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Cromatografia

Descrio Geral

Foi desenvolvida e nomeada pelo botnico russo Mikhail Tswett em 1906.


A cromatografia um mtodo fsico-qumico que permitem a separao, identificao e
determinao dos componentes muito semelhantes de misturas complexas.
Ela est fundamentada na migrao diferencial dos componentes de uma mistura, que ocorre
devido a diferentes interaes, entre duas fases imiscveis, a fase mvel (gs, lquido ou fluido
supercrtico) e a fase estacionria (imobilizada em uma coluna ou superfcie plana), na qual a
fase mvel forada a passar.
Os componentes que so retidos mais fortemente na fase estacionria movem-se mais
lentamente no fluxo da fase mvel, e as que interagem mais fracamente com a fase
estacionria se movem mais rapidamente.

Atravs destas diferenas de velocidades de migrao conseguimos separar os componentes


da amostra (em bandas ou zonas de discretas) que podem ser analisados.

Classificao dos Mtodos Cromatogrficos

Podem ser divididos em dois tipos:


Cromatografia de Coluna A fase estacionria mantida em um tubo estreito, e a fase
mvel forada atravs do tubo sob presso ou por gravidade.
Cromatografia Planar Fase eluente suportada sobre uma placa plana ou nos poros de
um papel. Baseia-se nos princpios de capilaridade e fora gravitacional.

Iremos tratar basicamente da cromatografia de coluna.

Classificao dos mtodos de Cromatografia em Coluna


Classificao geral Mtodo especfico Fase estacionria Tipo de equilbrio

Cromatografia Gasosa a. Cromatografia gs- Lquido adsorvido ou ligado a uma Partio entre gs e lquido
liquido (CGL) superfcie slida

b. Gs-slido Slido Adsoro

Cromatografia Lquida a. Lquido-liquido ou Lquido adsorvido ou ligado a uma Partio entre lquidos
partio superfcie slida imiscveis
b. Lquido-slido ou Slido Adsoro
adsoro
c. Troca inica Resina ou troca inica Troca inica
d. Excluso por Lquidos nos interstcios de um slido Partio/excluso
tamanho polimrico
e. Afinidade Grupo especfico ligado a uma superfcie Partio entre lquido na
slida superfcie e lquido da fase
mvel
Cromatografia com Espcies orgnicas ligadas a uma superfcie Partio entre fluido
fluido supercrtico slida supercrtico e espcies
liquidas ligadas superfcie
Eluio em cromatografia em coluna

Processo no qual os solutos so levados atravs da fase estacionria pelo movimento de uma
fase mvel. A fase mvel que deixa a coluna chamada eluato.
Eluente o solvente empregado para transportar os componentes de uma mistura atravs de
uma fase estacionria.
Coluna tubo estreito recheado de solido inerte, que retm a fase estacionria na superfcie.
Fase Mvel ocupa os espaos entre partculas do recheio.

Amostra coloca-se fase mvel coloca-se eluente amostra desloca-se separao em


bandas ou zonas coleta.

Cromatograma

um grfico de alguma funo da Concentrao da amostra x Tempo de Eluio ou Velocidade


de Eluio.
Detector sinal registrado em funo do tempo picos

A posio dos picos pode ser empregada para identificar os componentes da amostra. J a
rea sob os picos, exprime a quantidade de cada uma das espcies da amostra.

CROMATOGRAFIA GASOSA

O estudante graduado alemo Fritz Prior desenvolveu a cromatografia gasosa de estado slido
em 1947. Archer John Porter Martin, vencedor do Prmio Nobel, estabeleceu os fundamentos
para o desenvolvimento da cromatografia gasosa (1941 Juntamente com Richard Laurence
Millington Synge) e posteriormente produziu a cromatografia gs-lquido (1950).
Na Cromatografia gasosa, os componentes de uma amostra vaporizada so separados em
consequncia de sua partio entre uma fase mvel gasosa e uma fase estacionria lquida ou
slida contida em uma coluna. Em contraste com muitos outros tipos de cromatografia, a fase
mvel no interage com as molculas do analito.
Existem dois tipos de cromatografia gasosa:
- Cromatografia Gasosa Gs-Lquido (CGL) Fase mvel um gs, enquanto a fase estacionria
um liquido retido na superfcie de um slido inertepor adsoro ou ligao quimica.
- Cromatografia Gasosa Gs-Slido (CGS) Fase mvel um gs, ao passo que a fase
estacionria um slido que retm os analitos por adsoro fsica. Permite a separao de
gases de baixo peso molecular, como os componentes do ar, sulfeto de hidrognio, CO, xido
de nitrognio.
Instrumentos para a CGL

Sistema de gs de arraste: Fase mvel = gs de arraste deve ser quimicamente inerte


(He o mais comum Ar,N,H) disponveis em cilindros pressurizados.
Vaso controlada por reguladores de presso em dois estgios um no cilindro e outro
no cromatgrafo. No final da coluna medidor de vaso.

Sistema de Injeo da amostra: Obtemos maior eficincia se a amostra possuir tamanho


adequado.
Seringas calibradas amostras liquidas diafragmas ou septos de silicone em um ponto
de admisso aquecido localizado na cabea da coluna. Porta de admisso da amostra
50C acima da temperatura de ebulio do componente menos voltil da amostra.
Amostras solidas so introduzidas como soluo ou seladas um vials (frascos) de parede
fina.
Configuraes de colunas e fornos para as colunas: Existem dois tipos de colunas Colunas
recheadas (mais antigas) e Colunas Tubulares Abertas (Colunas Capilares), que so mais
rpidas e eficientes que as anteriores.
Comprimento Desde menos de 2 m at mais de 50m.
Constituio Vidro, slica fundida, teflon, ao inoxidvel (fornos enrolados em bobinas
de 20 a 30 cm de dimetro).
Temperatura uma varivel que deve ser controlada dentro de poucos dcimos de grau
(boa preciso). Temperatura tima depende do P.E. da amostra e grau de separao
requerido. Para amostras com ampla faixa de P.E., desejvel que se empregue uma
programao de temperatura, sendo esta aumentada continuamente ou em etapas, a
medida que a separao se processa.

Efeito da T nos cromatogramas obtidos por CG: (a) isotrmica 45C; (b) isotrmica 145C;
(c) programada de 30C a 180C.
Sistemas de deteco: Caractersticas de um detector ideal
1. Sensibilidade adequada;
2. Boa estabilidade e reprodutibilidade;
3. Resposta linear aos solutos que se estenda a vrias ordens de grandeza;
4. Faixas de T (ambiente at 400C);
5. Tempo de resposta curto e independente da vazo;
6. Alta confiabilidade e facilidade de uso;
7. Similaridade de resposta a todos os solutos ou resposta altamente previsvel e seletiva
a uma ou mais classes de solutos.
8. No deve destruir a amostra.
Nenhum detector existente exibe todas essas caractersticas.

- Detectores por Ionizao de Chama (FID):


o mais utilizado na CG. O eluente diludo para uma pequena chama de ar/hidrognio. A
deteco feita pelo monitoramento da corrente produzida pela coleta dos portadores de
carga oriundos da pirlise da amostra (ons e
eltrons). Esta corrente medida por um Pico
ampermetro.
Grupos funcionais como carbonila, lcool,
halognios e amina produzem pouco ou
nenhum on na chama.
insensvel para gases no combustveis
como H2O, CO2, SO2, e NOX. Por isso, muito
til para anlise de amostras orgnicas.
Possui alta sensibilidade (10-13 g/s), larga faixa
linear de resposta (10-7) e baixo rudo.
Desvantagem: Destri a amostra.
- Detector Fotomtrico de Chama (FPD):
Usado nas anlises de poluentes do ar e em gua, de agrotxicos e produtos hidrogenados de
carvo.
Seletivo: Principalmente compostos com S e P.

- Detector por Condutividade Trmica (DCT):


Um dos primeiros detectores, mas ainda com ampla aplicao.
Vantagens: Simplicidade, ampla faixa dinmica linear (10-5), resposta abrangente a espcies
orgnicas e inorgnicas e caracterstica no-destrutiva, permitindo que os solutos sejam
coletados aps a deteco..
Desvantagens: Detectabilidade relativamente baixa (10-8 g soluto/mL de gs de arraste).
Outros detectores 104 a 107.

- Detector por captura de eltrons:


Mais amplamente empregado para as amostras ambientais, pois responde seletivamente aos
compostos orgnicos contendo halognios, como pesticidas e bifenilas policloradas.
Altamente sensveis e no alteram a amostra significativamente. Contudo, a resposta linear
limitada a cerca de 2 ordens de grandeza.

- Detectores termoinicos: (similar ao FID)


500X mais sensvel aos compostos de P e 50X mais sensvel aos compostos de N.
Amplamente usado para pesticidas orgnofosforados e compostos farmacuticos.

- Detector por Condutividade Eletroltica (de Hall):


Usado para compostos que possuem halognios, enxofre e nitrognio.

- Espectrmetro de massa:
Um dos detectores mais poderosos, conhecido como CG-MS.
No espectrmetro de massa, as molculas da amostra entram em uma fonte de ionizao, que
ioniza sem decompor as molculas da amostra em seu tomos constituintes.
As fontes de ionizao CG/MS produzem fragmentos, os quais podem tambm ser ionizados.
Estes fragmentos so extrados da fonte de ons atravs de bombas de vcuo, e enviadas para
o analisador. Este seleciona os ons de acordo com seus valores m/z. Os ons separados so
ento detectados, e um grfico contendo a intensidade do sinal gerado pelo on x m/z
produzido pelo sistema de dados.
Em CG-MS, o espectrmetro de massa varre as massas repetidamente durante o experimento
cromatogrfico. Com isso, vrios espectros de massa so registrados.
Os dados podem ento ser obtidos de 3 formas:
1. A abundncia dos ons em cada espectro pode ser somada e colocada em um grfico
em funo do tempo para fornecer um cromatograma do total de ons. (similar ao da
cromatografia convencional)
2. Mostrar espectro de massas em um tempo particular durante o cromatograma para
identificar as espcies que esto eluindo naquele momento.
3. Selecionar um nico valor de m/z e monitor-lo durante o experimento
cromatogrfico, tcnica denominada monitoramento de on seletivo.

Fonte de Detector
Analisador
Ionizao de ons
Sistema de vcuo

Sistema
de dados
Entrada
A CG geralmente acoplada a tcnicas seletivas de espectroscopia ou eletroqumica,
mas tambm com a espectroscopia Infravermelho e ressonncia magntica nuclear. Essas
tcnicas combinadas so chamadas de mtodos hifenizados.

Colunas de CRG e Fases Estacionrias

Colunas Capilares ou Tubulares Abertas


So de 2 tipos:
1. CT Aberta de Parede Recoberta TAPR WCOT
Tubos recobertos com uma fina camada de fase estacionria.
2. CT Abertas Revestidas com Suporte TARS SCOT
Superfcie interna do capilar revestida com filme fino de um material de
suporte, com terra diatomcea*. Esse tipo retm uma quantidade de fase
estacionria muitas vezes maior que TAPR, apresentando assim maior
capacidade de amostra.
* Terra de ocorrncia natural, que so esqueletos de milhares de espcies de plantas
unicelulares que habitaram os antigos lagos e mares. So tratadas quimicamente, o que reduz a
tendncia de o recheio adsorver molculas polares.

A eficincia da SCOT menor que a TAPR, porm maior que uma Coluna Recheada.
A mais utilizada a TAPR de slica fundida.
Colunas Recheadas
So de vidro ou metal, medindo de 2 a 4 mm de dimetro e 2 a 3m de comprimento.
So recheados com material uniforme e finamente dividido, ou suporte slido,
recoberto com uma camada fina de fase estacionria lquida. So enrolados em forma
de bobina com dimetro de 15 cm.
Materiais slidos de suporte devem ser inertes a altas T, esfricos, grande rea
superficial, resistentes mecanicamente, molhados uniformemente pela fase lquida.
Fases estacionrias lquidas Baixa volatilidade, estabilidade trmica, inrcia qumica e
caractersticas de solvente.
H pelo menos uma dzia de uso comum (tabela).
Aplicaes da CGL
Separao e determinao de componentes em variados tipos de amostras.

Anlise Qualitativa

Meio de confirmao da presena ou ausncia de compostos suspeitos em uma


mistura, supondo que uma amostra autentica da substancia esteja disponvel.
Verificar a pureza de compostos orgnicos (processo de purificao)
Instrumentos hifenizados so ferramentas poderosas para a determinao de
componentes de misturas complexas.
CG-MS Identificao de componentes do sangue. Pode no levar a identificao
positiva de espcies em uma amostra, mas prov evidncia segura da ausncia de uam
espcie. (caso no produza um pico igual ao padro da substancia em condies
idnticas)

Analise Quantitativa

Baseada na comparao da altura ou da rea de um pico analtico com aquele de um ou


mais padres.
Alturas de picos so medidas mais facilmente, e para picos estreitos, mais exata.
Computadores fornecem medidas de reas relativas.
Cromatografia Gs-Solido
baseada na adsoro das substancias gasosas sobre as superfcies solidas. Muito til para
a separao de espcies que no so retidas pelas colunas gs-liquido, como componentes
do ar, sulfeto de hidrognio, CO, xido de nitrognio e gases raros.
realizada com colunas recheadas ou tubulares abertas. Para essa ultima, uma camada
fina do adsorvente fixada as paredes internas do capilar. Essas colunas so chamadas
Colunas Tubulares Abertas com Camada Porosa TACP.