DETERMINACIN DEL ACETAMINOFN EN JARABE DE DOSIS BAJA MEDIANTE

ESPECTROSCOPIA NIR

-El objetivo principal del artculo fue desarrollar un modelo de calibracin robusto utilizando NIR
capaz de determinar el contenido de dosis baja de un jarabe (2% p/v)

-Por lo tanto, utilizaron variables como campaas de produccin, lotes, concentracin de

principio activo, base de jarabe, operadores y temperaturas de la muestra se introdujeron en el
conjunto de calibracin. Luego, se construy un modelo de prediccin utilizando la regresin de
mnimos cuadrados parciales (PLS).

-La primera derivada seguida de la variable estndar normal (SNV) se eligieron como pre
procesamiento de la seal. Basado en la validacin cruzada de subconjuntos aleatorios, 4
factores PLS fueron seleccionados para el modelo de prediccin. A continuacin, se valid el
mtodo para una concentracin de acetaminofn que vari de 16 a 24 mg / ml (1,6-2,4%, p / v)
utilizando un conjunto de validacin externo. El RMSEP de 0,26 mg / ml sugiri la precisin global
del modelo.

- el perfil de precisin obtenido a partir de los resultados de la validacin, basado en los intervalos
de tolerancia, confirm la exactitud adecuada de los resultados generados por el mtodo en
todo el rango de concentracin del API investigado. Finalmente, se utiliz el modelo NIR para
monitorear en tiempo real la concentracin de API mientras se mezclaban jarabes que contenan
varias cantidades de API, se encontr una buena relacin entre el mtodo NIR y las
concentraciones tericas.

Cmo lo hicieron?

Preparacin del jarabe: un jarabe de acetaminofn fue diseado con una concentracin
entre: 16 y 24mg/mL. Una cantidad de entre 400 y 600mg de API se disolvi en 20 mL de
jarabe base en un matraz volumtrico de 25mL. El jarabe base fue preparado usando
60mL de glicerol, 10mL etanol, 5mL de agua y conservantes para 100mL.
Muestras de calibracin: 3 campaas de produccin de jarabes fueron incluidos en el
mtodo de calibracin por NIR. 16, 20 y 24mg/mL (1.6 , 2.0 y 2.4 w/v) de jarabe de
acetaminofn fueron preparados por cada campaa de produccin, 3 jarabes por cada
nivel de concentracin.
Muestras externas de validacin
FT-NIR y software
El mtodo de referencia utilizado para la determinacin de acetaminofn fue el de HPLC
recomendado por la USP 32.
Anlisis multivariado: PLS

Resultados:

Para construir una modelo robusto NIR, el conjunto de calibracin debe contener la variabilidad
futura esperada que el modelo cumplir en la rutina diaria. Por tal razn, 6 fuentes de variabilidad
fueron integradas: Campaas de produccin, lotes por campaa, Concentracin de
acetaminofn, Bases de excipientes, operadores, temperatura de las muestras durante la
adquisicin NIR. En la tabla 1 estn los detalles.
-En primer lugar, se fabricaron 3 campaas de produccin de jarabe. De hecho, durante el ciclo
de vida de un mtodo analtico, se analizarn muchas campaas de produccin.

- Entonces es necesario incluir diferentes campaas de produccin en el conjunto de calibracin.

En total acuerdo con la consideracin anterior, 9 lotes independientes fueron fabricados por
campaa de produccin, 3 lotes por nivel de API.

-Con el fin de cubrir una gran parte del intervalo de concentracin de acetaminofn, cada jarabe
se fabric alrededor de los niveles de concentracin objetivo (entre 16 y 24 mg / ml 5%) pesando
varias cantidades de API. Adems, de una campaa de produccin a otra, tambin se introdujo
la variabilidad en la base de jarabe: se utilizaron 2 marcas de glicerol y conservantes de jarabe, 1
lote por marca. Se combinaron al azar para fabricar 3 bases de jarabe por campaa de
produccin. Adems, como un mtodo analtico no est dedicado a slo 1 operador, el conjunto
de calibracin fue diseado con 2 operadores.

-El operador (a) fabric la primera campaa de produccin de jarabe y realiz los
correspondientes anlisis de HPLC y NIR. El operador (b) trabaj en las restantes campaas de
produccin del conjunto de calibracin. Finalmente, a medida que se analizan muestras lquidas
en el presente estudio, los cambios de temperatura pueden inducir variaciones espectrales que
conducen a distancias incrementadas de Mahalanobis (es una forma de determinar la similitud
entre dos variables aleatorias multidimensionales) Con el aumento de las temperaturas, las
bandas de absorcin de agua se estn moviendo a temperaturas ms altas y hay un aumento en
la altura de la seal. Por lo tanto, las muestras fueron escaneadas por termostato a 25 y 30 C.
Las muestras se analizaron una vez mediante el mtodo de referencia de HPLC. Por campaa de
produccin, se registraron 18 espectros NIR y se realizaron 9 mediciones de referencia. Como se
fabricaron 3 campaas de produccin diferentes, el conjunto de calibracin completo contiene
un total de 54 espectros NIR y 27 mediciones de referencia.

Validacin externa: ?

Se fabricaron nuevos lotes para el conjunto de validacin externa. Como puede verse en la Tabla
1, las fuentes de variabilidad introducidas fueron las mismas que para el conjunto de calibracin,
excepto que slo el operador (b) dise el conjunto de validacin externa. Con el fin de
demostrar que 3 niveles de concentracin de API fueron suficientes para construir un slido
conjunto de calibracin y para validar completamente el modelo, 5 niveles de concentracin de
API se integraron en el conjunto de validacin externa. Por campaa de produccin, se
registraron 30 espectros NIR y se realizaron 15 mediciones de referencia. Como 3 campaas de
produccin diferentes fueron fabricadas, el conjunto de validacin completo contiene un total
de 90 espectros NIR y 45 mediciones de referencia.

Resultados de la validacin del mtodo NIR:

La siguiente figura, Muestra el espectro de tramitancia del jarabe de acetaminofn (20mg/mL).

Y la reflectancia del espectro de acetaminofn.

Jarabe de acetaminofn: 3900-5300 y 6000-7200cm-1

Acetaminofn: 4000 9000 cm-1

La siguiente tabla (2), muestra los parmetros convencionales para el modelo NIR.

-La regin elegida: 5955-7212cm-1 para construir el modelo cuantitativo que contiene la
informacin acerca del API.

-La regresin PLS se realiz con el conjunto de calibracin. La validacin cruzada basada en
subconjuntos aleatorios se llev a cabo para seleccionar el nmero de modelo de factores PLS.
Para la validacin cruzada de subconjuntos aleatorios, se seleccionaron 9 divisiones y 10
iteraciones.
-Acerca del nmero de factores PLS, la Fig. 2 muestra la evolucin del RMSECV (Root Mean
Square Error of Cross Validation) segn el nmero de factores PLS. Basndose en esta cifra, se
seleccionaron 4 factores PLS, ya que el valor RMSECV es mnimo de 4 factores PLS.

La figura 3, muestra una concordancia entre las predicciones NIR y HPLC.

- Como el enfoque del presente estudio es la determinacin de una API en una formulacin
farmacutica, los lmites de aceptacin se fijaron en 5% para la validacin del mtodo NIR
mientras que la probabilidad de obtener resultados dentro del intervalo de tolerancia se fij en
95%.

- Los lmites de cuantificacin inferior y superior (LLOQ y ULOQ) definen el rango en el que un
mtodo analtico es capaz de cuantificar con precisin. Son respectivamente los niveles de
concentracin ms pequeos y ms altos donde los intervalos de tolerancia de expectativa se
incluyen dentro de los lmites de aceptacin. Si el intervalo de tolerancia de la expectativa nunca
cruza los lmites de aceptacin, entonces el LLOQ y ULOQ se localizan al principio y al final del
rango de contenido activo investigado.