AO DEL BUEN SERVICIO AL CIUDADANO

UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

FACULTAD DE ZOOTECNIA

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERA ZOOTECNIA

INFORME DE PRCTICA N01

Recuento de mesfilos en alimento concentrado

ASIGNATURA: MICROBIOLOGIA DE LOS ALIMENTOS

DOCENTE: M.V. LIZ AQUINO

ALUMNOS:

- ARBULU CORTES, CRISTIAN FERNANDO

- CALLE GARCIA, CARLOS ANDRES
- CASTILLO UBILLUS, ELIS JESS
- NEIRA MELENDREZ, LEIDAR HERNAN

PIURA- 2017
 PRACTICA N01: RECUENTO DE MESOFILOS EN ALIMENTO
CONCENTRADO

I. INTRODUCCION

El da jueves 15 de junio del presente ao, en el horario de 02:00 pm a 04:00 pm se realiz la

primera prctica titulada Recuentro de mesfilos en alimento concentrado, del curso
Microbiologa de los Alimentos, dictado por la Doctora Liz Aquino .

Esta prctica comenzando con una explicacin didctica en el laboratorio donde primero
reconocimos los materiales, equipos y reactivos a utilizar. En segundo plano explico sobre
los procedimientos correctos a llevarse en la prctica para lograr obtener si es posible el
recuento de mesofilos en el alimento. As mismo indico cmo se realizaba el mtodo de
dilucin en placa ya que este se utilizara en las siguientes prcticas.

Finalmente se culmina la prctica con una explicacin del docente acerca del mtodo del
recuento para realizar eficientemente nuestros resultados.

II. OBJETIVO

Aprender a realizar el metodo de dilucion en placa o el metodo del numero mas

probable, ya que este se utilizara en las siguientes practicas.

Obervar y analizar la concentracion de bacterias patogenas o mesofilos que puede

haber en el alimento concentrado para animales

III. MATERIALES Y EQUIPOS

Agar Plate Count Mufla

Agua peptonada. Guantes.
Tubos de ensayo (3). Mascarilla.
Placas petri (3). Alcohol 96
Muetsra.( Polvillo de arroz) Fosforo
Jeringas Bolsas de basura
Mechero. Paos.
Marcador. Algodn

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Ilustracin 01 MUFLA Ilustracin 02 AGUA PEPTONADA Ilustracin 03 AGAR
PLATE COUNT

IV. MARCO TEORICO

Mtodo de dilucin:

Los mtodos de dilucin son utilizados para medir la actividad in vitro de un agente
antimicrobiano sobre un microorganismo especfico, utilizando diferentes concentraciones
del agente y un inculo conocido de la cepa bacteriana.

Las pruebas pueden ser realizadas por dilucin en caldo o en agar, de esta forma es posible
determinar la concentracin inhibitoria mnima (CIM) del antibitico, despus de la
incubacin por 24 horas a 35 C.

Tcnica de Recuento por Dilucin:

Es aplicable para evaluar bacterias heterotrficas, aerobias totales (BAT), bacterias

reductoras de sulfato (BRS), anaerobias heterotrficas totales (BAnT), etc.

La tcnica de dilucin por extincin consiste en inocular una serie de frascos tipo
antibitico que contienen 9 ml del medio de cultivo apropiado segn el tipo de bacteria que
se quiera evaluar.

Se obtiene 1 ml de la muestra usando una jeringa descartable, estril, de 1 o 2 ml de

capacidad.

Se inocula el primer frasco, sin retirar la aguja se agita el mismo, se invierte y se retira 1 ml
que se inocula en el 2 frasco.

Con una nueva jeringa, se retira 1 ml del frasco N 2, previamente agitado, y se inocula el
frasco N 3 y as sucesivamente, utilizando una nueva jeringa para cada frasco.

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La manifestacin de crecimiento bacteriano se observa por la turbidez del medio de cultivo
que se compara por transparencia con un frasco sin inocular en el caso de bacterias aerobias
totales y bacterias anaerobias totales; en el caso de bacterias reductoras de sulfatos se debe
observar un ennegrecimiento del frasco.

Una vez inoculados los frascos y rotulados convenientemente, se incuban durante 7 das
(BAT, BAT-RF, MFT) o 14 das (BPA) en estufa de cultivo a 5C respecto de la
temperatura del agua muestreada, efectuando lecturas diarias para observar aquellos frascos
que manifiestan desarrollo positivo.

Agua peptonada:

Medio usado como diluyente y para enriquecimiento bacteriano a partir de alimentos y

otros materiales de inters sanitario.

Medio de enriquecimiento no selectivo, recomendado para ser utilizado en lugar de

solucin fisiolgica para recuperar clulas de enterobacterias daadas por procesos
fisicoqumicos, a los que ha sido sometido el alimento.

Si es utilizado como medio base para la fermentacin de hidratos de carbono, se debe

adicionar el indicador de Andrade y el hidrato de carbono en cuestin.

Agar PLATE COUNT:

PLATE COUNT AGAR (PCA) CROMOGNICO es idneo para Recuento total en

alimentos (FIL, IDF, AOAC, APHA, ICMSF), diferenciando las colonias, incluso las ms
diminutas, de las partculas y del medio.

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V. PROCEDIMIENTO

1. Peso de la muestra a 5 gramos

2. Aplicar 45 ml de agua peptonada al matraz (MADRE) y adicionar 10 ml de la

muestra.

3. Homogeneizar la muestra.

4. Tener listos 3 tubos de ensayos y aadirles 9 ml. de AP, colocarlos en orden en una
gradilla e identificarlos (D1, D2, D3)

5. Sacamos 1 ml. de la muestra madre con ayuda de la pipeta y lo agregamos al tubo

D1. Se homogeniza por 3 minutos aproximadamente.

6. Del tubo D1 sacamos 1ml. con ayuda de la pipeta y le agregamos al tubo D2. Se
homogeniza por 3 minutos aproximadamente.

7. Del tubo D2 sacamos 1ml. con ayuda de la pipeta y le agregamos al tubo D3. Se
homogeniza por 5 minutos aproximadamente.

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8. Colocamos 1ml de cada tubo de ensayo en sus respectivas placas petris.

D D D
1 2 3
D1 D2 D3

9. Aplicar la cantidad adecuada de agar PLATE COUNT a cada placa. Homogeneizar

el agar con la muestra con movimientos circulares sobre la mesa.

10. Dejar reposar las placas, una vez que se hayan solidificado, llevar al proceso de
incubacin a 37 C por 24 horas y 48 horas.

11. Hacer el recuento de colonias.

VI. RESULTADOS:

En los tres tubos de ensayo con la muestra despues de haber realizado el

procedimiento se observo lo siguiente:
- Tubo de ensayo D1: presento turbidez
- Tubo de ensayo D2: presento sedimento
- Tubo de ensayo D3. Presencia mas clara.

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 En los cultivos de placas petri el recuento de colonias fue lo siguiente:
- Cultivo D1: Gran presencia de colonias (incontables)
- Cultivo D2: buena presencia de colonias (incontables)
- Cultivo D3: 30 colonias

D3 = 30 x 103 UFC/g

VII. CONCLUSIONES

Se logro entender con claridad paso a paso el metodo de dilucion en placa.

Con los tubos de ensayo se observo que mientras mas dispersas desde un punto de
inicio(TED1) la muestra con agua peptonada la cantidad de microorganismos en
este caso de mesofilos sera menor (TED3).

Al finalizar la practica y realizar el conteo Se obtuvo gran cantidad de colonias, lo

que significa que el insumo empleado en este caso arroz polvillo esta contaminado
por microorganismos y no debe ser usado en la alimentacion animal, o si no debe
ser tratado a temperaturas altas para eliminar los microorganismos patogenos.

VIII. BIBLIOGRAFIA

http://www.laboratoriomag.com.ar/sitio2/index.php/tecnicas-recomendadas/tecnica-de-
recuento-por-dilucion.
http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/aguapep.htm.
http://aprendeenlinea.udea.edu.co/lms/moodle/mod/resource/view.php?inpopup=true&i
d=100909.
http://www.medioscultivo.com/plate-count-agar-pca-cromogenico/.

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