Universidad Nacional Federico Villarreal

Facultad de Tecnologa Mdica

Escuela Profesional de Laboratorio y Anatoma Patolgica

Determinacin de glucosa basal y posprandial

Docente:
Lic. TM. Andrs E. Huarachi Saavedra

Integrantes:
Apaza Delgado , Elizabeth
Crdenas Espinoza, Karen
Rabanal Casimiro, Caroline
Rodas Cancho, Elsa
Sandoval Mallma, Milagros
Torres Mora, Carolina
2015
 Universidad Nacional Federico Villarreal Bioqumica II

INTRODUCCIN

Los carbohidratos son aldehdos y cetonas que tienen dos o ms grupos hidroxilo. Se clasifican como
monosacridos (que tienen grupo aldehdo o cetona), oligosacridos (algunos monosacridos enlazados
entre s) o polisacridos (muchos monosacridos enlazados). El monosacrido ms abundante e importante
en la naturaleza es el azcar de seis carbonos D-glucosa.

La glucosa es la principal fuente de energa para el metabolismo celular. Se obtiene fundamentalmente a

travs de la alimentacin, y se almacena principalmente en el hgado, el cual tiene un papel primordial en
el mantenimiento de los niveles de glucosa en sangre (glucemia).
Para que esos niveles se mantengan y el almacenamiento en el hgado sea adecuado, se precisa la ayuda
de la insulina, sustancia producida por el pncreas. Cuando la insulina es insuficiente, la glucosa se acumula
en sangre, y si esta situacin se mantiene, da lugar a una serie de complicaciones en distintos rganos. Esta
es la razn principal por la que se produce aumento de glucosa en sangre, pero hay otras enfermedades y
alteraciones que tambin la provocan.

Es vital detectar, identificar y cuantificar la glucosa en suero o plasma y orina para el diagnstico de la
diabetes y para el control de los pacientes diabticos. Los procedimientos analticos que se utilizan con
mayor frecuencia son el mtodo enzimtico de la glucooxidasa y el mtodo de la hexocinasa, porque son
especficos para la glucosa. Con frecuencia se utiliza la prueba oral de tolerancia

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OBJETIVOS

Destacar la importancia de la glucosa en el metabolismo humano y su relacin con diversas

patologas.

Determinar la concentracin de glucosa en estado basal y posprandial en una muestra biolgica

mediante el mtodo enzimtico colorimtrico.

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MARCO TEORICO

I. Glucosa plasmtica en ayunas:

Los individuos normales mantienen una concentracin de glucosa plasmtica tras ayuno de 10 a 16 hrs de
55-110 mg/dl aunque los valores tienden a aumentar con la edad. La elevacin de la concentracin de
glucosa plasmtica en ayunas constituye una indicacin de diabetes sacarina. El National Diabetes Data
Group propone que una concentracin de glucosa plasmtica en ayunas igual o mayor a en ms de una
ocasin constituye diagnstico de diabetes sacarina.

II. Glucosa plasmtica poprandial de dos horas:

La prueba de glucosa plasmtica posprandial de dos horas es una prueba de carga sencilla en la cual mide
la glucosa plasmtica dos horas despus de que el paciente consume algn alimento ; por ejemplo: azcar
de mesa, Frutas, lcteos, dulces, harinas, y cereales, etc. ; que contenga aproximadamente 100g de
carbohidratos, mezclado con otras sustancias. Los niveles por encima de 200 mg/dl indican un diagnstico
de diabetes mellitus.

Normalmente luego de ingerir alimentos, la glucosa en sangre tiene un aumento moderado. Con la ayuda
de la insulina del cuerpo, la glucosa, ingresa en las clulas del organismo para que estas puedan
aprovecharla. Y es justamente el examen de glucosa pospandrial la que nos ayudara a medir este moderado
aumento, determinando si hay hiperglucemia pospandrial, para ello se mide la concentracin de glucosa
dos horas despus de la ingesta de un alimento.

Si el nivel de glucosa est entre 140 y 199 mg/dl dos horas despus de haber bebido el lquido, se tiene una
forma de pre-diabetes llamada Intolerancia a la glucosa, lo que significa que existe el riesgo de desarrollar
diabetes tipo dos pero an no se tiene.

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MATERIALES

a) 5 Tubos de ensaye de 13 X100mm.

b) Micropipetas de 1000 y 10L.
c) Puntas para micropipeta.
d) Gradilla.

A B C D

EQUIPOS:

a) Espectrofotmetro o analizador para lecturas de 490-550 nm.

b) Centrifuga.

A
B

REACTIVOS:

I. S. Standard: solucin de glucosa 100 mg/dl (1 g/l).

II. A.Reactivo A: solucin conteniendo glucosa oxidasa (GOD), peroxidasa (POD), 4-aminofenazona
(4-AF), buffer fosfatos pH 7,0 y 4-hidroxibenzoato

I II

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FUNDAMENTO DEL MTODO

La enzima glucooxidasa cataliza la oxidacin de glucosa a gluconato y perxido de hidrgeno. La

concentracin de glucosa es proporcional al H2O2, este puede medirse aparendolo con un indicador de
peroxidasa. La determinacin de glucosa se efecta mediante el mtodo de Trinder segn las siguientes
reacciones:

POD = Peroxidasa

4-AF = 4-aminofenazona

PROCEDIMIENTO

I. ANLISIS PREANALTICO

CONDICIONES PREVIAS A LA PTOG

Dieta sin restricciones los tres das previos ( 150 gr de carbohidratos)

Suspender tratamientos que interfieren con el metabolismo de la glucosa
No cambiar el estilo de vida los tres das previos
No estar cursando por un proceso febril o infecciones
No fumas , no tomar caf
Evitar el estrs
Es obligatorio el ayuno de 10 a 12 horas antes de la prueba ( solo tomar agua)
Explicar al paciente, en qu consiste la prueba y el tiempo de duracin
El paciente debe acudir puntualmente a la hora indicada.

INDICACIONES EN EL MOMENTO EN QUE SE VA A REALIZAR LA PTOG

Indicar al paciente o familiar que lea cuidadosamente la declaracin de consentimiento y luego de

haber entendido lo informado debe de firmar dicho documento
El paciente debe guardar treinta minutos de reposo antes de empezar y permanecer en reposo
durante el tiempo que demora la prueba.
El paciente debe ingerir toda la solucin glucosada en el lapso no mayor de 5 minutos
Se invalidara la prueba si el paciente llegara a vomitar, di fuma o mascara chicles.

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II. ANLISIS ANALTICO:

1. Realizamos la venopuncin a una compaera, la cual previamente debi de haber cumplido con
las condiciones previas a la PTOG. La persona a la que se le hizo la venopuncin estuvo en ayunas
(el ayuno no debe ser menor de 10 horas ni mayor a 12 horas).

1ra muestra ( 3ml ):

Esta vendra a ser la

muestra basal,
muestra que se
deber tomar al
paciente que a estado
en ayuna.

2. Luego de realizar la primera venopuncion, dar de comer y beber la carga oral de glucosa (verificar
la hora).En este caso fue un pltano, un vaso de leche y tostadas con mermelada.

Todos estos alimentos fueron

suministrados a partir de las 9.30 am.

Muy importante la hora para

calcular despus de dos horas la
glucosa posprandial.

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3. Despus de 2 horas, es decir a las 11.30 am , realizamos la ltima venopuncin para la

determinacion de la PTOG (separar el suero o plasma para evitar la glicolisis).

2da muestra (3ml) :

Esta vendra a ser la

muestra posprandial
, debido a que fue
tomada a los 120
minutos despus de
haber ingerido los
alimentos con carga
de glucosa
(desayuno).

ESQUEMA DE TRABAJO :

Muestra basal I Muestra corresponde a cero minutos.

9.30 a.m. Termina de comer y beber la solucin glucosada
Muestra post -pandrial II Muestra a las 2 horas
11:30 a.m.

4. Luego centrifugamos las dos muestras (muestra basal y post pandrial ) , por 10 minutos a 1500
rpm.

10 minutos
a 1500 rpm,
en la
centrifuga.

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5. Luego trabajamos de la siguiente forma con la muestra basal , post pandrial , y la solucin estndar
( S) que nos viene con el kit DE WIENER LAB. Esta solucin S nos sirve para medir el control de
calidad del procedimiento que vamos a realizar y de su resultado, ya que esta contiene una solucin
de glucosa conocida que es de 100 mg/dl (1 g/l).

T1 T2 ST ( 100mg/dl) GLUCOSA
ENZIMATICA
MP1 ( 0) 30 l - - 3000 l ( 3ml)
MP2 ( 120) - 30 l - 3000 l( 3ml)
ST - - 30 l 3000 l( 3ml)

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Cogemos 30 l de cada uno ( MP1,MP2,ST) , con la pipeta automtica, y lo echamos en tres

tubos respectivamente.

Vaciar cada uno en un tubo diferente.

Luego a cada
uno agregar
3ml (3000 l)
del reactivo A
(glucosa
enzimtica)
con la pipeta
automtica.

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Aqu tenemos todos los tubos con la muestra

respectiva (MP1, MP2, sol. estndar) ms 3
ml de la solucin de glucosa enzimtica.

A la vez preparamos un tubo blanco*, que

contiene reactivo A.

*tambin puede ser la misma cantidad de

agua destilada.

Este tubo blanco nos servir para calibrar

nuestro espectrofotmetro, y obtener un
resultado mucho ms especfico.

6. Incubar los siguientes

tubos en bao mara, a una
temperatura de 37C por 5
minutos.

7. Realizar la espectrofotometra de cada uno de los anteriores tubos a una longitud de onda de 505
nmt. MEDIR DE MENOR A MAYOR COLOR DEL TUBO

Echamos cada solucin de cada

tubo , en un tubo spectronic , los
ponemos en el espectrofotmetro
y leemos la absorbancia que nos
da cada uno a una longitud de
onda de 505nm.

M1 : 0,311
M2: 0,213
ST: 0,404

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III. POST- ANALTICO

1. Luego de realizar el procedimiento en el espectrofotmetro, se van a interpretar los resultados de
la siguiente manera:

Absorvancia
Observacin...

Al momento de medir con el espectrofotmetro lo

MP 1 0.311 calibramos con ayuda del BLANCO. El cual si se
desea ser exactos se utiliza como blanco el reactivo
MP 2 0.213 de glicemia enzimtica pero si dicho reactivo est
muy colorido es porque se ha pasado y en vez de eso
se usa agua destilada como blanco.
Solucin 0.404
Estndar

* MP 1: Muestra problema 1 ; MP2: muestra problema 2

2. Previamente se halla el Factor de Calibracin

Factor de calibracin = [ST]

L[ST]

Se observa la concentracin de la solucin estndar de la

glicemia enzimtica en la etiqueta del envase de

1 g/L <> 100 mg/dL.

Factor de calibracin = 100 = 247.5

0. 404

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3. Luego se determina la concentracin de la glucosa o concentracin de la muestra problema.

[MP x] = Factor de calibracin x absorcin de C/ MPx

[MP 1] = 247.5 x 0.311 = 76.9 mg/dL

[MP 2] = 247.5 x 0.213 = 52.7 mg/dL

4. CONTROL DE CALIDAD
Se realiza segn las indicaciones que vienen con el reactivo.

Para nuestros resultados se

A B
encuentran dentro del rango
establecido ya que
Low 50 - 100 50 - 80
A(MP 1) : 76.9 mg/dL

High 120 - 140 110 - 130 B (MP2): 52.7 mg/dL

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CUESTIONARIO

1. Cul sera la carga de glucosa anhidra indicada para los pacientes peditricos?

Para la realizacin de una prueba oral de tolerancia a la glucosa en nios, la OMS recomienda la
administracin de 1,75 g/KG de masa corporal (9,7mmol) hasta un mximo de 75g; esta
recomendacin era seguida por el 72,2% de los centros. Para la interpretacin de la prueba oral de
tolerancia a la glucosa en nios y adultos no gestantes, la OMS utiliza los valores de la concentracin
de glucosa en plasma basal y a las 2 horas post sobrecarga.

2. En qu casos el Lic. Tecnlogo medico puede rechazar o invalidar la PTOG?

Prueba de Tolerancia Oral a la Glucosa (PTOG): se requiere que el individuo haya ayunado al menos
ocho horas antes de la prueba. Individuo debe tomar una solucin glucosada con 75 gramos de
glucosa disuelta en agua.
Entonces no debe comer ni beber nada despus de la medianoche. Sino ser rechazada la PTOG.
Si el individuo tiene un nivel de glucosa en la sangre entre 140 y 199 mg/dl, se le diagnostica un pre
diabetes llamada intolerancia a la glucosa, significa que el individuo puede llegar a tener una
diabetes tipo 2.

3. Por qu es importante procesar la primera muestra basal, antes de suministrar al paciente la

solucin glucosada?

Como sabemos, que la concentracin de glucosa srica por lo general se vuelve anormal slo
cuando hay un trastorno grave de esta interaccin, el verificar la glucosa srica ayuda a evaluar la
funcin e integridad, el equilibrio del sistema.
La prueba de glucosa en ayunas va evaluar de modo aproximado la capacidad del cuerpo para
regular la glucosa y nos va a proporcionar informacin acerca de la clase de anormalidad, si es que
la hay.

4. Considera usted que debe de existir una declaracin de consentimiento de parte del paciente
para poder proceder a realizar la PTOG. Si o No por qu?

Si, considero que una declaracin de consentimiento se debera desarrollar desde el primer
momento en que se toma contacto con el paciente y a lo largo de toda su atencin. Ya que es
importante reconocer y respetar el derecho y la autonoma de los pacientes, lo que enmarca no
solo una exigencia jurdica, sino, sobre todo una exigencia tica como trabajadores de la salud.
Adems se promueve la participacin del paciente en su proceso de salud lo que significa que
COMPARTE RESPONSABILIDADES Y ASUME RIESGOS.

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5. Explique el comportamiento observado en las concentraciones sanguneas de PTOG, el

incremento observado y su posterior disminucin en la concentracin de este carbohidrato en
sangre?

Muestra problema 1: resultado de glucosa plasmtica en ayuna, al realizar mis clculos me sali
como resultado 76.9mg/dl de glucosa en ayuna.

Muestra problema 2: resultado de mi glucosa plasmtica posprandial de dos horas, al realizar los
respectivos clculos, result 52,7mg/dl.

En esta persona los valores de glucosa en ayuna estn dentro de los valores referenciales, debido a
que existe una buena interaccin al momento de regular la glucosa en sangre, ya que no se ha
ingerido ningn alimento; sin embargo el sistema lo regula adecuadamente. Por el contrario nos
indicara valores anormales si es que el sistema no funcionara correctamente.

Normalmente luego de ingerir alimentos (como frutas, harinas, dulces, etc), la glucosa en sangre
tiene un aumento moderado. Con la ayuda de la insulina del cuerpo, la glucosa, ingresa en las
clulas del organismo para que estas puedan aprovecharla. Y es justamente el examen de glucosa
pospandrial la que nos ayudara a medir este moderado aumento, que luego se regularizara por el
propio sistema.

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RECOMENDACIONES

Los anticoagulantes de uso corriente como la EDTA, oxalato, heparina o fluoruro no afectan los
resultados.
La hemlisis hasta 0,3 g/dL de hemoglobina no interfiere.
La muestra es inaceptable si:
Si el suero se obtiene turbio.
Si la identificacin es inadecuada.
Si el tubo de recoleccin no es el adecuado.
Cuando se haya excedido el tiempo mximo de anlisis permisible
No usar reactivos fuera de la fecha indicada.
No pipetee los reactivos con la boca y evite el contacto con piel y ojos.

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CONCLUSIONES

Esta prueba mide la cantidad de glucosa (azcar) que hay en la sangre. El azcar es una fuente importante
de energa, especialmente para el cerebro. El sistema endcrino (glandular) controla con exactitud la
cantidad de glucosa en la sangre. Este sistema hace que el azcar se almacene o se utilice para energa,
segn las necesidades de su cuerpo.

Usted puede obtener la glucosa directamente de algunos alimentos, como el azcar de mesa. El cuerpo
tambin puede producir glucosa cuando se digieren otros alimentos, como el pan y los cereales. Por lo
general, la prueba de glucosa en la sangre se hace para detectar la diabetes mellitus.

La glucosa postprandial los niveles de glucosa en sangre a las dos horas de la ingesta de un alimento. La
determinacin de este parmetro se utiliza para el diagnstico de la diabetes y otras enfermedades del
metabolismo de la glucosa y para el clculo del ndice glucmico de los alimentos. Algunos autores sealan
que la glucosa postprandial es un mejor marcador de la diabetes que la glucosa en ayunas

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BIBLIOGRAFA

Glicemia enzimtica AA para la determinacin de glucosa en suero, plasma, orina o liquido

cefalorraqudeo.
Obtenido en:
http://www.wienerlab.com.ar/VademecumDocumentos/Vademecum%20espanol/glicemia_enzi
matica_aa_liquida_sp.pdf

Manual practica de bioqumica clnica UNIVERSIDAD AUTONOMA DE MEXICO. Facultad de

QUIMICA.
Obtenido en:
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/MANUALBIOQUIMICACLINICA_10817.pdf

Glucosa plasmtica en ayunas y glucosa plasmtica posprandial .

Obtenido de:
Libro de Quimica clnica . - Shauna C.Anderson,Ph.D ,Susan Cockayne, Ph.D. Mc Graw-
Hill.Intearmericana.

Estado posprandial y el riesgo de enfermedad cardiovascular, declaratoria de posicin.

Obtenido en:
http://www.medigraphic.com/pdfs/cardio/h-2003/h032a.pdf

Clases dictadas en la Facultad de Tecnologa mdica en la UNFV.

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