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FACULDADE META
CURSO DE BIOMEDICINA

MONIQUE DA SILVA FERREIRA

MICOBACTRIAS

Rio Branco AC
2016
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FACULDADE META
CURSO DE BIOMEDICINA

MICOBACTRIAS

Trabalho entregue para obteno de nota no


Estgio Supervisionado em Microbiologia,
sob orientao da Professora Dr Mariane
Arnoldi da Silva.

Rio Branco AC
2016
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SUMRIO

1 INTRODUO........................................................................................................................4
2 OBJETIVOS............................................................................................................................5
2.1 Geral.................................................................................................................................5
2.2 Especficos.......................................................................................................................5
3 METODOLOGIA DE PESQUISA.........................................................................................5
4 MICOBACTRIAS.................................................................................................................6
4.1. Complexo Mycobacterium tuberculosis......................................................................8
4.2. Complexo Mycobacterium bovis................................................................................11
4.3. Complexo Mycobacterium africanum........................................................................11
4.4. Complexo Mycobacterium canettii.............................................................................11
4.5. Micobactrias no tuberculosas ...............................................................................12
4.5.1. Mycobacterium avium..............................................................................................12
4.5.2 Mycobacterium kansasii............................................................................................12
4.5.3 Mycobacterium marinum..........................................................................................13
4.5.4 Mycobacterium leprae...............................................................................................13
5. Diagnostico Laboratorial.................................................................................................15
5.1 Baciloscopia...............................................................................................................16
5.2 Cultura........................................................................................................................16
5.3 Identificao de Micobactrias................................................................................17
5.4 Teste de sensibilidade...............................................................................................18
REFERNCIAS.......................................................................................................................19
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INTRODUO

As micobactrias pertencem a ordem Actinomycetales e a famlia


Mycobacteriaceae, que possui um nico gnero, denominado Mycobacterium
(fungus bacterium), nome proposto por Lehmann e Neumann em 1896, em
referncia pelcula formada pelo Mycobacterium tuberculosis na superfcie de
meios lquidos que era similar a produzida por alguns fungos. Apresentam-se como
bacilos retos ou levemente curvados, com 1 - 4mm de comprimento por 0,3 - 0,6mm
de largura. Algumas vezes, podem apresentar-se na forma cocobacilar ou
filamentosa, variando de espcie para espcie.
Por exemplo, as clulas do Mycobacterium xenopi so muitas vezes
filamentosas e as do Mycobacterium avium so quase que freqentemente
cocides. So, de maneira geral, bacilos imveis, no esporulados, aerbios ou
microaerfilos, sendo, sua principal caracterstica, a capacidade de resistir
descolorao quando tratadas com lcool-cido.
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2 OBJETIVOS

2.1 Geral

Abordar os principais aspectos das bactrias e sua importncia clnica.

2.2 Especficos

2.2.1. Caracterizar os fatores de risco e os aspectos clnicos das


micobactrias;
2.2.2. Descrever os principais mtodos laboratoriais para o diagnstico das
micobactrias;
2.2.3. Abordar as formas de tratamento das micobactrias tuberculosas e no
tuberculosas.

3 METODOLOGIA DE PESQUISA

O presente estudo das Micobactrias tem como principal objetivo, fazer uma
anlise dos conceitos e diagnsticos laboratoriais, prognstico e tratamentos por
meio de revises da literatura, artigos cientficos e pesquisas.
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4 MICOBACTRIAS

O gnero Mycobacterium o nico representante da famlia


Mycobacteriaceae, tendo como caracterstica marcante ser lcool- cido resistente,
devido grande quantidade de lipdeos presentes em sua parede celular. Existe
uma diviso em dois grupos baseada no tempo de crescimento das colnias: as de
crescimento rpido (menos de sete dias para produo de colnias visveis em
meios de cultura slidos) e as de crescimento lento, sendo que neste grupo
encontram-se as espcies do complexo M. tuberculosis (M. tuberculosis, M. bovis-
BCG, M. africanum, M. microti) e outras denominadas micobactrias no
tuberculosas (MNT). J foram descritas mais de cem MNT (FERREIRA, 2001).
As micobactrias so bacilos finos, diferentes das demais bactrias em uma
srie de propriedades, muitas das quais esto relacionadas com a quantidade e
tipos de lipdeos complexos que estes germes contm na parede celular. So
germes aerbios estritos.
Vrias evidncias sugerem que a predileo do Mycobacterium tuberculosis
pelos pulmes est relacionada com a tenso de CO2 neste rgo.
As clulas bacterianas so de crescimento lento, imveis, no esporuladas. A
lentido do crescimento parece tambm estar relacionada absoro mais
demorada de nutrientes, provavelmente devido a grande quantidade de lipdeos da
parede. Alm do interesse diagnstico, o crescimento lento est relacionado com o
quadro clnico da tuberculose.
A temperatura tima de crescimento das micobactrias varivel. As que
crescem melhor em temperatura inferior a 37oC, como Mycobacterium marium e M.
ulcerans, geralmente causam somente uma infeco cutnea, uma vez que a
temperatura da pele mais baixa que a das regies mais profundas do organismo.
Presume-se tambm que a localizao preferencial da lepra nas extremidades do
corpo (dedos, nariz, lbulos da orelha) esteja relacionada por sua preferncia a
temperaturas baixas.
As micobactrias so cido-lcool resistentes (BAAR), o que significa que
durante os procedimentos de colorao pela fucsina, no se deixam descorar por
uma mistura de lcool e cido clordrico. Esta propriedade parece decorrer da firme
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fixao da fucsina a certos lipdeos da parede. O mtodo para se verificar se uma


bactria BAAR, o de Ziehl-Neelsen.
Este mtodo consiste em se tratar o esfregao por fucsina e, em seguida por
uma mistura de lcool (97%) e cido clordrico (3%). Depois de lavado com gua, o
esfregao corado com azul de metileno. As bactrias que retm a fucsina (BAAR)
adquirem a cor deste corante (vermelho), e as que no retm, se coram pelo azul de
metileno.
Provavelmente devido riqueza em lipdeos, as micobactrias tambm so
mais resistentes do que as outras bactrias ao hidrxido de sdio, cido sulfrico e a
certos antisspticos. Esta propriedade explorada no diagnstico laboratorial, pois
permite destruir a microbiota normal, presente nos espcimes clnicos, sem afetar a
viabilidade das micobactrias. Os lipdeos podem explicar a maior resistncia das
micobactrias a muitos antibiticos, bem como o mecanismo de ao da isoniazida
(usada no tratamento), que interfere na sntese de cidos graxos.
So germes intracelulares facultativos, que proliferam no interior de
macrfagos. As clulas so adjuvantes, uma vez que, quando injetadas com um
antgeno, estimulam a produo de anticorpos contra estes antgenos.
As micobactrias no produzem fatores de virulncia que possam explicar as
manifestaes clnicas de suas infeces. Estas so predominantemente
decorrentes da resposta do hospedeiro infeco e aos antgenos das
micobactrias.
De modo geral, as infeces causadas por micobactrias acompanham um
quadro de hipersensibilidade tardia e de imunidade celular. Os dois fenmenos tm
sido mais estudados na tuberculose, onde aparecem ao mesmo tempo e esto
sempre associados. A pesquisa de hipersensibilidade tardia e de imunidade celular
pode ser feita com injeo intradrmica de tuberculina. Esta substncia na
realidade, uma mistura de protenas de baixo peso molecular, produzidas pelo
Mycobacterium tuberculosis. Quando parcialmente purificada, recebe a designao
PPD (purified protein derivate).

Classificao:

Reino: Eubacteria;
Filo: Actinobacteria;
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Classe: Actinobacteria;
Ordem: Actinomycetales;
Famlia: Mycobacteriaceae;
Gnero: Mycobacterium;
Espcie: Atualmente o gnero compreende 8 espcies.

Morfologia Celular:

As micobactrias so bacilos aerbios, imveis, no esporulados e Gram-


positivos; no so corados com facilidade e resistem a agentes descorantes durante
a tcnica de colorao, sendo por isso chamados de bacilos lcool-cido resistente
(BAAR). Outras caractersticas incluem o crescimento lento de algumas espcies em
meios especiais a 37, enquanto que formas saprfitas crescem rapidamente na
maior parte dos meios de cultura a 37 e a 22C. A maior parte das micobactrias
so responsveis por infeces pulmonares e cutneas, como em outros rgos.

4.1 MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS

Patogenicidade:

O microrganismo geralmente transmitido por gotculas de secrees (como


de tosse) provenientes de uma pessoa com tuberculose ativa. muito estvel em
tais gotculas e no escarro, podendo permanecer vivel mesmo no escarro seco por
at seis semanas. O M.tuberculosis das gotculas ento, inalado e atinge um
ambiente altamente aerbio do pulmo, onde produz uma pneumonite no-
especfica.
Histologicamente, a resposta inicial exsudativa, seguida por uma resposta
granulomatosa, durante o qual o paciente desenvolve a hipersensibilidade tardia que
caracterstica da doena.
A infeco pelo Mycobacterium tuberculosis geralmente se inicia no
parnquima dos lobos pulmonares inferiores, passando em seguida para os ndulos
linfticos da regio hilar, de onde levada para vrios rgos e tecidos, pela
corrente sangunea. A infeo do parnquima pulmonar e dos ndulos linfticos da
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regio hilar chamada complexo primrio e este, juntamente com os focos


infecciosos que se formam nos diferentes rgos e tecidos, infeco primria.
Estes focos so encontrados principalmente nos rgos e tecidos onde uma
tenso apropriada de O2 favorece a proliferao do Mycobacterium tuberculosis, isto
, pices pulmonares, rins, extremidades dos ossos longos, ndulos linfticos e etc.
Embora a bactria esteja viva nestes focos, ela se encontra em estado de latncia,
uma vez que no se multiplicou ou faz de maneira insignificante e irregular. Este
estado infeccioso denominado de tuberculose-infeco, para contrastar com o
estado oposto, que denominado de tuberculose doena. Na grande maioria das
vezes, o nico sinal de existncia de tuberculose-infeco a presena de
hipersensibilidade tardia, que pode ser demonstrada pela injeo intradrmica de
tuberculina ou PPD.
Alguns indivduos, entretanto, podem tambm apresentar o complexo primrio
calcificado, chamado complexo de Gonh, que s pode ser demonstrado pelo exame
radiolgico dos pulmes. O tempo necessrio para a reativao de um foco de
infeco latente bastante varivel, podendo ser meses ou anos. Em muitos
indivduos ele permanece latente por toda vida.
Existem na literatura diversos estudos sobre a provvel influncia da idade,
sexo, fatores tnicos e constituio gentica. De qualquer modo, os fatores que
realmente predominam no processo de reativao no so bem conhecidos, mas
esto intimamente ligados a uma diminuio das defesas orgnicas. A doena
geralmente associada com falta de higiene e condies de moradia em locais
aglomerados.

Diagnstico:

O diagnstico pode ser feito pelo exame microscpio de esfregaos corados


pelo mtodo de Ziehl-Neelsen e pela cultura. O material clnico selecionado para
exame depende da localizao da doena. Nas infeces pulmonares, colhe-se o
escarro; nas urinrias, a urina.
A cultura o mtodo de escolha para o diagnstico das infeces por
micobactrias, porque alm de permitir o diagnstico especfico, possibilita o
isolamento da bactria para a realizao de testes de sensibilidade aos antibiticos.
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Tambm tida como bastante til no diagnstico laboratorial da tuberculose, a


inoculao de cobaias com espcimes clnicos, apresenta hoje algumas
desvantagens: contaminao de pessoas que manipulam estes animais, a doena
experimental demora de 4 a 6 semanas para se desenvolver, geralmente a
inoculao por via intramuscular, e no dispensa o cultivo e identificao da
bactria a partir das leses encontradas nestes animais.
Recentemente foram preparadas sondas genticas que permitem a rpida
identificao das espcies M. tuberculosis, M. avium, entre outras.
A pesquisa de hipersensibilidade tardia tambm um recurso de diagnstico
bastante til. Esta pesquisa geralmente feita pelo teste de Mantoux, que consiste
na injeo intradrmica, na face anterior do antebrao, de 0,1 mL de tuberculina ou
PPD. Considera-se o teste positivo, quando aparece, em 48 horas, no local da
injeo, uma rea endurecida de pelo menos 5 mm de dimetro. O teste de Mantoux
positivo no indica doena, mas apenas hipersensibilidade tardia, que pode ter se
originado de uma infeco primria (assintomtica) ou de uma tuberculose curada.
O teste negativo indica que o indivduo no deve ter tido contato com o bacilo da
tuberculose, ou teve contato e nunca desenvolveu a doena.

Tratamento:

As drogas mais usadas no tratamento das infeces causadas pelo M.


tuberculosis costumam ser divididas em drogas de primeira e segunda linha. As de
primeira linha so as preferidas, por serem mais ativas e menos txicas, e as de
segunda linha so menos ativas e mais txicas. As drogas de primeira linha so:
isoniazida, pirazinamida, rifampicina, estreptomicina e etambutol. So consideradas
de segunda linha o cido para-amino-saliclico (PAS), etionamida (derivado do cido
miclico), tiocetozona, e os seguintes antibiticos: canamicina, viomicina,
capreomicina e amicacina.

Imunidade:

No Brasil, a vacina usada a BCG (bacilo de Calmette-Gurin), que uma


mutante atenuada do Mycobacterium bovis. Embora cause infeco no homem, esta
mutante no provoca doena. A proteo conferida pela vacinao no total, mas
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bastante satisfatria. Os indivduos vacinados adquirem hipersensibilidade tardia,


passando a reagir positivamente ao teste de Mantoux

4.2 MYCOBACTERIUM BOVIS

O Mycobacterium bovis causa tuberculose no gado bovino, sendo tambm


bastante virulento para o homem. A grande maioria dos casos de tuberculose
humana por esta bactria transmitida pelo leite no-pasteurizado, proveniente de
vacas tuberculosas. Os bacilos ingeridos penetram pela mucosa da orofaringe e do
trato digestivo, invadindo respectivamente, os ndulos mesentricos. A partir destes
focos, a doena pode se disseminar para outros tecidos ou rgos.
Quando o Mycobacterium bovis inalado, pode provocar tuberculose idntica
causada pelo M. tuberculosis.

4.3 MYCOBACTERIUM AFRICANUM

O M. africanum mais comumente encontrado em pases da frica Ocidental,


sendo responsvel por at um quarto dos casos de tuberculose em pases como
Gmbia. uma infeco especfica de seres humanos, sendo transmitida por via
area a partir de indivduos contaminados. Ele tem um grau de infecciosidade similar
ao M. tuberculosis organismo, mas sua infeco tem menos chances de levar a
manifestaes clnicas em indivduos imunocompetentes.

A infeco por M. africanum desenvolve sintomas clincos mais


frequentemente em pacientes HIV-positivos, sendo uma importante infeco
oportunista de fases posteriores da doena do HIV em pases onde endmico.

4.4 MYCOBACTERIUM CANETTII

O M. canettii que inclui a Mycobacterium prototuberculosis um grupo


de colnias boas da espcie Mycobacterium. Ao contrrio dos membros
estabelecidos do grupo M. tuberculosis, so submetidos a recombinao com outras
espcies. A maioria das estirpes conhecidas deste grupo foram isoladas a partir do
Chifre da frica.
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4.5 MICOBACTRIAS NO TUBERCULOSAS

As MNT so encontradas no ambiente e algumas fazem parte da microbiota


de organismos superiores (PRIMM, et al, 2004). So geralmente encontradas em
pacientes com doena pulmonar crnica, imunossupresso e trauma percutneo.
Com a Aids houve aumento da incidncia e morbidade das doenas associadas a
estas micobactrias. As infeces causadas por elas no so transmitidas de
pessoa a pessoa, sendo na maioria das vezes adquiridas, possivelmente, por via
inalatria a partir de reservatrios naturais, domsticos ou nosocomiais (FERREIRA,
2001).
As MNT que apresentam destaque como potencialmente patognicas ao
homem so as que pertencem ao complexo Mycobacterium avium (MAC) que
compreende as espcies M.avium, M. intracellulare, M. paratuberculosis, M.
sylvaticum e M. Lepramurium (SATO, 1999).

4.5.1 MYCOBACTERIUM AVIUM

Os organismos do complexo M. avium so ubquos no ambiente e so


adquiridos por pacientes, em geral, aidticos atravs da alimentao, gua, solo e
poeira, levando colonizao do trato gastro-intestinal (GI), ou pulmes aps
disseminao hematognica. A relao entre GI e colonizao pulmonar e
subsequente disseminao, ainda no clara. O M.avium fagocitado por
macrfagos e carreado aos rgos do sistema moncito-fagocitrio.
Os sintomas mais prevalentes da infeco causada so: febre, sudorese,
anorexia, fraqueza e s vezes diarria.
O diagnstico da infeco por M. avium feito atravs de cultura de sangue
perifrico e de tecido. O organismo tambm pode ser observado histologicamente
em ndulos linfticos, medula ssea e bipsia de material de fgado. A resistncia do
complexo M. avium um desafio para o tratamento. Com base em teste de
sensibilidade e dados clnicos, um regime de tratamento ideal deve incluir
clofazimina, etambutol, rifampicina, ciprofloxacina e amicacina.

4.5.2 MYCOBACTERIUM KANSASII


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O M. kansasii um fotocromgeno que exige meios de cultura complexos


para seu crescimento a 37 C. Pode causar doena pulmonar e sistmica
indistinguvel da tuberculose, particularmente em pacientes com
comprometimento da resposta imunolgica. Sensvel RMP
frequentemente tratado com a combinao de RMP, BEM e INH, com boa
resposta clnica. A fonte da infeco permanece incerta e o contgio baixo
ou inexistente.

4.5.3 MYCOBACTERIUM MARINUM

O marinum um organismo relativamente comum que causa tuberculose.


Esta leso frequentemente chamada de granuloma de piscina. Infeces atpicas
por micobactria podem causar doenas potencialmente fatais em pessoas com o
sistema imunolgico enfraquecido (imunocomprometidas).

4.5.4 MYCOBACTERIUM LEPRAE

Este microrganismo tambm conhecido como bacilo de Hansen. Calcula-se


que existam 12 milhes de hansenianos (leprosos) no mundo.
uma doena degenerativa capaz de causar deformaes nos pacientes. A
hansenase (lepra) continua sendo uma doena bastante frequente. Como as
demais micobactrias, o bacilo da lepra BAAR. At o presente momento esta
bactria no foi cultivada in vitro, mas prolifera formando granulomas, quando
inoculadas nas patas de camundongos. O tatu (Dasypus novecintus) tambm
susceptvel ao Mycobacterium leprae, desenvolvendo manifestaes semelhantes
s da lepra lepromatosa humana.

Patogenicidade:

O M. leprae aparentemente transmitido de leses cutneas infectadas


atravs de ferimentos de pele onde ele pode permanecer latente por vrios meses
ou dcadas. Forma-se uma leso granulomatosa crnica semelhante quela da
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tuberculose, com clulas epiteliides gigantes, porm sem necrose caseosa. O M.


leprae afeta principalmente a pele e o tecido nervoso. As formas cutneas de lepra
resultam na produo de numerosos ndulos endurecidos. As formas neurais
resultam em paralisia e anestesia dos nervos perifricos.
Pacientes com esta forma de lepra so passveis de ferimentos nas
extremidades com o desenvolvimento de infeco secundria e danos estticos
graves. So reconhecidas duas formas polares de lepra e vrias intermedirias.
As formas polares so a lepra lepromatosa (LL) e a lepra tuberculide (LT).
Uma diferena entre LL e LT, refere-se a reao do paciente ao teste de Mitsuda. Os
primeiros so Mitsuda negativo, e os segundos, positivos. O teste de Mitsuda
realizado inoculando-se na pele do brao do paciente 0,1 mL de lepromina e
verificando-se aps 30 dias, a reao desenvolvida. A lepromina uma suspenso
de bacilos da lepra, obtidos de leproma (granuloma da lepra), mortos pelo calor.
Quando o teste positivo, h a formao de um ndulo no local da injeo,
com dimetro superior a 5 mm, apresentam tambm uma rea de endurecimento,
aps 24 e 48 horas da injeo. Os indivduos Mitsuda positivo so mais difceis de
adquirir infeco, e caso desenvolvam ser a forma mais benigna (tuberculide). Os
indivduos Mitsuda negativos apresentam risco de desenvolver a forma mais grave
(lepromatosa).

Diagnstico:

O diagnstico bacteriolgico da lepra feito pelo exame de esfregaos


corados pelo mtodo de Ziehl-Neesen.

Tratamento:

Atualmente as drogas mais usadas no tratamento da lepra so a dapsona,


rifampicina e clofazimina. Imunoterapia da lepra com injeo intradrmica de M.
vaccae, uma micobactria ambiental no-patognica, e antgenos proticos de M.
tuberculosis juntamente com quimioterapia tem levado a resposta em testes de pele
em paciente com lepra lepromatosa e retirada do bacilo do tecido. Ainda no h
concluso definitiva sobre o valor da BCG na profilaxia da lepra. Os resultados
obtidos em estudos so conflitantes.
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5 DIAGNSTICO LABORATORIAL

O diagnstico rpido e preciso da tuberculose vital para a interrupo do


ciclo de transmisso, para o controle e para cura da doena (TEIXEIRA, et al, 2007).
Para que o resultado emitido pelo laboratrio seja confivel necessrio que a
amostra esteja adequada. Uma boa amostra clnica a que provm do local da
leso, obtida em quantidade suficiente, em recipiente adequado, bem identificada,
conservada e transportada corretamente (MINISTRIO DA SADE, 2005).
Em relao ao escarro, boa amostra a que provm da rvore brnquica,
obtida aps esforo de tosse e, no a que se obtm da faringe ou por aspirao de
secrees nasais, nem contendo saliva; o volume ideal de cinco a dez mL. Para
lavado gstrico, necessrio hospitalizao, pois a coleta feita logo ao acordar,
sem que o paciente tenha levantado ou comido. Adiciona-se carbonato de sdio 1
mg/ 1 mL de lavado para neutralizar o suco gstrico. indicado para crianas e
colhe-se pelo menos duas amostras em dias consecutivos. Lavados brnquicos so
colhidos por mdicos atravs de induo de expectorao; esta induo se d pela
inalao de soluo salina hipertnica aerossolizada, que irrita os pulmes e induz a
tosse. A urina deve ser coletada na primeira mico da manh e utiliza-se de trs a
seis amostras colhidas em dias consecutivos (MINISTRIO DA SADE, 2005).
Os lquidos asspticos so colhidos por mdicos e recomenda-se a
semeadura direta do material em meio de cultura no momento da colheita para
obteno de maior positividade. Material de resseco, bipsia devem ser colhidos,
assepticamente, por mdicos, em frasco estril com gua destilada ou salina
fisiolgica estril. O pus, quando provm de cavidade fechada colhido atravs de
puno, por mdicos, e semeado diretamente em meio de cultura, quando de
cavidade aberta colhe-se com swab. No sangue a pesquisa indicada nos casos de
bacteremia, e depois da medula ssea, o material mais indicado para o
diagnstico em pacientes com Aids. Deve ser colhido, assepticamente, com
anticoagulante (EDTA) em volume de at cinco mL (MINISTRIO DA SADE, 2005).

5.1 BACILOSCOPIA
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A baciloscopia um mtodo de diagnstico bacteriolgico da tuberculose


(MINISTRIO DA SADE, 2005), identifica os bacilos lcool-cido-resistentes
(BAAR), rpido e barato (FERREIRA,A.A.A, et al, 2005), mas possui baixa
sensibilidade (MINISTRIO DA SADE, 2005).
Para obter um resultado positivo na baciloscopia, necessrio ao menos
5.000 a 10.000 bacilos por mililitro de escarro, o que pode acarretar uma grande
probabilidade de casos falso- negativos. A negatividade pode dar-se tanto em funo
do estgio inicial da doena (crescimento lento do bacilo), quanto devido
imunidade do indivduo, que pode manter os nveis de infeco sob controle
(FERREIRA, A.A.A, et al, 2005). Aplica-se sobre a lmina, com palitos de madeira, a
partcula mais densa ou mais purulenta, e estende-se. Aps a secagem fixa-se
passando trs vezes pelo fogo e depois faz-se a colorao. Para isto utiliza-se o
mtodo de Ziehl- Neelsen; cobre-se todo o esfregao com soluo fucsina fenicada
previamente filtrada, aquece-se por trs vezes at a formao de vapores por cinco
minutos; aps, cobre-se toda a superfcie com a soluo lcool- cido e deixa agir
por no mximo dois minutos, por ltimo, cobre-se com soluo de azul de metileno
por trinta segundos. Quando seco, faz-se a leitura no microscpio.
Com a tcnica de Ziehl-Neelsen, as bactrias apresentam-se como
bastonetes delgados, poucos curvos, isolados, aos pares ou em grupos, corados em
vermelho com fundo azul. A leitura deve ser feita em, no mnimo, cem campos e o
resultado liberado de acordo com a escala semiquantitiva. (MINISTRIO DA
SADE, 2005).
Escala semiquantitativa: (-) No foram encontrados BAAR em 100 campos
observados. (1-9) N de bacilos em 100 campos observados. (+) Presena de
menos de 1 BAAR por campo em 100 campos observados. (++) Presena de 1 a 10
BAAR por campo em 50 campos observados. (+++) Presena de mais de 10 BAAR
por campo em 20 campos observados (MINISTRIO DA SADE, 2005).

5.2 CULTURA

A cultura o mtodo bacteriolgico mais sensvel para o diagnstico da


tuberculose pulmonar e extrapulmonar (API TB, 2006). A partir de dez bacilos por
mililitro de escarro, o diagnstico pode ser realizado; possibilita dessa forma,
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diagnosticar mais precocemente os casos novos de tuberculose pulmonar, que no


foram possveis detectar pela baciloscopia. Alm disso, permite posterior
identificao da micobactria isolada e a realizao do teste de sensibilidade
(MINISTRIO DA SADE, 2005). Porm, o diagnstico tardio pode favorecer a
transmisso propagao e severidade da doena (FERREIRA, A.A.A, et al, 2005).
Os meios de cultura mais utilizados so Lowenstein Jensen e Ogawa/ Kudoh. A
leitura realizada, semanalmente, at a oitava semana, sendo necessrio durante
as primeiras 48 horas observar a presena de contaminao.
Os resultados de culturas positivas devem relatar aspecto (forma, cor), e
quantidade de colnias, segundo a escala semiquantitativa: (+++) Colnias
confluentes (++) Colnias separadas (mais de 100) ( + ) 20 a 100 colnias ( 0 ) Sem
crescimento ( C ) Contaminado (MINISTRIO DA SADE, 2005).
As colnias de M.tuberculosis apresentam cor creme, so rugosas,
desenvolvem na superfcie do meio e no alteram a sua cor; a temperatura tima de
incubao varia de 35 a 37C (MINISTRIO DA SADE, 2005).

5.3 IDENTIFICAO DE MICOBACTRIAS

As micobactrias esto posicionadas taxonomicamente na Ordem


Acticomycetales, Subordem Corynebacterinea, Famlia Mycobacteriacea, sendo
Mycobacterium tuberculosis a espcie tipo do gnero Mycobacterium. Em 1958,
Runyon props uma diviso das micobactrias mais frequentemente isoladas,
baseada no tempo de crescimento e pigmentao das colnias; constava de quatro
grupos:
GRUPO /DESCRIO

I- FOTOCROMOGNICAS Crescimento lento. Colnias no pigmentadas


que adquirem cor que pode variar do amarelo ao laranja quando
expostas luz.
II- ESCOTOCROMOGNICAS Crescimento lento. Colnias adquirem cor
que pode variar do amarelo ao laranja quando cultivadas na ausncia
ou na presena da luz.
III- NO CROMOGNICAS Crescimento lento. Colnias geralmente no
pigmentadas (cor creme).
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IV- CRESCIMENTO RPIDO Desenvolvem colnias nos meios de cultura


em 7 dias ou menos. Podem ser pigmentadas ou no.

Essa classificao ainda utilizada, e junto com a prova de crescimento na


presena de inibidores, permite constituir grupamentos preliminares antes daescolha
dos testes bioqumicos para identificao em espcies, dentro de cada grupo.
Existem outros mtodos para identificao, alguns se baseiam em
caractersticas fenotpicas, com o estudo dos cidos miclicos, atravs da
cromatografia, juntamente com testes culturais e bioqumicos; e outros se baseiam
em caractersticas genotpicas, utilizando testes comerciais como o GEN-PROBE,
que tem como molcula alvo o RNA ribossomal e o INNO-LIPA; entre os no
comerciais est o PRA que se baseia no PCR (reao da polimerase em cadeia) do
gen que codifica a protena 65 Kda, a anlise de enzimas de restrio do produto
gerado pelo PCR, atravs de eletroforese. Outra metodologia o sequenciamento
gentico, que consiste na amplificao, atravs do PCR, do gen que codifica a
subunidade 16 S do RNA ribossomal, seguido de sequenciamento do mesmo. A
identificao se d pela comparao com sequncias de referncia (MINISTRIO
DA SADE, 2005).

5.4 TESTE DE SENSIBILIDADE

Este teste indicado nos casos de: - pacientes com suspeita de resistncia,
por abandono, por falncia de tratamento, por recidiva ou por ser contato de um
caso de tuberculose resistente; - na vigilncia epidemiolgica da resistncia; - em
pacientes HIV/ Aids; - em pacientes em instituies fechadas como os de asilo e do
sistema prisional. Os mtodos bacteriolgicos mais empregados e aceitos pela
Organizao Mundial de Sade so: - mtodo das concentraes absolutas; -
mtodo da relao de resistncia; mtodo das propores.
No mtodo das propores, o teste pode ser realizado a partir do escarro
positivo na baciloscopia (teste direto) ou a partir da cultura (teste indireto)
(MINISTRIO DA SADE, 2005).
19

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