Captulo 2 - As bases moleculares da hereditariedade

GENERALIDADES
Todo ser vivo consiste de clulas, nas quais est situado o material hereditrio. O
nmero de clulas de um organismo pode variar de uma (como nas bactrias) a muitos
milhes (como nos humanos). Nos organismos pluricelulares estas clulas podem
apresentar-se nos mais variados tipos.
De acordo com sua organizao celular, os seres vivos so geralmente classificados
em dois grupos: procariotos e eucariotos, cujas caractersticas constam na Tabela
2.1.

TABELA 2.1 CARACTERIZACO DE PROCARIOTOS E EUCARIOTOS

Caractersticas em Procariotos e Eucariotos

Ncleo no sim
Membrana nuclear no sim
Corpo nucleide" sim no
Material gentico DNA; RNA DNA
Cromossomos visveis
na diviso celular no sim
Ribossomos sim sim
Outras organelas no sim
Parede celular rgida sim no
Exemplos bactrias, fungos,
cianobactrias protozorios, algas superiores, vegetais e animais

Na dcada de 1970, os pesquisadores descobriram um tipo de microrganismo at ento

desconhecido, ao qual denominaram Archaea pelo fato de pensarem que talvez pudessem
ser os mais antigos tipos de clulas existentes, combinando caractersticas dos
procariotos e eucariotos, mas exibindo tambm caractersticas prprias. Os Archaea,
inicialmente denominados Archaebactrias, so considerados uma subdiviso dos
procariotos, mas colocados em um grupo separado das demais bactrias, pelas suas
caractersticas distintivas: componentes de suas membranas e paredes celulares,
diferenas em bases raras encontradas em seus RNAs transportadores e em estruturas
diferentes nas subunidades da RNA-polimerase. Devido s diferenas moleculares que
esses microrganismos apresentam em relao s demais bactrias, alguns cientistas
tendem a cham-los preferentemente de Archaea, colocando-os em um subgrupo parte
dos procariotos.

Os primeiros indcios de que o DNA o material hereditrio surgiram de

experincias realizadas com bactrias, sendo essas indicaes estendidas aos orga-
superioresnismos superiores.
Os genes, seqncias de DNA que contm a informao para codificar as cadeias
polipeptdicas de uma protena, so os responsveis pela transmisso hereditria
das caractersticas de uma gerao para outra. Tais seqncias nem sempre so
contnuas, podendo ser interrompidas por segmentos de DNA no-relacionados com a
codificao daquela cadeia polipeptdica especfica.
Os genes que constituem o genoma de qualquer espcie esto organizados em um nmero
relativamente pequeno de cromossomos. O material gentico de cada cromossomo
consiste de um filamento muito longo de DNA, contendo muitos genes em uma ordem
linear, embora nem sempre contnua.
O conceito estrito de gene modificou-se ao longo do tempo, sendo atualmente
definido como o segmento de DNA que produz uma cadeia polipeptdica e inclui
regies flanqueadoras que antecedem e que seguem a regio codificadora, bem como
sequncias que no so traduzidas (ntrons) e que se intercalam com os segmentos
codificadores individuais (xons).
CIDOS NUCLICOS: ESTRUTURA QUMICA
A estrutura qumica dos cidos nuclicos simples e no varia nos diversos
organismos.
Os cidos nuclicos consistem de sequncias de nucleotdios. Cada nucleotdio
formado por:
- uma base nitrogenada, que pode ser uma puri-
na (adenina ou guanina) ou uma pirimidina (timina ou citosina, no DNA; uracil ou
citosina, no RNA);
- uma pentose (desoxirribose, no DNA; ribose, no RNA);
- um grupo fosfato (PO4).
O conjunto de base + acar denomina-se nucleosdio, chamando-se nucleotdio ao
conjunto de base + acar + fosfato.
De acordo com a pentose que apresentam, os cidos nuclicos so de dois tipos: DNA
(cido desoxirri-
bonuclico), que contm desoxirribose, e RNA (cido ribonuclico), que contm
ribose. Neste ltimo no. h timina, e sim uracil. O grupo fosfato apresenta-se
invarivel, tanto no DNA quanto no RNA. O DNA encontra-se principalmente nos
cromossomos. O RNA encontrado principalmente no nuclolo (estrutura nuclear) e no
citoplasma, havendo muito pouco nos cromossomos.
Na Figura 2.1 esto representadas as estruturas qumicas dos componentes dos
nucleotdios (bases nitrogenadas, acares e grupo fosfato) e a Figura 2.2
apresenta as estruturas qumica e molecular de um segmento de DNA.

FIGURA 2.1 Representao esquemtica das estruturas qumicas dos componentes dos
nucleotdios e de um nucleotdio, mostrando as ligaes entre esses componentes: A
- bases nitrogenadas (purinas: adenina e guanina; pirimidinas: timina, citosina e
uracil); B - grupo fosfato (monofosfato, difosfato e trifosfato; C - acares
(desoxirribose e ribose); D - nucleotdio. (Fonte: Azevedo e Astolfi Filho, 1987.)
FIGURA 2.2 Representao esquemtica das estruturas qumica e molecular do DNA e de
seus nucleotdios: A - Segmento de uma cadeia dupla de DNA, mostrando alguns pares
de nucleotdios adjacentes e considerando a localizao dos carbonos 5 e 3' no
acar (desoxirribose); pode ser notada a orientao oposta das cadeias, por isso
denominadas antiparalelas. A cadeia da esquerda corre na direo 5 (acima) para a
direo 3 (abaixo), a cadeia da direita corre em direo oposta: de 5 (abaixo)
para 3 (acima). Pode-se observar tambm a estrutura qumica dos componentes da
molcula de DNA, bem como o pareamento entre as bases nitrogenadas adenina (A) e
timina (T), ligadas por duas pontes de hidrognio, e entre as bases nitrogenadas
guanina (G) e citosina (C), ligadas por trs pontes de hidrognio. B - Numerao
dos carbonos do acar (desoxirribose) na estrutura acar-fosfato da molcula de
DNA e do acar (ribose) na estrutura acar-fosfato da molcula de RNA. C - A
relao espacial das duas mos assemelha-se a das duas cadeias que formam a dupla
hlice de DNA. (Fonte: Lewis, 1997.)

ACIDOS NUCLICOS: ESTRUTURA MOLECULAR

Alm das diferenas na sua composio qumica, o DNA e o RNA apresentam diversidade
quanto sua estrutura molecular.
Como os genes compem-se de DNA, necessrio que este ltimo tenha uma estrutura
suficientemente verstil para explicar a grande variedade de genes e, ao mesmo
tempo, ser capaz de reproduzir-se de tal maneira que se forme uma cpia idntica em
cada clula apta a dividir-se.
Em 1953, J. D. Watson e F. C. Crick, com base em estudos de difrao aos raios X,
propuseram um modelo para a estrutura molecular do DNA que preenchia estes
requisitos: (a) a molcula de DNA um longa cadeia de nucleotdios, formando uma
configurao semelhante a uma escada de corda, enrolada de forma helicoidal; (b)
nessa escada, o acar e o fosfato so os componentes verticais (corrimos) e as
bases nitrogenadas so os degraus: para que eles se formem, as ligaes entre as
bases so feitas por pontes de hidrognio, sendo duplas entre as bases adenina e
timina, e triplas entre guanina e citosina; (c) tal modelo tambm requer que as
duas cadeias polinucleotdicas sejam antiparalelas, isto , corram em direes
opostas: uma corre na direo 5'->3', enquanto a outra na 3'->5'. Na Figura 2.3
est representado o modelo da molcula de DNA (Watson & Crick, 1953). Por seu
trabalho, Watson e Crick receberam o Prmio Nobel de Medicina e Fisio- logia, em
1962.
Assim, o DNA formado por duas cadeias polinucleotdicas que se dispem em espiral
em torno de um mesmo eixo imaginrio, mas de polaridades opostas. Cada cadeia de
DNA tem sua polaridade determinada pela orientao dos componentes acar-fosfato.
Quando uma cadeia termina no tomo de carbono 5 da molcula de desoxirribose, que
constitui sua extremidade 5, a cadeia oposta termina no carbono 3 do acar,
denominando-se extremidade 3. Assim, a extremidade 5 de uma cadeia tem orientao
oposta extremidade 3 da outra, da a denominao de cadeias antiparalelas. A
estabilizao da dupla hlice dada pela interao entre as bases complementares
oponentes e as bases que se vo superpondo. O espao ocupado por duas bases opostas
pequeno, o que obriga a associao, por meio de pontes de hidrognio, entre uma
base grande (prica) e outra pequena (pirimdica); duas bases grandes no caberiam
nesse espao e duas pequenas no se aproximariam suficientemente para interagir.
Essas associaes complementares ocorrem entre adenina e timina e entre guanina e
citosina, por serem
estas combinaes mais estveis. Assim, as quantidades de bases pricas e
pirimdicas so iguais, de tal forma que A+G = C+T. Verifica-se, igualmente, que as
quantidades de adenina e timina so equivalentes, o mesmo ocorrendo com a guanina e
a citosina, tendo-se, assim: A=T e G=C. Considerando-se uma cadeia hipottica, com
a seguinte composio:
5'-ATGCGTCAG -3', sua cadeia complementar dever ser 5'-CTGACGCAT-3', com a
estrutura em dupla hlice completa sendo assim representada:
5' - ATGCGTCAG - 3'
3' -TACGCAGTC - 5'
A relao G+C / A+T igual em todos os indivduos da mesma espcie, mas varia de
uma espcie para outra.
A estrutura molecular do DNA apresenta uma srie de vantagens: (a) possibilita o
armazenamento e a codificao de imensa quantidade de informao, tendo em vista as
bases a contidas; para uma molcula com N bases, h 4N seqncias possveis; (b)
sugere um mecanismo para sua replicao, j que cada cadeia contm informao
completa da molcula de DNA, podendo servir como molde para a sntese de uma nova
cadeia complementar; (c) fornece um mecanismo de defesa contra a perda de
informao gentica causada por um dano ao DNA; por exemplo, se uma base de uma das
cadeias lesada ou perdida, ela pode ser substituda, j que sua cadeia
complementar dirige essa substituio; (d) a complementaridade das cadeias de DNA
permite que ambas se identifiquem e se renam, em uma mistura complexa de
molculas, configurando o que se denomina hibridizao, processo utilizado em
algumas situaes pelos mecanismos nucleares de regulao da expresso gnica.
Como j foi mencionado, o RNA difere do DNA em sua composio qumica quanto a dois
aspectos: o RNA possui ribose, no lugar da desoxirribose, e uracil, em vez de
timina.
Quanto estrutura molecular, o RNA apresenta apenas uma cadeia de nucleotdios,
cuja composio de bases no est restrita s igualdades G=C e A=U. Em
circunstncias especiais, uma molcula de RNA pode formar uma dupla hlice com
outra parte de sua prpria estrutura, como ocorre no RNA transportador, que ser
abordado mais adiante.
Alm disto, o DNA contm a informao que codifica uma cadeia polipeptdica,
enquanto o RNA utiliza essa informao.
O CDIGO GENTICO
O cdigo para a produo dos diferentes tipos de protenas que o organismo deve
formar ao longo de sua vida est contido na clula-ovo de cada indivduo.

FIGURA 2.3 Modelo de Watson e Crick para a estrutura da molcula do DNA, em

diferentes modos de representao. A-A dupla hlice est desenrolada para mostrar
os pares de bases (internamente, em vermelho) e o esqueleto de acar-fosfato
(externamente, em preto). Sua largura mantm-se constante porque as purinas pareiam
sempre com as pirimidinas: A com T, unidas por duas pontes de hidrognio, G com C,
unidas por trs pontes de hidrognio. B - A dupla hlice assemelha-se a uma escada,
na qual os degraus so os pares de bases, situados perpendicularmente aos corrimos
formados pela estrutura de acar e fosfato. As setas indicam a orientao oposta
das cadeias. O enrolamento helicoidal das duas cadeias faz surgir um sulco pequeno
ou estreito (~12A de dimetro) e um sulco grande ou largo (~22A de dimetro),
assinalados na figura. C - Esta representao mostra as relaes entre os tomos da
molcula de DNA. D - O esquema de um segmento desenrolado da dupla hlice mostra a
relao entre as bases complementares, que representam o contedo informativo
varivel do DNA, e o esqueleto de acar-fosfato, que idntico em todo o DNA.
(Fonte: Lewis, 1997.)

Todas as clulas de um determinado organismo, em um dado momento de sua vida,

contm o mesmo cdigo ou informao gentica daquela primeira clula, porm nem
todos os genes esto funcionando em todas as clulas ao mesmo tempo e com a mesma
intensidade. Isso varia com o tipo de clula e com a idade do indivduo.
O cdigo gentico descreve a relao entre a sequncia de bases nitrogenadas e a
seqncia de aminocidos na protena que ele especifica. Trs bases nitrogenadas
adjacentes codificam um aminocido e formam a unidade de informao gentica ou
cdon. O cdigo gentico apresenta as seguintes caractersticas:
(a) Sua leitura feita em trincas de bases ou nucleotdios.
(b) degenerado ou redundante. A seqncia de nucleotdios deve conter o nmero
suficiente de unidades cdificadoras para representar 20 aminocidos. Como o DNA
possui apenas quatro bases distintas, deve haver a combinao de vrias bases para
codificar os diferentes tipos de aminocidos. Se a combinao dessas bases fosse 2
a 2 (42), haveria 16 arranjos; como so 20 os aminocidos, esta combinao ,
portanto, inadequada. Agrupando-se as bases 3 a 3 (43), resultam 64 arranjos,
nmero maior do que o necessrio. Desde que h 64 combinaes possveis e apenas 20
aminocidos diferentes, deduz-se que somente algumas das trincas especificam
aminocidos ou que alguns deles devem ser especificados por mais de um tipo de
trinca ou por mais de um cdon.
(c) considerado no-ambguo, isto , uma trinca s pode codificar um aminocido.
(d) um cdigo sem superposio, ou seja, uma dada base pertence a uma s trinca
ou cdon.
(e) , tambm, contnuo, no existindo espaamento entre os cdons.
(f) universal, ou seja, os mesmos aminocidos
so codificados pelos mesmos cdons em todos os organismos, com algumas excees
(alguns genes da mitocndria de certos organismos unicelulares, por exemplo). Dessa
forma, um RNA mensageiro tem a capacidade de ser traduzido em uma clula de outra
espcie, o que possibilitou a tcnica do DNA recombinante (ver Captulo 17). Parece
que, uma vez evoludo, o cdigo gentico tem se mantido quase intacto ao longo da
histria evolutiva da vida na Terra.
(g) H cdons de iniciao e de finalizao. O incio da sntese de um
polipeptdio, em procariotos, assinalado pela presena de um cdon especfico,
que AUG no
RNA mensageiro, correspondendo ao aminocido metionina. H, tambm, cdons que
indicam o trmino da sntese polipeptdica, como UAA, UAG e UGA, que so os cdons
de finalizao, que no correspondem a aminocidos.

FIGURA 2.4 O cdigo gentico. (Fonte: Thompson e Thompson, 1988.)

Na Figura 2.4 est representado o cdigo gentico completo.

DNA
Tipos
O tamanho e a complexidade do genoma aumentam de maneira no-linear, entretanto
parece existir uma correlao aproximada entre a complexidade do organismo e a
quantidade de seu DNA. A Tabela 2.2 apresenta o tamanho do genoma haplide de
alguns organismos.
O contedo de DNA de uma clula diplide humana , portanto, de aproximadamente 6 x
109 pares de nucleotdios, embora alguns autores mencionem um nmero um pouco mais
alto (7,1 x 109; Vogel & Motulsky, 1997)- Se esse DNA consistisse apenas de genes
estruturais, isto , genes que codificam cadeias polipeptdicas, existiria cerca de
6 a 7 milhes de genes no genoma humano, nmero demasiadamente alto. Estima-se que
existam de 50.000 a 100.000* genes estruturais, sendo o restante constitudo de
outros tipos de DNA. A Tabela 2.3 apresenta os principais tipos de seqncias de
DNA e sua percentagem correspondente no genoma humano.

TABELA 2.2 TAMANHO DO GENOMA HAPLIDE DE ALGUNS ORGANISMOS

TABELA 2.3 TIPOS DE SEQUNCIAS DE DNA E RESPECTIVAS PERCENTAGENS
Organismo Pares de bases
SV40, vrus de DNA, de mamfero 4 x 103
Lambda, vrus de bactria 5 x 104
Escherichia coli, bactria 4 x 106
Saccharomyces cerevisiae, levedura 1,2 x 107
Caennorhabltis elegans, nematdio 1 x 108
Drosophila melanogaster, mosca, das frutas 1,2 x 108
Cromossomo 21, humanos 5 x 107
Cromossomo 1, humanos 3 x 108
Genoma haplide humano(a) 3 x 109
a Metade do total de pares de bases do DNA em uma clula somtica humana.
Fonte: Gelehrter e cols (1998)

DNA nuclear
Os principais tipos de DNA nuclear dos eucariotos so: DNA no-repetitivo, DNA
moderadamente repetitivo e DNA altamente repetitivo.
O DNA no-repetitivo consiste de seqncias individuais presentes em apenas uma
cpia por genoma, contendo os genes estruturais. A distribuio desses genes varia
muito entre os diferentes cromossomos e em certas regies cromossmicas, dado que
as regies centromricas e heterocromticas contm poucos genes estruturais,
estando a maioria deles localizada em regies subtelomricas (regies cromossmicas
situadas entre o centrmero e as extremidades dos cromossomos; para maiores
detalhes, ver Captulo 4). Os genes estruturais codificam polipeptdios que
integram enzimas, hormnios, receptores e protenas estruturais e reguladoras.
O DNA moderadamente repetitivo consiste de pequeno nmero de cpias por genoma,
contendo as famlias multignicas. Muitos genes apresentam funes similares, tendo
surgido pela duplicao, com consequente divergncia evolutiva. Alguns fazem parte
de grupamentos, enquanto outros esto espalhados pelo genoma, constituindo as
referidas famlias multignicas, as quais abrangem dois tipos:

NO-REPETITIVO Cpia nica

Genes estruturais 60-70%
MODERADAMENTE REPETITIVO
Pequeno nmero de cpias
Famlias multignicas:
Famlias gnicas clssicas Superfamlias gnicas
ALTAMENTE REPETITIVO 30-40%
Repeties em tandem Satlite 10-15%
Minissatlite
Telomrico
Hipervarivel
Microssatlite
Disperso 10-15%
Pequenos elementos nucleares dispersos (SINE) Longos elementos nucleares dispersos
(LINE)
Mitocondrial
Fonte: Mueller e Young (1998), modificada.
(a) Famlias gnicas clssicas, que apresentam alto grau de homologia em suas
seqncias, tendo se originado por duplicao. Exemplos: (1) os numerosos genes que
codificam os diversos RNAs ribossmicos e agrupam-se nas regies organizadoras de
nuclolos, nos braos curtos dos cinco cromossomos autossmicos acrocntricos
(cromossomos 13, 14, 15 do grupo D; 21 e 22 do grupo G; ver Captulo 4); (2) as
famlias gnicas que codificam os diferentes RNAs transportadores, localizadas em
numerosos conjuntos dispersos por todo o genoma.
(b) Superfamlias gnicas, compostas por genes com funes muito semelhantes que se
originaram por duplicao a partir de um gene precursor e posterior divergncia. Os
exemplos mais conhecidos so: (1) superfamlia do sistema HLA, localizada no brao
curto do cromossomo 6; (2) superfamlia dos receptores das clulas T, que tm
homologia estrutural com os genes para as imunoglobulinas.
O DNA no-repetitivo e o moderadamente repetitivo constituem 60 a 70% do genoma
humano.
Existem genes semelhantes aos estruturais, que, no entanto, no so expressos
funcionalmente. Tais genes denominam-se pseudogenes e parecem ter surgido por
duplicao e aquisio de muitas mutaes nos elementos codificadores e
reguladores, ou pela insero de seqncias de DNA complementares, s quais
faltam as seqncias promotoras necessrias para sua expresso.
O DNA altamente repetitivo consiste de sequncias muito repetidas no genoma, que
no so transcritas, totalizando 30 a 40% deste ltimo. O DNA altamente repetitivo
consiste sobremaneira de DNA satlite e sequncias de DNA dispersas por todo o
genoma. Esse DNA no-transcrito denominado DNA intergnico, e sua funo ainda
pouco conhecida. Sabe-se que algumas seqncias localizadas nas proximidades de
genes estruturais so cruciais para a expresso destes ltimos, mas a maior
quantidade parece dispensvel ou de funo ainda no-esclarecida.
(a) Repeties em tandem (nas quais o incio de uma repetio ocorre imediatamente
adjacente ao final de outra): consistem de muitas repeties de sequncias de DNA
no-codificadoras, que podem estar em locais restritos do genoma ou muito
dispersas. Podem dividir-se em trs subgrupos:
(a. 1) - DNA satlite - abrange cerca de 10 a 15% do DNA altamente repetitivo e
consiste de sries muito longas de seqncias repetidas em tandem, situadas nas
proximidades dos centrmeros de alguns cromossomos (1, 9, 16, Y, por exemplo). No
deve ser confundido com o satlite dos cromossomos acrocntricos (ver Captulo 4);
sua denominao origina-se do fato de, na centrifugao em um gradiente de
densidade de cloreto de csio, separar-se como um satlite do restante do genoma.
Alguns autores desconhecem sua funo, outros atribuem-lhe funo reguladora.
(a.2) - DNA minissatlite - consiste de duas famlias de seqncias curtas de DNA,
repetidas em tandem: (1) DNA telomrico, situado na poro terminal das
extremidades cromossmicas (telmeros) e consiste em 10 a 15 quilobases (kb) de
repeties em tandem de uma sequncia de DNA de 6 pares de bases (pb) (TTAGGG);
esse DNA necessrio para a integridade cromossmica na replicao e adicionado
ao cromossomo por uma enzima especfica denominada telomerase; (2) DNA
minissatlite hipervarivel, que ocorre nas proximidades dos telmeros e em outros
locais dos cromossomos. altamente polimrfico, consiste de uma seqncia de 9 a
24 pb. Contm uma seqncia central comum, que a base para a impresso digital
(fingerprinting) do DNA, a qual tem aplicao na identificao de indivduos e em
medicina forense (ver Captulo 17).
(a.3) - DNA microssatlite - consiste de repeties em tandem de um, dois, trs ou
quatro nucleotdios, dispersas no genoma. Raramente ocorrem no interior das
seqncias codificadoras, mas repeties de trs nucleotdios prximos aos genes
esto associadas a certas doenas hereditrias, como a doena de Huntington, o
retardo mental ligado ao X frgil e a distrofia miotnica (ver Captulo 5).
(b) DNA disperso (sua repetio no ocorre em tandem): responde por 10 a 15% do
genoma humano, sendo dividido em dois subtipos:
(b.1) Pequenos elementos nucleares dispersos ou elementos curtos intercalados
(SINE, do ingls short interspread nuclear elements) cerca de 5% do genoma
consiste de aproximadamente 750.000 cpias desses elementos. Um dos tipos mais
importantes de SINE a famlia Alu ou repeties Alu, cuja denominao deve-se ao
fato de que essas repeties, que tm cerca de 300 pb de tamanho, contm uma
sequncia de DNA que pode ser cortada pela enzima de restrio Alu I (ver Captulo
17). Uma caracterstica importante das sequncias Alu sua capacidade de se
autoduplicar, podendo inserir-se em outras regies do genoma, interrompendo, s
vezes, um gene que codifica uma dada protena e acarretando, assim, uma doena
gentica.
(b.2) - Longos elementos nucleares dispersos ou elementos longos intercalados
(LINE, do ingls long interspread nuclear elements) - tambm abrangendo cerca de 5%
do genoma, consistem, em sua forma mais comum (LINE-1 ou elemento L1), de 50.000 a
100.000 cpias de uma seqncia muito longa de DNA, com cerca de 6.000 pb, que
ocorre a cada 50 kb e codifica uma transcriptase reversa (enzima que transcreve
reversamente o RNA em DNA).
As funes do DNA disperso ainda no so bem conhecidas. Os membros da famlia Alu
so flanqueados por pequenas sequncias de repetio direta e, portanto,
assemelham-se a sequncias de DNA instveis, denominadas elementos transponveis ou
transpsons. Tais elementos, identificados primeiramente em milho, movem-se
espontaneamente ao longo de todo o genoma, de um cromossomo para outro, tanto em
plantas quanto em animais. Postula-se que tanto as repeties Alu como os elementos
L1 acarretariam mutaes patognicas, encontradas em vrias doenas humanas
hereditrias, como, por exemplo, a hipercolesterolemia familiar.
At o presente, no h uma explicao inteiramente satisfatria para a vasta
quantidade de DNA altamente repetitivo no genoma humano, parecendo ter pouca ou
nenhuma funo e pouco contribuindo para o fentipo. Da sua denominao de DNA
egosta, que se preserva a si prprio, como conseqncia da seleo dentro do
genoma.

DNA mitocondrial (DNAmt)

O DNA mitocondrial um DNA circular de cadeia dupla, existente no interior das

mitocndrias, organelas produtoras de energia localizadas no citoplasma de
praticamente todas as clulas eucariticas. Esse DNA
no apresentacrossing-over, ntrons e arcabouo de histonas, nem sistema de reparo;
existe em muitas cpias por mitocndria e por clula, de herana materna e sofre
alta exposio aos radicais livres de oxignio.
As clulas eucariticas contm um nmero varivel de mitocndrias, dependendo
da energia necessria para a realizao de suas funes: quanto maior essa
necessidade, como nos msculos e no crebro, por exemplo, maior a quantidade de
mitocndrias existente no citoplasma celular.
As mitocndrias apresentam, via de regra, forma cilndrica alongada, com
dimetro de 0,5 a 1,0 m, mas so organelas dotadas de grande mobilidade e
plasticidade, mudando constantemente de forma e podendo fundir-se umas s outras e
separar-se posteriormente.
Cada mitocndria formada por uma matriz limitada por duas membranas, uma
externa e outra interna. Esta ltima apresenta dobramentos para dentro, formando
cristas que aumentam internamente sua superfcie total (Figura 2.5A).
As mitocndrias constituem a nica fonte de DNA extranuelear na espcie
humana. Cada uma contm, em sua matriz, cinco a 10 cpias de DNA circular, auto-
replicativo e superenrolado, o DNA mitocondrial (DNA-mt), que pouco difere do DNA
nuclear em seu cdigo gentico. Essas diferenas consistem no seguinte: UGA
codifica triptofano, em vez de cdon finalizador do gene; AUA codifica metionina,
no isoleucina; AGA e AGG so
cdons de finalizao e no cdons para arginina; as bases da 3 posio so
A ou C mais freqentemente, em vez de G ou T, como no genoma nuclear. O DNAmt
muito compacto, contm cerca de 16 kb, codificando dois genes para RNA ribossmico,
22 para RNA transportador e 13 genes para polipeptdios que constituem parte das
enzimas envolvidas na fosforilao oxidativa para a produo de ATP (trifosfato de
adenosina), j que muitas enzimas mitocondriais so codificadas por genes nucleares
e contm pouco DNA repetitivo. A Figura 2.5B mostra, o DNAmt humano, com a
localizao dos respectivos genes.
A taxa de mutao do DNAmt quase 20 vezes mais alta do que a do DNA nuclear,
provavelmente devido grande produo de radicais livres de oxignio (mutagnicos)
nas mitocndrias e sua limitada capacidade de reparo.
O DNAmt atraiu a ateno de muitos pesquisadores, quando foi publicado um
artigo por Cann e colaboradores, em 1987, no qual era sugerido que a espcie humana
descenderia de uma nica mulher africana que teria vivido h 200.000 anos. Essa
hiptese baseava-se no fato de que as mitocndrias so exclusivamente de herana
materna e o acmulo de mutaes nesse DNAmt pode ser utilizado como um relgio
evolutivo. Ele tambm importante sob outros aspectos, como, por exemplo, o da
sua relao com algumas doenas. Os bilhes de molculas do DNAmt de qualquer
indivduo

FIGURA 2.5 Representao esquemtica de uma mitocndria e do DNA mitocondrial

(DNAmt). A - mitocndria e seus principais componentes: (a) matriz; (b) membrana
interna; (e) membrana externa; (d) espao intermembranas. (Fonte: Alberts e cols.,
1999.) B - DNA mitocondrial (DNAmt) humano, mostrando 22 genes para RNAt (em
vermelho), 2 para RNAr (12S RNAr e 16S RNAr) e 13 regies codificadoras de
protenas relacionadas com a respirao (ND1, ND2, CO1, CO2, ATPase 8, ATPase 6,
CO3, ND3, ND4L, ND4, ND5, ND6 e Cyt b). As setas indicam a direo da transcrio.
CO = citocromo-oxidase; Cyt b = citocromo b; Ala D = regio do DNAmt na qual um
curto segmento de RNA pareia com uma das cadeias de DMA; kb = quilobases; ND = NADH
desidrogenase. (Fonte: Lewin, 2000.)

so geralmente idnticas e de herana materna, pois o espermatozide contm

escasso citoplasma, com poucas mitocndrias. Assim, uma doena causada por mutao
no DNAmt herdada exclusivamente da me. Assim, apenas as mulheres podem
transmitir as doenas mitocondriais, passando as mutaes para toda a sua prole de
ambos os sexos. No entanto, essa transmisso no parece ser to simples, pois a
expresso de alguns genes mitocondriais depende da interao com genes nucleares,
cujo mecanismo ainda obscuro. Dado que o DNAmt replica-se independentemente do
DNA nuclear e as mitocndrias segregam-se nas clulas-filhas tambm de forma
independente dos cromossomos nucleares, a proporo de mitocndrias que porta uma
mutao no DNAmt pode diferir entre as clulas somticas. Essa heterogeneidade
denominada heteroplasmia e tem importante papel no fentipo varivel das doenas
mitocondriais.
Alm disso, os tecidos diferem em sua dependncia da fosforilao oxidativa,
sendo mais dependentes o corao, os msculos esquelticos e o sistema nervoso
central. Portanto, as doenas mitocondriais caracterizam-se com mais freqncia por
miopatias e encefalopatias, problemas dos msculos e do crebro, respectivamente.
Por fim, a fosforilao oxidativa declina com a idade, talvez devido ao acmulo de
mutaes no DNAmt. Assim, o fentipo clnico, nas doenas mitocondriais (como, por
exemplo, a neuropatia ptica hereditria de Leber, cardiomiopatia hipertrfica com
miopatia e diabete com surdez de herana materna; ver Captulo 5), no est direta
ou simplesmente relacionado ao gentipo do DNAmt, mas reflete vrios fatores, como
os j mencionados.

RNA

Tipos

Existem quatro tipos principais de RNA, todos transcritos de moldes de DNA por
RNA-polimerases e com a mesma estrutura qumica bsica. Eles tm tamanhos
diferentes e possuem seqncias de bases desiguais que determinam funes
especficas.

RNA heterogneo nuclear (RNAhn), pr-RNA mensageiro (pr-RNAm), RNA primrio

ou transcrito primrio
 Este tipo de RNA encontrado apenas em eucariotos e seu tamanho pode variar
de 5.000 a 50.000 nucleotdios. o primeiro passo da transcrio (da tambm ser
denominado s vezes transcrito primrio), forma-se a partir do DNA e grande parte
dele nunca sai do
ncleo. Fisicamente, corresponde a uma partcula ribonucleoprotica, na qual o
RNAhn mantm-se ligado a protenas; in vitro, essa partcula toma a forma de
pequeninas contas ou glbulos.
O RNAhn formado por regies codificadoras que so transcritas e traduzidas
(xons) e regies no-codificadoras que so transcritas, mas que no so traduzidas
(ntrons), por isso ele muito mais longo do que a informao que codifica. Os
ntrons so segmentos de RNAhn eliminados ainda no ncleo, como parte do
processamento do RNA mensageiro. Essa eliminao realizada por pequenas molculas
de RNA que funcionam como enzimas, denominadas ribozimas. Aps a exciso dos
ntrons, os segmentos remanescentes (os xons) renem-se para formar o RNA
mensageiro. A exciso dos ntrons e a reunio dos xons fazem parte desse
processamento, conforme mostrado na Figura 2.6.
Cerca de 90% do RNAhn degradado durante este evento e os restantes 10% so
reunidos no RNA mensageiro, que se dirige ao citoplasma por intermdio dos poros da
membrana nuclear. Ainda so ignoradas as razes pelas quais as funes dos ntrons
e os genes no so contnuos. Uma hiptese a de que os ntrons sirvam como
espaadores para facilitar a recombinao entre os xons. Provavelmente, a
organizao de xons e ntrons tenha sido nos primrdios evolutivos dos genes,
supondo-se que as seqncias de ntrons tenham propiciado o surgimento de novas e
teis protenas. O nmero de ntrons altamente varivel, mas nem todos os genes
os possuem, como, por exemplo, os genes que codificam as histonas (protenas
bsicas que, juntamente com o DNA e outros componentes, constituem os cromossomos).

FIGURA 2.6 Transcrio do DNA cm RNA heterogneo e processamento do RNA mensageiro.

(Fonte: Lewis, 1997.) Explicaes no texto.

RNA mensageiro (RNAm)

O RNA mensageiro transfere a informao contida nos genes estruturais para as

seqncias de aminocidos que formam os polipeptdios.
O RNAm, aps ser processado a partir do pr-RNAm, constitui-se apenas de
xons, relativamente estvel e possui de 350 a 5.000 nucleotdios.
Durante seu processamento, pode ocorrer o capping, isto , a adio de um
nucleotdio especfico modificado (uma guanina metilada), denominado de 7-
metilguanosina, trifosfato de guanosina ou cap, extremidade 5' do RNAm, no
ncleo. Esse evento parece ter grande efeito na traduo do RNAm, pois confere
vantagem ao seu transporte para o citoplasma e sua ligao aos ribossomos, alm
de proteg-lo da degradao pelas exonucleases celulares endgenas.
Outra modificao ps-transcrieional do RNAm a adio de aproximadamente
200 nucleotdios de adenina sua extremidade 3' (poliadenilao), aps a
transcrio, constituindo a chamada seqncia poli-A ou cauda poli-A. Tal adio
ocorre na regio flanqueadora no-traduzida, cerca de 18 a 20 pb abaixo de uma
seqncia de seis nucleotdios, denominada sinal AAUAA. Existe uma hiptese de que
esta seqn-
cia tambm esteja associada maior facilidade de transporte do RNAm para o
citoplasma e sua estabilidade no momento em que chega ao citoplasma, dando-lhe mais
resistncia digesto por exonucleases celulares endgenas. Estes eventos esto
representados na Figura 2.7.

FIGURA 2.7 Processamento do RNA mensageiro em eucariotos: capping e

poliadenilao. (Fonte: Alberts e cols., 1999, codificada.)
RNA transportador ou RNA de transferncia
(RNAt)

E tambm transcrito do DNA, sendo relativamente pequeno, com 70 a 90

nucleotdios. estvel, sendo uma molcula altamente especializada e importante
para a sntese de protenas; sua configurao torna-o apto a reconhecer e a ligar-
se a aminocidos, por uma de suas extremidades, e a cdons determinados rio RNAm,
pela outra extremidade. Algumas das bases do RNAt estabelecem ligaes fracas entre
si, fazendo com que esse RNAt forme alas, que lhe conferem um aspecto de folha de
trevo. Cada aminocido possu um ou mais RNAt que lhe so especficos. Tal
especificidade depende de uma srie de enzimas complexas, as aminoacil-RNAt-
sintetases, havendo uma destas para cada aminocdo. Em uma das alas do RNAt
existe uma seqncia de trs bases que so complementares a um conjunto de igual
nmero de bases no RNAm. As bases do RNAm denominam-se cdon, enquanto as do RNAt,
anticdon. Este ltimo o responsvel pelo reconhecimento do cdon correto (Figura
2.8).

RNA ribossrnico (RNAr)

Este tipo de RNA, sintetizado nos nuclolos, associa-se a certas protenas

ribossmicas sintetizadas no citoplasma e transportadas para os nuclolos, formando
os ribossomos, nos quais se d a traduo gentica, ou seja, a sntese protica.
Essas organelas celulares so compostas de mais de 50 protenas diferentes e de
diversas molculas de RNAr, existindo milhes delas em uma clula viva tpica.
Os ribossomos so constitudos de duas subunidades de tamanhos diferentes,
produzidas no nuclolo, que esto comumente separadas no citoplasma, juntando-se no
local da sntese protica. Os tamanhos dessas subunidades so determinados pelo
coeficiente de sedimentao (S), que a medida da velocidade com que uma partcula
sofre sedimentao, quando ultracentrifugada. Quanto maior o valor de S, maior ser
a molcula.
Os ribossomos dos procariotos consistem de partculas de SOS e 50S que,
quando juntas, comportam-se como uma partcula de 70S. Os ribossomos. dos
eucariotos so um pouco maiores, a subunidade maior apresentando 60S e a menor,
40S; quando unidas, comportam-se como uma partcula de 80S (Figura 2.9). Cerca da
metade do contedo ribossrnico constitudo pelo RNAr, que contm de 100 a 5.000
nucleotdios,

FIGURA 2.8 Representao esquemtica do RNA transportador. As bases identificadas

na figura so praticamente invariantes. As denominaes dos braos D e T referem-se
s bases T (pseudo-uridina) e D (diidrouridina), derivadas do uracil. (Fonte:
Lewin, 2000, modificada.) Explicaes no texto.

70S
massa: 2,5 x 106
dltons
66% RNAr
80S
massa: 4,2 x 106 dltons 60% RNAr
23S = 2904 bases 31 5S =120 bases
16S = 1542 bases 21
28S =4718 bases 5.8S = 160 bases 5S = 120 bases
18S = 1874 bases 33
FIGURA 2.9 Representao esquemtica dos ribossomos de procariotos e eucariotos.
(Fonte: Lewin, 2000.)

sendo o restante do seu contedo de protenas ribossmicas especficas.

O RNAr desempenha um papel ativo na funo ribossmica, pois interage com o
RNAt e o RNAm em cada etapa da traduo, facilitando o reconhecimento entre cdons
e antiedons e auxiliando na ligao desses RNAs aos ribossomos.

FUNES DO DNA

O DNA tem funo autoduplicadora

de fundamental importncia que o material gentico seja capaz de

autoduplicao ou auto-replicao e que esta se d corretamente a cada diviso
celular.
Como as cadeias polinucleotdicas so unidas apenas por pontes de hidrognio,
elas so facilmente separveis. No momento da replicao, essas ligaes se rompem
e a dupla hlice abre-se, com o auxlio de enzimas denominadas DNA-helicases,
ficando com os seus terminais livres para se ligarem a novos nuceotdios
especficos. Cada filamento dirige e serve de molde para a sntese de um novo
filamento, por complementaridade do pareamento de bases, a partir de nucleotdios
presentes no ncleo da clula. O princpio do pareamento complementar de bases
estabelece que uma base no pareada atrai um nucleotdio livre somente se ele lhe
for complementar. Os nucleotdios so unidos por
ao da enzima DNA-polimerase, sendo ligados ao filamento-molde por novas pontes de
hidrognio, com o auxlio de outra enzima, a DNA-ligase. A DNA-polimerase tambm
faz um procedimento de reviso ou reparo, no qual um nucleotdio recm-adicionado
conferido para que haja certeza de sua complementaridade base do filamento-molde.
Caso negativo, esse nucleotdio removido e substitudo pelo nucleotdio
complementar correto. Tal procedimento refora a preciso da replicao do DNA. No
caso de no haver esse reparo, caracteriza-se uma mutao.
A duplicao do DNA passvel de se iniciar, ao mesmo tempo, em vrios
pontos do filamento, podendo ser uni ou bidirecional. O ponto no qual ela se
origina denominado forquilha de replicao ou ponto crescente. O primeiro passo
na replicao do DNA ocorre quando uma helicase rompe as pontes de hidrognio,
mantendo junto um par de bases, em um stio de iniciao. Outra enzima, conhecida
como primase, atrai nucleotdios de RNA complementares, para formar uma pequena
seqncia de RNA, denominada de primer, desencadeador ou iniciador do RNA, no
incio de cada segmento de DNA a ser duplicado. Esse primer de RNA necessrio,
pois o DNA no pode iniciar uma nova cadeia de cido nuclico por si prprio. O
primer de RNA atrai a DNA-polimerase, que-ento traz os nucleotdios complementares
s bases expostas no filamento-molde de DNA. A nova cadeia de DNA comea a crescer,
medida que se formam as ligaes de hidrognio entre as bases complementares. O
primer de RNA removido enzimaticamente, sendo substitudo pelas bases corretas do
DNA. As ligaes necessrias entre os nucleotdios da nova cadeia de DNA so
realizadas cataliticamente pelas ligases.
Na replicao unidirecional, a forquilha de replicao parte da origem e
prossegue ao longo do DNA. Na bidirecional, formam-se duas forquilhas de replicao
e elas partem da origem, uma em direo outra, at se encontrarem (Figuras 2.10 e
2.11A). As forquilhas de replicao mais prximas entre si esto separadas por
cerca de 30 a 300kb e ocorrem em unidades de replicao que contm entre 20 e 80
origens de replicao (ou forquilhas de replicao). Assim, a replicao do DNA
realiza-se deseontinuamente, com posterior unio pela DNA-ligase entre os pequenos
segmentos recm-formados. Os menores segmentos, com no mximo 150 nucleotdios, so
denominados de fragmentos de Okazaki, em homenagem ao seu descobridor (Figura
2.11B).
Vista ao microscpio eletrnico, a regio replicada aparece como um olho ou
uma bolha dentro do DNA no-duplicado. medida que a replicao prossegue, uma
determinada bolha expande-se at encontrar outras bolhas, s quais se funde (Figura
2.11A).
Completadas as novas ligaes, cada uma das molculas recm-formadas de DNA
tem uma das cadeias originais e outra proveniente dos novos nueleotdios.

FIGURA 2.10 Replicao do DNA. A - Forquilha de replicao ou ponto crescente:

ponto dc origem da replicao do DNA. B - A replicao pode ser uni ou
bidirecional, segundo se formem, na origem, uma ou duas forquilhas de replicao.
(Fonte: Lewin, 2000.)
dios. Por essa razo, a duplicao do DNA chamada de semiconservativa (Figura
2.12).
Em geral, a replicao inicia-se em diferentes momentos da fase S da interfase do
ciclo celular, at que todo o DNA se duplique, formando duas molculas-filhas
completas. Ao fim dessa replicao que tem incio a diviso celular. a
autoduplicao que garante a transmisso do material gentico de uma clula para as
suas descendentes.
O DNA comanda a sntese de protenas
O DNA tambm responsvel pela sntese das protenas necessrias ao funcionamento
celular.

FIGURA 2.11 A - Etapas da replicao do DNA. As cadeias parentais so mostradas em

vermelho-escuro para distingui-las do novo DNA replicado, apresentado em cor
vermelho-claro. A replicao comea com o desenrolamento da dupla hlice, em vrios
pontos de origem, e a sntese dos prmers de RNA. A DNA-polimerase estende os
primers, que so substitudos depois pelo DNA e as pequenas seqncias replicadas
so unidas pela DNA-ligase.
FIGURA 2.11 B - Replicao do DNA, mostrando os fragmentos de Okazaki, que
posteriormente so unidos pela DNA-ligase. (Fonte: Lewis, 1997.)

FIGURA 2.12 Replicao semconservativa do DNA. Cada uma das cadeias de DNA usada
como molde para a formao de uma nova cadeia complementar; assim, cada molcula
recm-formada de DNA conserva uma das cadeias originais unida a outra proveniente
dos novos nucleotdios.
O nmero de protenas de um organismo muito grande, mas elas podem ser
agrupadas nos seguintes tipos, de acordo com sua funo:
a) Protenas estruturais - so responsveis pela forma dos organismos, pois
constroem as paredes celulares e as membranas nucleares, fazendo parte, ainda, do
contedo citoplasmtico e de suas organelas.
b) Enzimas - so protenas especializadas na catalise de reaes biolgicas.
Apresentam uma extraordinria especificidade e esto envolvidas nas atividades
metablicas celulares, controlando toda a fisiologia do organismo.
c) Anticorpos - so protenas responsveis pela defesa do organismo. Sua
funo eliminar estruturas proticas estranhas, desempenhando, portanto, um papel
importante nas infeces e nos transplantes.
d) Hormnios - so protenas formadas em rgos especficos e transportadas
pelo sangue para outras regies do organismo, com a finalidade de regular o seu
funcionamento normal.
Dois aminocidos unem-se pelas ligaes peptdicas, formadas pela reao de um
grupo amino de um aminocido com o grupo carboxila do aminocido seguinte.

As seqncias da protena so convencionalmente escritas na ordem do

aminocido com o grupo NH2 livre (N terminal), correspondendo extremidade 5 do
filamento de RNAm, para o aminocido com o grupo COOH livre (C terminal),
correspondendo extremidade 3 do RNAm.
A seqncia de aminocidos que forma uma cadeia polipeptdica compreende a
estrutura primria da protena. A estrutura secundria produzida por dobramentos
da seqncia primria, devido a ligaes qumicas entre aminoeidos muito prximos
entre si, criando stios ativos ou aspecto estrutural. Essa estrutura secundria
confere organizao espacial ao esqueleto,pnlip.epdiccydandn-funcionalidade
molcula. A
estrutura terciria a organizao completa em trs dimenses de todos os tomos
na cadeia polipeptdica, em decorrncia da interao entre os aminocidos e a gua
circulante, incluindo os grupos laterais, bem como o esqueleto polipeptdico. Um
grau mais alto de organizao encontrado nas protenas multimricas, formadas por
agregados de mais de uma cadeia polipeptdica. A conformao assumida pela protena
multimriea a estrutura quaternria. A hemoglobina, por exemplo, uma protena
carreadora de oxignio situada nas hemcias, apresenta quatro cadeias
polipeptdicas; a ferritina, uma protena do fgado, tem 20 polipentdios
idnticos, com 200 aminocidos cada um; em compensao, a mioglobina, uma protena
muscular, apresenta uma nica cadeia polipeptdica.
Etapas da sntese protica
Transcrio: DNA -> RNAm
O processo pelo qual a informao gentica transmitida do DNA para o RNA
denomina-se transcrio.
Para formar uma cadeia de RNA, a dupla fita de DNA abre-se no sentido
longitudinal pela quebra das pontes de hidrognio, deixando livres os terminais das
bases. Os nucleotdios do RNA pareiam-se com os do DNA, obedecendo mesma
especificidade no pareamento das bases:
Bases do DNA Bases do RNA
G (guanina) C (citosina)
C (citosina) G (guanina)
T (timina) A (adenina)
A (adenina) U (uracil)
Esta nova cadeia que se forma usando um dos filamentos do DNA como molde o
RNA, que idntico em seqncia a uma das cadeias do DNA, que se denomina cadeia
codificadora, cadeia-sentido ou cadeia com sentido, e complementar outra cadeia
do DNA, a cadeia-molde ou cadeia anti-sentido, que
fornece o molde para sua sntese. A Figura 2.13 mostra a relao entre o DNA
de dupla cadeia e o RNA de cadeia simples.
A estrutura de um gene humano hipottico mostrada na Figura 2.14, na qual
se vem: a regio flanqueadora antecedente, que constitui o stio ou regio
promotora da transcrio do gene, o cdon de iniciao ou iniciador, os xons e os
ntrons, o cdon de finalizao ou finalizador e a regio flanqueadora subseqente,
com o sinal para a poliadenilao do RNA mensageiro (RNAm).
Existem pelo menos trs tipos de RNA-polimerase, enzima que catalisa a
sntese do RNA: (a) RNA-polimerase I, que transcreve o RNA ribossmico; (b) RNA-
polimerase II, que transcreve o RNA mensageiro; e (c) RNA-polimerase III, que
transcreve o RNA transportador e outros pequenos RNAs. A transcrio inicia-se
quando a enzima RNA-polimerase II liga-se ao promotor, stio promotor ou regio
promotora, que se situa a vrias centenas de pares de bases do local de incio da
transcrio. J foram identificadas diversas seqncias especficas do promotor
(denominadas boxes), sendo as seguintes as mais comuns: GC, TATA e CAAT. O promotor
circunda o primeiro par de bases que transcrito em RNA, o ponto de partida, e a
RNA-polimerase move-se ao longo da cadeia-molde at atingir um cdon
finalizador. A ao que se estende do stio promotor ao cdon finalizador define
uma unidade de transcrio. Seu aspecto crtico que constitui uma seqncia de
DNA expressa pela produo de uma nica molcula de RNA. A unidade de transcrio
pode incluir mais de um gene.
O produto imediato da transcrio denominado transcrito primrio, RNA
primrio, RNA heterogneo nuclear ou pr-RNAxn consiste de um RNA que se estende do
promotor ao cdon finalizador, na direo 5' para 3. Entretanto, esse transcrito
primrio quase sempre instvel: em procariotos, rapidamente modificado em RNAm
ou clivado em produtos maduros (RNAr e RNAt); em eucariotos, sofre vrias
modificaes em suas extremidades, dando origem ao RNAm.
A transcrio o primeiro estgio na expresso gnica e o primeiro passo no
qual essa expresso controlada. Existem protenas reguladoras que determinam se
um gene especfico est disponvel para ser transcrito pela RNA-polimerase. O
primeiro passo na regulao o da deciso sobre transcrever ou no um gene.
Durante a transcrio, distinguem-se as seguintes etapas:
(a)Reconhecimento do molde: comea com a ligao da RNA-polimerase II. ao
stio promotor do gene. As duas cadeias do DNA separam-se para constituir o molde,
criando-se a bolha de transcrio, devido a um desenrolamento que se inicia no
stio de ligao da RNA-polimerase II com o promotor.

(b) Iniciao: so sintetizadas e liberadas as primeiras seqncias, com dois

a nove nucleotdios; essa etapa termina quando a enzima libera-se do promotor e a
cadeia ultrapassa o comprimento mencionado; a seqncia de DNA necessria para a
RNA-polimerase II ligar-se ao molde e realizar a reao de iniciao define o
promotor.
(c) Elongao: a enzima move-se ao longo do DMA e alonga a cadeia de RNA;
medida que se move, a enzima desenrola a dupla hlice de DNA, expondo um novo
segmento da cadeia-molde, com o qual pareiam os nucleotdios da cadeia de RNA em
crescimento e, atrs dessa regio desenrolada, a cadeia-molde de DNA pareia com sua
cadeia complementar, para restabelecer
a dupla hlice. Finalmente, o RNA emerge como uma cadeia unifilamentar livre.
(d)Finalizao: supe o reconhecimento do ponto a partir do qual nenhuma base
mais adicionada cadeia de RNA. Quando a ltima base adicionada a essa cadeia,
tanto a RNA-polimerase II quanto a cadeia de RNA so liberadas, constituindo esta
ltima o RNA heterogneo nuclear ou pr-RNAm. A Figura 2.15 mostra a transcrio do
RNA a partir do DNA.
FIGURA 2.13 Relao entre o DNA de dupla hlice e o RNA de cadeia simples. A funo
da RNA-polimerase copia uma cadeia da dupla hlice de DNA em RNA. (Fonte: Lewin,
2000.)
FIGURA 2.14 Representao esquemtica de um gene estrutural humano tpico,
mostrando: a regio flanqueadora antecedente, que constitui o stio ou a regio
promotora da transcrio do gene; o cdon de iniciao ou iniciador da transcrio;
os xons e os ntrons; o cdon de finalizao ou finalizador; e a regio
flanqueadora subseqente, com o sinal para a poliadenilao do RNA mensageiro
(RNAm). (Fonte: Mueller e Young, 1998, modificada.)

Antes de sair do ncleo como RNAm, o pr-RNAm sofre vrias modificaes,

reunidas sob a denominao processamento ps-transcricional. A primeira delas a
emenda ou recomposio (splicing) do RNAm, que consiste na remoo de todos os
ntrons do pr-RNAm e juno dos xons no-contguos, formando, ao fim dessa etapa,
uma molcula de RNAm muito menor, funcional, com uma seqncia codificadora
ininterrupta formada s de xons, que sai do ncleo e localiza-se junto aos
ribossomos, no citoplasma.

FIGURA 2.15 Transcrio do RNA a partir do DNA. A - A dupla hlice de DNA abre-se e
fecha-se, possibilitando o acesso da RNA-polimerase, que transcreve a cadeia de DNA
codificadora em RNA. B - A mesma cadeia de DNA codificadora pode ser transcrita
vrias vezes simultaneamente.

Como feito o reconhecimento, pela clula, das partes do pr-RNAm (isto , os

ntrons) que devem ser
removidas? Ainda que nos diferentes organismos existam vrios tipos de recomposio
ou splicing, nos eucariotos superiores os ntrons apresentam pequenas seqncias de
nucleotdios iguais ou muito semelhantes, situadas nas suas extremidades ou
prximas a estas, denominadas pequenas seqncias de consenso (assim chamadas
porque so comuns a todos os genes
eucariotos), que atuam como sinal para a sua remoo. As extremidades dos ntrons
consistem de um stio 5 doador da emenda, formado pelo dinucleotdio GU (tambm
representado por GT, como no DNA) e um stio 3 aceptor da emenda, formado pelo
dinucleotdio AG (ver Figura 2.16). A presena constante desses nuceotdios nas
duas primeiras posies (GU no RNA, GT no DNA)) e nas duas ltimas (AG) dos ntrons
dos genes nucleares denominada regra GT-AG.
Os ntrons so removidos do pr-RNAm pelos snurps, que so pequenas partculas
de ribonucleoprotena nuclear (snRNPs, do ingls small nuclear rbonucleoproteins,
snurps). A funo dos snRNPs aproximar as duas extremidades de um ntron, para
que sua remoo possa ocorrer. Essa remoo mostrada na Figura 2,17 e d-se da
seguinte maneira: (a) em cada ntron, um grupo de snurps liga-se ao RNA e corta o
ntron na sua extremidade 5 (stio 5 doador da emenda), separando o xon da
esquerda (xon 1) e o conjunto ntron-xon da direita (ntron-xon 2); (b) o xon .
1. mostra-se como uma molcula linear e o conjunto ntron-xon 2 toma a forma de um
lao ou ala; para tanto, uma base especfica (adenina) situada no interior do
ntron, na seqncia denominada de stio de ramificao da emenda, une-se
extremidade 5 gerada pelo corte no ntron, dando a este ltimo a forma de lao ou
ala; (c) a extremidade 3 do xorn 1 reage com a extremidade 5 do xon 2.
cortando o ntron em sua extremidade 3 e liberando esse ntron em forma de lao ou
ala, ao mesmo tempo ligando ambos os xons; o lao desfeito, dando origem a um
ntron linear excisado, que rapidamente degradado.
As outras modificaes que ocorrem no RNAm so o capping, na sua extremidade
5, e a poliadenilao na sua extremidade 3, j descrita, A Figura 2.18 mostra
esquematicamente o processamento ps-transcricional do RNAm.
A molcula desse cido nuclico leva o cdigo do DNA (a mensagem) at os
ribossomos, no citoplasma.
Transcrio reversa: RNA DNA
Inicialmente, acreditava-se que a informao gentica era transcrita apenas
do DNA para o RNA e, ento, traduzida em protena. Entretanto, a partir do estudo
de certos vrus cujo material gentico o RNA, denominados retrovrus, existem
evidncias de que estes ltimos so capazes de reverter o fluxo no processo normal
de informao do DNA para o RNA. Tal processo feito graas enzima transcriptase
reversa, que capaz de sintetizar uma cadeia dupla de DNA, copiando o RNA do
cromossomo viral. O DNA chamado de pro vrus e incorporado ao DNA do hospedeiro,
durante o ciclo vital do vrus.Esse processo referido como transcrio reversa ou
sntese de DNA dirigida pelo RNA. A homologia entre seqncias de oncogenes humanos
e retrovirais (ver Captulo 12) poderia representar uma evidncia desse mecanismo e
constituir uma importante abordagem teraputica no tratamento das doenas
hereditrias em humanos (ver Captulo 17).
A Figura 2.19 mostra a concepo atual dos papis da replicao, transcrio
e traduo do DNA no dogma da gentica-molecular.

Traduo: RNAm > cadeia polipeptdiea

A traduo o segundo evento na sntese protica, consistindo na transmisso

da informao gentica do RNAm para um polipeptdio.
A Figura 2.20 ilustra esquematicamente esse processo, do qual participam
muitos componentes celulares: RNAm, RNAt, ribossomos (RNAr + protenas),
aminocidos, molculas de armazenamento de energia (ATP) e vrios fatores
proticos.
(1) O RNAm leva a mensagem copiada do DNA at os ribossomos, organelas
citoplasmticas situadas nas paredes do retculo endoplasmtico e local da sntese
protica, ocorrendo, ento, o incio da traduo. Uma curta seqncia de bases no
incio de cada RNAm, denominada seqncia-lder, habilita-o a ligar-se s pequenas
subunidades dos ribossomos por meio de pontes de hidrognio. O primeiro cdon do
RNAm a especificar um aminocido AUG, que atrai um RNAt iniciador, o qual
transporta o aminocido metionina (met).esse aminocido, portanto, o incio da
cadeia polipeptdica, sendo geralmente removido antes do trmino de sua sntese. A
pequena subunidade do ribossorno, o RNAm a ela ligado e o RNAt iniciador com seu
aminocido metionina formam o complexo de iniciao.
FIGURA 2.16
Seqncias de nucleotdios que sinalizam o incio (stio 5' doador da emenda) e o
fim (stio 3 aceptor da emenda) de um ntron. (Fonte; Alberts e cols., 1999.)
Explicaes no texto.

FIGURA 2.17 Splicing, emenda ou recomposio do RNAm, que consiste na remoo de

todos os ntrons do pr-RNAm e juno dos xons no-contguos. snRNP = pequena
ribonucleoprotena nuclear; A = adenina. (Fonte: Alberts e cols., 1999,
modificada.) Explicaes no texto.

Para que se incorporem cadeia polipeptdica em formao, os aminocidos devem ser

primeiramente ativados, reagindo com molculas de ATP. Cada aminocido assim
ativado liga-se, ento, a uma extremidade do RNAt especfico, que identificado
pelo seu anticdon. Este ltimo faz um pareamento complementar de bases com um
cdon adequado do RNAm. Assim, o RNAm especifica a seqncia de aminocidos,
atuando por intermdio do RNAt.
(2)O RNAt transporta os aminocidos ativados at os ribossomos, organizando-os
segundo a seqncia de nucleotdios contida no RNAm e que foi transcrita do DNA.

FIGURA 2.18 Processamento do RNA mensageiro. O RNAhn ou transcrito primrio

modificado no ncleo, mediante acrscimos nas extremidades 5 (cap) e 3 (poli-A) e
splicing para remover os ntrons. O splicing ou recomposio do RNA exige quebra
das junes entre xons e ntrons contguos e reunio das extremidades dos xons.
Por meio dos poros da membrana nuclear, o RNAm transportado para o citoplasma,
onde traduzido. (Fonte: Lewin, 2000.)

FIGURA 2.19 Concepo atual dos papis da replicao, transcrio e traduo do

DNA, no dogma central da gentica molecular. A replicao responsvel pela
herana da informao gentica; a transcrio e a traduo so responsveis pela
sua converso em protena. A transcrio do DNA em RNA pode ser reversvel, mas a
traduo do RNA em protena irreversvel. (Fonte: Lewin, 2000.) Mais explicaes
no texto.
(3) Os ribossomos mantm o controle da sntese,
de tal forma que os aminocidos sejam reunidos na mesma ordem determinada pelos
cdons do DNA. Esse controle feito pelo RNA ribossmico.
(4) Na elongao da traduo, a grande subunidade do ribossomo une-se ao complexo
de iniciao. Depois do primeiro aminocido trazido pelo respectivo RNAt, um
segundo RNAt transporta at esse complexo outro aminocido, o qual, com o auxlio
da enzima peptidil-transferase, forma uma ligao peptdica com o primeiro. Assim,
a pequena subunidade ribossmica est associada ao RNAm, e a grande subunidade,
cadeia polipeptdica recm-iniciada. Nesse momento, o primeiro RNAt liberado para
buscar outra metionina, que poder ser utilizada ou no na cadeia polipeptdica. E
assim se processam os demais passos da elongao da traduo.
(5) Durante a formao da cadeia polipeptdica, os ribossomos movem-se ao longo do
RNAm, traduzindo cada um dos cdons.
A medida que os RNAt vo sendo liberados pelos ribossomos, eles podem ser
reutilizados no transporte de outros aminocidos que lhes so especficos. A
traduo continua at que a mensagem seja lida por inteiro, e o trmino da sntese
d-se quando encontrado um cdon finalizador no RNAm. H fatores de liberao que
auxiliam a cadeia polipeptdica recm-formada a se desligar do ribossomo. Uma vez
liberada essa cadeia, o ribossomo une-se a um novo ponto de partida de uma molcula
de RNAm.
Durante a traduo, depois que. um ribossomo percorreu um certo trecho ao longo do
RNAm, um segundo ribossomo pode se ligar a este, o que possvel de ocorrer em um
espao de cerca de 70 a 90 nueleotdios entre os ribossomos. Assim, uma molcula de
RNAm de 450 nucleotdios, como, por exemplo, um polipeptdio da hemoglobina, pode
ter cinco ou seis ribossomos unidos simultaneamente durante a traduo, cada um
sintetizando um polipeptdio separado. Esses grupos de ribossomos so denominados
de polirribossomos ou polissomos.
A sntese protica econmica. Uma clula pode produzir grandes quantidades de uma
determinada protena apenas com uma ou duas cpias de um gene. Uma clula
plasmtica do sistema imunolgico humano, por exemplo, pode produzir 2.000
molculas de anticorpo idnticas por segundo. Para essa produo em massa, RNAs,
ribossomos, enzimas e outros componentes celulares devem ser reciclados. Muitos
RNAm podem ser transcritos de um nico gene, assim como um RNAm pode ser traduzido
por vrios ribossomos simultaneamente, cada um em um ponto diferente ao longo da
mensagem, resultando polipeptdios de diferentes comprimentos. O nmero de vezes
que qualquer RNAm pode ser traduzido uma funo da afinidade de seu stio de
iniciao pelos ribossomos e de sua estabilidade (o RNAm de bactrias tem uma meia-
vida de alguns minutos; o RNAm de eucariotos geralmente estvel por vrias
horas).
Muitas cadeias polipeptdicas, antes de atingir sua estrutura normal ou sua
atividade funcional, sofrem o processamento ps-traducional, que pode envolver
vrias modificaes: a adio de carboidratos, a clivagem em unidades
polipeptdicas menores ou a combinao com outros polipeptdios para formar uma
protena maior. Tais modificaes so necessrias, por exemplo, para realizar os
dobramentos das cadeias polipeptdicas visando estrutura secundria da protena
ou para estabilizar a estrutura desta ltima.
REGULAO GNICA
Com algumas excees, pode-se dizer que todas as clulas de um organismo contm os
mesmos genes. No entanto, em um determinado tecido ou rgo, apenas um grupo desses
genes expresso. Em nossa espcie, por exemplo, muitos processos celulares e os
genes que os determinam so comuns a todas as clulas do nosso corpo, como os genes
das protenas ribossmicas, cromossmicas e do citoesqueleto, constituindo os
chamados genes de manuteno (housekeeping genes). Entretanto, embora teoricamente
todas as clulas tenham os mesmos genes, algumas difereneiam-se em clulas da
epiderme, outras em musculares, etc.,
devido a um controle coordenado e diferencial da expresso genes estruturais, o
qual pode ocorrer em diferentes estgios e em diferentes clulas. Esse controle, em
geral, exercido por um gene, denominado gene regulador, que produz uma protena,
diferente das que so codificadas pelos estruturais e cuja nica funo controlar
a expresso destes ltimos genes, por meio de sua ligao a stios particulares do
DNA, agindo sobretudo na transcrio.

FIGURA 2.20 Representao esquemtica das etapas da sntese protica. (Fonte:Brcwer

e SLrig, 1983, modificada.)

O conhecimento do controle da expresso gnica , portanto, fundamental para

compreenderem-se todos os aspectos do desenvolvimento e do ciclo vital humano.
Regulao gnica em procariotos
Um elemento essencial da regulao gnica em procariotos a rapidez com que os
genes ligam-se ou se desligam, em resposta a mudanas ambientais repentinas
(fatores como temperatura, pH e outros organismos no ambiente podem mudar
rapidamente). O microrganismo deve estar pronto a adaptar-se logo a tais
alteraes. Esse tipo de regulao a curto prazo exemplificado pelo sistema
operon lac, em bactrias. A Escherichia coli pode crescer em vrios tipos de
acares, mas seu substrato preferido a glicose, de modo que, mesmo que a lactose
esteja presente, o sistema necessrio para o uso desta ltima no ser ativado. Na
ausncia da glicose, a bactria forada a usar a lactose, sendo, ento, ativado
um sistema de genes conhecido como operon lac.
O modelo desse tipo de induo foi proposto por Franois Jacob e Jacques Monod
(1961), que receberam o Prmio Nobel pelo trabalho. Os referidos pesquisadores
cunharam o termo operon para a unidade de ao gnica que consiste de um gene
operador e os genes estruturais que lhe so adjacentes e cuja ao o gene operador
controla. Este ltimo, por sua vez, controlado por um gene regulador, que no lhe
est necessariamente prximo. O gene regulador sintetiza um repressor ou uma
protena repressora que inibe o gene operador. Assim, quando o gene regulador est
funcionando, as protenas no so sintetizadas pelos respectivos genes estruturais.
Estes ltimos somente funcionam quando o regulador desligado pela inativao do
repressor por um metablito especfico denominado indutor.
O controle bsico do operon lac, como ele entendido atualmente, est
ilustrado na Figura 2.21.
Quando o operon lac induzido, so sintetizadas trs enzimas: pernxease,
galactosidase e acetilase, que metabolizam a lactose. Os genes estruturais para as
trs enzimas esto situados muitos prximos, no cromossomo da E. coli, na seguinte
ordem: lac Z (galactosidase), lac Y (permease) e lac A (acetilase). Junto a este
grupo de genes estruturais, encontram-se o gene operador (O), o promotor (P) e, a
alguma distncia, o gene repressor (Z). Este ltimo transcreve um RNAm que
traduzido em uma protena repressora. No estado repressor, esta protena liga-se a
um stio especfico do gene O, impedindo tambm a conexo da RNA-polimerase ao
promotor e, conseqentemente, a transcrio dos genes estruturais do operon lac.
 No estado indutor, a lactose, funcionando como indutor, liga-se protena
repressora, impedindo-a de unir-se ao gene O. Na ausncia desta ligao, a RNA-
polimerase junta-se ao promotor (P) e ocorre a transcrio dos genes estruturais
lac Z, lac Y e lac A, com a subseqente traduo do RNAm nas trs enzimas.
Mecanismo de regulao semelhante ainda no foi detectado nos eucariotos, cujo
sistema de controle da expresso gnica mostra-se muito mais complexo.
Regulao gnica em eucariotos
A regulao gnica em eucariotos apresenta um problema de coordenao muito
maior do que ocorre nos procariotos. Isto devido, em parte, maior complexidade
dos organismos, em suas atividades e funes, bem como s situaes ambientais mais
complexas que eles enfrentam.
Nos eucariotos, os genes que controlam as enzimas de rotas metablicas no
parecem estar ligados ou agrupados nos cromossomos; as mensagens so individuais
(cada gene codifica um polipeptdo); a transcrio ocorre no ncleo e a traduo
no citoplasma (nos procariotos, ambas ocorrem em grande proximidade fsica); o RNAm
dos eucariotos varia muito em sua estabilidade, alguns sendo bastante estveis, o
que permite pontos mltiplos de controle.

FIGURA 2.21 O sistema operon-lac em E. coli: estados no-induzido (acima) e

induzido (abaixo). (Fonte: Lewis, 1997.)

As necessidades regulatrias dos organismos superiores podem ser divididas em

dois tipos:
a) Regulao com efeitos a longo prazo, que envolve a diferenciao
morfolgica e funcional permanente.
b) Regulao com efeitos a curto prazo, que resulta em respostas imediatas,
porm transitrias, a um dado estmulo.
A diferenciao celular, durante o desenvolvimento onfogentico, depende da
regulao da expresso dos genes que as clulas contm. No incio do
desenvolvimento embrionrio, a diferenciao, em muitas espcies, est controlada
por fatores de origem materna encontrados no citoplasma do ovo. Entretanto, depois
de algum tempo, os prprios genes do embrio comeam a se tornar ativos. Em
mamferos, por exemplo, a sntese do RNAm inicia-se no estgio de quatro clulas,
embora eles continuem a usar o RNAm de origem materna por um bom perodo de tempo.
Os genes esto cuidadosamente regulados para se tornarem ativos no momento
especfico em que um dado produto gnico necessrio.
A regulao da expresso gnica nos eucariotos pode-se dar pelo menos em
quatro fases: (a) ativao do gene estrutural; (b) incio da transcrio; (c)
processamento do RNAm e transporte ao citoplasma; (d) traduo do RNAm. A primeira
fase nesses organisi :os considerada sob controle positivo: os genes so
inativos, a menos que sejam ativados. Os estgios seguintes da regulao podem
estar sujeitos a controle positivo ou negativo.
Os genes reguladores podem ser distinguidos dos estruturais pelos efeitos das
mutaes. Uma mutao em um gene estrutural modifica uma protena especfica
codificada por aquele gene. J uma mutao em um gene regulador influi na expresso
de todos os genes estruturais que ele regula. A natureza desta influncia revela o
tipo de regulao: negativa ou positiva.
Na regulao dita negativa, os genes so transcritos, a menos que desativados
pela protena reguladora. Assim, uma mutao que inative o regulador faz com que os
genes estruturais permaneam se expressando. J que a funo do regulador, neste
caso, impedir a expresso dos genes estruturais, ele denominado de repressor.
Por outro lado, na regulao positiva, os genes reguladores devem ativar os
genes estruturais, fazendo-os se expressarem. Na ausncia do regulador, os genes
no se expressam.
Os mecanismos e as molculas que executam os vrios tipos de controle ainda
no so totalmente conhecidos, mas alguns deles j foram descritos. A regulao da
transcrio pode ser especfica a certos tecidos ou clulas, por intermdio da ao
de hormnios ou fatores de crescimento. O controle da transcrio, nesse nvel,
realizado mediante a ligao de fatores de transcrio a seqncias curtas de DNA
localizadas dentro do promotor, stio promotor ou regio promotora, em uma
distncia no maior do que 200 pb esquerda ou acima da extremidade 5 da maioria
dos genes estruturais dos eucariotos. Tais fatores de transcrio consistem
geralmente de protenas que se ligam ao DNA para aumentar, diminuir ou modular o
nvel da expresso gmea; so produzidos por genes que controlam a transcrio do
DNA para o RNA e, ativados por sinais extracelulares, ligam-se s seqncias da
regio promotora, com as quais formam complexos que iniciam a transcrio, com o
auxlio da RNA-polimerase.
Vrios tipos de fatores so necessrios para a transcrio de um gene
eucaritico, j sendo conhecida mais de uma centena deles. Muitos apresentam
seqncias em comum, que os dobram em conformaes tridimensionais caractersticas
(motivos), das quais surgem suas denominaes. Por exemplo, nas protenas em
"dedos de zinco" ( ver figura 222) existem segmentos repetidos que projetam uma
ala em forma de dedo, aos quais se ligam tomos de zinco (Zn). Detalhadamente,
esse motivo constitudo por quatro amnocidos que formam um complexo com um
on zinco, dobrando-se sobre si prprio para formar uma projeo digital. O
motivo dos dedos de zinco capacita as protenas a se ligarem molcula de DNA,
onde regulam a transcrio. Conseqentemente, os genes que o possuem so candidatos
a causarem distrbios do desenvolvimento (ver Captulo 7).
FIGURA 2.22 Protenas em dedos de zinco: possuem segmentos repetidos que
projetam uma ala em forma dc dedo, aos quais se ligam tomos de zinco (Zn).
Detalhadamente, cada segmento (motivo) constitudo por quatro aminoeidos (duas
cistenas e duas histidinas) que formam um complexo com um on zinco, dobrando-se
sobre si prprio para formar uma projeo digital. O motivo dos dedos de zinco
capacita as protenas a ligar-se molcula de DNA, onde regulam a transcrio.
(Fonte: King e Stansfield, 1997.)

Outro exemplo relacionado o do raquitismo resistente vitamina D, no qual h

uma anormalidade da protena receptora da vitamina D exatamente nesse motivo, que
impede a protena de ligar-se ao DNA. Os dedos so formados de quatro cistenas
estrategicamente localizadas, que se atraem por conterem enxofre e atraem tambm o
zinco, estabilizando a formao dos dedos (ver Figura 2.23).
As seqncias curtas do promotor fixam o local de incio da transcrio e
controlam a quantidade e a especificidade tecidual do RNAm transcrito. As
seqncias mais conhecidas incluem:
(a) O boxe TATA, tambm denominado de boxe Hogness, que contm 7 pb
freqentemente na seqncia TATAAAA, localizando-se cerca de 25-30 pb 5 acima ou
esquerda do ponto de partida da transcrio; parece estar envolvido na localizao
exata do incio da transcrio.
(b) O boxe CAT ou CCAAT, localizado aproximadamente a 75 a 80 pb 5 acima ou
esquerda do ponto de partida da transcrio, sendo menos presente do que o boxe
TATA; quando presente, contribui para uma transcrio quantitativamente mais
eficiente.
(c.)A seqncia de consenso GC ou GGGCGGG particularmente presente na regio
promotora dos genes de manuteno (housekeeping genes), alguns dos quais no
possuem os boxes TATA e CAT, mas so extremamente ricos em GC na regio promotora.
A Figura 2.24 apresenta esquematicamente o complexo de iniciao da transcrio,
mostrando os principais elementos reguladores.
As seqncias reguladoras localizadas no promotor so consideradas de atuao
cis, quando afetam
apenas a expresso do gene adjacente, e de atuao trans, quando atuam sobre genes
distantes, geralmente sobre ambas as cpias de um gene em cada cromossomo. Em
alguns genes humanos, como o da distrofia muscular Duchenne, existem vrios
promotores, situados em diferentes regies do gene. Dessa forma, a transcrio
gnica pode comear em pontos distintos, produzindo protenas tambm diferentes.
Isso permite que a mesma seqncia gnica codifique variantes de uma protena em
tecidos diferentes (por exemplo, no tecido muscular versus tecido cerebral).
Alm do controle regulador qualitativo, os eucariotos tambm apresentam uma
variedade de mecanismos responsveis pelo controle quantitativo dos produtos
gnicos. Esses mecanismos consistem de seqncias de DNA situadas a uma distncia
varivel dos genes estruturais, denominadas de acentuadores ou reforadores
(enhancers, em ingls), que aumentam o nvel da transcrio de genes que lhes esto
prximos ou distantes e interagem com os promotores. Uma vez que os acentuadores
situam-se a distncias variveis dos promotores, existe um mecanismo de de
dobramento ou inverso do DNA, que permite a interao simultnea de vrios
elementos reguladores, pela formao de uma GGGCGGG ou mais laos complexos do.
DNA. A interao acentuador-promotor tambm pode ocorrer quando uma protena
reguladora liga-se primeiramente ao acentuador e, ento, desliza no DNA at ligar-
se a um promotor. Os primeiros acentuadores descobertos foram os de certos vrus de
DNA, como o SV40, capazes de aumentar a transcrio de um grande nmero de genes
em. praticamente todos os tecidos testados. Mais recentemente, foram descobertos
acentuadores especficos para alguns tecidos ou clulas, como, por exemplo, o
acentuador localizado no gene da imunoglobulina, o qual funcional nas clulas B,
mas no em outros tipos de clulas.
FIGURA 2.23 O raquitismo resistente vitamina D pode ser devido a uma mutao no
gene que codifica o motivo dos dedos de zinco. (Fonte: Lewis, 1997.)
Explicaes no texto.
O nvel das protenas reguladoras pode ser modificado por diferentes fatores: (a) a
velocidade da transcrio do gene em RNA; (b) o processamento desse RNA; (c) o
transporte do RNAm do ncleo para o citoplasma; (d) a velocidade da traduo do
RNAm em cadeia polipeptdica; (e) a velocidade de degradao do RNAm; (f) o
processamento ps-traducional do polipeptdio; e (g) a velocidade de degradao da
protena.

Todos esses mecanismos de controle correspondem a situaes especficas.

Entretanto, talvez o mtodo de controle mais econmico e mais difundido nos
eucariotos seja o de controlar a produo da protena no nvel da transcrio do
gene.

MUTAES
Conceito e tipos
FIGURA 2.24 Representao esquemtica da formao do complexo de iniciao da
transcrio. A - Uma protena de ligao TATA liga-se ao boxe TATA no promotor de
um determinado gene. B - Protenas co-ativadoras renem-se em torno da protena
referida no item (A). C -Protenas ativadoras e repressoras ligam-se ao conjunto
assim formado, para controlar o ritmo da transcrio, e sua presena transmitida
ao gene que dever ser expresso, pelas protenas co-ativadoras referidas no item
(B) e unidas protena de ligao TATA. D - Finalmente, uma srie de protenas
(denominadas fatores basais) unem-se protena de ligao TATA, de modo a fazerem
espao para a RNA-polimerase ligar-se ao promotor. (Fonte: Lewis, 1997.)

Em geral, a replicao do DNA d-se de maneira correta; eventualmente, podem

ocorrer erros nesse processo, que constituem fonte de variabilidade, a qual um
componente essencial no processo da evoluo.
As alteraes hereditrias do material gentico de um organismo. decorrentes de
erros de replicao antes da diviso celular e no causadas por recombinao ou
segregao, so denominadas mutaes. O termo mutante refere-se a um fentipo
incomum ou expresso do gene que sofreu a mutao. O fenpo comum ou a expresso
fenotpica do gene inalterado denominado tipo selvagem. Mas nem todas as mutaes
so detectveis fenotipicamente, podendo, no entanto, ser verificadas no nvel
molecular. Na espcie humana, uma mutao provavelmente ser reconhecida mais pelos
seus efeitos prejudiciais, causando um transtorno ou uma doena, do que por seus
efeitos benficos, como o aumento da resistncia a infeces ou o aumento da
sobrevivncia.
As modificaes hereditrias que ocorrem num. loco gnico especfico so
chamadas mutaes gnicas, de ponto ou pontuais. Elas podem envolver substituio,
adio ou perda de uma nica base. Se as modificaes forem maiores, -alterando os
cromossomos, elas so denominadas mutaes cromossmicas, sendo mutaes
estruturais as que modificam a estrutura dos cromossomos e mutaes numricas as
que alteram o seu nmero. Em geral, estes tipos de mutaes so. denominados
aberraes ou anomalias cromossmicas.

De acordo com a sua etiologia, as mutaes so classificadas em espontneas,

quando ocorrem sem que haja a interferncia conhecida de qualquer agente capaz de
provoc-las, e induzidas, quando ocorrem em freqncia aumentada pela ao de
agentes fsicos e/ ou qumicos conhecidos, denominados agentes mutagnicos. A
maioria desses agentes atua diretamente sobre o DNA, seja alterando uma determinada
base, seja incorporando-se ao mesmo. A freqncia de mutaes denomina-se taxa de
mutao, sendo expressa pelo nmero de mutaes por loco, por gameta e por gerao.
Na espcie humana, a taxa mdia de mutaes est em torno de 1/
1OO.OOO/loco/gerao. Esta taxa pode ser aumentada, pela ao de agentes
mutagnicos. A Tabela 2.4 mostra as taxas de mutao de genes responsveis por
algumas doenas humanas.
As mutaes gnicas podem ser de trs tipos: por substituio de base; por
perda ou deleo de base; por adio ou insero de base.
As mutaes por substituio apresentam denominaes diferentes, de acordo
com o tipo de bases que envolvem. Quando a substituio abrange bases do
mesmo tipo, isto , substituio de uma purina por outra purina ou de uma
pirimidina por outra de igual tipo, ela denominada transio. Exemplos: purina -
purina - ACG (treonina) --> GCG (alanina); pirimidina -> pirimidina - ACA
(treonina) > AUA (isoleucina),
Quando a substituio envolve bases de tipos diferentes, isto , troca de uma
purina por uma pirimidina, ou vice-versa, a mutao chama-se transverso. Exemplos:
purina pirimidina - AAG (lisina) > ACG (treonina); pirimidina -> purina - UGC
(cistena) - UGG (trptofano).
Quando a substituio de base ocasiona a troca de um aminocido, denominada
de mutao com sentido trocado ou errado (missense, em ingls) e seu efeito sobre a
protena depende da natureza da substituio do aminocido. A substituio do
aminocido na cadeia polipeptdica pode levar a uma protena alterada, com reduo
ou perda da sua atividade biolgica, ou pode acarretar tambm uma protena
semelhante normal, sem qualquer efeito funcional. Se a substituio fizer surgir
um dos trs cdons terminais, finalizando prematuramente a sntese protica, ela se
chama mutao sem sentido (nonsense, em ingls), Na maioria dos casos, a cadeia
polipeptdica encurtada e provavelmente no conserva sua atividade biolgica
normal.
As substituies de base alteram apenas o cdon ao qual ela pertence,
acarretando somente a alterao de um aminocido na protena. Embora a atividade
desta ltima possa ser reduzida, ela no abolida.
Por outro lado, as inseres e delees de base alteram toda a leitura do
cdigo gentico, sendo conhecidas como mutaes de mudana na leitura do cdigo
gentico (frameshtft, em ingls); neste caso a protena praticamente perde a sua
funo. Estes tipos de mutaes so mais freqentes cm bactrias, embora tambm
ocorram nos eucariotos.
TABELA 2.4 TAXAS DE MUTAO DOS GENES QUE CAUSAM ALGUMAS DOENAS HUMANAS

Quando se trata de deleo ou insero de trs bases adjacentes, ou de

mltiplos de trs bases, resulta perda ou adio de aminocidos na cadeia
polipeptdica, mas a estrutura de leitura das bases da seqncia restante no se
altera. No entanto, quando estas mutaes no envolvem, trs bases ou mltiplos de
trs bases, a leitura se altera at o fim da cadeia.
Podem ocorrer, ainda, mutaes no DNA no-codificador, que podem ser incuas
fenotipicamente, a menos que ocorram em seqncias do DNA relacionadas com a
regulao dos genes estruturais ou na juno da emenda entre ntrons e xons. As
mutaes nas seqncias reguladoras podem afetar o nvel da expresso, gnica,
enquanto as mutaes na juno da emenda podem causar perda de seqncias
codificadoras (perda de xons) ou adio de seqncias no-codificadoras (adio de
ntrons) na molcula de RNA mensageiro. As mutaes das junes da emenda parecem
ocorrer mais comumente em genes do colgeno, sendo a base mutacional para a
osteognese imperfeita.
As mutaes podem ainda ser classificadas conforme seu efeito, em:
a) Diretas - as substituies de base que resultam na troca do aminocido
original para um novo aminocido: exemplo: UUU (fenilalanina) - UUA (leucina).
b) Reversas - as responsveis pelo processo inverso, quando ocorrem no mesmo
ponto; exemplo: UUA (leucina) - UUU (fenilalanina).
c) Silenciosas - quando a mudana implica em um cdon sinnimo, que no
altera o aminocido; exemplo: UUU (fenilalanina) -> UUC (fenilalanina).
d) Neutras - quando a substituio de base resulta em troca de aminocido,
mas isso no afeta a atividade da protena.
Alguns autores, como Mueller e Young (1998), classificam as mutaes, de
acordo com sua transmisso para outras geraes de forma inalterada ou no, em
mutaes estveis ou fixas, as quais so transmitidas inalteradas, e mutaes
instveis ou dinmicas, que so mutaes que sofrem alteraes ao serem
transmitidas nas famlias. As estveis ou. fixas abrangem as substituies,
delees e inseres de bases; as instveis ou dinmicas consistem em seqncias de
trincas repetidas que ocorrem em nmero de cpias aumentadas (amplificao ou
expanso de trincas), constituindo as mutaes bsicas para muitas doenas de
herana rnonognica, inclusive a doena de Huntington, retardo mental determinado
pelo X frgil e distrofia miotnica.
O mecanismo pelo qual a amplificao ou a expanso de trincas ocorre ainda
no est bem esclarecido. Sabe-se, no entanto, que as repeties de trincas abaixo
de um certo comprimento para cada doena so fielmente transmitidas, na mitose e na
meiose; acima de um certo nmero de repeties para cada doena, so instveis e
geralmente sero transmitidas com aumento ou decrscimo no nmero de trincas
repetidas. Um dos possveis mecanismos pelo qual isso ocorre o do Crossing-over
desigual entre cromtides-irms, gerando e expandindo essas repeties de trincas.
As expanses das trincas repetidas normalmente ocorrem em vrias geraes de
uma famlia, fornecendo uma explicao para um padro de herana incomum, bem como
a possvel base para o fenmeno da antecipao (ver Captulo 5).
Em algumas doenas a expanso de trincas ocorre dentro da seqncia
codificadora, enquanto em outras nas extremidades 5 ou 3' do gene.
Finalmente, deve-se distinguir duas classes de mutaes, segundo o tipo de
clula em que ocorrem e seus efeitos. As mutaes que ocorrem nas clulas somticas
mutaes somticas acarretam maior prejuzo para o prprio indivduo que as sofre.
Nos adultos, se atingirem clulas em diviso, podem causar tumores e outras leses
degenerativas. Se atingirem um zigoto, embrio ou feto, podem causar mosaicismo
(ver Captulo 4), sendo que o grau deste ltimo depender do perodo do
desenvolvimento em que as mutaes ocorreram. Se atingirem as clulas germinativas
primordiais, que originaro os gametas do indivduo, este poder ter sua
fertilidade diminuda e ainda transmitir o dano para as futuras geraes.
As mutaes que ocorrem nas clulas da linhagem germinativa - mutaes
gamticas - so transmitidas s futuras geraes. Em geral elas no causam prejuzo
ao seu portador, mas, dependendo do tipo de dano, podero acarretar diminuio da
fertilidade. A Tabela 2.5 resume os diferentes tipos de mutaes.
Agentes mutagnicos Agentes fsicos
Os principais agentes fsicos mutagnicos so as radiaes ionizantes e os
raios ultravioleta.
Radiaes ionizantes
As radiaes ionizantes so radiaes de alta energia e pequeno comprimento de
onda, como os raios X, os raios gama, os raios csmicos e partculas emitidas por
elementos radiativos (partculas alfa, partculas beta e nutrons). A passagem
dessas radiaes atravs da clula provoca a liberao de eltrons, o que torna as
molculas altamente instveis e suscetveis a reaes qumicas. Tais substncias
combinam-se com o DNA, causando erros no pareamento das bases durante a duplicao
e rompendo as ligaes acar-fosfato de modo a causar quebras cromossmicas.
TABELA 2.5 PRINCIPAIS TIPOS DE MUTAES E RESPECTIVOS EFEITOS
As diversas fontes e doses anuais mdias nos diferentes tipos de radiao
ionizante natural e artificial so apresentadas na Tabela 2.6. As fontes naturais
de radiao incluem os raios csmicos, a radiao externa de materiais radiativos
em certas rochas e a radiao interna de materiais radiativos em tecidos. As fontes
artificiais compreendem a radiologia diagnostica e teraputica, a exposio
ocupacional e a precipitao radiativa de exploses nucleares.
Merecem ateno os seguintes aspectos:
a) A quantidade de radiao recebida pelos tecidos irradiados freqentemente
referida como a dose de radiao, a qual medida em funo da dose absorvida de
radiao ou rad (do ingls, radiation absorbed dose). O rad uma medida da
quantidade de qualquer radiao ionizante que realmente absorvida pelos tecidos.
Muitos efeitos da radiao ionizante dependem do volume de tecido exposto. No
homem, a irradiao do corpo inteiro com uma dose de 300 a 500 rads geralmente
fatal, mas no tratamento de tumores malignos podem ser dadas doses de 10.000 rads a
um pequeno volume de tecido, com efeitos menos graves.
b) A espcie humana pode ser exposta a uma mistura de radiaes, por isto a
unidade rem (do ingls, roentgen equivalent for man) adequada, j que uma
medida de qualquer radiao em funo dos raios X. Um rem de radiao a dose
absorvida que produz, em um dado tecido, o mesmo efeito biolgico que um rad de
raios X. A expresso das doses de radiao em rems permite-nos comparar as
quantidades de diferentes tipos de radiao aos quais a espcie humana est
exposta.
c) Um milirm (mrem) equivale a um milsimo de um rem; 100 rem equivalem a um
sievert (Sv) e 100 rad equivalem a um gray (Gy), em unidades internacionais
padronizadas. Em termos prticos, sieverts e grays so aproximadamente iguais;
d) A dose de radiao expressa em relao quantidade recebida pelas
gnadas, porque os efeitos da radiao sobre as clulas germinativas so os mais
importantes, na medida em que nos interessamos pela transmisso das mutaes
futura prole. A dose gonadal de radiao muitas vezes expressa como a quantidade
de radiao recebida em 30 anos. perodo que corresponde aproximadamente ao tempo
de uma gerao em humanos.
e) H uma relao linear entre a dose de radiao e a taxa de mutaes
induzidas, sendo essa relao vlida somente para doses pequenas, que correspondem
maioria das situaes prticas, e para mutaes que requerem apenas um evento
primrio.
f) Para uma determinada dose de radiao, a exposio lenta causa menos
mutaes do que a realizada cm um curto perodo de tempo; como existem mecanismos
de reparo enzimtico para as leses do DNA, se a radiao for aplicada lentamente
essas enzimas eliminam as seqncias danificadas e permitem o reparo da cadeia; por
outro lado, se a aplicao se der em um curto prazo, o mecanismo de reparo ser
insuficiente para um grande nmero de leses.
g) No existe uma dose limiar de radiao abaixo da qual no sejam induzidas
mutaes, de modo que qualquer aumento na dose de radiao resulta em elevao
proporcional da taxa de mutao.
h) As doses de radiao tm efeito cumulativo no organismo, de modo que toda
vez que uma pessoa estiver exposta radiao, a dose desta tem de ser adicionada
quantidade de radiao j recebida.
i) A suscetibiiidade s mutaes varia com o tipo de clula, o loco gnico, o
sexo e os fatores do ambiente; de qualquer modo, os cromossomos so muito mais
sensveis radiao do que os genes, pois, mesmo com doses muito pequenas
aplicadas a longo prazo, h um aumento significativo na freqncia de cromossomos
acntricos e dicntricos, bem como de delees (ver Captulo 4).
TABELA. 2.6 DOSES MDIAS APROXIMADAS DA RADIAO IONIZANTE PROVENIENTE DE VRIAS
FONTES PARA AS GNADAS (POPULAO GERAL)
Considera-se que a dose mxima permissvel de radiao um limite de
segurana arbitrrio, provavelmente muito menor do que aquela que causaria algum
efeito significativo na freqncia de mutaes prejudiciais, na populao. Tem sido
recomendado que a exposio ocupacional no exceda 50mSv em um ano. Entretanto,
existe muita controvrsia sobre o que seja exatamente a dose permissvel. No caso
da radiologia mdica, a dose de radiao resultante de um determinado procedimento
tem de ser ponderada contra o efeitcrbenieo mximo para o paciente; na exposio
ocupacional radiao, os riscos tm de ser definidos e providenciada a legislao
adequada. Com relao aos perigos das precipitaes radiativas de acidentes e
exploses nucleares, as solues parecem bvias.
Radiaes ultravioleta
As radiaes ultravioleta so menos energticas e tm maior comprimento de onda do
que as ionizantes.
Seu principal efeito mutagnico est na formao de ligaes entre duas molculas
adjacentes de timina, impedindo o seu pareamento com a adenina. As radiaes
ultravioleta causam, portanto, mutaes pontuais, mas poucos defeitos estruturais.
Para as clulas germinativas, os raios ultravioleta no so prejudiciais, j que
so absorvidos na epiderme, mas podem induzir mutaes somticas e cncer na pele.
Efeitos biolgicos das radiaes
Os efeitos biolgicos das radiaes dependem da localizao da fonte (dentro ou
fora do organismo), do tipo de radiao, de sua energia e das caractersticas do
material que as absorve (densidade, contedo hdrico, etc.).
Embora o DNA possa ser alterado por vrios fatores, existe uma proteo natural
contra as mutaes:
(a) A redundncia do cdigo gentico ajuda a realizar essa proteo, j que
cdons redundantes garantem que muitas alteraes na base da terceira posio sejam
silenciosas, isto , no alterem o aminocido codificado e, por extenso, a
protena resultante. Mesmo quando ocorrem na base da segunda posio, as mutaes
que acarretam a substituio de um aminocido por outro de conformao semelhante
podem no modificar drasticamente a protena resultante. (b) A posio em que a
substituio de aminocido ocorre na protena tambm pode representar um fator
protetor
contra as mutaes. Uma mutao pode acarretar a substituio de um aminocido
muito diferente do original, mas isso pode no afetar o fentipo, se a mutao
ocorrer em uma parte da protena que no seja crtica sua funo. Por exemplo,
certas mutaes no gene da cadeia beta da globina da hemoglobina no causam anemia,
mas podem alterar a migrao da protena num campo eltrico (ver Captulo 9). (c)
Uma mutao pode ter efeito condicional, afetando o fentipo apenas sob
determinadas condies. Por exemplo, na deficincia da enzima glieose-6-
fosfatodesidrogenase (G6PD; ver Captulo 10), a anemia desenvolve-se apenas sob
ingesto de substncias oxidantes.
Alm desses fatores protetores, existem mecanismos de reparo que amenizam o efeito
dos agentes mutagnicos. No caso do dano causado pelos raio ultravioleta, o reparo
ocorre em duas etapas. Na primeira, uma endonuclease provoca uma quebra na
seqncia de DNA que contm o dmero, enquanto uma exonuclease remove os
nuceotdios alterados. Na segunda etapa, h a reconstruo do trecho removido, com
o auxlio de uma DNA-polimerase, e sua unio cadeia nueleotdica, pela ao de
uma ligase (Figura 2.25).
Existem pessoas, entretanto, incapazes de produzir a endonuclease especfica
para o dmero, o que lhes causa uma doena hereditria, o xeroderma pigmentoso,
caracterizada por sardas, ndulos crneos e reas de atrofia na pele, bem como
profunda sensibilidade luz solar. Nesses indivduos, pela deficincia do reparo
do DNA, os raios ultravioleta solares provocam queimaduras que freqentemente
evoluem para tumores letais.
Existem, ainda, outras doenas hereditrias causadas por defeitos no reparo do
DNA, como a sndrome de Bloom, a anemia aplstica de Fanconi e a ataxia
telangiectasia, abordadas no Captulo 12.
Substncias qumicas
Os efeitos das substncias qumicas sobre o material gentico so mais
variados do que os das radiaes.
Os principais mutagnicos qumicos so os anlogos de bases, os compostos com
ao direta, os agentes alquilantes e os corantes de acridina. Sua ao sobre a
molcula do DNA mais conhecida, podendo levar no disjuno meitica, quebras
cromossmicas e mutaes pontuais (Figura 2.26).
Os anlogos de bases so substncias cuja estrutura qumica to semelhante
das bases nitrogenadas que podem ser incorporadas ao DNA, substituindo-as durante a
replicao deste. Um exemplo o anlogo de base 5-bromouracil, semelhante
timina, que se pode incorporar em seu lugar ao DNA, durante a replicao; na
duplicao seguinte, no entanto, ele pareia. em sua forma enlica. com a guanina.
Dessa forma, o par A-T muda para G-C.
Os compostos com ao direta no so incorporados ao DNA, mas modificam
diretamente a estrutura das bases. Uma dessas substncias o cido nitroso (HNO2),
responsvel pela desaminao da adenina e da citosina, fazendo com que a primeira
altere-se para hipoxantina, que pareia com a citosina e no com a timina, enquanto
a citosina modifica-se em uracil, que pareia com a adenina e no com a guanina.
FIGURA 2.25 Reparo do DNA por exciso de nuceotdios. A - Sob a ao da luz
ultravioleta, podem-se formar dmeros de pirimidinas (timina ou citosina), por meio
de ligaes covalentes entre bases pirimdicas adjacentes, os quais deformam o DNA,
impedindo o pareamento normal de bases. B - O dmero e as bases adjacentes so
cortados pela endonuclease, removidos pela exonuclease e substitudos por nova
seqncia idntica, com o auxlio da DNA-polimerase e da DNA-ligase e usando-se
como molde o filamento complementar de DNA. (Fonte: Jorde e cols., 2000.)

FIGURA 2.28 Mecanismos moleculares das mutaes gnicas causadas por substncias
qumicas. (Fonte: Vogel e Motulsky, 1997.)

Os agentes alquilantes (mostardas nitrogenadas, esteres do cido metilsulfnico)

constituem os mais potentes mutagnicos. Eles agem sobre a guanina, enfraquecendo
sua ligao com a desoxirribose. A guanina assim perdida e, em seu lugar, pode
entrar qualquer base.
Os corantes de acridina ligam-se ao DNA, inserindo-se entre bases adjacentes. Isso
faz com que, durante a replicao do DNA, haja distoro da hlice de DNA e
mudanas na matriz de leitura, resultando adio ou deleo de nucleotdios.
Alm dessas substncias, existem outras, como a cafena, que interferem no
mecanismo de reparo do DNA, inibindo a sntese das purinas e produzindo,
consequentemente, quebras e delees na molcula do DNA.
Por outro lado, os mutagnicos qumicos integram-se ao sistema metablico do
organismo, sendo convertidos em outros compostos que podem tanto perder sua
capacidade mutagnica como adquirir mutagenicidade. Este o caso da
ciclofosfamida, uma droga citosttica, antitumoral, que originalmente no
mutagnica, mas, nos mamferos, convertida em compostos altamente mutagnicos.
Embora os mutagnicos qumicos atuem de maneira diversificada, h estgios da
gametognese mais sensveis maioria deles, sendo particularmente vulnerveis, no
homem, as espermtides e os espermatozides e, na mulher, as oognias e os ocitos.
QUESTES PARA FIXAO
1 - De acordo com a sua organizao celular, como se classificam os seres
vivos e quais as suas caractersticas?
2 - Conceitue gene.
3 - Descreva, brevemente, as estruturas qumica e molecular dos cidos
nuclicos.
4 - Quais so os tipos de DNA e de RNA?
5 - Quais so as funes do DNA e do RNA?
6 Que cdigo gentico e como ele se caracteriza?
7 - Descreva, sucintamente, a sntese protica.
8 - Como se d a regulao gnica em procariotos? E em eucariotos?
9 - Conceitue: mutaes e seus vrios tipos, de acordo com a Tabela 2.5.
10 - Quais so os principais agentes mutagnicos fsicos e qumicos, e como se
d sua ao?