ADN RECOMBINANTE

El ADN recombinante, o ADN recombinado, es una molcula de ADN artificial formada de

manera deliberada in vitro por la unin de secuencias de ADN provenientes de dos
organismos distintos que normalmente no se encuentran juntos. Al introducirse este ADN
recombinante en un organismo, se produce una modificacin gentica que permite la adicin
de una nueva secuencia de ADN al organismo, conllevando a la modificacin de rasgos
existentes o la expresin de nuevos rasgos. La produccin de una protena no presente en un
organismo determinado y producidas a partir de ADN recombinante, se llaman protenas
recombinantes.
El ADN recombinante es resultado del uso de diversas tcnicas que los bilogos
moleculares utilizan para manipular las molculas de ADN y difiere de la recombinacin
gentica que ocurre sin intervencin dentro de la clula. El proceso consiste en tomar una
molcula de ADN de un organismo, sea virus, planta o una bacteria y en el laboratorio
manipularla y ponerla de nuevo dentro de otro organismo. Esto se puede hacer para estudiar
la expresin de un gen, para producir protenas en el tratamiento de una enfermedad
gentica, vacunas o con fines econmicos y cientficos.1

Procedimiento
El proceso de produccin de un ADN recombinante comienza con la identificacin desde un
organismo de una secuencia de ADN de inters con el fin de propagarlo en otro organismo
que carece de la secuencia y, por ende, del producto proteico de esa secuencia de ADN.2 As
se pueden producir cantidades ilimitadas de la protena codificada por el susodicho gen. En
trminos simples, el procedimiento consiste en:3

Localizacin de genes y sus funciones.

Clonacin del ADN, y su posterior almacenamiento en genes.
Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR)
Utilizacin de vectores de expresin.

Aplicaciones
El vector que se utiliza contiene secuencias de ADN que al ser replicadas confieren resistencia
a antibiticos especficos. Esta tcnica ha sido ampliamente utilizada en el campo de la
medicina y ha permitido el desarrollo de importantes avances teraputicos como por ejemplo
la produccin de insulina recombinante.2
Permite adems la posibilidad de utilizar plantas y alimentos transgnicos, as como
microorganismos modificados genticamente para producir frmacos u otros productos de
utilidad para el hombre, entre los que se pueden citar: la insulina humana, la hormona del
crecimiento, interferones, la obtencin de nuevas vacunas o la clonacin de animales.
Con el uso de ADN recombinante se ha logrado obtener plantas transgnicas resistentes
a insectos, hongos, bacterias y herbicidas, con mejores caractersticas de calidad durante
poscosecha y con alto contenido nutricional.4 Tambin ha permitido la clonacin, expresin y
produccin mediante esta tcnica de diversos antgenos, por ejemplo, la vacuna contra la
hepatitis B5 y la vacuna contra el virus del papiloma humano.6
Produccin y terapia con protenas recombinantes

Las protenas recombinantes son aquellas que se producen mediante la tcnica del ADN
recombinante, es decir, expresando un gen de un organismo en otro organismo distinto. Para
que estas protenas sean tiles desde el punto de vista teraputico tienen que conservar su
actividad. Adems, se debe evitar que sean inmunognicas para el ser humano. Para ello es
importante decidir para cada protena recombinante cual es el organismo de expresin ms
adecuado.

Produccin en bacterias[editar]
Estas protenas recombinantes han intentado expresarse en bacterias como E. coli, ya que
son fciles de mantener, crecen rpido y se conoce bien su genoma. Sin embargo, el mayor
problema que presenta la produccin en bacterias es que en ellas no existe glicosilacin
proteica, por lo que algunas protenas producidas en bacterias pierden totalmente su funcin.
Aun as se han logrado producir con xito algunas protenas recombinantes en bacterias. La
primera protena recombinante que se produjo en E. coli fue la somatostatina, una hormona
anti-crecimiento de 14 aminocidos. Sin embargo, aunque desde el punto de vista cientfico
fue un xito, desde el punto de vista econmico fue un fracaso, ya que su utilidad estaba
reducida a personas con problemas de gigantismo y similares, que son poco comunes.
Posteriormente se logr un gran xito en este campo mediante la produccin de insulina en
bacterias. La insulina presenta la ventaja de no necesitar modificaciones postraduccionales,
por lo que se evita este problema de su produccin en bacterias. Adems, la diabetes es una
enfermedad muy frecuente en la sociedad, con unos 347 millones de diabticos.7 En EEUU el
6% de la poblacin (20 millones de habitantes) son diabticos y esta enfermedad es la 6
causa de muerte. Antes de esta produccin en bacterias, se usaba insulina porcina.

Produccin en levaduras[editar]
Al ser clulas eucariotas y por lo tanto ms similares a las humanas que las bacterias y ser
muy fciles de emplear industrialmente, las levaduras constituyen otro grupo de organismos
susceptibles de producir protenas recombinantes para uso humano. Sin embargo, aunque s
presentan glicosilacin proteica, al contrario que las bacterias, esta es totalmente distinta a la
humana, por lo que estas protenas presentan problemas, en muchos casos incluso
inmunognicos.

Produccin en clulas de insecto[editar]

Ms cercanas an a las clulas humanas que las levaduras son las de insecto, como las de
Spodoptera frugiperda (una polilla parsito del maz y del algodn), que se cultivan fcilmente
in Vitro, aunque el medio de cultivo es caro. Dicho medio, adems, no contiene suero, lo que
hace ms fcil el procesado de la protena. Otra de las propuestas ha sido el uso no de clulas
de insecto, sino de los insectos completos para la produccin de estas protenas. Para ello se
infectan a los insectos con baculovirus modificados (que adems no infectan a los seres
humanos) para que expresen la protena recombinante. Sin embargo, este sistema presenta
exactamente el mismo problema que el de levaduras: que las clulas de insecto presentan
glicosilacin, pero esta es totalmente distinta a la de mamferos.

Produccin en clulas de mamfero[editar]

Al ser clulas ms parecidas a las humanas, el procesamiento que sufren las protenas
recombinantes producidas en clulas de mamfero tambin es ms similar, por lo que se
conserva su funcin (aunque puede haber ligeros cambios en el patrn de glicosilacin). Los
inconvenientes de este mtodo es que el crecimiento celular es ms lento, tardando de 6 a 24
horas en duplicarse las clulas, que los cultivos pueden sufrir contaminacin de bacterias u
hongos y que se puede contaminar el producto con virus que infecten a humanos. Para la
produccin en mamferos se usan las clulas CHO, de ovario de ratn chino, que presentan la
ventaja de que crecen bien y existen gran cantidad de mutantes de glicosilacin. Adems, se
est intentando que los animales secreten estas protenas en la orina, en la leche, etc.