TERAPIA GENICA

Concepto

La terapia gnica consiste en la transferencia de un gen

activo a una clula husped. Este gen puede ser tanto un
gen hmologo funcional que complemente a un gen
defectuoso y que haya sido obtenido del mismo husped, o
un gen heterlogo de otro donante y que haya sido
transferido con fines teraputicos. Las potenciales
aplicaciones clnicas de la terapia gnica son numerosas y
van desde el tratamiento de enfermedades que derivan de
defectos genticos, as como tambin el cncer y
enfermedades virales.
La terapia gnica no solo requiere la introduccin de
secuencias de ADN forneas, sino tambin de su expresin
en forma estable y regulada en la clula husped.
La situacin ideal consistira en lograr el reemplazo del gen
defectuoso por el gen normal mediante recombinacin
homologa.
Hasta el momento la metodologa utilizada consiste en la
complementacin del defecto gentico mediante la
introduccin de un gen normal adicional.

Tipos

Existen en la actualidad dos grandes tipos de terapia

gnica: la terapia de clulas germinales y la de clulas
somticas.
La primera no ha sido desarrollada en el ser humano.
Consiste en introducir un gen exgeno en una clula
huevo, obtener un organismo transgnico y a partir de l
una lnea pura que exprese de forma estable el producto
gnico. Las razones que impiden su aplicacin al hombre
son variadas: unas de ndole tico; otras, los enormes
problemas tcnicos, aun hoy insoslayables, asociados a
esta tecnologa.
Queda as como nica opcin la terapia de clulas
somticas, se preserva el reservorio gentico de la especie
y solo se pretende obviar los efectos metablicos asociados
a un defecto gentico determinado en un individuo
afectado. Los genes candidatos para la transferencia son
aquellos que ya han sido clonados y caracterizados y que
estn claramente asociados a una sintomatologa clnica
definida. Tambin se conocen trastornos de origen
multignico pero su terapia es aun hoy inabordable por la
complejidad gentica y tecnolgica inherente a los mismos.
La terapia gnica somtica a su vez puede clasificarse en dos tipos: in
vivo y ex vivo.
En la terapia in vivo la transformacin celular tiene lugar en el
paciente al que se le administra la terapia. Tiene la desventaja de que
es muy difcil que el vector, por ejemplo un virus, localice a un nico
tipo de clulas diana.
En la terapia ex vivo la transformacin celular se lleva a cabo a partir
de una biopsia del tejido del paciente y luego se le transplantan a las
clulas ya transformadas. Como ocurre fuera del cuerpo del paciente,
este tipo de terapia es ms fcil de llevar a cabo y permite un control
mayor del tipo de clulas infectadas. Principalmente se utilizan en
esta terapia clulas hematopoyticas, que son aquellas llamadas
clulas madre pluripotenciales.

Procedimientos

Los avances realizados hacia fines de la dcada del 70 y

comienzos de los 80, en la comprensin de la biologa de
los retrovirus llevaron a su uso intensivo como vehculos
para la transferencia eficiente de genes a clulas de
mamferos. Llevan en su interior informacin gentica en
forma de ARN. Una vez que infectan a una clula, el
genoma a ARN es transcripto en forma reversa hacia la
forma ADN.
A los efectos de poder utilizar los retrovirus como vehiculo
de genes teraputicos, los genes virales endgenos deben
ser reemplazados por el gen de inters. Estas
manipulaciones se realizan utilizando tcnicas de
recombinacin de ADN
AGREGAR FIGURA.
Un vector retroviral con estas caractersticas ser incapaz
de producir las protenas que permitan su propia
encapsidacin tal cual ocurre con el retrovirus silvestre. Es
decir, que los retrovirus recombinados son defectivos. Los
genes que codifican para las protenas necesarias para el
ensamblado de la partcula viral estn suplementadas por
las lneas celulares denominadas empaquetadoras. De aqu
se desprende que le sistema de retrovirus recombinado se
divide en dos componentes: el vector retroviral en si mismo
y las clulas empaquetadoras. El retrovirus recombinado
que contiene el gen teraputico producido por las clulas
empaquetadoras, podr infectar una clula blanco e
integrarse en el genoma husped, pero una vez integrado
ser incapaz de replicarse o reproducir partculas virales.
El sistema retroviral mas utilizado es el derivado del
retrovirus de la leucemia murina de molones. Las clulas
empaquetadoras son fi1broblastos de origen murino.
Como desventaja, ocurre que los genes se integran
aleatoriamente y pueden, pues, fragmentar genes del
hospedador; muchos retrovirus slo infectan clulas en
divisin. Adems, pueden tener

Entre los diversos sistemas no virales de la transferencia de

genes, uno de los procedimientos con mayores perspectivas
de uso clnico es el de los liposomas. Los liposomas son
vesculas lipdicas que inicialmente fueron utilizadas en la
industria farmacutica para la liberacin de drogas y
actualmente son utilizados tambin en cosmetologa. A los
efectos de su uso como vehiculo de genes en terapias
gnicas, ciertos liposomas de carga positiva son asociados
con el ADN de inters que posee carga negativa,
formndose de este modo un complejo ADN-liposoma que
interacta a travs de uniones electrostticas. Este sistema
ha sido utilizado en forma eficiente para la transferencia de
genes en cultivo, aunque aun existen diversos
inconvenientes a resolver para su utilizacin in vivo. El
primero de todos es obviamente la especificidad de modo
tal que solo las clulas afectadas sean capaces de captar el
complejo ADN-liposoma. Otro inconveniente importante es
la eficiencia de la transferencia gnica, ya que estos
sistemas difcilmente escapen con xito a los
compartimientos lisosomales intracelulares que digieren
completamente a los liposomas, liberando el ADN y
facilitando su destruccin.
Otro sistema no viral con posibles aplicaciones teraputicas
es el bombardeo con partculas de alta energa. Dichas
partculas consisten en general en ADN conjugado a
partculas de oro o plata. Un mtodo innovador para la
transferencia de ADN in vivo es el desarrollo de los
complejos ADN-asialo ovomucoide-polisina. Este complejo
posee alta especificidad por el hgado ya que el receptor de
las asialoglicoproteinas esta confinado casi exclusivamente
a los hepatocitos.
Finalmente, los ltimos aos han sido testigos de un
aumento en el uso de ADN desnudo, en particular el de
oligonucleotidos dirigidos contra el extremo 5 de un gen
determinado. El objetivo teraputico en este caso es
intentar el bloqueo de la expresin de dicho gen y es
particularmente til en el diseo de terapias antitumorales.
Diversos estudios han demostrado que es posible bloquear
la expresin de oncogenes mediante el uso de este sistema,
lo que ha llevado al inicio de ensayos clnicos en seres
humanos.

No todos los vectores virales son retrovirus, tambin se

utilizan vectores como los adenovirus. Estos son la
alternativa ms acariciada, en parte por su notable
seguridad, ya que no puede esperarse ninguna enfermedad
grave de un adenovirus. Adems infectan fcilmente a las
clulas humanas, que tienden a producir elevados niveles
de la protena teraputica. Los vectores adenoviricos
introducen genes en el nucleo, pero no en los cromosomas.
Se evita as la posibilidad de alterar genes vitales o
desarrollar un cncer. En su contra tienen que la eficacia de
los genes es temporal. Puesto a que el Adn termina
desapareciendo , los tratamientos de la fibrosis qustica y
otras enfermedades crnicas deberan repetirse cada
meses o aos. A la ves esta es una ventaja si se necesita
solo transitoriamente la presencia de alguna protena.
Actualmente el principal obstculo al uso de adenovirus en
pacientes humanos radica en la potente respuesta
inmunitaria que provocan. Tras un primer tratamiento , la
infeccin es exitosa pero enseguida las defensas del
hospedador se ponen en marcha, matando a las clulas
alteradas y el sistema inmunitario reconoce a los virus en
tratamientos posteriores.
Tambien se estn estudiando las posibilidades que ofrecen
otros virus, asociados con los adenovirus: Los herpesvirus,
alfavirus y poxvirus. Aunque ninguno es ideal, es posible
que exista alguna aplicacin terapeutica para cada uno de
ellos ya que ninguno produce enfermedades conocidas en
el hombre. Ademas, sus formas naturales integran a sus
genes en los cromosomas humanos, utilidad limitada por su
pequeo tamao y capacidad de almacenamiento de
informacin gentica.

DATOS EXPERIMENTALES.

La mayora de los datos experimentales con los que cuenta

la terapia gnica son de tratamientos contra el cncer,
muchas veces usados como la ltima alternativa
teraputica en pacientes de extrema gravedad.

TERAPIA GENICA CONTRA EL CANCER.

Existen varios enfoques de la terapia gnica experimental

en el tratamiento del cncer. Se basan en la introduccin de
clulas cancerosas de genes que den lugar a la produccin
de molculas txicas qweqweqweqweqwe