante similar ao relatado para o -tocoferol e o
colesterol45.
Vol. 29, No. 1 Estresse Oxidativo: Relao entre Gerao de Espcies Reativas
CONSIDERAES FINAIS
O organismo humano est sujeito ao estresse oxidativo causa-
do por ERO e ERN provenientes do meio ambiente ou geradas
pelo prprio organismo. Entre as biomolculas alvo dessas espci-
es encontram-se as que compem membranas celulares, protenas
DNA e RNA. Hoje em dia sabe-se que a ao de espcies oxidantes
sobre o DNA responsvel por mutao ou mesmo oncognese.
No entanto, o organismo protegido em parte por macro e micro-
molculas de origem endgenea ou obtidas diretamente da dieta. A
proteo enzimtica baseia-se quase que exclusivamente na decom-
posio de nion superxido ou dismutao de perxido de hidro-
gnio, agentes oxidantes brandos. Cabe s micromolculas, tais
como tocoferis, carotenides e flavonides entre outros, o papel
de impedir o ataque de ERO e ERN ou regenerar os danos causa-
dos em sistemas biolgicos essenciais. O mecanismo complexo de
atividade anti e pr-oxidante destas substncias alvo de extensos
estudos cientficos contemporneos, tendo em vista que o sucesso
destas investigaes est diretamente relacionado com a melhoria
da qualidade de vida do ser humano.
AGRADECIMENTOS
Ao CNPq, FAPESB e ao IMSEAR pelas bolsas e auxlios.
LISTA DE ABREVIATURAS
8OHdA 5-8-ciclo-2-desoxiadenosina
8OHdG 5-8-ciclo-2-desoxiguanosina
8-oxoA 8-oxo-7,8-diidro-2-desoxiadenosdeo
8-oxoG 8-oxo-7,8-diidro-2-desoxiguanosdeo
AG-CoA cido graxo coenzima A
CAT - Catalase
ERN Espcies Reativas de Nitrognio
ERO Espcies Reativas de Oxignio
FapyA 4,6-diamino-5-formamido-pirimidina
FapyG 2,6-diamino-4-hidroxi-5-formamidopirimidina
GPx Se-glutationa peroxidase
GR Glutationa Redutase
GSH Glutationa
HPODE cido hidroperoxioctadecadienico
PMHC 2,2,5,7,8-pentametil-6-hidroxicromano
SHi Substituio Homoltica Intramolecular
SOD Superxido dismutase
TMMP 2,3,5,6-tetrametil-4-metoxifenol
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