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DETERMINACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

RESUMEN

La finalidad de este trabajo experimental es determinar la actividad de la -amilasa

salival; enzima que tiene la capacidad de producir la degradacin del almidn para
formar glucosa.

INTRODUCCIN
Las enzimas son protenas que actan como catalizadores en reacciones qumicas dentro
de la clula, aumentan notablemente su velocidad y son protagonistas fundamentales en
los procesos del metabolismo celular.

La accin cataltica de las enzimas es de carcter especfico, es decir, cada reaccin

qumica debe ser catalizada por una determinada enzima.

Para el desarrollo de esta prctica se utiliz la enzima -amilasa salival y como sustrato
el almidn, para poder demostrar la actividad enzimtica que ella posee.

OBJETIVOS

Objetivos principales:

Realizar la actividad enzimtica de la enzima -amilasa salival sobre el almidn.

Reconocer la conformacin del sistema enzimtico.

Objetivos especficos:

Reconocer la presencia de azucares reductores a travs de la utilizacin del

reactivo de Benedict.
Reconocer el sustrato residual utilizando solucin yodada.
Demostrar la formacin de carbohidratos reductores como consecuencia de la
actividad enzimtica.

MATERIALES Y REACTIVOS

Materiales: Reactivos

Gradilla Solucin de almidn al 1%

6 tubos de ensayo Cloruro de Sodio 0.1 M
Pipetas graduadas Enzima al 1%
Incubadora Bao Mara cido Clorhdrico 0.05 M
Mechero Solucin yodada
Reactivo de Benedict
Agua destilada
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PROCEDIMIENTO

ETAPA 01:

Armar el siguiente sistema:

COMPONENTES / REACTIVOS SISTEMA

- Tubos de ensayo IA II A

- Solucin de Almidn 1% 5 mL 5 mL

- Solucin de Cloruro de Sodio 0.1 M 1 mL 1 mL

- Agua destilada 4 mL 3 mL

- Enzima 1% X 1 mL

Realizar el siguiente procedimiento para el tubo de ensayo I A:

PASO 1: Colocar 5 mL PASO 3: Colocar 4 mL

de almidn al 1% de H2O destilada
desedeedesdesdestilada

PASO 2: Colocar
1 mL NaCl 0.1 M
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Realizar el siguiente procedimiento para el tubo de ensayo II A:

- Poner a calentar el Bao Mara a 37 C

- Antes de realizar el paso 4 colocar el tubo de ensayo en el Bao Mara por 5 min

PASO 1: Colocar 5 mL PASO 3: Colocar 3 mL

de almidn al 1% de H2O destilada
destilada

al 1%

PASO 2: Colocar 1 PASO 4: Colocar 1 mL de la enzima al

mL de NaCl 0.1 M 1%, sin retirar del Bao Mara por 30 min.

ETAPA 02:

De cada uno de los tubos de ensayo de la ETAPA A, transferir 1 mL de sus

correspondientes en el siguiente cuadro inmediatamente cumplidos los 30 min.

Armar el siguiente sistema:

COMPONENTES / REACTIVOS SISTEMA

- Tubos de ensayo IB II B

- De los tubos I A y II A de la ETAPA 1 1 mL 1 mL

- cido Clorhdrico 0.05 N 1 mL 1 mL

- Solucin Yodada 0.5 mL 0.5 mL

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Realizar el siguiente procedimiento para el tubo de ensayo I B:

PASO 1: Colocar 1 PASO 3: Colocar 0.5 mL
mL del tubo I A de solucin yodada

PASO 2: Colocar 1 mL
de HCl 0.05 N

- Observar que sucede al momento de colocar la solucin yodada en el tubo de

ensayo que no contiene la enzima.

Realizar el siguiente procedimiento para el tubo de ensayo II B:

PASO 1: Colocar 1 PASO 3: Colocar 0.5 mL

mL del tubo II A de solucin yodada

PASO 2: Colocar 1 mL
de HCl 0.05 N
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- Observar que sucede al momento de colocar la solucin yodada en el tubo de

ensayo que contiene la enzima.

ETAPA 03:

COMPONENTES / REACTIVOS SISTEMA

- Tubos de ensayo IC II C

- De los tubos I A y II A de la ETAPA 1 1 mL 1 mL

- Reactivo de Benedict 1 mL 1 mL

Realizar el siguiente procedimiento para el tubo de ensayo I C:

PASO 1: Colocar 1
mL del tubo I A

PASO 2: Colocar
1 mL de Benedict

- Una vez finalizado el procedimiento del tubo I C, poner a hervir por 2 minutos e
identificar algn cambio que se produzca.
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Realizar el siguiente procedimiento para el tubo de ensayo II C:

PASO 1: Colocar 1
mL del tubo II A

PASO 2: Colocar
1 mL de Benedict

- Una vez finalizado el procedimiento del tubo II C, poner a hervir por 2 minutos
e identificar algn cambio que se produzca.

RESULTADOS

Resultados de la ETAPA 1:

Una vez finalizado el procedimiento de la ETAPA 01 se obtuvieron dos resultados,

que son los siguientes:

Tubo de ensayo I A Tubo de ensayo II A

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- No se observa ningn cambio en ninguno de los tubos de ensayo, la nica

diferencia es que el tuno I A no contiene la enzima, mientras que el tubo II A s.

Resultados de la ETAPA 2:

Una vez finalizado el procedimiento de la ETAPA 02 se obtuvieron dos resultados,

que son los siguientes:

Tubo de ensayo I B Tubo de ensayo II B

- Tubo I B: La solucin que contiene el tubo de ensayo I B tomo un color azul

oscuro, este cambio de color se debe a que existe una presencia de almidn en la
solucin.

- Tubo II B: Ocurrieron dos cambios en la solucin que contiene el tubo de ensayo:

PRIMER CAMBIO: La enzima -amilasa salival tuvo un efecto catalizador

sobre el almidn, formando molculas ms pequeas, como la glucosa.
SEGUNDO CAMBIO: Ya que la -amilasa salival degrado al almidn en
molculas ms pequeas, la solucin yodada pudo actuar sobre la solucin
presente en el tubo de ensayo; producindose as el color anaranjado opaco.
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Resultados de la ETAPA 3:

Una vez finalizado el procedimiento de la ETAPA 03 se obtuvieron dos resultados,

que son los siguientes:

Tubo de ensayo I C Tubo de ensayo II C

- Tubo I C: Luego de haber hervido la solucin presente en el tubo de ensayo I C por 2

minutos, no se produjo ningn cambio de color o de algn otro tipo.

- Tubo II C: Luego de haber hervido la solucin presente en el tubo de ensayo II C por 2

minutos, se gener un cambio de color, paso de color cian a color verde oliva; este
cambio de color en la solucin se produjo a causa del reactivo de Benedict, ya que solo
acta en presencia de carbohidratos reductores.

DISCUSIN

1. Cmo observo usted la presencia del sustrato en los tubos de ensayo?

Se puede observar la presencia del sustrato (almidn) al colocarle solucin
yodada a una muestra , en el caso del experimento fue al colocarle solucin
yodada al tubo I B. Si la muestra no contiene almidn, al colocarle la
solucin yodada cambia a un color anaranjado opaco ya que se produjo una
reaccin enzimtica.
2. Cmo demostr usted si se ha producido o no reaccin enzimtica en el
experimento realizado?
La reaccin enzimtica se demostr en la etapa 2, al colocarle solucin
yodada a la solucin de almidn, en el tubo I B hubo un cambio a color azul
oscuro, lo que indica la presencia de almidn (no se produjo reaccin
enzimtica); mientras que en el tubo II B hubo un cambio de color a
anaranjado opaco, lo que indica que hubo una reaccin enzimtica. Tambin
se demostr la en la etapa 3, usando el reactivo de Benedict en el tubo I C,
generando un color a verde oliva, lo que indico que se haba producido una
reaccin enzimtica del almidn hasta carbohidratos reductores.
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3. Cmo objetiv usted los productos de la reaccin enzimtica en el experimento

realizado?
En la etapa 2, el producto final en el tubo I B fue almidn ya que no se
gener una reaccin enzimtica; mientras que en el tubo II B el producto
final fueron carbohidratos reductores ya que si se gener una reaccin
enzimtica.
4. Qu diferencia y/o semejanza entre los experimentos 4 y 5 para determinar la
actividad enzimtica?
Se utilizaron dos reactivos: solucin yodada y reactiva de Benedict. La
diferencia para determinar la reaccin enzimtica en una solucin de
almidn es que al usar la solucin yodada cambia de a color azul oscuro;
muestras que al usar el reactivo de Benedict cambia a color verde oliva.

CONCLUSIONES
La aceleracin de la reaccin qumica producida en la degradacin del almidn
se da por la enzima -amilasa salival y teniendo como coenzima al Cloruro de
Sodio; la aceleracin de la reaccin del almidn se produce hasta llegar a
carbohidratos reductores.

En la etapa 2, tubo de ensayo I B; al colocarle la solucin yodada a la solucin

presente en el tubo de ensayo, tomo un color azul oscuro, este cambio de color
se debe a que existe una presencia de almidn en la solucin.

En la etapa 3, tubo de ensayo II C; la enzima -amilasa salival actu

correctamente sobre el almidn, degradndolo a molculas menos complejas, el
reactivo de Benedict actu cambindolo de color cian a color verde oliva; lo que
indica la presencia de carbohidratos reductores.