Introduo ao Espalhamento Raman

e Aplicaes

Adriana Fontes Departamento de Biofsica e Radiobiologia UFPE

hi

h(i-R)

hi
Histria

Fundamentos do espalhamento Raman

Aspectos experimentais

Aplicaes

Novas tcnicas baseadas em Raman

 HISTRIA
Um dos seus mais importantes trabalhos foi sobre as cores dos
oceanos, quando comeou a estudar o espalhamento da luz que
resultou na descoberta do efeito Raman em 1928, pelo qual recebeu o
prmio Nobel (1930).

Chandrasekhara
Espectro Raman do Tetracloreto de Carbono
Venkata Raman

Universidade de Calcut ndia , nasceu: 1888 e faleceu: 1970

 FUNDAMENTOS

Luz
Absoro

Luminescncia

Espalhamento
(1 ou mais ftons)

Espalhamento Rayleigh (elstico no h troca de frequncia)

Espalhamento Raman (inelstico h )

 FUNDAMENTOS
Uma pequena frao da luz espalhada - 1 entre 107 ftons - sofre troca
de freqncia.

Luz ganha ou doa energia

Raman Stokes
h(L M) = hc (1/L-1/M)

E=E E

Raman Anti-Stokes
h(L + M) = hc (1/L+1/M)

A variao de freqncia da luz espalhada deve ser igual s diferenas de

freqncias vibracionais das molculas do material.
 ESPECTRO RAMAN
O espectro Raman um grfico da intensidade em funo do
deslocamento Raman.

Rayleigh
Intensidade

anti-stokes stokes
- 218
- 314
- 459

Raman shift (cm-1)

Espectro Raman do CCl4
 ESPALHAMENTO RAMAN

Processo Seo de choque (cm2)

Absoro (IR) 10-20

Fluorescncia 10-19

Rayleigh 10-24

Raman 10-29

Raman Ressonante 10-24

SERS 10-18
 FUNDAMENTOS

estadosvirtuais
estados virtuais

fnon
fnon nveis vibracionais
nveis vibracionais
Stokes
stokes Anti Stokes
anti-stokes

Raman Stokes Raman Anti-Stokes

h(L M) = hc (1/L-1/M)
h(L + M) = hc (1/L+1/M)

 FUNDAMENTOS
Em um quadro clssico podemos pensar o efeito Raman como a
modulao de um dipolo oscilante.

Rayleigh
Luz
-

+
Raman (Stokes, Anti-Stokes)
p=qL

vibraes (ncleos)

impresso digital

(informaes sobre ligaes qumicas)

 FUNDAMENTOS
Rayleigh
Luz
-

+
Raman (Stokes, Anti-Stokes)
p=qL

p=E E = E0 cos (2 L t)

funo das coordenadas normais de vibrao L = L0 cos (2 M t)

expandindo: = 0 + (/ L)0 L0 cos (2 Mt) +

p = 0 E0 cos (2 L t) + (/ L)0 E0L0 cos (2 M t) cos (2 L t) +

p = 0 E0 cos (2 L t) + (/ L)0 (E0L0/2) {cos [2 (L+ M) t] + cos [2 (L- M) t]} +

Rayleigh Anti-Stokes Stokes

 ASPECTOS EXPERIMENTAIS

Dificuldade do Raman = Sinal Fraco!

IRaman ~ 10-6 a 10-10 IRayleigh

Separar o sinal Raman do Rayleigh

(monocromadores duplos e triplos 60s)

90s Desenvolvimento de filtros NOTCH (rejeitam apenas freqncia

do laser). Filtros super notch plus s passa 10-6 Ilaser . Dois filtros em
srie rejeita o laser at 10-12 (permitem uso de monocromadores de
30 cm).

linha do laser *
 ASPECTOS EXPERIMENTAIS

Raman dispersivo vs. micro-Raman (classificado de acordo com a

regio analisada da amostra).

Micro-Raman mais interessante do ponto de vista biolgico (precisa

de microscpio).
ASPECTOS EXPERIMENTAIS

fenda
lentes

CCD
ASPECTOS EXPERIMENTAIS

Lasers pulsados vs. contnuos:

 ESPALHAMENTO RAMAN

1. Material polarizvel: 0
dq

Intensidade 4

2. Comprimento de onda?
(polarizao)
Luminescncia

3. Sensvel: massa atmica, estrutura e geometria, fora de ligao,

vizinhana

4. Molculas: simetria de inverso (IR ou Raman), sem simetria (IR e

Raman), vibrao simtrica (Raman) e anti-simtrica (IR).

materiais cristalinos vs. no cristalinos *

 ASPECTOS EXPERIMENTAIS

Infravermelho menor espalhamento (1/4) e menor absoro

 APLICAES

units)

units)
(arb.units)

Intensity (arb. units)

Silcio 1 s Anatase 1 s

Intensity (arb.
Intensidade

Intensidade
460 500 540 580 250 400 550 700
Raman shift (cm-1-1) Raman shift
Raman (cm-1-1))
shift (cm
Raman shift (cm )

Microesfera 2 s Hemcia 120 s

units)
(arb.units)

units)
units)

(a) 1030 (b) 751

units)
(arb.
(arb.
1001
Intensidade(arb.

Intensity (arb.
622

Intensidade
Intensity
Intensity

SrTiO3
667
60s
995

600 800 1000 600 800 1000

-1 -1
Raman shift
Raman shift (cm
(cm -1) ) Ram anshift
Raman shift (cm
(cm-1) )

Os picos da hemcia em 667, 751, e 995 cm1 correspondem, respectivamente,

a 7 hem, 14 hem, e (CbC1) bandas. Os picos da microesfera, 1001 and 1030
cm1, so atribudos a fenil grupos do poliestireno.
 SISTEMA DE ESPECTROSCOPIA

Nd:Yag

camera
Computador

BS
Telescpio
NF/SP
CCD
BS1 NF BS2
Monocromador

Ti:S pulsado

BP Argnio

Ti:S cw
APLICAES
 intensity (arb. units)

619 phenylalanine
guanine 667
adenine 720
RNA bases
cytosine, uracil 783
813
tyrosine 853
aromatic amino acids

902

phenylalanine 1005

C-N, C-C str. 1092

1127

1211
amide III 1259

Raman shift (cm-1)

1340

C-H 2 def. 1457

ESPECTRO RAMAN DE UMA CLULA

1580

amide I 1651
Urine sample Blood serum sample

Phenylalanine
tyrosine

tyrosine
tyrosine
C-O-C stretching

urea phenylalanine

C-C stretching

Amide III
BIOFLUIDOS

C-H bending

Amide I
T = 150 seconds

T = 60 seconds
APLICAES: ATEROSCLEROSE
 APLICAES

CNCER DE PELE - ADQUIRIDO IN VIVO BIPSIA PTICA

 APLICAES

normal

maligno

benigno

CNCER DE MAMA
 APLICAES

Avaliar a qualidade, identificar e quantificar materiais polimricos.

Polietileno de 0.96, 0.910 e 0.882 g/cm3.

 APLICAES
Molculas orgnicas so polimrficas. Isso tem despertado a ateno da
indstria farmacutica, pois diferentes polimrficos podem ter
diferentes propriedades fsicas e qumicas, tais como, estabilidade
trmica, dissoluo e biocompatibilidade.
APLICAES: NANOTUBOS DE CARBONO

d = 218,3/ (RBM - 15,9)

razo entre a banda G e

D indica defeitos se as
mesmas tem intensidade
semelhante
 IMAGENS RAMAN E ESPECTROSCOPIA DE NICA
MOLCULA (PARTCULA)

Distribuio de Nucleotdeo na apopitose

de clula HeLa em 788 cm-1.

SERS CARS
(Surface Enhancement Raman Scattering)
(Coherent Anti-Stokes Raman Scattering)
103 a 106
 SERS = Surface Enhanced Raman Scattering
- Superfcie com filmes/partculas metlicas, pontas com filmes/
partculas metlicas, partculas metlicas em suspenso.

- Campo eltrico incidente causa oscilao nas cargas de superfcie do

metal (plasmons). H amplificao de campo eletromagntico quando
o objeto est prximo dos plasmons.

- Transferncia de carga entre as molculas adsorvidas na superfcie e

o metal.
 SERS = Surface Enhanced Raman Scattering

-Casamento do comprimento de onda incidente com o plasmon do

material.

- Plasmon varia com o material, tamanho, rugosidade e forma.

- Plasmon varia com agregados (pinas pticas).

SERS = Surface Enhanced Raman Scattering
 CARS = Coherent Antistokes Raman Scattering

Ressonncia com ncleos se B = 1 - 2 = fonon

Batimento

2 CARS
1 + fnon
1
1
105

fnon ICARS I12 I 2

tempo

lasers pulsados de picosegundo no infravermelho, confocal

lasers caros, background no ressonante, tem que saber antes a vibrao de

interesse
 CARS = Coherent Antistokes Raman Scattering

F-CARS = muito intenso e E-CARS = sem background no ressonante

CARS Microscopy for Biology and Medicine E. Potma & X. S. Xie Optics and Photonics
News 40 November (2004)
 CARS = Coherent Antistokes Raman Scattering

E CARS Difuso de leo de beb na pele

Chemical imaging of tissue in vivo with video-rate coherent anti-Stokes Raman scattering microscopy
C. Evans et al. Proc. Natl. Acad. Sci. 102 (46) 16807 (2005)
CARS = Coherent Antistokes Raman Scattering

CARS Microscopy
X. Sunney Xie - Harvard
Evoluo do crescimento de
gotas de lipdio (2845 cm -1)
visualizadas sem marcao
aps introduo de drogas

Lipid Res. 44, 2202, 2003.

CARS = Coherent Antistokes Raman Scattering

camera

BS

CARS Microscopy
BS1 X. Sunney Xie - Harvard

Ti:S pulsado

Argnio

Telescpio Ti:S pulsado/

Lock-to-clock
 ESPALHAMENTO RAMAN

Identificao, anlise e caracterizao de materiais.

OBRIGADA PELA ATENO!