LE DOSAGE ELECTROPHOTOMETRIQUE DES

VITAMINES B1 ET B2 DU LAIT SANS

ADSORPTION PREALABLE
Mlle Andree Vinet, M. Paul Meunier

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Mlle Andree Vinet, M. Paul Meunier. LE DOSAGE ELECTROPHOTOMETRIQUE DES VI-
TAMINES B1 ET B2 DU LAIT SANS ADSORPTION PREALABLE. Le Lait, INRA Editions,
1941, 21 (207 208), pp.236-238. <hal-00927851>

HAL Id: hal-00927851

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Submitted on 1 Jan 1941

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 236 Mlle A. VINET E,T M. P. MEUNIER. ~. LE DOSAGE

Nous pensons que la mthode expose pourra rendre des services

utiles toutes les fois que la prise d'essai du produit biologique
. analyser ne permettra pas l'application des mthodes couramment
appliques.

LE DOSAGE LECTROPHOTOMTRIQUE
DES VITAMINES BI ET B2
DU LAIT-SANS ADSORPTION PRALABLE (1)
par
'Mlle ANDREVINET et M. PAUL MEUNIER

Aprs limination du beurre, de la casine, des phosphates et du lactose, on

obtient; sans adsorption, un extrait de lait dans lequel on -peut doser la vitamine
B; par son azo-raction effectue avel} et sans ferricyanure (mthode M eunier-
Blancpain [1]) et la vitamine B, par colorimtrie directe.

Les faibles concentrations sous lesquelles les vitamines BI et

B2 se rencontrent dans la' plupart des produits naturels ont oblig
les biochimistes concentrer ces vitamines par une adsorption
pralable avant de procder leur dosage par fluoromtrie. Les
difficults techniques de cette mthode d'isolement, d'une part,
et des mesures de lumire de fluorescence, d'autre part, sont bien
connues.
Nous voulons montrer par suite de quelles circonstances favo-
rables le dosage des vitamines BI et B2 est possible dans le lait
sans adsorption pralable et par l'emploi de l'lectrophotomtre.
Aprs plusieurs essais, nous avons choisi le mode d'extraction
suivant: la casine et les matires grasses sont limines par l'acide
actique 20/u' le rsidu, vapor sec sous vide est extrait par
l'alcool mthylique qui insolubilise iesphosphates et le lactose
et en.trane la totalit des vitamines BI et B2 Dans l'extrait final,
la vitamine l?l est le seul corps diazotable et la vitamine B2 le seul
pigment mesurable avec l'cran bleu de l'appareil. .
Technique
10 Extraction. Placer au bain-marie bouillant reflux
100 cm" de lait et 100 cm" d'acide actique 2%. Laisser une demi-
'heure.,
Filtrer sur filtre' de Buchner et rincer Je filtre l'aide de 20 cm"
d'acide actique 2?/o.
Ajouter ensuite 100 cm3 d'alcool absolu et abandonner deux
heures. Fiitrer nouveau. Evaporer le filtrat sous vide jusqu'
(1) Bulletin de la Socit de Chimie biologique, t. XXII, septembre-dcembre 1940,
p. 556558. Mmoire prsent la s~nce du 15 octobre 1940.
 LECTROPHOTOMTRIQUE DES VITAMINES Bi ET BI 237

rsidu sec. Traiter le rsidu par 100 cm" d'alcool, mthylique et

laisser deux heures en contact.
-""'l
Filtrer et vaporer nouveau le filtrat sous vide. Dissoudre
finalement le rsidu dans 10 cm" d'eau distille et filtrer.
2 Dosage de la vitamine B2 - Verser dans une cuve de 10 'mm.
;la' liqueur d'extraction prcdente. En dterminer l'absorption
dans l'cran' bleu et l'cran orang del'lectrophotomtre (1).
Cette dernire valeur ne doit pas dpasser sensiblement le,chiffre
d'absorption de l'eau distille.
Le produit de la diffrence entre les absorptions de l'extrait
et de l'eau distille dans le bleu multipli par 1,92 (valeur d'une
division de l'lectrophotomtre en lactoflavine) mesure en gamma
la quantit de lactoflavine contenue dans 100 cm" de lait.
3 Dosage de la vitamine BI'
Solutions ncessaires:
A) Solution alcaline
Bicarbonate de sodium , .. , . 2,6 g.
Hydroxyde de sodium N/2 .', 100 cm"
B), Solution de nitrite de sodium 5%dans l'eau.
C) Avant chaque srie de mesures, mlanger 6 volumes de
B 100 volumes de A.
,D) Solution d'acide sulfanilique 1% dans l'acide chlorhy- ,
drique 10%'
E) Solution frache (moins de 8 jours) de ferricyanure de
potassium 2 % dans l'eau.

Dans la cuve de 10 mm. d'paisseur, verser deux gouttes de la

solution D puis 4 cm" du mlange C. Agiter lgrement la cuve.
Verser un moment bien dtermin 1 cm" de la liqueur d'extrac-
tion prcdente. Agiter la cuve par retournement.
Faire les lectures colorimtriques dans l'cran vert de 30 en
30 secondes jusqu' 2 minutes.
Rpter l'exprience en ajoutant dans la cuve une goutte de
ferricyanure avant l'addition de l'extrait titrer.
Tracer les deux courbes cintiques ainsi obtenues. Evaluer la
quantit de vitamine BI de la prise d'essai en multipliant la diff-
rence des ordonnes des deux courbes 1 minute et demie
ou 2 minutes par 0,81 gamma (valeur d'une division de I'lectro-
photomtre en chlorhydrate d'aneurine).

(1) Electrophotomtre Meunier', Jobin et Yvon, constructeurs Arcueil (Seine).

 \

238 Mlle A. VINET ET 111. P. MEUNIER. - LE DOSAGE

Rsultats obtenus

BI en mg. de B2 en mg.
Echantillons
ChI. par litre par litre

Lait M. nature, hiver ': . 0,72 0,82

Lait O. nature" h~~er " " . 0,81 1,10
hornognts , . ],00 0,85
stabilis ( 2 jours) . 0,97 ],10
, ( 3 jours) . 1,05 0,90
( 6 jours) . 1,01 1,20
(20 jours) . 0,81 1,30
( 1 mois) " . 0,90 1,40
( 2 mois) . 0,36 ],20

Conclusions'
Pour la vitamine B2, nos rsultats sont en accord avec les chiffres
obtenus par voie biologique (1 mg. par Iitre en moyenne) [2].
Nous n'avons constat aucune perte au cours de l'homognisation,
de la strilisation rapide (stabilisation) ou de la .conservabion du lait.
En ce qui concerne la vitamine BI> nous sommes en gnral un
peu avantags sur' les rsultats antrieurs [3]. Pour l'aneurine, nous
ne constatons pas non plus de perte sensible au cours de la stabili-
sation du lait comme Kay [4] l'a observ au cours de la pasteuri-
sation.Enfin, cette teneur se maintient aprs deux mois de conser-
vation. Ce fait a d'ailleurs dj t expos par M. J VILLIER [5].
. Au point de vue e.nalyt.ique, nous voudrions insister sur ie fait
que la mthode de dosage l'azo-raction et au ferricyanure doit
tre soigneusement contrle. chaque extension de son application:
Dans le cas du lait, nous avons tenu valuer par fluorescence les
quantit de thiochrome que nous produisons dans la seconde phase
de notre technique.
(Laborat.oire de Chimie biologique de la Facult des Sciences,
96, boulevard Raspail. Professeur : :M. M. JAVILLTER.) 1

BIBLIOGRAPHIE
[1] MEUNIER (P.) et BLANCPAIN (Cl.). Bull. Soc.Ohim. biol., 1939, 21, 649~
[2] R:AFFY (Mlle A.). Bull. Soc. Hyg. Alim., 1939, 27, 1 et 2.
[3] WILLIAMS et SPIES. Vitamine BI and its use in Medecine. 1 vol. New- York,
1938,237. .
[4] KAY (H. D.). Nutrition Abs. ns, 1939, 9, 1.
[5] J AVILLIER (M. M.). O. R. Ac. Agric., 1940, 26, 369.
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