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Universidade Federal do Rio de Janeiro

AVALIAO DO PERFIL DA COMUNIDADE MICROBIANA DE


ECOSSISTEMAS DE MANGUEZAL RECEPTORES DE EFLUENTES DA
ATIVIDADE DE CULTIVO DE CAMARO NO ESTADO DO CEAR, BRASIL

Oscarina Viana de Sousa

Tese de Doutorado apresentada ao Programa de Ps-


graduao em Cincias (Microbiologia), Instituto de
Microbiologia Professor Paulo de Ges, da Universidade
Federal do Rio de Janeiro, como parte dos requisitos
necessrios obteno do ttulo de Doutor em Cincias
(Microbiologia).

Orientadora: Leda Cristina Santana Mendona-Hagler


Co-orientadora: Regine Helena Silva dos Fernandes Vieira

Rio de Janeiro
Maio de 2006
AVALIAO DO PERFIL DA COMUNIDADE MICROBIANA DE
ECOSSISTEMAS DE MANGUEZAL RECEPTORES DE EFLUENTES DA
ATIVIDADE DE CULTIVO DE CAMARO NO ESTADO DO CEAR, BRASIL

Oscarina Viana de Sousa

Orientadora
Leda Cristina Santana Mendona-Hagler
Co-orientadora
Regine Helena Silva dos Fernandes Vieira

Tese de Doutorado submetida ao Programa de Ps-graduao em Cincias


(Microbiologia), Instituto de Microbiologia Prof. Paulo de Ges, da Universidade
Federal do Rio de Janeiro - UFRJ, como parte dos requisitos necessrios obteno do
ttulo de Doutor em Cincias (Microbiologia).

Aprovada por:
__________________________________________
Presidente, Profa. Leda Cristina Santana Mendona-Hagler

___________________________________
Prof. Dr. Andrew Macrae

___________________________________
Prof. Dr. Carlos Augusto Soares

___________________________________
Prof. Dr. Fabio Vieira de Arajo

___________________________________
Prof. Dr. Fernando Portela Cmara

Rio de Janeiro
Maio de 2006
Sousa, Oscarina Viana de
Avaliao do perfil da comunidade microbiana de ecossistemas de
manguezal receptores de efluentes da atividade de cultivo de camaro no
Estado do Cear (Brasil) / Oscarina Viana de
Sousa Rio de Janeiro: UFRJ/IMPPG, 2006.
xi, 121f.: il.
Orientador: Leda Cristina Santana Mendona-Hagler
Tese (doutorado) UFRJ/IMPPG/ Programa de Ps-graduao em
Microbiologia, 2006.
Referncias Bibliogrficas: f. 86-104
1.ecologia microbiana. 2. carcinicultura. 3. manguezal. 4. efluentes. I.
Mendona-Hagler, Leda Cristina Santana. II. Universidade Federal do Rio de
Janeiro, Instituto de Microbiologia Professor Paulo de Ges. III. Ttulo
Ao meu pai, Oscar Victor (In memoriam)
Agradecimentos

A Deus, por me presentear com tantos anjos disfarados de amigos.

minha famlia (minha me, Telma, Renato, Nonato e meus amados sobrinhos) por ser
o alicerce sobre o qual a minha vida est construda.

minha orientadora Profa. Leda Mendona Hagler, pela confiana, ateno e carinho
sempre presentes durante todo o perodo de doutorado.

Profa. Regine Vieira, minha orientadora em pesquisas e na vida. Meu eterno


agradecimento e admirao.

Ao Prof. Fernando Portela, pela reviso feita nos meus escritos.

Ao Prof. Andrew Macrae, pela sua ateno e carinho. E por ter me dado a oportunidade
de provar os deliciosos Baked beans.

Ao Prof. Allen Hagler (baiano legtimo de Winsconsin) por me colocar a par das
tradies e costumes de sua terra.

s minhas queridas Profa. Eliana Schwartz e Fernanda Reinert (coordenadora e vice do


curso de Biotecnologia Vegetal) pela preocupao com minha tese mesmo eu sendo de
outro programa de ps-graduao.

A todos os amigos da Repblica Federativa Drago do Mar (minha famlia no Rio):


Fabio Rabelo, Elder, Henrique, Jorge e Mara, que muito me ajudaram nos primeiros
tempos de saudade de casa. E uma citao especial a minha amiga Ceclia pelos seus
cuidados de me durante um ano no qual dividimos apartamento.

A todas as Reginetes pela amizade, dedicao e esprito de grupo. O que torna qualquer
trabalho prazeroso. Meus agradecimentos especiais s amigas: Susy, Cristiane e Gleire,
meu grupo de apoio durante a realizao das coletas.

A todos aqueles que vou levar de volta para Fortaleza dentro do meu corao: Maria do
Carmo, Anderson, Jose Olavo, Patricia, Andrei, Paulinho, Samantha, Zoraidy, Karina,
Paulo Mineiro e Ida. Pessoas com as quais dividi bancada, trabalho, cansao, decepes,
mas tambm (e principalmente!) alegrias, almoos e festas memorveis.

Aos meus irmos cuiabanos, Selma e Fabio que ganhei de presente nesse doutorado.
A todos os amigos que eu deixei em Fortaleza em uma torcida quase organizada.

Ao curso de Ps-graduao do Instituto de Microbiologia Prof. Paulo de Ges.

Ao Instituto de Cincias do Mar (LABOMAR) da Universidade Federal do Cear.

Coordenao de Aperfeioamento de Pessoal de Nvel Superior CAPES - pela


concesso da bolsa de estudos.

Uma tese um trabalho muitas vezes SOLITRIO, mas principalmente SOLIDRIO:


meus sinceros agradecimentos a todas as pessoas que direta ou indiretamente me
ajudaram durante essa jornada.
SUMRIO

Pgina
LISTA DE FIGURAS E QUADROS
LISTA DE TABELAS
Resumo
Abstract
1 INTRODUO............................................................................................................ 1
2 REVISO BIBLIOGRFICA............................................................................. 3
2.1 Ecossistema Manguezal............................................................................................ 3
2.1.1 Classificao dos manguezais................................................................................ 9
2.2 O Impacto da Carcinicultura sobre o Ecossistema Manguezal................................. 10
2.2.1 Localizao e caractersticas dos manguezais da costa cearense........................... 15
2.3 Diversidade microbiana no ecossistema manguezal................................................. 17
2.3.1 Microrganismos associados com ambiente aqutico.............................................. 17
2.3.2 Comunidades microbianas em sedimento, razes e rizosfera de plantas de
mangue............................................................................................................................ 18
2.4 Biodiversidade dos vbrios........................................................................................ 21
2.5 Ferramentas para avaliao da diversidade microbiana............................................ 23
2.6 Avaliao da similaridade de espcies...................................................................... 27
3 OBJETIVOS................................................................................................................. 28
3.1 Objetivo Geral........................................................................................................... 28
3.2 Objetivos especficos................................................................................................ 28
4. HIPTESES............................................................................................................ 29
5 MATERIAL E MTODOS......................................................................................... 30
5.1 Descrio da rea de estudo...................................................................................... 30
5.1.1 Escolha dos pontos de coleta................................................................................. 30
5.1.2 Determinao de parmetros hidrobiolgicos........................................................ 34
5.1.3 Coleta e processamento das amostras de gua....................................................... 34
5.1.4 Coleta e processamento das amostras de sedimento.............................................. 34
5.1.4.1 Anlise da textura e caractersticas fsico-qumicas dos sedimentos................. 34
5.1.5 Coleta e processamento das amostras de razes..................................................... 35
5.2 Anlise das amostras atravs de tcnicas convencionais de cultivo......................... 36
5.2.1 Colimetria............................................................................................................... 36
5.2.2 Contagem de Bactrias Heterotrficas Totais cultivveis (BHT).......................... 36
5.2.2.1 Isolamento e manuteno de estirpes.................................................................. 36
5.2.2.1.1 Identificao das estirpes.................................................................................. 36
5.2.3 Contagem e isolamento de Vibrio spp.................................................................... 37
5.2.3.1 Isolamento e identificao de estirpes................................................................. 38
5.2.4 Contagem de Fungos e Leveduras Totais............................................................... 39
5.2.5 Anlise estatstica................................................................................................... 39
5.3 Anlise das amostras de gua atravs de tcnicas moleculares................................. 40
5.3.1 Extrao de DNA total .......................................................................................... 40
5.3.1.1 Extrao de DNA total das amostras de gua..................................................... 40
5.3.2 Amplificao dos fragmentos dos genes 16S do DNA total (PCR) das amostras
de gua com iniciadores universais................................................................................. 41
5.3.3 Amplificao dos fragmentos de DNA das amostras de gua com iniciadores
especficos para o gnero Vibrio..................................................................................... 41
5.3.4 Anlise da diversidade microbiana das amostras de gua atravs de Eletroforese
em Gel de Gradiente Desnaturante (DGGE)................................................................... 42
6 RESULTADOS............................................................................................................ 43
6.1 Parmetros fsico-qumicos da gua.......................................................................... 43
6.1.1 Parmetros fsicos e qumicos dos sedimentos....................................................... 44
6.2 Anlises microbiolgicas atravs das tcnicas convencionais de cultivo................. 45
6.2.1 Colimetria das amostras de gua e sedimento........................................................ 45
6.2.2 Contagem de Bactrias Heterotrficas Totais cultivveis (BHT).......................... 47
6.2.2.1 Identificao das estirpes isoladas...................................................................... 50
6.2.3 Contagem de Fungos e Leveduras Totais.............................................................. 56
6.2.4 Estimativa do nmero Vibrio spp.......................................................................... 56
6.2.4.1 Identificao das estirpes de Vibrio..................................................................... 57
6.3 Anlise das amostras de gua atravs de tcnicas moleculares................................ 63
7 DISCUSSO................................................................................................................ 69
8 CONCLUSES............................................................................................................ 86
9 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS..................................................................... 88
LISTA DE FIGURAS E QUADROS

Pgina

Figura 1 Distribuio mundial das reas de mangue.............................................. 3


Figura 2 Figura 2 Fotos dos manguezais onde foram realizadas as coletas. Da
esquerda para a direita; A: rio Pacoti; B: rio Pirangi; C: rio Chor; e D: rio
Jaguaribe.................................................................................................................... 7
Figura 3 Mapa de localizao do Estado do Cear................................................. 30
Figura 4 Localizao dos pontos de coleta no rio Pacoti Mangue 1 (Cear,
Brasil)......................................................................................................................... 32
Figura 5 Localizao dos pontos de coleta no rio Chor Mangue 2 (Cear,
Brasil)......................................................................................................................... 32
Figura 6 Localizao dos pontos de coleta no rio Pirang Mangue 3 (Cear,
Brasil)......................................................................................................................... 33
Figura 7 Localizao dos pontos de coleta no rio Jaguaribe Mangue 4 (Cear,
Brasil)......................................................................................................................... 33
Figura 8 Riqueza de espcies de Vibrio isolados e identificados nas quatro reas
de manguezal estudadas (Cear, Brasil).................................................................... 60
Figura 9 Nmero de espcies de Vibrio isolados e identificados em trs pontos
dentro de uma fazenda de cultivo de camaro marinho (Cear, Brasil).................... 62
Figura 10 Perfis de DGGE dos fragmentos de 16S rDNA obtidos das amostras
de gua de quatro reas de manguezal e de trs pontos dentro de uma fazenda de
carcinicultura (Cear, Brasil). Linhas: CD, canal de descarga; VV, viveiro; CA,
canal de abastecimento; M4, Mangue 4; M3; Mangue 3; M2, Mangue 2; M1,
Mangue 1. As letras a e b indicam as rplicas de uma mesma amostra.................... 64
Figura 11 Perfis de DGGE da comunidade de vbrios nas amostras de gua de
quatro reas de manguezal e de trs pontos dentro de uma fazenda de
carcinicultura (Cear, Brasil). Linhas: CD, canal de descarga; VV, viveiro; CA,
canal de abastecimento; M4, Mangue 4; M3; Mangue 3; M2, Mangue 2; M1,
Mangue 1. As letras a e b indicam as rplicas de uma mesma amostra.................... 65
Figura 12 Perfil de similaridade da comunidade bacteriana total (a), e da
comunidade de vbrios (b) baseado na presena e ausncia de bandas no gel de
DGGE das amostras de gua de um manguezal controle (M1); manguezais
receptores de efluentes de carcinicultura (M2, M3 e M4) e de trs pontos dentro
de uma fazenda de carcinicultura (CD, VV e CA) (Cear, Brasil)........................... 67
Quadro 1 Distribuio das reas de mangues no Estado do Cear......................... 15
Quadro 2 Testes para identificao fenotpica de estirpes do gnero Vibrio.......... 38
LISTA DE TABELAS

Pgina
Tabela 1 Mdia e desvio padro dos valores da temperatura, salinidade e pH
de dois pontos das amostras de gua registrados nas duas expedies de coleta
nas reas de manguezal estudadas......................................................................... 44
Tabela 2 Anlise fsico-qumica e de textura das amostras de sedimento de
quatro reas de manguezal do litoral leste do Estado do Cear............................ 45
Tabela 3 Nmero mais provvel de coliformes fecais nas amostras de gua e
sedimento coletadas em reas de manguezal na regio nordeste (Cear, Brasil /
2003)...................................................................................................................... 46
Tabela 4 Estimativa do nmero de coliformes fecais nas amostras de gua e
sedimento coletadas em reas de manguezal na regio nordeste (Cear, Brasil /
2004)...................................................................................................................... 47
Tabela 5 Mdia e desvio padro do logaritmo do nmero de bactrias (UFC)
em amostras de gua e sedimento coletadas em reas de manguezal na regio
nordeste (Cear, Brasil / 2003).............................................................. 48
Tabela 6 Mdia e desvio padro do logaritmo do nmero de bactrias (UFC)
por grama de amostras de razes das espcies Rhizophora mangle e Avicennia
schaueriana em reas de manguezal na regio nordeste(Cear, Brasil / 2003).... 49
Tabela 7 Mdia e desvio padro do logaritmo do nmero de bactrias (UFC)
nas amostras de gua, sedimento e rizosfera das espcies Rhizophora mangle e
Avicennia schaueriana em reas de manguezal na regio nordeste (Cear,
Brasil / 2004)......................................................................................................... 50
Tabela 8 Nmero de culturas isoladas das amostras ambientais nas quatro
reas de manguezal no litoral do nordeste (Cear, Brasil).................................... 51
Tabela 9 Caracterizao morfolgica das culturas isoladas de amostras
ambientais em quatro reas de manguezal da regio nordeste (Cear, Brasil)..... 52
Tabela 10 Identificao das estirpes isoladas nas amostras de gua de reas
de manguezal no Estado do Cear (Brasil)........................................................... 53
Tabela 11 Identificao das estirpes isoladas nas amostras de sedimento de
reas de manguezal com presena da atividade de carcinicultura (Cear, Brasil) 54
Tabela 12 ndice de diversidade fenotpica das amostras de gua e sedimento
de reas de manguezal no Estado do Cear (Brasil)............................................. 55
Tabela 13 Mdia e desvio padro do logaritmo das contagens padro em
placas do nmero de fungos totais nas amostras de gua, sedimento e rizosfera
das espcies Rhizophora mangle e Avicennia schaueriana em reas de
manguezal na regio nordeste (Cear, Brasil / 2004)........................................... 56
Tabela 14 Estimativa do nmero de Vibrio nas amostras de gua e sedimento
coletados em reas de manguezal (CE, Brasil)..................................................... 57
Tabela 15 Identificao das estirpes de Vbrio isoladas das amostras de gua
e sedimento nos quatro manguezais estudados (CE, Brasil)................................. 58
Tabela 16 ndice de diversidade fenotpica de espcies do gnero Vibrio nas
amostras de gua e sedimento de reas de manguezal no Estado do Cear
(Brasil)................................................................................................................... 59
Tabela 17 Identificao* das espcies de Vbrio isoladas das amostras de
gua e sedimento de trs diferentes pontos (canal de abastecimento, viveiro e
canal de descarga) de uma fazenda de camaro localizada em rea de
manguezal no Rio Jaguaribe (Cear, Brasil)......................................................... 61
Tabela 18 ndice de diversidade fenotpica das amostras de gua e sedimento
em locais dentro de uma fazenda de cultivo de camares no Estado do Cear
(Brasil)................................................................................................................... 61
Tabela 19- Comparao entre o nmero de bandas, nos gis de DGGE, obtidos
com os amplicons das amostras de gua de ambientes de manguezal e de
fazenda de camaro e o nmero de espcies isoladas dessas amostras
ambientais. ........................................................................................................... 68
RESUMO

Avaliao do perfil da comunidade microbiana de ecossistemas de manguezal


receptores de efluentes da atividade de cultivo de camaro no Estado do Cear, Brasil

Oscarina Viana de Sousa

Orientadoras:
Profa. Dra. Leda Cristina Santana de Mendona-Hagler
Profa. Dra. Regine Helena Silva dos Fernandes Vieira

Resumo da Tese de Doutorado submetida ao Programa de Ps-graduao em


Microbiologia, Instituto de Microbiologia Prof. Paulo de Ges, da Universidade Federal
do Rio de Janeiro -UFRJ, como parte dos requisitos necessrios obteno do ttulo de
Doutor em Microbiologia

O Brasil o segundo pas com a maior rea de mangues em seu territrio no


mundo e o primeiro nas Amricas. Nas ltimas dcadas, ocorreu uma reduo
substancial de reas de manguezal devido a atividades antropognicas. O cultivo de
camares marinhos vem sendo relacionado a essas perdas. A regio nordeste concentra
cerca de 97% da produo nacional de camaro cultivado. O desenvolvimento acelerado
de fazendas de cultivo de camaro na regio tem gerado uma preocupao quanto aos
efeitos das descargas contnuas dos efluentes produzidos pelos viveiros sobre os
ecossistemas de manguezal. Esta pesquisa visou fornecer dados sobre o perfil da
comunidade microbiana em ecossistemas de manguezal receptores de efluentes das
fazendas de carcinicultura na regio nordeste, atravs da combinao de tcnicas
convencionais de microbiologia ambiental e tcnicas de biologia molecular que
permitem avaliar os efeitos causados por distrbios externos no ambiente. Os dados
obtidos so importantes para a formulao de estratgias de gerenciamento e
conservao das reas com potencial para a explorao dessa atividade agroindustrial.
Para tanto, foram coletadas amostras em quatro manguezais no litoral leste do Estado do
Cear. As coletas aconteceram em dois anos consecutivos. Foram utilizadas tcnicas
convencionais e moleculares para estudar diferentes aspectos relacionados microbiota
das amostras. Foram isoladas e identificadas espcies de Vibrio patognicas para
camares (V. harveyii) e para o homem (V. cholerae e V. parahaemolyticus). Alm da
carga de matria orgnica originada no cultivo do camaro, ficou evidente que esses
ecossistemas tambm so receptores de efluentes de esgoto domstico como ficou
demonstrado pelo nvel de contaminao fecal observado em todos os esturios durante
a primeira etapa de coletas. Foram encontradas diferenas significativas na estrutura das
comunidades bacterianas nos diversos manguezais estudados. Os perfis dessas
comunidades mostraram uma tendncia a agrupamento entre os ambientes com
atividade de carcinicultura, o que pode indicar uma influncia dos resduos de viveiros.
Esse efeito no necessariamente pode ser atribudo carcinicultura, considerando as
flutuaes encontradas no mangue controle (M1).

Palavras chaves: ecossistema manguezal; cultivo de camaro; diversidade microbiana


ABSTRACT

Abstract da Tese de Doutorado submetida ao Programa de Ps-graduao em


Microbiologia, Instituto de Microbiologia Prof. Paulo de Ges, da Universidade Federal
do Rio de Janeiro -UFRJ, como parte dos requisitos necessrios obteno do ttulo de
Doutor em Microbiologia

Brazil has the second largest area of mangroves in the world and the first one in
the Americas. In last decade occurred a substantial reduction of mangrove areas due to
the anthropogenic activities, as shrimp culture. The northeast region of Brazil is
responsible for about 97% of the national production of cultivated shrimp. The rapid
development of shrimp farms in this region has generated a concern about the effect of
continued flux of effluent from cultivation dams in mangrove ecosystems. This study
aimed to supply information about the microbial community profile in mangrove
ecosystems receiving effluent waters of shrimp farms in the Northeast region. A polifasic
approach was used through conventional and molecular techniques of environment
microbiology to evaluate the effect caused by external impacts on the environment. The
data derived from the present work are important to formulate strategies of management
and conservation of areas with potential for aquaculture activity. During this study
samples had been collected in four mangroves in the coastal east of Cear state. Strains
of Chryseomonas luteola and species of Enterobacteriaceae were the most frequently
isolated bacteria. Among Vibrio species had been identified human (V. cholerae and V.
parahaemolyticus) and shrimp (V. harveyii) pathogenic bacteria. Besides organic
compounds originated from shrimp ponds, this ecosystems receives sewage water as
shown by fecal coliform levels observed in all the water samples. Significative
differences were found in the community structure among the evaluated mangrove areas.
The communities profiles present a trend to grouping between environments with shrimp
farms, indicating an influence of pond fluxes. However this effect on the communities
profile is not necessarily a consequence of shrimp farm discharges, since variations in
reference mangrove were noted.

Key-words: mangrove ecossistem; shrimp farm; microbial diversity


1. INTRODUO

Historicamente, as sociedades humanas sempre apresentaram uma


interdependncia com as reas costeiras do planeta. Atualmente, aproximadamente 55%
da populao mundial vivem em zonas costeiras e utilizam esses ecossistemas (costeiros
e marinhos) para produzir alimentos, construir moradias, instalar indstrias e tambm
para transporte e outros usos.
Nas regies tropicais e subtropicais, os ecossistemas costeiros incluem os recifes
de coral, bancos de pradarias marinhas e os manguezais que esto entre os locais mais
ricos do mundo em relao diversidade biolgica e produtividade primria. As
florestas de manguezal so reconhecidas como ecossistemas-chave cuja preservao
fundamental para a manuteno de outros ecossistemas maiores e fora de seus limites
(FAO, 2003).
Os manguezais desempenham um papel importante na manuteno da vida
marinha. Existe uma preocupao mundial a respeito da preservao das reas de
manguezais. Reconhecidas como locais importantes para a multiplicao e conservao
de um nmero incalculvel de espcies, essas regies de transio sempre sofreram
influncia de fatores antropognicos. A complexidade desses sistemas no diz respeito
apenas a sua diversidade biolgica, mas principalmente a diversidade funcional. Mesmo
esses ambientes sendo eficientes em resistir s perturbaes naturais e antropognicas,
cada alterao imposta gera a perda de elementos do sistema o que pode torn-lo menos
apto a ao de novos tensores e, portanto mais frgil.
Os grandes distrbios causados pelas atividades humanas nos ecossistemas
maguezal como os derrames de petrleo e desmatamentos so mais facilmente
identificados e monitorados. Entretanto existem alguns outros impactos sofridos pelos
manguezais que so crnicos e de difcil deteco e monitoramento mas que podem
causar danos ao ambiente em um perodo mais longo. As descargas de efluentes de
esgoto domstico e das fazendas de camaro marinho esto entre esses distrbios
silenciosos.
A velocidade e intensidade do crescimento da atividade de cultivo de camaro
marinho no mundo vm produzindo perdas substanciais nas reas de mangue. Sendo
uma atividade bastante lucrativa, a carcinicultura tem atrado uma quantidade cada vez
Introduo 2

maior de investimentos e isso faz com que cada vez mais reas sejam convertidas em
fazendas de cultivo de camaro.
No Brasil, a regio nordeste (Estados do Cear, Paraba, Piau e Rio Grande do
Norte) concentra cerca de 97% da produo nacional. Esse aumento e rpido
desenvolvimento de fazendas de cultivo de camaro na regio tm gerado uma
preocupao quanto aos efeitos das descargas contnuas dos efluentes gerados pelos
viveiros sobre os ecossistemas de manguezal. A destruio de reas de manguezal, o
descarte de altos nveis de material de origem orgnica nas guas costeiras e o
aparecimento de surtos de doenas so alguns dos efeitos dos distrbios causados pela
atividade de cultivo de camaro. Por outro lado, temos uma relao de interdependncia
entre a produtividade e sustentabilidade do cultivo de camaro e a manuteno da
qualidade e equilbrio do ecossistema manguezal.
Apesar de um considervel volume de pesquisas avaliando a composio
qumica e fsica desses efluentes e dos mananciais receptores ainda existe poucos
estudos, sob o ponto de vista da ecologia microbiana, que avaliem o impacto desses
efluentes e a capacidade de recuperao desses ecossistemas. A qualidade dos efluentes
bsica para a tomada de decises sobre o nmero e tamanho das fazendas de camaro
que podem ser implantadas nos ambientes costeiros sem colocar em risco o ecossistema.
O crescimento continuado dos viveiros de camaro marinho fortemente dependente
das alteraes diretas causadas sobre o ambiental por essa atividade. Devido ausncia
de informao sobre o efeito que a atividade de aquacultura poderia ter em reas
tropicais e subtropicais, tem sido difcil desenvolver regras para o controle da expanso
dessa atividade em reas prximas ao manguezal. Os dados apresentados nesse trabalho
podem ser teis na tentativa de minimizar os riscos ecolgicos e assegurar a viabilidade
dessa atividade por longo prazo.
Reviso Bibliogrfica 3

2 REVISO BIBLIOGRFICA

2.1 Ecossistema Manguezal

Em sua maioria os manguezais esto localizados na sia (principalmente


Malsia e ndia), na frica Atlntica (Nigria e Senegal) e na Amrica Atlntica (Brasil
e Venezuela) (Figura 1). Nas regies tropicais e subtropicais, os manguezais cobrem
cerca de 100.000 km2 de rea no planeta e representam o principal ecossistema nas
margens continentais (Wilkie e Fortuna, 2003).

Fonte: FAO (2001)

Figura 1 Distribuio mundial das reas de mangue

No Brasil, estima-se que a rea total de mangues cerca de 25.000 Km2,


distribudos ao longo do litoral, entre o cabo Orange (Amap) e o rio Ararangu (Santa
Catarina) (Araujo e Maciel, 1979; Lacerda, 1984, Lovelock, 1999; Riley, 2000). Na
regio nordeste, esses ambientes esto limitados s baixadas costeiras, que representam
reas de transio entre o oceano e os nveis mais elevados localizados no interior da
faixa litornea (Fernandes e Silva, 1990).
Reviso Bibliogrfica 4

O manguezal um ecossistema litorneo que ocorre em terrenos baixos, sujeitos


ao das mars, localizados em reas relativamente abrigadas formadas por vasas
lodosas s quais se associam comunidades caractersticas, vegetais e animais
(Resoluo 04 / 85 do CONAMA). Esses importantes ecossistemas so encontrados em
regies tropicais e subtropicais ao longo das margens protegidas dos esturios.
Apresentam alta produtividade, diversidade e zonao mpar de vrias comunidades. Ele
se caracteriza por um entrelaamento de vegetao arbrea tpica, com fortes razes
areas e pneumatforas que servem de suporte e para a respirao; substrato silto-
argiloso de cor escura, constituindo um meio redutor, freqentemente contendo pouco
ou nenhum oxignio dissolvido. rico em matria orgnica dissolvida com pH entre 6.0
e 8.0 e baixa concentrao de oxignio dissolvido na gua devido a processos de
oxidao em conseqncia da abundncia de matria orgnica (Odum e Heald, 1975;
Tam e Wong, 1998).
Segundo Schaeffer-Novelli (1999), os manguezais so de forma geral sistemas
jovens que seguindo a dinmica das mars nas reas onde se localizam, produzem
alteraes na topografia desses terrenos o que resulta em uma seqncia de recuos e
avanos da cobertura vegetal. Esses sistemas so funcionalmente complexos, altamente
resilientes e resistentes, portanto, estveis. A cobertura vegetal se instala em substratos
de vaza de formao recente, de pequena declividade e que sofre ao diria das mars
de gua salgada ou salobra.
As rvores de mangue so o componente mais bsico e visvel do ecossistema
manguezal. O termo manguezal freqentemente usado para se referir tanto cobertura
vegetal como a comunidade que composta de uma variedade de organismos
pertencentes a grupos sistemticos diferentes incluindo bactrias, fungos, microalgas,
invertebrados, aves e mamferos. Os ecossistemas de mangue cobrem aproximadamente
60 a 70% da linha costeira nas regies tropicais e subtropicais. O Brasil, Indonsia e
Austrlia so os pases com maior abundncia desse sistema biolgico (Aksornkoae et
al., 1984; Holguin et al., 2001).
Dentre os ambientes costeiros, os ecossistemas de mangue so nicos,
excepcionalmente produtivos e constituem um elemento crtico da hidrosfera costeira.
Vrios estudos de campo estabeleceram que os manguezais suportam uma significante
biodiversidade, desempenham um papel vital na proteo de margens e ambientes
Reviso Bibliogrfica 5

costeiros contra a eroso e enxurradas e so extremamente valiosos na subsistncia de


muitas comunidades (Field,1995).
De acordo com Miranda et al. (1990), entre os papis desempenhados pelas
reas de mangue quanto aos aspectos ecolgico, econmico e social destacam-se: ser
constitudo de vegetao de preservao permanente; apresentar valor paisagstico e de
relevncia cultural como stios arqueolgicos; constituir importante banco gentico para
recuperao de reas degradadas; desempenhar papel fundamental como exportador de
matria orgnica para o esturio, contribuindo para a produtividade primria na zona
costeira; ser importante para a manuteno de recursos pesqueiros marinhos e de gua
doce; sua manuteno ser vital para a subsistncia das comunidades pesqueiras que
vivem em seu entorno; ser um importante estabilizador dos sedimentos costeiros e
mantenedor das condies climticas litorneas; exercer uma funo fixadora de metais
pesados.
Alm de todas essas caractersticas, os manguezais se destacam por ser um
ecossistema com alto poder de fixao energtica. O material constitudo de nutrientes
inorgnicos, que transportado pelas guas fluviais e transformado em matria orgnica
e depois transferido para os ecossistemas vizinhos, o fator determinante para sua
elevada produtividade. Isso significa que alteraes na composio e fluxo de matria e
energia tm imediata repercusso nos ecossistemas prximos.
Normalmente, a elevada quantidade de nutrientes para manter essa alta
produtividade suprida pelos influxos de guas pluviais, rios e mars e tambm pela
intensa ciclagem interna atravs da atividade de organismos bnticos e microrganismos
(Woodroffe, 1992). De maneira geral, os manguezais so sistemas biolgicos
deficientes em nutrientes, especialmente nitrognio e fsforo (Vazquez et al., 2000) que
so indispensveis para o desenvolvimento das plantas. Segundo Bashan e Holguin
(2002), existem evidncias para propor uma estreita relao microrganismo-nutriente-
planta que funciona como um mecanismo principal para a ciclagem e conservao de
nutrientes essenciais no ecossistema manguezal. A comunidade microbiana, altamente
produtiva e diversa existente nos ecossistemas de manguezal, transforma a vegetao
morta em fontes de nitrognio, fsforo e outros nutrientes que podem ser usados mais
tarde pelas plantas.
Reviso Bibliogrfica 6

A produtividade mdia diria nos mangues calculada em 2.500 mg de carbono


por metro quadrado e por isso esto entre os ecossistemas mais produtivos do planeta
(Bunt, 1992). Esse valor quatro vezes maior do que aquele encontrado nas reas de
recifes e quarenta vezes maior que a produtividade em oceano aberto (Ong, 1995;
Berger et al., 1999). A alta produtividade primria juntamente com as taxas variveis de
matria orgnica e a troca permanente com ecossistemas terrestre e marinho torna os
manguezais ambientes particularmente importantes para a ciclagem de carbono e
elementos associados ao longo das margens continentais nas regies tropicais.
A estrutura e produtividade dos manguezais esto controladas, principalmente,
pela freqncia de inundao pelas mars, taxa de evaporao e aporte de gua doce
procedente de chuvas e efluentes de rios. Esses fatores esto diretamente relacionados
com a biodiversidade do ecossistema e a alta produtividade primria e secundria (Lugo
e Snedaker, 1974; Coelho Jr., 1998; Coelho Jr. e Novelli, 2000). A localizao
geogrfica desses sistemas biolgicos uma varivel importante na produo primria,
que parece aumentar em latitudes mais baixas e com maior amplitude de mars (Tam et
al., 1998). Assim, os manguezais presentes no continente asitico apresentam
produtividade primria superior queles localizados nas Amricas.
A presena de grandes quantidades de detritos orgnicos nas guas dos mangues
em grande parte o resultado da contribuio da vegetao do prprio manguezal. O
material introduzido modificado na sua composio qumica e no tamanho das
partculas, pela colonizao e decomposio por micro e macro hetertrofos. Dessa
forma, as condies nutritivas favorveis no so determinadas apenas pela grande
quantidade, mas tambm pela qualidade dos detritos (Knoppers e Opitz, 1984).
Entre as espcies vegetais dos manguezais que se desenvolvem na costa
brasileira trs espcies so dominantes: o mangue vermelho (Rhizophora mangle), o
mangue siriba (Avicennia schaueriana) e o mangue branco (Laguncularia racemosa)
(Lacerda, 1984; Araujo e Maciel, 1979). Altamente adaptadas ao solo com pouco ou
nenhum oxignio, as razes do manguezal emergem do substrato na forma de razes
areas ou pneumatforos, os quais possuem pequenos poros chamados lenticelas, que
levam o oxignio atmosfrico para o sistema radicular (Araujo e Maciel, 1979; Lacerda,
1984; Lovelock, 1999; Riley, 2000) (Figura 2).
Reviso Bibliogrfica 7

A distribuio das plantas de mangue no espao fsico (zonao) decorrente


das exigncias de cada espcie com relao imerso, salinidade, tipo de solo, etc.
Esses fatores so determinantes nas modificaes na ordem de ocorrncia das espcies
vegetais. Porm, de um modo geral, o mangue vermelho ocupa as partes mais baixas e
prximas s margens dos cursos de gua que drenam o manguezal; um pouco mais
acima predominam o mangue siriuba e o mangue branco.

A B C

Figura 2 Fotos dos manguezais onde foram realizadas as coletas. Da esquerda para a
direita; A: rio Pacoti ; B: rio Pirangi; C: rio Chor; e D: rio Jaguaribe

Os manguezais e as reas estuarinas so classificados como ambientes de


transio com uma diversidade microbiana particular. Podem ser encontradas nesses
ambientes, alm das halfitas, as bactrias halotolerantes (tpicas de gua salobra) e as
halfobas (que sobrevivem por maior ou menor tempo em funo da salinidade a que
so expostas). Pesquisando a variao espao-temporal de bactrias saprfitas em
Reviso Bibliogrfica 8

ambiente estuarino, Kolm e Absher (1995) relataram um aumento gradativo no nmero


de bactrias na direo interna do esturio e uma inter-relao com os parmetros
ambientais principalmente temperatura e pluviosidade.
Reviso Bibliogrfica 9

2.1.1 Classificao dos manguezais


Schaeffer-Novelli et al. (1990) dividiram o litoral brasileiro em oito segmentos
baseado na uniformidade de condies hidrogrfica, oceanogrfica, fisiogrfica e
climtica e descrevendo ocorrncia, distribuio e as caractersticas estruturais dos
bosques de mangue em cada um dos segmentos.
Existem vrias formas de abordar ou classificar os manguezais. A abordagem
ecolgica se baseia no conceito de assinatura energtica que considera os diversos
fatores abiticos atuando sobre os ecossistemas. A classificao fisiogrfica proposta
por Cintron e Schaeffer-Novelli (1985) assume que os ambientes sejam reflexos dessa
assinatura energtica e estabelece trs tipos de bosques: ribeirinho; franja e ilhote;
bacia. Essa classificao ecolgica (tipos fisiogrficos) considera os efeitos da
microtopografia, da pluviosidade, descarga fluvial, amplitude de mar, turbidez e
energia das ondas. Os bosques de franja e ilhote so caractersticos das margens de
costas protegidas, que se destacam pelas variaes dirias das mars. Na abordagem
geomorfolgica, a fisiografia considerada um dos fatores mais importantes para
explicar os diversos modelos de desenvolvimento das zonas midas costeiras.
Reviso Bibliogrfica 10

2.2 O Impacto da Carcinicultura sobre o Ecossistema Manguezal

A carcinicultura marinha mundial vem crescendo com extrema rapidez nas


ltimas dcadas, aproximadamente a uma taxa de mais que 10% ao ano (World Bank,
1998; FAO, 2001). O efeito combinado do aumento da populao mundial juntamente
com o aumento da demanda por produtos da aqicultura nos pases em
desenvolvimento, fez com que a produo mundial passasse de 84.000 ton. em 1980
para 814.250 ton. em 1999 apresentando um faturamento na ordem de 6 bilhes de
dlares (Caddy e Griffiths, 1995; FAO, 2001).
O cultivo do camaro marinho chegou ao Brasil na dcada de setenta e se firmou
como atividade industrial no final dos anos oitenta. A viabilidade do cultivo comercial
do camaro marinho foi obtida com a aclimatao da espcie Litopenaeus vannamei que
originria da costa do Pacfico e teve uma excelente adaptao s condies tropicais
de clima, solo e gua principalmente as encontradas no litoral nordeste.
O pas considerado por especialistas internacionais como o pas com maior
potencial para o desenvolvimento dessa atividade. Dados da produo nacional a partir
de 1997 at 2000 indicam uma taxa de crescimento anual em torno de 100%. A regio
nordeste detm 94,5% das reas produtivas e contribui com cerca de 97% da produo
nacional (Rocha, 2002). No Estado do Cear, a produo registrada de 1947 ton. em
1999 chegou a 4.914 ton. em 2000 (SEMACE, 2000). Esse desenvolvimento gera
benefcios e lucros mas tambm produz riscos de impacto ambiental negativo sobre o
meio ambiente. A destruio de reas de manguezal, o descarte de altos nveis de
material de origem orgnica nas guas costeiras e o aparecimento de surtos de doenas
so alguns dos efeitos dos distrbios causados pela atividade de cultivo de camaro
(Pez-Osuna, 2001a; Qian e Wu, 2001). Nas ltimas dcadas, o desenvolvimento e
crescimento desordenados da aqicultura de camares em vrios pases tm produzido
perdas drsticas em reas de florestas de manguezais (FAO, 1997; Spalding et al.,
1997). Segundo dados de Hamilton e Snedaker (1984) e Primavera (1998), mais de 50%
dos manguezais em todo o mundo j foram perdidos e o estabelecimento de viveiros de
camaro vem sendo a principal causa dessa perda em muitos pases.
Alm da converso direta dos manguezais em viveiros de camaro, esse
ecossistema tambm degradado indiretamente como um resultado de regimes
Reviso Bibliogrfica 11

hidrodinmicos alterados devido construo de vias de acesso e canais para captao e


escoamento. Como um paradoxo, a produtividade e sustentabilidade do cultivo de
camaro so diretamente dependentes dos benefcios e servios como manuteno da
qualidade da gua e controle da eroso (Beveridge et al., 1997; Rnnbck, 1999;
Kautsky et al., 2000; Rnnbck, 2002).
O tipo de cultivo empregado nas fazendas o chamado intensivo que se
caracteriza pela combinao de alta densidade de estocagem (> 400.000 indivduos / ha)
e taxa de oferta de alimento. Dependendo das condies locais e do estgio de
crescimento, a oferta de alimento na forma de rao peletizada acontece vrias vezes ao
dia e feita uma troca de gua diria correspondendo de 3 a 30% do volume do viveiro.
A utilizao constante de aeradores assegura a manuteno das condies aerbias
(Paez-Osuna et al., 1998, 1999).
A expanso dos cultivos de camaro na maioria das reas costeiras do mundo
implica em um aumento em larga escala da quantidade de nutrientes e slidos suspensos
nas guas receptoras dos efluentes. A elevao do aporte de material particulado tem
efeitos imediatos sobre o ambiente receptor tal como reduo da penetrao da luz e
aumento da concentrao de NH4+. Em alguns casos o nvel de impacto foi suficiente
para afetar a prpria atividade de cultivo. Existem fortes evidncias de que perdas na
produo de fazendas de carcinicultura na sia e Amrica Latina resultantes de surtos
de doenas, tenham como origem primria as alteraes causadas no ambiente pelas
guas residuais dos cultivos (Phillips et al., 1993, Jones et al., 2001).
Os efluentes dos viveiros de aquacultura so enriquecidos com slidos orgnicos
suspensos, carbono, nitrognio e fsforo. Isso pode contribuir significativamente para a
elevada descarga de nutrientes nos ambientes costeiros (Pez-Osuda et al., 1997). Os
efeitos do aporte de nutrientes sobre o ambiente so especficos de cada local e muito
dependente das caractersticas biolgicas e fsico-qumicas do ambiente receptor. A
resposta inicial no ambiente aqutico est associada com o aumento da biomassa de
fitoplncton , concentrao da clorofila a e uma elevao no nvel de produo primria.
No sedimento, um dos primeiros efeitos desse enriquecimento um aumento no
consumo de oxignio pelos organismos heterotrficos. As principais alteraes na
qumica e ecologia do sedimento ocorrem quando se estabelece uma situao de anoxia,
quando a demanda por oxignio supera a quantidade disponvel. Na ausncia do
Reviso Bibliogrfica 12

oxignio, os processos anaerbicos prevalecem resultando na produo de compostos


reduzidos (amnia, sulfeto de hidrognio e metano), os quais, produzidos em
quantidades suficientes podem ser liberados pelo sedimento (Islam, 2005). Entretanto,
existem estudos que relacionam o aumento das descargas de fosfato e amnia geradas
pelos cultivos de camaro ao aumento das taxas de decomposio de matria orgnica
nos sedimentos de manguezal (Holmboe et al., 2001).
Em estudos anteriores, as florestas de manguezal se mostraram altamente
eficientes na remoo de slidos e nutrientes originados dos efluentes de esgoto e/ou de
aquacultura (Paez-Osuna et al., 1998). Robertson e Phillips (1995) estimaram que para
cada hectare de viveiro de camaro, em um sistema semi-intensivo, seriam necessrios 2
a 3 hectares de floresta de mangue enquanto que nos cultivos intensivos seriam
necessrios mais de 22 ha de floresta para o processamento de nitrognio de fsforo das
descargas dos viveiros.
Nos ambientes terrestres, as bactrias que colonizam a superfcie das razes das
plantas induzem a exudao da raiz, que estimula a atividade microbiana fornecendo
nutrientes para as bactrias (Lynch e Whipps, 1990). Nos manguezais, os exudados das
razes estimulam a comunidade microbiana nos sedimentos (Alongi et al., 1993;
Nedwell et al., 1994). Assim, as plantas do mangue podem alterar as caractersticas do
sedimento. Segundo Holguin et al. (2001), as alteraes edficas induzidas por essa
vegetao de mangue poderiam influenciar a proliferao de determinados grupos de
bactrias na rizosfera.
Dentro dos viveiros, a quantidade de matria orgnica maior, em relao ao
ambiente natural, devido a entrada de rao, excretas, fertilizantes, etc. Os
microrganismos (bactrias, fungos, protozorios, etc) executam a decomposio dos
resduos de rao e metablitos a formas inorgnicas (NH3, H2S, CO2, etc) atravs de
processo de mineralizao (Moriarty, 1997).
Nos ecossistemas aquticos, os microrganismos no apenas ajudam na produo
e quebra de matria orgnica, mas tambm na ciclagem de nutrientes. O ciclo do
nitrognio desempenha um papel importante na reciclagem de matria orgnica e
envolve processos de fixao, amonificao, nitrificao e denitrificao do nitrognio
executados por diferentes microrganismos (Abraham et al., 2004).
Reviso Bibliogrfica 13

As bactrias heterotrficas so reconhecidas por desempenhar um papel


importante no processo de degradao do material orgnico controlando a ciclagem de
nutrientes essenciais em sedimentos costeiros e o nvel de oxignio dos ecossistemas
aquticos (Alongi, 1994; Servais et al., 1999; Lacerda et al., 2000). Os efluentes so
uma importante fonte de matria orgnica (com uma sobrecarga de nitrognio e fsforo)
e bactrias heterotrficas que causam uma queda significante nos teores de oxignio
(Servais e Garnier, 1990).
Em algumas regies, a carcinicultura em larga escala resultou em degradao de
reas alagadas, poluio pontual da gua e problemas de salinizao (Phillips e
Macintosh, 1997; Barg et al., 1997). O uso incorreto de substncias qumicas, a coleta
de sementes do ambiente e a introduo de espcies exticas tambm so fatos
preocupantes nesse tipo de atividade (Kautsky et al., 2000). reas com elevada
densidade de viveiros onde acontece recirculao de poluentes qumicos e biolgicos
entre as fazendas, tambm apresentaram problemas de autopoluio e transmisso de
doenas (Smith, 1998). Biao et al. (2004) chamaram ateno para o fato da qualidade da
gua e o controle de doenas serem interdependentes e estarem ligados atividade
microbiana nos sistemas de aqicultura.
Pearson e Rosenberg (1978) consideravam que os distrbios causados pelo
aporte dos efluentes gerados pela carcinicultura sobre os ambientes receptores seriam
similares queles causados pelas descargas de esgoto domstico, apesar das diferenas
entre os dois tipos de resduos. As guas dos efluentes de esgotos so doces,
relativamente baixas em slidos suspensos e com nveis altos em NO3- e PO43-. Os
efluentes da carcinicultura so de guas salgadas, com salinidade variando de 35 a 36,
contendo uma elevada concentrao de fitoplncton, slidos suspensos totais, NH4+ e
nitrognio orgnico. Burford et al. (2003) afirmam que as descargas dos cultivos de
camaro apresentam caractersticas e impactos diferentes daqueles causados pelas
outras principais fontes de eutrofizao nas guas costeiras. Desse modo, o
gerenciamento e regulao dessa indstria deveriam refletir essas diferenas.
Durante dcadas, a correlao direta entre a quantidade de manguezais e
produtividade pesqueira tem sido motivo de debate entre os ecologistas marinhos. Por
exemplo, Cintron e Schaeffer-Novelli (1981) afirmaram existir uma correlao
estatstica positiva entre esses dois fatores enquanto Lee (2004) encontrou uma
Reviso Bibliogrfica 14

influncia maior da extenso das reas intertidais e disponibilidade de matria orgnica


sobre a captura de camares em ambientes tropicais do que a abundncia relativa dos
manguezais. Ray (1991) sugeriu que os efeitos indiretos do impacto das atividades
humanas sobre os principais organismos formadores do ecossistema podem ser at
maiores que os efeitos diretos sobre as atividades pesqueiras e de extrao.
No monitoramento dos ecossistemas de manguezal alguns distrbios, como a
retirada de vegetao tpica e derramamento de leo, facilmente so detectados. A
utilizao de tecnologias avanadas, como o sensoriamento remoto, eficiente. Outros
impactos antropognicos podem ser menos dramticos, porm impem estresse crnico
ao ecossistema manguezal (Moritz-Zimmermann et al., 2002). Alm da converso das
reas de manguezal em viveiros, a atividade de cultivo de camaro tambm submete o
ecossistema a uma presso crnica devido a descargas dos efluentes desses viveiros no
ambiente adjacente s reas de cultivo.
Pesquisas sobre a influncia das fazendas de camaro sobre o ambiente receptor
so limitadas. Os estudos usando parmetros fsico-qumicos indicam que a influncia
dos efluentes das fazendas perceptvel apenas bem prximo aos pontos de descarga
enquanto a influncia biolgica dessas descargas pode se estender bem mais (Jones et
al., 2001). Portanto, ainda existe uma carncia de dados quantitativos e quantitativos
sobre as alteraes sofridas no ecossistema manguezal atingido por esse tipo de
poluio tanto na estrutura como na diversidade microbiana desse ambientes. Torsvik et
al. (1995) encontraram uma diversidade gentica 250 vezes menor em ambientes de
mangue utilizados para aquacultura comparado com reas onde no havia essa
atividade.
Reviso Bibliogrfica 15

2.2.1 Localizao e caractersticas dos manguezais da costa cearense


O litoral cearense est localizado entre as coordenadas geogrficas 246 a 449
de latitude Sul (S) e 3714 a 4119 de longitude Oeste (W) possuindo
aproximadamente 573 Km de extenso. De acordo com classificao de Scheiffer-
Novelli et al. (1990), esses manguezais fazem parte da Unidade IV, trecho que vai da
Ponta Mangues Secos (02o15S) ao Cabo Calcanhar (05o08S), apresentando
desenvolvimento pobre devido falta de aporte de gua doce, associada a estaes secas
prolongadas. Os manguezais so limitados s desembocaduras dos rios pelas altas
concentraes de sais.
Os manguezais cearenses se distribuem preferencialmente nas zonas estuarinas,
ocorrendo desde a desembocadura dos rios, acompanhando suas margens at onde
chega a influncia das mars. Apresenta uma rea total estimada em aproximadamente
22.000 ha distribuda principalmente em treze rios litorneos (Quadro 1).

rea aproximada de
Rios Mangues (ha) %
Timonha/Ubatuba 10.184 44,40
Remdios 431 1,89
Corea 4.620 20,14
Acara 1.907 8,32
Zumbi 1.708 7,45
Aracatia 498 2,17
Munda/Cruxati 1.071 4,67
Cear 500 2,17
Coc 375 1,63
Pacoti 158 0,69
Chor 24 0,10
Pirang 200 0,87
Jaguaribe 1.260 5,50
22.936 100,00
Fonte: Funceme (1989)
Quadro 1 Distribuio das reas de mangues no Estado do Cear

Apesar de prevalecer o clima semi-rido no Estado do Cear, na faixa litornea


encontrada uma condio climtica descrita como tropical chuvosa, quente e mida,
Reviso Bibliogrfica 16

com chuvas concentradas no vero/outono o que determina dois perodos anuais


distintos: o perodo chuvoso, no primeiro semestre do ano, e o perodo de estiagem no
segundo semestre. Devido proximidade da linha equatorial, a incidncia de radiao
solar e as temperaturas mdias no so muito variveis no decorrer do ano. As maiores
temperaturas e os mximos de radiao solar ocorrem entre os meses de setembro e
fevereiro e as oscilaes trmicas nunca so superiores a 5C.
A formao florstica composta essencialmente por quatro famlias e cinco
gneros principais: Rizoforaceas (Rhizophora mangle), Verbenaceas (Avicennia
schaueriana e Avicennia germinans), Combrataceas (Laguncularia racemosa e
Conocarpus erectus), Fabaceas (Dalbergia hecastophyllum) (Fernandes e Silva, 1990).
Reviso Bibliogrfica 17

2.3 Diversidade microbiana no ecossistema manguezal

2.3.1 Microrganismos associados com ambiente aqutico


A microbiota presente no ecossistema manguezal extremamente complexa. Em
manguezais tropicais, calcula-se que as bactrias e os fungos representem 91% da
biomassa total, enquanto as algas e protozorios seriam somente 7% e 2% da
comunidade microbiana nesses ecossistemas (Alongi, 1988).
No ambiente aqutico, os microrganismos so considerados os principais
produtores primrios mas desempenham tambm papel de produtores secundrios e
consumidores. As atividades coletivas de microrganismos fotossintetizantes, litotrficos
e organotrficos favorecem um estado de equilbrio importante para a manuteno de
outras formas de vida (Al-Sayed et al., 2005).
difcil estabelecer uma diversidade microbiana aqutica estuarina por causa da
dinmica nesses ambientes e a dificuldade de distinguir populaes estuarinas e aquelas
que so carreadas das reas adjacentes. Vrios estudos descreveram a diversidade
microbiana nos esturios e alguns demonstraram como as comunidades de gua doce e
marinha se misturam ao longo dos gradientes estuarinos (Crump et al., 2004).
Entretanto, existem poucos trabalhos que forneam evidncias de uma comunidade
bacterioplanctnica estuarina nica.
A deteco dessas comunidades no ambiente aqutico de manguezais est
fortemente influnciado pelos fatores fsico-qumicos da gua, principalmente a
variao de salinidade. A microbiota das guas estuarinas tambm sofre forte influncia
dos descartes de efluentes de esgotos domsticos e industriais, guas das galerias
pluviais e das grandes fazendas de cultivo de organismos marinhos.
A deteco dos impactos sofridos pelos ambientes aquticos dependente do
uso de bio-indicadores combinados com dados fsicos e qumicos (Dudgeon, 1994).
Esse monitoramento microbiolgico nos ambientes aquticos geralmente utiliza
indicadores de poluio fecal como os coliformes termotolerantes (fecais) e Escherichia
coli.
Kemp e Aller (2004) em um estudo sobre a diversidade microbiana em
ambientes aquticos utilizando bibliotecas genmicas baseadas na regio 16S rDNA
concluram que, de modo geral, o nvel de esforo utilizado em estudos publicados
Reviso Bibliogrfica 18

sobre sistemas aquticos no o suficiente para a representao da diversidade


microbiana. Em muitos casos, a diversidade estimada nessas bibliotecas bem menor
do que seria esperado. Isso surpreendente, dado que bactrias so extremamente
diversas na natureza. Curtis et al. (2002) apresentaram argumentos de que a provvel
diversidade em todos os sistemas planctnicos combinados possa alcanar em torno de
2 x 106 filotipos diferentes no total.
Entre os grupos bacterianos, as espcies pertencentes aos gneros Pseudomonas,
Vibrio, Acinetobacter, Alteromonas e Flavobacterium so comuns nas guas de
aqicultura.

2.3.2 Comunidades microbianas em sedimento, razes e rizosfera de plantas de mangue


Os sedimentos de manguezal so principalmente anaerbios, cobertos por uma
fina camada superficial aerbia. A decomposio da matria orgnica acontece ento na
camada mais superficial principalmente atravs da respirao; nas camadas mais
profundas essa degradao da matria orgnica acontece por reduo de sulfato
(Nedwell et al., 1994; Sherman et al., 1998). O ecossistema manguezal depende da ao
das bactrias para a ciclagem de nutrientes, mas esses microrganismos tambm parecem
se beneficiar da sua associao com as plantas de mangue. Nos ambientes terrestres, as
bactrias colonizam a superfcie das razes das plantas induzindo os exudados das razes
que podem estimular a atividade microbiana na rizosfera (Alongi, 1988).
A relao entre a intensidade da atividade bacteriana no sedimento e a presena
de plantas em ecossistemas de manguezal j reconhecida. As maiores taxas de reduo
de sulfatos por bactrias em manguezais coincidiram com a presena do sistema
subterrneo de razes (Zuberer e Silver 1978). Em mangues da ndia, bactrias
envolvidas em processos de transformao de nitrognio (amonizao, nitrificao e
denitrificao) ocorreram em maior nmero nos solos com plantas do que naqueles sem
a presena de plantas de mangue (Routray et al., 1996). provvel que estas mudanas
edficas, induzidas pelas plantas, influenciam a proliferao de certos grupos de
bactrias na rizosfera. Routray e colaboradores (1996) tambm observaram em uma rea
desmatada de um manguezal na ndia, uma diminuio na populao bacteriana,
provavelmente causada pelo aumento da salinidade do solo na ausncia das plantas.
Essa diminuio na populao bacteriana tambm pode ter ocorrido devido perda de
Reviso Bibliogrfica 19

entrada substancial de carbono da vegetao do mangue. Eles concluram que a


ciclagem dos nutrientes, entre associaes de microrganismos e plantas, conserva esses
nutrientes dentro do ecossistema de manguezais para benefcio de todos os organismos.
A rizosfera foi definida em 1904 por Hiltner como sendo o volume de solo,
influenciado pela presena de razes de plantas vivas, cuja extenso pode variar com o
tipo de solo, a espcie da planta, idade, alm de outros fatores. As razes das plantas
liberam uma grande quantidade de exudados levando a uma estimulao da densidade e
atividade microbianas. A presena de algumas populaes mais especfica que outras
na rizosfera por causa do nvel de adequao de suas atividades metablicas com a
composio das substncias liberadas pelas razes. Assim, a estrutura e diversidade das
populaes microbianas na rizosfera podem diferir significativamente daquelas
populaes do solo ou sedimento (Miller e Wood, 1996). Essa variao quantitativa e
qualitativa chamada efeito rizosfera.
Alongi et al. (1993) e Nedwell et al. (1994) sugeriram uma interdependncia
entre microrganismos e plantas de mangue, cujas razes exudam nutrientes que podem
ser usados pela comunidade bacteriana presente tanto no sedimento como na rizosfera.
Em razes de plantas de manguezais, no Mxico, foram isoladas bactrias dos trs
principais gneros Xanthobacter, Kluyvera e Chryseomonas capazes de solubilizar
fosfato. As espcies bacterianas foram isoladas de razes de A. germinans: Bacillus
amyloliquefaciens, B. atrophaeus, Paenibacillus macerans, Xanthobacter agilis, Vibrio
proteolyticus, Enterobacter aerogenes, E. taylorae, E. asburiae, e Kluyvera
cryocrescens; e das razes de L. racemosa: B. licheniformis, Chryseomonas luteola, e
Pseudomonas stutzeri (Vazquez et al., 2000).
Nas rizosferas das plantas R. mangle e A. germinans em manguezais da Florida,
as bactrias redutoras de sulfatos foram o grupo mais numeroso nas contagens em
placas, alcanando uma densidade populacional de 106 UFC por grama de peso fresco.
Espcies sulfato-redutoras pertencentes aos gneros Desulfovibrio, Desulfotomaculum,
Desulfosarcina e Desulfococcus tambm foram isoladas de plantas de mangue em Goa.
Esses microrganismos so capazes de metabolizar uma variedade ampla de compostos
simples. A versatilidade nutricional dessas bactrias pode permitir uma competio
eficiente por nutrientes dentro do manguezal (Bharathi et al., 1991).
Reviso Bibliogrfica 20

Entre a microbiota do sedimento, rizosfera e superfcie de razes de vrios


manguezais tambm foram identificadas bactrias fixadoras de nitrognio dos gneros
Azospirillum, Azotobacter, Rhizobium, Clostridium e Klebsiella. Entretanto, essas
bactrias no mostraram especificidade por qualquer das espcies de planta de mangue
(Sengupta e Chaudhuri, 1991). Holguin et al. (1992) tambm isolaram as espcies
Vibrio campbelli, Listonella anguillarum, V. aestuarianus, e Phyllobacterium sp. das
razes de plantas R. mangle, A. germinans e L. racemosa.
Reviso Bibliogrfica 21

2.4 Biodiversidade dos vbrios

De acordo com o Bergeys Manual of Determinative Bacteriology (1994) e o


Bergeys Manual of Systematic Bacteriology (2004), as estirpes da famlia Vibrionaceae
pertencem ao grupo Gamaproteobactrias, so bastonetes gram negativos geralmente
mveis, mesfilos e quimiorganotrficos, apresentam metabolismo fermentativo
facultativo e so encontrados em ambientes aquticos e em associao com organismos
eucariotos. A maioria das bactrias desse grupo so oxidase positivas e capazes de
crescer em meio agar marine e sobre o meio seletivo Agar tiossulfato-citrato-bile-
sacarose (TCBS). Existe uma quantidade importante de trabalhos fazendo referncia a
presena e elevada abundncia dos vbrios em ambientes aquticos costeiros incluindo
esturios, guas marinhas costeiras e sedimentos e ambientes de aqicultura (Thompson
et al., 2004a; Thompson et al., 2004b; Cavallo e Stabili, 2004; Montes et al., 2003;
Heidelberg et al., 2002). Para o estudo desse grupo so utilizadas tcnicas dependentes e
independentes de cultivo.
Alm de desempenhar um papel de patgeno para o homem e alguns organismos
aqutico, existem tambm indicaes de que os vbrios participem da ciclagem de
nutrientes nos ambientes aquticos atravs do transporte de matria orgnica dissolvida
(Sherr e Sherr, 2000; Thompson et al., 2004a). Os vbrios possuem a capacidade de
degradar quitina, um homopolimero presente nos oceanos principalmente como
principal componente formador do exoesqueleto dos crustceos e moluscos (Svitil et al.,
1997). Algumas espcies tambm esto envolvidas na degradao de hidrocarbonos
aromticos policiclicos em sedimentos marinhos impactados por derrames de petrleo
(Hedlund e Staley, 2001).
Na atividade de aqicultura, algumas espcies de Vibrio so reconhecidas como
importantes patgenos e responsveis por perdas significativas na produo de animais
aquticos para a alimentao humana. V. anguillarum, V. salmonicida e V. vulnificus
esto entre os principais patgenos bacterianos de vrias espcies de peixes enquanto o
V. harveyii o principal patgeno de camares como o Litopenaeus vannamei, uma
espcie largamente utilizada no mundo para cultivo em fazendas camaroneiras. A
mortalidade causada pelos vbrios acontece principlamente nas fases larvais dos
organismos aquticos podendo causar a morte de toda a populao no ambiente de
Reviso Bibliogrfica 22

cultivo. As espcies de Vibrio so patgenos oportunistas que encontram boas


condies para proliferar nas reas onde o cultivo intensivo praticado. A combinao
de fatores como a elevada densidade de organismos nos viveiros, o aporte de protenas
atravs da rao e fertilizantes e a utilizao de antibiticos, parece favorecer a
proliferao dos vbrios e aumentar a virulncia e prevalncia de doenas com efeitos
desastrosos sobre o ambiente (Naylor et al., 1998; Williams et al., 2000)
A maioria dos estudos ecolgicos sobre Vibrio realizados focada sobre
membros especficos do gnero. Entretanto, existem poucas pesquisas realizadas sobre a
diversidade e dinmica das populaes de Vibrio. A maioria das pesquisas realizadas
utiliza tcnicas convencionais de microbiologia dependentes de cultivo e por isso
permanece desconhecido se as dinmicas observadas refletem a fisiologia do estado
vivel mas no cultivvel das clulas ou representam flutuaes na densidade
causadas por fatores abiticos como a temperatura (Thompson et al., 2004a).
Reviso Bibliogrfica 23

2.5 Ferramentas para avaliao da diversidade microbiana

A elevada complexidade estrutural das comunidades microbianas naturais torna


sua caracterizao um desafio para os pesquisadores.
Nos ltimos 15 anos, o nmero de estudos desenvolvidos sobre biodiversidade
de comunidades microbianas tem aumentado exponencialmente (Morris et al., 2002).
No passado, a ausncia de ferramentas metodolgicas adequadas foi uma limitao a
esse tipo de pesquisa. Atualmente, porm, a disponibilidade dos mtodos moleculares
tornou possvel a investigao desse tpico. O advento dos mtodos independentes de
cultivo, como as tcnicas moleculares, vem mudando a viso da diversidade microbiana
(Giovannoni e Rapp, 2000; Olsen et al., 1986; Amann et al., 1995; Rossello-Mora e
Amann, 2001).
Na tentativa de fornecer uma viso geral do comportamento dos microrganismos
no ambiente foram desenvolvidas vrias tcnicas baseadas em aspectos distintos: os
chamados mtodos tradicionais dependentes do cultivo, isolamento e crescimento em
meios de cultura; os mtodos que focalizam atividades especficas dos microrganismos
como a utilizao de substratos, presena de enzimas especficas e aqueles que se
concentram na viabilidade celular (biomassa e respirao) e componentes celulares
(Kennedy, 1999).
Uma grande parte dos estudos realizados em sistemas biolgicos complexos
encontrou como barreiras principais: a no culturabilidade da maioria dos
microrganismos; e a pouca sensibilidade dos meios de cultura (Hugenholtz et al., 1998).
Em alguns sistemas naturais onde so encontrados nveis elevados de bactrias
cultivveis, como o caso de ambientes de aqicultura intensiva, os mtodos de cultivo
so utilizados (Salvesen e Vadstein, 2000). Entretanto, na maioria dos ambientes com
uma maior diversidade, a maioria das bactrias no recuperada porque no pode ser
cultivada e/ou est em relao de simbiose com planta ou animais hospedeiros. Deve-se
tambm considerar que a maioria das bactrias tem necessidades nutricionais que no
so encontrados em apenas um nico meio de cultura. Organismos de crescimento
rpido podem excluir aquela com crescimento lento, utilizando os nutrientes do meio de
cultura slido e produzindo substncias antimicrobianas. Alguns desses problemas
Reviso Bibliogrfica 24

podem ser parcialmente resolvidos pelo plaqueamento das amostras em vrios meios de
cultura com composies diferenciadas (Balestra e Misaghi, 1997)
Nas duas ltimas dcadas, a utilizao de novos mtodos de biologia molecular
baseados essencialmente na extrao e amplificao de cidos nuclicos forneceu uma
alternativa apropriada para os mtodos baseados no cultivo proporcionando uma viso
geral sobre a composio, riqueza e estrutura de comunidades microbianas de ambientes
complexos (Martin-Laurent et al., 2001). Apesar do impacto das pesquisas do gene
rRNA sobre a ecologia microbiana, a informao filogentica fornecida por um nico
gene (por exemplo, rRNA) geralmente insuficiente para inferir a significncia
fisiolgica ou ecolgica dos organismos apenas pela seqncia do rRNA. A ausncia de
alternativas para o cultivo tem limitado em muito a habilidade dos microbiologistas para
caracterizar os microrganismos na natureza. A amplitude e diversidade filogentica de
muitas das linhagens microbianas implica em inovaes evolucionrias, novas
propriedades fenotpicas e papis ecolgicos imprevistos. Novas estratgias para a
caracterizao biolgica mais esclarecedora dos novos taxas microbianos so
urgentemente necessrios para a compreenso dos microrganismos existentes e suas
interaes (Delong e Pace, 2001)
Atualmente, diversas tcnicas moleculares esto disponveis para a deteco de
variabilidade gentica da seqncia de DNA, ou seja, para a deteco de polimorfismo
gentico. Algumas dessas tcnicas usadas para analisar a estrutura e diversidade de
comunidades microbianas so: a eletroforese em gel de gradiente desnaturante
(Denaturating Gradient Gel Eletrophoresis - DGGE), a eletroforese em gel de gradiente
de temperatura (Temperature Gradient Gel Eletrophoresis - TGGE), a conformao de
polimorfismo em fita simples (Single-Strand-Conformation Polimorfism - SSCP), e
anlise dos perfis eletroforticos de fragmentos de restrio (Amplified Ribosomal
DNA Restriction-ARDRA) (Smalla et al., 1993; Rosado et al., 1997; Schwieger e
Tebbe, 1998; Rosado et al., 1999).
As tcnicas de eletroforese do DGGE, TGGE so consideradas mtodos padres
em ecologia microbiana molecular (Muyzer e Smalla, 1998) e juntamente com a SSCP
permitem analisar produtos de reao em cadeia de polimerase (PCR) de acordo com as
seqncias de pares de bases, possibilitando ento determinar a diversidade gentica de
comunidades microbianas naturais e tambm a identificao filogentica dos membros
Reviso Bibliogrfica 25

da comunidade. A tcnica de DGGE utiliza gel de poliacrilamida contendo um


gradiente linear de desnaturantes, uria e formamida, enquanto a de SSCP diferentes
conformaes podem ser separadas por um gel de poliacrilamida no desnaturante
(Smalla et al., 1993; Schwieger e Tebbe, 1998). Portanto, possvel atravs das tcnicas
de PCR/DGGE e PCR/SSCP, comparar a estrutura de comunidade de um grande
nmero de amostras ambientais e avaliar os impactos de diferentes tratamentos na
estrutura dessas comunidades microbianas ambientais.
A tcnica de DGGE, desenvolvida por Fisher e Lerman em 1983, se baseia nas
diferentes propriedades de desnaturao apresentada pelas fitas duplas de DNA das
molculas quando submetidas a um gradiente desnaturante crescente (uria e
formamida). Esse comportamento de melting, que altamente dependente da
seqncia, torna possvel a resoluo de fragmentos de DNA com poucas ou apenas
uma diferena nos pares de base. Quando a fita dupla de DNA submetida
eletroforese atravs de gradiente, acontece uma desnaturao resultando em uma
mudana conformacional do fragmento e conseqentemente a mobilidade da molcula
dramaticamente reduzida. A introduo de grampo de GC durante a amplificao do
fragmento de DNA, previne a total dissociao das fitas e facilita a deteco de
mutaes. Teoricamente, a utilizao do grampo de GC aumenta a acuidade da tcnica
em 100% (Hayes et al., 1999).
O DGGE uma ferramenta importante nos estudos ecolgicos onde se avalia
diversidade microbiana ambiental. A avaliao estatstica dos perfis de bandas das
amostras expressa atravs de ndices de similaridade entre amostras distintas e suas
rplicas. A intensidade das bandas tambm tem sido empregada para avaliar o perfil
populacional, sendo usado como indicativo dos grupos dominantes ou mais
representativos na amostra ou sistema estudado. Apesar do largo emprego da tcnica, a
interpretao dos resultados obtidos deve ser cautelosa. Problemas de amplificao
preferencial ou amplificao de diferentes operons de 16S rDNA da mesma espcie
bacteriana fazem com que a tcnica de DGGE seja semiquantitativa (Heuer et al., 2001).
Mesmo assim, essa tcnica permite que um grande nmero de amostras seja analisado a
fim de caracterizar a variabilidade intrnseca das estruturas da comunidade bacteriana.
Essa grande quantidade de dados pode ser analisada atravs de ferramentas estatsticas
Reviso Bibliogrfica 26

fornecendo uma vantagem significante para a interpretao das variabilidades


observadas (Morris et al. , 2002).
Uma estratgia interessante no estudo da ecologia bacteriana em ambientes que
apresentam alta diversidade a utilizao de grupos especficos que possam ter um
papel de indicadores das alteraes dentro do ecossistema estudado e a combinao de
tcnicas convencionais e moleculares de forma a obter o maior nmero de informaes
possvel das amostras analisadas. importante a utilizao combinada de vrias
tcnicas no estudo da diversidade das comunidades como uma forma de entender as
inter-relaes entre microrganismos e dos microrganismos com o ambiente.
Reviso Bibliogrfica 27

2.6 Avaliao da Similaridade de espcies

A tcnica estatstica aplicada na anlise dos perfis nos gis de DGGE de


natureza exploratria. Isso torna possvel simular hipteses consistentes sobre
causalidade na ecologia microbiana. A anlise estatstica permite a interpretao dos
perfis do DGGE (Fromin et al., 2002). Um modo de analisar as imagens dos gis de
DGGE a observao de alteraes na presena/ausncia de bandas ou na variao de
intensidade de bandas especficas. A variao na presena ou intensidade das bandas
pode ser avaliada atravs da relevncia das bandas indicadoras testando sua ocorrncia
em relao a vrios parmetros biolgicos e fsico-qumicos bem como com a presena
ou ausncia de outras bandas nos perfis (Murray et al., 1996; Widmer et al., 2001).
Quando a presena/ausncia das bandas considerada, a similaridade entre os
perfis de bandas, em pares, podem ser expressas como valores percentuais de um
coeficiente de similaridade como Jaccard ou Dice ou como medida Euclidiana (Diez et
al., 2001, van der Gucht et al., 2001). As matrizes de similaridade ou de distncia
podem ser apresentadas graficamente como um dendrograma.
O mtodo de agrupamento UPGMA aplicado nos perfis de DGGE com o
objetivo de identificar as amostras com padres similares (Yang et al., 2001; Boon et
al., 2002). Uma vantagem dessa forma de apresentaos dos dados que a coerncia
dos perfis pode ser avaliada rapidamente.
Objetivos 28

3 OBJETIVOS

3.1 Objetivo Geral

Esta pesquisa visou fornecer dados sobre o perfil da comunidade microbiana em


ecossistemas de manguezal receptores de efluentes das fazendas de carcinicultura na
regio nordeste, atravs da combinao de tcnicas convencionais de microbiologia
ambiental e tcnicas de biologia molecular que permitem avaliar os efeitos causados por
distrbios externos no ambiente. Os dados obtidos so importantes para a formulao de
estratgias de gerenciamento e conservao das reas com potencial para a explorao
dessa atividade agroindustrial.

3.2 Objetivos especficos

Para a obteno de dados que possam ser usados para responder as hipteses
formuladas, os seguintes objetivos foram traados:
9 Quantificar, isolar e identificar bactrias em amostras de gua, sedimento
e rizosfera das duas espcies vegetais mais abundantes em ecossistemas de manguezal
de quatro rios no Estado do Cear, trs deles (Chor, Pirang e Jaguaribe) com a
presena de fazendas de cultivo de camaro marinho e um (Pacoti) onde essa atividade
no est presente.
9 Estabelecer propores entre as bactrias cultivveis;
9 Caracterizar a comunidade microbiana associada a rizosfera, sedimentos
e gua utilizando metodologias convencionais de cultivo e metodologias moleculares;
9 Determinar os ndices de diversidade e similaridade entre as reas
estudadas;
9 Avaliar o grau de contaminao por esgoto domstico dos manguezais
atravs de anlises fisico-qumica e microbiolgicas desses ambientes
Hipteses 29

4 HIPTESES

As alteraes do perfil de comunidade microbiana no ecossistema manguezal


receptor de efluentes da atividade de cultivo de camaro marinho na regio
nordeste diferem daquelas causadas pelos efluentes de esgotos domsticos.

O tempo e o volume dos descartes das guas residuais dos viveiros de camaro
apresenta uma correlao positiva com alteraes na diversidade da comunidade
microbiana nas reas de manguezal receptoras dessas descargas.
Material e Mtodos 30

5 MATERIAL E MTODOS

5.1 Descrio da rea de estudo

Figura 3 Mapa de localizao do Estado do Cear

5.1.1 Escolha dos pontos de coleta


Os manguezais selecionados para esse estudo localizam-se em quatro rios do
litoral leste do Estado do Cear. A seleo dos locais seguiu um gradiente temporal do
surgimento e fixao das grandes fazendas produtoras de camaro marinho. Na poca
das coletas, a atividade de cultivo de camaro estava presente nos rios Jaguaribe,
Pirang e Chor, aproximadamente h 20, 10 e 5 anos, respectivamente. O Rio Pacoti,
apesar de ser uma rea de preservao ambiental, recebe uma carga substancial de
esgotos domsticos. Neste estudo, esse rio foi utilizado como o ambiente controle, uma
vez que no existem empreendimentos de carcinicultura presentes ao longo de sua rea
de esturio.
Os pontos de amostragens foram ento estabelecidos de forma a caracterizar
melhor o ambiente em estudo, representando as condies ambientais da regio e os
diferentes nveis do afluxo de guas residuais produzidas pelas fazendas de cultivo.
Material e Mtodos 31

Assim, os pontos de coleta foram estabelecidos a montante, adjacente e a jusante dos


canais de descarga das fazendas nos rios.
As expedies foram realizadas em dois perodos: de maro a maio de 2003 e
janeiro a fevereiro de 2004. No primeiro perodo, foram realizadas 3 coletas em cada
manguezal com intervalo de um ms entre elas. Em cada uma das coletas foram obtidas
amostras de gua, sedimento e rizosfera em dois diferentes pontos dos rios Pacoti,
Chor, Pirang e Jaguaribe denominados Mangue 1, 2, 3 e 4, respectivamente (Figuras 4
a 7). Na segunda expedio, no ano seguinte, foram coletadas amostras em cinco pontos
nas reas de manguezal nos esturios dos rios Pacoti (Mague 1) e Jaguaribe (Mangue 4).
Na segunda expedio, da mesma forma que na primeira, foram coletadas amostras de
gua, sedimento e razes de plantas de mangue. As coletas foram sempre realizadas em
mar vazante.
Material e Mtodos 32

Figura 4 Localizao dos pontos de coleta no rio Pacoti Mangue 1(Cear, Brasil)

Figura 5 Localizao dos pontos de coleta no rio Chor Mangue 2 (Cear, Brasil)
Material e Mtodos 33

Figura 6 Localizao dos pontos de coleta no rio Pirang Mangue 3 (Cear, Brasil)

Figura 7 Localizao dos pontos de coleta no rio Jaguaribe Mangue 4 (Cear, Brasil)
Material e Mtodos 34

5.1.2 Determinao de parmetros hidrobiolgicos


Temperatura e salinidade da gua foram determinadas no momento das coletas
utilizando respectivamente, termmetro e refratmetro porttil (ATAGO S/MILL). Em
laboratrio foi determinado o pH das amostras de gua (potencimetro MARCONI-PA
200P).
Os ndices pluviomtricos das localidades, nos perodos das expedies e de
anos anteriores foram obtidos junto a Fundao Cearense de Meteorologia
(FUNCEME).

5.1.3 Coleta e processamento das amostras de gua


As amostras de gua foram coletadas em recipientes de vidro mbar com
capacidade de 1000 mL. De cada ponto foram recolhidos cerca de 2 litros de gua para
anlise. O transporte das amostras foi feito sob refrigerao em caixas isotrmicas e o
processamento se iniciou imediatamente aps a chegada ao laboratrio de
Microbiologia Ambiental e do Pescado (LABOMAR UFC).

5.1.4 Coleta e processamento das amostras de sedimento


Amostras de sedimento, coletadas em perfis de 0 a 15 cm de profundidade,
foram combinadas formando uma amostra composta, de cada ponto de amostragem (van
Elsas e Smalla, 1997). A frao microbiana do sedimento foi resgatada aps etapa de
agitao de 10g de sedimento em um erlenmeyer contendo 90 mL de soluo salina
estril (0,85%). Aps um perodo de 30 minutos a temperatura ambiente, uma alquota
de 1mL era retirada desse material para iniciar as diluies necessrias para o
processamento das amostras.

5.1.4.1 Anlise da textura e caractersticas fsico-qumicas dos sedimentos


Uma alquota dos sedimentos foi enviada para o laboratrio de solos da Empresa
Brasileira de Pesquisa Agropecuria (EMBRAPA Agrobiologia) para a realizao de
anlise fsico-qumica.
Material e Mtodos 35

5.1.5 Coleta e processamento das amostras de razes


As coletas das plantas para anlise das rizosferas foram realizadas ao longo dos
pontos de amostragem. Buscando a representatividade do material coletado, cada
amostra foi formada por razes de cinco plantas jovens (aproximadamente 50 a 70 cm de
comprimento) da mesma espcie, coletadas aleatoriamente, formando uma amostra
composta (van Elsas e Smalla, 1997). Foram coletadas duas espcies dominantes em
cada ponto de coleta quando foi possvel. Uma quantidade de 5 g de razes (com solo
aderido) foi adicionada em um erlenmeyer contendo prolas de vidro e 45 mL de uma
soluo de pirofosfato de sdio (0,1%) e Tween 80 (0,1%). Depois de um perodo de 30
minutos sob agitao constante a 200 g e em temperatura ambiente, foi retirada uma
alquota (1 mL) desse material para iniciar as diluies seriadas em soluo salina a
0,85%.
Todas as vidrarias e material de laboratrio utilizados nas coletas foram
devidamente esterilizadas por autoclavao bem como as solues diluentes.
Depois de retirada parte das amostras para as anlises atravs das tcnicas
convencionais de microbiologia, o restante do material foi preparado e acondicionado
-20oC at o momento de processamento e anlise atravs das tcnicas moleculares no
laboratrio de Taxonomia e Ecologia Microbiana (IMPPG-UFRJ).
As amostras de gua (aproximadamente 2 L) foram filtradas em um sistema
contnuo, utilizando bomba de vcuo, com duas etapas de pr-filtrao (papel de filtro
Wattman 3) e uma filtrao atravs de membrana millipore (0,22). Os filtrados foram
ento reunidos, cortados em 4 pedaos de igual tamanho, colocados em tubos tipo
Falcon, ressuspensos em uma soluo desnaturante (SDS 0,1%, Na2EDTA 1mM [pH
8.0], isotiocianato de guanidium 0,5%) e congelados (Petit et al.,1999).
Cada amostra de sedimento e rizosfera foi fracionada em quatro (4) sub-
amostras que foram embaladas em sacos plsticos e congeladas a -20oC.
Material e Mtodos 36

5.2 Anlise das amostras atravs de tcnicas convencionais de cultivo


5.2.1 Colimetria
A estimativa do nmero de bactrias do grupo dos Coliformes foi determinada
nas amostras de gua e sedimento. Foi utilizada a tcnica de Fermentao em Tubos
Mltiplos (FTM) com inoculao das diluies (10-1 10-4) em sries de 5 tubos para as
amostras de gua (APHA, 2000), e sries de 3 tubos para o sedimento. Os resultados
foram expressos em NMP/100mL e NMP/g para gua e sedimento, respectivamente.

5.2.2 Contagem de Bactrias Heterotrficas Totais cultivveis (BHT)


A populao total de bactrias heterotrficas e aerbias foi determinada nas
amostras de gua, sedimento e rizosfera atravs do mtodo de Contagem Padro em
Placas (CPP), fazendo uso da tcnica de espalhamento em placa (APHA, 2000).
Alquotas de 1 mL das diluies (10-3 10-5) das amostras de gua, sedimento e
rizosfera foram plaqueadas, em triplicata, em meio Agar Marinho (Gomes, 1997) pela
tcnica de pour plate. A contagem das Unidades Formadoras de Colnias (UFC) nas
placas foi realizada aps 48 horas de incubao a 35oC nas placas que apresentavam
nmero entre 25 e 250 colnias. O nmero de colnias foi multiplicado pelo inverso do
fator de diluio para obteno do valor de UFC/mL ou g de amostra.

5.2.2.1 Isolamento e manuteno de estirpes


A partir das colnias crescidas no meio Agar Marinho, foram feitos isolamentos
para obteno de culturas puras das bactrias. A pureza das colnias isoladas foi
verificada aps plaqueamento, pela tcnica de esgotamento, sobre o meio Tripticase Soy
Agar (TSA) (1%NaCl) com incubao por 35oC durante 24/48 horas. No caso das
colnias apresentarem similaridade morfolgica, uma alada era transferida para o meio
TSA (1%NaCl) em tubo inclinado. Depois de 24 horas a uma temperatura de 35oC, os
tubos inoculados receberam uma camada de leo mineral e foram mantidos em
temperatura de refrigerao para posterior identificao.

5.2.2.1.1 Identificao das estirpes


Os isolados foram submetidos a uma triagem de modo a serem separados em
grupos similares para realizao posterior de provas de identificao. A caracterstica
Material e Mtodos 37

morfotintoriais de parede celular (atravs do teste de Gram) foi o primeiro critrio de


triagem. Foram realizadas tambm testes de oxidase, catalase, motilidade,
oxidao/fermentao. Parte das estirpes Gram negativas no fermentadoras foi
identificada atravs do kit API 20NE (Biomerieux). Baseado nas caractersticas das
estirpes isoladas, foi utilizado gua do mar com salinidade ajustada para 20 com gua
destilada como diluente em substituio a soluo salina 0,85%. Essa estratgia baseada
em estudo anterior de MacDonell et al. (1982) permitiu uma melhor caracterizao das
estirpes de origem ambiental marinha.
As demais seguiram chaves de identificao fenotpica construdas com base no
Manual Bergey (1994).

5.2.3 Contagem e isolamento de Vibrio spp.


Na segunda etapa de coletas, a comunidade total de vbrios foi determinada nas
amostras de gua e sedimento.
As amostras de gua foram diludas (10-1 a 10-5) em gua Peptonada Alcalina
(APA com 1% de NaCl e pH 7.8) e incubadas por 16-18 h a 37oC. Para a anlise das
amostras de sedimento foram pesados 25 gramas e homogeneizados em 225 mL de
APA por 30 min., sob agitao. Logo depois, uma srie de diluies (10-2 a 10-5) foi
feita usando-se o mesmo diluente. O procedimento a partir de ento foi o mesmo para
os dois tipos de amostra.
Dos tubos que apresentavam turvao depois do perodo de incubao, foram
tomados 0,2 mL da soluo que foram inoculados em placas de meio Agar Tiossulfato-
citrato-bile-sacarose (TCBS) por espalhamento usando ala de Drigalski. As placas
foram incubadas por 18 h a 37oC. As placas apresentando crescimento entre 25 e 250
colnias foram escolhidas e contadas com auxilio de contador de colnias (Phoenix
mod. EC550AS). O resultado das contagens foi multiplicado pelo inverso do fator de
diluio para obter o nmero presuntivo de Unidades Formadoras de Colnias (UFC)
por grama ou mililitro de amostra (Downes e Ito, 2001).
Material e Mtodos 38

5.2.3.1 Isolamento e identificao de estirpes


Colnias crescidas sobre o meio agar TCBS foram selecionadas, inoculadas por
esgotamento em meio Agar Marine e isoladas para posterior identificao fenotpica
atravs de testes bioqumicos de acordo com Koneman et al. (1993) e Tison (1999). Os
testes foram divididos em duas etapas: presuntiva e confirmatria que so apresentadas
no Quadro 2.

Identificao presuntiva
Teste Meio
Colorao de Gram
Produo de citocromo-oxidase
Motilidade Sulfeto-Indol-Motilidade (SIM)
Utilizao de glicose/fermentao de sacarose Agar Trplice Acar Ferro (TSI)
Identificao confirmatria
Decarboxilao de lisina e ornitina / hidrlise de Meio basal
arginina
Halofilismo Caldo triptona com 0, 3, 6, 8 e 10 % de
Cloreto de sdio
Voges-Proskauer Caldo MR-VP
Hidrlise de ONPG
Fermentao de carboidratos Caldo Prpura de Bromocresol
Produo de Indol Sulfeto-Indol-Motilidade (SIM) (Difco)

Quadro 2 Testes para identificao fenotpica de estirpes do grupoVibrio


Material e Mtodos 39

5.2.4 Contagem e Fungos e Leveduras Totais


A contagem padro em placas (CPP) do nmero total de fungos e leveduras nas
amostras foi feita pela tcnica de espalhamento em placa na superfcie do meio Agar
Dextrose Batata (PDA) contendo 200 mg/mL de cloranfenicol. O plaqueamento foi
feito em triplicata para cada diluio (103 a 105) e as placas incubadas de 3 at 5 dias em
uma temperatura de 30oC.

5.2.5 Anlise estatstica


Os dados obtidos na colimetria e contagem padro em placas foram
transformados em logaritmo decimal, calculados a mdia e desvio padro. Os dados
foram submetidos anlise de varincia comparando-se as mdias atravs de teste de
Tukey (p 0,05) utilizando o pacote estatstico Origin verso 4.1, e o erro alfa foi fixado
em p=0,05.
Material e Mtodos 40

5.3 Anlise das amostras de gua atravs de tcnicas moleculares


5.3.1 Extrao de DNA total
O protocolo utilizado para extrao dos cidos nuclicos das amostras de gua
foi estabelecido e otimizado para resultar em um melhor produto quanto ao rendimento
e integridade dos extrados.
A eficincia de todas as extraes foi avaliada por eletroforese em gel de agarose
1% em tampo Tris-acetato 0,04M; EDTA 0,001M (TAE 1X), visualizado em
transluminador ultravioleta aps colorao com brometo de etdio (Sambrook et al.,
1989). Um padro de 1 Kb foi usado nos gis para avaliar a pureza e peso molecular do
DNA extrado.

5.3.1.1 Extrao de DNA total das amostras de gua


O DNA foi extrado dos filtrados usando protocolo descrito por Sommerville et
al. (1989) e modificado por Rivera et al. (2003): as amostras foram descongeladas a
temperatura ambiente e agitadas. Foram adicionados 360 l de tampo lisozima e as
amostras incubadas por 1 hora a 37oC sob agitao (150 g). Depois desse tempo foram
adicionados 50 l de soluo de SDS (20%) e 25 l de uma soluo de proteinase K
(20mg/mL) s amostras, e novamente incubadas a 37oC sob agitao por 2 h. Depois de
adicionados 400 l de soluo salina 5M, as amostras foram agitadas e adicionados 280
l de soluo CTAB-NaCl, agitadas novamente e incubadas a 65oC por 20 min. Para
purificao do DNA extrado, foi usado igual volume de fenol-clorofrmio-lcool
isoamlico (25:24:1), agitado e centrifugado (400 g por 30min.) temperatura ambiente.
A fase aquosa sobrenadante foi transferida para outro tubo ao qual foi adicionado igual
volume de soluo clorofrmio-lcool isoamlico (24:1). A precipitao do DNA foi
feita usando um volume de 0,6x de isopropanol e deixado por uma noite temperatura
ambiente. O pellet formado depois da centrifugao (13000 g por 20 min.) foi lavado
com etanol 70% gelado. O material foi eludo em 50 l tampo TE pH 8,0 e estocado a -
20oC.
Material e Mtodos 41

5.3.2 Amplificao dos fragmentos dos genes 16S do DNA total (PCR) das amostras de
gua com iniciadores universais
Os fragmentos da regio varivel V6 a V8 do gene 16S do rDNA total extrado das
amostras de gua foram amplificados em um termociclador GeneAmp 9700 (Applied
Biosystems), em duas etapas: primeira com o par de iniciadores 1401U (5 CGG TGT
GTA CAA GGC CC- 3) e 984 (5-AAC GCG AAG AAC CTT AC-3). O produto
dessa amplificao foi usado como padro para a segunda etapa utilizando os
iniciadores F984 com grampo de GC (5-CGC CCG GGG CGC GCC CCG GGC GGG
GCG GGG GCA CGG GGG GAA CGC GAA GAA CCT TAC-3) e R1378 (5-CGG
TGT GTA CAA GGC CCG GGA ACG-3). Os iniciadores so especficos para
seqncias universalmente conservadas nos gene 16S rDNA bacteriano. O PCR foi
realizado com a enzima Sttoffel Fragment (Applied Biosystem). Cada mistura de reao
continha: tampo 1X; 2,5 mM de MgCl2; 0,2 mM de DNTPs; 0,2 M de cada
primer; 5% de DMSO; gua Milliq; 2,5 unidades de Taq e 50 ng de DNA. O
Programa de PCR foi desenvolvido em 30 ciclos, com as seguintes etapas: desnaturao
a 94 oC/1min.; anelamento 57oC/1min; extenso a 72oC/75min.

Na etapa de elongao foi usada uma temperatura de 72oC por 30 min. para
prevenir a formao de artefatos de bandas duplicadas na anlise por DGGE (Janse et
al., 2004).

5.3.3 Amplificao dos fragmentos de DNA das amostras de gua com iniciadores
especficos para o gnero Vibrio
Os iniciadores especficos para o gnero Vibrio foram desenhados baseado em
alinhamento de Vibrio publicado e relacionado a seqncias de 16S rRNA. Estes foram
testados in silico com o programa Ribosomal Database Project (RDP) (verso 2.0). O
iniciador senso foi modificado com um grampo GC de 30 pares de base.
O DNA total extrado das amostras de gua foi utilizado como padro para
amplificao dos fragmentos de 16S com iniciadores vibF727 (5-AGG CGG CCC
CCT GGA CAG A-3) e vibR1423 (5-RCT TCT KKT GCA GCC CAC TCC CA-3)
Material e Mtodos 42

desenhados para o gnero Vibrio. A mistura da reao e o programa utilizado foram


similares ao anteriormente descrito no tem 5.3.2.

A eficincia das reaes de amplificao foi verificada atravs de eletroforese


em gel de agarose a 1%, em tampo TAE 1X; e visualizado em transluminador
ultravioleta aps colorao com brometo de etdio (Sambrook et al., 1989). Um
marcador de peso molecular de 100 pb (DNA ladder, Gibco BRL) foi usado nos gis
para avaliar a pureza e tamanho dos amplicons obtidos com PCR 16S rDNA.

5.3.4 Anlise da diversidade microbiana das amostras de gua atravs de Eletroforese


em Gel de Gradiente Desnaturante (DGGE)
Os amplicons do PCR 16S rDNA foram analisados em gel de poliacrilamida
(acrilamida: bis-acrilamida, 37,5:1) contendo um gradiente duplo (DG-DGGE). Essa
tcnica descrita por Gelfi et al. (1997) baseada na combinao de dois gradientes
lineares; um desnaturante primrio formado pela uria e formamida e um segundo
gradiente colinear de porosidade formado pela acrilamida. A formao desse gradiente
secundrio ajuda a melhorar a resoluo dos padres de banda. O gel foi formado por
duas solues desnaturantes, 65% e 35% de gradiente uria/formamida e com 9% e 6 %
de acrilamida, respectivamente. A eletroforese foi realizada em aparelho D-Code
universal mutation detection system (Bio-Rad,Hercules, Calif.),em tampo TAE 1x e
uma temperatura de 60oC. A velocidade de corrida foi 200V por um perodo de 5,5
horas. Os gis foram corados utilizando protocolo com Nitrato de Prata de acordo com
Sambook et al. (1989)
Depois de corados, os gis de DGGE dos amplicons foram digitalizados e
analisados. A riqueza de espcies foi determinada pelo nmero de amplicons presentes
em cada amostra sendo portando considerada a relao 1 banda = 1 amplicon. A
similaridade entre as amostras foi determinada com base na ausncia/presena das
bandas no gel. Os dendrogramas foram gerados utilizando o programa estatstico
BioDiversity Professional Beta (MacAleece, 1998), com o coeficiente de similaridade
DICE e o algoritmo de agrupamento UPGMA., para construo dos dendrogramas.
Resultados 43

6 RESULTADOS

Durante a execuo dessa pesquisa foram realizadas duas expedies para coleta
de material em dois anos consecutivos (2003 e 2004) em quatro reas de manguezal do
litoral leste do Estado do Cear. A primeira expedio gerou 24 amostras de gua, 24 de
sedimento e 31 amostras de rizosfera das espcies Rhizophora mangle e Avicennia
schaueriana encontradas como dominantes nas reas estudadas. Na segunda expedio
as coletas aconteceram em duas das reas de manguezal (Mangue 1 e Mangue 4, rio
Pacoti e Rio Jaguaribe, respectivamente), em cinco pontos distintos, tendo-se coletado
um total de 10 amostras de cada material a ser analisado (gua, sedimento e razes).

6.1 Parmetros fsico-qumicos da gua


A mdia e desvio padro da temperatura, salinidade e pH da gua esto
apresentados na Tabela 1. Na primeira expedio as maiores mdias de temperatura
foram registradas nos dois pontos do Mangue 4. Esse fato no se repetiu no segundo
perodo de coletas onde a mdia de temperatura dos cinco (5) pontos amostrados foi
maior no Mangue 1 (ANOVA, p<0,05). A salinidade apresentou valores notadamente
oscilantes determinados principalmente pela localizao do ponto de coleta e o volume
de guas pluviais recebido pelos rios nos perodos das coletas. As mdias dos registros
de pH das guas variaram entre 7,32 e 7,93 e de 7,30 e 7,82 na primeira e segunda
coleta, respectivamente.
Resultados 44

Tabela 1 Mdia e desvio padro dos valores da temperatura, salinidade e pH de dois


pontos das amostras de gua registrados nas duas expedies de coleta nas reas de
manguezal estudadas.

Parmetros
Temperatura C Salinidade pH
1. Expedio
P1 P2 P1 P2 P1 P2
*Mangue 1 292,6 27,32,1 1312,1 4,78,0 7,83 0,34 7,570,21
*Mangue 2 28,61,4 29,31,2 0,81,0 0,40,5 7,700,19 7,680,20
*Mangue 3 293,5 293,6 10,48,9 18,71,5 7,320,46 7,360,40
*Mangue 4 31,30,6 30,71,2 27,38,1 149,6 7,930,35 7,760,43
2. Expedio
**Mangue 1 31,22,2 34,60,5 7,820,10
**Mangue 4 26,41,5 3 3,7 7,300,19
* mdia de 3 amostras; **mdia de 5 amostras

6.1.1 Parmetros fsicos e qumicos dos sedimentos


Os resultados das anlises dos fatores fsicos e qumicos nas amostras de
sedimento das reas de manguezal estudadas so mostrados na Tabela 2. A anlise
granulomtrica atravs da tcnica Expedita indicou que a maioria dos sedimentos
analisados apresentou um maior teor de areia. Apenas o sedimento do ponto M4P1 foi
classificado como argiloso. Os teores de fsforo e potssio variaram de 8,0 a 48,0
mg/dm3 e 61,0 a 780,0 mg/dm3 respectivamente. O teor de carbono foi relativamente
baixo nas amostras sendo o menor percentual encontrado na amostra M4P2. A maioria
das amostras de sedimento se mostrou alcalina com pH variando na faixa de 7,3 a 8,6
com exceo da amostra M1P2 que apresentou pH 5,5.
Os resultados se referem a uma nica amostra de sedimento de dois pontos em
cada uma das quatro reas de manguezal analisadas.
Resultados 45

Tabela 2 Anlise fsico-qumica e de textura das amostras de sedimento de quatro


reas de manguezal do litoral leste do Estado do Cear

Textura pH em Al Ca + Mg Ca Mg P K C
Amostra cmol /c/dm3
mg / dm 3
%
(Expedita) gua
M1P1 Mdia 8,0 nd 14,3 5,3 6,0 21,0 295,0 0,81
M1P2 Arenosa 5,5 nd 9,1 3,0 6,1 25,0 285,0 1,08
M2P1 Mdia 8,4 nd 7,7 3,1 4,6 24,0 345,0 0,28
M2P2 Arenosa 8,6 nd 6,8 1,9 4,9 19,0 250,0 0,24
M3P1 Arenosa 7,7 nd 4,1 2,9 1,2 48,0 61,0 0,09
M4P1 Argilosa 7,3 nd 20,0 8,2 11,8 38,0 780,0 1,00
M4P2 Arenosa 8,1 nd 9,2 1,7 1,5 8,0 120,0 0,07
M1P1: Mangue 1/ Ponto 1; M1P2: Mangue 1/ Ponto 2; M2P1: Mangue 2/ Ponto 1; M2P2: Mangue 2/
Ponto 2; M3P1: Mangue 3/ Ponto 1; M4P1: Mangue 4/ Ponto 1; M4P2: Mangue 4/ Ponto 1
nd: No detectvel

6.2 Anlises microbiolgicas atravs das tcnicas convencionais de cultivo

6.2.1 Colimetria das amostras de gua e sedimento


Durante a primeira expedio, a avaliao da qualidade bacteriolgica das guas
dos Mangues 1 a 4 revelou que 37,5% das amostras analisadas apresentaram valores
para coliformes fecais (CF) ou termotolerantes acima do limite de 2500 CF por 100
mililitros (resoluo CONAMA 357) para guas salobras onde ocorrer pesca ou cultivo
de organismos, para fins de consumo intensivo.

Tambm possvel verificar valores pontuais bem mais elevados nos Mangues 1
(Ponto 1) e Mangue 2 (Ponto 2). importante lembrar que a legislao estabelece
parmetros para os valores mdios de seis (6) amostras coletadas durante o perodo de
um ano, com freqncia bimestral. Como as coletas realizadas no visavam o
monitoramento da contaminao por esgoto domstico, na primeira expedio cada
ponto foi analisado 3 vezes em dois diferentes pontos dentro da rea de mangue e na
segunda etapa as amostras foram coletadas em um mesmo dia, em cinco pontos de cada
estuario. Assim, a utilizao dos parmetros para CF como referncia tem um carter
comparativo e no de classificao.

Durante a segunda etapa de coletas foi verificado valor elevado de apenas no


Ponto 4 de M1. O M4, onde existe a presena de fazendas de carcinicultura, apresentou
mais pontos (3) com valores de CF acima de 2500 por 100mL de gua.
Resultados 46

Nas amostras de sedimento, o nmero de coliformes fecais foi maior que nas
amostras de gua na primeira expedio (Tabelas 3). O Mangue 1 foi o que apresentou
os valores mais elevados e o Mangue 4 foi aquele com os menores valores. O mesmo
perfil de contaminao por coliformes pode ser observado nas amostras de gua, com o
Mangue 1 apresentando valores mais altos.

Tabela 3 Nmero mais provvel de coliformes fecais nas amostras de gua e


sedimento coletadas em reas de manguezal na regio nordeste (Cear, Brasil / 2003)

Mangue 1 Mangue 2 Mangue 3 Mangue 4


P1 P2 P1 P2 P1 P2 P1 P2
gua (NMP / 100mL)
Coleta 1 41000 2300 15000 220000 6100 610 <180 2300
Coleta 2 >16000 3300 4500 1300 3300 400 <180 400
Coleta 3 200 450 2700 2400 680 450 2700 2400
Sedimento (NMP / g)
Coleta 1 2400 280 2100 23 280 150 <3 14
Coleta 2 4600 4600 120 2900 280 150 <3 29
Coleta 3 460 460 15 24 3 11 7,4 3
Valores sombreados: NMP coliformes fecais acima de 2500/100mL (resoluo CONAMA 357)

Os resultados de colimetria esto dispostos na Tabela 4 onde pode ser notado


que a contaminao por CF nas amostras de gua e sedimento do Mangue 1 se mostrou
menor na poca em que se realizaram essas coletas. J no Mangue 4 os valores
aumentaram tendo como referncia os valores obtidos nas coletas durante a primeira
expedio.
Resultados 47

Tabela 4 Estimativa do nmero de coliformes fecais nas amostras de gua e sedimento


coletadas em reas de manguezal na regio nordeste (Cear, Brasil / 2004)

Mangue 1 Mangue 4
gua Sedimento gua Sedimento
(NMP / 100mL) (NMP / g) (NMP / 100mL) (NMP / g)
Ponto 1 200 <3 1700 23
Ponto 2 <180 <3 200 >1100
Ponto 3 <180 <3 2700 150
Ponto 4 2400000 <3 2700 150
Ponto 5 780 23 2700 150
Valores sombreados: NMP coliformes fecais acima de 2500/100mL (resoluo CONAMA 357)

6.2.2 Contagem de Bactrias Heterotrficas Totais cultivveis (BHT)

As contagens das Unidades Formadoras de Colnias (UFC/ml ou g) de Bactrias


Heterotrficas Totais nas amostras de gua e sedimento, obtidas na primeira etapa de
coletas, esto expostos nas Tabelas 5 e 6, respectivamente.
possvel observar que as contagens bacterianas, nas amostras de gua,
permaneceram em torno de 104 UFC / mL. Os valores de bactrias no Mangue 4, o que
apresenta a maior concentrao de fazendas de cultivo de camaro, se mostrou um
pouco maior que os demais nos dois pontos de coleta.
Da mesma forma que nas amostras de gua, o nmero de bactrias totais nas
amostras de sedimento se mostrou homogneo tanto entre as coletas como entre as reas
de manguezal. As maiores contagens foram obtidas nos manguezais 3 e 4,
principalmente durante a primeira coleta. Os valores nesses dois ambientes ficaram em
torno de 108 UFC/g. A maioria das contagens ficou na ordem de 104 a 106.
Resultados 48

Tabela 5 Mdia e desvio padro do logaritmo do nmero de bactrias (UFC) em


amostras de gua e sedimento coletadas em reas de manguezal na regio nordeste
(Cear, Brasil / 2003)
Mangue 1 Mangue 2 Mangue 3 Mangue 4
P1 P2 P1 P2 P1 P2 P1 P2
gua (UFC/mL)
Coleta 1 4,040,03 3,770,03 4,330,07 5,240,18 4,390,07 4,350,04 6,920,03 4,890,01
Coleta 2 5,830,02 4,380,11 4,390,04 4,420,06 5,670,07 6,820,28 7,440,05 5,570,00
Coleta 3 5,420,12 4,180,10 5,330,00 6,490,00 5,440,08 5,890,08 4,410,02 6,890,20
Sedimento (UFC/g)
Coleta 1 4,440,01 4,320,06 5,700,04 4,740,01 7,530,02 7,750,00 7,740,07 7,670,19
Coleta 2 7,600,03 6,210,08 4,550,01 5,320,10 5,890,07 6,440,08 6,440,00 5,410,00
Coleta 3 4,660,13 5,550,03 4,990,10 6,880,01 5,150,04 7,610,01 4,430,10 5,500,03

Nas amostras de rizosfera das espcies Rhizophora mangle e Avicennia


schaueriana, que eram as espcies dominantes nos pontos de coleta, os valores de UFC
por grama de raiz ficaram na ordem de 106 e 107. Em pontos onde foi possvel coletar as
duas espcies ao mesmo tempo, nota-se que as contagens foram extremamente prximas
(ANOVA, p>0,05). Os valores pouco variaram tambm entre as mesmas espcies em
pontos diferentes. importante observar a variao no aparecimento de plantas jovens
da espcie Avicennia schaueriana nos locais de coleta. A presena dessa planta foi
observada nos Mangues 1 e 2 em pelo menos uma das coletas e nos dois pontos. No
Mangue 3 no foi possvel observar a presena de plantas jovens dessa espcie durante
o perodo de coletas. No Mangue 4 foram observadas plantas jovens de Av. schaueriana
no ponto 1 que corresponde a barra do rio portanto mais influenciado pela gua do mar.
Resultados 49

Tabela 6 Mdia e desvio padro do logaritmo do nmero de bactrias (UFC) por


grama de amostras de razes das espcies Rhizophora mangle e Avicennia schaueriana
em reas de manguezal na regio nordeste(Cear, Brasil / 2003)
Mangue 1 Mangue 2
P1 P2 P1 P2
Rm As Rm As Rm As Rm As
Coleta 1 5,990,02 * 5,960,04 * 6,330,07 6,840,03 6,060,13 6,270,03
Coleta 2 6,120,01 6,14 0,03 6,200,03 * 7,340,03 * 6,630,01 *
Coleta 3 5,610,08 5,960,27 5,670,03 5,420,06 6,620,18 * 5,570,25 *
Mangue 3 Mangue 4
P1 P2 P1 P2
Rm As Rm As Rm As Rm As
Coleta 1 7,510,02 * 7,360,01 * 6,140,04 6,420,14 6,930,02 *
Coleta 2 6,620,18 * 6,740,04 * 7,000,20 7,400,01 5,930,00 *
Coleta 3 6,160,04 * 7,360,03 * 6,450,05 * 4,990,01 *
*Ausncia de amostra;
Rm, Rhizophora mangle; As, Avicennia schaueriana

Os dados apresentados na Tabela 7 se referem s contagens de BHT em


amostras de gua, sedimento e rizosfera em cinco pontos das reas de manguezal dos
Mangues 1 e 4.
Nesse segundo momento de coleta, as maiores contagens foram observadas nas
amostras de gua no Mangue 1 (acima de sete ordens de magnitude). Em todos os
pontos, as contagens de bactrias cultivveis nas amostras de gua foram maiores que
aquelas das amostras de sedimento e rizosferas. Essas contagens elevadas no se
mostraram relacionadas a contaminao fecal, uma vez que a colimetria dos pontos do
Mangue 1 mostrou valores de coliformes fecais menores que aqueles encontrados nas
guas do Mangue 4. Apenas no ponto 5 foram observadas plantas jovens da espcie
Avicennia schaueriana junto com Rhizophora mangle.
No Mangue 4, o nmero de BHT foi menor nas amostras de gua. As contagens
mais altas foram observadas nas amostras de sedimento.
Resultados 50

Tabela 7 Mdia e desvio padro do logaritmo do nmero de bactrias (UFC) nas


amostras de gua, sedimento e rizosfera das espcies Rhizophora mangle e Avicennia
schaueriana em reas de manguezal na regio nordeste (Cear, Brasil / 2004)

Mangue 1 Mangue 4
gua Sedimento Rizosfera gua Sedimento Rizosfera
Rm
Ponto 1 7,90 0,07 4,87 0,10 4,75 0,06 4,06 0,04 5,07 0,01 6,76 0,01As

Ponto 2 7,83 0,06 5,48 0,11 6,20 0,08 Rm 4,15 0,02 6,85 0,03 7,24 0,00Rm

Ponto 3 7,54 0,00 4,81 0,22 5,07 0,00 Rm 5,85 0,06 7,19 0,08 4,98 0,05As

Ponto 4 7,65 0,04 4,90 0,02 6,67 0,14Rm 4,44 0,00 5,59 0,11 4,89 0,16As

Ponto 5 7,39 0,00 6,63 0,13 5,81 0,09 Rm 4,2 0,01As 4,34 0,16 6,98 0,00 4,28 0,11Rm
Rm As
Rhizophora mangle; Avicennia schaueriana; * UFC por grama de raiz

6.2.2.1 Identificao das estirpes isoladas

Durante a primeira etapa das coletas, em 2003, foram isoladas 168 estirpes
bacterianas a partir dos crescimentos em superfcie das placas de Agar Marine. Na
segunda etapa, em 2004, o nmero de isolados correspondeu a 89 estirpes das diferentes
amostras ambientais analisadas. Essas estirpes foram submetidas a novo isolamento em
placa para garantir a pureza. Durante novo plaqueamento alguns isolados no
apresentaram crescimento aps o tempo de incubao. A caracterizao morfolgica foi
realizada com 92 estirpes da primeira expedio e 69 da segunda.
A Tabela 8 apresenta o nmero de isolados e a amostra ambiental da qual eles se
originaram. Na primeira etapa das coletas as amostras ambientais originadas do Mangue
4 apresentaram um maior nmero de colnias morfologicamente distintas. Na etapa
seguinte, quando as coletas aconteceram nos Mangues 1 e 4 essa maior diversidade
morfolgica colonial foi observada nas placas inoculadas com as amostras do Mangue
1.
Resultados 51

Tabela 8 Nmero de culturas isoladas das amostras ambientais nas quatro reas de
manguezal no litoral do nordeste (Cear, Brasil)
Mangue 1 Mangue 2 Mangue 3 Mangue 4
Amostras
Etapa 1 Etapa 2 Etapa 1 Etapa 1 Etapa 1 Etapa 2
gua 8 19 6 5 12 7
Sedimento 7 9 4 12 6 8
Rizosfera 10 19 5 2 15 9
Total 25 47 15 19 33 24

A caracterizao morfolgica atravs da tcnica de colorao de Gram das


culturas isoladas das amostras originadas das quatro reas de manguezal analisadas
revelou a presena de culturas mistas. A tentativa de se isolar essas culturas mistas
resultou na perda da capacidade de crescimento em meio de cultura. Na Tabela 9 so
mostrados os dados referentes caracterizao morfolgica das culturas isoladas a partir
das placas de Agar marinho utilizadas nas contagens bacterianas. A maioria dos
isolados (44,5%) foi caracterizada como bastonetes Gram negativos. Os isolados
caractersticos de culturas mistas corresponderam a 19,3%. A principal combinao
nessas culturas foi entre bastonetes Gram negativos e Gram positivos e a origem
principal dessas culturas foram as amostras de rizosfera das plantas de mangue.
Resultados 52

Tabela 9 Caracterizao morfolgica das culturas isoladas de amostras ambientais em


quatro reas de manguezal da regio nordeste (Cear, Brasil)

Morfologia da clula Mangue 1 Mangue 2 Mangue 3 Mangue 4 %


Bastonetes Gram - 37 5 3 17 44,7
Bastonetes Gram + 10 2 nd 10 13,7
Cocos Gram - 1 nd 1 Nd 1,2
Cocos Gram + nd nd nd 1 0,6
Cocobacilos Gram + 1 2 nd 1 2,5
Cocobacilos Gram - 7 5 3 9 14,9
Culturas mistas 16 nd nd 15 19,3
Esporos nd 1 nd 4 3,1
Total 72 15 7 57 100,0

A Tabela 10 corresponde a identificao de estirpes que foram isoladas das


amostras de gua dos quatro manguezais estudados. O maior nmero de estirpes
identificadas foi da espcie Chryseomonas luteola (13) e espcies da famlia
Enterobacteriaceae (11). Os manguezais 1 e 4 apresentaram a maior riqueza de espcies
entre as bactrias cultivveis.
Nas amostras de sedimento, o maior nmero de estirpes isoladas tambm
pertencia famlia das Enterobacteriaceae (Tabela 11). Nessas amostras, o maior
nmero de diferentes espcies foi isolado das amostras vindas do ambiente Mangue 4.
Resultados 53

Tabela 10 Identificao das estirpes isoladas nas amostras de gua de reas de


manguezal no Estado do Cear (Brasil)
Identificao Mangue 1* Mangue 2 Mangue 3 Mangue 4
Acinetobacter
baumannii/calcoaceticus 2 2
Aeromonas sp. 3 2
Agrobacterium radiobacter 1
Brevundimonas vesicularis 1
Burkholderia cepacia 3 3
Chryseomonas luteola 11 1 1
Chryseomonas luteola (55,2%)
Aeromonas hydrophila/caviae(30,7%) 2
Chryseomonas luteola (55,3%)
Aeromonas hydrophila/caviae (44,1%) 1 1
Enterobacteriaceae 9 2
Flavobacterium-Cytophaga sp 1
Ochrobactrum anthropi 1
Photobacterium sp 2
Pseudomonas paucimobilis
Ps. vesiculares 2
Grupo II K-1
Pseudomonas vesiculares
Pseudomonas extorquens
Grupo IV C-2 1
Grupo IV e
Vibrio / Aeromonas 2
Total de isolados 26 6 3 13
* manguezal sem atividade de carcinicultura controle negativo
Resultados 54

Tabela 11 Identificao das estirpes isoladas nas amostras de sedimento de reas de


manguezal com presena da atividade de carcinicultura (Cear, Brasil)
Identificao Mangue 1* Mangue 2 Mangue 3 Mangue 4
Acinetobacter spp. 2
Aeromonas spp. 2
Burkholderia cepacia 2
Chryseomonas luteola 1 1
Enterobacteriaceae 4 2 6
Moraxella spp. 1
Photobacterium spp. 1
Pseudomonas aeruginosa (61,0%) 2
Pseudomonas vesiculares
Pseudomonas extorquens
Grupo IV C-2 1
Grupo IV e
Vibrio spp. 2 2
Total de isolados 8 7 2 11
manguezal sem atividade de carcinicultura controle negativo

Os ndices de diversidade fenotpica da amostras de gua e sedimento esto


dispostos na Tabela 12. Uma maior diversidade foi observada nas amostras de gua do
ambiente M4. Entre as amostras de sedimento, os ambientes M2 e M4 apresentaram
ndices de diversidade similares.
Resultados 55

Tabela 12 ndice de diversidade fenotpica das amostras de gua e sedimento de reas


de manguezal no Estado do Cear (Brasil)
Amostras
Ambientes H*
M1 2,583
M2 1,918
gua
M3 -
M4 2,873

M1 1,5
M2 1,95
Sedimento
M3 1
M4 1,959
* ndice de Shannon [H = -pi log 2 pi]

Tambm foram isoladas e identificadas, fenotipicamente, estirpes da rizosfera


das plantas de mangue predominantes (Rizophorae mangle e/ou Avicennia schaueriana)
coletadas nos ambientes de manguezal estudados. Foram identificadas 17 estirpes
bacterianas sendo 5 do Mangue 1; 2 do Mangue 2; 2 do Mangue 3 e 7 do Mangue 4.
Nas amostras da rizosfera de R. mangue foram identificadas bactrias da famlia
Enterobacteriaceae (3), dos gneros Aeromonas(1), Pseudomonas(1), Vibrio(1) e
Xanthomonas(2), e espcie do grupo Flavobacterium-Cytophaga(2). Nas mostras de
plantas Av. schaueriana foram identificadas bactrias dos gneros Aeromonas(3),
Pseudomonas(2), Vibrio(1) e da famlia Enterobacteriaceae(1).
Resultados 56

6.2.3 Contagem de Fungos e Leveduras Totais

Os logaritmos dos valores de fungos das contagens realizadas nas amostras


ambientais da segunda etapa esto apresentados na Tabela 13. As contagens nas
amostras de gua foram maiores no Mangue 1. O mesmo no foi observado nas
amostras de sedimento e rizosfera cujas contagens permaneceram bem prximas. Entre
as amostras de rizosfera de plantas diferentes no Ponto 5 do Mangue 1, as contagens
obtidas das espcimes jovens de mangue Av. schaueriana foram maiores (ANOVA,
p<0,05) aproximadamente um ciclo logartmico.

Tabela 13 Mdia e desvio padro do logaritmo das contagens padro em placas do nmero
de fungos totais nas amostras de gua, sedimento e rizosfera das espcies Rhizophora mangle
e Avicennia schaueriana em reas de manguezal na regio nordeste (Cear, Brasil / 2004)

Mangue 1 Mangue 4
gua Sedimento Rizosfera gua Sedimento Rizosfera
Rm
Ponto 1 6,290,05 6,230,04 4,380,09 3,710,09 6,380,03 4,360,27Rm
Ponto 2 5,920,00 4,650,02 5,280,06Rm 3,490,02 6,300,11 6,880,01Rm
Ponto 3 5,840,08 4,590,16 4,810,03Rm 3,480,01 4,990,04 5,200,07Rm
Ponto 4 5,680,00 4,840,09 6,180,02Rm 4,570,15 3,770,25 6,000,03Rm
Ponto 5 4,770,10 6,080,00 4,820,03Rm 5,600,08As 4,280,11 3,990,12 5,810,09Rm
Rm
Rhizophora mangle; AsAvicennia schaueriana

6.2.4 Estimativa do nmero Vibrio spp.

Na tabela 14 esto os nmeros estimados de vbrios nas amostras gua e


sedimento nas reas de manguezal estudadas e em 3 pontos dentro de uma fazenda de
carcinicultura que so: canal de abastecimento, viveiro e canal de descarga. Nas
amostras de gua do Mangue 2, 3 e 4 onde a atividade de carcinicultura est presente o
logaritmo do NMP de Vibrio spp. por mL variou de 3,62 a 5,04. Nas amostras de
sedimento esses valores variaram de 2,36 a 5,04. As amostras do Mangue 1, onde a
atividade de carcinicultura no exercida, os valores de NMP/mL de Vibrio spp. para as
Resultados 57

amostras de gua variaram de 7,5 x 102 a 1,1 x 105 e nas amostras de sedimento os
valores estimados por grama foram 1,1 x 103 e 1,1 x 107, nos dois pontos. Foram
coletadas amostras dentro de uma fazenda localizada no Mangue 4. Os valores obtidos
por estimativa nas amostras de gua e sedimento foram: 1,5x105 NMP/100mL e 1,1 x
105 NMP/g, 2,4 x 106 NMP/100mL e 4,6 x 106 NMP/100mL e 1,1 x 105 NMP/g para
canal de abastecimento, viveiro e canal de descarga, respectivamente.

Tabela 14 Estimativa do nmero de Vibrio nas amostras de gua e sedimento


coletados em reas de manguezal (CE, Brasil)

Amostras Parmetros ambientais


Local Ponto gua Sedimento Temperatura Salinidade
o
(NMP/mL) (NMP/g) C
Mangue 1 P1 5,04 3,04 30,0 35,0
P2 2,88 7,04 30,0 34,0

Mangue 2 P1 3,97 3,54 28,0 37,0


P2 5,04 2,36 29,0 37,0

Mangue 3 P1 5,00 5,04 25,0 nd

Mangue 4 P1 5,04 5,04 26,0 nd


P2 3,62 2,36 26,0 nd

Canal de
25,0 nd
abastecimento 5,18 5,04
Viveiro 6,38 25,0 7,0
Canal de descarga 6,66 5,18 25,0 1,0
* no foi coletado; nd, abaixo da capacidade de deteco do equipamento utilizado

6.2.4.1 Identificao das estirpes de Vibrio

No total foram isoladas 181 estirpes crescidas sobre meio agar TCBS, seletivo
para vbrios. Desse total, foram caracterizadas fenotipicamente 163 atravs de provas
bioqumicas e morfolgicas. Na tabela 14 so apresentados as espcies isoladas e o
nmero de isolados em cada ponto amostrado nas quatro reas de manguezal do litoral
cearense. A riqueza do nmero de espcies das estirpes isoladas a partir das placas de
TCBS mostrada na Tabela 15. O maior nmero de estirpes isoladas e identificadas
Resultados 58

aconteceu na amostra de gua do Mangue 2 /Ponto 1. A maior riqueza em nmero de


diferentes espcies isoladas tambm foi registrada nesse ponto que fica na barra do rio
Chor e portanto, sob a influncia direta das guas ocenicas. A identificao das
espcies de Vibrio cultivveis mostrou uma maior riqueza em nmero de espcies nas
amostras de gua do que naquelas de sedimento. Em 3 das reas de manguezal foram
isoladas estirpes de Vibrio cholerae no toxignicas. O V. parahaemolyticus que tambm
um importante patgeno humano foi isolado em duas das reas amostradas.

Tabela 15 Identificao* das estirpes de Vbrio isoladas das amostras de gua e


sedimento nos quatro manguezais estudados (CE, Brasil)
Mangue 1(controle) Mangue 2 Mangue 3 Mangue 4
Espcies Ponto 1 Ponto 2 Ponto 1 Ponto 2 Ponto 1 Ponto 1 Ponto 2
A S A S A S A S A S A S A S
Vibrio spp. 6 4 15 4 4 4 2 4 3 2 1 1
V. parahaemolyticus 1 8 2 3
V. fluvialis 4 1 1 1 2 1 1
V. cholerae no O1 2 3 2 1 1 1
e no O139
V. aestuarinus 3 2 1 2
V. damselae 1 1 3 1
V. campbelli 1 1 1 1 1
V. costicola 2 1 1 1
V. ordalii 4 1
V. gazogenes 1 3 1
V. metschinikovii 1 1 1 1
V. anguillarum 3 1
V. mimicus 1 2
V. splendidus 1 1
V. harveyii 1 1
V. alginolyticus 1
V. vulnificus 1
V. diazotrophicus 1
V. fisheri 1
Total de isolados 18 5 22 7 26 6 16 9 9 4 7 6 1 2
A: amostra de gua; S: amostra de sedimento
* identificao da estirpe considerada positiva com 80% de similaridade fenotpica
Resultados 59

A diversidade fenotpica das espcies de Vibrio, baseada na identificao das


estirpes cultivadas, est disposta na Tabela 16. Pode-se observar que o maior ndice de
diversidade foi mostrado pelo ambiente M2P1, mais influenciado pelas guas ocenicas.
Entre as amostras de sedimento, a maior diversidade de espcies de Vibrio cultivveis
ocorreu no ponto 2 do ambiente M2. O Mangue 4 e Mangue 3 apresentaram os menores
ndices de diversidade entre as amostras de gua e sedimento, respectivamente.

Tabela 16 ndice de diversidade fenotpica de espcies do gnero Vibrio nas amostras


de gua e sedimento de reas de manguezal no Estado do Cear (Brasil)

Amostras Ambientes H
M1P1 2,489
M1P2 1,705
M2P1 2,902
gua M2P2 2,656
M3P1 2,059
M4P1 1,842
M4P2 -

M1P1 0,722
M1P2 1,664
M2P1 2,252
Sedimento M2P2 2,419
M3P1 0,811
M4P1 2,252
M4P2 1
* ndice de Shannon [H = -pi log 2 pi]

Na Figura 8 est apresentado o nmero de diferentes espcies isoladas. Os


ambientes M1 e M2 apresentaram o maior nmero de diferentes espcies cultivveis de
vbrios.
De modo geral, um maior nmero de espcies foi recuperado das amostras de
gua do que do sedimento. A menor diversidade foi observada no Mangue 4 onde
existem registros de fazendas de carcinicultura pelo menos h 20 anos.
Resultados 60

gua
12
Sedimento
10
N de espcies de Vibrio

8
identificadas

0
Ponto 1 Ponto 2 Ponto 1 Ponto 2 Ponto 1 Ponto 1 Ponto 2

Mangue 1 (controle) Mangue 2 Mangue 3 Mangue 4


Locais de Coleta

Figura 8 Riqueza de espcies de Vibrio isolados e identificados nas quatro reas de


manguezal estudadas (Cear, Brasil)

A riqueza e nmero de vbrios isolados e identificados a partir das amostras


feitas em trs pontos dentro de uma fazenda de camaro so apresentados na Tabela 17.
O maior nmero de isolados bem como o maior nmero de espcies distintas foram
detectados nas amostras de gua do viveiro de camaro (veja tambm Figura 9).
Resultados 61

Tabela 17 Identificao* das espcies de Vbrio isoladas das amostras de gua e


sedimento de trs diferentes pontos (canal de abastecimento, viveiro e canal de
descarga) de uma fazenda de camaro localizada em rea de manguezal no Rio
Jaguaribe (Aracati, Cear, Brasil).
Canal de
Espcies abastecimento Viveiro Canal de descarga
gua sedimento gua gua sedimento
Vibrio spp. 3 1 2
V. cholerae no O1 e no O139 1
V. campbelli 1 3
V. fluvialis 1
V. costicola 1
V. damselae 1 1
V. harveyii 1
V. parahaemolyticus 1 1
V. vulnificus 1
V. splendidus 1
V. cincinnatiensis 1 1 2 1
Total de isolados 4 3 9 7 2
* identificao da estirpe considerada positiva com 80% de similaridade fenotpica

Nos ambientes dentro da fazenda de cultivo de camaro, a maior diversidade na


gua foi observada dentro do viveiro de cultivo. No sedimento dos dois canais, o ndice
de diversidade de espcies de Vibrio foi um pouco maior na descarga do que no canal de
abastecimento (Tabela 18).

Tabela 18 ndice de diversidade fenotpica das amostras de gua e sedimento em


locais dentro de uma fazenda de cultivo de camares no Estado do Cear (Brasil)

Amostras Ambientes H
CA 0,811
gua VV 2,948
CD 1

CA 1,585
Sedimento
CD 1,842
* ndice de Shannon [H = -pi log 2 pi]; CA: canal de abastecimento; VV: viveiro;
CD: canal de descarga
Resultados 62

Nmero de espcies de Vibrio identificados


gua
9 sedimento
8
7
6
5
4
3
2
1
0
Canal de Viveiro Canal de
captao descarga
Pontos de coleta na fazenda de carcinicultura

Figura 9 Nmero de espcies de Vibrio isolados e identificados em trs pontos dentro


de uma fazenda de cultivo de camaro marinho (Cear, Brasil)
Resultados 63

6.3 Anlise das amostras de gua atravs de tcnicas moleculares


Os amplicons obtidos com o PCR do DNA total, extrado das amostras de gua,
dos manguezais estudados, foram analisados em gis de poliacrilamida com gradiente de
desnaturao. A Figura 10 apresenta o gel de DGGE obtido com amplicons utilizando
iniciadores universais da regio 16S rDNA. Foram corridas duas rplicas de cada
amostra. Na imagem do gel nota-se que existe um perfil de bandas dominantes na parte
inferior do gel comum a todos os ambientes. Nota-se tambm pouca variao entre os
perfis dos ambientes receptores dos efluentes de carcinicultura e o Mangue 1 que o
controle do estudo.
Resultados 64

Figura 10 Perfis de DGGE dos fragmentos de 16S rDNA obtidos das amostras de
gua de quatro reas de manguezal e de trs pontos dentro de uma fazenda de
carcinicultura (Cear, Brasil). Linhas: CD, canal de descarga; VV, viveiro; CA, canal de
abastecimento; M4, Mangue 4; M3; Mangue 3; M2, Mangue 2; M1, Mangue 1. As
letras a e b indicam as rplicas de uma mesma amostra.
Resultados 65

Percebe-se tambm presena ou no de bandas nos perfis bem como as mesmas


bandas com diferentes intensidades o que representaria a abundncia filogentica dos
grupos.
Os perfis obtidos no gel com amplicons obtidos a partir de iniciadores
especficos para o gnero Vibrio so mostrados na Figura 11. A imagem do gel de
DGGE mostra a existncia de um perfil de bandas, similar ao gel anterior, na parte
inferior o que caracteriza populaes com alto teor de GC.

Figura 11 Perfis de DGGE da comunidade de vbrios nas amostras de gua de quatro


reas de manguezal e de trs pontos dentro de uma fazenda de carcinicultura (Cear,
Brasil). Linhas: CD, canal de descarga; VV, viveiro; CA, canal de abastecimento; M4,
Mangue 4; M3; Mangue 3; M2, Mangue 2; M1, Mangue 1. As letras a e b indicam as
rplicas de uma mesma amostra.
Resultados 66

A partir dos perfis de bandas dos gis de DGGE foram elaborados dendrogramas
para cada um dos perfis. Na Figura 12a esto os ndices de similaridade dos perfis de
16S rDNA entre as amostras de gua dos manguezais e nos pontos dentro da fazenda de
cultivo de camaro. Os perfis dos mangues receptores de efluentes agruparam com
similaridade mnima em torno de 60%.
A Figura 12b diz respeito ao dendrograma mostrando o perfil de similaridade
entre as amostras de gua de diferentes ambientes baseado no perfil de DGGE dos
amplicons obtidos com iniciadores especficos para o gnero Vibrio. Nota-se uma
variao dos perfis de comunidade bacteriana entre as rplicas do ponto 2 no Mangue 4
(M4P2) que ficou em torno de 75%. Nos pontos amostrados dentro da fazenda de
cultivo, os ambientes viveiro (VV) e canal de descarga (CD) apresentaram similaridade
em torno de 48%, enquanto que o efluente do canal de abastecimento (CA) da fazenda,
que capta gua diretamente do rio, mostrou pouca similaridade com esses dois outros
pontos. A amostra CA agrupou com Mangue 4 no ponto 2, que o ponto prximo
fazenda. Existiu uma estabilidade entre as rplicas, a menor similaridade encontrada foi
no Ponto 2 do Mangue 4 (M4-P2) que ficou em torno de 80%. As amostras do Mangue
4 mostraram similaridade abaixo de 50% em relao aos outros manguezais.
A maioria das amostras com maior contato com as guas ocenicas (M2P1,
M3P1 e M4P1) agruparam, juntamente com as amostras VV, com similaridade de 55%.
Entre as rplicas a menor similaridade foi apresentada nas amostras CA, CD e M4-P2.
Resultados 67

Figura 12 Perfil de similaridade da comunidade bacteriana total (a), e da comunidade


de vbrios (b) baseado na presena e ausncia de bandas no gel de DGGE das amostras
de gua de um manguezal controle (M1); manguezais receptores de efluentes de
carcinicultura (M2, M3 e M4) e de trs pontos dentro de uma fazenda de carcinicultura
(CD, VV e CA) (Cear, Brasil).

A mdia do nmero de bandas nos gis de DGGE obtidas dos produtos de


amplificao do DNA total das amostras de gua est na Tabela 19. De acordo com os
ambientes amostrados e os iniciadores utilizados esses valores variaram de 7 a 24
(iniciadores universais) e 10 a 16 (iniciadores do gnero Vibrio). Foi possvel perceber o
maior nmero de bandas na amostra M4P2, que corresponde ao rio Jaguaribe, e na
amostra M3P1 (rio Pirang). A mdia do nmero de bandas na amostra do Mangue 4, no
gel com iniciadores universais, no foi significativamente diferente do ambiente
Resultados 68

controle (Mangue 1) (ANOVA, p>0,05). As outras amostras no apresentaram diferena


mostraram mais nem menos bandas que o controle.
No gel de DGGE onde os amplicons foram obtidos com iniciadores especficos
para o gnero Vibrio, o nmero de bandas entre as amostras se mostrou mais
homogneo, com o maior nmero de bandas sendo visualizado na amostra M4P2. J o
maior nmero de espcies obtidas a partir de isolamentos em placas de meio TCBS foi
conseguido na amostra M2P1.

Tabela 19- Comparao entre o nmero de bandas, nos gis de DGGE, obtidos com os
amplicons das amostras de gua de ambientes de manguezal e de fazenda de camaro e
o nmero de espcies isoladas dessas amostras ambientais.
Nmero de
Nmero de Bandas no Gel
espcies
(mdia)
Amostras isoladas
iniciadores
16S rDNA Vibrios
Vibrios
CD 19 13 5
VV 19 12 8
CA 7 10 2
M4 P1 12 12 4
M4 P2 24 16 1
M3 P1 17 10 5
M2 P1 8 12 11
M2 P2 18 11 7
M1 P1 23 10 8
M1 P2 17 11 8
CD: canal de descarga; VV: viveiro; CA: canal de abastecimento
Discusso 69

7 DISCUSSO

A demanda global nos pases desenvolvidos vem gerando um forte incentivo


econmico para o cultivo de camares em cativeiro. Nos ltimos anos, os efeitos
ambientais adversos resultantes dessa expanso descontrolada de fazendas de camaro
em extensas reas de regies tropicais e sub-tropicais vm gerando preocupao e
esforos globais visando o desenvolvimento de tcnicas para uma prtica sustentvel
dessa atividade.
Uma das preocupaes cruciais diz respeito ao efeito do lanamento direto de
efluentes dos viveiros de camaro, contendo concentraes elevadas de slidos
suspensos e nutrientes, no ambiente de manguezal. guas costeiras e estuarinas
recebem descargas de nutrientes de uma variedade de fontes naturais e antropognicas.
As caractersticas das descargas da carcinicultura so qualitativamente diferentes das
outras principais fontes poluidoras. Os nutrientes originados nas fazendas de
carcinicultura so derivados de raes base de protena de pescado e juntamente com
as partculas que ficam suspensas na coluna dgua produzidas pela eroso que acontece
nos viveiros, so lanados no ambiente. A gua residual dos cultivos tambm apresenta
altas concentraes de partculas inorgnicas, fitoplncton, compostos orgnicos
dissolvidos e particulados alm da presena de amnia (Jackson et al., 2003). guas
residuais de esgoto domstico tm uma alta proporo de amnia e nitrato, mas baixas
concentraes de fitoplncton, nutrientes particulados e partculas inorgnicas enquanto
que os efluentes gerados na agricultura so compostos principalmente por fertilizadores
e solo e possuem altas concentraes de nutrientes particulados, nitrato e partculas
inorgnicas suspensas (Jones et al., 2001; Eyre, 1993).
Os efeitos dos efluentes das fazendas de camaro sobre a biodiversidade no so
conhecidos. O elevado aporte de nutrientes antropognicos foi relacionado reduo na
diversidade de espcies do fitoplncton e desenvolvimento de eventos de blooms de
algas com conseqncias negativas para o equilbrio ecolgico dos ecossistemas
costeiros (Alonso-Rodrguez e Paez-Osuna, 2003).
Discusso 70

importante o estabelecimento de tcnicas eficientes que permitam diagnosticar


e monitorar os efeitos desse tipo caracterstico de efluente sobre o ecossistema de
manguezal, que ao mesmo tempo em que o fornecedor da gua para as fazendas
tambm o receptor final dos descartes desses cultivos. Esse trabalho tentou estabelecer
o impacto sobre a microbiota de ambientes aquticos, receptores de efluentes de
fazendas de camaro no litoral do Estado do Cear. O estudo foi realizado em quatro
esturios com um sendo o controle negativo da atividade e os outros trs com um
histrico gradativo de estabelecimento das fazendas. Alm dos parmetros fsico-
qumicos da gua e sedimento foram determinadas as abundncias das populaes de
Bactrias Heterotrficas Totais, Coliformes Fecais e Vbrios.
As caractersticas fsicas, qumicas, geolgicas e biolgicas de um habitat so
refletidas na composio das comunidades microbianas. Informaes sobre
determinados membros de uma comunidade juntamente com abordagens ecolgicas
podem ser utilizados para o desenvolvimento de hipteses sobre os processos
biogeoqumicos que ocorrem em um dado habitat (Atlas e Bartha, 1998). Nesta
pesquisa, as temperaturas mdias registradas nas guas dos rios Pacoti (Mangue 1,
controle negativo), Chor (Mangue 2), Pirang (Mangue 3) e Jaguaribe (Mangue 4)
foram maiores naqueles pontos mais dentro do rio e afastados das guas ocenicas. O
mesmo perfil decrescente, afastando-se da costa, foi observado para os ndices de
salinidade. Esse fato somente foi exceo no Ponto 2 do Mangue 3. Essa ocorrncia
pode ser explicada pela proximidade do canal de escoamento de uma das fazendas
instaladas prximo a esse ponto. Geralmente os efluentes dos viveiros apresentam uma
salinidade em torno de 35.
Outro parmetro importante, o pH das guas variou muito pouco entre os
manguezais e entre os pontos dentro de cada rea. Alguns trabalhos (Allan e Maguire,
1993; Hopkins et al. 1993; Shireman e Cichra, 1994) relatam valores de pH que foram
significativamente maiores em viveiros de camaro do que em guas de captao,
nenhum estudo foi capaz de esclarecer a relao dessas mudanas com a densidade de
cultivo, trocas de gua ou utilizao de aeradores nos tanques.
Abraham et al. (2004) encontraram a temperatura, pH e salinidade nas guas de
abastecimento e descarte de fazendas de camaro controladas por fatores ambientais
Discusso 71

como radiao solar, temperatura relativa do ar e chuvas. Enquanto os dois primeiros


fatores promovem o aquecimento da gua durante o dia, provocando a evaporao e um
aumento nos valores da salinidade, as precipitaes pluviomtricas reduzem
temperatura, pH e salinidade na gua. Jeong et al. (2005) comparando registros de
bactrias indicadoras de contaminao fecal (coliformes fecais e enterococos) com
registros simultneos de fluxo de mar, temperatura e salinidade, concluram que as
galerias pluviais figuram como uma fonte primria de bactrias fecais na coluna dgua
e sedimento subtidal.
Durante a primeira expedio, essas variaes na salinidade se refletiram nas
contagens de coliformes dos Mangues 3 e 4 que apresentaram menores nveis de
contaminao por CF (r=0,371, r=0,663, respectivamente). O mesmo efeito foi
verificado para as variaes de temperatura durante as coletas, os dois manguezais com
os menores nveis de contaminao (Mangue 3 e Mangue 4) por esgoto domstico
apresentaram correlao positiva com as temperaturas registradas (r=0,646, r=0,460,
respectivamente). Nos dois outros ambientes, Mangue 1 e Mangue 2, as contagens de
CF apresentaram correlao negativa com a salinidade e a temperatura.
No segundo grupo de dados coletados com intervalo de um ano, os nveis de CF
nos Mangues 1 e 4 estavam positivamente correlacionados com a salinidade . Dentro
dos cinco pontos nos dois ambientes amostrados a temperatura da gua esteve
inversamente relacionada ao nmero de coliformes obtidos nos mangues, com exceo
do Mangue 4 onde houve uma correlao direta entre o parmetro e o nmero de CF. A
distribuio de CF mostrou uma tendncia a um padro decrescente notada nos pontos
mais afastados do mar.
As salinidades extremamente baixas registradas na segunda expedio
provavelmente ocorreram devido ao aporte de um volume grande de guas pluviais na
bacia do rio Jaguaribe (Mangue 4) que teve o efeito de diluio da gua marinha e
portanto, reduzindo drasticamente a salinidade dentro da rea de manguezal. A variao
na salinidade em habitats de manguezal, como uma funo da ao das mars e descarte
de efluentes, j foi anteriormente relatada (Al-Sayed et al., 2005). Esses mesmos autores
concluram que a interao de esgoto domstico, gua de irrigao das fazendas e a
gua do mar, coletivamente, determinam a abundncia e distribuio das comunidades
bacterianas tanto quanto afetam a qualidade da gua dentro do manguezal. A troca livre
Discusso 72

de gua da rea de mangue com as reas costeiras adjacentes, que est relacionada com
a natureza hidrodinmica do manguezal, exporta as guas do manguezal eutrofizadas e
ricas em nutrientes aumentando a produtividade costeira e dispersando as bactrias
patognicas em reas mais amplas. Tambm parece que a atividade de outros
microrganismos alm de alguns fatores ambientais tal como salinidade e pH, limitam a
abundncia e distribuio de algumas comunidades aliengenas como o caso de
coliformes fecais. Wu (1993) encontrou microrganismos nativos, como actinomicetos,
isolados de floresta de mangue na Tailndia produzindo antibiticos que controlavam a
ocorrncia de bactrias aliengenas como os coliformes fecais, indicando que os
manguezais possuem muitos tipos de microrganismos que podem funcionar como
agentes de limpeza do descartes de esgotos lanados nesses ambientes.
Comparativamente, a presena de CF nas amostras de sedimento foi bem maior
do que na gua do rio. A capacidade de agregao e multiplicao de bactrias do grupo
coliforme em partculas de sedimento j foi anteriormente citado (Anderson et al.,
2005). As caractersticas granulomtricas do sedimento tambm parecem ter influncia
sobre a ocorrncia desse fenmeno.
A multiplicao de estirpes de bactrias fecais indicadoras (coliformes fecais e
enterococos) ambientalmente adaptadas foi apresentada por Jeong et al. (2005) como
uma fonte no pontual de poluio da coluna dgua em uma baa no sudeste da
Califrnia.
Al-Sayed et al. (2005) mostraram uma correlao positiva entre as altas
concentraes de E.coli nas guas e no sedimento em um manguezal de uma regio
subtropical. Os ciclos das mars tambm mostraram influenciar os nveis de E. coli.
Essa influncia explicada porque durante a mar alta o sedimento anteriormente
drenado lavado pelas guas do rio. Experimentos em laboratrio confirmaram que
essa bactria fecal capaz de se multiplicar em vrias ordens de magnitude agregada ao
sedimento drenado. Os autores sugeriram a necessidade de utilizao de outras bactrias
como indicadoras de poluio fecal caso seja confirmada, atravs de pesquisas, a
influncia dos perodos de alternncia do contato do solo com a gua e das propriedades
granulomtricas desse solo sobre a capacidade de multiplicao da E. coli em ambientes
que sofrem ao das mars.
Discusso 73

Nota-se que o Mangue 1, utilizado neste estudo como controle negativo para a
existncia de atividade de carcinicultura, apresentou ndice de contaminao por esgoto
domstico significativamente maior que os Mangues 3 e 4. O rio Pacoti uma rea de
preservao permanente mas devido ao fato do seu curso estar dentro da cidade de
Fortaleza, ele acaba sendo o destino final de uma quantidade considervel de esgoto
domstico no tratado. A presena de moradias irregulares e sem infra-estrutura ao
longo do rio explica esses valores elevados de contaminao fecal.
Foi estabelecido por Alongi et al. (1993) que a magnitude de matria orgnica
exportada das reas de mangue para os oceanos pode depender de processos geofsicos.
provvel ento que o tamanho do ecossistema manguezal, a freqncia e durao das
mars, a freqncia de volume de chuvas e o influxo de efluentes tambm influenciem a
diversidade e abundncia das populaes microbianas presentes nessas reas.
A contagem de microrganismos heterotrficos tambm pode indicar o nvel de
degradao do ambiente aqutico, uma vez que esses organismos so freqentemente
associados com matria orgnica (Callisto et al., 2004). difcil estabelecer uma
diversidade microbiana estuarina por causa da dinmica nesses ambientes e a
dificuldade de distinguir populaes estuarinas e aquelas que so carreadas das reas
adjacentes. Vrios estudos descreveram a diversidade microbiana nos esturios e alguns
demonstraram como as comunidades de gua doce e marinha se misturam ao longo dos
gradientes estuarinos. Entretanto, existem poucos trabalhos que forneam evidncias de
uma comunidade bacterioplanctonica estuarina nica (Crump et al., 2004).
Nas contagens de heterotrficos totais nas amostras de sedimento tambm foram
verificados nmeros mais elevados nos manguezais Mangue 1 e Mangue 2.
As contagens de BHT nas amostras do Mangue 4 foram uma ordem de grandeza
maior que as contagens em amostras de gua no Mangue 1. Os nmeros mdios das
contagens de bactrias heterotrficas foram bem prximos entre os quatro manguezais
no primeiro momento das coletas. Um ano depois, os as contagens bacterianas na gua
do Mangue 1 foram maiores que aquelas do Mangue 4.
Acredita-se que vrios fatores biticos e abiticos podem agir conjuntamente
estruturando as comunidades fitoplanctonicas em sucesses sazonais. As alteraes nos
fatores abiticos tal como regime de luz, temperatura e/ou outro distrbio fsico
determinariam os limites dentro dos quais os fatores abiticos (como competio,
Discusso 74

predao e infeco) podem regular a resposta de diferentes populaes (Pinhassi e


Berman, 2003). Polymenakou et al. (2005) detectaram uma mudana na composio da
comunidade de bacterioplancton em salinidades prximas a 1 ppm. Anteriormente j
havia sido sugerido que a maioria das bactrias de gua doce no podem sobreviver em
concentraes elevadas de sal.
A determinao da contagem de heterotrficos usualmente utilizada como um
indicador para avaliar a qualidade microbiana normal em guas potveis. Contudo, os
dados qualitativos sobre a composio da comunidade bacteriana determinada por
contagem de heterotrficos totais e ou a dinmica da populao tem sido restabelecidos
para situaes especficas (Norton e LeChevallier, 2000).
A caracterstica unificante das bactrias em CH sua capacidade geral de
crescimento (e formao de colnias visveis) sobre compostos orgnicos com grau de
facilidade varivel para degradao sob condies especificas de temperatura e tempo
de incubao (Reasoner, 1990). Considerando essa composio heterognea das
comunidades das CH em um aspecto qualitativo, poderia ser questionado que diferentes
populaes das CH apresentam potencialmente diferentes valores de indicao para uma
mesma situao. Alm dessa caracterstica fisiolgica unificante como referido
anteriormente, as bactrias heterotrficas podem ocupar diferentes nichos ecolgicos
multidimensionais (Begon et al., 1996). Por exemplo, as comunidades presentes nas CH
podem mostrar um carter mais autctone ou alctone (Towner e Cockayne, 1995).
Nas amostras de sedimento e rizosfera no aconteceu uma variao significativa
nos valores encontrados nas contagens de hetrotrficos totais, ficando as mdias bem
prximas s contagens anteriores nos dois manguezais. Nos pontos de amostra onde
foram encontradas plantas das duas espcies R. mangle e A. schaueriana, dominantes na
rea de franja dos manguezais, as contagens de BHT foram prximas entre as duas
espcies. A capacidade que as plantas de mangue possuem de oxigenar o solo da
rizosfera e dessa forma melhorar o efeito do sulfeto de hidrognio no solo j foram
descritos anteriormente (Bashan e Holguin, 2002; Marchand et al., 2004). Existe ento
uma possibilidade de que essas mudanas favoream a proliferao de grupos
especficos de bactrias nessas reas.
As comunidades estabelecidas pela CH no constituem um termo definido
taxonomicamente, porm normalmente consistem mais precisamente de uma mistura
Discusso 75

heterognea de diferentes taxa bacterianos (Farnleitnera et al., 2004; Norton e


LeChevallier, 2000).
As bactrias da rizosfera (rizobactrias) so habitantes da rea de solo
influenciada pelas razes das plantas. A rizosfera dinmica: sua extenso e
propriedades so influenciadas pelas propriedades fsicas e qumicas do solo, mudanas
induzidas por tempo e plantas no contedo de gua no solo, a composio e densidade
das populaes microbianas, e as atividades metablicas das plantas e microrganismos.
O solo da rizosfera uma zona de grande atividade com uma densidade de populao
bacteriana 10 200 vezes maior que o solo adjacente (Miller e Wood, 1996). Nas
amostras do ambiente manguezal essa relao entre as contagens no foi observada. Isso
poderia ser devido a constante lavagem do sedimento e parte da rizosfera pelas mars
como tambm pelas limitaes do meio de cultura.
Essa relao entre os nmeros de bactrias nas amostras de gua e sedimento
tambm pode ser verificada na maioria das contagens de BHT (Tabela 5). Em mais de
70% das amostras de gua, as contagens de bactrias totais foram menores que aquelas
dos sedimentos correspondentes.
Apesar dos efeitos dos efluentes das fazendas de camaro sobre a qualidade e
processos na coluna da gua dos ambientes receptores, no existem efeitos bvios sobre
os processos no sedimento desses ambientes. Isso surpreendente em vistas da elevada
taxa de sedimentao que pode produzir condies anxicas, e ainda mais o aumento
das taxas de fosfato e amnia. Uma possvel explicao para esse fato seria a constante
ressuspenso e movimento das partculas e pela ao de lavagem das mars como
tambm os episdios de chuvas na rea.
Segundo Islam (2005), o primeiro efeito dos resduos de aquacultura sobre o
ambiente inicia com o enriquecimento orgnico do ecossistema e um dos primeiros
efeitos desse enriquecimento um aumento no consumo de oxignio pelos organismos
heterotrficos no sedimento. As principais mudanas na qumica do sedimento
acontecem quando esse sedimento torna-se anxico, isto a demanda por oxignio
torna-se maior que o fornecimento. Na ausncia de oxignio, os processos aerbios
predominam e o sedimento torna-se um ambiente redutor. Os processos anaerbios
resultam na produo de compostos reduzidos como amnia,e hidrognio e metano que,
se for produzido em quantidade suficiente pode ser liberado do sedimento. Alteraes
Discusso 76

na qumica dos sedimentos ocorreram em locais prximos aos cultivos. Karakassi et al.
(2000) relataram que a alterao na qumica do solo ocorreu em locais prximos s
fazendas de aquacultura. A biomassa microbiana no sedimento nessas reas aumentou
em uma ordem de magnitude.
As comunidades estabelecidas pela CH no constituem um termo definido
taxonomicamente, porm normalmente consistem mais precisamente de uma mistura
heterognea de diferentes taxa bacterianos (Norton e LeChevallier, 2000). A
caracterstica unificante das bactrias em CH sua capacidade geral de crescimento (e
formao de colnias visveis) sobre compostos orgnicos com facilidade varivel para
degradao sob condies especificas de temperatura e tempo de incubao (Szewzyk et
al., 2000).
A contagem de heterotrficos totais nos sedimentos pareceu no sofrer
influncia das caractersticas granulomtricas. O mangue 4, receptor de efluentes de
carcinicultura, apresentou contagens mdias em torno de 1 ciclo logartmico maior do
que o Mangue 1, controle negativo da presena dessa atividade. A posio do ponto de
coleta no manguezal, mais prximo (Ponto 1) ou mais afastado (Ponto 2) do mar, parece
no ter influenciado os resultados das contagens. A comunidade de bactrias
heterotrficas em esturios bastante diversa. Segundo Bano et al. (1997), essa
comunidade rica em energia e bastante ativa se apresentando agregada a partculas e
/ou na forma de vida livre.
A presena de fungos e leveduras totais na coluna dgua, agregadas ao
sedimento e nas rizosferas foi determinada atravs de contagens em placa. O valor
mdio das contagens de fungos no manguezal controle (Mangue 1) foi cerca de duas
ordens de magnitude maior do que nas guas do rio Jaguaribe (Mangue 4). Isso poderia
ser um reflexo da temperatura e salinidade das guas durante as coletas.
As contagens mais altas de fungos no Mangue 1 podem ter uma correlao com
o aporte de esgoto domstico que ficou comprovado pela colimetria dessas guas.
Alguns autores relacionam a presena de CF e espcies especficas de fungos em corpos
dgua. O monitoramento dos nveis de contaminao na gua, geralmente, feito
atravs de indicadores de poluio fecal representado por estimativas do nmero de
bactrias do grupo coliforme (Noble et al., 2004). As bactrias aquticas e fungos
utilizam matria orgnica dissolvida, multiplicam-se rapidamente em condies
Discusso 77

favorveis. Alguns autores sugerem que o nmero e a composio de leveduras


presentes em rios e lagos poderia ser usado como indicador de enriquecimento orgnico
nesses corpos dgua (Rosa et al., 1995).
Trott e Alongi (2000) relataram a capacidade do esturio para assimilar os
efluentes de esgoto domstico como tambm a capacidade de tolerar descargas
peridicas vindas dos viveiros de camaro com cultivo intensivo.
evidente que o ambiente receptor age para assimilar uma grande parte dos
resduos das fazendas de carcinicultura, a eficincia dessa assimilao depende da
natureza do corpo dgua isto , profundidade, extenso, hidrodinmica, vegetao.
Entretanto, essa prtica tem influenciado de forma definitiva, muitos parmetros dentro
dos ambientes receptores levando a danos graves, caso a capacidade assimilativa seja
excedida (Costanzo et al., 2004). Os resduos da atividade de aquacultura entre outros
tipos de distrbios no ambiente manguezal, substituem um sistema de decomposio
aerbio-anaerbio por um sistema apenas anaerbio, que menos eficiente e lento na
reciclagem de nutrientes, resultando em formao e liberao de sulfitos txicos. O
resultado que a restaurao dos ecossistemas tropicais, incluindo o ecossistema de
manguezal, depende da preservao das comunidades microbianas bnticas e seu
ambiente geoqumico (Holmboe et al., 2001).
Em uma anlise mais geral dos ambientes, verificou-se que a maioria dos
isolados foi caracterizada como bacilos e cocobacilos Gram negativos, respondendo por
59,6% de um total de 161 estirpes. Foram verificados tambm crescimentos de colnias
mistas representando 19,35% das culturas. Somente uma das cepas isoladas mostrou
caractersticas de cocos Gram positivos, ela foi originria da rizosfera de R. mangle do
Mangue 2. Entre as estirpes isoladas das amostras de gua, a maioria foi identificada
como pertencente famlia Enterobacteriaceae, provenientes do Mangue 1 e 2. Esses
dados esto coerentes com aqueles obtidos na colimetria, onde as guas nessas duas
reas de manguezal foram as mais contaminadas por esgotos. O segundo mais isolado
foi Chryseomonas luteola (3 estirpes). Analisando manguezais impactados por derrame
de petrleo na baa de Guanabara (Rio de Janeiro), Maciel-Sousa (2004) tambm
identificou cepas dessa espcie. As espcies Burkholderia cepacia e Chryseomonas
luteola foram isoladas nos trs tipos de amostras.
Discusso 78

Pinhassi e Berman (2003) avaliaram a resposta diferencial de crescimento entre


gama e alfaproteobactrias originrias de gua doce e gua marinha em meios de cultura
com diferentes fontes de nutrientes e enriquecimento. Aps incubao as
gamaproteobactrias de crescimento rpido dominaram. Nas placas inoculadas com
gua marinha, diferentes espcies de Vibrio e Alteromonas aparecerem enquanto que
nas placas de gua doce cresceram as espcies dos gneros Shewanella, Aeromonas, e
Rheinheimera. Esses resultados sugerem que diferentes gneros de proteobactrias da
subclasse gama tanto em ambientes marinhos como lacustres apresentam preferncia
por concentraes elevadas de nutrientes e fontes de matria orgnica de fcil
assimilao. Entretanto, em meios com baixa concentrao de nutrientes as
alfaproteobactrias mostraram melhor crescimento. Ocorreu uma diferena notvel na
amplitude da resposta do crescimento bacteriano entre os experimentos com e sem a
adio de nutrientes. Conseqentemente, a capacidade para crescer rapidamente em
resposta a elevadas concentraes de nutrientes resultou no domnio de
gamaproteobactrias sobre meios de cultura ricos em nutrientes. Entretanto, essas
bactrias foram relativamente malsucedidas comparadas a alfaproteobactrias em
culturas controladas com baixas concentraes de nutrientes.
Das amostras de rizosfera foram isoladas e identificadas estirpes pertencentes a
gneros com espcies reconhecidamente patgenos oportunistas como Aeromonas,
Chryseomonas, Burkholderia, Pseudomonas, Vibrio e membros da famlia
Enterobacteriaceae. Berg et al. (2005) encontraram alguns desses gneros em rizosfera
de diversas plantas, segundo esses autores, os mecanismos responsveis pela
colonizao da rizosfera e a atividade antagonista contra patgenos de plantas so
similares queles responsveis pela colonizao de rgos e tecidos humanos e a
patogenicidade.
Vazquez et al. (2000) isolou das razes de plantas do chamado Mangue negro
(Avicenia germinans) as espcies: Bacillus amyloliquefaciens, B. atrophaeus,
Paenibacillus macerans, Xanthobacter agilis, Vibrio proteolyticus, Enterobacter
aerogenes, E. taylorae, E. asburiae Kluyvera cryocrescens; e do mangue branco
(Laguncularia racemosa), as trs espcies: B. licheniformis, Chryseomonas luteola, e
Pseudomonas stutzeri. Segundo Holguin et al. (2001), esse foi o primeiro registro de
bactrias pertencentes aos gneros Xanthobacter, Kluyvera e Chryseomonas com
Discusso 79

capacidade de solubilizar fosfato e de sua presena nas razes de mangue. Em nossa


pesquisa, identificamos nas razes de R. mangle, espcies dos gneros Aeromonas,
Pseudomonas, Vibrio, espcie do grupo Flavobacterium Cytophaga e espcies
pertencentes famlia Enterobacteriaceae.
Segundo Maeda (2002) entre os grupos bacterianos aerbios, espcies
pertencentes aos gneros Pseudomonas, Vibrio, Acinetobacter, Alteromonas e
Flavobacterium so comuns em guas de aquacultura. Al-Harbi e Uddin (2002) tambm
encontraram bactrias Chryseomonas sp., Vibrio spp. e Aeromonas hydrophila em
sistemas de cultivo de larvas de camaro sendo Vibrio, o gnero dominante.
Em nossa pesquisa, foram isoladas poucas estirpes pertencentes ao gnero Vibrio
a partir do meio de cultura para contagem de heterotrficos totais (Agar Marinho).
Entretanto, foi possvel isolar e identificar uma grande diversidade de espcies desse
grupo a partir de inculos de gua e sedimento em meio TCBS. A pouca
competitividade dos vbrios sobre um meio no seletivo poderia ser uma explicao
para essa dificuldade de recuperao das amostras ambientais.
A abundncia de bactrias do gnero Vibrio no apresentou diferenas entre as
amostras de gua do manguezal controle (Mangue 1) e as outras reas de manguezal.
Dentro da fazenda, o nmero de vbrios presentes no canal de abastecimento foi similar
ao do Mangue 4, onde a fazenda se localiza. Por outro lado, a gua dentro do viveiro e
no canal de descarga apresentou valores maiores (1 ciclo logartmico) que aqueles
encontrados nas guas do rio apesar dos baixos valores de salinidade e temperatura
nesse ambiente devido a fortes chuvas ocorridas na poca das coletas principalmente na
regio que corresponde cabeceira dos rios Pirang (Mangue 3) e Jaguaribe (Mangue
4).
Quanto diversidade das espcies de Vibrio isoladas dos formadores de colnias
percebe-se que, apesar das contagens menores de vbrios nos corpos d`gua dos rios
Pacoti e Chor (Mangue 1 e 2, respectivamente), o nmero de diferentes espcies do
gnero Vibrio foi maior na gua, comparado com as reas de manguezal dos rios Pirang
e Jaguaribe (Mangues 3 e 4, nessa ordem) que recebem um volume grande de efluentes
das fazendas de carcinicultura. Segundo Rocha e Rodrigues (2003), o nmero de
fazendas instaladas nos esturios dos rios Jaguaribe e Pirang, em 2002, era 113 e 36
Discusso 80

respectivamente. Entretanto, a rea de viveiros ocupados nessas fazendas correspondia a


796 e 938,4 hectares.
Devido localizao de cidades prximas aos rios Pacoti e Pirang, as reas de
manguezal recebem uma significante descarga de esgotos. Dessa forma, com uma
temperatura adequada, a entrada de nutrientes pode estimular o crescimento de vbrios
nessas reas. Grimes et al. (1986) afirmou que muitas pesquisas interpretam
erroneamente as descargas de guas residuais apenas como fonte de patgenos, no
considerando esses efluentes tambm como uma fonte de nutrientes que pode estimular
a multiplicao de patgenos autctones.
Uma abordagem alternativa para avaliar os efeitos das descargas da aqicultura
a medida de processos e indicadores ecolgicos determinantes. As concentraes de
parmetros de qualidade da gua so apenas representantes para os processos ecolgicos
e, como os resultados tem mostrado, podem ser muito variveis.
Trott e Alongi (2000) relataram a capacidade do esturio para assimilar os
efluentes de esgoto domstico como tambm a capacidade de tolerar descargas
peridicas vindas dos viveiros de camaro com cultivo intensivo.
evidente que o ambiente receptor age para assimilar uma grande parte dos
resduos das fazendas de carcinicultura, a eficincia dessa assimilao depende da
natureza do corpo dgua isto , profundidade, extenso, hidrodinmica, vegetao.
Entretanto, essa prtica tem influenciado, de forma definitiva, muitos parmetros dentro
dos ambientes receptores levando a danos graves caso a capacidade de assimilao seja
excedida (Costanzo et al., 2004).
A entrada de efluentes de carcinicultura nessas reas pode determinar o aumento
da atividade bacteriana e a reduo nos nveis de oxignio, produzindo condies
anaerbias nos sedimentos em reas prximas s fazendas (Zaccone et al., 2005). Os
Vibrios spp. multiplicam-se especialmente rpido por causa de sua elevada taxa de
crescimento e a habilidade de se adaptar a condies deficientes de oxignio.
Conseqentemente, as bactrias desse grupo so os principais patgenos para
organismos aquticos cultivados (Maeda, 2002).
O V. fluvialis foi a espcie identificada mais abundante entre os isolados nas
amostras de gua sendo V. parahaemolyticus o mais isolado nas amostras de sedimento.
O Vibrio harveyii o principal patgeno dos camares Litopenaeus vannamei e
Discusso 81

Penaeus monodon (Austin et al., 2003). Gmez-Gil et al. (2004) chamam a ateno para
o fato de que o V. harveyii e V. campbelli so praticamente indistinguveis
fenotipicamente e que estirpes identificadas como V. harveyii na verdade se mostraram
V. campbelli em hibridizao DNA-DNA. Isso coloca a espcie V. campbelli como um
importante patgeno para camares. Foi verificada tambm a presena de espcie do
chamado grupo vbrios luminescentes (V. fisheri) que j foram relacionados a casos
de doenas em peixes e crustceos. As espcies de interesse para a sade humana como
V. cholerae, V. vulnificus e V. parahaemolyticus foram encontradas nas guas e
sedimento nas reas de manguezal estudadas.
Alm de possuir alguns patgenos importantes para o homem e animais
aquticos, o gnero Vibrio tambm apresenta espcies envolvidas na ciclagem de
nutrientes como o V. harveyii. Vbrios so capazes de quebrar quitina, e algumas
espcies so capazes de degradar hidrocarbonetos aromticos policclicos que so
extremamente txicos para o meio ambiente (Thompson et al., 2004a). O prprio V.
harveyii um importante patgeno de camares cultivados e que j foi responsvel por
srias perdas na produo nas Filipinas e em outros pases do sudeste asitico
(Grslund, 2001).
amplamente reconhecido que a classificao das espcies de Vibrio difcil
como uma conseqncia da grande variabilidade entre as estirpes dependendo das
adaptaes a diferentes condies ambientais (Schintu et al., 1994). Porm a
distribuio dos vbrios halofilicos poderia ser completamente diferente com respeito as
diferentes condies ambientais.
A escala espacial dos efeitos dos efluentes de aquacultura dependente do
nmero de fatores incluindo a rea usada, o grau de intensidade dos cultivos, o nvel de
produo e o perfil do corpo dgua (Kisand e Wikner, 2003). Essa extenso alcanada
pelos efluentes de cultivo nos rios receptores pode foi verificada por Guo e Li (2003)
em um tipo de cultivo em redes chamadas gaiolas em um lago na China. Esses
autores registraram o impacto dos resduos de rao, atravs da eutrofizao dos
sedimentos, at 20 metros fora da rea de cultivo. A reduo gradual no contedo de
nitrognio nos sedimentos e partculas, com o distanciamento das fazendas.
Os mtodos independentes de cultivo so propostos para gerar um perfil mais
preciso da riqueza e diversidade das comunidades bacterianas do que aquele
Discusso 82

apresentado pelos mtodos dependentes, notadamente por causa da presso seletiva


imposta por estes para crescimento dos microrganismos sobre um substrato slido,
levando ao isolamento de uma sub-populao das comunidades adaptada ao crescimento
em placa (Amann et al., 1995; Brock, 1987). Entretanto, outros pesquisadores tm
proposto uma viso diferente de que as bactrias cultivveis podem constituir a maioria
do nmero total de bactrias nas amostras (Kisand et al., 2002). Os dois pontos de vista
no so necessariamente excludentes. Se existe uma tendncia para as clulas crescerem
ativamente para formar colnias sobre meios slidos ricos, essas bactrias podem ser
seletivamente isoladas. As espcies dominantes sobre a superfcie das placas podem ser
minorias nas amostras ambientais e vice-versa. Ao mesmo tempo muitas espcies
falham para crescerem sobre a superfcie de placas de um meio especfico ou mostram
to poucas unidades formadoras de colnias que acabam sendo subestimadas nas etapas
de isolamento. A estratgia dependente de cultivo pode dessa forma, subestimar a
riqueza das amostras.
As tcnicas moleculares se mostram bem mais eficientes nessa tentativa de
estimar a diversidade microbiana em amostras ambientais. Quando a amplificao
eficiente, os mtodos moleculares podem detectar espcies que ainda so impossveis
atravs das tcnicas de cultivo. Entretanto, essas tcnicas tambm so dependentes do
PCR. Da mesma forma, a clonagem de vetores ou separao de 16S rDNA por
eletroforese de gradiente desnaturante ou de temperatura tem suas prprias deficincia
potenciais com respeito separao de taxa. Yu e Morrison (2004) mostraram que a
escolha das regies variveis para amplificao pode influenciar muito o perfil de PCR-
DGGE e os ndices de diversidade produzidos a partir de amostras de DNA da
comunidade.
Sendo os manguezais ambientes extremamente variveis difcil, portanto,
correlacionar diferenas no perfil microbiano com a presena da atividade de
carcinicultura. Por isso importante que se tenha cautela na tentativa de determinar
diversidade de ambientes atravs da anlise de gis de DGGE.
A utilizao da tcnica de DGGE com amplificao da regio 16S rDNa com
iniciadores universais no nos permite afirmar que a recepo de efluentes das fazendas
de carcinicultura tenha afetado as populaes microbianas aquticas desses ambientes.
A ocorrncia de precipitaes, ampla variao de salinidade bem como a amplitude de
Discusso 83

mars so alguns fatores que podem afetar a riqueza e diversidade dessa comunidade
microbiana.
Outros estudos encontraram a salinidade, contaminao com metais pesados,
estresse de temperatura, pH influenciando a estrutura e funo de comunidades
procariticas em diversos ambientes. A maioria desses estudos avalia a resistncia
estrutura e ou funcionalidade da comunidade a determinado tipo de alterao ou
contaminao. Poucos consideram a resilincia, isto , o potencial da comunidade em
retornar condio anterior passada a perturbao (Langenhender, 2005).
Tambm deve ser considerado que na interpretao da ecologia e evoluo
microbiana atravs das seqncias de 16S rRNA, a existncia de muitas bactrias que
apresentam mltiplos e heterogneos operons rRNA. A heterogeneidade de seqncias
de 16rRNA dentro de um nico genoma cria um problema significante para a anlise
independente de cultivo da comunidade microbiana uma vez que ela pode levar a uma
sobrestimativa da diversidade bacteriana baseada em alvos do 16S rRNA (Acinas et al.,
2004). O verso dessa moeda o fato de que nem sempre uma banda em um gel de
DGGE representa uma nica espcie. Na interpretao do perfil de bandas que
aparecem no gel de DGGE considera-se que cada banda observada no gel representa
uma espcie de microrganismo. Entretanto, sabe-se que bandas de mais de uma espcie
da comunidade microbiana podem estar escondidas atrs de uma nica banda, e desta
forma subestimar a diversidade microbiana (Heuer et al., 2001).
A avaliao da diversidade de ambientes atravs da utilizao de iniciadores
para genes de grupos especficos dentro da comunidade bacteriana parece ser uma
alternativa vivel e bem mais esclarecedora.
No gel especfico para o grupo vbrios ficou evidente uma diferena entre a
diversidade dos ambientes receptores dos efluentes da carcinicultura. possvel notar
uma tendncia a agrupamento entre as amostras do rio Jaguaribe (Mangue 4) que
apresenta o maior tempo de funcionamento da atividade de carcinicultura. A
similaridade entre essas amostras e a maioria das amostras do manguezal controle
(Mangue 1) ficou abaixo de 45%. Entre os manguezais com atividade de carcinicultura
o ndice de similaridade foi mais alto, em torno de 50%. Esse um ndice considervel
se levarmos em conta todas as variveis afetando esse tipo de ambiente, principalmente
o fluxo de mars.
Discusso 84

Devemos considerar nesse caso a especificidade dos primers e o fato de que uma
grande parte das espcies de Vibrio possui dois cromossomos. A especificidade dos
iniciadores tambm um fator importante a serem considerados na anlise dos perfis
observados nos gis.
possvel tambm que essa tcnica de DGGE no tenha sido capaz de detectar
as alteraes acontecidas na comunidade dos manguezais. Como j foi dito
anteriormente os efluentes de carcinicultura contm uma alta concentrao de NH4+ e
nitrognio orgnico representando um aporte significativo de nutrientes no ambiente do
manguezal. A eutrofizao do ambiente pela recepo das descargas dos viveiros no
representa ento um impacto drstico como seria um derramamento de petrleo.
Como o DGGE detecta principalmente os membros das comunidades
dominantes (Muyzer et al., 1993) possvel que as alteraes nessa comunidade
aconteam em um nvel no detectvel por essa tcnica.
Langenhender (2005) especulou que as alteraes na composio da comunidade
bacteriana sofrendo baixo regime de distrbio ocorreriam no nvel da microdiversidade,
isto , entre os taxas proximamente relacionados que presumivelmente so
funcionalmente equivalentes enquanto que as mudanas filogenticas maiores poderiam
ser visualizadas depois de eventos de impactos mais drsticos. Em oposio a essa
hiptese, Jasper e Overmann (2004) mostraram que taxa bem prximos ou at com
seqncias idnticas de 16S rRNA podem ser funcionalmente diferentes e
necessariamente no pertencerem ao mesmo ecotipo.
importante tambm chamar a ateno para o perfil de diversidade encontrado
nos pontos dentro da fazenda de cultivo. A amostra de gua do canal de descarga foi a
que apresentou os menores percentuais de similaridade com as outras amostras. Apenas
com a amostra do viveiro que a similaridade se mostrou um pouco maior que 50%.
Seguindo o procedimento de descarte de efluentes nas fazendas, esse canal de descarga
utilizado como um ambiente para estabilizao e precipitao de slidos suspensos
dos efluentes que vem do viveiro. A gua residual permanece algum tempo nesse canal
antes de ser lanada no corpo dgua.
Em estudo anterior de Costanzo et al. (2004) avaliando a influncia e
distribuio dos efluentes de viveiros de camaro em uma rea de manguezal no
nordeste da Austrlia, ficou evidente que o ambiente receptor foi influenciado como
Discusso 85

resultado da presena de uma fazenda de camaro. Utilizando uma combinao de


indicadores (anlises fsico-qumicas da coluna dgua, biomassa do fitoplncton e
nitrognio) para aumentar a preciso da avaliao de como os poluentes estavam
afetando a regio estudada, os resultados demonstraram que a influncia dos descartes
do cultivo de camaro sobre as guas receptoras foi varivel e relacionada ao estgio
dos viveiros, sugerindo que o monitoramento do impacto deveria ser planejado
adequadamente a fim de se avaliar plenamente os efeitos e distribuio dos poluentes.
Os parmetros fsico-qumicos indicaram uma baixa qualidade da gua e os
bioindicadores mostraram uma influncia das descargas se estendendo at a rea de
captao da gua, indicando a recirculao do efluente dentro da fazenda.
O problema da recirculao das guas residuais das fazendas tem srias
implicaes para o gerenciamento da prpria atividade. Uma vez que essa atividade de
cultivo extremamente dependente da qualidade da gua dos esturios, os impactos
causados nesse ambiente se refletiro no desempenho das fazendas. importante
detectar e estabelecer parmetros que permitam avaliar o nvel de impacto sofrido pela
ambiente onde essa atividade se instala. O papel das bactrias nesses ambientes
extremamente importante uma vez que as grandes perdas sofridas nos cultivos de
camaro tm como causa principal de doenas bacterianas cujos agentes so
microrganismos autctones nesses ambientes.
Concluses 86

8 CONCLUSES

Baseado nas anlises realizadas em quatro reas de manguezal localizadas no litoral


leste da costa cearense foi possvel constatar que:

1. A contagem de bactrias heterotrficas aerbias totais no se mostrou diferente


entre os mangues com e sem a presena de cultivos de camaro. Tambm no
foi possvel observar diferena nos valores da comunidade de Vbrios nesses
ambientes indicando que os efluentes de carcinicultura no influenciam a
comunidade bacteriana cultivvel do sedimento, rizosfera e gua dos
ecossistemas de manguezal.

2. O maior nmero de isolados das amostras de gua foi da espcie Cryseomonas


luteola e espcies pertencentes famlia Enterobacteriaceae.

3. Entre as amostras de sedimento o maior nmero de isolados fazia parte da


famlia Enterobacteriacea estando em acordo com os nveis de contaminao
fecal dessas amostras. Alm da carga de matria orgnica originada no cultivo
do camaro, ficou evidente que esses ecossistemas tambm so receptores de
efluentes de esgoto domstico, como ficou demonstrado pelo nvel de
contaminao fecal observado em todos os esturios durante a primeira etapa de
coletas.

4. Os maiores ndices de diversidade fenotpica entre as bactrias heterotrficas


foram registrados nas amostras de gua de M1 e M4 que correspondendo ao
local que no recebe efluentes de fazendas de camaro e o local que recebe esses
efluentes por mais tempo.

5. No foi possvel detectar alterao na diversidade de espcies de Vibrio


cultivveis isolados na coluna dgua e sedimento dos manguezais com a
atividade de carcinicultura e o ambiente controle, onde essa atividade inexiste.

6. Foram encontradas diferenas significativas na estrutura das comunidades


bacterianas nos diversos manguezais estudados. Os perfis dessas comunidades
mostraram uma tendncia a agrupamento entre os ambientes com atividade de
carcinicultura, o que pode indicar uma influncia dos resduos de viveiros. Esse
Concluses 87

efeito no necessariamente pode ser atribudo carcinicultura, considerando as


flutuaes encontradas no mangue controle (M1).

7. Dados semelhantes foram encontrados quando estudamos isoladamente a


populao de Vibrios. A riqueza de espcies encontrada para esse grupo nos
diversos mangues foi semelhante. No entanto, foram detectadas diferenas na
composio das espcies.

8. V. cholerae (no O1 e no O139), V. vulnificus e V. parahaemolitycus foram


isolados nesses mangues. As populaes de microrganismos heterotrficos
foram elevadas indicando eutrofizao desses ambientes.Estudos enfatizando a
diversidade funcional poderiam melhor evidenciar o efeito da poluio sobre a
microbiota de manguezais.
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