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INTRODUCCIN
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II. OBJETIVOS
2.1. General
- Realizar la toma de muestra, preparar, diluir y sembrar
muestras para el anlisis microbiolgico del alimentos.
2.2. Especfico
- Identificar el uso de los medios de cultivo de acuerdo al
microorganismo a estudiar.
- Conocer las dos tcnicas de sembrado (puncin y por estras)
realizados en 2 cajas Petri y 2 tubos de ensayo.
- Determinar la cantidad de microorganismos presentes en la
muestra de refresco de cocona.
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para el muestreo. Tambin debe cubrir el tipo de producto que se va a
analizar, pues la calidad de un anlisis depende de la calidad del
muestreo realizado.
La toma de muestras para anlisis debe ser practicada por el funcionario
que representa la autoridad sanitaria, el cual debe ser competente y
estar autorizado para hacerla efectiva durante la preparacin,
almacenamiento, transporte, comercializacin, expendio de alimentos y
bebidas, para efectos de la actividad de Inspeccin, Vigilancia y Control
sanitario de acuerdo con la reglamentacin sanitaria vigente, la cual
establece que las Entidades Territoriales de Salud, tomarn muestras de
acuerdo a su competencia.
A su vez la toma de muestras se basa en el peligro que puede ofrecer el
alimento a la poblacin susceptible de consumirlo, por la posibilidad de
la presencia de microorganismos con capacidad de alterar el alimento,
de patgenos o cualquier otro inconveniente fsico o qumico que se
determine como posible fuente de riesgo para la salud de las personas.
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3.2.1 Recuento microbiano
Se determina el nmero de microorganismos en una muestra en
relacin a las colonias que forman, las UFC (Unidades Formadoras de
Colonias). Se emplean soluciones diluidas o diluciones de una
muestra concentrada para que cada colonia formada provenga de un
solo microorganismo aunque algunas agrupaciones no pueden ser
separadas por las diluciones. Se utilizan principalmente para la
cuantificacin de bacterias, levaduras y hongos filamentosos. Se
reporta como:
UFC ****/unidad de volumen o peso.
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3.3 Condiciones generales para el cultivo de microorganismos
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3.3.4. Condiciones adecuadas de humedad
3.3.6 pH
3.3.7. Temperatura
Segn su origen:
3.4.1 Naturales
Son los preparados a partir de sustancias naturales de origen animal
o vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya
composicin qumica no se conoce exactamente.
3.4.2 Sintticos
Son los medios que contienen una composicin qumica definida
cualitativa y cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados
reproducibles.
3.4.3 Semisintticos
Son los sintticos a los que se les aaden factores de crecimiento
bajo una forma de un extracto orgnico complejo, como por ejemplo
extracto de levadura.
3.4.4 Lquidos
Se denominan caldos y contienen los nutrientes en solucin acuosa.
3.4.5 Slidos
Se preparan aadiendo un agar a un medio lquido (caldo) a razn de
15g/litro. El agar es una sustancia inerte polisacrido (hidrato de
carbono) que se extrae de las algas. Como esta sustancia no es
digerida por las bacterias no constituye ningn elemento nutritivo.
Este conjunto convenientemente esterilizado puede ser vertido en
placas de Petri o en tubos de ensayo y presentan la posibilidad de
aislar y diferenciar bacterias, "procesos que antes no eran posibles en
medio lquido".
3.4.6 Semislidos:
Contienen 7,5 g de agar /litro de caldo. Se utilizan para determinar la
motilidad de las especies en estudio. Actualmente se encuentran
disponibles comercialmente con el agregado de agar. microbiano, a
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veces es necesario agregar o eliminar componentes qumicos del
medio.
3.4.7 Comunes o universales:
Su finalidad es el crecimiento de la mayor parte de los
microorganismos poco existentes. Es el medio ms frecuentemente
utilizado para mantener colonias microbianas. Por ejempl: agar
comn o caldo comn.
3.4.8 Enriquecidos
Estn compuestos de un medio base como apoyo del crecimiento al
cual se le puede agregar un gran exceso de nutrientes como
suplementos nutritivos, por ejemplo: sangre, suero, lquido asctico,
etc. Se utiliza para microorganismos que tienen grandes exigencias
nutricionales.
3.4.9 Selectivos
Son slidos en los que la selectividad se consigue alterando las
condiciones fsicas del medio o aadiendo o suprimiendo
componentes qumicos especficos con el fin de inhibir el crecimiento
de especies qumicas cuyo crecimiento no interesa. Este tipo de
medio slo permite el crecimiento de un grupo de microorganismos e
inhibiendo el de otros. Se utiliza para seleccionar y aislar
microorganismos a partir de poblaciones mixtas. Por ejemplo Agar
salado-manitol o Chapman (permite el crecimiento de ciertos
estafilococos).
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Recuento microscpico de partculas
Recuento electrnico de partculas
Recuento de colonias
Mtodo del nmero ms probable
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La mayor dificultad del recuento en cmara es obtener
reproducibilidad en el llenado de la cmara con lquido. Otra dificultad
es la adsorcin de las clulas en las superficies del vidrio, incluyendo
pipetas. Esta adsorcin es crtica en el proceso de dilucin de la
muestra y se minimiza al realizar las diluciones en medios de alta
fuerza inica (solucin fisiolgica o medios mnimos sin fuente de
carbono).
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IV. MATERIALES Y METODOS.
4.1. Materiales.
- Asas de siembra
- Agua destilada
- Piseta
- Algodn
- Placa Petri
- Tubos de ensayo
- Pipeta
- Detergente
- Escobillas
- Mechero de alcohol
- Gradilla
- Vaso precipitado
4.2. Sustancias
- Agar nutritivo
- Muestra (refresco de cocona)
4.3. Metodologa.
El siguiente trabajo prctico se realiz en el laboratorio de
fitopatologa de la Universidad Nacional de Ucayali a las 11a.m el
da 06/06/17 el cual se realiz con las explicaciones de la Ing.
Cristina Quiones y con la colaboracin de su ex alumno Cristian
Ramos.
La prctica consisti en la determinacin de microorganismos en
una muestra lquida la cual fue refresco de cocona; realizamos las
diluciones 10-1 10 -2 y 10 -3 de la muestra madre.
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V. PROCEDIMIENTO.
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Los resultados obtenidos fueron:
VI. CONCLUSIONES.
VII. BIBLIOGRAFA.
https://www.ecured.cu/Medio_de_cultivo_(Microbiolog%C3%ADa)
https://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/quimica/5_anio/bio
tecnologia/practicoIII.pdf
https://libroslaboratorio.files.wordpress.com/2012/09/medios-de-
cultivo-en-un-laboratorio-de-microbiologc3ada.pdf
http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/tp4.pdf
http://www.ugr.es/~cjl/medios%20de%20cultivo.pdf
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VIII. ANEXOS.
Materiales utilizados
Desinfeccin del rea de trabajo con
detergente y agua destilada
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Esterilizacin del asa de siembra
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