ACTIVIDAD

DE LA DESHIDROGENASA DEL CIDO SUCCNICO

OBJETIVOS: Determinar la actividad de la enzima deshidrogenasa en el musculo fresco

MUESTRAS: Msculos frescos (desmenuzado en la picadora de carne)

EQUIPOS:

MATERIALES DE PROTECCION PERSONAL:

Mandil
Guantes
Vestimenta apropiada

REACTIVOS:

Hidrxido sdico, dilucin al 10%

cido succnico, dilucin al 3% (3g de acido succnico se disuelven en 97ml de agua y se
neutralizan con disolucin de hidrxido sdico al 10% hasta el pH 7,4 segn el papel
indicador)
Azul de metileno, disolucin acuosa al 0.001%, 0.05%, 0.1% y 0.5%
Aceite de vaselina o vegetal
Acido tricloroactico, disolucin al 20%, 5% y 1%

MATERIALES E INSUMOS:

Mortero con pistilo

Arena de vidrio
Soporte con tubos de ensayo
Pipetas
Bao Mara (50C)
Termmetro
Tubos de ensayo
Espectrofotmetro
Celdas para espectrofotmetro
Vasos de precipitacin

PROCEDIMIENTO:

1. MARCAHA DE LOS TRABAJOS}

Triturar cuidadosamente en el mortero con arena de vidrio aproximadamente 6 g de

tejido de musculo desmenuzado, aadiendo de 18 a 20 ml de disolucin de acido
succnico. La masa homogenizada obtenida se reparte en 20 porciones iguales que se
ponen en 20 tubos de ensayo. Las combinaciones sern las siguientes:

 Tubo Acido tricloroactico Azul de
metileno
1 0,001%
2 - 0,05%
3 0,1%
4 0,5%
5 0,001%
6 20% 0,05%
7 0,1%
8 0,5% Tejido de Aceite
9 0,001% musculo
10 10% 0,05%
11 0,1%
12 0,5%
13 0,001%
14 15% 0,05%
15 0,1%
16 0,5%
17 0,001%
18 1% 0,05%
19 0,1%
20 0,5%

Los tubos de ensayo 1, 2, 3 y (experimental) le enzima activa. En todos los tubos se aade 1 2
gotas de disolucin de azul de metileno, se mezcla y sobre la superficie de liquido se vierte de
0,5 a 1 ml de aceite para aislar del oxigeno de aire. Los tubos de ensayo se incuban en bao
Mara (50C) durante 1, 3, 5, 10 y 15 min. Medir la absorbancia a 660 nm para cada una de las
muestras en cada uno de los tiempos, se deber medir y reingresar al bao de Mara
inmediatamente.

RESULTADOS:

Absorbancia nm Velocidad
Inhibidor 20% (umol/L/min)
Sustrato S.I. 1(min) 3 (min) 5(min) 10(min) 15(min)
0,001%
0,05%
0,1%
0,5%

 Absorbancia nm Velocidad
Inhibidor 10% (umol/L/min)
Sustrato S.I. 1(min) 3 (min) 5(min) 10(min) 15(min)
0,001%
0,05%
0,1%
0,5%

Absorbancia nm Velocidad
Inhibidor 15% (umol/L/min)
Sustrato S:I. 1(min) 3 (min) 5(min) 10(min) 15(min)
0,001%
0,05%
0,1%
0,5%

Absorbancia nm Velocidad
Inhibidor 1% (umol/L/min)
Sustrato S. I 1(min) 3 (min) 5(min) 10(min) 15(min)
0,001%
0,05%
0,1%
0,5%

Absorbancia nm Velocidad
Sin Inhibidor (umol/L/min)
Sustrato S.I. 1(min) 3 (min) 5(min) 10(min) 15(min)
0,001%
0,05%
0,1%
0,5%